JPH0634713B2 - ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養方法 - Google Patents
ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養方法Info
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- JPH0634713B2 JPH0634713B2 JP62206569A JP20656987A JPH0634713B2 JP H0634713 B2 JPH0634713 B2 JP H0634713B2 JP 62206569 A JP62206569 A JP 62206569A JP 20656987 A JP20656987 A JP 20656987A JP H0634713 B2 JPH0634713 B2 JP H0634713B2
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、バイオ・テクノロジイ分野において、例え
ば、生理化学的機構の解明や、例えば、診断、予防、治
療などの医薬用途に有用なバイオ製品の製造に際して、
ヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリド
ーマを培養するのに有用な無血清培地に関し、特には、
顕著に改善された抗体生産量をもってヒトモノクローナ
ル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを培養するこ
とができ、更に、そのような培養に際して、工業的実施
に適した継代培養が可能なヒトモノクローナル抗体生産
性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養用無血清培地に関す
る。
ば、生理化学的機構の解明や、例えば、診断、予防、治
療などの医薬用途に有用なバイオ製品の製造に際して、
ヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリド
ーマを培養するのに有用な無血清培地に関し、特には、
顕著に改善された抗体生産量をもってヒトモノクローナ
ル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを培養するこ
とができ、更に、そのような培養に際して、工業的実施
に適した継代培養が可能なヒトモノクローナル抗体生産
性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養用無血清培地に関す
る。
更に詳しくは、本発明は、無血清完全培地中に、１０
-12Ｍ以上、１０-6Ｍ以下、好ましくは１０-10Ｍ以上、
１０-6Ｍ以下、より好ましくは１０-9Ｍ以上、１０-7Ｍ
以下のレチノイン酸を含有することを特徴とするヒトモ
ノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培
養用無血清培地に関する。
-12Ｍ以上、１０-6Ｍ以下、好ましくは１０-10Ｍ以上、
１０-6Ｍ以下、より好ましくは１０-9Ｍ以上、１０-7Ｍ
以下のレチノイン酸を含有することを特徴とするヒトモ
ノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培
養用無血清培地に関する。
従来、多数の基礎培地（血清や血清アルブミンの如き血
清成分を含有しない培地）、たとえば動物細胞培養基礎
培地が知られてをり、約５０種類に及ぶ基礎培地が市場
でも入手可能である。そして、動物細胞の培養に際して
は、細胞の実用に供し得る生育、増殖能を維持するため
に、これら基礎培地に例えば仔牛血清、ヒト血清などの
如き血清の適当量、たとえば約５〜約１０％（vol/vol
−培地）程度、を配合して完全培地となして使用するの
が普通である。
清成分を含有しない培地）、たとえば動物細胞培養基礎
培地が知られてをり、約５０種類に及ぶ基礎培地が市場
でも入手可能である。そして、動物細胞の培養に際して
は、細胞の実用に供し得る生育、増殖能を維持するため
に、これら基礎培地に例えば仔牛血清、ヒト血清などの
如き血清の適当量、たとえば約５〜約１０％（vol/vol
−培地）程度、を配合して完全培地となして使用するの
が普通である。
ところが、血清は例えば高密度リポ脂質（ＨＤＬ）、低
密度リポ脂質（ＬＤＬ）などの挟雜脂質その他の多種多
様な夾雜異種因子を含有し、これらの不都合な異種因子
の混入を回避することができない。このために、例えば
細胞増殖機構の解明、抗体生産機構の解明などの如き生
理化学的機構の解明や、更には、抗体その他の有用物質
の如きバイオ製品の製造に際して、血清含有完全培地の
使用は、該培地に添加利用される血清中の不都合な異種
因子の混入から解放された高純度の有用物質を容易な操
作をもって且つ高品質で製造することを不可能にし、ま
た、生理化学的機構の解明に重大な妨害を与える等々の
技術的トラブルを生ずる。
密度リポ脂質（ＬＤＬ）などの挟雜脂質その他の多種多
様な夾雜異種因子を含有し、これらの不都合な異種因子
の混入を回避することができない。このために、例えば
細胞増殖機構の解明、抗体生産機構の解明などの如き生
理化学的機構の解明や、更には、抗体その他の有用物質
の如きバイオ製品の製造に際して、血清含有完全培地の
使用は、該培地に添加利用される血清中の不都合な異種
因子の混入から解放された高純度の有用物質を容易な操
作をもって且つ高品質で製造することを不可能にし、ま
た、生理化学的機構の解明に重大な妨害を与える等々の
技術的トラブルを生ずる。
このような技術的トラブルを回避するためには、血清を
添加しない無血清培地での培養が望まれるが、培養され
る細胞の生育、増殖、抗体生産などに支障を伴ったり、
更には、工業的実施に望まれる継代培養が実際上できな
かったりする他の技術的トラブルを招来するのが普通で
ある。そして、上述の如き血清由来の多種多様な混在異
種因子による不都合な影響は、ヒトモノクローナル抗体
生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養においては一
層重大な技術的トラブルとなり、ヒトモノクローナル抗
体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを用いる技術的利
益を失わせる結果ともなりかねない。
添加しない無血清培地での培養が望まれるが、培養され
る細胞の生育、増殖、抗体生産などに支障を伴ったり、
更には、工業的実施に望まれる継代培養が実際上できな
かったりする他の技術的トラブルを招来するのが普通で
ある。そして、上述の如き血清由来の多種多様な混在異
種因子による不都合な影響は、ヒトモノクローナル抗体
生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養においては一
層重大な技術的トラブルとなり、ヒトモノクローナル抗
体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを用いる技術的利
益を失わせる結果ともなりかねない。
同一出願人の１人は、先に、従来普通に用いられてきた
アミノ酸濃度を超える可成りの高濃度量でアミノ酸成
分、とくには特定の高濃度範囲量のＬ−アルギニンをア
ミノ酸成分の少なくとも一種として含有せしめることに
よって、全く意外なことにも、無血清／無血清アルブミ
ン培地であって且つヒト／ヒト・ハイブリドーマの生
育、増殖、更には抗体生産能を保持でき、斯くて血清及
び／又は血清アルブミンの使用に由来する挟雑因子によ
る不都合な影響からの解放されたヒト／ヒト・ハイブリ
ドーマ培養用の真正の無血清完全培地が提供できること
を発見して、特開昭６２−５１９８３号（特願昭６０−
１９２１４５号）に提案した。しかしながら、この提案
においても、無血清完全培地におけるレチノイン酸の配
合については全く言及していないし、さらに、該培地に
おけるヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養にレチノイン
酸が及ぼす如何なる影響についても、何等、記載も示唆
もしていない。
アミノ酸濃度を超える可成りの高濃度量でアミノ酸成
分、とくには特定の高濃度範囲量のＬ−アルギニンをア
ミノ酸成分の少なくとも一種として含有せしめることに
よって、全く意外なことにも、無血清／無血清アルブミ
ン培地であって且つヒト／ヒト・ハイブリドーマの生
育、増殖、更には抗体生産能を保持でき、斯くて血清及
び／又は血清アルブミンの使用に由来する挟雑因子によ
る不都合な影響からの解放されたヒト／ヒト・ハイブリ
ドーマ培養用の真正の無血清完全培地が提供できること
を発見して、特開昭６２−５１９８３号（特願昭６０−
１９２１４５号）に提案した。しかしながら、この提案
においても、無血清完全培地におけるレチノイン酸の配
合については全く言及していないし、さらに、該培地に
おけるヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養にレチノイン
酸が及ぼす如何なる影響についても、何等、記載も示唆
もしていない。
一方、下記式で表わされるレチノイン酸（ビタミンＡ
酸） を含有する培地を用いた細胞培養に関するいくつかの報
告が知られている。
酸） を含有する培地を用いた細胞培養に関するいくつかの報
告が知られている。
そのような報告の一つとして、Frank H.Valone and Don
ald G.Payan"Cancer Research"４５、４１２８−４１３
１（１９８５）には、レチノイン酸５×１０-6Ｍを含む
血清培地において、ヒト血液から採取精製されたヒトＢ
リンパ球の増殖が阻害されたことが報告されている。し
かしながら、この報文には、レチノイン酸を上記濃度で
含有する血清培地において、該ヒトＢリンパ球の増殖が
阻害されるというレチノイン酸の利用についての否定的
な知見が記載されているだけであって、レチノイン酸の
無血清培地における影響についての知見及びヒト／ヒト
・ハイブリドーマの培養に際してのレチノイン酸の影響
に関する知見については、全然、言及されていない。更
に、この報文は、レチノイン酸５×１０-6Ｍを含有する
血清培地におけるヒトＢリンパ球の抗体生産に該レチノ
イン酸が与える影響についてさえ、何等、記載も示唆も
していない。
ald G.Payan"Cancer Research"４５、４１２８−４１３
