JPH0673002A

JPH0673002A - 免疫抑制活性を有する新規抗生物質、デラミノマイシン類およびそれらの製造法

Info

Publication number: JPH0673002A
Application number: JP15213593A
Authority: JP
Inventors: Masaaki Ishizuka; 雅章石塚; Mitsuhiro Ueno; 充博上野; Hironobu Iinuma; 寛信飯沼; Hiroshi Osanawa; 博長縄; Masa Hamada; 雅濱田; Kenji Maeda; 謙二前田; Tomio Takeuchi; 富雄竹内
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1992-06-23
Filing date: 1993-06-23
Publication date: 1994-03-15

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】〔式中、Ｘはヒドロキシル基、メトキシ基または水素原
子を表し、ＸはデラミノマイシンＡではヒドロキシル
基であり、デラミノマイシンＢではメトキシ基であ
り、デラミノマイシンＣでは水素原子である〕のデラ
ミノマイシンＡ、ＢおよびＣがストレプトミセス属に
属する上記物質の生産菌の培養により製造された。デラミノマイシンＡ、ＢおよびＣを脱水閉環してデラ
ミノマイシンＡ２、Ｂ２およびＣ２を製造する。【効果】免疫抑制活性を有する。グラム陽性菌に抗菌
活性とある種の癌細胞に抗癌活性も有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫抑制活性を有し且つ
抗菌活性および抗腫瘍活性も有する新規抗生物質デラミ
ノマイシン類(Delaminomycins)に関し、またそれらの製
造法に関する。

【０００２】詳しくは、本発明は免疫抑制活性、グラム
陽性細菌に対する抗菌活性および抗腫瘍活性を有する新
規な抗生物質としてデラミノマイシンＡ、デラミノマ
イシンＢ、デラミノマイシンＣ、デラミノマイシン
Ａ２、デラミノマイシンＢ２およびデラミノマイシン
Ｃ２、ならびにこれらの製薬学的に許容できる塩に関
し、またこれらの新規な抗生物質の製造法にも関する。
また、本発明はこれらの新規な抗生物質を有効成分とし
て含む医薬組成物、特に免疫抑制剤組成物に関する。

【０００３】上記のデラミノマイシンＡ、デラミノマ
イシンＢ、デラミノマイシンＣ、デラミノマイシン
Ａ２、デラミノマイシンＢ２およびデラミノマイシ
ンＣ２はこれら新規な抗生物質を本発明者が収得するの
に成功した当初では、それぞれに抗生物質ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ａ、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ、ＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｃ、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′、ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｂ′およびＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ｃ′と命名された抗生物質であり、それらの研究所名称
で日本特許出願平４−１８７４０３号明細書（１９９２
年６月２３日出願）に記載されてあるけれども、最近は
ＭＪ２０２−７２Ｆ３の名称の代りにデラミノマイシン
(Delaminomycin) の新名称を用いることにした。

【０００４】

【従来の技術】従来、微生物が生産する免疫抑制物質と
してサイクロスポリンＡ、ＦＫ５０６およびスパガリン
等が知られているが、これらは免疫抑制剤として完全に
満足できるものではない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】臓器移植や免疫不全疾
患および局所の炎症の医療に有用であるより優れている
新規な免疫抑制物質を得ること、また優れた抗腫瘍活性
物質を得ることは長年、要望されている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは微生物生産
物中に有用な免疫抑制活性物質を見出す目的で、天然の
土壌より数多くの微生物を単離し、それら微生物の生産
物について種々の研究を行なった。その結果、本発明者
らが新たに土壌から分離したストレプトミセス属に属す
る微生物の培養液中に優れた免疫抑制活性を有してＭＪ
２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣ物質と当初に命名さ
れた３種の抗生物質が生産され蓄積されることを認め
た。それらの物質を単離し、生物学的および物理化学的
性状を調べ、これらの物質が免疫抑制活性とグラム陽性
細菌に対する抗菌活性および抗腫瘍活性を有すること、
および化学構造式の決定により新規化合物であること、
また互変異性体があることを見出した。

【０００７】なお、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂお
よび−Ｃ物質が夫々にデラミノマイシンＡ、デラミノ
マイシンＢおよびデラミノマイシンＣと最近に改名
したのは、前述のとおりである。

【０００８】さらに、本発明者らは上記のデラミノマイ
シンＡ、ＢおよびＣをそれぞれに原料として用い、そ
れらを、脱水を伴う閉環反応からなる化学的方法によ
り、デラミノマイシンＡからデラミノマイシンＡ２
を、デラミノマイシンＢからデラミノマイシンＢ２
を、またデラミノマイシンＣからデラミノマイシンＣ
２を製造することに成功した。これらデラミノマイシン
Ａ２、Ｂ２およびＣ２についても生物学的および物理
化学的性状を調べ、これらの物質が免疫抑制活性とグラ
ム陽性細菌に対する抗菌活性および抗腫瘍活性を有する
こと、および化学構造式の決定により新規化合物である
ことを見出した。

【０００９】すなわち、本発明は免疫抑制活性、抗菌活
性および抗腫瘍活性を有する新規抗生物質デラミノマイ
シンＡ、ＢおよびＣならびにＡ２、Ｂ２およびＣ２の
各物質を提供し、またそれらの製造法を提供するもので
ある。

【００１０】詳しく言えば、第１の本発明によると、次
の一般式〔Ｉ〕

【００１１】または次の一般式〔Ｉ′〕

【００１２】〔式中、Ｘはヒドロキシル基、メトキシ基
または水素原子を表し、ＸはデラミノマイシンＡでは
ヒドロキシル基であり、デラミノマイシンＢではメトキ
シ基であり、デラミノマイシンＣでは水素原子であ
る〕で表される免疫抑制活性を有する新規な抗生物質、
デラミノマイシンＡ、デラミノマイシンＢおよびデ
ラミノマイシンＣ、およびそれらの塩が提供される。

【００１３】一般式〔Ｉ〕で表される化合物と一般式
〔Ｉ′〕で表される化合物は互変異性の関係にある。ま
た、一般式〔Ｉ〕または一般式〔Ｉ′〕のデラミノマイ
シンＡ、ＢまたはＣの塩には、製薬学的に許容できる金
属、例えばナトリウム、カリウムの如きアルカリ金属と
の塩、カルシウムの如きアルカリ土類金属との塩、ある
いはアンモニウム塩がある。

【００１４】また、第２の本発明によると、次の一般式
〔II〕

【００１５】〔式中、Ｙはヒドロキシル基、メトキシ基
または水素原子を表し、ＹはデラミノマイシンＡ２で
はヒドロキシル基であり、デラミノマイシンＢ２では
メトキシ基であり、デラミノマイシンＣ２では水素原
子である〕で表される免疫抑制活性を有する新規な抗生
物質、デラミノマイシンＡ２、デラミノマイシンＢ
２およびデラミノマイシンＣ２が提供される。

【００１６】〔１〕デラミノマイシンＡ、ＢおよびＣ
の物理化学的性質（ａ）第１の本発明によるデラミノマイシンＡ（一般
式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕でＸがヒドロキシル基である化
合物）の物理化学的性状は下記のとおりである。

