JP3043023B2 - ハイブリドーマ - Google Patents
ハイブリドーマInfo
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Description
【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は、ヒト型モノクローナル抗体を産生するハイ
ブリドーマを高頻度に作製し得る新規親細胞株、（ヒト
・マウス）ヘテロハイブリドーマに関するものである。
ブリドーマを高頻度に作製し得る新規親細胞株、（ヒト
・マウス）ヘテロハイブリドーマに関するものである。
「従来の技術」 抗体を、予防、治療または診断を目的としてヒトに投
与する場合、ヒト型モノクローナル抗体は、マウスモノ
クローナル抗体に比べ抗原性に関する問題が少ないと考
えられており、臨床治療上利用範囲が非常に大きい。
与する場合、ヒト型モノクローナル抗体は、マウスモノ
クローナル抗体に比べ抗原性に関する問題が少ないと考
えられており、臨床治療上利用範囲が非常に大きい。
ところで、ヒト型モノクローナル抗体の作製は、マウ
スの場合と比べて、融合効率が悪い、抗体産生の安定性
が悪い、抗体を大量に得ることが困難である、免疫され
たリンパ球が自由に得られない、IgGタイプの抗体を得
ることが難しいなどの不利な点があった。
スの場合と比べて、融合効率が悪い、抗体産生の安定性
が悪い、抗体を大量に得ることが困難である、免疫され
たリンパ球が自由に得られない、IgGタイプの抗体を得
ることが難しいなどの不利な点があった。
これらを克服するために、ヒトの親細胞株を改良する
方法、例えば（ヒト・マウス）ヘテロミエローマを親細
胞として用いる方法［プロシーディング オブ ナショ
ナル アカデミー オブ サイエンス（Proc.Nat.Acad.
Sci.USA）80,7308,（1983）等］、又はマウスミエロー
マを親細胞として用いる方法［ジャーナル オブ クリ
ニカル インベスティゲーション（J.Clin.Invest.）7
0,1306,（1982）等］などが考えられている。その他
に、in vitroで抗原刺激することにより特異抗体産性ハ
イブリドーマを効率よく得る方法［ヨーロピアン ジャ
ーナル オブ イミュノロジー（Eur.J.Immunol.14,23,
（1984）等］、又は向リンパ性ウイルスであるエプスタ
イン・バーウイルス（EBV）で抗体産性細胞を形質転換
する方法［サイエンス（Science）199,1439,（1978）
等］、更にはEBV形質転換細胞を親細胞と融合する方法
［プロシーディング オブ ナショナル アカデミー
オブ サイエンス（Proc.Nat.Acad.Sci.USA）79,6651,
（1982）等］などが試みられている。
方法、例えば（ヒト・マウス）ヘテロミエローマを親細
胞として用いる方法［プロシーディング オブ ナショ
ナル アカデミー オブ サイエンス（Proc.Nat.Acad.
Sci.USA）80,7308,（1983）等］、又はマウスミエロー
マを親細胞として用いる方法［ジャーナル オブ クリ
ニカル インベスティゲーション（J.Clin.Invest.）7
0,1306,（1982）等］などが考えられている。その他
に、in vitroで抗原刺激することにより特異抗体産性ハ
イブリドーマを効率よく得る方法［ヨーロピアン ジャ
ーナル オブ イミュノロジー（Eur.J.Immunol.14,23,
（1984）等］、又は向リンパ性ウイルスであるエプスタ
イン・バーウイルス（EBV）で抗体産性細胞を形質転換
する方法［サイエンス（Science）199,1439,（1978）
等］、更にはEBV形質転換細胞を親細胞と融合する方法
［プロシーディング オブ ナショナル アカデミー
オブ サイエンス（Proc.Nat.Acad.Sci.USA）79,6651,
（1982）等］などが試みられている。
「発明が解決しようとする課題」 このようにヒト型モノクローナル抗体を産生するハイ
ブリドーマを高頻度に作製し得る親細胞株を得る試みが
種々なされているが、現在までのところ、以下の諸条件
を満足する親細胞株は得られていない。すなわち、親細
胞株に求められる諸条件とは、a.ヒトリンパ球との融合
効率が高い、b.自身では抗体を産生しない、c.得られた
ハイブリドーマがヒト型モノクローナル抗体、特にIgG
タイプの抗体を安定に産生する、d.得られたハイブリド
