JPH06279479A - 新規抗生物質ｍｊ２０２−７２ｆ３−ｄ物質およびその製造法 - Google Patents
新規抗生物質ｍｊ２０２−７２ｆ３−ｄ物質およびその製造法Info
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- JPH06279479A JPH06279479A JP4213183A JP21318392A JPH06279479A JP H06279479 A JPH06279479 A JP H06279479A JP 4213183 A JP4213183 A JP 4213183A JP 21318392 A JP21318392 A JP 21318392A JP H06279479 A JPH06279479 A JP H06279479A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 下記の理化学的性質を有する新規抗生物質、
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその塩。 （１）分子式：Ｃ３９Ｈ６６Ｏ１３Ｎ８ （２）分子量：８５４ （３）溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホル
ム、エーテルに可溶であるが水、ｎ−ヘキサンに難溶で
ある。 （４）物質の色および性状：白色の固体である。 ストレプトミセス属に属する新規抗生物質ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄ物質生産菌を培養し、その培養液から新規
抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質を採取すること
を特徴とする、新規抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ
物質の製造法。 【効果】 この物質は免疫抑制活性とグラム陽性細菌に
対する抗菌活性および抗腫瘍活性を有する。
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその塩。 （１）分子式：Ｃ３９Ｈ６６Ｏ１３Ｎ８ （２）分子量：８５４ （３）溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホル
ム、エーテルに可溶であるが水、ｎ−ヘキサンに難溶で
ある。 （４）物質の色および性状：白色の固体である。 ストレプトミセス属に属する新規抗生物質ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄ物質生産菌を培養し、その培養液から新規
抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質を採取すること
を特徴とする、新規抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ
物質の製造法。 【効果】 この物質は免疫抑制活性とグラム陽性細菌に
対する抗菌活性および抗腫瘍活性を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性と抗腫瘍活性
および免疫抑制活性を有する新規抗生物質ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄ物質およびその製造法に関する。
および免疫抑制活性を有する新規抗生物質ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄ物質およびその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】微生物の生産する抗生物質は、これまで
多く報告されており、癌および感染症の治療に広く用い
られている。このうち、ストレプトミセス属に属する微
生物の生産する抗腫瘍性抗生物質としては、アクチノマ
イシンＤ，マイトマイシンＣ，ブレオマイシン、ダウノ
マイシン、アドリアマイシン、アクラシノマイシンなど
が知られている。
多く報告されており、癌および感染症の治療に広く用い
られている。このうち、ストレプトミセス属に属する微
生物の生産する抗腫瘍性抗生物質としては、アクチノマ
イシンＤ，マイトマイシンＣ，ブレオマイシン、ダウノ
マイシン、アドリアマイシン、アクラシノマイシンなど
が知られている。
【０００３】また、微生物が生産する免疫抑制物質とし
ては、サイクロスポリンＡ，ＦＫ５０６，ラパマイシン
およびスパーガリン等が知られている。
ては、サイクロスポリンＡ，ＦＫ５０６，ラパマイシン
およびスパーガリン等が知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は臓器移植や免
疫不全疾患および局所の炎症に有用な新規免疫抑制剤、
および細菌感染症の治療に有用な新規抗生物質、および
ある種の癌治療に有用な新規抗腫瘍活性物質を得ること
を目的とする。
疫不全疾患および局所の炎症に有用な新規免疫抑制剤、
および細菌感染症の治療に有用な新規抗生物質、および
ある種の癌治療に有用な新規抗腫瘍活性物質を得ること
を目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは微生物生産
物中に有用な新規生理活性物質を見出す目的で、天然の
土壌より数多くの微生物を単離し、その生産物について
種々の研究を行った。
物中に有用な新規生理活性物質を見出す目的で、天然の
土壌より数多くの微生物を単離し、その生産物について
種々の研究を行った。
【０００６】先に、本発明者らは、免疫抑制活性並びに
抗菌活性及び抗腫瘍活性を有する新規抗生物質、ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ａ、Ｂ、ＣおよびＡ′、Ｂ′、Ｃ′物
質と、その製造法を発明した（特願平４−
号；出願日；１９９２年６月２３日）。本発明者らは更
に研究を進め、その結果、本発明者らが先に土壌から分
離したストレプトミセス属に属する微生物であるＭＪ２
０２−７２Ｆ３株の培養液中に優れた抗菌活性と抗腫瘍
活性および免疫抑制活性を有するＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄ物質が生産され蓄積されることを認め、その物質を
単離し、生物学的および物理化学的性状を調べ、この物
質が免疫抑制活性とグラム陽性細菌に対する抗菌活性お
よび抗腫瘍活性を有すること、および新規化合物である
ことを見出した。
抗菌活性及び抗腫瘍活性を有する新規抗生物質、ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ａ、Ｂ、ＣおよびＡ′、Ｂ′、Ｃ′物
質と、その製造法を発明した（特願平４−
号；出願日；１９９２年６月２３日）。本発明者らは更
に研究を進め、その結果、本発明者らが先に土壌から分
離したストレプトミセス属に属する微生物であるＭＪ２
０２−７２Ｆ３株の培養液中に優れた抗菌活性と抗腫瘍
活性および免疫抑制活性を有するＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄ物質が生産され蓄積されることを認め、その物質を
単離し、生物学的および物理化学的性状を調べ、この物
質が免疫抑制活性とグラム陽性細菌に対する抗菌活性お
よび抗腫瘍活性を有すること、および新規化合物である
ことを見出した。
【０００７】すなわち、本発明は抗菌活性と抗腫瘍活性
および免疫抑制活性を有する新規抗生物質、ＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその製造法を提供するもので
ある。
および免疫抑制活性を有する新規抗生物質、ＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその製造法を提供するもので
ある。
【０００８】詳しく言えば、第１の本発明によると、下
記の物理化学的性状を有する新規な抗生物質、ＭＪ２０
２−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその塩が提供される。
記の物理化学的性状を有する新規な抗生物質、ＭＪ２０