【００１７】（１）物質の色および性状：無色〜白色、
固体（２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₃Ｏ₆Ｎ（３）元素分析：Ｃ₂₉Ｈ₄₃Ｏ₆Ｎ・Ｈ₂ＯとしてＣＨＯＮ実測値６７．３７％８．７９％２１．２２％２．６１％計算値６７．０３％８．７３％２１．５５％２．７０％（４）分子量：５０１（５）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マススペクト
ル：ｍ／ｚ５００〔Ｍ−Ｈ〕^-が観測された。

【００１８】（６）紫外線吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した吸収ピークを次に示す。

【００１９】（７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
法）：添付図面の図１に示す。

【００２０】（８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：

【００２１】重メタノール中メタノール（３．３０ｐｐ
ｍ）を基準物質として測定した。

【００２２】（９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：

【００２３】重メタノール中メタノール（４９．００ｐ
ｐｍ）を基準物質として測定した。

【００２４】（10）溶解性：メタノールに可溶、水、ア
セトン、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶であ
る。（11）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ値を次表に示
す。

【００２５】

【００２６】（12）呈色反応：バニリン硫酸およびアニ
スアルデヒド硫酸に対して陽性である。

【００２７】（ｂ）第１の本発明によるデラミノマイシ
ンＢ（一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕でＸがメトキシ基
である化合物）の物理化学的性状は下記のとおりであ
る。

【００２８】（１）物質の色および性状：無色〜白色、
固体（２）分子式：Ｃ₃₀Ｈ₄₅Ｏ₆Ｎ（３）分子量：５１５（４）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マススペクト
ル：ｍ／ｚ５１４〔Ｍ−Ｈ〕^-が観測された。

【００２９】（５）紫外線吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した吸収ピークを次に示す。

【００３０】（６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
法）：添付図面の図２に示す。

【００３１】（７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：

【００３２】重メタノール中メタノール（３．３０ｐｐ
ｍ）を基準物質として測定した。

【００３３】（８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：

【００３４】重メタノール中メタノール（４９．００ｐ
ｐｍ）を基準物質として測定した。

【００３５】（９）溶解性：メタノールに可溶、水、ア
セトン、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶であ
る。（10）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ値を次表に示
す。

【００３６】

【００３７】（11）呈色反応：バニリン硫酸およびアニ
スアルデヒド硫酸に対して陽性である。

【００３８】（ｃ）第１の本発明によるデラミノマイシ
ンＣ（一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕でＸが水素である
化合物）のとおりである。

【００３９】（１）物質の色および性状：無色〜白色、
固体（２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₃Ｏ₅Ｎ（３）分子量：４８５（４）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マススペクト
ル：ｍ／ｚ４８４〔Ｍ−Ｈ〕^-が観測された。

【００４０】（５）紫外線吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した吸収ピークを次に示す。

【００４１】（６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
法）：添付図面の図３に示す。

【００４２】（７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：

【００４３】重メタノール中メタノール（３．３０ｐｐ
ｍ）を基準物質として測定した。

【００４４】（８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：

【００４５】重メタノール中メタノール（４９．００ｐ
ｐｍ）を基準物質として測定した。

【００４６】（９）溶解性：メタノールに可溶、水、ア
セトン、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶であ
る。（10）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ値を次表に示
す。

【００４７】

【００４８】（11）呈色反応：バニリン硫酸およびアニ
スアルデヒド硫酸に対して陽性である。

【００４９】（ｄ）第２の本発明によるデラミノマイシ
ンＡ２（一般式〔II〕でＹがヒドロキシル基である化
合物）の物理化学的性状は下記の通りである。

【００５０】（１）物質の色および性状：無色〜白色、
固体（２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₅Ｎ（３）元素分析：Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₅ＮとしてＣＨＯＮ実測値７１．２２％８．４６％１６．９１％３．２８％計算値７２．０２％８．５４％１６．５４％２．９０％（４）分子量：４８３（５）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マススペクト
ル：ｍ／ｚ４８２〔Ｍ−Ｈ〕^-、６３６〔Ｍ＋ＮＢ
Ａ〕⁺が観測された。

【００５１】（６）紫外線吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した吸収ピークを次に示す。

【００５２】（７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
法）：添付図面の図４に示す。

【００５３】（８）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：

【００５４】重クロロホルムでテトラメチルシラン（Ｔ
ＭＳ）（０ｐｐｍ）を基準物質として測定した。

【００５５】（９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：

【００５６】重クロロホルム中重クロロホルム（７７．
００ｐｐｍ）を基準物質として測定した。

【００５７】（10）溶解性：メタノール、酢酸エチル、
クロロホルム、エーテルに可溶、ｎ−ヘキサン、水に難
溶または不溶である。（11）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ値を次表に示
す。

【００５８】

【００５９】（12）呈色反応：バニリン硫酸およびアニ
スアルデヒド硫酸に対して陽性である。

【００６０】（ｅ）第２の本発明によるデラミノマイシ
ンＢ２（一般式〔II〕でＹがメトキシ基である化合
物）の物理化学的性状は下記の通りである。

【００６１】（１）物質の色および性状：無色〜白色、
固体（２）分子式：Ｃ₃₀Ｈ₄₃Ｏ₅Ｎ（３）分子量：４９７（４）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マススペクト
ル：ｍ／ｚ４９８〔Ｍ＋Ｈ〕⁺、４９６〔Ｍ−Ｈ〕^-
が観測された。

【００６２】（５）紫外線吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した吸収ピークを次に示す。

【００６３】（６）赤外線吸収スペクトル（Ｋｂｒ
法）：添付図面の図５に示す。

【００６４】（７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：

【００６５】重クロロホルム中ＴＭＳ（０ｐｐｍ）を基
準物質として測定した。

【００６６】（８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：

【００６７】重クロロホルム中重クロロホルム（７７．
００ｐｐｍ）を基準物質として測定した。

【００６８】（９）溶解性：メタノール、酢酸エチル、
クロロホルム、エーテルに可溶、ｎ−ヘキサン、水に難
溶または不溶である。（10）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ値を次表に示
す。

【００６９】

【００７０】（11）呈色反応：バニリン硫酸およびアニ
スアルデヒド硫酸に対して陽性である。

【００７１】（ｆ）第２の本発明によるデラミノマイシ
ンＣ２（一般式〔II〕でＹが水素である化合物）の物
理化学的性状は下記のとおりである。

【００７２】（１）物質の色および性状：無色〜白色、
固体（２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₄Ｎ（３）分子量：４６７（４）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マススペクト
ル：ｍ／ｚ４６８〔Ｍ＋Ｈ〕⁺、４６６〔Ｍ−Ｈ〕^-
が観測された。