１（１９８５）には、レチノイン酸５×１０-6Ｍを含む
血清培地において、ヒト血液から採取精製されたヒトＢ
リンパ球の増殖が阻害されたことが報告されている。し
かしながら、この報文には、レチノイン酸を上記濃度で
含有する血清培地において、該ヒトＢリンパ球の増殖が
阻害されるというレチノイン酸の利用についての否定的
な知見が記載されているだけであって、レチノイン酸の
無血清培地における影響についての知見及びヒト／ヒト
・ハイブリドーマの培養に際してのレチノイン酸の影響
に関する知見については、全然、言及されていない。更
に、この報文は、レチノイン酸５×１０-6Ｍを含有する
血清培地におけるヒトＢリンパ球の抗体生産に該レチノ
イン酸が与える影響についてさえ、何等、記載も示唆も
していない。
さらに、他の報告として、Neil Sidell et.al."Cellula
r Immunology"８８、３７４−３８１（１９８４）に
は、レチノイン酸を１０-7Ｍ、１０-6Ｍ及び１０-5Ｍの
濃度でそれぞれ抗原と共に含有する血清培地において、
扁桃腺リンパ球を培養することによって、或は、レチノ
イン酸を１０-6Ｍの濃度で抗原と共に含有する血清培地
において、扁桃腺リンパ球から精製されたヒトＢリンパ
球を培養することによって、Ｂリンパ球の抗体産生細胞
への分化が促進されたことが報告されている。しかしな
がら、この報文においても、前者の報告と同様に、無血
清培地における知見については全く言及されていない
し、且つ又、ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養におけ
るレチノイン酸の影響についても全く開示されていな
い。更に、この報文には、すでに分化した抗体生産性細
胞に対するレチノイン酸の影響、とくにその抗体生産能
に与える影響については、全く記載も示唆もされたいな
い。
r Immunology"８８、３７４−３８１（１９８４）に
は、レチノイン酸を１０-7Ｍ、１０-6Ｍ及び１０-5Ｍの
濃度でそれぞれ抗原と共に含有する血清培地において、
扁桃腺リンパ球を培養することによって、或は、レチノ
イン酸を１０-6Ｍの濃度で抗原と共に含有する血清培地
において、扁桃腺リンパ球から精製されたヒトＢリンパ
球を培養することによって、Ｂリンパ球の抗体産生細胞
への分化が促進されたことが報告されている。しかしな
がら、この報文においても、前者の報告と同様に、無血
清培地における知見については全く言及されていない
し、且つ又、ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養におけ
るレチノイン酸の影響についても全く開示されていな
い。更に、この報文には、すでに分化した抗体生産性細
胞に対するレチノイン酸の影響、とくにその抗体生産能
に与える影響については、全く記載も示唆もされたいな
い。
上述したように、レチノイン酸含有培地について言及し
ているこれら従来文献に開示されているのは、血清培地
を用いた場合についてであって、無血清培地におけるレ
チノイン酸の作用効果については、これら従来文献には
全然言及されていないし、且つ又、ヒトモノクローナル
抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの生育、増殖、
抗体生産能に対するレチノイン酸の影響について予測し
得るような如何なる知見に関しても、これら従来文献に
は、何等、記載も示唆もされていない。
ているこれら従来文献に開示されているのは、血清培地
を用いた場合についてであって、無血清培地におけるレ
チノイン酸の作用効果については、これら従来文献には
全然言及されていないし、且つ又、ヒトモノクローナル
抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの生育、増殖、
抗体生産能に対するレチノイン酸の影響について予測し
得るような如何なる知見に関しても、これら従来文献に
は、何等、記載も示唆もされていない。
本発明者らは、ヒト／ヒト・ハイブリドーマとくにモノ
クローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培
養に適した無血清完全培地（本発明においては血清を添
加してない完全培地を意味し、たとえば血清アルブミン
を所望により添加してもよい）の開発について、更に研
究を進めてきた。
クローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培
養に適した無血清完全培地（本発明においては血清を添
加してない完全培地を意味し、たとえば血清アルブミン
を所望により添加してもよい）の開発について、更に研
究を進めてきた。
その結果、前述したように、従来、無血清培地成分とし
ての利用、更には、ヒトモノクローナル抗体生産性ヒト
／ヒト・ハイブリドーマの培養における動向のいづれに
ついても、完全に未知であったレチノイン酸を、無血清
完全培地中に、１０-12Ｍ以上、１０-6Ｍ以下の量で含
有せしめた培地が、ヒト／ヒト・ハイブリドーマとくに
ヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリド
ーマの抗体生産能を顕著に向上させ且つ工業的実施に適
した該ハイブリドーマの継代培養を円滑に行なうことを
可能とするヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・
ハイブリドーマ培養用無血清培地となることを発見し
た。
ての利用、更には、ヒトモノクローナル抗体生産性ヒト
／ヒト・ハイブリドーマの培養における動向のいづれに
ついても、完全に未知であったレチノイン酸を、無血清
完全培地中に、１０-12Ｍ以上、１０-6Ｍ以下の量で含
有せしめた培地が、ヒト／ヒト・ハイブリドーマとくに
ヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリド
ーマの抗体生産能を顕著に向上させ且つ工業的実施に適
した該ハイブリドーマの継代培養を円滑に行なうことを
可能とするヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・
ハイブリドーマ培養用無血清培地となることを発見し
た。
本発明者らの研究によれば、後に第１図に一例を示すよ
うに、本発明のレチノイン酸含有無血清完全培地におけ
る該レチノイン酸の含有量は可成り臨界的な傾向を示
し、モノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリド
ーマの抗体生産量は、レチノイン酸含有量１０-10Ｍ〜
１０-9Ｍ付近で急激に増大し、１０-8Ｍ〜１０-7Ｍ付近
でほぼ極大に達し、１０-6Ｍを超えると急激に減少する
傾向を示すことが発見された。
うに、本発明のレチノイン酸含有無血清完全培地におけ
る該レチノイン酸の含有量は可成り臨界的な傾向を示
し、モノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリド
ーマの抗体生産量は、レチノイン酸含有量１０-10Ｍ〜
１０-9Ｍ付近で急激に増大し、１０-8Ｍ〜１０-7Ｍ付近
でほぼ極大に達し、１０-6Ｍを超えると急激に減少する
傾向を示すことが発見された。
更に又、本発明の好適態様においては、動物細胞培養基
礎培地と、インシュリン及びトラスフェリンより成る群
からえらばれた成長因子の少なくとも一種とを含有して
成り、且つ血清無配合である無血清完全培地が広く利用
でき、このような無血清完全培地に、１０-12Ｍ以上、
１０-6Ｍ以下、好ましくは１０-10Ｍ以上、１０-6Ｍ以
下、より好ましくは１０-9Ｍ以上、１０-7Ｍ以下のレチ
ノイン酸を含有せしめることによって、優れたヒトモノ
クローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養
用無血清培地が提供できることがわかった。
礎培地と、インシュリン及びトラスフェリンより成る群
からえらばれた成長因子の少なくとも一種とを含有して
成り、且つ血清無配合である無血清完全培地が広く利用
でき、このような無血清完全培地に、１０-12Ｍ以上、
１０-6Ｍ以下、好ましくは１０-10Ｍ以上、１０-6Ｍ以
下、より好ましくは１０-9Ｍ以上、１０-7Ｍ以下のレチ
ノイン酸を含有せしめることによって、優れたヒトモノ
クローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養
用無血清培地が提供できることがわかった。
従って、本発明の目的はヒトモノクローナル抗体生産性
ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養用無血清培地を提供す
るにある。
ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養用無血清培地を提供す
るにある。
本発明の上記目的及び更に多くの他の目的ならびに利点
は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。
は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。
本発明のヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハ
イブリドーマ培養用無血清培地は、無血清完全培地中
に、１０-12Ｍ以上、１０-6Ｍ以下のレチノイン酸を含
有する。
イブリドーマ培養用無血清培地は、無血清完全培地中
に、１０-12Ｍ以上、１０-6Ｍ以下のレチノイン酸を含
有する。
該無血清完全培地としては、前述したように、それ自体
公知で且つ市場でも入手可能な多数の基礎培地から適宜
に選択した基礎培地（血清や血清アルブミンの如き血清
成分を含有しない培地）に少なくとも一種の成長因子を
含有せしめた血清無配合の完全培地を利用できる。この
ような無血清完全培地の好ましい例としては、それ自体
公知で且つ市場でも入手可能な動物細胞培養基礎培地
と、インシュリン及びトランスフェリンよりなる群から
えらばれた成長因子の少なくとも一種とを含有して成
り、且つ血清無配合の無血清完全培地を挙げることがで
きる。
公知で且つ市場でも入手可能な多数の基礎培地から適宜
に選択した基礎培地（血清や血清アルブミンの如き血清
成分を含有しない培地）に少なくとも一種の成長因子を
含有せしめた血清無配合の完全培地を利用できる。この
ような無血清完全培地の好ましい例としては、それ自体