２−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその塩が提供される。
【０００９】 〔１〕ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の物理化学的性質 第一の本発明によるＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の物
理化学的性状は下記のとおりである。
理化学的性状は下記のとおりである。
【００１０】（１）分子式：Ｃ39Ｈ66Ｏ13Ｎ8 高分解能ＦＡＢ−ＭＳ〔Ｎｅｇ．〕により決定した。
【００１１】Ｃ39Ｈ66Ｏ13Ｎ8 〔Ｍ−Ｈ〕- として 実測値 ８５３．４６７１ 計算値 ８５３．４６７１ なお基準物質はＰＥＧ６００を用いた。
【００１２】（２）分子量：８５４ ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ８５５〔Ｍ＋Ｈ〕+ ，８７７
〔Ｍ＋Ｎａ〕+ ，８５３〔Ｍ−Ｈ〕- が観測された。
〔Ｍ＋Ｎａ〕+ ，８５３〔Ｍ−Ｈ〕- が観測された。
【００１３】（３）融点：１６７〜１７０℃
【００１４】（５）紫外線吸収スペクトル：添付図面の
図１に示すとおり、末端吸収のみである。
図１に示すとおり、末端吸収のみである。
【００１５】（６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
法）：添付図面の図２に示すとおりである。
法）：添付図面の図２に示すとおりである。
【００１６】
【００１７】（７） 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００Ｍ
Ｈｚ）：添付図面の図３に示すとおりである。重メタノ
ール中メタノール（３．３０ｐｐｍ）を基準物質として
測定した。
Ｈｚ）：添付図面の図３に示すとおりである。重メタノ
ール中メタノール（３．３０ｐｐｍ）を基準物質として
測定した。
【００１８】（８）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００Ｍ
Ｈｚ）：添付図面の図４に示すとおりである。重メタノ
ール中メタノール（４９．００ｐｐｍ）を基準物質とし
て測定した。
Ｈｚ）：添付図面の図４に示すとおりである。重メタノ
ール中メタノール（４９．００ｐｐｍ）を基準物質とし
て測定した。
【００１９】（９）溶解性：メタノール、酢酸エチル、
クロロホルム、エーテルに可溶、水、ｎ−ヘキサンに難
溶である。
クロロホルム、エーテルに可溶、水、ｎ−ヘキサンに難
溶である。
【００２０】（１０）薄層クロマトグラフィー（メルク
社製シリカゲル６０Ｆ254 Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒ
ｆ値を次表に示す。
社製シリカゲル６０Ｆ254 Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒ
ｆ値を次表に示す。
【００２１】
【００２２】（１１）呈色反応：バニリン硫酸およびラ
イドンスミスに対して陽性、ニンヒドリンに対して陰性
である。
イドンスミスに対して陽性、ニンヒドリンに対して陰性
である。
【００２３】（１２）物質の色および性状：白色の固体
である。
である。
【００２４】 〔２〕ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の生物学的活性 第１の本発明によるＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は、
グラム陽性菌に対して強い抗菌作用を示した。
グラム陽性菌に対して強い抗菌作用を示した。
【００２５】また混合リンパ球培養反応(Mixed Lymphoc
yte Culture Reaction) において、組織適合抗原依存性
のＴ細胞増殖反応に対して強い阻害活性を示した。更
に、in vivoにおいて、羊赤血球を抗原としたマウスの遅
延型過敏症に対し強い抑制活性を示した。一方、抗体産
生試験においては全く阻害しなかった。
yte Culture Reaction) において、組織適合抗原依存性
のＴ細胞増殖反応に対して強い阻害活性を示した。更
に、in vivoにおいて、羊赤血球を抗原としたマウスの遅
延型過敏症に対し強い抑制活性を示した。一方、抗体産
生試験においては全く阻害しなかった。
【００２６】また種々の培養癌細胞の増殖に対し強い阻
害活性を示した。更に、in vivo において、エールリッ
ヒ癌細胞を皮下に移植したマウスの実験系において抑制
効果を示した。
害活性を示した。更に、in vivo において、エールリッ
ヒ癌細胞を皮下に移植したマウスの実験系において抑制
効果を示した。
【００２７】これらの結果から、Ｔ細胞を選択的に阻害
するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は、臓器移植や細胞
性免疫反応を介する過敏免疫状態である自己免疫疾患治
療に有用な薬剤としての用途がある。
するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は、臓器移植や細胞
性免疫反応を介する過敏免疫状態である自己免疫疾患治
療に有用な薬剤としての用途がある。
【００２８】また、ある種の癌細胞に対し増殖阻害活性
を示し、in vivo におけるマウス固型癌の実験系におい
ても抑制効果を示したことより、抗癌剤としての用途が
ある。上要約すると、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は
グラム陽性菌感染症の治療に有用であるとともに、臓器
移植や自己免疫疾患に有用な免疫抑制剤としての用途が
ある。更に、ある種の癌細胞に対して有用な抗癌剤とし
ての用途がある。
を示し、in vivo におけるマウス固型癌の実験系におい
ても抑制効果を示したことより、抗癌剤としての用途が
ある。上要約すると、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は
グラム陽性菌感染症の治療に有用であるとともに、臓器
移植や自己免疫疾患に有用な免疫抑制剤としての用途が
ある。更に、ある種の癌細胞に対して有用な抗癌剤とし
ての用途がある。
【００２９】第１の本発明によるＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄ物質の生理活性を後記の試験例で評価した。
−Ｄ物質の生理活性を後記の試験例で評価した。
【００３０】試験例１ 混合リンパ球培養反応(Mixed Lymphocyte Culture Reac
tion) に対する阻害活性 混合リンパ球培養反応の刺激細胞としてＷＫＹラットの
脾細胞をマイトマイシンＣ ５０μｇ／ｍｌで３７℃、
２０分間処理したものを用い、反応細胞としてフィッシ
ャーＦ３４４ラットの脾細胞のナイロンウール非付着細
胞を用いた。これらの細胞をＰＲＭＩ１６４０培地（５
％、牛胎児血清を含む）中にて、種々の濃度で添加され
る供試化合物の存在下または非存在下で混合培養し３７
℃、５％炭酸ガス濃度の条件下で、１２０時間反応させ
た。反応終了の１６〜１８時間前に 3Ｈ−チミジンを添
加し、その反応細胞への取り込みを液体シンチレーショ
ンカウンターにて測定した。混合リンパ球培養反応に対
する供試化合物の阻害活性は、次式で算出される阻害率
（％）で評価した。 阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００） ただし、Ｔは供試化合物を添加した時の 3Ｈ−チミジン
の取り込み量を表し、Ｃは供試化合物無添加時の 3Ｈ−
チミジンの取り込み量を表す。その結果を表１に示す。
tion) に対する阻害活性 混合リンパ球培養反応の刺激細胞としてＷＫＹラットの
脾細胞をマイトマイシンＣ ５０μｇ／ｍｌで３７℃、
２０分間処理したものを用い、反応細胞としてフィッシ
ャーＦ３４４ラットの脾細胞のナイロンウール非付着細
胞を用いた。これらの細胞をＰＲＭＩ１６４０培地（５
％、牛胎児血清を含む）中にて、種々の濃度で添加され
る供試化合物の存在下または非存在下で混合培養し３７
℃、５％炭酸ガス濃度の条件下で、１２０時間反応させ
