JPH06327485A - ゲンチアノースの製造方法 - Google Patents
ゲンチアノースの製造方法Info
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- JPH06327485A JPH06327485A JP14154593A JP14154593A JPH06327485A JP H06327485 A JPH06327485 A JP H06327485A JP 14154593 A JP14154593 A JP 14154593A JP 14154593 A JP14154593 A JP 14154593A JP H06327485 A JPH06327485 A JP H06327485A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ゲンチアノースを収率良く簡便に製造するこ
と。 【構成】 β−グルコシド結合を持つ多糖あるいはその
分解物とショ糖とを含有する溶液にβ−グルコシル転移
活性を有するフラボバクテリウム属に属する微生物ＳＫ
Ｐ４００１または当該微生物ＳＫＰ４００１由来の酵素
とを反応する。
と。 【構成】 β−グルコシド結合を持つ多糖あるいはその
分解物とショ糖とを含有する溶液にβ−グルコシル転移
活性を有するフラボバクテリウム属に属する微生物ＳＫ
Ｐ４００１または当該微生物ＳＫＰ４００１由来の酵素
とを反応する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ゲンチアノースを収率
よく、簡便に製造する方法に関するものである。
よく、簡便に製造する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ゲンチアノースは南部ヨーロッパ産のゲ
ンチアナなどのリンドウ科植物の根茎などに含まれる、
Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−
グルコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−フラクトフラ
ノシドという構造を持つ非還元三糖であり天然に少量存
在するのみであるが、ニトロソ尿素誘導体に合成して、
抗白血病剤、抗腫瘍剤として、医薬品としての用途を有
するものである（特公昭60-41078号公報）。しかし、従
来、原料となるゲンチアノースを得るためには、天然物
からの抽出あるいは、多段階の化学合成法によるしかな
く、前者は、夾雑物が多く、ゲンチアノースを単離する
事が困難である等の欠点があり、後者は、、反応工程が
複雑、多段階であり、ゲンチアノースの最終的収率が低
い等の欠点があった。
ンチアナなどのリンドウ科植物の根茎などに含まれる、
Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−
グルコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−フラクトフラ
ノシドという構造を持つ非還元三糖であり天然に少量存
在するのみであるが、ニトロソ尿素誘導体に合成して、
抗白血病剤、抗腫瘍剤として、医薬品としての用途を有
するものである（特公昭60-41078号公報）。しかし、従
来、原料となるゲンチアノースを得るためには、天然物
からの抽出あるいは、多段階の化学合成法によるしかな
く、前者は、夾雑物が多く、ゲンチアノースを単離する
事が困難である等の欠点があり、後者は、、反応工程が
複雑、多段階であり、ゲンチアノースの最終的収率が低
い等の欠点があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、上述した問題点を微生物学的手法により解決すべ
く、鋭意研究した結果、製造工程を大幅に簡略化し、そ
のことによってゲンチアノースの最終的収率を高めるこ
とができることを見いだし本発明を完成するに至った。
従って、本発明の目的はゲンチアノースを収率よく、簡
便に製造する方法を提供することにある。