公知で且つ市場でも入手可能な動物細胞培養基礎培地
と、インシュリン及びトランスフェリンよりなる群から
えらばれた成長因子の少なくとも一種とを含有して成
り、且つ血清無配合の無血清完全培地を挙げることがで
きる。
このような無血清完全培地は、インシュリン及び／又は
トランスフェリンの他に、基礎培地に配合して完全培地
とするのに使用可能な任意の完全培地形成用添加剤（但
し、本発明においては、血清を除外する呼称である）を
含有することができる。そのような完全培地形成用添加
剤の例としては、β−メルカプトエタノール、亜セレン
酸塩たとえばＮａ塩やＫ塩、エタノールアミン、Ｌ−ア
ルギニン、アルブミン等を包含して、それ自体公知の他
の培地用アミノ酸類、ビタミンもしくはミネラル類、核
酸誘導体類、糖類、補酵素類、脂肪酸類などを例示で
き、これらは一種に限らず、二種もしくはそれ以上を適
当に選択組み合わせて利用できる。
トランスフェリンの他に、基礎培地に配合して完全培地
とするのに使用可能な任意の完全培地形成用添加剤（但
し、本発明においては、血清を除外する呼称である）を
含有することができる。そのような完全培地形成用添加
剤の例としては、β−メルカプトエタノール、亜セレン
酸塩たとえばＮａ塩やＫ塩、エタノールアミン、Ｌ−ア
ルギニン、アルブミン等を包含して、それ自体公知の他
の培地用アミノ酸類、ビタミンもしくはミネラル類、核
酸誘導体類、糖類、補酵素類、脂肪酸類などを例示で
き、これらは一種に限らず、二種もしくはそれ以上を適
当に選択組み合わせて利用できる。
このような無血清完全培地の数態様について更に詳しく
例示すると、以下のような無血清完全培地を例示するこ
とができる。
例示すると、以下のような無血清完全培地を例示するこ
とができる。
例えば、前述した同一出願人の出願と係わる特開昭６２
−５１９８３号に開示された下記 （１）動物細胞培養基礎培地、 （２）インシュリン及びトランスフェリンより成る群か
ら選ばれた成長因子の少なくとも一種 （３）エタノールアミン、 （４）メルカプトエタノール及び （５）亜セレン酸塩（たとえばＮａ塩、Ｋ塩） を含有してなる動物細胞培養完全培地であって、更に （６）約１０００mg／−完全培地を越え、 約４５０００mg／−完全培地以下の高濃度量Ｌ−アル
ギニン を必須成分として含有する無血清培地、該（６）のＬ−
アルギニンの他に、或は該（６）のＬ−アルギニンの代
りに、（７）血清アルブミンの適量たとえば約０．１〜
約１mg／ｍ−完全培地を含有する無血清培地を例示で
きる。
−５１９８３号に開示された下記 （１）動物細胞培養基礎培地、 （２）インシュリン及びトランスフェリンより成る群か
ら選ばれた成長因子の少なくとも一種 （３）エタノールアミン、 （４）メルカプトエタノール及び （５）亜セレン酸塩（たとえばＮａ塩、Ｋ塩） を含有してなる動物細胞培養完全培地であって、更に （６）約１０００mg／−完全培地を越え、 約４５０００mg／−完全培地以下の高濃度量Ｌ−アル
ギニン を必須成分として含有する無血清培地、該（６）のＬ−
アルギニンの他に、或は該（６）のＬ−アルギニンの代
りに、（７）血清アルブミンの適量たとえば約０．１〜
約１mg／ｍ−完全培地を含有する無血清培地を例示で
きる。
更に、上記例示の（１）〜（６）含有の無血清培地にお
いて、該（３）のエタノールアミンを省略した成分を必
須成分として含有する無血清培地、また、上記例示の
（１）〜（６）含有の無血清培地において、該（３）の
エタノールアミン及び該（６）のＬ−アルギニンを省略
し、これらに代えて（７）血清アルブミンを加えた成分
を必須成分として含有する無血清培地、また更に、上記
例示の（１）〜（６）含有の無血清培地において、該
（３）のエタノールアミン及び該（６）のＬ−アルギニ
ンを省略した成分を必須成分として含有する無血清培
地、さらには、上記例示の（１）〜（６）含有の無血清
培地において、該（３）のエタノールアミン、該（４）
のメルカプトエタノール及び該（６）のＬ−アルギニン
を省略した成分を必須成分として含有する無血清培地な
ども、本発明に従って、特定範囲量から適宜に選択され
た量のレチノイン酸を含有せしめることにより利用でき
る。
いて、該（３）のエタノールアミンを省略した成分を必
須成分として含有する無血清培地、また、上記例示の
（１）〜（６）含有の無血清培地において、該（３）の
エタノールアミン及び該（６）のＬ−アルギニンを省略
し、これらに代えて（７）血清アルブミンを加えた成分
を必須成分として含有する無血清培地、また更に、上記
例示の（１）〜（６）含有の無血清培地において、該
（３）のエタノールアミン及び該（６）のＬ−アルギニ
ンを省略した成分を必須成分として含有する無血清培
地、さらには、上記例示の（１）〜（６）含有の無血清
培地において、該（３）のエタノールアミン、該（４）
のメルカプトエタノール及び該（６）のＬ−アルギニン
を省略した成分を必須成分として含有する無血清培地な
ども、本発明に従って、特定範囲量から適宜に選択され
た量のレチノイン酸を含有せしめることにより利用でき
る。
上記に例示した無血清完全培地の数態様を包含して、本
発明において、該（１）の基礎培地に配合される（２）
〜（７）の各成分の配合量は、必須成分の種類及び組み
合せの態様、培養目的、培養するヒト／ヒト・ハイブリ
ドーマの種類などの要素によっても、適宜に選択変更で
き一義的に例示することはできないが、それらの要素に
応じて、当業者は実験的に予め容易に好ましい配合量を
選択設定することができる。一例として、前記例示の
（１）〜（６）を必須成分として含有する無血清完全培
地の場合には、例えば、約２〜約５０mg／−完全培地
の（２）成分、約１０-8モル〜約１０-4モル／−完全
培地の（３）成分、約１０-8モル〜約１０-4モル／−
培地の（４）成分及び約１０-11モル〜約１０-7モル／
−完全培地の（５）成分の如き配合量を例示すること
ができる。
発明において、該（１）の基礎培地に配合される（２）
〜（７）の各成分の配合量は、必須成分の種類及び組み
合せの態様、培養目的、培養するヒト／ヒト・ハイブリ
ドーマの種類などの要素によっても、適宜に選択変更で
き一義的に例示することはできないが、それらの要素に
応じて、当業者は実験的に予め容易に好ましい配合量を
選択設定することができる。一例として、前記例示の
（１）〜（６）を必須成分として含有する無血清完全培
地の場合には、例えば、約２〜約５０mg／−完全培地
の（２）成分、約１０-8モル〜約１０-4モル／−完全
培地の（３）成分、約１０-8モル〜約１０-4モル／−
培地の（４）成分及び約１０-11モル〜約１０-7モル／
−完全培地の（５）成分の如き配合量を例示すること
ができる。
上記（１）動物細胞培養基礎培地は種々知られており、
公知文献（例えば、「細胞培養マニュアル」、第３版、
１９８４年７月２０日講談社サイエンテイフイツク発
行）に従って調製でき、その多くのものはまた市場で入
手可能であり本発明で利用することができる。
公知文献（例えば、「細胞培養マニュアル」、第３版、
１９８４年７月２０日講談社サイエンテイフイツク発
行）に従って調製でき、その多くのものはまた市場で入
手可能であり本発明で利用することができる。
このような基礎培地の例としては、下記の如き公知の基
礎培地及びその公知改質培地を例示することができる。
礎培地及びその公知改質培地を例示することができる。
ＢＥＭ培地（Basal Medium Eagle）［イーグル・エイ
チ、サイエンス（Eagle,H.,Science）、１２２：５０１
（１９５５）；イーグル・エイチ、ジャーナル オブ
エクスペリメンタル メデイスン（Eagle,H.,J.Exp.Me
d.）、１０２、３７（１９５５）及び１０２、５９５
（１９５５）；イーブル・エイチ、ジャーナル オブ
バイオロジカル ケミストリー（Eagle,H.,J.Biol.Che
m.）２１４、８３９（１９５５）；イーグル・エイチ、
エトアール、サイエンス（Eagle,H.,Science）、１２
３、８４５（１９５５）；ハンクス・ジエイ・エイチ、
ワランス・アール・イー、プロシーデイング オブ ザ
ソサイエテイー フオー イクスペリメンタル バイ
オロジー アンド メデイスン（Hanks,J.H.,Wallace,
R.E.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med）、７１、１９６（１９４
９）；ヤマネ・アイ、プロシーデイング オブ ザ ソ
サイエテイー フオー イクスペリメンタル バイオロ
ジー アンド メデイスン（Yamane,I.,Proc.Soc.Exp.B
iol.Med）、１２７、３３５（１９６８）；モートン・
エイチ・ジエイ・インビトロ（Morton,H.J.,InVitr
o）、６、８９（１９７０）；イーグル・エイチ、プロ
シーテイング オブ ザ ソサイエテイー フオー イ
クスペリメンタル バイオロジー アンド メデイスン
（Eagle,H.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med）、８９、３６２
（１９５５）；著］、 ＭＥＭ培地（Minimum Essential Medium）［例えばイー
グル・エイチ、サイエンス（Eagle,H.,Science）、１３
０、４３２（１９５９）；ストーカー・エム、マツク
フアーソン・アイ、バイロロジー（Stoker,M.,Macphers
on,I.,Virology）、１４、３５９（１９３１）；マツク
フアーソン・アイ、ストーカー・エム、バイロロジー
（MacPherson,I.,Stoker,M.,Virology）、１６、１４７
（１９６２）；ストーカー・エム、マツクフアーソン・
アイ、ネイチヤー（Stoker,M.,MacPherson,I.,Nature）
２０３、１３５５（１９６４）；ダルベツコー・アー
ル、フリーマン・ジー、バイロロジー（Dulbecco,R.,Fr
eeman,G.,Virology）、８、３９６（１９５９）；スミ
ス・ジエイ・デイー、エト アール、バイロロジー（Sm
ith,J.,D.,et al.,Virology）、１２、１８５（１９６
０）；スタンナーズ・シー・ピー、エトアール、ネイチ
ヤー ニユー バイオロジー（Stanners,C.P.,et al.,N
ature New Biology）、２３０、５２（１９７１）；ス
タンナーズ・シー・ピー、スチユアート・シー、パーソ
ナル コミユニケーシヨン（Stanners,C.P.,Stewart.