た。反応終了の１６〜１８時間前に 3Ｈ−チミジンを添
加し、その反応細胞への取り込みを液体シンチレーショ
ンカウンターにて測定した。混合リンパ球培養反応に対
する供試化合物の阻害活性は、次式で算出される阻害率
（％）で評価した。 阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００） ただし、Ｔは供試化合物を添加した時の 3Ｈ−チミジン
の取り込み量を表し、Ｃは供試化合物無添加時の 3Ｈ−
チミジンの取り込み量を表す。その結果を表１に示す。
【００３１】
【００３２】試験例２ マウス遅延型過敏症に対する抑制効果 ＣＤＦ1 マウスに羊赤血球（１０5 個／マウス）を静注
後、４日目に羊赤血球（１０8 個／マウス）を足蹠に皮
下注射し遅延型過敏症状を惹起した。供試化合物は免疫
後０〜４日目まで腹腔内投与し、免疫後５日目にマウス
足蹠の厚さを測定することにより抑制効果を判定した。
この抑制効果は次式で算出される阻害率（％）で評価し
た。 阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００） ただし、Ｔは供試化合物を投与したときの足蹠の厚さを
表し、Ｃは供試化合物無投与の時の足蹠の厚さを表す。
結果を表２に示す。
後、４日目に羊赤血球（１０8 個／マウス）を足蹠に皮
下注射し遅延型過敏症状を惹起した。供試化合物は免疫
後０〜４日目まで腹腔内投与し、免疫後５日目にマウス
足蹠の厚さを測定することにより抑制効果を判定した。
この抑制効果は次式で算出される阻害率（％）で評価し
た。 阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００） ただし、Ｔは供試化合物を投与したときの足蹠の厚さを
表し、Ｃは供試化合物無投与の時の足蹠の厚さを表す。
結果を表２に示す。
【００３３】
【００３４】試験例３ 癌細胞に対する増殖阻害活性 各種動物癌細胞を培養し、これら培養癌細胞に対する本
発明の抗生物質の増殖阻害活性（ＩＣ50）値を測定し、
その結果を表３に示す。
発明の抗生物質の増殖阻害活性（ＩＣ50）値を測定し、
その結果を表３に示す。
【００３５】
【００３６】試験例４ マウスのエールリッヒ癌に対する制癌効果 ＩＣＲマウスにエールリッヒ癌細胞（２×１０6 個／マ
ウス）を皮下に移植し、供試化合物は移植後１〜９日目
まで腹腔内投与し、移植後１５日目に腫瘍の重量を測定
した。生理食塩水を投与した対照群のマウスの腫瘍重量
を１００とした次式で算出される抑制率（％）で評価し
た。 抑制率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００） ただし、Ｔは供試化合物を投与したときの腫瘍重量を表
し、Ｃは供試化合物無投与の時の腫瘍重量を表す。その
結果を表４に示す。
ウス）を皮下に移植し、供試化合物は移植後１〜９日目
まで腹腔内投与し、移植後１５日目に腫瘍の重量を測定
した。生理食塩水を投与した対照群のマウスの腫瘍重量
を１００とした次式で算出される抑制率（％）で評価し
た。 抑制率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ×１００） ただし、Ｔは供試化合物を投与したときの腫瘍重量を表
し、Ｃは供試化合物無投与の時の腫瘍重量を表す。その
結果を表４に示す。
【００３７】
【００３８】試験例５ 抗菌活性 さらに本発明によるＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質はあ
る種の細菌に対して抗菌活性を有する。寒天平板希釈法
によって測定した各種細菌および糸状菌に対するＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の最小生育阻止濃度（μｇ／ｍ
ｌ）の測定結果を表５ａおよび表５ｂに示す。
る種の細菌に対して抗菌活性を有する。寒天平板希釈法
によって測定した各種細菌および糸状菌に対するＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の最小生育阻止濃度（μｇ／ｍ
ｌ）の測定結果を表５ａおよび表５ｂに示す。
【００３９】
【００４０】
【００４１】さらに、第２の本発明によると、ストレプ
トミセス属に属するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質生産
菌を培養し、その培養物からＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ
物質を採取することを特徴とする免疫抑制活性および抗
腫瘍活性を有する新規抗生物質、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄ物質の製造法が提供される。
トミセス属に属するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質生産
菌を培養し、その培養物からＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ
物質を採取することを特徴とする免疫抑制活性および抗
腫瘍活性を有する新規抗生物質、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄ物質の製造法が提供される。
【００４２】本発明の方法に用いるＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｄ物質生産菌はストレプトミセス属の菌株でＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｄ物質生産能を有するものであれば良
く、特に限定されない。使用できるＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｄ物質生産菌の一例には平成２年１月、山梨県大月
市の土壌より分離された放線菌でＭＪ２０２−７２Ｆ３
の菌株番号が付された菌株がある。
３−Ｄ物質生産菌はストレプトミセス属の菌株でＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｄ物質生産能を有するものであれば良
く、特に限定されない。使用できるＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｄ物質生産菌の一例には平成２年１月、山梨県大月
市の土壌より分離された放線菌でＭＪ２０２−７２Ｆ３
の菌株番号が付された菌株がある。
【００４３】以下、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株の菌学的性
状について述べる。 ＭＪ２０２−７２Ｆ３菌の菌学的性状 １．形態 ＭＪ２０２−７２Ｆ３株は、分枝した基生菌糸より比較
的長い気菌糸を伸長し、その先端は５〜６回転のらせん
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。気
菌糸の先端には５０個以上の胞子の連鎖を認め、胞子の
大きさは約０．５〜０．７×０．８〜１．２ミクロンで
あった。なお、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状を呈
する。
状について述べる。 ＭＪ２０２−７２Ｆ３菌の菌学的性状 １．形態 ＭＪ２０２−７２Ｆ３株は、分枝した基生菌糸より比較
的長い気菌糸を伸長し、その先端は５〜６回転のらせん
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。気
菌糸の先端には５０個以上の胞子の連鎖を認め、胞子の
大きさは約０．５〜０．７×０．８〜１．２ミクロンで
あった。なお、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状を呈
する。
【００４４】２．各種培地における生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル(Container Corporation ofAmerica
の color harmony manual)を用いた。