ーマの抗体産生量が多い、e.得られたハイブリドーマが
無血清培地中でも充分に増殖する、f.得られたハイブリ
ドーマのクローニング効率がよい、などである。
ブリドーマを高頻度に作製し得る親細胞株を得る試みが
種々なされているが、現在までのところ、以下の諸条件
を満足する親細胞株は得られていない。すなわち、親細
胞株に求められる諸条件とは、a.ヒトリンパ球との融合
効率が高い、b.自身では抗体を産生しない、c.得られた
ハイブリドーマがヒト型モノクローナル抗体、特にIgG
タイプの抗体を安定に産生する、d.得られたハイブリド
ーマの抗体産生量が多い、e.得られたハイブリドーマが
無血清培地中でも充分に増殖する、f.得られたハイブリ
ドーマのクローニング効率がよい、などである。
したがって、本発明の目的は、ヒト型モノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマを作製する親細胞株とし
て上記のような諸条件を満足する新規な親細胞株を提供
することにある。
抗体を産生するハイブリドーマを作製する親細胞株とし
て上記のような諸条件を満足する新規な親細胞株を提供
することにある。
「課題を解決するための手段」 本発明者らは、ヒトミエローマ細胞株RPMI8226とマウ
スミエローマ細胞株FOをポリエチレングリコールを用い
て細胞融合を行い、得られたヘテロハイブリドーマを８
−アザグアニン耐性化して、ヒトリンパ球との融合効率
が高い親細胞株RFを樹立した。更にこのRFを限界希釈法
又は寒天法によりクローニングを繰り返し、最も増殖能
のよいクローンをRF−S1と命名した。そして、この細胞
株がヒト型モノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マを作製する親細胞株として要求される上記諸条件を満
足し得ることを確認し、本発明を完成するに至った。
スミエローマ細胞株FOをポリエチレングリコールを用い
て細胞融合を行い、得られたヘテロハイブリドーマを８
−アザグアニン耐性化して、ヒトリンパ球との融合効率
が高い親細胞株RFを樹立した。更にこのRFを限界希釈法
又は寒天法によりクローニングを繰り返し、最も増殖能
のよいクローンをRF−S1と命名した。そして、この細胞
株がヒト型モノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マを作製する親細胞株として要求される上記諸条件を満
足し得ることを確認し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、ヒトミエローマ細胞株（RPMI82
26）とマウスミエローマ細胞株（FO）とを細胞融合させ
た後、８−アザグアニン耐性化し、更にクローニングを
繰り返して得られ、以下の性質を有することを特徴とす
るハイブリドーマを提供するものである。
26）とマウスミエローマ細胞株（FO）とを細胞融合させ
た後、８−アザグアニン耐性化し、更にクローニングを
繰り返して得られ、以下の性質を有することを特徴とす
るハイブリドーマを提供するものである。
a.ヒトリンパ球との融合効率が、1.26（個/105リンパ
球）以上である。
球）以上である。
b.自身では抗体を産生しない。
c.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマは抗
体産生量、特にIgG抗体産生量が４箇月培養した後でも
実質的に維持される。
体産生量、特にIgG抗体産生量が４箇月培養した後でも
実質的に維持される。
d.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマを１
×105個/mlの密度で培養を開始したとき、５日目の培養
上清中に含まれる抗体産生量が８μg/ml以上である。
×105個/mlの密度で培養を開始したとき、５日目の培養
上清中に含まれる抗体産生量が８μg/ml以上である。
e.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマは、
無血清培地中でも増殖し抗体を産生する。
無血清培地中でも増殖し抗体を産生する。
f.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマを、
48ウェルに10個／ウェルの細胞数でまき込んだときのク
ローニング効率が、42/48以上である。
48ウェルに10個／ウェルの細胞数でまき込んだときのク
ローニング効率が、42/48以上である。