C.,Personal Communication.（１９７２）；等］ １９９培地［モーガン・ジエイ・エフ、エト アール、
ジャーナル オブ キヤンサー インステイチユート
（Morgan,J.F.,et al.,J.Nat.Cancer Inst）、１６、５
５７（１９５５）；モートン・エイチ・ジエイ、インビ
トロ（Morton,H.J.,InVitro）、６、８９（１９７
０）；等］、 Ｌ−１５培地（Ｌ−１５ Medium）［リーボビッツ・エ
イ、アメリカン（Leibvitz,A.,Amer,J.Hyg）、７８、１
７３（１９６３）；等］、 ハム培地（Ham′s Medium）［ハム・アール・ジー、イ
クスペリメンタル セル リサーチ（Ham,R.G.,Exp.Cel
l Res）、２９、５１５（１９６３）；ハム・アール・
ジー、プロシーデイング オブ ナシヨナル アカデミ
ー オブ サイエンス オブ ザ ユナイテツド ステ
ート オブ アメリカ（Ham,R.G.,Proc.Nat.Acad. Sc
i）、５３、２８８（１９６５）；モルトン・エイチ・
ジエイ、インビトロ（Morton,H.J.,InVito）、６、８９
（１９７０）；等］、 マツコイ５Ａ培地［ノイマン・アール・イー、マツコイ
・テイー・エー、プロシーデイング オブ エクスペリ
メンタル バイオロジー アンド メデイスン（Neuma
n,R.E.,McCoy,T.A.,Proc.Exp.Biol.Med）、９８、３０
３（１９５８）；マツコイ・テイー・エー、エトアー
ル、プロシーデイング オブ エクスペリメンタル バ
イオロジー アンド メデイスン（McCoy,T.A.,et al.,
Proc.Exp.Biol.Med）、１００、１１５（１９５９）；
スー・テイー・シー、ケロツグ・デイー・エス、（Hsu,
T.C.,Kellogg,D.S.,J.Nat.Cancer Inst.,２５、２２１
（１９６０）；等］、 ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ Medium）［ムーア・ジー・イ
ー、エト アール、ジエイ・エー・エム・エー（Moore,
G.E.,et al.,J.A.M.A.）１９９、５１９（１９６７）；
ムーア・ジー・イー、エト アール、ジャーナル オブ
ナショナル キヤンサー インステイチユート（Moor
e,G.E.,et al.,J.Nat.Cancer Inst）、３６、４０５
（１９６６）；等］、 ウイリアムＥ培地（Williams′Medium E）［ウイリアム
ス・ジー・エム、ワイスバーガー・イー・ケイ、ワイス
バーガー、ジエイ・エイチ、エクスペリメンタルセル
リサーチ（Williams,G.M.,Weisburger,E.K.,Weisburge
r,J.H.,Exp.Cell.Res）、６９、１０６〜１１２（１９
７１）；等］、 ＮＣＴＣ１３５培地（ＮＣＴＣ１３５Medium）［エバン
ス・ブイ・ジエイ等、エクスペリメニタル セル リサ
ーチ（Evans,V.J.et.al.,Exp.Cell.Res.）、３６、４３
９（１９６８）；等］、 ウエイマウス培地（Waymouth′s MediumＭＢ７５ ２
／１）［ウエイマウス・シー、ジャーナル オブ キヤ
ンサー インステイチュート（Waymouth,C.,J.Nat.Canc
er Inst.）、２２、１００３（１９５９）；モルトン・
エイチ・ジエイ、インビトロ（Morton,H.J.,InVitr
o）、６、８９（１９７０）；等］。
チ、サイエンス（Eagle,H.,Science）、１２２：５０１
（１９５５）；イーグル・エイチ、ジャーナル オブ
エクスペリメンタル メデイスン（Eagle,H.,J.Exp.Me
d.）、１０２、３７（１９５５）及び１０２、５９５
（１９５５）；イーブル・エイチ、ジャーナル オブ
バイオロジカル ケミストリー（Eagle,H.,J.Biol.Che
m.）２１４、８３９（１９５５）；イーグル・エイチ、
エトアール、サイエンス（Eagle,H.,Science）、１２
３、８４５（１９５５）；ハンクス・ジエイ・エイチ、
ワランス・アール・イー、プロシーデイング オブ ザ
ソサイエテイー フオー イクスペリメンタル バイ
オロジー アンド メデイスン（Hanks,J.H.,Wallace,
R.E.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med）、７１、１９６（１９４
９）；ヤマネ・アイ、プロシーデイング オブ ザ ソ
サイエテイー フオー イクスペリメンタル バイオロ
ジー アンド メデイスン（Yamane,I.,Proc.Soc.Exp.B
iol.Med）、１２７、３３５（１９６８）；モートン・
エイチ・ジエイ・インビトロ（Morton,H.J.,InVitr
o）、６、８９（１９７０）；イーグル・エイチ、プロ
シーテイング オブ ザ ソサイエテイー フオー イ
クスペリメンタル バイオロジー アンド メデイスン
（Eagle,H.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med）、８９、３６２
（１９５５）；著］、 ＭＥＭ培地（Minimum Essential Medium）［例えばイー
グル・エイチ、サイエンス（Eagle,H.,Science）、１３
０、４３２（１９５９）；ストーカー・エム、マツク
フアーソン・アイ、バイロロジー（Stoker,M.,Macphers
on,I.,Virology）、１４、３５９（１９３１）；マツク
フアーソン・アイ、ストーカー・エム、バイロロジー
（MacPherson,I.,Stoker,M.,Virology）、１６、１４７
（１９６２）；ストーカー・エム、マツクフアーソン・
アイ、ネイチヤー（Stoker,M.,MacPherson,I.,Nature）
２０３、１３５５（１９６４）；ダルベツコー・アー
ル、フリーマン・ジー、バイロロジー（Dulbecco,R.,Fr
eeman,G.,Virology）、８、３９６（１９５９）；スミ
ス・ジエイ・デイー、エト アール、バイロロジー（Sm
ith,J.,D.,et al.,Virology）、１２、１８５（１９６
０）；スタンナーズ・シー・ピー、エトアール、ネイチ
ヤー ニユー バイオロジー（Stanners,C.P.,et al.,N
ature New Biology）、２３０、５２（１９７１）；ス
タンナーズ・シー・ピー、スチユアート・シー、パーソ
ナル コミユニケーシヨン（Stanners,C.P.,Stewart.
C.,Personal Communication.（１９７２）；等］ １９９培地［モーガン・ジエイ・エフ、エト アール、
ジャーナル オブ キヤンサー インステイチユート
（Morgan,J.F.,et al.,J.Nat.Cancer Inst）、１６、５
５７（１９５５）；モートン・エイチ・ジエイ、インビ
トロ（Morton,H.J.,InVitro）、６、８９（１９７
０）；等］、 Ｌ−１５培地（Ｌ−１５ Medium）［リーボビッツ・エ
イ、アメリカン（Leibvitz,A.,Amer,J.Hyg）、７８、１
７３（１９６３）；等］、 ハム培地（Ham′s Medium）［ハム・アール・ジー、イ
クスペリメンタル セル リサーチ（Ham,R.G.,Exp.Cel
l Res）、２９、５１５（１９６３）；ハム・アール・
ジー、プロシーデイング オブ ナシヨナル アカデミ
ー オブ サイエンス オブ ザ ユナイテツド ステ
ート オブ アメリカ（Ham,R.G.,Proc.Nat.Acad. Sc
i）、５３、２８８（１９６５）；モルトン・エイチ・
ジエイ、インビトロ（Morton,H.J.,InVito）、６、８９
（１９７０）；等］、 マツコイ５Ａ培地［ノイマン・アール・イー、マツコイ
・テイー・エー、プロシーデイング オブ エクスペリ
メンタル バイオロジー アンド メデイスン（Neuma
n,R.E.,McCoy,T.A.,Proc.Exp.Biol.Med）、９８、３０
３（１９５８）；マツコイ・テイー・エー、エトアー
ル、プロシーデイング オブ エクスペリメンタル バ
イオロジー アンド メデイスン（McCoy,T.A.,et al.,
Proc.Exp.Biol.Med）、１００、１１５（１９５９）；
スー・テイー・シー、ケロツグ・デイー・エス、（Hsu,
T.C.,Kellogg,D.S.,J.Nat.Cancer Inst.,２５、２２１
（１９６０）；等］、 ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ Medium）［ムーア・ジー・イ
ー、エト アール、ジエイ・エー・エム・エー（Moore,
G.E.,et al.,J.A.M.A.）１９９、５１９（１９６７）；
ムーア・ジー・イー、エト アール、ジャーナル オブ
ナショナル キヤンサー インステイチユート（Moor
e,G.E.,et al.,J.Nat.Cancer Inst）、３６、４０５
（１９６６）；等］、 ウイリアムＥ培地（Williams′Medium E）［ウイリアム
ス・ジー・エム、ワイスバーガー・イー・ケイ、ワイス