は、上述した問題点を微生物学的手法により解決すべ
く、鋭意研究した結果、製造工程を大幅に簡略化し、そ
のことによってゲンチアノースの最終的収率を高めるこ
とができることを見いだし本発明を完成するに至った。
従って、本発明の目的はゲンチアノースを収率よく、簡
便に製造する方法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者の目的は、β−
グルコシド結合を持つ多糖あるいはその一部分解物とシ
ョ糖とを含有する溶液に、β−グルコシル転移活性を有
する特定の微生物またはその微生物由来の酵素を反応さ
せることにより達成される。
グルコシド結合を持つ多糖あるいはその一部分解物とシ
ョ糖とを含有する溶液に、β−グルコシル転移活性を有
する特定の微生物またはその微生物由来の酵素を反応さ
せることにより達成される。
【０００５】以下に発明の詳細を説明する。本発明にお
いて用いられるβ−グルコシド結合を持つ多糖とは、基
本的には、β−グルコシル転移反応が進行するものであ
れば特に限定されるものではなく、入手しやすく、低価
格などの点から、実用的なパキマン、カードラン、ラミ
ナリンが好ましい。β−グルコシド結合を持つ多糖の分
解物は、上記の糖などを、それぞれの分解酵素で適当に
分解し、オリゴ糖にしたものや、少糖類にしたもののい
ずれを用いても良い。またショ糖については、精製度は
特に問題でなく、工業用のものでも十分に利用できる。
いて用いられるβ−グルコシド結合を持つ多糖とは、基
本的には、β−グルコシル転移反応が進行するものであ
れば特に限定されるものではなく、入手しやすく、低価
格などの点から、実用的なパキマン、カードラン、ラミ
ナリンが好ましい。β−グルコシド結合を持つ多糖の分
解物は、上記の糖などを、それぞれの分解酵素で適当に
分解し、オリゴ糖にしたものや、少糖類にしたもののい
ずれを用いても良い。またショ糖については、精製度は
特に問題でなく、工業用のものでも十分に利用できる。
【０００６】本発明で使用する微生物は、徳島県小松島
市で採集された土壌より得られたものであり、単一の炭
素源としてラミナリンを含む寒天培地に生育したものの
中から選択されたものである。
市で採集された土壌より得られたものであり、単一の炭
素源としてラミナリンを含む寒天培地に生育したものの
中から選択されたものである。
【０００７】なお、本発明に使用するこの微生物の菌学
的性質は以下の通りである。 Ａ．形態学的特徴 細胞の形及び大きさ：桿菌、大きさは 0.5μｍ× 1.0〜
3.0 μｍ 細胞の多形成：なし 運動性：なし 胞子形成能：なし グラム染色性：陰性 抗酸性：なし
的性質は以下の通りである。 Ａ．形態学的特徴 細胞の形及び大きさ：桿菌、大きさは 0.5μｍ× 1.0〜
3.0 μｍ 細胞の多形成：なし 運動性：なし 胞子形成能：なし グラム染色性：陰性 抗酸性：なし
【０００８】Ｂ．培養学的性質 次の各培地における生育状況 肉汁寒天培地：生育良。コロニーの色は培養初期は淡黄
色であるが、日数の経過にともなって、深黄色になる。
コロニーの形は、完全な円形、光沢があり盛り上がって
いて、粘張性がある。普通寒天培地上で２日間培養後の
コロニーの直径は２〜３ミリメートル。果実様芳香を発
する。 肉汁斜面培地：生育程度は普通。黄色で透明がかってい
て粘張性がある。湿った感じで光沢がある。 肉汁液体培地：生育程度普通から良。濁り、沈殿あり。
不完全なリング形成。 肉汁ゼラチン穿刺培養：20℃にて２日後液化開始。層状
液化。 リトマスミルク：酸により凝固
色であるが、日数の経過にともなって、深黄色になる。
コロニーの形は、完全な円形、光沢があり盛り上がって
いて、粘張性がある。普通寒天培地上で２日間培養後の
コロニーの直径は２〜３ミリメートル。果実様芳香を発
する。 肉汁斜面培地：生育程度は普通。黄色で透明がかってい
て粘張性がある。湿った感じで光沢がある。 肉汁液体培地：生育程度普通から良。濁り、沈殿あり。
不完全なリング形成。 肉汁ゼラチン穿刺培養：20℃にて２日後液化開始。層状
液化。 リトマスミルク：酸により凝固