以下に本発明について詳細に説明する。
本発明において、ヒトミエローマ細胞部は、RPMI8226
を用い、マウスミエローマ細胞株としては、抗体非産生
で融合効率の高いマウス親細胞株FOを用いた。なお、こ
れらの細胞は市販されており、容易に入手可能である。
RPMI8226は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジ
ン（以下HATと記す）を加えた培地で培養可能だがウア
バインを加えた培地中では増殖できない。FOは逆に、HA
T添加培地中では増殖できないが、ウアバインを添加し
た培地中でも増殖できる。これらの細胞株をポリエチレ
ングリコールを用いた公知の方法で融合させ、HAT及び
ウアバインを加えた選択培地にて培養を行い、HAT・ウ
アバイン耐性の（ヒト・マウス）ヘテロハイブリドーマ
を得た。次いで、８−アザグアニンの濃度を徐々に高く
した培地で順次培養することにより、８−アザグアニン
耐性にし、HAT感受性のヘテロハイブリドーマRFを得
た。このヘテロハイブリドーマを限界希釈法又は軟寒天
法によりクローン化して、最も増殖能のよい（ヒト・マ
ウス）ヘテロハイブリドーマRF−S1を樹立した。このRF
−S1は、ヒトリンパ球との融合効率が高く、しかもRF−
S1を用いて作製したハイブリドーマはクローニング効率
がよく抗体産生も安定していることが確認された。ま
た、RF−S1及びRF−S1を用いて作製したハイブリドーマ
は無血清培地中でも培養可能である。したがって、RF−
S1を用いて作製したハイブリドーマが産生するIgGタイ
プのヒト型モノクローナル抗体は、プロテイン−Ａカラ
ムを用いた常法の手段により容易に精製できる。
を用い、マウスミエローマ細胞株としては、抗体非産生
で融合効率の高いマウス親細胞株FOを用いた。なお、こ
れらの細胞は市販されており、容易に入手可能である。
RPMI8226は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジ
ン（以下HATと記す）を加えた培地で培養可能だがウア
バインを加えた培地中では増殖できない。FOは逆に、HA
T添加培地中では増殖できないが、ウアバインを添加し
た培地中でも増殖できる。これらの細胞株をポリエチレ
ングリコールを用いた公知の方法で融合させ、HAT及び
ウアバインを加えた選択培地にて培養を行い、HAT・ウ
アバイン耐性の（ヒト・マウス）ヘテロハイブリドーマ
を得た。次いで、８−アザグアニンの濃度を徐々に高く
した培地で順次培養することにより、８−アザグアニン
耐性にし、HAT感受性のヘテロハイブリドーマRFを得
た。このヘテロハイブリドーマを限界希釈法又は軟寒天
法によりクローン化して、最も増殖能のよい（ヒト・マ
ウス）ヘテロハイブリドーマRF−S1を樹立した。このRF
−S1は、ヒトリンパ球との融合効率が高く、しかもRF−
S1を用いて作製したハイブリドーマはクローニング効率
がよく抗体産生も安定していることが確認された。ま
た、RF−S1及びRF−S1を用いて作製したハイブリドーマ
は無血清培地中でも培養可能である。したがって、RF−
S1を用いて作製したハイブリドーマが産生するIgGタイ
プのヒト型モノクローナル抗体は、プロテイン−Ａカラ
ムを用いた常法の手段により容易に精製できる。
「作用及び効果」 本発明により樹立したRF−S1は、親細胞株として融合
効率が高く、得られたハイブリドーマは抗体産生が安定
で、しかも無血清培地で培養可能である。この親細胞株
を用いることにより、ヒトに投与可能なヒト型モノクロ
ーナル抗体の生産及び精製が比較的容易にでき、その有
用性は非常に大きい。
効率が高く、得られたハイブリドーマは抗体産生が安定
で、しかも無血清培地で培養可能である。この親細胞株
を用いることにより、ヒトに投与可能なヒト型モノクロ
ーナル抗体の生産及び精製が比較的容易にでき、その有
用性は非常に大きい。
「実施例」 （１）８−アザグアニン耐性（ヒト・マウス）ヘテロハ
イブリドーマの作製 ヒトミエローマ細胞株RPMI8226及びマウスミエローマ
細胞株FOはそれぞれ15％の非動化牛胎児血清（以下FSC
と記す）を含むRDF培地（RPMI1640、ダルベッコMEM、ハ
ムF12培地を2:1:1で混合した培地）にて培養した。これ
らの細胞はRDF培地で２回洗浄後、1:1の割合で混合し、
再度遠心する。遠心後、細胞ペレットをよく分散し、1m
lの50％ポリエチレングリコールを１分間にわたって滴
