JPH0692867A - 免疫系賦活剤 - Google Patents
免疫系賦活剤Info
- Publication number
- JPH0692867A JPH0692867A JP5066200A JP6620093A JPH0692867A JP H0692867 A JPH0692867 A JP H0692867A JP 5066200 A JP5066200 A JP 5066200A JP 6620093 A JP6620093 A JP 6620093A JP H0692867 A JPH0692867 A JP H0692867A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- arg
- peptide
- gln
- pro
- action
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
活剤を提供する。 【構成】 次式I:Gln-Arg-Pro-Arg (式中、Gln はグ
ルタミン、Arg はアルギニンおよびPro はプロリンを表
す。)で表されるペプチドまたはその塩を有効成分とす
る免疫系賦活作用を有する医薬組成物、及び該ペプチド
の酵素加水分解法による製造法。 【効果】 上記ペプチドは好中球の集積能および腫瘍壊
死因子の産生能を高める作用及び制癌作用を有する。
Description
活性ペプチドを有効成分とする医薬組成物に関するもの
である。
理活性を有するものがあることが知られており、食品起
源で生体に対する安全性が期待できることから種々の研
究がなされている。このうちの一つとして貪食作用(フ
ァゴサイトシス)が知られている。生体内に細菌等の外
的異物が侵入してきた場合、マクロファージや好中球に
よる異物の貪食作用は生体防御の初発反応として重要で
ある。このファゴサイトシスを活性化するペプチドとし
ては、生体内で免疫グロブリンから派生するタフトシン
( Tuftsin:Thr-Lys-Pro-Arg )およびリギン( Rigi
n:Gly-Gln-Pro-Arg )が知られている。本発明者らは
先に、これらに類似の構造を持つ大豆グリシニンA1aサ
ブユニットに含まれているペプチド:Gln-Arg-Pro-Arg
がマクロファージの貪食能を高めることについてその合
成ペプチドを用いて証明し、新規なペプチドとして報告
した(特開平1-249800号公報)。
チドは、内因性生理活性ペプチドと比較して意外な構造
−活性相関を示す物質が多いことおよび複数の機能を有
するペプチドが多いことから、ペプチドの構造からその
有する機能については予測できないとされている。
チドについて更に研究を進めた結果、マクロファージの
貪食能を高める作用の他に更に優れた生理活性を有する
ことを見いだして本発明を完成した。したがって、本発
明は上記ペプチドの新規な医薬用途を提供せんとするも
のである。
o はプロリンを表す。)で表されるペプチドまたはその
医薬上許容される塩を有効成分とする免疫系賦活作用を
有する医薬組成物に関する。本発明者らは、大豆蛋白質
の酵素分解によって得られた上記式Iで示されるペプチ
ドが好中球の集積、活性酸素の産生および腫瘍壊死因子
の産生を高めるとともに、腹水ガンに対する抑制作用を
有することを見いだした。
g-Pro-Arg (以下、QRPRと略記する。)は、前記特
開平1-249800号公報に記載したようにペプチド化学合成
法によって合成することができる他、大豆蛋白質などの
上記式Iのアミノ酸配列を含む蛋白質より酵素加水分解
によって得ることもできると考えられるが、その方法に
ついては知られていなかった。本発明者は酵素加水分解
法による新規な製法を見いだした。それ故、本発明は上
記ペプチドの新規な製造方法をも提供するものである。
トリプシンで消化し、得られた消化物をオクタデシルシ
リル(ODS)カラムおよびフェニルカラムによる高速
液体クロマトグラフィー(HPLC)によって分画して
次式:His-Cys-Gln-Arg-Pro-Arg で示されるペプチドを
得、該ペプチドにプロナーゼを加えてインキュベーショ
ンし、分画することを特徴とする。
す。 製造例 酵素消化によるHis-Cys-Gln-Arg-Pro-Arg (HCQRP
R)およびGln-Arg-Pro-Arg (QRPR)の調製:以下
に調製法の概要を図式で示す。
s-Gln-Arg-Pro-Arg (HCQRPR)の単離 分離大豆蛋白質2gを32ml水に溶解しpH7.0 に調整後、
3000rpm 30分の遠心により不溶物を除去した。30分間煮
沸の後、16mgのトリプシンを添加し、37℃、5時間の消
化を行った。さらに10分間煮沸の後、10,000rpm., 10分
の遠心上清をトリプシン消化物とした。上記消化物に1
%となるよう2−メルカプトエタノールを添加し、その
50mg蛋白質相当量を 0.1%トリフルオロ酢酸で平衡化し
たODS−カラム(Cosmosil5C18、20×250mm 、ナカ
ライテスク製)にロードし、 0.1%トリフルオロ酢酸を
含むアセトニトリルの直線的濃度勾配(1%/10ml/mi
n )により展開した。
溶出した画分に含まれているが、他のペプチドも共存す
るので、さらにフェニルカラム(Cosmosil 5Ph、 4.6
× 250mm、ナカライテスク製)、次いでシアノプロピル
カラム(Cosmosil 5CN、4.6× 250mm、ナカライテ
スク製)により精製し、HCQRPRを得た。なお両カ
ラムは 0.1%トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルの
直線的濃度勾配(1%/1ml/min )によって展開し
た。HCQRPRはフェニルカラムおよびシアノプロピ
ルカラムからそれぞれ13%および 4.7%のアセトニトリ
ルによって溶出された。分離大豆蛋白質からのHCQR
PRの収率は0.06%であった。大豆蛋白質トリプシン消
化物のODS−カラムによる分画の吸光度のチャートを
図1に、ODS−カラム画分のフェニルカラムによる分
画のチャートを図2に、そしてフェニルカラム画分のシ
アノプロピルカラムによる分画のチャートを図3に示
す。各チャート中にAで示した画分にHCQRPRは回
収される。
への酵素変換 10mgのHCQRPRを50mMトリス−塩酸緩衝液(pH 7.