バーガー、ジエイ・エイチ、エクスペリメンタルセル
リサーチ（Williams,G.M.,Weisburger,E.K.,Weisburge
r,J.H.,Exp.Cell.Res）、６９、１０６〜１１２（１９
７１）；等］、 ＮＣＴＣ１３５培地（ＮＣＴＣ１３５Medium）［エバン
ス・ブイ・ジエイ等、エクスペリメニタル セル リサ
ーチ（Evans,V.J.et.al.,Exp.Cell.Res.）、３６、４３
９（１９６８）；等］、 ウエイマウス培地（Waymouth′s MediumＭＢ７５ ２
／１）［ウエイマウス・シー、ジャーナル オブ キヤ
ンサー インステイチュート（Waymouth,C.,J.Nat.Canc
er Inst.）、２２、１００３（１９５９）；モルトン・
エイチ・ジエイ、インビトロ（Morton,H.J.,InVitr
o）、６、８９（１９７０）；等］。
上記例示の如き（１）動物細胞培養基礎培地は一種にか
ぎらず、複数種を適当な割合で配合して利用することも
できる。
ぎらず、複数種を適当な割合で配合して利用することも
できる。
本発明のヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハ
イブリドーマ培養用無血清培地は、以上に詳しく説明し
たような無血清完全培地中に、１０-12Ｍ以上、１０-6
Ｍ以下のレチノイン酸を含有する。
イブリドーマ培養用無血清培地は、以上に詳しく説明し
たような無血清完全培地中に、１０-12Ｍ以上、１０-6
Ｍ以下のレチノイン酸を含有する。
該レチノイン酸の量は、無血清完全培地を構成する基礎
培地及び完全培地形成用添加剤の種類、それらの組み合
わせ及び量組成、培養するヒト／ヒト・ハイブリドーマ
の種類ならびに培養目的などの要素によっても、上記量
範囲において適宜に選択変更でき、それらの要素に応じ
て、当業者は必要ならば予め実験的に容易に好ましい配
合量を選択設定することができる。好ましい量の例とし
ては、１０-10Ｍ以上、１０-6Ｍ以下、より好ましくは
１０-9Ｍ以上、１０-7Ｍ以下のレチノイン酸含有量を例
示することができる。更に、工業的実施に適した継代培
養による培養に際しての細胞数の増加及び抗体生産量の
バランスも考慮に入れて、たとえば１０-9Ｍ以上、１０
-7Ｍ未満の如きレチノイン酸含有量を好ましく挙げるこ
とができる。レチノイン酸含有量が少量にすぎても多量
にすぎても、培体生産量が可成り急激に減少する傾向が
あるので、上記量範囲において、適当に選択変更するの
がよい。
培地及び完全培地形成用添加剤の種類、それらの組み合
わせ及び量組成、培養するヒト／ヒト・ハイブリドーマ
の種類ならびに培養目的などの要素によっても、上記量
範囲において適宜に選択変更でき、それらの要素に応じ
て、当業者は必要ならば予め実験的に容易に好ましい配
合量を選択設定することができる。好ましい量の例とし
ては、１０-10Ｍ以上、１０-6Ｍ以下、より好ましくは
１０-9Ｍ以上、１０-7Ｍ以下のレチノイン酸含有量を例
示することができる。更に、工業的実施に適した継代培
養による培養に際しての細胞数の増加及び抗体生産量の
バランスも考慮に入れて、たとえば１０-9Ｍ以上、１０
-7Ｍ未満の如きレチノイン酸含有量を好ましく挙げるこ
とができる。レチノイン酸含有量が少量にすぎても多量
にすぎても、培体生産量が可成り急激に減少する傾向が
あるので、上記量範囲において、適当に選択変更するの
がよい。
本発明の無血清完全培地中、レチノイン酸含有の無血清
培地の利用に際しては、培養されるヒトモノクローナル
抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマにとくべつな制
約はなく、ヒトモノクローナル抗体生産性の任意のヒト
／ヒト・ハイブリドーマの培養に、本発明無血清培地を
使用することができる。
培地の利用に際しては、培養されるヒトモノクローナル
抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマにとくべつな制
約はなく、ヒトモノクローナル抗体生産性の任意のヒト
／ヒト・ハイブリドーマの培養に、本発明無血清培地を
使用することができる。
このようなヒト／ヒト・ハイブリドーマ及びその形成方
法それ自体は本発明の主題ではないが、例えば、特開昭
５８−２０１９９４号（特願昭５７−８４８４３号）、
特開昭５９−１３５８９８号（特願昭５８−６６０４
号）、特開昭５９−１３７４９７号（特願昭５８−６６
０３号）、特開昭６２−７０４００号（特願昭６０−２
１０３１０号）などに詳しく開示された形成方法で得る
ことのできるこれら公知文献に開示されたヒトモノクロ
ーナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ、更に
は、形成方法それ自体はこれら公知文献に開示の手法を
利用して得ることのできる同一出願人の出願に係わる特
開昭６２−１５５０８３号、特願昭６１−２０２７５２
号（昭和６１年８月３０日出願）、特願昭６２−１２６
６８７号（昭和６２年５月２３日出願）などに詳しく開
示されたヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハ
イブリドーマを例示することができる。
法それ自体は本発明の主題ではないが、例えば、特開昭
５８−２０１９９４号（特願昭５７−８４８４３号）、
特開昭５９−１３５８９８号（特願昭５８−６６０４
号）、特開昭５９−１３７４９７号（特願昭５８−６６
０３号）、特開昭６２−７０４００号（特願昭６０−２
１０３１０号）などに詳しく開示された形成方法で得る
ことのできるこれら公知文献に開示されたヒトモノクロ
ーナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ、更に
は、形成方法それ自体はこれら公知文献に開示の手法を
利用して得ることのできる同一出願人の出願に係わる特
開昭６２−１５５０８３号、特願昭６１−２０２７５２
号（昭和６１年８月３０日出願）、特願昭６２−１２６
６８７号（昭和６２年５月２３日出願）などに詳しく開
示されたヒトモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハ
イブリドーマを例示することができる。
このようなヒト／ヒト・ハイブリドーマの具体例として
は、上記公知文献に詳しく開示されているヒト／ヒト・
ハイブリドーマＣＬＮ／ＳＵＺＨ５［微工研寄託受託拒
否通知番号５７微寄文第６３７号］、ヒト／ヒト・ハイ
ブリドーマＣＬＮＨ５［ＡＴＣＣ ＨＢ８２０６］、ヒ
ト／ヒト・ハイブリドーマＳＬＮ Ｆ１０［微工研寄託
受託拒否通知番号６０微寄文第１１９７号］などを例示
することができる。更には、同一出願人の１人の出願に
係わる上記出願に詳しく開示されているように、患者由
来のヒトＢ−セルとして大腸癌患者由来のヒトＢ−セル
を用いるほかは上記公知文献開示の手法と同様にして得
ることのできるヒト／ヒト・ハイブリドーマＣｏＬＮＥ
１０［微工研寄託受託拒否通知番号６１微寄文第７９４
号］、上記特願昭６２−１５５０８３号に詳しく開示さ
れ且つ後に要約するヒトＢセル・リンパ芽球細胞変異株
ＨＩＨ／ＴＯ１株［微工研寄託受託拒否通知番号６０微
寄文第１１９８号］を融合パートナーとした胃癌患者由
来のヒトＢ−セルとのヒト／ヒト・ハイブリドーマＴＯ
Ｓ／Ｇ５［微工研寄託受託拒否通知番号６０微寄文第１
１９６号］やＴＯＳ／Ｈ８［微工研寄託受託拒否通知番
号６１微寄文第８４４号］、該融合パートナーと肝癌患
者由来のヒトＢ−セルとのヒト／ヒト・ハイブリドーマ
ＴＯＨ／Ｂ９［微工研寄託受託拒否通知番号６２微寄文
第５号］、ＴＯＨ／Ｄ５［微工研寄託受託拒否通知番号
６２微寄文第６号］、ＴＯＨ／Ｇ２［微工研寄託受託拒
否通知番号６２微寄文第７号］などを例示することがで
きる。
は、上記公知文献に詳しく開示されているヒト／ヒト・
ハイブリドーマＣＬＮ／ＳＵＺＨ５［微工研寄託受託拒
否通知番号５７微寄文第６３７号］、ヒト／ヒト・ハイ
ブリドーマＣＬＮＨ５［ＡＴＣＣ ＨＢ８２０６］、ヒ
ト／ヒト・ハイブリドーマＳＬＮ Ｆ１０［微工研寄託
受託拒否通知番号６０微寄文第１１９７号］などを例示
することができる。更には、同一出願人の１人の出願に
係わる上記出願に詳しく開示されているように、患者由
来のヒトＢ−セルとして大腸癌患者由来のヒトＢ−セル
を用いるほかは上記公知文献開示の手法と同様にして得
ることのできるヒト／ヒト・ハイブリドーマＣｏＬＮＥ
１０［微工研寄託受託拒否通知番号６１微寄文第７９４
号］、上記特願昭６２−１５５０８３号に詳しく開示さ
れ且つ後に要約するヒトＢセル・リンパ芽球細胞変異株
ＨＩＨ／ＴＯ１株［微工研寄託受託拒否通知番号６０微
寄文第１１９８号］を融合パートナーとした胃癌患者由
来のヒトＢ−セルとのヒト／ヒト・ハイブリドーマＴＯ
Ｓ／Ｇ５［微工研寄託受託拒否通知番号６０微寄文第１
１９６号］やＴＯＳ／Ｈ８［微工研寄託受託拒否通知番
号６１微寄文第８４４号］、該融合パートナーと肝癌患
者由来のヒトＢ−セルとのヒト／ヒト・ハイブリドーマ
ＴＯＨ／Ｂ９［微工研寄託受託拒否通知番号６２微寄文
第５号］、ＴＯＨ／Ｄ５［微工研寄託受託拒否通知番号