下した。更に１分間37℃で反応後、５分間で10mlのRDF
培地を加えた。
イブリドーマの作製 ヒトミエローマ細胞株RPMI8226及びマウスミエローマ
細胞株FOはそれぞれ15％の非動化牛胎児血清（以下FSC
と記す）を含むRDF培地（RPMI1640、ダルベッコMEM、ハ
ムF12培地を2:1:1で混合した培地）にて培養した。これ
らの細胞はRDF培地で２回洗浄後、1:1の割合で混合し、
再度遠心する。遠心後、細胞ペレットをよく分散し、1m
lの50％ポリエチレングリコールを１分間にわたって滴
下した。更に１分間37℃で反応後、５分間で10mlのRDF
培地を加えた。
これを遠心した後、15％FCS培地を含むRDF培地に懸濁
し、96ウェルマイクロプレートに１ウェル当たり４×10
4個の細胞が含まれるように分注した。翌日、HAT培地
（0.1mMヒポキサンチン、16μＭチミジン及び0.4μＭア
ミノプテリン添加15％FCS/RDF培地）にウアバイン10μ
Ｍを添加したHAT・ウアバイン培地に交換し、37℃、５
％CO2の条件下で培養した。２−３日間隔でHAT・ウアバ
イン培地を交換した。約１週間後にヘテロハイブリドー
マの増殖が確認され、その中で最も増殖のよいクローン
を選択し、更に２週間HAT・ウアバイン培地で培養を続
けた。
し、96ウェルマイクロプレートに１ウェル当たり４×10
4個の細胞が含まれるように分注した。翌日、HAT培地
（0.1mMヒポキサンチン、16μＭチミジン及び0.4μＭア
ミノプテリン添加15％FCS/RDF培地）にウアバイン10μ
Ｍを添加したHAT・ウアバイン培地に交換し、37℃、５
％CO2の条件下で培養した。２−３日間隔でHAT・ウアバ
イン培地を交換した。約１週間後にヘテロハイブリドー
マの増殖が確認され、その中で最も増殖のよいクローン
を選択し、更に２週間HAT・ウアバイン培地で培養を続
けた。
その後１週間15％FCSを含むRDF培地で培養した後、５
μg/mlの８−アザグアニンを加えた15％FCS含有RDF培地
で培養を始めた。８−アザグアニンの濃度を10、20、5
0、100μg/mlに順次高めた15％FCS含有RDF培地でそれぞ
れ１週間培養を行い、８−アザグアニン耐性ヘテロハイ
ブリドーマRFを樹立した。
μg/mlの８−アザグアニンを加えた15％FCS含有RDF培地
で培養を始めた。８−アザグアニンの濃度を10、20、5
0、100μg/mlに順次高めた15％FCS含有RDF培地でそれぞ
れ１週間培養を行い、８−アザグアニン耐性ヘテロハイ
ブリドーマRFを樹立した。
この樹立細胞を限界希釈法又は軟寒天法でクローニン
グを行い、最も増殖のよいクローンをRF−S1と命名し
た。
グを行い、最も増殖のよいクローンをRF−S1と命名し
た。
RF−S1をHAT培地で培養したところ約５日で死滅し、R
F−S1のHAT感受性が確認された。RF−S1のDNAを分離
し、ヒトDNAに特異的なalu遺伝子の存在を確かめたとこ
ろ、RF−S1のDNA中にヒトDNAが約10％含まれていること
が確認された。また、RF−S1は外見上マウスミエローマ
FOと同一であり、しかもマウスミエローマFO由来の性質
である10μＭのウアバインに耐性であることから、RF−
S1はヒト・マウスのヘテロハイブリドーマであることが
明らかとなった。また、RF−S1はヒト及びマウス免疫グ
ロブリンを分泌していないことも確認した。
F−S1のHAT感受性が確認された。RF−S1のDNAを分離
し、ヒトDNAに特異的なalu遺伝子の存在を確かめたとこ
ろ、RF−S1のDNA中にヒトDNAが約10％含まれていること
が確認された。また、RF−S1は外見上マウスミエローマ
FOと同一であり、しかもマウスミエローマFO由来の性質
である10μＭのウアバインに耐性であることから、RF−
S1はヒト・マウスのヘテロハイブリドーマであることが
明らかとなった。また、RF−S1はヒト及びマウス免疫グ
ロブリンを分泌していないことも確認した。
（２）融合効率の検討 ヒトリンパ球は、ヒト末梢血からフィコールバックを
用いた比重遠心法により分離し、RDF培地で２回洗浄
後、同じくRDF培地で洗浄したRF−S1と2:1の割合で混合
する。遠心後、細胞ペレットをよく分散し、1mlの50％
ポリエチレングリコールを１分間にわたって滴下した。
更に１分間37℃で反応後、５分間で10mlのRDF培地を加
えた。これを遠心した後、15％FCSを含むRDF培地に懸濁
し、96ウェルマイクロプレートに１ウェル当たり２×10