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル(Container Corporation ofAmerica
の color harmony manual)を用いた。
【００４５】 （１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（３０℃培養） 無色〜うす黄の発育上に、部分的に明るい灰〔２ｆｅ，
Covert Gray 〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は認めら
れない。
Covert Gray 〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は認めら
れない。
【００４６】（２）グルコース・アスパラギン寒天培地
（３０℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。
（３０℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。
【００４７】（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ＩＳＰ−培地５、３０℃培養） うす黄〔２ｇｃ，Bamboo〕の発育上に、白の気菌糸をう
っすらと着生し、溶解性色素は認められない。
（ＩＳＰ−培地５、３０℃培養） うす黄〔２ｇｃ，Bamboo〕の発育上に、白の気菌糸をう
っすらと着生し、溶解性色素は認められない。
【００４８】（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ
−培地４、３０℃培養） 無色〜うす黄の発育上に、明るい灰〔３ｆｅ，Silver G
ray 〕の気菌糸をわずかに着生する。溶解性色素は認め
られない。
−培地４、３０℃培養） 無色〜うす黄の発育上に、明るい灰〔３ｆｅ，Silver G
ray 〕の気菌糸をわずかに着生する。溶解性色素は認め
られない。
【００４９】（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地
７、３０℃培養） うす黄〔２ｇｃ，Bamboo〕の発育上に、白の気菌糸をう
っすらと着生し、溶解性色素は認められない。
７、３０℃培養） うす黄〔２ｇｃ，Bamboo〕の発育上に、白の気菌糸をう
っすらと着生し、溶解性色素は認められない。
【００５０】（６）栄養寒天培地（３０℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認めら
れない。
れない。
【００５１】（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−
培地２、３０℃培養） うす黄〔１1/2 ｉｃ，Lt Antique Gold 〕の発育上に、
部分的に明るい灰〔ｆ，〜２ｆｅ，Covert Gray 〕の気
菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。
培地２、３０℃培養） うす黄〔１1/2 ｉｃ，Lt Antique Gold 〕の発育上に、
部分的に明るい灰〔ｆ，〜２ｆｅ，Covert Gray 〕の気
菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。
【００５２】（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培
地３、３０℃培養） うす黄の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解
性色素は認められない。
地３、３０℃培養） うす黄の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解
性色素は認められない。
【００５３】 （９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（３０℃培養） 発育は無色〜うす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は
認められない。
認められない。
【００５４】（１０）スターチ寒天培地（３０℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。
ない。
【００５５】 （１１）リンゴ酸石灰寒天培地（３０℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。
ない。
【００５６】 （１２）セルロース（濾紙片添加合成液、３０℃培養） ４０日間培養後も生育は認められない。
【００５７】（１３）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はう
す黄、茶白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は認
められない。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２
７℃培養）の場合、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。
す黄、茶白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は認
められない。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２
７℃培養）の場合、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。
【００５８】 （１４）脱脂牛乳（３０℃および３７℃培養） ３０℃培養で、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。３７℃培養の場合、発育は極め
て悪く、うす黄の発育がわずかに観察されるが、気菌糸
および溶解性色素は認められない。
性色素も認められない。３７℃培養の場合、発育は極め
て悪く、うす黄の発育がわずかに観察されるが、気菌糸
および溶解性色素は認められない。
【００５９】３．生理的性質 （１）生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース１．０
％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、リン酸二カリウム
０．０５％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）を用い、２
０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温
度で試験した結果、５０℃を除き、そのいずれの温度で
も発育したが、３７℃での生育は極めて悪い。なお、生
育至適温度は２７℃〜３０℃付近と思われる。
％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、リン酸二カリウム
０．０５％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）を用い、２
０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温
度で試験した結果、５０℃を除き、そのいずれの温度で
も発育したが、３７℃での生育は極めて悪い。なお、生
育至適温度は２７℃〜３０℃付近と思われる。
【００６０】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養） １５％単純ゼラチン培地およびグルコース・ペプトン・
ゼラチン培地のいずれの場合も２１日間の観察で液化性
は認められない。
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養） １５％単純ゼラチン培地およびグルコース・ペプトン・
ゼラチン培地のいずれの場合も２１日間の観察で液化性
は認められない。
【００６１】（３）スターチの加水分解（スターチ・無
機塩寒天培地およびスターチ寒天培地、いずれも３０℃
培養） いずれの培地においても水解性は認められない。
機塩寒天培地およびスターチ寒天培地、いずれも３０℃