【０００９】Ｃ．生理学的性質 硝酸塩の還元：− 脱窒反応：− ＭＲテスト：− ＶＰテスト：− インドールの生成：＋ 硫化水素の生成：± 澱粉の加水分解：＋ クエン酸の利用：クリステンセン培地には少し生育する
がコーザーの培地には生育しない。 無機窒素の利用：アンモニウム塩も硝酸塩もほとんど利
用しない。 色素の生成：非水溶性の黄色の色素を生成する。 ウレアーゼ：＋ オキシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲：ｐＨ5.0 〜ｐＨ9.0 で生育し、４℃〜40℃
で生育する。 酸素に対する態度：通性嫌気性 Ｏ−Ｆテスト* ：発酵的（パラフィン封入下では酸化反
応が非常に遅い。） * ＯＦテストの嫌気条件は、パラフィンでスラントを封
入して行った。
がコーザーの培地には生育しない。 無機窒素の利用：アンモニウム塩も硝酸塩もほとんど利
用しない。 色素の生成：非水溶性の黄色の色素を生成する。 ウレアーゼ：＋ オキシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲：ｐＨ5.0 〜ｐＨ9.0 で生育し、４℃〜40℃
で生育する。 酸素に対する態度：通性嫌気性 Ｏ−Ｆテスト* ：発酵的（パラフィン封入下では酸化反
応が非常に遅い。） * ＯＦテストの嫌気条件は、パラフィンでスラントを封
入して行った。
【００１０】Ｄ．その他の生理学的性質 エスクリンの分解：＋ マロン酸の利用：− アルギニンの分解：− リジンの脱炭酸反応：− オルニチンの脱炭酸反応：− フェニルアラニンの脱アミノ反応：− β−ガラクトシダーゼ：＋ 塩化ナトリウムの耐性：塩化ナトリウム濃度２％までは
生育する。 マッコンキー培地での生育：− リゾチーム耐性：＋ レシチナーゼ（Egg-york反応）：＋ カゼインの分解：＋ チロシンの分解：＋ チロシン培地での色素の生成：＋ ジオキシアセトンの生成：＋ グルコン酸の酸化：− セルロースの分解：− 溶血性（羊血寒天）：＋（７日目に溶血する） ツイーン80の分解：＋
生育する。 マッコンキー培地での生育：− リゾチーム耐性：＋ レシチナーゼ（Egg-york反応）：＋ カゼインの分解：＋ チロシンの分解：＋ チロシン培地での色素の生成：＋ ジオキシアセトンの生成：＋ グルコン酸の酸化：− セルロースの分解：− 溶血性（羊血寒天）：＋（７日目に溶血する） ツイーン80の分解：＋
【００１１】以上の菌学的性質に基づき、本発明に使用
する微生物を、バージェイズ・マニュアル・オブ・シス
テマチック・バクテリオロジー第２巻（Bergey's Manua
l ofsystematic Bacteriology Volume 2)の記載及びそ
の他の研究（岐阜大医学部記要，Vol.38,P380(1990) 、
Microbiol. Immunol.,Vol.34,P73(1990)、Ann. Rev.Mic
robiol., Vol.37,P233(1983) 、J. Gen. Appl. micro-b
iol.,Vol.27,P57(1981)）の記載と比較したところ、フ
ラボバクテリウム属に属する細菌であり、フラボバクテ
リウム・インドロゲネスに近い種であると推定される
が、糖の資化性、ウレアーゼ、β−ガラクトシダーゼの
産生及びマロン酸の利用等で違いがあった。また、イン
ドロゲネスは臨床からの分離菌であるのに対し、本発明
で用いる菌は土壌からの分離菌である。以上のような生
育環境の大幅な違い、生理学的性質の違いから、インド
ロゲネスと本菌は類縁ではあるが、同一種ではないと考
えられた。そこで、本菌をフラボバクテリウム・エスピ
ーＳＫＰ４００１と命名し、平成５年３月22日「微工研
菌寄１３５３７号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５３７）」とし
て寄託されている。
する微生物を、バージェイズ・マニュアル・オブ・シス
テマチック・バクテリオロジー第２巻（Bergey's Manua
l ofsystematic Bacteriology Volume 2)の記載及びそ