【００７３】（５）紫外線吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した吸収ピークを次に示す。

【００７４】（６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法)
：添付図面の図６に示す。

【００７５】（７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：

【００７６】重クロロホルム中ＴＭＳ（０ｐｐｍ）を基
準物質として測定した。

【００７７】（８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：

【００７８】重クロロホルム中重クロロホルム（７７．
００ｐｐｍ）を基準物質として測定した。

【００７９】（９）溶解性：メタノール、酢酸エチル、
クロロホルムに可溶、水、ｎ−ヘキサンに難溶または不
溶である。（10）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ値を次表に示
す。

【００８０】

【００８１】（11）呈色反応：バニリン硫酸およびアニ
スアルデヒド硫酸に対して陽性である。

【００８２】〔２〕デラミノマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ａ
２、Ｂ２およびＣ２の生物学的活性本発明によるデラミノマイシンＡ、ＢおよびＣならび
にデラミノマイシンＡ２、Ｂ２およびＣ２の各々は、グ
ラム陽性細菌に対して強い抗菌作用を有することが認め
られた。

【００８３】脾細胞には、細胞性免疫に関与するＴ細胞
（Ｔリンパ球とも言う）と抗体産生に基づく免疫に関す
るＢ細胞（Ｂリンパ球とも言う）とが含有される。脾細
胞に含有されているＴ細胞は、Ｔ細胞に選択的に作用す
るマイトジェンであるコンカナバリンＡで処理される
と、活性化され芽球化即ち幼若化して増殖する反応を起
すことが知られる。しかし、Ｂ細胞はコンカナバリンＡ
処理を受けても活性化されず増殖しないことが知られ
る。コンカナバリンＡ処理により活性化されたＴ細胞を
含有する脾細胞が増殖する反応の程度は、Ｔ細胞による
³Ｈ−チミジンの取り込み(incorporation) の量を測定
することにより評価できる。

【００８４】或る化合物がＴ細胞による細胞性免疫を抑
制する活性を有するか否かは、コンカナバリンＡ処理さ
れた脾細胞をその化合物の存在下で培養し、その際の脾
細胞の増殖反応がその化合物により阻害される程度を測
定することで判定できる〔参考文献１； Larson,E.L.
ら：Mechanism of T cell activation. I.A screeningo
f“step one”ligands.「Eur. J. Immunol.」10巻，93
〜99(1980)、および参考文献２： Ueno,M.ら：Dethymic
in, a novel immunosuppressant isolated froman Amyc
olatopsis. Fermentation, isolation, physico-chemic
al propertiesand biological activities.「J. Antibi
ot.」45巻，1819〜1826(1992)参照〕。

【００８５】本発明によるデラミノマイシンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ａ２、Ｂ２またはＣ２はコンカナバリンＡ処理で活
性されたマウス脾細胞が増殖する反応を阻害する活性を
有することがin vitro の試験により認められた。

【００８６】更に、或るマウス個体から取った脾細胞
（リンパ球）を、別のマウス個体から取られて予じめマ
イトマイシンＣ処理を受けて刺激細胞(stimulator)とし
て作用する脾細胞（リンパ球）と混合し、このように混
合された細胞を培養すると、前者の脾細胞 (反応細胞、
responder)に含有されるＴ細胞が刺激されて芽球化即ち
幼若化して増殖する反応を起すことが知られる。

【００８７】この反応は混合リンパ球培養反応 (Mixed
LymphocyteCulture Reaction) と言われるが、混合リン
パ球培養反応において、混合されたリンパ球を培養する
培地中に、Ｔ細胞に選択的に阻害活性を示す化合物を添
加して置くと、混合リンパ球培養反応での組織適合抗原
依存性のＴ細胞の増殖反応に対し阻害することが知られ
る〔参考文献１； Ishizuka,M.ら：Induction of antit
umor resistance tomouse leukemia Ｌ1210 by spergu
alins.「J. Antibiot.」39巻，1736〜1743(1986)および
参考文献２；Ueno,M. ら:Dethymicin, a novel immunos
uppressantisolated from an Amycolatopsis. Fermenta
tion, isolation,physico-chemicalpropertiesand biol
ogical activities.「J. Antibiot.」45巻，1819〜1826
(1992)参照〕。

【００８８】本発明によるデラミノマイシンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ａ２、Ｂ２およびＣ２は混合リンパ球培養反応のin
vitro試験で反応細胞として働くＴ細胞の増殖反応を阻
害する活性を有することが認められた。

【００８９】更にまた、羊赤血球を抗原として注射され
て免疫を受けたマウスに、羊赤血球を再度注射すること
により遅延型過敏症（ＤＴＨ）が起る現象を利用するこ
とにより、或る化合物が細胞性免疫を抑制する活性を有
するか否かを評価する試験が知られている〔参考文献
１；「J. Antibiot.」33巻， 642〜652(1990) および参
考文献２；「J. Antibiot.」45巻，1819〜1826(1992)参
照〕。

【００９０】羊赤血球を抗原として注射されたマウスの
遅延型過敏症のin vivo試験において、本発明のデラミ
ノマイシン類(delaminomycins)は抑制活性を示した。一
方、Ｂ細胞が関与する抗体産生試験においてはまったく
阻害活性を示さなかった。従って、本発明による一般式
〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕および一般式〔II〕のデラミノマ
イシン類は免疫抑制活性をもち、また抗菌活性も有す
る。

【００９１】これらの結果から、本発明のデラミノマイ
シン類はＴ細胞を選択的に阻害する活性を有すると認め
られ、臓器移植で必要とされる免疫抑制剤(immunosuppr
essant) として、また細胞性免疫反応を原因とする過敏
免疫状態である自己免疫疾患の治療に有用な薬剤として
の用途がある。また、ある種の癌細胞に対し癌細胞の増
殖阻害活性を示す事も認められることより本発明のデラ
ミノマイシン類は抗癌剤としての用途がある。要約する
と、本発明によるデラミノマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ａ
２、Ｂ２およびＣ２の各々はグラム陽性菌感染症の治療
に有用であるとともに臓器移植や自己免疫疾患に有用な
免疫抑制剤または免疫調節剤としての用途がある。さら
に、ある種の癌に対して有用な抗癌剤としての用途があ
る。

【００９２】第１および第２の本発明によるデラミノマ
イシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ａ２、Ｂ２およびＣ２の生理活性
を後記の試験例で評価した。

【００９３】試験例１マイトジェンにより起された脾細胞の増殖反応に対すデ
ラミノマイシンの阻害活性ＲＰＭＩ１６４０培地（１０％、牛胎児血清を含む）中
に懸濁されたＣＤＦマウス脾細胞に供試化合物（デラミ
ノマイシン）を種々の濃度で添加し、更にマイトジェン
としてコンカナバリンＡを０．５μｇ／ｍｌとなるよう
に添加した後に３７℃、５％炭酸ガス濃度の条件下に
て、７２時間脾細胞を培養した。培養終了時の１６〜１
８時間前に³Ｈ−チミジンを添加し、その後、細胞増殖
を³Ｈ−チミジンの細胞内取り込みを基準として判定し
た。また、細胞増殖を５０％阻害する供試化合物濃度、
すなわちＩＣ₅₀値も測定した。その脾細胞増殖に対する
供試化合物の阻害活性を次式の阻害率で評価した。