培養） いずれの培地においても水解性は認められない。
【００６２】（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂
牛乳、３０℃および３７℃培養） ３０℃培養では、培養後２１日目頃より凝固することな
くペプトン化が始まるが、その作用は極めて弱い。３７
℃培養の場合、生育は極めて悪く、それらの作用は観察
されない。
牛乳、３０℃および３７℃培養） ３０℃培養では、培養後２１日目頃より凝固することな
くペプトン化が始まるが、その作用は極めて弱い。３７
℃培養の場合、生育は極めて悪く、それらの作用は観察
されない。
【００６３】（５）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培
地、ＩＳＰ−培地７；いずれも３０℃培養） いずれの培地でも陰性である。
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培
地、ＩＳＰ−培地７；いずれも３０℃培養） いずれの培地でも陰性である。
【００６４】（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴド
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９；３０℃培養） D−グルコース、イノシトールを利用して生育し、シュ
クロース、 D−マンニトール、ラクトースは利用しな
い。 D−キシロース、 D−フルクトースの利用の存否は
判然とせず、 L−アラビノース、ラムノース、ラフィノ
ースは、おそらく利用しないと思われる。
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９；３０℃培養） D−グルコース、イノシトールを利用して生育し、シュ
クロース、 D−マンニトール、ラクトースは利用しな
い。 D−キシロース、 D−フルクトースの利用の存否は
判然とせず、 L−アラビノース、ラムノース、ラフィノ
ースは、おそらく利用しないと思われる。
【００６５】（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天培地、３０℃培養） 培養後７日目頃より、リンゴ酸石灰の溶解が認められ、
その作用は中等度である。
寒天培地、３０℃培養） 培養後７日目頃より、リンゴ酸石灰の溶解が認められ、
その作用は中等度である。
【００６６】（８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カ
リウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、３０℃培養） 陰性である。
リウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、３０℃培養） 陰性である。
【００６７】（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成
液、３０℃培養） ４０日間培養の観察では生育せず、分解は認められな
い。
液、３０℃培養） ４０日間培養の観察では生育せず、分解は認められな
い。
【００６８】以上の性状を要約すると、ＭＪ２０２−７
２Ｆ３株の形態は、分枝した基生菌より５〜６回転のら
せん形成を有する気菌糸を伸長し、輪生枝および胞子の
うは認められない。気菌糸の先端には５０個以上の胞子
を連鎖し、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状である。
種々の培地で、発育は無色〜うす黄、気菌糸の着生は悪
いが、２〜３の培地では、明るい灰の気菌糸を部分的に
着生する。溶解性色素は認められない。生育至的温度は
２７℃〜３０℃付近である。メラニン様色素の生成は陰
性、スターチの水解性は認められず、蛋白分解力は弱
い。
２Ｆ３株の形態は、分枝した基生菌より５〜６回転のら
せん形成を有する気菌糸を伸長し、輪生枝および胞子の
うは認められない。気菌糸の先端には５０個以上の胞子
を連鎖し、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状である。
種々の培地で、発育は無色〜うす黄、気菌糸の着生は悪
いが、２〜３の培地では、明るい灰の気菌糸を部分的に
着生する。溶解性色素は認められない。生育至的温度は
２７℃〜３０℃付近である。メラニン様色素の生成は陰
性、スターチの水解性は認められず、蛋白分解力は弱
い。
【００６９】また、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノ
ピメリン酸はＬＬ−型であった。
ピメリン酸はＬＬ−型であった。
【００７０】これらの性状より、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
株は、ストレプトミセス（Streptom yces）属に属すると
考えられる。ストレプトミセス属の既知菌種を検索する
と近縁の種として、ストレプトミセス・アルブルス（St
reptomyces albulus ，文献，International Journal
of Systematic Bacteriology，２２巻，２７１頁，１９
７２年；同誌，３０巻，３７１頁，１９８０年）および
ストレプトミセス・ナタレンシス（Streptomyces nata
lensis，文献，International Journal of Systematic
Bacteriology，２２巻，３２３頁，１９７２年）があげ
られた。現在、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株と上記２種の本
研究所保存菌株とを実地に比較検討中である。そこで現
時点では、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株をストレプトミセス
・エスピー（Streptomyces sp.) ＭＪ２０２−７２Ｆ３
とする。
株は、ストレプトミセス（Streptom yces）属に属すると
考えられる。ストレプトミセス属の既知菌種を検索する
と近縁の種として、ストレプトミセス・アルブルス（St
reptomyces albulus ，文献，International Journal
of Systematic Bacteriology，２２巻，２７１頁，１９
７２年；同誌，３０巻，３７１頁，１９８０年）および
ストレプトミセス・ナタレンシス（Streptomyces nata
lensis，文献，International Journal of Systematic
Bacteriology，２２巻，３２３頁，１９７２年）があげ
られた。現在、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株と上記２種の本
研究所保存菌株とを実地に比較検討中である。そこで現
時点では、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株をストレプトミセス
・エスピー（Streptomyces sp.) ＭＪ２０２−７２Ｆ３
とする。
【００７１】なお、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株を工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託申請し、平成３年１２月
２４日、微工研菌寄第１２６７４号として受託された。
院微生物工業技術研究所に寄託申請し、平成３年１２月
２４日、微工研菌寄第１２６７４号として受託された。
【００７２】次に、第２の本発明の方法による抗生物質
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の製造について説明す
る。
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の製造について説明す
る。
【００７３】免疫抑制活性を有する新規抗生物質ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は、ストレプトミセス属に属す
るＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ生産菌を適当な培地で培養
することにより、好ましくは好気的条件下に培養するこ
とにより、培地中に目的物質を産生、蓄積させ、次いで
培養物から目的物質を採取することにより製造すること
ができる。
０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は、ストレプトミセス属に属す
るＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ生産菌を適当な培地で培養
することにより、好ましくは好気的条件下に培養するこ
とにより、培地中に目的物質を産生、蓄積させ、次いで
培養物から目的物質を採取することにより製造すること
ができる。
【００７４】培地はＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ生産菌が
利用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。具
体的には、例えば、炭素源としてグルコース、イノシト
ール、マルトースおよび油脂類などが使用でき、窒素源
として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母エキス、ポリペプトン
およびコーンスティープリカーなどの有機物並びにアン
モニウム塩または硝酸塩、例えば硫酸アンモニウム、硝
酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの無機物が使
用できる。また必要に応じて食塩、塩化カリウム、炭酸
カルシウム、リン酸塩、重金属塩などの無機塩類を添加
することができる。発酵中の発泡を抑制するために常法
に従って適当な消泡剤、例えばシリコーン系消泡剤を添
加することもできる。
利用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。具
体的には、例えば、炭素源としてグルコース、イノシト
ール、マルトースおよび油脂類などが使用でき、窒素源
として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母エキス、ポリペプトン
およびコーンスティープリカーなどの有機物並びにアン
モニウム塩または硝酸塩、例えば硫酸アンモニウム、硝
酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの無機物が使
用できる。また必要に応じて食塩、塩化カリウム、炭酸
カルシウム、リン酸塩、重金属塩などの無機塩類を添加
することができる。発酵中の発泡を抑制するために常法
に従って適当な消泡剤、例えばシリコーン系消泡剤を添
加することもできる。
【００７５】培養方法としては、一般に行なわれている
生理活性抗生物質等の生産のための培養方法であればよ
く、特に好気的液体深部培養法が適している。培養温度
は２０〜３７℃が適当であるが、２７〜３０℃が好まし
い。この方法でＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の生産量
は、振盪培養、通気攪拌培養共に培養５〜７日間で最高
に達する。このようにしてＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物
質の蓄積された培養物が得られる。
生理活性抗生物質等の生産のための培養方法であればよ
く、特に好気的液体深部培養法が適している。培養温度
は２０〜３７℃が適当であるが、２７〜３０℃が好まし
い。この方法でＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の生産量
は、振盪培養、通気攪拌培養共に培養５〜７日間で最高
に達する。このようにしてＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物
質の蓄積された培養物が得られる。
【００７６】培養物中では、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ
物質は菌体中および培養濾液中に存在するが、菌体中に
より多く存在する。このような培養物からＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄ物質を採取するには、合目的な任意の方法
が利用可能である。そのひとつの方法は、抽出の原理に
基づくものであって、具体的には、例えば、培養濾液中
でのＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質については水不混和
性の溶媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、ｎ−ブタノ
ールなどで抽出する方法、あるいは菌体内のＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｄ物質については濾過または遠心分離など
で得た菌体集体をメタノール、エタノール、アセトンな
どで処理して回収する方法がある。菌体を分離せずに培
養物そのままを上記の抽出操作に付すこともできる。適
当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範ちゅうに入れる
ことができる。例えばＣＰＣ（Centrifugal Partition
Chromatograph 、三鬼エンヂニアリング社製）も使用で
きる。
物質は菌体中および培養濾液中に存在するが、菌体中に
より多く存在する。このような培養物からＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄ物質を採取するには、合目的な任意の方法
が利用可能である。そのひとつの方法は、抽出の原理に
基づくものであって、具体的には、例えば、培養濾液中
でのＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質については水不混和
性の溶媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、ｎ−ブタノ
ールなどで抽出する方法、あるいは菌体内のＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｄ物質については濾過または遠心分離など
で得た菌体集体をメタノール、エタノール、アセトンな
どで処理して回収する方法がある。菌体を分離せずに培
養物そのままを上記の抽出操作に付すこともできる。適
当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範ちゅうに入れる
ことができる。例えばＣＰＣ（Centrifugal Partition
Chromatograph 、三鬼エンヂニアリング社製）も使用で
きる。
【００７７】培養物からＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質
を採取する他の方法のひとつは、吸着の原理に基づくも
のである。例えば、培養濾液あるいは上記のようにして
抽出操作を行なうことによって得られる抽出液を対象と
して、適当な吸着剤、ゲル濾過剤、例えば、シリカゲ
ル、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、
トヨパールＨＷ−４０（東ソー社製）、ダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化成工業社製）などを用いたカラムクロ
マトグラフィー、ヌクレオシル５Ｃ18（西独ナーゲル社
製）などを用いた高速液体クロマトグラフィーその他に
よってＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質を吸着させ、その
後溶離させることによりＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質
を得ることができる。このようにして得られたＭＪ２０
２−７２Ｆ３−Ｄ物質含有溶液を減圧濃縮乾固すれば、
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の粗標品が得られる。