の他の研究（岐阜大医学部記要，Vol.38,P380(1990) 、
Microbiol. Immunol.,Vol.34,P73(1990)、Ann. Rev.Mic
robiol., Vol.37,P233(1983) 、J. Gen. Appl. micro-b
iol.,Vol.27,P57(1981)）の記載と比較したところ、フ
ラボバクテリウム属に属する細菌であり、フラボバクテ
リウム・インドロゲネスに近い種であると推定される
が、糖の資化性、ウレアーゼ、β−ガラクトシダーゼの
産生及びマロン酸の利用等で違いがあった。また、イン
ドロゲネスは臨床からの分離菌であるのに対し、本発明
で用いる菌は土壌からの分離菌である。以上のような生
育環境の大幅な違い、生理学的性質の違いから、インド
ロゲネスと本菌は類縁ではあるが、同一種ではないと考
えられた。そこで、本菌をフラボバクテリウム・エスピ
ーＳＫＰ４００１と命名し、平成５年３月22日「微工研
菌寄１３５３７号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５３７）」とし
て寄託されている。
【００１２】本発明の実施に際しては、上記した微生物
の通気攪拌培養により得られた菌体培養液を遠心分離し
て培養上清液を除いた菌体を使用するか、あるいは菌体
から調整した粗酵素液、その粗酵素を各種カラムクロマ
トグラフィーにより精製し、比活性を高めたもの等を使
用することができる。
の通気攪拌培養により得られた菌体培養液を遠心分離し
て培養上清液を除いた菌体を使用するか、あるいは菌体
から調整した粗酵素液、その粗酵素を各種カラムクロマ
トグラフィーにより精製し、比活性を高めたもの等を使
用することができる。
【００１３】また、本発明に使用する酵素としては、シ
ョ糖にグルコースをβ−１、６結合させるものであれば
自由に使用することができるが、中でもフラボバクテリ
ウム属に属する細菌由来のβ−グルコシル糖転移活性を
有する酵素を使用することができる。
ョ糖にグルコースをβ−１、６結合させるものであれば
自由に使用することができるが、中でもフラボバクテリ
ウム属に属する細菌由来のβ−グルコシル糖転移活性を
有する酵素を使用することができる。
【００１４】これらの酵素は、菌体膜結合あるいは菌体
内酵素であるので、超音波破砕、フレンチプレス処理、
細菌壁溶解酵素処理等公知の方法により菌体を破砕し、
遠心分離によって菌体残さを除いた後、さらに各種クロ
マトグラフィー、例えばDEAE−セルロースカラム、ゲル
濾過カラム等の公知の方法を使用して精製すると比活性
の高い酵素が得られる。
内酵素であるので、超音波破砕、フレンチプレス処理、
細菌壁溶解酵素処理等公知の方法により菌体を破砕し、
遠心分離によって菌体残さを除いた後、さらに各種クロ
マトグラフィー、例えばDEAE−セルロースカラム、ゲル
濾過カラム等の公知の方法を使用して精製すると比活性
の高い酵素が得られる。
【００１５】本発明で使用する微生物あるいはその微生
物由来の酵素は、ゲンチアノースの生産のみでなく、そ
のβ−グルコシル転移活性を用いて、他の二糖類、例え
ばマルトース、セロビオースや、少糖類、オリゴ糖類、
糖類類似物質例えばアスコルビン酸、リボフラビン、ま
たは配糖体例えばステビオサイド等に、β−グルコシル
転移することもできる。
物由来の酵素は、ゲンチアノースの生産のみでなく、そ
のβ−グルコシル転移活性を用いて、他の二糖類、例え
ばマルトース、セロビオースや、少糖類、オリゴ糖類、
糖類類似物質例えばアスコルビン酸、リボフラビン、ま
たは配糖体例えばステビオサイド等に、β−グルコシル
転移することもできる。
【００１６】次に本発明の転移反応条件について説明す
る。本発明における転移反応に使用するショ糖とβ−グ
ルコシル結合を持つ多糖または、その分解物は、まず水
に溶解させ、その濃度をショ糖は 0.1〜15W/V%、β−グ
ルコシル結合を持つ多糖または分解物は、 0.1〜50W/V%
程度として使用する。転移反応において、β−グルコシ
ル結合を持つ多糖とその分解物の挙動は同じであるの
で、どちらを用いても同様に目的は達成しうるが、グル