【００９４】阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１０
０）但し、Ｔは供試化合物で処理した時の³Ｈ−チミジンの
取り込み量を表わし、Ｃは処理しない時の取り込み量を
表わす。得られた試験結果を表１に示す。

【００９５】

【００９６】試験例２混合リンパ球培養反応(Mixed Lymphocyte Culture Reac
tion) に対するデラミノマイシンの阻害活性混合リンパ球培養反応を行うため、刺激細胞として、Ｗ
ＫＹラットから採取した脾細胞をマイトマイシンＣ５
０μｇ／ｍｌで３７℃、２０分間処理したものを用い、
反応細胞として、フィッシャーＦ３４４ラットから採取
した脾細胞のナイロンウール非付着細胞を用いた。これ
ら細胞を混合し、混合された細胞をＲＰＭＩ１６４０培
地（５％、牛胎児血清を含む）中にて、種々の濃度で添
加される供試化合物（デラミノマイシン）の存在下又は
非存在下で培養することにより３７℃、５％炭酸ガス濃
度の条件下で１２０時間反応させた。

【００９７】反応終了の１６〜１８時間前に³Ｈ−チミ
ジンを添加し、反応細胞への³Ｈ−チミジンの取り込み
を液体シンチレーションカウンターにて測定した。混合
リンパ球培養反応に対する供試化合物の阻害活性は、阻
害率〔１００−（Ｔ／Ｃ×１００），％〕で評価した。
また、この反応を５０％阻害する供試化合物濃度、すな
わちＩＣ₅₀値も測定した。その試験結果を表２に示す。

【００９８】

【００９９】試験例３マウス遅延型過敏症（ＤＴＨ）に対するデラミノマイシ
ンの抑制効果ＣＤＦ₁マウスに羊赤血球（１０⁵個／マウス）を静注
して免疫後、４日目に羊赤血球（１０⁸個／マウス）を
足蹠に皮下注射して感作させ、遅延型過敏症（ＤＴＨ）
を惹起した。供試化合物は免疫後０〜４日目まで毎日１
回、腹腔内投与した。感作５日目に、マウス足蹠の厚さ
を測定する事によりＤＴＨに対する抑制効果を判定し
た。この抑制効果は次式で算出される阻害率（％）で評
価した。

【０１００】阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００）但し、Ｔは供試化合物を投与した時の足蹠の厚さを表
し、Ｃは供試化合物無投与の時の足蹠の厚さを表す。得
られた試験結果を表３に示す。

【０１０１】

【０１０２】試験例４癌細胞に対するデラミノマイシンの増殖阻害活性各種動物癌細胞および人癌細胞を培養し、これらの培養
癌細胞の増殖を５０％阻害する本発明のデラミノマイシ
ンＡ、Ｂ、Ｃ、Ａ２、Ｂ２およびＣ２の濃度、すなわ
ちＩＣ₅₀値を測定して癌細胞に対する増殖阻害活性を評
価した。得られた結果を表４に示す。

【０１０３】

【０１０４】試験例５抗菌活性さらに本発明によるデラミノマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ａ
２、Ｂ２およびＣ２は各種の細菌に対して抗菌活性を有
する。寒天平板希釈法によって測定した各種細菌および
糸状菌に対する本発明の新規抗生物質の最小生育阻止濃
度（ＭＩＣ．）（μｇ／ｍｌ）の測定結果をそれぞれ表
５ａ、表５ｂ、表５ｃおよび表５ｄに示す。

【０１０５】

【０１０６】

【０１０７】

【０１０８】

【０１０９】さらに、第３の本発明によると、ストレプ
トミセス属に属するデラミノマイシンＡ、ＢおよびＣ
の生産菌を培養し、その培養物からデラミノマイシン
Ａおよび／またはデラミノマイシンＢおよび／または
デラミノマイシンＣを採取することを特徴とする、免
疫抑制活性を有する新規な抗生物質、デラミノマイシン
Ａ、および／またはデラミノマイシンＢおよび／ま
たはデラミノマイシンＣの製造法が提供される。

【０１１０】本発明の方法に用いるデラミノマイシン
Ａ、ＢおよびＣの生産菌はストレプトミセス属の菌株で
デラミノマイシンＡ、ＢおよびＣの少なくとも１つの
生産能を有するものであれば良く、特に一つの菌株に限
定されない。使用できるデラミノマイシンＡ、Ｂおよ
びＣの生産菌の一例には平成２年１月、山梨県大月市の
土壌より分離された放線菌でＭＪ２０２−７２Ｆ３の菌
株番号が付された菌株がある。

【０１１１】以下、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株の菌学的性
状について述べる。

【０１１２】１．形態ＭＪ２０２−７２Ｆ３株は、分枝した基生菌糸より比較
的長い気菌糸を伸長し、その先端は５〜６回転のらせん
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。気
菌糸の先端には５０個以上の胞子の連鎖を認め、胞子の
大きさは約０．５〜０．７×０．８〜１．２ミクロンで
あった。なお、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状を呈
する。

【０１１３】２．各種培地における生育状態色の記載について〔〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル(Container Corporation ofAmerica
のcolor harmony manual) を用いた。

【０１１４】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（３
０℃培養）無色〜うす黄の発育上に、部分的に明るい灰〔２ｆｅ，
Covert Gray〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は認めら
れない。（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（３０℃培
養）発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５、３０℃培養）うす黄〔２ｇｃ，Bamboo〕の発育上に、白の気菌糸をう
っすらと着生し、溶解性色素は認められない。（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、３
０℃培養）無色〜うす黄の発育上に、明るい灰〔３ｆｅ，Silver G
ray 〕の気菌糸をわずかに着生する。溶解性色素は認め
られない。

【０１１５】（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地
７、３０℃培養）うす黄〔２ｇｃ，Bamboo〕の発育上に、白の気菌糸をう
っすらと着生し、溶解性色素は認められない。（６）栄養寒天培地（３０℃培養）発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認めら
れない。（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、３０
℃培養）うす黄〔１ 1/2ｉｃ， Lt Antique Gold〕の発育上に、
部分的に明るい灰〔ｆ，〜２ｆｅ， Covert Gray〕の気
菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、３０℃
培養）うす黄の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解
性色素は認められない。

【０１１６】（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（３０
℃培養）発育は無色〜うす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は
認められない。（10）スターチ寒天培地（３０℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。（11）リンゴ酸石灰寒天培地（３０℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。（12）セルロース（濾紙片添加合成液、３０℃培養）４０日間培養後も生育は認められない。

【０１１７】（13）ゼラチン穿刺培養１５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はう
す黄、茶白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は認
められない。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２
７℃培養）の場合、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。

【０１１８】（14）脱脂牛乳（３０℃および３７℃培
養）３０℃培養で、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。３７℃培養の場合、発育は極め
て悪く、うす黄の発育がわずかに観察されるが、気菌糸
および溶解性色素は認められない。