を採取する他の方法のひとつは、吸着の原理に基づくも
のである。例えば、培養濾液あるいは上記のようにして
抽出操作を行なうことによって得られる抽出液を対象と
して、適当な吸着剤、ゲル濾過剤、例えば、シリカゲ
ル、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、
トヨパールＨＷ−４０（東ソー社製）、ダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化成工業社製）などを用いたカラムクロ
マトグラフィー、ヌクレオシル５Ｃ18（西独ナーゲル社
製）などを用いた高速液体クロマトグラフィーその他に
よってＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質を吸着させ、その
後溶離させることによりＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質
を得ることができる。このようにして得られたＭＪ２０
２−７２Ｆ３−Ｄ物質含有溶液を減圧濃縮乾固すれば、
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の粗標品が得られる。
【００７８】このようにして得られるＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ｄ物質の粗標品を更に精製するためには、上記の
抽出法および吸着法を必要に応じて組み合わせ必要回数
行なえばよい。例えば、ダイヤイオンＨＰ−２０、セフ
ァデックスＬＨ−２０などの吸着剤またはゲル濾過剤を
用いたカラムクロマトグラフィー、ＣＰＣを用いた遠心
液々分配クロマトグラフィー、シリカゲルを用いた順相
クロマトグラフィーおよびヌクレオシル５Ｃ18などを用
いた高速液体クロマトグラフィーを適宜組合わせて実施
することができる。
Ｆ３−Ｄ物質の粗標品を更に精製するためには、上記の
抽出法および吸着法を必要に応じて組み合わせ必要回数
行なえばよい。例えば、ダイヤイオンＨＰ−２０、セフ
ァデックスＬＨ−２０などの吸着剤またはゲル濾過剤を
用いたカラムクロマトグラフィー、ＣＰＣを用いた遠心
液々分配クロマトグラフィー、シリカゲルを用いた順相
クロマトグラフィーおよびヌクレオシル５Ｃ18などを用
いた高速液体クロマトグラフィーを適宜組合わせて実施
することができる。
【００７９】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【００８０】以下において「％」は「ｗ／ｖ ％」を示
す。
す。
【００８１】実施例１ （１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１ｌの水に溶解し
たものである。
たものである。
【００８２】ｐＨは無調整とした。
【００８３】 グルコース １．５ ％ 酵母エキス（大五栄養社製） ０．２５％ カザミノ酸（ディフコ社製） ０．２５％ 炭酸カルシウム ０．４ ％
【００８４】上記培地１１０ｍｌを５００ｍｌの三角フ
ラスコに分注し殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＭ
Ｊ２０２−７２Ｆ３株（微工研寄菌第１２６７４号）を
スラントより１白金耳摂取し、３０℃、１８０ｒｐｍの
ロータリーシェーカーにて７２時間回転培養したものを
種母とした。
ラスコに分注し殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＭ
Ｊ２０２−７２Ｆ３株（微工研寄菌第１２６７４号）を
スラントより１白金耳摂取し、３０℃、１８０ｒｐｍの
ロータリーシェーカーにて７２時間回転培養したものを
種母とした。
【００８５】（２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１ｌの水に溶解し
たものである。ｐＨは無調整とした。この培地を１１０
ｍｌずつ５００ｍｌの三角フラスコへ分注殺菌したもの
へ、上記種母２．２ｍｌを添加し、ロータリーシェーカ
ーを用いて２７℃、１８０ｒｐｍにて回転培養を行なっ
た。
たものである。ｐＨは無調整とした。この培地を１１０
ｍｌずつ５００ｍｌの三角フラスコへ分注殺菌したもの
へ、上記種母２．２ｍｌを添加し、ロータリーシェーカ
ーを用いて２７℃、１８０ｒｐｍにて回転培養を行なっ
た。
【００８６】 グルコース ３．０ ％ 酵母エキス（大五栄養社製） ０．５ ％ カザミノ酸（ディフコ社製） ０．５ ％ ＮａＮＯ3 ０．２ ％ ＫＣｌ ０．２ ％ ＣａＣＯ3 ０．４ ％
【００８７】 （３）ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の採取 上記（２）の条件で６日間の培養の後、培養液約１０ｌ
を遠心分離し（３０００ｒｐｍ、１５分間）、菌体をメ
タノール処理後、メタノールを溜去した後、残った水槽
をｎ−ブタノールにて抽出し、ｎ−ブタノール層を減圧
下にて濃縮乾固する。得られた粗抽出物約３ｇを遠心液
々分配クロマトグラフ（ＣＰＣ）（三鬼エンヂニアリン
グ社製）に付す。クロロホルム／メタノール／水＝２／
２／１の下層を固定相とし、上層を移動相として２０
℃、４００ｒｐｍ、１ｍｌ／ｍｉｎの条件下、上昇法に
て分離精製を行なう。反転溶出画分（上昇法にて一定量
の移動相を流し分離精製を行った後、固定相に保持され
た物質が、下層を移動相として下降法にて溶出された画
分）にＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は溶出され、これ
を減圧下濃縮乾固する。
を遠心分離し（３０００ｒｐｍ、１５分間）、菌体をメ
タノール処理後、メタノールを溜去した後、残った水槽
をｎ−ブタノールにて抽出し、ｎ−ブタノール層を減圧
下にて濃縮乾固する。得られた粗抽出物約３ｇを遠心液
々分配クロマトグラフ（ＣＰＣ）（三鬼エンヂニアリン
グ社製）に付す。クロロホルム／メタノール／水＝２／
２／１の下層を固定相とし、上層を移動相として２０
℃、４００ｒｐｍ、１ｍｌ／ｍｉｎの条件下、上昇法に
て分離精製を行なう。反転溶出画分（上昇法にて一定量
の移動相を流し分離精製を行った後、固定相に保持され
た物質が、下層を移動相として下降法にて溶出された画
分）にＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は溶出され、これ
を減圧下濃縮乾固する。
【００８８】得られた粗精製物７４４ｍｇを条件を変え
て再度ＣＰＣに付す。すなわち、ヘキサン／酢酸エチル
／アセトニトリル＝７／２／３の下層を固定相とし、上
層を移動相として、２０℃、９００ｒｐｍ，３ｍｌ／ｍ
ｉｎの条件下、上昇法にて分離精製を行う。反転溶出画
分にＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は溶出され、これを
減圧下濃縮乾固する。得られた粗精製物質１６１ｍｇを
メタノールに溶解し、その一定量をカプセルパック５Ｃ
18（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）
を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、メタノー
ル／水＝８０／２０にて溶出し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄフラクションを得る。これらを減圧下濃縮乾固後、
小量のメタノールに溶解後、セファデックスＬＨ−２０
を用いたゲルクロマトグラフィーに付し、ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄを含むフラクションを減圧下濃縮乾固する
とＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄの白色粉末５１ｍｇが得ら
れた。
て再度ＣＰＣに付す。すなわち、ヘキサン／酢酸エチル
／アセトニトリル＝７／２／３の下層を固定相とし、上
層を移動相として、２０℃、９００ｒｐｍ，３ｍｌ／ｍ
ｉｎの条件下、上昇法にて分離精製を行う。反転溶出画
分にＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質は溶出され、これを
減圧下濃縮乾固する。得られた粗精製物質１６１ｍｇを
メタノールに溶解し、その一定量をカプセルパック５Ｃ
18（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）
を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、メタノー
ル／水＝８０／２０にて溶出し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｄフラクションを得る。これらを減圧下濃縮乾固後、
小量のメタノールに溶解後、セファデックスＬＨ−２０
を用いたゲルクロマトグラフィーに付し、ＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｄを含むフラクションを減圧下濃縮乾固する
とＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄの白色粉末５１ｍｇが得ら
れた。
【００８９】
【発明の効果】以上詳細に説明した通り、本発明により
免疫抑制活性とグラム陽性菌に対する抗菌活性および抗
癌活性を有する新規物質としてＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ｄ物質が得られ、またその製造方法が提供された。
免疫抑制活性とグラム陽性菌に対する抗菌活性および抗
癌活性を有する新規物質としてＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ｄ物質が得られ、またその製造方法が提供された。
【図１】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質のメタノール中
における紫外部吸収スペクトル図である。
における紫外部吸収スペクトル図である。
【図２】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質のＫＢｒディス
ク法による赤外部吸収スペクトル図である。
ク法による赤外部吸収スペクトル図である。
【図３】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の重メタノール
中における４００ＭＨｚでの1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図
である。
中における４００ＭＨｚでの1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図
である。
【図４】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の重メタノール
中における１００ＭＨｚでの13Ｃ−ＮＭＲスペクトル図
である。
中における１００ＭＨｚでの13Ｃ−ＮＭＲスペクトル図
である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 長縄 博 東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者 濱田 雅 東京都新宿区内藤町１番地26 秀和レジデ ンス405号 (72)発明者 前田 謙二 東京都目黒区五本木２丁目46番11号 (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５丁目１番11号 ニ ユーフジマンシヨン701
Claims (3)
- 【請求項１】 下記の理化学的性質を有する新規抗生物
質、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質およびその塩。 （１）分子式：Ｃ39Ｈ66Ｏ13Ｎ8 高分解能ＦＡＢ−ＭＳ〔Ｎｅｇ．〕により決定した。な
お基準物質はＰＥＧ６００を用いた。 （２）分子量：８５４ ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ８５５〔Ｍ＋Ｈ〕+ ８７７〔Ｍ＋Ｎａ〕+ ，８５３〔Ｍ−Ｈ〕- が観測され
た。 （３）融点：１６７〜１７０℃ （４）紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に示すと
おりである。 （５）赤外線吸収スペクトル：添付図面の図２に示すと
おりである。 （６） 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：添付
図面の図３に示すとおりである。重メタノール中メタノ
ール（３．３０ｐｐｍ）を基準物質として測定した。 （７）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：添付
面の図４に示すとおりである。重メタノール中メタノー
ル（４９．００ｐｐｍ）を基準物質として測定した。 （８）溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホル
ム、エーテルに可溶であるが水、ｎ−ヘキサンに難溶で
ある。 （９）物質の色および性状：白色の固体である。 - 【請求項２】 ストレプトミセス属に属する請求項１記
載の新規抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質生産菌
を培養し、その培養液から新規抗生物質ＭＪ２０２−７
２Ｆ３−Ｄ物質を採取することを特徴とする、新規抗生
物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質の製造法。 - 【請求項３】 ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｄ物質生産菌が
ストレプトミセス・エスピー(Streptomyces sp.)ＭＪ２
０２−７２Ｆ３株である請求項１記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4213183A JPH06279479A (ja) | 1992-07-20 | 1992-07-20 | 新規抗生物質ｍｊ２０２−７２ｆ３−ｄ物質およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4213183A JPH06279479A (ja) | 1992-07-20 | 1992-07-20 | 新規抗生物質ｍｊ２０２−７２ｆ３−ｄ物質およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06279479A true JPH06279479A (ja) | 1994-10-04 |
Family
ID=16634922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4213183A Pending JPH06279479A (ja) | 1992-07-20 | 1992-07-20 | 新規抗生物質ｍｊ２０２−７２ｆ３−ｄ物質およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06279479A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017072542A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Rotachrom Technológiai Kft. | Method for the purification of cyclosporine a |
-
1992
- 1992-07-20 JP JP4213183A patent/JPH06279479A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017072542A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Rotachrom Technológiai Kft. | Method for the purification of cyclosporine a |
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