６２微寄文第６号］、ＴＯＨ／Ｇ２［微工研寄託受託拒
否通知番号６２微寄文第７号］などを例示することがで
きる。
以下、本発明無血清培地の主題ではないが、上記例示に
おいて融合パートナーとして記載したＨＩＨ／ＴＯ１株
に代表される融合パートナーの形成、それを用いてヒト
／ヒト・ハイブリドーマを形成する手法について要約す
る。
おいて融合パートナーとして記載したＨＩＨ／ＴＯ１株
に代表される融合パートナーの形成、それを用いてヒト
／ヒト・ハイブリドーマを形成する手法について要約す
る。
該融合パートナーは、それ自体公知のヒトＢセル・リン
パ芽球細胞ＷＩ−Ｌ２［微工研寄託受託拒否通知番号６
０微寄文第１６２１号］から、薬剤耐性化手法を利用し
た変異株形成操作を用いてそれ自体増殖能を有するが免
疫グロブリンを実質的に生産しない株化細胞として得る
ことができる。得られる株化細胞は、ヒトＢセル・リン
パ芽球細胞から導かれた変異株であって、下記（ｉ）〜
（ｖ）の形質特性を有する。
パ芽球細胞ＷＩ−Ｌ２［微工研寄託受託拒否通知番号６
０微寄文第１６２１号］から、薬剤耐性化手法を利用し
た変異株形成操作を用いてそれ自体増殖能を有するが免
疫グロブリンを実質的に生産しない株化細胞として得る
ことができる。得られる株化細胞は、ヒトＢセル・リン
パ芽球細胞から導かれた変異株であって、下記（ｉ）〜
（ｖ）の形質特性を有する。
（ｉ）６−チオグアニン耐性である、 (ii)ウワバイン耐性である、 (iii)ＨＡＴＯ（ヒポキサンチン、アメソプテリン、チ
ミジン及びウワバイン）含有培地で死滅する、 (iv)免疫グロブリンＩｇＧ及びＩｇＭを実質的に生産し
ない、 （ｖ）基礎培地ＲＤＦ中にインシュリン、トランスフェ
リン、セレニウム、エタノールアミン、β−メルカプト
エタノール及び牛血清アルブミンを含む無血清培地にお
いて増殖可能である。
ミジン及びウワバイン）含有培地で死滅する、 (iv)免疫グロブリンＩｇＧ及びＩｇＭを実質的に生産し
ない、 （ｖ）基礎培地ＲＤＦ中にインシュリン、トランスフェ
リン、セレニウム、エタノールアミン、β−メルカプト
エタノール及び牛血清アルブミンを含む無血清培地にお
いて増殖可能である。
更に詳しくは、上記ヒトＢセル・リンパ芽球細胞変異体
である融合パートナーは、例えば、ヒトＢセル・リンパ
芽球細胞を無血清培地で培養適応させ、適応した細胞群
から実質的に免疫グロブリン生産能を欠如する細胞をス
クリーニングし、このスクリーニングした細胞を６−チ
オグアニン含有無血清培地で培養適応させ、斯くて形成
された６−チオグアニン耐性細胞を突然変異剤で処理し
たのち、ウワバイン含有無血清培地で培養適応させ、得
られた耐性細胞を６−チオグアニン及びウワバインの両
者を含有する無血清培地でクローン化することにより創
製することができる。
である融合パートナーは、例えば、ヒトＢセル・リンパ
芽球細胞を無血清培地で培養適応させ、適応した細胞群
から実質的に免疫グロブリン生産能を欠如する細胞をス
クリーニングし、このスクリーニングした細胞を６−チ
オグアニン含有無血清培地で培養適応させ、斯くて形成
された６−チオグアニン耐性細胞を突然変異剤で処理し
たのち、ウワバイン含有無血清培地で培養適応させ、得
られた耐性細胞を６−チオグアニン及びウワバインの両
者を含有する無血清培地でクローン化することにより創
製することができる。
この際利用する無血清培地の例としては、基礎培地ＲＤ
Ｆ（基礎培地ＲＰＭＩ１６４０：基礎培地ＤＭＥ：基礎
培地Ｆ１２＝２：１：１の混合基礎培地）に、インシュ
リン、トランスフェリン、セレニウム、エタノールアミ
ン、β−メルカプトエタノール及び牛血清アルブミンの
適量を配合した無血清培地を好ましく例示することがで
きる。他の無血清培地も利用でき、培養適応させるヒト
Ｂセル・リンパ芽球細胞及び基礎培地の種類、上記他の
配合成分の種類及びそれらの量などに応じて、実験的に
適宜に選択、変更、決定して利用することができる。
又、利用する突然変異剤の例としては、ＭＮＮＧ、ＥＭ
Ｓ、ＡＡＢ、ＡＡＦ、ＡＦ−２、ＢＰox、ＤＡＢ、ＢＺ
Ｄ、ＤＡＮ、ＤＢＡ、ＤＢＥ、ＤＢＰ、ＤＭＮ、ＥＮＮ
Ｇ、ＥＮＵ、ＨＦＡ、３ＭＣＡ、ＭＭＳ、２ＮＡ、ＮＡ
ＡＡＦ、ＮＢＡ、４ＮＱＯ、ＯＡＴ、ＰＩ、ＴＣＥ、Ｔ
ＤＳ、ＴＯＸ、ＶＣなどの如き公知変異剤を例示するこ
とができる。
Ｆ（基礎培地ＲＰＭＩ１６４０：基礎培地ＤＭＥ：基礎
培地Ｆ１２＝２：１：１の混合基礎培地）に、インシュ
リン、トランスフェリン、セレニウム、エタノールアミ
ン、β−メルカプトエタノール及び牛血清アルブミンの
適量を配合した無血清培地を好ましく例示することがで
きる。他の無血清培地も利用でき、培養適応させるヒト
Ｂセル・リンパ芽球細胞及び基礎培地の種類、上記他の
配合成分の種類及びそれらの量などに応じて、実験的に
適宜に選択、変更、決定して利用することができる。
又、利用する突然変異剤の例としては、ＭＮＮＧ、ＥＭ
Ｓ、ＡＡＢ、ＡＡＦ、ＡＦ−２、ＢＰox、ＤＡＢ、ＢＺ
Ｄ、ＤＡＮ、ＤＢＡ、ＤＢＥ、ＤＢＰ、ＤＭＮ、ＥＮＮ
Ｇ、ＥＮＵ、ＨＦＡ、３ＭＣＡ、ＭＭＳ、２ＮＡ、ＮＡ
ＡＡＦ、ＮＢＡ、４ＮＱＯ、ＯＡＴ、ＰＩ、ＴＣＥ、Ｔ
ＤＳ、ＴＯＸ、ＶＣなどの如き公知変異剤を例示するこ
とができる。
培養適応は、例えば３７℃、５％ＣＯ2条件下で行なう
ことができ、また、クローン化はそれ自体公知の例えば
限界稀釈法を利用して行なうことができる。培養適応手
段、スクリーニング手段、突然変異剤処理手段などの各
単位手段それ自体はよく知られており、適宜に選択利用
することができる。
ことができ、また、クローン化はそれ自体公知の例えば
限界稀釈法を利用して行なうことができる。培養適応手
段、スクリーニング手段、突然変異剤処理手段などの各
単位手段それ自体はよく知られており、適宜に選択利用
することができる。
上記において利用するヒトＢセル・リンパ芽球細胞の例
としては、前述したそれ自体公知のヒトＢセル・リンパ
芽球細胞ＷＩ−Ｌ２のほかに、例えば、ヒトＢセル・リ
ンパ芽球細胞ＩＭ−９（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １５９）、
ヒトＢセル・リンパ芽球細胞ＮＣ−３７（ＡＴＣＣ Ｃ
ＣＬ ２１４）及びヒトＢセル・リンパ芽球細胞ＣＣＲ
Ｆ−ＳＢ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １２０）などの如き公知
株化細胞を例示することができる。
としては、前述したそれ自体公知のヒトＢセル・リンパ
芽球細胞ＷＩ−Ｌ２のほかに、例えば、ヒトＢセル・リ
ンパ芽球細胞ＩＭ−９（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １５９）、
ヒトＢセル・リンパ芽球細胞ＮＣ−３７（ＡＴＣＣ Ｃ
ＣＬ ２１４）及びヒトＢセル・リンパ芽球細胞ＣＣＲ
Ｆ−ＳＢ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １２０）などの如き公知
株化細胞を例示することができる。
上述のようにして得ることのできるヒトＢセル・リンパ
芽球細胞変異株を融合パートナーとして利用し、たとえ
ば抗原特異的ヒト免疫グロブリンの生産をヒト体外で工
業的に行うことを可能とするヒトモノクローナル抗体生
産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの創製は、該融合パー
トナーと例えば悪性腫瘍患者のヒトリンパ球細胞（ヒト
Ｂセル）とを融合させることにより創製することができ
る。
芽球細胞変異株を融合パートナーとして利用し、たとえ
ば抗原特異的ヒト免疫グロブリンの生産をヒト体外で工
業的に行うことを可能とするヒトモノクローナル抗体生
産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの創製は、該融合パー
トナーと例えば悪性腫瘍患者のヒトリンパ球細胞（ヒト
Ｂセル）とを融合させることにより創製することができ
る。
この融合細胞を産生する融合操作それ自体はよく知られ
ており、例えば、溶媒中で融合促進剤の存在下に、癌患
者のヒトＢセルと融合パートナーのヒトＢセル・リンパ
芽球細胞変異株とを接触させることにより行うことがで
きる。このような融合方法の例としては、たとえば仙台
ビールス（ＨＶＪ）、ポリエチレングリコールなどの如
き融合促進剤を用いる方法を例示できる。更に、高電圧
で電気的に融合する方法［例えば、U.Zimmerman et.a
l.,"Electric Field-Mediated Cell Fusion";The Journ
al of Biological Physics,１０，４３−５０，１９８
２。U.Zimmerman et.al.,"Electric Field-Induced Cel
l-to-Cell Fusion";The Journal of Membrene Biology,
６７，１６５−１８２，１９８２。U.Zimmerman,"Elect
ric Field Mediated Fusion and Related Electrical P
henomena";Biochimica et Biophysica Acta６９４，２
２７−２７７，１９８２。等］を利用して行うこともで