5)15mlに溶解し、3mgのプロナーゼを添加、37℃で5
時間のインキュベーションを行い、塩酸を加えpH2とし
た後、ODS−カラム(Cosmosil 5C18-AR , 4.6 ×
150mm 、ナカライテスク製)による分画を行った。展開
液は図1の場合と同じ。ODS−カラムによる分画のチ
ャートを図4に示す。理論収率の80%の効率でQRPR
の純品が得られる。
明する。 試験例1:好中球の集積作用 7週令の雄 ddYマウスの腹腔内に3mgのペプチドを投与
し1日後の腹腔内細胞を採取し、ディフクイック(ミド
リ十字製)にて染色後、好中球の割合を顕微鏡により算
定した。結果を表1に示す。
3日後に腹腔内細胞を回収し、それにオイルレッドを含
むパラフィンエマルジョンを1/10量加えて反応を開始
し、5分後、氷冷した生理食塩水を加え、反応を止め
る。遠心後、ペレットにパラジオキサンを加え、細胞に
取り込まれた色素を抽出する。その色素量を 524nmと 6
00nmの吸光度から測定し、その差より、ファゴサイトシ
ス量を評価した。なお、 600nmの吸光度は濁度の補正で
ある。結果を表2に示す。
す。活性酸素は、図式1に示すように、食細胞内でHM
P経路から供給されるNADPHにより酸素が還元さ
れ、作られる。そして、活性酸素は試験管中で、チトク
ロムCを定量的に還元するので、その還元量を吸光度計
で吸光度(OD)を測り、活性酸素産生量を決定した。
イモサン(酵母の細胞壁)をオプソニン化したものと、
チトクロムCを加えて反応を開始し、15分後氷水中に入
れ、反応を止める。遠心後、上清の 550nmと 468nmの吸
光度を測定し、その差から活性酸素産生量を計算した。
計算式は以下のようになる。 [O2 -]=A/ε・2×10-3・500/400 [μmol /2×106 ・15min ] ε=0.0245より =102・A[nmol/2×106 ・15min ] なお、A:吸光度 結果を表3に示す。
の上昇作用の測定 7週令の雄C3H/Hcマウスにペプチドを静脈内また
は経口投与し、3時間後に 0.3mgのピシバニール(OK
−432)を静脈内投与した。さらに2時間後に採血
し、血清中のTNFレベルをラジオイムノアッセイによ
り測定した。結果を表4に示す。本発明のペプチドは経
口投与において特に効果を示す。
のDBA/2マウスの腹腔内に投与し、マウスが腹水ガ
ンで死亡するまでの日数を測定した。1群は5または6
匹とした。生存日数を表5に示し、生存率を図5に示
す。
いが、腹水ガン抑制作用を持つとされているタフトシン
と同程度の作用を示す。
腔内投与し、1時間後にキャンディダ・アルビカンス
( Candida albicans )菌を対照群の10日後の致死率が
90〜100 %になるような菌数を静脈内に接種し、10日後
の生存数で免疫増強作用を判定した。結果を表6に示
す。
のペプチドは免疫系賦活作用を有することから種々の疾
病の医薬組成物として使用できる。また、本発明の酵素
加水分解法によれば得られるペプチドは食品蛋白質を起
源とするため安全性が充分に期待できる。本発明のペプ
チドは使用にあたり、それ自体でまたは製薬上使用され
る担体および助剤と共に適当な剤形に調製して経口また
は静脈内投与することができる。
による分画の吸光度のチャート。
画の吸光度のチャート。
よる分画の吸光度のチャート。
カラムによる分画の吸光度のチャート。
ラフである。
Claims (4)
- 【請求項1】 次式I: Gln-Arg-Pro-Arg (I) (式中、Gln はグルタミン、Arg はアルギニンおよびPr
o はプロリンを表す。)で表されるペプチドまたはその
塩を有効成分とする免疫系賦活作用を有する医薬組成
物。 - 【請求項2】 免疫系賦活作用が、好中球の集積能およ
び腫瘍壊死因子の産生能を高める作用である請求項1記
載の医薬組成物。 - 【請求項3】 免疫系賦活作用が、制癌作用である請求
項1記載の医薬組成物。 - 【請求項4】 大豆蛋白質をトリプシンで消化し、得ら
れた消化物をオクタデシルシリル(ODS)カラムおよ
びフェニルカラムによる高速液体クロマトグラフィーに
よって分画して次式:His-Cys-Gln-Arg-Pro-Arg で示さ
れるペプチドを得、該ペプチドにプロナーゼを加えてイ
ンキュベーションし、分画することを特徴とする次式
I: Gln-Arg-Pro-Arg (I) で表されるペプチドの製造方法。(上記式中、His はヒ
スチジン、Cys はシステイン、Gln はグルタミン、Arg
はアルギニンおよびPro はプロリンを表す。)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5066200A JP2683993B2 (ja) | 1992-03-04 | 1993-03-02 | ペプチドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP8265892 | 1992-03-04 | ||
JP4-82658 | 1992-03-04 | ||
JP5066200A JP2683993B2 (ja) | 1992-03-04 | 1993-03-02 | ペプチドの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0692867A true JPH0692867A (ja) | 1994-04-05 |
JP2683993B2 JP2683993B2 (ja) | 1997-12-03 |
Family
ID=26407366
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5066200A Expired - Lifetime JP2683993B2 (ja) | 1992-03-04 | 1993-03-02 | ペプチドの製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2683993B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100679692B1 (ko) * | 2004-12-06 | 2007-02-07 | 주식회사농심 | 혈중 지질 농도의 증가 억제 및 체중 감소 효과가 있는검은콩 펩타이드 조성물 |