【０１１９】３．生理的性質（１）生育温度範囲グルコース・アスパラギン寒天培地 (グルコース１．０
％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、リン酸二カリウム
０．０５％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）を用い、
２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各
温度で試験した結果、５０℃を除き、そのいずれの温度
でも発育したが、３７℃の生育は極めて悪い。なお、生
育至適温度は２７℃〜３０℃付近と思われる。

【０１２０】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養）１５％単純ゼラチン培地およびグルコース・ペプトン・
ゼラチン培地のいずれの場合も２１日間の観察で液化性
は認められない。（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
およびスターチ寒天培地、いずれも３０℃培養）いずれの培地においても水解性は認められない。

【０１２１】（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂
牛乳、３０℃および３７℃培養）３０℃培養では、培養後２１日目頃より凝固することな
くペプトン化が始まるが、その作用は極めて弱い。３７
℃培養の場合、生育は極めて悪く、それらの作用は観察
されない。

【０１２２】（５）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培
地、ＩＳＰ−培地７；いずれも３０℃培養）いずれの培地でも陰性である。

【０１２３】（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴド
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９；３０℃培養）Ｄ−グルコース、イノシトールを利用して生育し、シュ
クロース、Ｄ−マンニトール、ラクトースは利用しな
い。Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトースの利用の存否は
判然とせず、Ｌ−アラビノース、ラムノース、ラフィノ
ースは、おそらく利用しないと思われる。

【０１２４】（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天培地、３０℃培養）培養後７日目頃より、リンゴ酸石灰の溶解が認められ、
その作用は中等度である。（８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ＩＳＰ−培地８、３０℃培養）陰性である。（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、３０℃培
養）４０日間培養の観察では生育せず、分解は認められな
い。

【０１２５】以上の性状を要約すると、ＭＪ２０２−７
２Ｆ３株の形態は、分枝した基生菌糸より５〜６回転の
らせん形成を有する気菌糸を伸長し、輪生枝および胞子
のうは認められない。気菌糸の先端には５０個以上の胞
子を連鎖し、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状であ
る。種々の培地で、発育は無色〜うす黄、気菌糸の着生
は悪いが、２〜３の培地では、明るい灰の気菌糸を部分
的に着生する。溶解性色素は認められない。生育至適温
度は２７℃〜３０℃付近である。メラニン様色素の生成
は陰性、スターチの水解性は認められず、蛋白分解力は
弱い。また、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノピメリ
ン酸はＬＬ−型であった。

【０１２６】これらの性状より、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
株は、ストレプトミセス（Streptom yces）属に属すると
考えられる。ストレプトミセス属の既知菌種を検索する
と近縁の種として、ストレプトミセス・アルブルス（St
reptomyces albulus ，文献，International Journal
of Systematic Bacteriology，22巻， 271頁，1972年；
同誌，30巻， 371頁，1980年）およびストレプトミセス
・ナタレンシス（Stre ptomyces natalensis，文献，In
ternational Journal of Systematic Bacteriology，22
巻， 323頁，1972年）があげられた。当面は、ＭＪ２０
２−７２Ｆ３株をストレプトミセス・エスピー（Strept
omyces sp.）ＭＪ２０２−７２Ｆ３と命名する。

【０１２７】なお、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株を工業技術
院微生物工業技術研究所（日本、茨城県つくば市にあ
る）に寄託申請し、平成３年１２月２４日、微工研菌寄
第１２６７４号として受託された。

【０１２８】更に、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株と、前述の
２菌株＜ストレプトミセス・アルブルスＩＭＣＳ−０８
０２（ＩＳＰ５４９２）、ストレプトミセス・ナタレ
ンシスＩＭＳＳ−０６８７（ＩＳＰ５３５７）＞
とを実地に比較検討した。その結果、ＭＪ２０２−７２
Ｆ３株と上記の両菌株は、ゼラチンの液化、ミルクの凝
固、ペプトン化、及びスターチの水解性にやや相違が認
められた。しかし、それらの性質は変化し易く、大きな
相違とは考えられない。さらに、気菌糸の色調、炭素源
の利用性等より、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株はストレプト
ミセス・アルブルスに、より類似していた。そこで、Ｍ
Ｊ２０２−７２Ｆ３株をストレプトミセス・アルブルス
（Streptomyces albulus ）ＭＪ２０２−７２Ｆ３株と
同定した。

【０１２９】現在、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株はブタペス
ト条約の規約下に寄託を移行されて上記の微生物工業技
術研究所（現在は生命工学工業技術研究所と改称）に寄
託番号「ＦＥＲＭＢＰ−４０７９」として寄託されて
ある。

【０１３０】次に、第３の本発明の方法による抗生物
質、デラミノマイシンＡ、ＢおよびＣの製造について説
明する。

【０１３１】本発明による新規抗生物質デラミノマイシ
ンＡ、ＢおよびＣは、ストレプトミセス属に属するデ
ラミノマイシンＡ、ＢおよびＣの生産菌を適当な培地で
培養することにより、好ましくは好気的条件下に培養す
ることにより、培地中に目的の抗生物質を産生、蓄積さ
せ、次いで培養物から目的の抗生物質を採取することに
より製造することができる。

【０１３２】培地はデラミノマイシンＡ、ＢおよびＣ
の生産菌が利用しうる任意の栄養源を含有するものであ
りうる。具体的には、例えば、炭素源としてグルコー
ス、イノシトール、マルトースおよび油脂類などが使用
でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母エキス、
ポリペプトンおよびコーンスティープリカーなどの有機
物並びにアンモニウム塩または硝酸塩、例えば硫酸アン
モニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなど
の無機物が利用できる。また必要に応じて食塩、塩化カ
リウム、炭酸カルシウム、リン酸塩、重金属塩などの無
機塩類を培地に添加することができる。発酵中の発泡を
抑制するために常法に従って適当な消泡剤、例えばシリ
コーン系消泡剤を添加することもできる。

【０１３３】培養方法としては、一般に行なわれている
生理活性抗生物質等の生産のための微生物の培養方法で
あればよく、特に好気的液体深部培養法が適している。
培養温度は２０〜３７℃が適当であるが、２７〜３０℃
が好ましい。この方法でデラミノマイシンＡ、Ｂおよ
びＣの生産量は、振盪培養、通気攪拌培養共に培養５〜
７日間で最高に達する。このようにしてデラミノマイシ
ンＡ、ＢおよびＣが培地中に生産、蓄積されて培養物
が得られる。

【０１３４】得られた培養物中では、デラミノマイシン
Ａ、ＢおよびＣは菌体中および培養濾液中に存在する
が、菌体中により主に存在する。このような培養物から
デラミノマイシンＡ、ＢおよびＣを採取するには、合
目的な任意の方法が利用可能である。それらの方法に
は、抽出の原理に基づく方法であって、具体的には、例
えば、培養濾液中からデラミノマイシンＡ、ＢおよびＣ
を水不混和性の有機溶媒、例えば酢酸ブチル、ｎ−ブタ
ノールなどで抽出する方法がある。また菌体内のデラミ
ノマイシンＡ、ＢおよびＣを回収する場合は濾過または
遠心分離などで得た菌体集体をメタノール、エタノー
ル、アセトンなどで処理して抽出することにより回収す
る方法がある。菌体を分離せずに培養物をそのままを上
記の抽出操作に付すこともできる。適当な溶媒を用いた
向流分配法も抽出方法の範ちゅうに入れることができ
る。例えば遠心分配クロマトグラフィー（Centrifugal
Partition Chromatograph ；三鬼エンジニアリング社製
ＣＰＣ) （注；ＣＰＣは商標名）も使用できる。