きる。
ており、例えば、溶媒中で融合促進剤の存在下に、癌患
者のヒトＢセルと融合パートナーのヒトＢセル・リンパ
芽球細胞変異株とを接触させることにより行うことがで
きる。このような融合方法の例としては、たとえば仙台
ビールス（ＨＶＪ）、ポリエチレングリコールなどの如
き融合促進剤を用いる方法を例示できる。更に、高電圧
で電気的に融合する方法［例えば、U.Zimmerman et.a
l.,"Electric Field-Mediated Cell Fusion";The Journ
al of Biological Physics,１０，４３−５０，１９８
２。U.Zimmerman et.al.,"Electric Field-Induced Cel
l-to-Cell Fusion";The Journal of Membrene Biology,
６７，１６５−１８２，１９８２。U.Zimmerman,"Elect
ric Field Mediated Fusion and Related Electrical P
henomena";Biochimica et Biophysica Acta６９４，２
２７−２７７，１９８２。等］を利用して行うこともで
きる。
前者の態様に於ては、例えば、水性媒体中、上記例示の
如き融合促進剤の存在下、所望によりおだやかな攪拌を
加えて系を均一にし、前記癌患者のヒトＢセルと融合パ
ートナーのヒトＢセル−リンパ芽球細胞変異株から成る
融合細胞が産生される時間、たとえば数分間のオーダー
で両者を接触させることにより、所望の融合細胞を産生
することができる。利用する水性媒体の例としては、
水、生理食塩水、５％ジメチルスルホキシド水溶液、５
％グリセロール水溶液などを例示することができる。
如き融合促進剤の存在下、所望によりおだやかな攪拌を
加えて系を均一にし、前記癌患者のヒトＢセルと融合パ
ートナーのヒトＢセル−リンパ芽球細胞変異株から成る
融合細胞が産生される時間、たとえば数分間のオーダー
で両者を接触させることにより、所望の融合細胞を産生
することができる。利用する水性媒体の例としては、
水、生理食塩水、５％ジメチルスルホキシド水溶液、５
％グリセロール水溶液などを例示することができる。
斯くて所望の融合細胞が産生された系を、たとえば遠心
分離して細胞群を採取し、再び適当な培地たとえば１０
％仔牛血清を含有させたＲＤＦ基礎培地にＨＡＴＯを加
えた培地に、採取した該細胞群を分散させ、この分散液
を例えばマイクロ・タイター・プレートの穴に、夫々、
一定量づつ分取注入し、たとえば５％ＣＯ2の存在下、
３７℃で培養し、各穴中の培養液を例えば３日毎に新し
い培養液を取りかえ、たとえば２週間培養を続けたの
ち、顕微鏡下で融合細胞の有無を調べ、コロニーの認め
られた試料の培養液を採取し、ヒト免疫グロブリンの有
無をたとえば125Ｉを用いたラジオ・イムノ・アツセイ
や酵素抗体法により検出することにより、所望のコロニ
ーを選別することができる。このようにして選別された
ヒト免疫グロブリンの生産の認められたコロニーを、新
しい培養液に移して培養し、融合細胞を増殖させること
により融合細胞クローンを取得することができる。
分離して細胞群を採取し、再び適当な培地たとえば１０
％仔牛血清を含有させたＲＤＦ基礎培地にＨＡＴＯを加
えた培地に、採取した該細胞群を分散させ、この分散液
を例えばマイクロ・タイター・プレートの穴に、夫々、
一定量づつ分取注入し、たとえば５％ＣＯ2の存在下、
３７℃で培養し、各穴中の培養液を例えば３日毎に新し
い培養液を取りかえ、たとえば２週間培養を続けたの
ち、顕微鏡下で融合細胞の有無を調べ、コロニーの認め
られた試料の培養液を採取し、ヒト免疫グロブリンの有
無をたとえば125Ｉを用いたラジオ・イムノ・アツセイ
や酵素抗体法により検出することにより、所望のコロニ
ーを選別することができる。このようにして選別された
ヒト免疫グロブリンの生産の認められたコロニーを、新
しい培養液に移して培養し、融合細胞を増殖させること
により融合細胞クローンを取得することができる。
本発明の無血清完全培地中、特定範囲量のレチノイン酸
含有の無血清培地は、ヒトモノクローナル抗体生産性ヒ
ト／ヒト・ハイブリドーマの培養に顕著に有利に利用で
きるが、他のハイブリドーマの培養にも利用することが
できる。更に、本発明の無血清培地は、予め所定量のレ
チノイン酸を配合含有せしめた形態の剤形であってもよ
いし、使用時に所定量となるように配合含有させて使用
する形体の剤形であっても差支えない。
含有の無血清培地は、ヒトモノクローナル抗体生産性ヒ
ト／ヒト・ハイブリドーマの培養に顕著に有利に利用で
きるが、他のハイブリドーマの培養にも利用することが
できる。更に、本発明の無血清培地は、予め所定量のレ
チノイン酸を配合含有せしめた形態の剤形であってもよ
いし、使用時に所定量となるように配合含有させて使用
する形体の剤形であっても差支えない。
又、本発明の無血清培地を使用して、ヒトモノクローナ
ル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを培養するに
際して、その培養条件それ自体は適宜に選択実施でき、
必応ならば、予め実験的に容易に選択変更することがで
きるが、例えば、約５％ＣＯ2雰囲気下、約３７゜±３
℃の如き培養条件を例示することができる。
ル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを培養するに
際して、その培養条件それ自体は適宜に選択実施でき、
必応ならば、予め実験的に容易に選択変更することがで
きるが、例えば、約５％ＣＯ2雰囲気下、約３７゜±３
℃の如き培養条件を例示することができる。
以下、実施例により本発明のヒトモノクローナル抗体生
産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養用無血清培地につ
いて、その調製例及び該培地を用いたヒトモノクローナ
ル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養例につい
て更に詳しく例示する。勿論、本発明はこれらの例示に
よって限定されるものではない。
産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養用無血清培地につ
いて、その調製例及び該培地を用いたヒトモノクローナ
ル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ培養例につい
て更に詳しく例示する。勿論、本発明はこれらの例示に
よって限定されるものではない。
実施例１〜５及び比較例１ レチノイン酸（市販品）は０．４％稀水酸化ナトリウム
水溶液に溶解して使用した。基礎培地として動物細胞培
養基礎培地ＲＤＦを用い、下記に示す完全培地形成用添
加剤を配合した下記組成の無血清完全培地を調製した。
水溶液に溶解して使用した。基礎培地として動物細胞培
養基礎培地ＲＤＦを用い、下記に示す完全培地形成用添
加剤を配合した下記組成の無血清完全培地を調製した。
無血清完全培地：− ＲＤＦ基礎培地 13.433mg／ｍ−完全培地 トランスフエリン 10μｇ／ｍ−完全培地 インシュリン 10μｇ／ｍ−完全培地 亜セレン酸ナトリウム 1ｎＭ エタノールアミン 1μＭ β−メルカプトエタノール 1μＭ ヒトアルブミン 100μｇ／ｍ−完全培地 上記組成の無血清完全培地（対照）及び該無血清完全培
地に後掲第１表に示したレチノイン酸の各種濃度となる
ようにレチノイン酸を配合したレチノイン酸含有の無血
清完全培地を、それぞれ調製した（実施例及び比較
例）。
地に後掲第１表に示したレチノイン酸の各種濃度となる
ようにレチノイン酸を配合したレチノイン酸含有の無血
清完全培地を、それぞれ調製した（実施例及び比較
例）。
特開昭６２−７０４００号に詳細に開示されたヒト／ヒ
ト・ハイブリドーマＳＬＮＦ１０［微工研寄託受託拒否
通知番号６０微寄文第１１９７号］（ヒトモノクローナ
ル抗体ＩｇＧ生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ）を、
レチノイン酸を含まない上記無血清完全培地で、低速度
の遠心操作によって２回洗浄した後、上記無血清完全培
地（対照）及びレチノイン酸含有の無血清完全培地（実
施例及び比較例）のそれぞれに、細胞数１０5cells／ｍ
となるように接種し、５％ＣＯ2、３７℃の条件下の
インキュベーター中で培養した。培養開始から６日後、
ヘモサイトメーターを用いて細胞数を測定し、以下に記
載する方法を用いて抗体量を測定した。
ト・ハイブリドーマＳＬＮＦ１０［微工研寄託受託拒否
通知番号６０微寄文第１１９７号］（ヒトモノクローナ
ル抗体ＩｇＧ生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマ）を、
レチノイン酸を含まない上記無血清完全培地で、低速度
の遠心操作によって２回洗浄した後、上記無血清完全培
地（対照）及びレチノイン酸含有の無血清完全培地（実
施例及び比較例）のそれぞれに、細胞数１０5cells／ｍ
となるように接種し、５％ＣＯ2、３７℃の条件下の
インキュベーター中で培養した。培養開始から６日後、
ヘモサイトメーターを用いて細胞数を測定し、以下に記
載する方法を用いて抗体量を測定した。
抗体量の測定：− ミクロタイタープレートの中に、抗ヒト免疫グロブリン
抗体を滴下（１００μ）し、３７℃で３０分間プレー
トに吸着させる。0.3％のゼラチンを含む１０mMのＰＢ
Ｓ（ゼラチン緩衝液）で３回洗浄した後、１％牛血清ア
ルブミン溶液を滴下（２００μ）し、３７℃で１時間
吸着させる。ゼラチン緩衝液で３回洗浄して未吸着のも
のを除去する。次に検液（培養上清）を滴下（５０μ
）して、３７℃で１時間反応後、ゼラチン緩衝液で３
回洗浄する。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇ抗体
を滴下（５０μ）して、３７℃で３０分間反応させ、
検液中のヒトＩｇと結合させる（酵素抗体法）。ゼラチ
ン緩衝液で３回洗浄後、過酸化水素とｏ−フェニレンジ
アミンを含む基質溶液を加え、暗室で１０分間反応させ
る。５Ｎ−Ｈ2ＳＯ4（５０μ）を加えて反応を止め
る。検液中のヒトＩｇの量に比例して生産される４９２
ｎｍに吸収を持つ黄色の基質反応生成物の量を吸光光度
計を用いて測定し、予め濃度のわかったヒトＩｇの吸光
度と対比することによって、検液中のヒトＩｇ濃度を知
ることができる。
抗体を滴下（１００μ）し、３７℃で３０分間プレー
トに吸着させる。0.3％のゼラチンを含む１０mMのＰＢ
Ｓ（ゼラチン緩衝液）で３回洗浄した後、１％牛血清ア
ルブミン溶液を滴下（２００μ）し、３７℃で１時間
吸着させる。ゼラチン緩衝液で３回洗浄して未吸着のも
のを除去する。次に検液（培養上清）を滴下（５０μ
）して、３７℃で１時間反応後、ゼラチン緩衝液で３
回洗浄する。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇ抗体
を滴下（５０μ）して、３７℃で３０分間反応させ、
検液中のヒトＩｇと結合させる（酵素抗体法）。ゼラチ
ン緩衝液で３回洗浄後、過酸化水素とｏ−フェニレンジ
アミンを含む基質溶液を加え、暗室で１０分間反応させ
る。５Ｎ−Ｈ2ＳＯ4（５０μ）を加えて反応を止め
る。検液中のヒトＩｇの量に比例して生産される４９２
ｎｍに吸収を持つ黄色の基質反応生成物の量を吸光光度
計を用いて測定し、予め濃度のわかったヒトＩｇの吸光
度と対比することによって、検液中のヒトＩｇ濃度を知
ることができる。
上記細胞数及び抗体量の測定結果を、下掲第１表に示し
た。更に、添付第１図に該抗体量とレチノイン酸の量の
関係をグラフで示した。
た。更に、添付第１図に該抗体量とレチノイン酸の量の
関係をグラフで示した。
実施例６（継代培養） 無血清完全培地中にレチノイン酸１０-7Ｍで含有する下
記無血清培地（本発明培地）を調製した。
記無血清培地（本発明培地）を調製した。
ＲＤＦ基礎培地 13.433mg／ｍ−完全培地 トランスフエリン 10μｇ／ｍ−完全培地 インシュリン 10μｇ／ｍ−完全培地 亜セレン酸ナトリウム 1ｎＭ β−メルカプトエタノール 1μＭ Ｌ−アルギニン 1mg／ｍ−完全培地 レチノイン酸 10-7Ｍ この無血清培地にヒト／ヒトハイブリドーマＳＬＮＦ１
０を細胞数１０5cells／ｍとなるように接種し、５％
ＣＯ2、３７℃の培養条件で培養を開始した。６日後
に、同様な新しい無血清培地に、上記第１世代を培養物
から分離した細胞を細胞数１０5cells／ｍとなるよう
に移植し、同様な培養条件で第２世代培養を行った。第
２世代培養開始から６日後に、上記と同様に新しい無血
清培地に、該第２世代培養物から分離した細胞を細胞数
１０5cells／ｍとなるように移植し、上記と同様な培
養条件で第３世代培養を行った。
０を細胞数１０5cells／ｍとなるように接種し、５％
ＣＯ2、３７℃の培養条件で培養を開始した。６日後
に、同様な新しい無血清培地に、上記第１世代を培養物
から分離した細胞を細胞数１０5cells／ｍとなるよう
に移植し、同様な培養条件で第２世代培養を行った。第
２世代培養開始から６日後に、上記と同様に新しい無血
清培地に、該第２世代培養物から分離した細胞を細胞数
１０5cells／ｍとなるように移植し、上記と同様な培
養条件で第３世代培養を行った。
このようにして、３世代にわたって継代培養を行った結
果を、添付第２図に示した。第２図に示されるように、
無血清完全培地中にレチノイン酸を含有する本発明無血
清培地を使用して、ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ生産
性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを継代を培養すると、細
胞増殖能及び抗体生産能のいづれについても不都合な低
下を伴うことなしに長期間にわって継代培養が可能であ
ることがわかる。
果を、添付第２図に示した。第２図に示されるように、
無血清完全培地中にレチノイン酸を含有する本発明無血
清培地を使用して、ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ生産
性ヒト／ヒト・ハイブリドーマを継代を培養すると、細
胞増殖能及び抗体生産能のいづれについても不都合な低
下を伴うことなしに長期間にわって継代培養が可能であ
ることがわかる。
実施例７〜９ 実施例４と同様にして無血清完全培地中にレチノイン酸
を１０-7Ｍで含有する無血清培地（本発明培地）及びレ
チノイン酸をを省略したほかは同様な無血清培地（対
照）を調製した。
を１０-7Ｍで含有する無血清培地（本発明培地）及びレ
チノイン酸をを省略したほかは同様な無血清培地（対
照）を調製した。
上記本発明無血清培地及び対照無血清培地（レチノイン
酸を未配合）のそれぞれを用いて、実施例４で用いたと
同様なヒト／ヒト・ハイブリドーマＳＬＮＦ１０、更
に、すでに例示したＴＯＳ／Ｈ８及びＣｏＬＮＥ１０の
夫々について、実施例４と同様にして培養試験を行っ
た。培養開始から６日後の抗体量を測定した結果を下掲
第２表に示し、且つ対比を容易にするため第３図にその
結果をグラフで示した。これらの結果から、種々のヒト
モノクローナル抗体生産性のヒト／ヒト・ハイブリドー
マについても、本発明無血清培地が利用でき、且つ又、
レチノイン酸未配合の対照培地に比して抗体生産量の顕
著な向上増強が達成されることがわかる。
酸を未配合）のそれぞれを用いて、実施例４で用いたと
同様なヒト／ヒト・ハイブリドーマＳＬＮＦ１０、更
に、すでに例示したＴＯＳ／Ｈ８及びＣｏＬＮＥ１０の
夫々について、実施例４と同様にして培養試験を行っ
た。培養開始から６日後の抗体量を測定した結果を下掲
第２表に示し、且つ対比を容易にするため第３図にその
結果をグラフで示した。これらの結果から、種々のヒト
モノクローナル抗体生産性のヒト／ヒト・ハイブリドー
マについても、本発明無血清培地が利用でき、且つ又、
レチノイン酸未配合の対照培地に比して抗体生産量の顕
著な向上増強が達成されることがわかる。
添付図面第１図は実施例１〜５における抗体量とレチノ
イン酸の量の関係を示すグラフ、第２図は実施例６の継
代培養の結果を示すグラフ、そして第３図は実施例７〜
９の結果を示すグラフである。
イン酸の量の関係を示すグラフ、第２図は実施例６の継
代培養の結果を示すグラフ、そして第３図は実施例７〜
９の結果を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】１０-12Ｍ以上で且つ１０-6Ｍ以下のレチ
ノイン酸又はその塩を含有する無血清完全培地中で、ヒ
トモノクローナル抗体生産性ヒト／ヒト・ハイブリドー
マを培養することを特徴とするヒトモノクローナル抗体
生産性ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養方法。 - 【請求項２】レチノイン酸又はその塩の含有量が１０-9
Ｍ以上で且つ１０-7Ｍ以下である特許請求の範囲第１項
記載の方法。 - 【請求項３】該無血清完全培地が、動物細胞培養基礎培
地と、インシユリン及びトランスフエリンより成る群か
らえらばれた成長因子の少なくとも一種とを含有して成
る特許請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (10)
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| JP62206569A JPH0634713B2 (ja) | 1987-08-21 | 1987-08-21 | ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養方法 |
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| JP62206569A JPH0634713B2 (ja) | 1987-08-21 | 1987-08-21 | ヒト／ヒト・ハイブリドーマの培養方法 |
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Family Applications (1)
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