コシル結合を持つ多糖の中には、水溶性の低いものがあ
るので、その場合は、水溶性の高い分解物を使用し、反
応操作を容易にすることができる。
る。本発明における転移反応に使用するショ糖とβ−グ
ルコシル結合を持つ多糖または、その分解物は、まず水
に溶解させ、その濃度をショ糖は 0.1〜15W/V%、β−グ
ルコシル結合を持つ多糖または分解物は、 0.1〜50W/V%
程度として使用する。転移反応において、β−グルコシ
ル結合を持つ多糖とその分解物の挙動は同じであるの
で、どちらを用いても同様に目的は達成しうるが、グル
コシル結合を持つ多糖の中には、水溶性の低いものがあ
るので、その場合は、水溶性の高い分解物を使用し、反
応操作を容易にすることができる。
【００１７】転移反応における、転移酵素の添加量は、
菌体を用いる場合には、基質１ｇに対して、培養液とし
て５ml以上、好ましくは20〜50ml、菌由来の酵素を用い
る場合には、基質に対して、タンパク質量として 0.5％
以上、好ましくは 2.0〜5.0％である。
菌体を用いる場合には、基質１ｇに対して、培養液とし
て５ml以上、好ましくは20〜50ml、菌由来の酵素を用い
る場合には、基質に対して、タンパク質量として 0.5％
以上、好ましくは 2.0〜5.0％である。
【００１８】転移反応における反応液のｐＨと温度は、
β−グルコシル転移活性を有する酵素が反応してゲンチ
アノースを生成させ得る条件であれば良いが、そのｐＨ
としては通常ｐＨ４〜10、好ましくはｐＨ５〜８、反応
温度としては20〜85℃、好ましくは30〜75℃が適当であ
る。反応時間は10分以上であれば良く、好ましくは２〜
48時間である。
β−グルコシル転移活性を有する酵素が反応してゲンチ
アノースを生成させ得る条件であれば良いが、そのｐＨ
としては通常ｐＨ４〜10、好ましくはｐＨ５〜８、反応
温度としては20〜85℃、好ましくは30〜75℃が適当であ
る。反応時間は10分以上であれば良く、好ましくは２〜
48時間である。
【００１９】なお、転移酵素が最適に反応する条件下で
は、使用したショ糖のうち、40％がゲンチアノースに変
換していた。
は、使用したショ糖のうち、40％がゲンチアノースに変
換していた。
【００２０】また転移反応方式としては、バッチ方式の
他、公知の方法により菌体、もしくはその酵素を固定化
して連続変換反応による方法等を使用することができ
る。
他、公知の方法により菌体、もしくはその酵素を固定化
して連続変換反応による方法等を使用することができ
る。
【００２１】以上の転移反応条件により得たゲンチアノ
ース生成溶液は、公知の方法により、各種のカラムクロ
マトグラフィーを組み合わせて、ショ糖、残存したβ−
グルコシル糖化合物と分離することができる。
ース生成溶液は、公知の方法により、各種のカラムクロ
マトグラフィーを組み合わせて、ショ糖、残存したβ−
グルコシル糖化合物と分離することができる。
【００２２】
（１）菌体の調整 フラボバクテリウム・エスピーＳＫＰ４００１をラミナ
リン 0.5W/V%，ＫＨ2 ＰＯ4 0.5W/V%，（ＮＨ4 ）2 Ｓ
Ｏ4 0.3W/V%，ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ0.05W/V%，ポリペ
プトン 0.1W/V%，メタルソルーション（ＦｅＳＯ4 ・７
Ｈ2 Ｏ0.01ｇ，ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ 0.01ｇ，ＺｎＳ
Ｏ4 ・７Ｈ2 Ｏ 0.01ｇを脱イオン水に溶解し、 100ml
にフィルアップした溶液） 0.5V/V%からなる培地１リッ
トルに植菌し、30℃で48時間通気攪拌培養した。得られ
た菌体培養液を遠心分離し、培養上清を除いた菌体を使
用菌体とした。
リン 0.5W/V%，ＫＨ2 ＰＯ4 0.5W/V%，（ＮＨ4 ）2 Ｓ
Ｏ4 0.3W/V%，ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ0.05W/V%，ポリペ
プトン 0.1W/V%，メタルソルーション（ＦｅＳＯ4 ・７