【０１３５】培養物からデラミノマイシンＡ、Ｂおよ
びＣを採取する他の方法のひとつは、吸着の原理に基づ
くものである。例えば、培養濾液あるいは上記のように
して抽出操作を行なうことによって得られる抽出液を用
い、適当な吸着剤、ゲル濾過剤、例えば、シリカゲル、
セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、トヨ
パールＨＷ−４０（東ソー社製）、ダイヤイオンＨＰ−
２０（三菱化成工業社製）などを用いたカラムクロマト
グラフィー、ヌクレオシル５Ｃ18（西独ナーゲル社製）
などを用いた高速液体クロマトグラフィー又はその他の
手段によって目的の抗生物質を吸着剤に吸着させ、その
後溶離させることによりデラミノマイシンＡ、Ｂおよ
びＣを単独に又は混合物として得ることができる。この
ようにして得られたデラミノマイシンＡおよび／また
はデラミノマイシンＢおよび／またはデラミノマイシ
ンＣの含有溶液を減圧濃縮乾固すれば、デラミノマイ
シンＡおよび／またはデラミノマイシンＢおよび／ま
たはデラミノマイシンＣの粗標品が得られる。

【０１３６】このようにして得られるデラミノマイシン
Ａおよび／またはデラミノマイシンＢおよび／またはデ
ラミノマイシンＣの粗標品を更に精製するためには、
上記の抽出法および吸着法を必要に応じて組み合わせ必
要回数行なえばよい。例えば、ダイヤイオンＨＰ−２
０、セファデックスＬＨ−２０（商品名）などの吸着剤
またはゲル濾過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、
ＣＰＣを用いた遠心液々分配クロマトグラフィー、シリ
カゲルを用いた順相クロマトグラフィーおよびヌクレオ
シル５Ｃ₁₈などを用いた高速液体クロマトグラフィーを
適宜組合わせて実施することができる。

【０１３７】更に、本発明者らは研究を進めて、その結
果、上記の一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕で表される抗生
物質デラミノマイシンＡ、ＢまたはＣを無水の有機溶
媒中に溶解し、その溶液を無機酸とともに撹拌すると、
脱水を伴う閉環反応が起きて前記の一般式〔II〕で表さ
れる抗生物質デラミノマイシンＡ２またはＢ２または
Ｃ２を生成することが認められた。

【０１３８】従って、第４の本発明によると、デラミノ
マイシンＡまたはデラミノマイシンＢまたはデラミ
ノマイシンＣを、脱水閉環反応にかけることを特徴と
する、新規な抗生物質デラミノマイシンＡ２またはデ
ラミノマイシンＢ２またはデラミノマイシンＣ２の
製造法が提供される。

【０１３９】この第４の本発明の方法を実施するには、
原料としてデラミノマイシンＡまたはＢまたはＣを無
水の有機溶剤、例えばメタノール、エタノール、ｎ−ブ
タノールまたはアセトンにとかし、その溶液へ無機酸、
例えば塩酸または硫酸を加えて室温または加温下に反応
することができる。反応液から目的のデラミノマイシン
Ａ２またはＢ２またはＣ２を採取するのには、溶剤を
留去後に、得られた残渣を各種のクロマトグラフィー法
にかけることにより行い得る。

【０１４０】第１の本発明による一般式〔Ｉ〕または
〔Ｉ′〕のデラミノマイシンＡまたはＢまたはＣまた
はそれらの塩、あるいは第２の本発明による一般式〔I
I〕のデラミノマイシンＡ２またはＢ２またはＣ２
は、免疫抑制剤またはその他の医薬として使用する場
合、製薬学的に許容できる通常の固体または液体状の担
体と混和することにより医薬組成物として製剤できる。

【０１４１】従って、第４の本発明によると、デラミノ
マイシンＡ、デラミノマイシンＢ、デラミノマイシン
Ｃ、デラミノマイシンＡ２、デラミノマイシンＢ
２およびデラミノマイシンＣ２からなる群より選ばれ
る少くとも１つの抗生物質またはそれの製薬学的に許容
される塩を有効成分として含有し且つこれと混和された
製薬学的に許容できる固体または液体状の担体を含有す
る医薬組成物が提供される。

【０１４２】本発明による一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕
あるいは一般式〔II〕のデラミノマイシン類の１種又は
それ以上を免疫抑制剤または免疫調節剤あるいはその他
の医薬として用いる場合は、一般に経口的にまたは非経
口的に投与できる。

【０１４３】デラミノマイシンＡはＩＣＲマウスに腹
腔内投与した場合に５００ｍｇ／ｋｇ以上のＬＤ₅₀値を
示し、毒性が極めて低い。

【０１４４】本発明の組成物における有効成分化合物、
すなわち、デラミノマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、またはそれ
らの塩、あるいはデラミノマイシンＡ２、Ｂ２または
Ｃ２は単独に、または賦形剤あるいは担体と混合して注
射剤、経口剤または坐剤などの製剤の形で投与される。
賦形剤および担体としては製薬学上許容されるものが選
ばれ、その種類および組成は投与経路や投与方法によっ
て決まる。例えば、液状担体として水、アルコールもし
くは大豆油、ゴマ油、ミネラル油などの動植物油、また
は合成油などが用いられる。固体担体としてマルトー
ス、シュクロースなどの糖類、リジンなどのアミノ酸
類、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘
導体、シクロデキストリンなどの多糖類、ステアリン酸
マグネシウムなどの有機酸塩などが使用される。

【０１４５】注射剤として製剤する場合には、一般に生
理食塩水、各種緩衝液、グルコース、イノシトール、マ
ンニトールなどの糖類溶液、エチレングリコール、ポリ
エチレングリコールなどのグリコール類が望ましい。ま
た、イノシトール、マンニトール、グルコース、マンノ
ース、マルトース、シュクロースなどの糖類、フェニル
アラニンなどのアミノ酸類などの賦形剤と共に凍結乾燥
製剤とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤、例えば
滅菌水、生理食塩水、ブドウ糖液、電解質溶液、アミノ
酸などの静脈投与用液体に溶解して用いることもでき
る。

【０１４６】製剤された組成物中におけるデラミノマイ
シン化合物の含量は製剤型により種々異なるが、通常は
０．１−１００重量％、好ましくは１−９０重量％で
ある。例えば注射液の場合には、通常０．１−５重量％
のデラミノマイシン化合物を含むようにすることがよ
い。経口投与の場合には、前記固体担体もしくは液状担
体と共に錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、ドライシロ
ップ剤、液剤、シロップ剤などの形態で用いられる。カ
プセル、錠剤、顆粒、粉剤の場合、一般にデラミノマイ
シン化合物の含量は３−１００重量％、好ましくは５−
９０重量％であり、残部は担体である。