4個の親細胞が含まれるように分注した。翌日、HAT培地
に交換し37℃、５％CO2の条件下で培養した。２−３日
間隔でHAT培地を交換した。
用いた比重遠心法により分離し、RDF培地で２回洗浄
後、同じくRDF培地で洗浄したRF−S1と2:1の割合で混合
する。遠心後、細胞ペレットをよく分散し、1mlの50％
ポリエチレングリコールを１分間にわたって滴下した。
更に１分間37℃で反応後、５分間で10mlのRDF培地を加
えた。これを遠心した後、15％FCSを含むRDF培地に懸濁
し、96ウェルマイクロプレートに１ウェル当たり２×10
4個の親細胞が含まれるように分注した。翌日、HAT培地
に交換し37℃、５％CO2の条件下で培養した。２−３日
間隔でHAT培地を交換した。
以上の条件でハイブリドーマが増殖してきたウェルの
数を数え、融合効率を計算した。結果を第１表に示し
た。この融合効率は、マウスのモノクローナル抗体を作
製する際のマウス親細胞の融合効率に匹敵する。
数を数え、融合効率を計算した。結果を第１表に示し
た。この融合効率は、マウスのモノクローナル抗体を作
製する際のマウス親細胞の融合効率に匹敵する。
（３）RF−S1の培養上清中の抗体濃度測定 RF−S1を15％FCSを含むRDF培地中で培養し、培養上清
中の抗体濃度を測定した。測定は酵素免疫測定法（EIA
法）により行なった。この結果を第２表に示す。
中の抗体濃度を測定した。測定は酵素免疫測定法（EIA
法）により行なった。この結果を第２表に示す。
第２表に示されるように、ヒトIgG、ヒトIgM、マウス
IgG、マウスIgM及びヒトカッパ鎖、ヒトラムダ鎖ともに
測定限界以下であり、RF−S1は自身では抗体を産生しな
いことが明らかとなった。
IgG、マウスIgM及びヒトカッパ鎖、ヒトラムダ鎖ともに
測定限界以下であり、RF−S1は自身では抗体を産生しな
いことが明らかとなった。
（４）RF−S1を用いて作製したハイブリドーマの抗体産
生の安定性 前記（２）における第１表の実験６で得られたハイブ
リドーマG6を15％FCSを含むRDF培地で培養し、ハイブリ
ドーマG6の抗体産生の安定性を検討した。すなわち、ハ
イブリドーマG6を、０箇月、４箇月、７箇月培養した
後、１×105個/mlの密度で培養を開始し、５日目の培養
上清中に含まれるIgG濃度を測定した。この結果を第３
表に示す。
生の安定性 前記（２）における第１表の実験６で得られたハイブ
リドーマG6を15％FCSを含むRDF培地で培養し、ハイブリ
ドーマG6の抗体産生の安定性を検討した。すなわち、ハ
イブリドーマG6を、０箇月、４箇月、７箇月培養した
後、１×105個/mlの密度で培養を開始し、５日目の培養
上清中に含まれるIgG濃度を測定した。この結果を第３
表に示す。
第３表から明らかなように、７箇月培養した後でも抗
体産生量はほとんど変化なく安定していることが確認さ
れた。
体産生量はほとんど変化なく安定していることが確認さ
れた。
（５）RF−S1を用いて作製したハイブリドーマのクロー
ニング効率 前記（２）の実験で得られた各種ハイブリドーマを用
いてクローニング効率を測定した。すなわち、15％FCS
を含むRDF培地にハイブリドーマを懸濁し、96ウェルプ
レートに１ウェル当たり10個、３個、１個、0.3個の割
合で細胞をまき込み、２週間後に細胞が増殖してきたウ
ェル数を数えた。この結果を第４表に示す。
ニング効率 前記（２）の実験で得られた各種ハイブリドーマを用
いてクローニング効率を測定した。すなわち、15％FCS
を含むRDF培地にハイブリドーマを懸濁し、96ウェルプ
レートに１ウェル当たり10個、３個、１個、0.3個の割
合で細胞をまき込み、２週間後に細胞が増殖してきたウ
ェル数を数えた。この結果を第４表に示す。
（表中のクローニング効率は、「細胞が増殖してきたウ
ェル数」／「細胞をまき込んだウェル数」を表わしてい
る。） このように、第４表に示されるクローニング効率は、
マウスのハイブリドーマの場合に匹敵するものである。
ェル数」／「細胞をまき込んだウェル数」を表わしてい
る。） このように、第４表に示されるクローニング効率は、
マウスのハイブリドーマの場合に匹敵するものである。
（６）無血清培地での培養 RF−S1及び前記（２）における第１表の実験６で得ら
れたハイブリドーマG6を用いて無血清培養を行った。無
血清培地としてはインシュリン５μg/ml、トランスフェ
リン35μg/ml、エタノールアミン20μＭ、セレニウム2.
5nM（以下ITESと記す）を添加したRDF培地を用いた。そ
れぞれの細胞を、１×105個/mlの密度でITES・RDF培地
に懸濁し、35mmのディッシュで培養した。そして、24時
間経過する毎に、RF−S1については細胞密度、ハイブリ
ドーマG6については細胞密度とIgGタイプの抗体産生量
を測定した。なお、抗体産生量は酵素免疫測定法（EIA
法）により測定した。この結果を第１図に示す。図中、
折れ線グラフ−・−はRF−S1の細胞密度を表わし、折れ
線グラフ−ｏ−はハイブリドーマG6の細胞密度を表わ
し、棒線グラフはIgG濃度を表している。
れたハイブリドーマG6を用いて無血清培養を行った。無
血清培地としてはインシュリン５μg/ml、トランスフェ
リン35μg/ml、エタノールアミン20μＭ、セレニウム2.
5nM（以下ITESと記す）を添加したRDF培地を用いた。そ
れぞれの細胞を、１×105個/mlの密度でITES・RDF培地
に懸濁し、35mmのディッシュで培養した。そして、24時
間経過する毎に、RF−S1については細胞密度、ハイブリ
ドーマG6については細胞密度とIgGタイプの抗体産生量
を測定した。なお、抗体産生量は酵素免疫測定法（EIA
法）により測定した。この結果を第１図に示す。図中、
折れ線グラフ−・−はRF−S1の細胞密度を表わし、折れ
線グラフ−ｏ−はハイブリドーマG6の細胞密度を表わ
し、棒線グラフはIgG濃度を表している。
このように、RF−SI及びハイブリドーマG6ともに無血
清培地中で充分に増殖し、抗体産生量も多いことが明ら
かとなった。
清培地中で充分に増殖し、抗体産生量も多いことが明ら
かとなった。
第１図は（ヒト・マウス）ヘテロハイブリドーマRF−S1
と、このRF−S1を用いて作製したハイブリドーマG6を、
無血清培地で培養したときの培養時間と細胞密度との関
係、並びにハイブリドーマG6の培養時間と抗体産生量と
の関係を表わしている。
と、このRF−S1を用いて作製したハイブリドーマG6を、
無血清培地で培養したときの培養時間と細胞密度との関
係、並びにハイブリドーマG6の培養時間と抗体産生量と
の関係を表わしている。
Claims (1)
- 【請求項１】ヒトミエローマ細胞株（RPMI8226）とマウ
スミエローマ細胞株（FO）とを細胞融合させた後、８−
アザグアニン耐性化し、更にクローニングを繰り返して
得られ、以下の性質を有することを特徴とするハイブリ
ドーマ。 a.ヒトリンパ球との融合効率が、1.26（個/105リンパ
球）以上である。 b.自身では抗体を産生しない。 c.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマは抗
体産生量、特にIgG抗体産生量が４箇月培養した後でも
実質的に維持される。 d.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマを１
×105/mlの密度で培養を開始したとき、５日目の培養上
清中に含まれる抗体産生量が８μg/ml以上である。 e.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマは、
無血清培地中でも増殖し抗体を産生する。 f.ヒトリンパ球と融合して得られたハイブリドーマを、
48ウェルに10個／ウェルの細胞数でまき込んだときのク
ローニング効率が、42/48以上である。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1322118A JP3043023B2 (ja) | 1989-12-12 | 1989-12-12 | ハイブリドーマ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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