Ｈ2 Ｏ0.01ｇ，ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ 0.01ｇ，ＺｎＳ
Ｏ4 ・７Ｈ2 Ｏ 0.01ｇを脱イオン水に溶解し、 100ml
にフィルアップした溶液） 0.5V/V%からなる培地１リッ
トルに植菌し、30℃で48時間通気攪拌培養した。得られ
た菌体培養液を遠心分離し、培養上清を除いた菌体を使
用菌体とした。
【００２３】（２）転移反応 ショ糖（市販グラニュー糖、純度98％）５ｇ、ラミナリ
ン20ｇ、先に調整した菌体を50mMリン酸バッファー（ｐ
Ｈ 7.0）100ml に溶解し、70℃で24時間反応後、温度95
℃で10分間加熱し酵素を失活させた。
ン20ｇ、先に調整した菌体を50mMリン酸バッファー（ｐ
Ｈ 7.0）100ml に溶解し、70℃で24時間反応後、温度95
℃で10分間加熱し酵素を失活させた。
【００２４】（３）ゲンチアノースの分離 得られた反応液をゲル濾過カラムクロマトグラフィー
（ファルマシア（株）製Sephadex ＬＨ−２０）に供
し、水で溶出し、ラミナリンとショ糖・反応生成物混合
液を分離した。ショ糖・反応生成物混合液は、減圧濃縮
し、さらにシリカゲル（ＭＥＲＣＫ製シリカゲル６０）
カラムクロマトグラフィー（溶媒；クロロホルム：メタ
ノール：水＝６：４：１）に供し、反応生成物 1.7ｇを
得た。
（ファルマシア（株）製Sephadex ＬＨ−２０）に供
し、水で溶出し、ラミナリンとショ糖・反応生成物混合
液を分離した。ショ糖・反応生成物混合液は、減圧濃縮
し、さらにシリカゲル（ＭＥＲＣＫ製シリカゲル６０）
カラムクロマトグラフィー（溶媒；クロロホルム：メタ
ノール：水＝６：４：１）に供し、反応生成物 1.7ｇを
得た。
【００２５】（４）ゲンチアノースの確認 前記反応生成液を高速液体クロマトグラフィー（株式会
社島津製作所製ＬＣ−１０Ａ）にて以下の条件で測定し
たところ、酵素を失活させて反応させた対照と比較する
と、保持時間17分のところと29分のところに新しいピー
クを確認した。（図１及び図２） （ＨＰＬＣによる分析条件） カラム：順相シリカゲル系カラム（東ソー（株）製 Ami
do−８０） 移動相：アセトニトリル：水＝70：30 流量： 1.0ml/min 温度：30℃ 検出：ＲＩ検出器
社島津製作所製ＬＣ−１０Ａ）にて以下の条件で測定し
たところ、酵素を失活させて反応させた対照と比較する
と、保持時間17分のところと29分のところに新しいピー
クを確認した。（図１及び図２） （ＨＰＬＣによる分析条件） カラム：順相シリカゲル系カラム（東ソー（株）製 Ami
do−８０） 移動相：アセトニトリル：水＝70：30 流量： 1.0ml/min 温度：30℃ 検出：ＲＩ検出器
【００２６】ついで、保持時間17分の生成物について、
起伝導核磁気共鳴装置（株式会社日本電子製ＧＸ−２７
０型）と、核磁気共鳴装置（株式会社日本電子製ＧＸ−
６８型）にて、以下の条件によりその構造の確認を行っ
たところ、ゲンチアノースであることが判明した。（図
３及び図４） （Ｈ−ＮＭＲによる分析条件） 測定溶媒：重水 標準物質：Ｔｓｐ−ｄ６ 270KHz ，20℃ （Ｃ−ＮＭＲによる分析条件） 測定溶媒：重水 標準物質：Ｔｓｐ−ｄ６ 68KHz ，20℃
起伝導核磁気共鳴装置（株式会社日本電子製ＧＸ−２７
０型）と、核磁気共鳴装置（株式会社日本電子製ＧＸ−
６８型）にて、以下の条件によりその構造の確認を行っ
たところ、ゲンチアノースであることが判明した。（図
３及び図４） （Ｈ−ＮＭＲによる分析条件） 測定溶媒：重水 標準物質：Ｔｓｐ−ｄ６ 270KHz ，20℃ （Ｃ−ＮＭＲによる分析条件） 測定溶媒：重水 標準物質：Ｔｓｐ−ｄ６ 68KHz ，20℃
【００２７】以上のＨ−ＮＭＲ，Ｃ−ＮＭＲによる解析
結果から、本発明により得られた生成物はゲンチアノー
スであることを確認した。なお、もう一方の保持時間29
分のピークは、ゲンチアノースにグルコースが一個付加
した物質であると推定される。
結果から、本発明により得られた生成物はゲンチアノー
スであることを確認した。なお、もう一方の保持時間29
分のピークは、ゲンチアノースにグルコースが一個付加
した物質であると推定される。
【００２８】
【発明の効果】本発明によれば、ゲンチアノースを、従
来の天然からの抽出、あるいは化学合成法によって製造
していたのに比べて、収率よく、簡便に生産でき、工業
的に優れた方法である。
来の天然からの抽出、あるいは化学合成法によって製造
していたのに比べて、収率よく、簡便に生産でき、工業
的に優れた方法である。
【図１】実施例で得られた反応生成物のクロマトグラフ
ィーを示す図である。
ィーを示す図である。
【図２】実施例の転移反応のブランクのクロマトグラフ
ィーを示す図である。
ィーを示す図である。
【図３】実施例で得られた反応生成物のＨ−ＮＭＲスペ
クトル線図である。
クトル線図である。
【図４】実施例で得られた反応生成物のＣ−ＮＭＲのス
ペクトル線図である。
ペクトル線図である。
Claims (3)
- 【請求項１】 β−グルコシド結合を持つ多糖あるいは
その分解物とショ糖とを含有する溶液にβ−グルコシル
転移活性を有するフラボバクテリウム属に属する微生物
ＳＫＰ４００１または当該微生物ＳＫＰ４００１由来の
酵素とを反応することを特徴とするゲンチアノースの製
造方法。 - 【請求項２】 β−グルコシド結合を持つ多糖あるいは
その分解物とフラボバクテリウム属に属する微生物ＳＫ
Ｐ４００１または当該微生物ＳＫＰ４００１由来の酵素
とを用いて、二糖類、少糖類、オリゴ糖類、糖類類似物
質、配糖体等の糖類にβ−グルコシル転移する方法。 - 【請求項３】 糖類がショ糖である請求項２記載のβ−
グルコシル転移する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5141545A JP2901458B2 (ja) | 1993-05-20 | 1993-05-20 | ゲンチアノースの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5141545A JP2901458B2 (ja) | 1993-05-20 | 1993-05-20 | ゲンチアノースの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06327485A true JPH06327485A (ja) | 1994-11-29 |
| JP2901458B2 JP2901458B2 (ja) | 1999-06-07 |
Family
ID=15294465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5141545A Expired - Lifetime JP2901458B2 (ja) | 1993-05-20 | 1993-05-20 | ゲンチアノースの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2901458B2 (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62155096A (ja) * | 1985-12-27 | 1987-07-10 | Dainippon Ink & Chem Inc | β−１，３−グリコシルステビオ−ル配糖体の製造法 |
-
1993
- 1993-05-20 JP JP5141545A patent/JP2901458B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62155096A (ja) * | 1985-12-27 | 1987-07-10 | Dainippon Ink & Chem Inc | β−１，３−グリコシルステビオ−ル配糖体の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2901458B2 (ja) | 1999-06-07 |
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