【０１４７】本発明によるデラミノマイシンまたはその
塩の投与量は、患者の年令、体重、症状、治療目的など
により決定されるが、投与量は一般的な指針として非経
口投与で１−１００ｍｇ／ｋｇ／日、また経口投与で５
−５００ｍｇ／ｋｇ／日である。しかし、その投与量は
動物試験の結果など種々の状況を勘案して総投与量が一
定量を越えない範囲で、連続的または間けつ的に投与で
きる。

【０１４８】非経口投与の場合におけるその総投与量は
投与方法、患者の状況、例えば年令、体重、性別、食
事、併用薬剤などに応じて適宜変更して投与することは
もちろんである。一定の条件下における適量と投与回数
は、上記の指針を基にして専門医の決定によらなければ
ならない。これらの投与条件は経口投与においても同様
である。

【０１４９】以下、本発明を実施例により更に具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。以
下において「％」は「ｗ／ｖ，％」を示す。

【０１５０】実施例１本例はＭＪ２０２−７２Ｆ３株の培養による抗生物質デ
ラミノマイシンＡ、ＢおよびＣの製造例を示す。

【０１５１】（１）種母の調製種母の調製に使用した培地は、下記の成分を１ｌの水に
溶解した組成のものである。ｐＨは無調整とした。グルコース１．５％酵母エキス（大五栄養社製）０．２５％カザミノ酸（ディフコ社製）０．２５％炭酸カルシウム０．４％

【０１５２】上記培地１１０ｍｌを５００ｍｌの三角フ
ラスコに分注し殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＭ
Ｊ２０２−７２Ｆ３株（微工研菌寄第１２６７４号また
はＦＥＲＭＢＰ−４０７９）をスラントより１白金耳
摂取し、３０℃、１８０ｒｐｍのロータリーシェーカー
にて７２時間回転培養したものを種母として得た。

【０１５３】（２）培養生産培地として使用した培地は、下記の成分を１ｌの水
に溶解した組成のものである。ｐＨは無調整とした。こ
の培地を１１０ｍｌずつ５００ｍｌの三角フラスコへ
分注殺菌したものへ、上記種母２．２ｍｌを添加し、ロ
ータリーシェーカーを用いて２７℃、１８０ｒｐｍにて
攪拌下に培養を行なった。

【０１５４】グルコース３．０％酵母エキス（大五栄養社製）０．５％カザミノ酸（ディフコ社製）０．５％ＮａＮＯ₃ ０．２％ＫＣｌ０．２％ＣａＣＯ₃ ０．４％

【０１５５】（３）抗生物質デラミノマイシンＡ、デ
ラミノマイシンＢおよび／またはデラミノマイシンＣ
の採取上記（２）の条件で６日間のＭＪ２０２−７２Ｆ３株を
培養の後、培養液約２０ｌを遠心分離し（３０００ｒｐ
ｍ、１５分間）、菌体をメタノールで抽出処理後、メタ
ノールを溜去した後、残った水層をｎ−ブタノールにて
抽出し、ｎ−ブタノール層を減圧下にて濃縮乾固した。
得られた粗抽出物約３ｇを遠心液々分配クロマトグラフ
（ＣＰＣ，三鬼エンジニアリング）に付す。クロロホル
ム−メタノール−水（２：２：１）の下層を固定相と
し、上層を移動相として２０℃、４００ｒｐｍ、１ｍｌ
／ｍｉｎの条件下、上昇法にて分離精製を行なった。正
溶出画分にデラミノマイシンＡ、ＢおよびＣは溶出さ
れ、これを減圧下濃縮乾固した。

【０１５６】得られた粗精製物８３０ｍｇをセファデッ
クスＬＨ−２０（ファルマシア社製）を用いたゲルクロ
マトグラフィーに付した。メタノールにて溶出を行ない
デラミノマイシンＡ、ＢおよびＣ画分を集め減圧下に
て濃縮乾固した。得られたデラミノマイシンＡ、Ｂお
よびＣ粗精製物８１３ｍｇをメタノールに溶解し、その
一定量をカプセルパック５Ｃ₁₈（資生堂社製）のカラム
（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマト
グラフィーにかけ、メタノール−２５ｍＭ酢酸アンモニ
ウム−アセトニトリル（６０：１０：３０）にて溶出
し、デラミノマイシンＡおよびＢおよびＣの各フラク
ションを得た。

【０１５７】これらフラクションを各々に減圧下で濃縮
乾固後、少量のメタノールに溶解後、セファデックスＬ
Ｈ−２０を用いたゲルクロマトグラフィーに付し、デラ
ミノマイシンＡまたはＢまたはＣを含むフラクション
を減圧下濃縮乾固するとデラミノマイシンＡの無色〜
白色の固体３２０ｍｇ、デラミノマイシンＢの無色〜
白色の固体３０ｍｇ、デラミノマイシンＣの無色〜白
色の固体１３ｍｇが得られた。

【０１５８】実施例２本例はデラミノマイシンＡの脱水閉環による抗生物質
デラミノマイシンＡ２の製造を示す。

【０１５９】デラミノマイシンＡ２２０ｍｇをメタノ
ール３ｍｌに溶解後、１Ｎ塩酸１ｍｌを添加し室温にて
一晩攪拌した。ＴＬＣにて原料のデラミノマイシンＡ
が残っていないことを確認の後、反応液を減圧下濃縮乾
固した。得られた残渣２７７ｍｇを少量のメタノールに
溶解後、シリカゲルカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）
を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、ｎ−ヘキ
サン−クロロホルム−アセトニトリル（６０：２７：１
３）にて溶出し、デラミノマイシンＡ２のフラクショ
ンを得た。

【０１６０】このフラクションを減圧下濃縮乾固後、少
量のメタノールに溶解後、カプセルパック５Ｃ₁₈（資生
堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）を用いた
高速液体クロマトグラフィーにかけ、メタノール−水
（８０：２０）にて溶出し、デラミノマイシンＡ２の
フラクションを得た。これを減圧下濃縮乾固すると６４
ｍｇの粉末が得られた。さらにこれを少量のメタノール
に溶解後、セファデックスＬＨ−２０を用いたゲルクロ
マトグラフィーに付し、デラミノマイシンＡ２を含む
フラクションを減圧下濃縮乾固するとデラミノマイシン
Ａ２の無色〜白色の固体５６．５ｍｇが得られた。

【０１６１】実施例３本例はデラミノマイシンＢの脱水閉環による抗生物質
デラミノマイシンＢ２の製造を示す。

【０１６２】デラミノマイシンＢ約２００ｍｇをメタ
ノール３ｍｌに溶解後、１Ｎ塩酸１ｍｌを添加し室温に
て一晩攪拌した。ＴＬＣにて原料のデラミノマイシン
Ｂが残っていないことを確認の後、反応液を減圧下濃縮
乾固した。得られた残渣を少量のメタノールに溶解後、
シリカゲルカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）を用いた
高速クロマトグラフィーにかけ、ｎ−ヘキサン−クロロ
ホルム−アセトニトリル（６０：２７：１３）にて溶出
し、デラミノマイシンＢ２のフラクションを減圧下濃
縮乾固した。