CN111840510A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-10-30 | 华中科技大学 | 一组食源性多肽的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01249800A (ja) * | 1988-03-31 | 1989-10-05 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 新規ペプチド |
-
1993
- 1993-03-02 JP JP5066200A patent/JP2683993B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01249800A (ja) * | 1988-03-31 | 1989-10-05 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 新規ペプチド |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100679692B1 (ko) * | 2004-12-06 | 2007-02-07 | 주식회사농심 | 혈중 지질 농도의 증가 억제 및 체중 감소 효과가 있는검은콩 펩타이드 조성물 |
CN111840510A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-10-30 | 华中科技大学 | 一组食源性多肽的应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2683993B2 (ja) | 1997-12-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO1991004023A1 (en) | Isolating aminoarginine and use to block nitric oxide formation in body | |
US5158883A (en) | Method of using aminoarginine to block nitric oxide formation in vitro | |
CZ287816B6 (en) | Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof | |
US6548543B1 (en) | Remedies or preventives containing cyclopentenone compounds as the active ingredient | |
JPH023661A (ja) | 血圧降下活性を有するグアニジン誘導体 | |
JP2683993B2 (ja) | ペプチドの製造方法 | |
CN114835724B (zh) | (+/-)-spiroganoapplanin A及其药物组合物与应用 | |
JP2660379B2 (ja) | 大豆蛋白質起源のペプチドからなる免疫系賦活組成物 | |
JP2006342134A (ja) | 紅麹を用いた薬剤及びその製造方法 | |
KR101074030B1 (ko) | 이데솔리드의 신규 용도 | |
JP2753938B2 (ja) | 液性免疫増強用医薬組成物 | |
JP2004083529A (ja) | 紅麹菌を用いた血圧上昇抑制剤及びその製造方法 | |
US5071955A (en) | Octopeptide exhibiting antimypertensive activity | |
CN114075256A (zh) | 具有脂肪酶抑制活性的酰基他定类化合物、其制备方法及应用 | |
JPS632922A (ja) | ドラツグキヤリア | |
JPH0826072B2 (ja) | 生理活性ポリペプチド、その製法および用途 | |
JPH0778077B2 (ja) | 新規ペプチド | |
JP3602574B2 (ja) | 炎症抑制物質の製造方法 | |
JPH04330095A (ja) | 生理活性ポリペプチド、その製造法および抗菌剤 | |
WO2016111310A1 (ja) | 新規アンジオテンシン変換酵素阻害剤 | |
JPH07116233B2 (ja) | 新規ペプチド | |
JPH07233158A (ja) | 新規化合物F−10463a | |
CN117126234A (zh) | 一类天然ace抑制肽及其应用 | |
JPS6248633A (ja) | 抗アレルギ−剤及び気管支拡張剤 | |
CN116925183A (zh) | 一类多肽化合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090815 Year of fee payment: 12 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090815 Year of fee payment: 12 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090815 Year of fee payment: 12 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100815 Year of fee payment: 13 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100815 Year of fee payment: 13 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110815 Year of fee payment: 14 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110815 Year of fee payment: 14 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120815 Year of fee payment: 15 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120815 Year of fee payment: 15 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130815 Year of fee payment: 16 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |