JPH06511423A - 微粒子の調製 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 紘任肛 本発明は、微粒子およびその調製に関する。より詳細には、鼻腔内および膣内投 与用の薬剤キャリア、および、診察補助物、特に心エコー検査法やその他の目的 のためのエコー原性材料に関する。

微球体およびマイクロカプセル状の微粒子は、薬剤学文献に記載されている（た とえば、Ｓ、Ｓ、デーヴイス、Ｌ、イルム、Ｊ、Ｇ、マクゲイおよびＥ、トムリ ンソンによる、″マイクロスフェアーズ　アンド　ドラッグセラビー、ファーマ シューティカル　インミューノロジ力ル　アンド　メディカル　アスペクト°、 エルセライア、アムステルダム、１９８４年、参照）。このようなシステムは、 診察薬剤としての薬剤およびワクチン用キャリアとして、および外科手術工程（ 塞栓形成）において使用可能である。他の適用としては、化粧品の分野に使用可 能である。これらの微粒子の粒径は、１００ミクロンから２．３ナノメーターの 範囲で、適用に応じて種々に変えられるものである。微粒子状薬剤送達システム は、種々のルートで投与可能であり、特に、血流に、筋肉または皮下スペースに 、胸膜などの隔室部に、関節に、目、呼吸システム（鼻および肺）、胃腸（口内 および直腸投与を含む）に、および尿生殖器（膀胱点滴注入、膣投与）に投与可 能である。

ＥＰ−Ａ−３２４９３８からは、約１−１０マイクロメートルの空気充填アルブ ミンマイクロカプセルが、血流に注入可能であり、診察に有用な画像を得る方法 において、超音波に反射するということが知られている。これらのマイクロバブ ルは、まず、粘性アルブミン溶液を音波粉砕する工程により得られる。得られた マイクロバブルは、熱変性されて、アルブミンを水不溶性とするものである。

澱粉は、５から２０ミクロンの範囲の大きさの天然微粒子である。この材料は、 古くから、薬剤のふ形削として使用されてきた。これは、低い免疫原性を有し、 生分解性である。澱粉は、物理的および化学的に変性可能である。この変性によ り、澱粉の粒状性を維持することも破壊することも可能であり、また、分子レベ ルで変性を起こすことも可能である。澱粉およびその誘導体の特性は、詳細に以 下の文献に示されている（ワルツブルグ、Ｍ、Ｓ、による、°゛モデイフアイド スターチーズ、プロパティーズ　アンド　ニーシーズ’、ＣＲＣプレス、バカ　 レイトン、１９８６；およびゲイラード、Ｔ、による、゛スターチ：プロパテイ ーズ　アンド　ポテンシャルパ、クリティカル　レポーツ　オン　アプライド　 ケミストリー、１３巻、ジョン　ワイリー、チャイチェスター、１９８７、参照 ）。

モスバッハ、Ｋ、およびシュローダ−１Ｕ、による、°′エンザイム　Ｅｎｇ、 ”５巻、２３９−４１　（１９８０）は、磁性微球体の調製を開示しており、こ こで、磁性材料と懸濁した酸加水分解澱粉を、界面活性剤を含有するトルエンに 圧ぐことにより、約１０ミクロンの平均粒子径を有するビーズが形成されること を、開示している。結晶化炭水化物球体の調製は、シュローダ−１Ｕ０、スター ル、Ａ。

およびサルフォード、Ｌ、Ｇ、による、″ミクロスフエアーズ　アンド　ドラッ グ　セラビー、フ７−マシューティカル、インミューノロジカル　アンド　メデ ィカル　アスベクッ°°、デーヴイス、Ｓ、Ｓ、ら（エディター）、エリセライ アー、アムステルダム、１９８４、ｐ、４２７；およびシュローダ−１肌にょる ＰＣＴ／５Ｅ８３１００２６８．１９８３　（ＷＯ８４１００２９４）ｉ：記載 されている。ここで、炭水化物水溶液は、包含されるべき物質と乳化媒体（コー ン、アブラ菜、または綿実油）と混合し、エマルジョンが形成される。このエマ ルジョンは次いで、ゆっくりと、非イオン性界面活性剤の低い濃度のものを含有 するアセトンに添加される。炭水化物球体が次いで沈殿し、収集可能となる。

エフマン、Ｂ、Ｍ、およびリンダール、Ａ、Ｒ，は、２つの不混和性水相を用い て、澱粉微球体を製造した（ＥＰ−Ａ−２１３３０３）。小さい球粒子は、第２ の不混和性水相の連続相において、溶解可能な材料（たとえば、澱粉、寒天、ゼ ラチン、ペクチン、コラーゲン、カラゲニン、フィブリン）の分散小滴を固体化 することにより、製造可能である。

ダブルエマルジョン方法による、非炭水化物で非生分解可能な材料からのマイク ロカプセルの形成は、塗料に使用される有機色素マイクロカプセルの調製が開示 されたＧＢ−Ａ−１２８８５８’３に、提案されている。しかしながら、使用さ れたポリマーは、ポリスチレンなどの不溶性ポリマーであり、薬剤用、生物医学 用、または化粧品用、または、鼻腔用、または心エコー検査法用注入可能な組酸 物として、マイクロカプセルを使用することは、示唆されていない。これに対し て、本発明の組成物は、少なくともこのような目的で使用される場合には、適合 し、生分解可能で、免疫原性ではない。米国特許３９１９１１０は、平均粒子径 が約２ミクロンの空気含有球形マイクロカプセルを開示している。マイクロカプ セルの前駆体は、水中油形孔化方法を用いて調製される。ここで、水中油形孔化 方法とは、水相は、水で希釈した際、固形粒子形状の水相から分離することの可 能な、部分的に縮合されたホルムアルデヒド縮合生成物の分散物を含有するもの である。疎水性澱粉かは、好ましい乳化剤として使用された。ここで、このよう な粒子は、心エコー検査法用の注入可能な組成物として、または鼻腔投与用とし てなどの、薬剤用、生物医学用、または化粧品用として使用可能である。

Ａ、コンドウによる、°′マイクロカプセル　プロセスシング　アンド　テクノ ロジー゛（マーセル　デツカ−インコーポレーション、ニューヨーク、１９７９ ）は、イン−リキッド　ドライ　プロセス（１０９ページ）で、コアとして低沸 点溶媒を使用した中空カプセル、およびオイルが除去されない、オイル−含有ゼ ラチンカプセルを形成することを提案している。米国特許４１７３４８８．３７ ８１２３０および４０８９８００は、疎水性樹脂および疎水性澱粉を使用して、 水中薄形エマルジョンにおいて、オイル液滴をコートし、次いでマイクロカプセ ルを形成することを開示している。これらの文献はいずれも、心エコー検査法用 としてマイクロカプセルを使用することは、開示していない。ＥＰ−Ａ−０３２ ７４９０は、合成ポリマーを使用して、液体媒体におけるガスバブルを包囲し、 次いで心エコー検査法用マイクロカプセルを形成することを開示している。

これは、本発明の方法とは異なるものである。

我々はここに、水溶性澱粉誘導体またはＰＥＧ−変性材料から中空マイクロカプ セルを調製する改善された方法、および、固形微球体の調製方法を提供する。

本発明によれば、固形微球体または空気が充填されたマイクロカプセルの調製方 法が提供され、液体コアを含有する初期のマイクロカプセルを形成し、前記液体 の少なくともいくらかを除去して、固形微球体または空気が充填されたマイクロ カプセルを製造し、ここで、空気が充填されたマイクロカプセル用に使用された 壁形成材料は、ヒドロキシエチル澱粉以外の水溶性澱粉誘導体、またはＰＥＧ− 変性材料である、固形微球体または空気が充填されたマイクロカプセルの調製方 法が提供される。

ここで、”ＰＥＧ−変性材料゛とは、ポリエチレングリコールに共役することに より変性するいかなる材料でもよく、マイクロカプセルまたは微球体を形成する のに適当であり、このようなＰＥＧ−変性材料と適当な非変性材料との混合物で あり、ＰＥＧ−変性材料とした場合には、このような混合物も含有されるもので ある。

本発明の方法におけるコアは、好ましくは水−不混和性オイルであり、また好ま しくはマイクロカプセルが形成された後、言い換えれば壁部の硬化中または硬化 後に蒸発可能な、比較的に揮発性なものである。これを、ここでは°゛比較的に 揮発性°′とする。より特別には、沸点が２０−１００’Ｃ１好ましくは４ｏ− ９０℃、より好ましくは５０−８０℃の不活性オイル、好ましくはパーフルオロ 化合物が、一般には適当である。パーフルオロヘキサン、パーフルオロへブタン 、パーフルオロメチルシクロヘキサン、シクロペンタン、ヘキサン、２−メチル ペンタン、３−メチルペンタン、２．２−ジメチルブタン、２．３−ジメチルブ タン、１−クロロプロパン、２−クロロ−２−メチルプロパン、クロロホルム、 ジクロロメタン、１．１−ジクロロエタンおよびブロモエタンが全て適当である 。

１以上のコアが、各ミクロカプセルに設けられることも可能である。

中空マイクロカプセルまたは固形微球体の製造方法は、一般的には、簡単なコア セルベーション、複雑なコアセルベーション、ＭＳＩＥＰ（等電点における溶解 度の極小化）およびダブルエマルジョンが知られているが、好ましくは、後者で ある。界面重合は、タンパク様の材料用には使用不可能であるが、壁形成材料用 には使用可能である。

ダブルエマルジョン法は、特に、中空マイクロカプセルまたは固形微球体の双方 の製造に好ましい。固形微球体の形成においては、第１エマルジヨンに使用され るオイルの量は、中空マイクロカプセルの調製において使用される量よりも少な く、典型的には０．５−５−１Ｏである。パーフルオロヘキサンなどの少量のオ イルは、固形微球体における、ダイズオイルの含有、第２エマルジヨンのオイル 相を防止するために、必要である。第２エマルジヨンに使用されるグイズオイル または類似の野菜オイルが、固形微球体のコアに含有されると、水媒体における 分散が、困難になり、さらに不十分になり、投与前の再構成用の乾燥形態で、微 球体を使用することが妨げられるものである。第１エマルジヨンに使用される少 量のオイルは、初期のマイクロカプセルが完全に固まる前に、蒸発させ、この結 果として、最終生成物である固形微球体が形成されるものである。

適当に溶解可能な澱粉誘導体は、中空マイクロカプセル用の壁形成材料として使 用可能であり、これは、水には可溶であるが、一旦マイクロカプセルが形成され ると、水に不溶となることが可能なものである。アミロデキストリン、アミロペ クチン、およびカルボキシメチル澱粉が特に好ましい。ヒトに対する使用の場合 は、アミロデキストリンが好ましい。これは、常法にしたがって、ポテトまたは コーンの澱粉を希塩酸で処理することにより、調製可能である。

ＰＥＧ−澱粉共役体を製造するための、ポリエチレングリコールで変性された澱 粉（またはその誘導体）は、微球体が生体内で長い循環時間を有するようにする ことのできるＰＥＧ基をその表面に有する、中空マイクロカプセルまたは固形微 球体を製造するのに使用可能である（イルラム　アンド　ディヴイス、Ｊ。

Ｐｈａｒｍ、Ｓｃｉ、７２．１９８３．１０８６−１０８９　；イルラム　アン ドデイヴイス、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、１６７．１９８４．７９−８２参照）。

ＰＥＧ−澱粉（または澱粉誘導体）は、それ自身で、または変性していない澱粉 誘導体またはアルブミンと組み合わせて使用可能である。ポリエチレングリコー ルの炭水化物へのグラフティングは、コレソテらによる、Ｐｏ　ｌ　ｙｍ、Ｍｅ 　ｄ、、ＩＩｌ、エルセライア、アムステルダム、１９８８、ｐ６１−７２に開 示されている。

種々の文献および特許に記載（たとえば、ハリスによる、Ｍａｃｒｏｍｏｌ。

Ｃｈｅｍ、Ｐｈｙｓ、Ｃ２５，１９８５，３２５−３７３；イナダ等による、Ｊ 。

Ｂｉｏａｃｔ、Ｃｏｍｐａｔ、Ｐｏｌｙｍ、、５．１９９０．３４３−３６４　 ；ビノゾによる、Ａｄｖ、Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌ、Ｒｅｖ、　、６．１９９１，１５ ３−１６６；フェルトゲスおよびアブコツスキーにょるＪ、Ｃｏｎｔ、Ｒｅｌ、 。

１１．１９９０．１３９−１４８；タッチらによる、Ａｄｖ、Ｄｒａｇ　Ｄｅｌ 。

Ｒｅｖ、、６．１９９１．１２３−１５１）されている、ポリエチレングリコー ル共役変性アルブミンはまた、本発明により調製された中空マイクロカプセルお よび固形微球体の製造に使用可能である。アルブミン−ＰＥＧは、それ自身で、 または変性されていないアルブミンまたは澱粉誘導体と組み合わせて使用可能で ある。このような微球体は、その表面にＰＥＧ基を有しており、その結果として 、イルラムにより開示された（イルラム　アンド　デイヴイス、Ｊ、Ｐｈａｒｍ 。

Ｓｃｉ、７２．１９８３．１０８６−１０８９；イルラム　アンド　デイヴイス 、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、１６７．１９８４．７９−８２参照）ように良好な循 環時間を示すものである。

本発明に使用されるＰＥＧは好ましくは、２００−１００００の分子量、より好 ましくは１０００−６０００の分子量を有する。

ＰＥＧをアルブミンまたは澱粉などの材料に共役させる工程、またはＰＥＧ化は 、従来技術、たとえば米国特許４１７９３３７に詳細に記載されている。ＰＥＧ は従来の方法により、共役のために活性化することが可能であり、たとえば、Ｐ ＥＧのＮ−ヒドロキシコハク酸誘導体が調製されて、使用されてもよい。

アルブミンまたは澱粉（またはその誘導体）の共役量は、１％と９０％の間であ り、好ましくは、５％と５０％の間である。

適当な壁形成材料は、固形微球体用としては、少なくとも使用状態において、（ ｉ）水に分散可能な（好ましくは溶解可能な）ものであり、（ｉ　ｉ）一旦マイ クロカプセルが形成されると水に不溶となることが可能であり、（ｉ　ｉ　ｉ） 物理学的に無毒性で非免疫原性である。患者に投与する場合には、生分解可能な 材料が好ましい。血清アルブミンなどのタンパク状の材料が好ましい。ここで使 用する゛タンパク状゛′とは、タンパク質、天然または合成ポリペプチド、およ び、タンパク質およびポリペプチドのフラグメントを意味する。他の材料として は、ゼラチン、澱粉およびデキストリンが挙げられる。溶解可能な澱粉誘導体が 好ましく、アミロデキストリン、アミロペクチン、カルボキシメチル澱粉および ヒドロキシエチル澱粉が特に好ましい。アルブミンなどの材料の特性は、オモト ショらにより開示（１９８６Ｊ、Ｐｈａｒｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３８，８６ ５−８７０）されているように、界面複合などの、非イオン性界面活性剤の存在 により、変性可能である。これらの材料は、マイクロカプセルが形成された後、 不溶性とするために、化学的にまたは熱的に変性されるものである。

これらの材料は、化学交差結合させたり、変性（たとえば熱により）させたり、 キレートさせたりまたはグラフトさせることにより、水に不溶性とすることが可 能である。

本発明の中空マイクロカプセルは、ガスまたは蒸気が充填されており、これは空 気であっても他の真ガスであってもよいが、しばしば、揮発油からの蒸気と空気 の混合物である。本明細書においては、”空気充填”および°゛ガス充填°゛と は何れも、空気、他のガス、蒸気、またはそれらの混合物をカバーするために使 用される言葉である。マイクロカプセルの空気の中身は、０．５ｍｌ−１００ｍ ｌ　ノ範［’、１１エマルジヨンにおけるオイル相の相客量を変えることにヨリ 、変換可能である。さらに、第１エマルジヨンにおけるオイル相の相客量は、形 成された固形微球体の比率を増すために、減らすことも可能である。

形成された中空マイクロカプセルおよび固形微球体は、直径、０．１から５００ マイクロメートルである。鼻腔内および膣内投与用としては、１から１００マイ クロメートルの直径が好ましい。心エコー検査法に使用される中空マイクロカプ セルとしては、１．０から１０マイクロメートルの直径が好ましく、２．０から ８マイクロメートルの直径が特に好ましい。このような粒径は、適当に工程のパ ラメーターを選択することにより、および／または、ふるいにかけるなどの分離 により、得られたマイクロカプセルから所望の粒径にすることにより得られる。

粒径は範囲をもって得られるが、本発明における数字は、重量に関して約９０％ のものがその数字内のものである。粒径の範囲は、顕微鏡を用いるか、または、 公知の粒径測定装置、たとえばコールタ−カウンターおよびレーザーディフラク トメーターにより測定可能である。

複数の中空部を有するマイクロカプセルを得ることが可能であり、複数の中空部 を有するマイクロカプセルの場合には蜂の巣に似ており、１つの中空部の場合に は、貝に似ている。

最終生成物は、典型的には、洗浄、殺菌および使用可能な懸濁液の形状でえられ るものである。少なくともある場合には、マイクロカプセルは、潰されることな く、フリーズドライされて、後の使用のために、自由に流動する粉体として保存 することが可能である。

中空マイクロカプセルおよび固形微球体の双方を含有する混合システムは、必要 に応じて浮遊または遠心分離を使用して、分離することも可能である。

空気充填マイクロカプセルは、心エコー検査法および他の超音波画像法に、従来 の公知の方法により、（懸濁液よりもむしろ粉状に調製された場合）薬剤を鼻腔 、肺送達システムで、使用可能であり、また、化粧品の場合には、乳白剤として または反射増加剤として使用可能である。

空気充填マイクロカプセルおよびそれらの使用、特に、診察工程におけるエコー 原性材料は、本発明の範囲内である。

固形微球体は、鼻腔内、口内、肺および膣への薬剤送達システムとして、使用可 能である。これらは特に、鼻腔への薬剤送達システムとして使用され、以下のよ うな薬剤の送達に使用されるものである：ポリペプチド類またはそれらの誘導体 （好ましくは１０００から３００，０００の分子量） インスリン（ヘキサメリック／ダイメリック／モノメリック形態）カルシトニン 類およびその合成変性体 エンケ′ファリン類 インターフェロン類（特に一般的なかぜの治療用ａ２インターフェロン）ＬＨＲ Ｈおよびその類似体（ナファレリン、プセレリン、ゴセレリン）ＧＨＲＨ（成長 ホルモン遊離ホルモン）ブラシキン拮抗剤 ＧＲＦ　（成長遊離ファクター） ＨＦ ＴＲＨ（チロトロピン遊離ホルモン） ＡＣＴＨ類似体 Ｃ３Ｆｓ　（コロニー刺激ファクター）ＥＰＯ（エリスロマイシン） ＩＧＦ（インスリン類似成長ホルモン）ＣＯＲＰ　（カルシトニン遺伝子関連ペ プチド）心房ナトリウム排泄増加性ペプチド ヴアソブレソシンおよびその類似体（ＤＤＡＶＰ、リプセ・スリン）他の薬剤と しては、以下のものが挙げられる：抗生物質類 メトクロプラミド 片頭痛治療剤（ジヒドロエルゴタミン、エルゴメトリン、エルゴタミン、ビゾチ ジン） ワクチン（特にＡＩＤＳワクチン） ファクターＶＩＩＩ 低分子量ヘパリン類 テトラサイクリン塩酸塩、ロイコマイシン、ペニシリン、ペニシ’Ｊン誘導イ本 およびエリスロマイシンなどの抗生物質および抗微生物剤、サルファチアゾール およびニトロフラジールなどの化学治療薬；ベンシカインなと′の局部麻酔薬； フェニルフリン塩酸塩、テトラヒドラゾリン塩酸塩、ナファ゛／１ノン６肖酸塩 、オキシメタゾリン塩酸塩、およびドラマゾリン塩酸塩などの血管収縮斉１；ジ ギタ１ノスおよびジゴキシンなどの強心剤；ニトログリセリンおよびノ（ノクべ １ノン塩酸塩なと″の血管拡張剤；クロロへキシジン塩酸塩、ヘキシルレソルシ ノール、塩化デクア１ノニウム、エタクリジンなどの防腐薬；塩化すゾジウム、 デキストラナーゼなと′の酵素；ビタミンＤ１および活性ビタミンＤ　などの骨 代謝制御剤；性ホルモン；低血圧症剤；鎮静剤；および抗腫瘍剤。

ヒドロコーチシン、プレドニゾン、フルチカゾン、プレドニゾンロン、ト１ノア ミチノロン、ドリアミチノロン　アセトニド、デキサメタシン、ベータメタ゛／ ン、ベクロメタゾン、およびベクロメタゾン　ジプロピオネートなどのステロイ ドｎ之抗炎症剤；ア七タミノフエン、アスピリン、アミノピリン、フエニＪレブ タ゛／ン、メツエンアミン酸、イブプロフェン、ジクロフエナン酸ナトリウム塩 、インドメタシン、コルチゾン、プロベノシドなどの非ステロイド系抗炎症剤； チモトリスピン、プロメライン　セラチオペプチダーゼなどの酵素系抗炎症剤； ジフェニルヒドラミン塩酸塩、クロロフェニルアミン　マレイン酸塩、フレマス チンなどの抗ヒスタミン剤；クロモグリツク酸ナトリウム、燐酸コディン、イソ プロテレオール塩酸塩などの抗アレルギー剤。

鼻腔送達用には、微球体が、リソホスファチドなどの増強剤とともに使用可能で ある。リソホスファチド類は、ホスファチド類の加水分解により製造可能である 。このような材料は、界面活性があり、ミセル構造を有する。リンレシチンおよ び他のりソホスファチド類は、薬剤送達用吸収増強剤として使用可能であり、こ れにより、活性薬剤の生物的利用能が増加する。リソホスファチジコリンは、膜 透過性を変化させ、たとえば、インスリン、ヒト成長ホルモンおよび他の生化学 技術とＤＮＡ組み替え法の生成物を含有する、タンパク質とペプチドの取り込み を良好にするものである。投与後、リソホスファチドは、ムコサの内皮の内層細 胞により、通常の細胞成分であるそのままのホスファチドに、変換される（デュ 　ゲイリー等（１１）参照。リソレシチン事態がまた非常に少ない量で細胞膜に 存在する（１２）。）。この迅速で効果的なりソホスファチドの完全なホスファ チド構造への変換は、刺激性および毒性の点から、逆反応および副作用をより少 なくすることにつながる。生物学的利用能を増加させるより好ましい材料は、卵 またはダイズレシチンから製造されるリソホスファチジルコリンである。他の異 なったアシル基および類似の膜質性特性を有するホスファチド酸およびホスファ チジルエタノールアミン類から製造されたリソ化合物が使用可能である。アシル 　カルニチン類（たとえばバルミトイル−ＤＬ　カニチン−クロリド）も替わり に使用可能である。

適当な他の薬剤としては、キレート剤（ＥＧＴＡ，ＥＤＴＡ、アルギン酸塩）、 界面活性剤（特に非−イオン材料）、アシル　グリセロール類、脂肪酸およびそ の塩、チロキサポールおよびシグマのカタログ、１９８８年、３１６−３２１ベ ージに記載の生物学的洗浄剤が挙げられる。膜流動性および透過性を変性する薬 剤も適当であり、たとえば、エナミン類（たとえばエチルラセトアセテートの） エニルアラニン　エナミン）、マロネート類（たとえば、ジエチレンオキシメチ レン　マロネート）、サツシレート類、胆汁塩およびその類似体およびフシデー ト類などが挙げられる。適当な濃度は、１０％までである。

添加された薬剤学的な添加剤を用いて、生物学的接着微球体内にまたは生物学的 接着微球体上に結合された薬剤の送達に関する同様のコンセプトが、活性薬剤、 および、粘液溶解剤、ペブチターゼ阻害剤または無関係性ポリペプチド物質を、 単独でまたは組み合わせて含有するシステムに適用されてもよい。適当な粘液溶 解剤は、Ｎ−アセチルシスティンおよびその誘導体などの化合物を含有するチオ ールでもよい。ペプチド阻害剤としては、アプチニン、アマスタチン、アンチベ イン、ベスタチン、クロロアセチル−ＨｏＬｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＮＨ２、ジ プロチンＡおよびＢ１エベラクトンＡおよびＢ、Ｅ−６４、ロイペプチン、ペプ スタチンＡ、フィスホラミオン、Ｈ−Ｔｈｒ−（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｐｒ。

−○ｈが挙げられる。アプロチニン、カリクレイン、Ｉｎｈ、１、チモステーシ ョン、ペンズアミヂン、チモトリプシン　Ｉｎｇ、１１、トリプシンエｎｈ、１ １１−０が挙げられる。適当な濃度は、０．０１から５％である。

この方法で使用された場合、微球体は、好ましくは１ｏと１００ミクロンの粒径 である。

微球体は、鼻腔注入器を用いることなどの、常法により、鼻腔ルートを経由して 投与可能である。これらの実施例はすでに、鼻腔投与用の市販された粉末システ ムとして、使用されている（たとえば、フィソンズ　ロムダル　システム）。

他の装置の詳細は、薬剤学的文献（たとえば、ベル、Ａ、による、イントラナサ ル　デリヴアリー　ディヴアイシーズ、イン　ドラッグ　デリヴアリー　デヴア イシーズ　ファンダメンタルズ　アンド　アプリケーションズ、タイル　Ｐ３、 デツカ−、ニューヨーク、１９８８参照）に開示されている。

特別には、微球体は、我々の系統中の出願ＰＣＴ／ＧＢ８８１００３９６に開示 されているような送達システムにおいて使用可能である。微球体はまた、増強剤 を使用することなく、特に我々の系統中の出願ＰＣＴ／ＧＢ　８８１０　Ｏ８３ ６に開示されているような送達システムにおいても使用可能である。増強剤を使 用することなく、微球体を使用することは、特に、６０００の最大分子量を有す る送達システム用ペプチド薬剤の生物学的利用能を得るのに適当である。微球体 は上記したように鼻腔ルートによる送達が可能である。

本発明の実施例を、以下、図面と共に説明を加える。

図１は、攪拌パドルの斜め上から見た図であり；図２は、図１の攪拌パドルの底 部平面図である。

失嵐皿上 中空の空気充填微球体が以下の方法によってアミロデキストリンから調製された 。

１エマルジヨン５成 １０％ゲルが、ｌｏｇのアミロデキストリン（溶解可能なポテト澱粉）　（シグ マ　ケミカル　カンパニー）を１００ｍ１の冷却された蒸留水に分散させること により調製された。この分散液を次いで透明になるまで加熱した。これは、約９ ０℃でおこった。このゲルを、磁性攪拌機で攪拌しながら冷却した。３０ｍ１の パーフルオロヘキサン（９５％アルドリッチ　ケミカル　カンパニー、ギリンガ ム、ドルセット）が、前記冷却されたゲルに添加され、７０００ｒｐｍで４分間 均一化された。

第２エマルジヨン形成 １５ｍ１の第１エマルジヨンを、５００ｍ１のダイズ油（Ｊ、セインスバーリー 　ｐｌｃ）に添加し、６０００ｒｐｍで３分間均一化した。

艮床生立色毀 第２エマルジヨンが、油浴（８０℃）に移され、６−ブレードのパドル攪拌機（ 図１）を用いて、１５００ｒｐｍで攪拌しながら、加熱が続けられた。エマルジ ョンは、２℃／分の早さで最大バルクエマルジョンの温度が１００’Ｃになるま で、迅速に加熱され、その後、冷却された。微球体は次いで、１５００ｒｐｍで 攪拌されつづけながら、２００ｍ１のアセトンを加えることにより、脱水された 。

微隻庄０床収 微球体／アセトン分散物が、４０００ｒｐｍで１ｏ分間、遠心分離された。

再懸濁された。アセトン懸濁液は次いで、１マイクロメートルのガラスマイクロ ファオバーフィルターで濾過され、得られた微球体は、フィルターサークル上に 、乾燥層として収集された。この微球体層は、空気乾燥し、室温でデシケータ− に保存した。微球体は必要に応じてフリーズドライされてもよい。

得られた粒子は、顕微鏡によれば、５−２０マイクロマートルの粒径であった。

夾施町Ｉ 水中油形タイプのエマルジョンの形成に基づいた方法が用いられた。水相はアミ ノデキストリン−ゲルからなり、非水性またはオイル相は揮発注油の１つである 。１０％アミノデキストリン−ゲルは、ボラドアミロデキストリンまたはアミロ デキストリン（リンドナー法により調製された）を水中に分散し、懸濁液を、ゲ ルが透明になるまで、８０℃に加熱した。揮発注油が、エマルジョンの形成に使 用可能である。これには、ジクロロメタン（沸点、３９−４０℃）、パーフルオ ロヘキサン（沸点、５８−６０℃）、パーフルオロメチルシクロヘキサン（沸点 、７６℃）、パーフルオロジメチルシクロヘキサン（沸点、１０１−１０２℃） が挙げられる。オイル相容量は、エマルジョンの５−２０％（ｖ／ｖ）の範［Ｅ ｔｌである。界面活性剤、スパン８０が、安定剤として、エマルジョンに添加さ れた。

容量の残りは、アミロデキストリンゲルからなる。このエマルジョンは、室温で 、２−５分間、５０００−８００Ｏｒｐｍで、シルヴアーソンヘンチ　トップホ モジナイザーを用いて、均一化された。このエマルジョンは、攪拌（１５００ｒ ｐｍ）Ｌながら最高温度、１２０℃まで加熱することにより、固体化した。イソ プロパツール、エタノールまたはアセトンなどの脱水剤または２０％ｗ／ｖ硫酸 ナトリウム（全容量の３０−５０％）が、遠心分離されて濾過された微球体に添 加された。この微球体は、室温でデシケータに保存され、粒径は、顕微鏡および レーザーディフラクトメトリーにより決められた。

アルブミン（ヒト血清、ウシ血清または卵アルブミン）またはその付加物、たと えば、ｌ５Ａ−ＰＥＧ　（ポリエチレングリコール）　、ｌ５Ａ−ＦＡＡ　（ポ リアミドアミド）−ＰＥＧなともまた、アミロデキストリンゲルに添加可能であ る。

アルフミンまたはその付加物のｌＯ％Ｗ　／　Ｖ水溶液が調製され、これが、ア ミロデキストリンゲルに添加されて、ゲル容量の５−１０％が調製された。この 調製は次いで、上記のように続けられた。

実施例３から６は、ダブルエマルジョン方法を用いた、中空または空気充填のア ミロデキストリン微球体の製造を開示する。

第１エマルジヨンは、水中油形タイプのエマルジョンであり、ここで、オイル相 は、パーフルオロヘキサン（沸点、５８−６０℃）などの揮発性オイルであり、 水性または連続相は、アルブミンと組み合わせたアミロデキストリンゲルであり 、またはアルブミン付加物、ｌ５Ａ−ＰＥＧ　（ポリエチレングリコール）、ｌ ５Ａ−ＦＡＡ　（ポリアミドアミド）−ＰＥＧ、プルロニックＦ−６８もまた、 添加可能である。ジクロロメタン（沸点３９−４０℃）、パーフルオロメチルシ クロヘキサン（沸点、７６℃）、パーフルオロジメチルシクロヘキサン（沸点、 １０１−１０２℃）もまた使用可能である。

夾胤鮭１ １−３％アルブミン、１０ｍ１が、冷却された１０％アミロデキストリンゲル、 ６０ｍ１に添加された。２０２０−４Ｏの揮発注油（パーフルオロヘキサン）が 、アミロデキストリン混合物に添加され、６０００−８００Ｏｒｐｍで、３分間 、均一化された。１５ｍ１のエマルジョンが、泡止め剤、ポリ（メチルフェニル シロキサン）、５ｍｌを含有する５００ｍ１のダイズ油Ｂ、Ｐ、に添加された。

第２エマルジヨンが６０００−８００Ｏｒｐｍで３分間、均一化され、１５００ ｒｐｍで、最高温度、１２０℃までで攪拌しながら、油浴で加熱することにより 固体化した。この混合物が冷却され、２００ｍ１のアセトンを、アミロデキスト リン微球体を脱水するために、添加した。この微球体は、遠心分離および濾過に より、採収された。

夾路岨土 １−３％ＨＳＡ−ＰＡＡ−ＰＥＧ、１０ｍ１が、６０ｍ１の冷却された１０％ア ミロデキストリンゲルに添加された。２０２０−４Ｏの揮発注油（パーフルオロ ヘキサン、沸点５８−６０℃）が、アミロデキストリン混合物に添加され、６０ ００−８０００　ｒｐｍで３分間、均一化された。１５ｍ１のエマルジョンが、 泡止め剤、ポリ（メチルフェニルシロキサン）、５ｍｌを含有する５００ｍ１の ダイズ油Ｂ、Ｐ、に添加された。第２エマルジヨンが６０００−８００Ｏｒｐｍ で３分間、均一化され、１５００ｒｐｍで、１２０℃の最高温度までで攪拌しな がら、油浴で加熱することにより固体化した。この混合物が冷却され、２００ｍ １のアセトンを、アミロデキストリン微球体を脱水するために、添加した。この 微球体は、遠心分離および濾過により、採収された。

夾嵐皿旦 １−３％Ｈ３Ａ−ＰＥＧ、１０ｍ１が、６０ｍ１の冷却された１０％アミロデキ ストリンゲルに添加された。２０２０−３Ｏの揮発注油（パーフルオロヘキサン ）が、アミロデキストリン混合物に添加され、６０００−８００Ｏｒｐｍで３分 間、均一化された。１５ｍ１のエマルジョンが、泡止め剤、ポリ（メチルフェニ ルシロキサン）、５ｍｌを含有する５００ｍ１のダイズ油Ｂ、Ｐ、に添加された 。第２エマルジヨンが６０００−８００Ｏｒｐｍで３分間、均一化され、１５０ ０ｒｐｍで、１２０℃の最高温度までで攪拌しながら、油浴で加熱することによ り固体化した。この混合物が冷却され、２００ｍ１のアセトンを、アミロデキス トリン微球体を脱水するために、添加した。この微球体は、遠心分離および濾過 により、採収された。

大履咎見 １−３％プルロニックＦ−６８．１０ｍ１が、６０ｍ１の冷却された１０％アミ ロデキストリンゲルに添加された。２０２０−４Ｏの揮発注油（パーフルオロデ カリン）が、アミロデキストリン混合物に添加され、６０００−８００Ｏｒｐｍ で３分間、均一化された。１５ｍ１のエマルジョンが、泡止め剤、ポリ　（メチ ルフェニルシロキサン）、５ｍｌを含有する５００ｍ１のダイズ油Ｂ、Ｐ、　に 添加された。第２エマルジヨンが６０００−８００Ｏｒｐｍで３分間、均一化さ れ、１５００ｒｐｍで、１２０℃の最高温度までで攪拌し、なから、油浴で加熱 することにより固体化した。この混合物が冷却され、２００ｍ１のアセトンを、 アミロデキストリン微球体を脱水するために、添加した。この微球体は、遠心分 離および濾過により、採収された。

実施例７および８は、アルブミン付加物を含有する中空アルブミン微球体の調製 を開示する。

人五四Ｌ １０％アルブミン（ＩＳＡ）水溶液、６０ｍ１が調製され、パーフルオロヘキサ ンなどの揮発注油、４０ｍ１に添加された。この混合物は、ペンチ　トソプシル ヴアーソン　ホモジナイザーを用いて、６０００−８００Ｏｒｐｍで３分間、均 一化された。５ｍｌのポリ（メチルフェニルシロキサン）が、５００ｍ１のダイ ズ油Ｂ、Ｐ、に添加され、完全に攪拌された。１５ｍ１のアルブミンエマルジョ ンがダイズ油に添加され、６０００−８００Ｏｒｐｍで３分間、均一化された。

パドル攪拌機を用いて、１５分間、１１５℃の最高温度までで攪拌しながら、油 浴で加熱することにより固体化した。冷却後、石油エーテルを前記混合物に添加 し、この微球体は、遠心分離および濾過により、採収された。

人鬼霞ｌ 全蛋白質の５−１０％がＩＳＡ−ＰＥＧ　（ポリエチレングリコール）またはｌ ５Ａ−ＦＡＡ　（ポリアミドアミド）−ＰＥＧである、１０％アルブミン（ＩＳ Ａ）水溶液が調製された。このアルブミン溶液、６０ｍ１が、パーフルオロヘキ サン（沸点５８−６０℃）などの揮発注油、４０ｍ１に添加され、ベンチ　トッ プ　シルヴアーソン　ホモジナイザーを用いて、６０００−８００Ｏｒｐｍで３ 分間、均一化された。５ｍｌのポリ（メチルフェニルシロキサン）が、５００ｍ １のダイズ油Ｂ、Ｐ、に添加され、完全に攪拌された。１５ｍ１のアルブミンエ マルジョンがダイズ油に添加され、６０００ｒｐｍで３分間、均一化された。こ のエマルジョンは、パドル攪拌機を用いて、１５分間、１１５℃の最高温度まで で攪拌しながら、油浴で加熱された。冷却後、石油エーテルを前記混合物に添加 し、この微球体は、遠心分離および濾過により、採収された。

ジクロロメタン（沸点、３９−４０℃）、パーフルオロメチルシクロヘキサン（ 沸点、７６℃）、パーフルオロジメチルシクロヘキサン（沸点、１０１−１０２ ℃）などの他の揮発注油も使用可能である。

夾麿岨見 固形微球体が以下の方法によってアミロデキストリンから調製された。

第１エマルジヨンユ成 １０％澱粉ゲルが、１０ｇのアミロデキストリンポテト澱粉（シグマ　ケミカル 　カンパニー）を１００ｍ１の冷却された蒸留水に分散させることにより調製さ れた。この分散液を次いで透明になるまで加熱した。これは、約９０℃でおこっ た。このゲルを、磁性攪拌機で攪拌しながら冷却した。１０ｍ１のパーフルオロ ヘキサン（９５％アルドリッチ　ケミカル　カンパニー、ギリンガム、ドルセッ ト）が、前記冷却されたゲルに添加され、７０００ｒｐｍで４分間均一化される か、またはミクロフリューダイザに通過させた。

第２エマルジヨン形成 １５ｍ１の第１エマルジヨンを、５００ｍ１のダイズ油（Ｊ、セインスバーリー 　ｐｌｃ）に添加し、６０００ｒｐｍで３分間均一化した。

微球体の調製および採収は、実施例１に開示されているように行なわれた。

大旌匿土立 固形ヒト血清アルブミン微球体が、ダブルエマルジョン方法を用いて調製された 。微球体は固体であり、平均粒径は、製造条件によって、１マイクロメートルと ３０マイクロメートルの間である。

、、１エマルジヨン〉成 １０ｍ１のパーフルオロヘキサン ２０ｍ１の１０％ヒト血清アルブミン（アルブチイン２５％：アルファセラビノ クス）。アルブミン溶液およびパーフルオロヘキサンが混合され、ミクロフルイ ダイザ（１４０００ｐｓｉで３サイクル）に通過させた。氷のノ（ツクされた冷 却コイルが、エマルジョンの温度が４０℃以上にならないようにするために固定 された。

第２エマルジヨンβ １５ｍ１の第１エマルジヨンを、５００ｍ１のダイズ油に添加し、６８００ｒｐ ｍで３分間均一化した。

微１体の調“および本収 第２エマルジヨンが油浴に移され、温度が非常にゆっくりと　（１℃／分）上げ られた。エマルジョンが、６−ブレード攪拌機で、１５００ｒｐｍで攪拌された 。攪拌ブレードは、そのヘッドがエマルジョンの表面より４ｃｍ下のところにあ るように設置された。エマルジョンの温度は、ここで１２０℃まで上げられ、約 ２０分間均衡化された。

艮生生Δ床収 エマルジョンは冷却され、２００ｍ１の石油エーテルが添加された。この混合物 は次いで４５００ｒｐｍで２０分間、遠心分離され、ペレットが収集された。

このペレットはエーテルに再懸濁され、１マイクロメートルのフルオロポールフ ィルタに通過させた。フィルター層がエタノールおよびアセトン、それぞれで洗 浄された。この懸濁液は次いでさらに濾過され、濾過層は、デシケータ−内で、 室温で空気乾燥された。微球体は、必要に応じてフリーズドライされてもされな くてもよい。

国ａ！１審報牛 １ｍ１−ａｅｓ＋＋ｌ　Ａａｍｌｅａ。、、、、　ＰＣＴ／ＧＢ　９２１０１４ ２１フロントページの続き ＢＯＩＪ　１３／１２ Ｉ

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．固形微球体または空気充填マイクロカプセルの調製方法であり、液体コアを 含有する初期のマイクロカプセルを形成し、前記液体の少なくともいくらかを、 固形微球体または空気充填マイクロカプセルのいずれかを形成するために、除去 することからなり、ここで、空気充填マイクロカプセルに使用される壁形成材料 は、ヒドロキシエチル澱粉を除く水溶性澱粉誘導体、またはＰＥＧ−変性材料で ある、固形微球体または空気充填マイクロカプセルの調製方法。
2. ２．固形マイクロカプセルの形成におけるマイクロカプセルの壁部は、水溶性澱 粉誘導体、またはＰＥＧ−変性材料から形成され、これらは次いで水不溶性とな る、請求項１に記載の方法。
3. ３．澱粉誘導体がアミロデキストリンである、請求項１または２に記載の方法。
4. ４．ＰＥＧ−変性材料が、ＰＥＧ−アルブミン共役体またはＰＥＧ−澱粉または 澱粉誘導体の共役体である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
5. ５．コアが水−不混和性オイルである、請求項１から４のいずれか一項に記載の 方法。
6. ６．オイルが比較的揮発性であり、蒸発により、オイル充填カプセルから除去さ れるものである、請求項５に記載の方法。
7. ７．初期のマイクロカプセルが、ダブルエマルジョン方法により形成される、請 求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
8. ８．さらに、固形微球体または空気充填マイクロカプセルを、液体媒体から分離 し、固形微球体またはマイクロカプセルをフリーズドライすることからなる、請 求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
9. ９．請求項１から８のいずれか一項に記載の方法により調製されたまたは得るこ との可能な微球体。
10. １０．請求項１から８のいずれか一項に記載の方法により調製されたまたは得る ことの可能なマイクロカプセル。
11. １１．送達システムにおいて使用される固形微球体であり、微球体は、液体コア の周りの初期のマイクロカプセルを形成し、初期のマイクロカプセルの壁部が崩 壊される問に、前記液体コアの少なくとも１部分を除去することにより形成され たものである、固形微球体。
12. １２．診断方法に使用される空気充填マイクロカプセルであり、ヒドロキシエチ ル澱粉を除く水溶性殿粉誘導体またはＰＥＧ−変性材料からなる、液体コアの周 りの、初期のマイクロカプセルを形成し、前記液体コアの少なくとも１部分を除 去することにより形成されたものである、空気充填マイクロカプセル。
13. １３．請求項９から１２の何れか一項に記載の固形微球体または空気充填マイク ロカプセルと、薬剤学的に許容されるキャリアとからなる、体内投与用薬剤組成 物。
14. １４．診断画像を形成する方法であり、請求項１０または１２の空気充填マイク ロカプセルを患者の血流に添加し、像映されるべき器官に通過するまたは入る際 、マイクロカプセルに超音波が反射し、反射波から画像を形成することからなる 、診断画像を形成する方法。