【０１６３】得られたデラミノマイシンＢ２の粗精製
物６５ｍｇを少量のメタノールに溶解後、カプセルパッ
ク５Ｃ₁₈（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０
ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、メ
タノール−水（８０：２０）にて溶出し、デラミノマイ
シンＢ２のフラクションを得た。これを減圧下濃縮乾
固すると４３ｍｇの粉末が得られた。これを少量のメタ
ノールに溶解後、セファデックスＬＨ−２０を用いたゲ
ルクロマトグラフィーに付し、デラミノマイシンＢ２
を含むフラクションを減圧下濃縮乾固するとデラミノマ
イシンＢ２の無色〜白色の固体３４．６ｍｇが得られ
た。

【０１６４】実施例４本例はデラミノマイシンＣの脱水閉環による抗生物質
デラミノマイシンＣ２の製造を示す。

【０１６５】デラミノマイシンＣ約３０ｍｇをメタノ
ール３ｍｌに溶解後、１Ｎ塩酸１ｍｌを添加し室温にて
一晩攪拌した。ＴＬＣにて原料のデラミノマイシンＣ
が残っていないことを確認の後、反応液を減圧下濃縮乾
固した。得られた残渣を少量のメタノールに溶解後、カ
プセルパック５Ｃ₁₈（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍ
φ×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィー
にかけ、メタノール−水（８０：２０）からメタノール
のグラジエント溶出法にて溶出し、デラミノマイシン
Ｃ２のフラクションを得た。

【０１６６】このフラクションを減圧下濃縮乾固する
と、１１ｍｇの粉末が得られた。さらにこれを少量のメ
タノールに溶解後、セファデックスＬＨ−２０を用いた
ゲルクロマトグラフィーに付し、デラミノマイシンＣ
２を含むフラクションを減圧下濃縮乾固するとデラミノ
マイシンＣ２の無色〜白色の固体９．８ｍｇが得られ
た。

【０１６７】

【発明の効果】以上のように、本発明において、免疫抑
制活性とグラム陽性菌に対する抗菌活性と抗癌活性を有
する新規抗生物質として、デラミノマイシンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ａ２、Ｂ２およびＣ２が収得された。これらのデラ
ミノマイシン類は、臓器移植に必要とされる免疫抑制剤
として、あるいは免疫不全疾患および局所の炎症の治療
に有用である治療薬として期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】デラミノマイシンＡのＫＢｒディスク法によ
る赤外部吸収スペクトル図である。

【図２】デラミノマイシンＢのＫＢｒディスク法によ
る赤外部吸収スペクトル図である。

【図３】デラミノマイシンＣのＫＢｒディスク法によ
る赤外部吸収スペクトル図である。

【図４】デラミノマイシンＡ２のＫＢｒディスク法に
よる赤外部吸収スペクトル図である。

【図５】デラミノマイシンＢ２のＫＢｒディスク法に
よる赤外部吸収スペクトル図である。

【図６】デラミノマイシンＣ２のＫＢｒディスク法に
よる赤外部吸収スペクトル図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｐ 17/10 8931−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 17/10 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者長縄博東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者濱田雅東京都新宿区内藤町１番地26 秀和レジデンス405号 (72)発明者前田謙二東京都目黒区五本木２丁目46番11号 (72)発明者竹内富雄東京都品川区東五反田５丁目１番11号ニユーフジマンシヨン701

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の一般式〔Ｉ〕または次の一般式〔Ｉ′〕〔式中、Ｘはヒドロキシル基、メトキシ基または水素原
子を表し、ＸはデラミノマイシンＡではヒドロキシル
基であり、デラミノマイシンＢではメトキシ基であ
り、デラミノマイシンＣでは水素原子である〕で表さ
れる免疫抑制活性を有する抗生物質、デラミノマイシン
Ａ、デラミノマイシンＢおよびデラミノマイシン
Ｃ、およびそれらの塩。
【請求項２】次の一般式〔II〕〔式中、Ｙはヒドロキシル基、メトキシ基または水素原
子を表し、ＹはデラミノマイシンＡ２ではヒドロキシ
ル基であり、デラミノマイシンＢ２ではメトキシ基で
あり、デラミノマイシンＣ２では水素原子である〕で
表される免疫抑制活性を有する抗生物質、デラミノマイ
シンＡ２、デラミノマイシンＢ２およびデラミノマ
イシンＣ２。
【請求項３】一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕において、
Ｘがヒドロキシル基を表す化合物である請求項１に記載
のデラミノマイシンＡ。
【請求項４】一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕において、
Ｘがメトキシ基を表す化合物である請求項１に記載のデ
ラミノマイシンＢ。
【請求項５】一般式〔Ｉ〕または〔Ｉ′〕において、
Ｘが水素原子を表す化合物である請求項１に記載のデラ
ミノマイシンＣ。
【請求項６】一般式〔II〕において、Ｙがヒドロキシ
ル基を表す化合物である請求項２に記載のデラミノマイ
シンＡ２。
【請求項７】一般式〔II〕において、Ｙがメトキシ基
を表す化合物である請求項２に記載のデラミノマイシン
Ｂ２。
【請求項８】一般式〔II〕において、Ｙが水素原子を
表す化合物である請求項２に記載のデラミノマイシン
Ｃ２。
【請求項９】ストレプトミセス属に属するデラミノマ
イシンＡ、デラミノマイシンＢおよびデラミノマイ
シンＣの生産菌を培養し、その培養物からデラミノマ
イシンＡおよび／またはデラミノマイシンＢおよび
／またはデラミノマイシンＣを採取することを特徴と
する免疫抑制活性を有する新規な抗生物質、デラミノマ
イシンＡおよび／またはデラミノマイシンＢおよび
／またはデラミノマイシンＣの製造法。
【請求項１０】デラミノマイシンＡ、デラミノマイ
シンＢおよびデラミノマイシンＣの生産菌がストレ
プトミセス・アルブルス（Streptomyces alublus ）ＭＪ
２０２−７２Ｆ３株である請求項９記載の製造法。
【請求項１１】請求項１に記載の一般式〔Ｉ〕または
〔Ｉ′〕のデラミノマイシンＡ、デラミノマイシン
ＢまたはデラミノマイシンＣを脱水を伴う閉環反応に
かけることを特徴とする、請求項２に記載の一般式〔I
I〕で表される抗生物質、デラミノマイシンＡ２、デ
ラミノマイシンＢ２またはデラミノマイシンＣ２の
製造法。
【請求項１２】デラミノマイシンＡ、デラミノマイ
シンＢ、デラミノマイシンＣ、デラミノマイシン
Ａ２、デラミノマイシンＢ２およびデラミノマイシン
Ｃ２からなる群より選ばれる少なくとも１つの抗生物
質またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として
含有し且つこれと混和された製薬学的に許容できる固体
または液体状の担体を含有する医薬組成物。