JPH06293735A

JPH06293735A - Ｍｊ２０２−７２ｆ３物質の新規エステル

Info

Publication number: JPH06293735A
Application number: JP10492193A
Authority: JP
Inventors: Masaaki Ishizuka; 雅章石塚; Mitsuhiro Ueno; 充博上野; Hironobu Iinuma; 寛信飯沼; Kenji Maeda; 謙二前田; Tomio Takeuchi; 富雄竹内
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1993-04-08
Filing date: 1993-04-08
Publication date: 1994-10-21
Anticipated expiration: 2018-03-17
Also published as: JP3386842B2

Abstract

(57)【要約】【目的】抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′、−
Ｂ′および−Ｃ′の免疫抑制活性と高い水溶性をもつ誘
導体を収得する。【構成】一般式（Ｉ）（式中、Ｒは硫酸基（−ＳＯ₃Ｈ）またはその薬理学的
に許容される塩を示し、また、ＸはＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ａ′ではヒドロキシル基を、またＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ｂ′ではメトキシ基を、またＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｃ′では水素原子を示す）で表されるＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ａ′、Ｂ′、およびＣ′の新規エステル、ま
たはその製薬学的に許容される塩。これらの新規な抗生
物質硫酸エステルの各々は、免疫抑制活性を有し、免疫
抑制剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫抑制活性、抗菌活性
および抗腫瘍活性を有するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′
または−Ｂ′または−Ｃ′の新規硫酸エステルに関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂ、−Ｃ
物質および−Ａ′、−Ｂ′、−Ｃ′物質は免疫抑制作
用、抗菌活性および抗腫瘍活性を有する化合物として、
特願平３−１８７４０３号明細書（平成４年６月２３日
出願）に記載される。

【０００３】

【発明が解決しようとする問題点】上記の特許願明細書
に記載のＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂ、−Ｃ物質お
よび−Ａ′、−Ｂ′、−Ｃ′物質は水に対して極めて難
溶性であり、かつ経口吸収され難い性状であった。本発
明者らは、前記物質から水に対して易溶となり、かつ経
口吸収されやすい性状を有し、すなわち、注射剤として
の調製が容易となり、さらに経口吸収効率を向上させた
新規な誘導体を合成することを目的として研究を行っ
た。

【０００４】

【問題点を解決するための手段】そこで本発明者らは水
溶性を高めたＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂ、−Ｃ、
−Ａ′、−Ｂ′及び−Ｃ′の各物質の誘導体につき種々
検討した。その結果、一般式（Ｉ）（式中、Ｒは硫酸基（−ＳＯ₃Ｈ）またはその製薬学的
に許容される塩を示し、また、ＸはＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ａ′ではヒドロキシル基を示し、ＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ｂ′ではメトキシ基を示し、またＭＪ２０２−７
２Ｆ３−Ｃ′では水素原子を示す）で表されるＭＪ２０
２−７２Ｆ３−Ａ′、−Ｂ′および−Ｃ′の新規エステ
ルまたはその製薬学的に許容される塩を合成することに
成功し、これらが高い水溶性をもつこと、および経口吸
収効率が向上すること、並びに免疫抑制活性を有するこ
とを見出し、本発明を完成した。

【０００５】従って、本発明によれば、上記の一般式
（Ｉ）で表されるＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′、−Ｂ′
および−Ｃ′の新規エステルまたはそれの製薬学的に許
容される塩が提供される。

【０００６】本発明による一般式（Ｉ）の化合物を製造
するには、例えば次のような方法を行うのがよい。すな
わち、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′または−Ｂ′または
−Ｃ′化合物に、非プロトン性溶媒中で硫酸化剤を作用
させる。硫酸化剤の量はＭＪ２０２−７２Ｆ３化合物に
対し、通常は等モル以上使用すればよい。硫酸化剤とし
ては無水硫酸、ピリジン複合塩、クロルスルホン酸など
があげられる。硫酸化の溶媒としてはＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド、ピリジンなどが好ましい。

【０００７】反応中に加える中和剤として、ピリジン、
トリエチルアミンなどの有機塩基、酸化カルシウム、炭
酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどの無機塩基を使用
することができる。反応温度は通常使用する溶媒の沸点
以下で行われるが、好ましくは−２０℃〜室温程度で行
われる。

【０００８】硫酸化された一般式（Ｉ）の化合物は、こ
れを含む反応液を水と酢酸エチルあるいはジクロロメタ
ンなどで抽出した後、目的化合物の含有層を濃縮する。
得られた濃縮残査は必要に応じてカラムクロマトグラフ
ィー等にて精製後、常法により単離することにより本発
明による一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

【０００９】本発明による一般式（Ｉ）の硫酸エステル
誘導体は常法により金属例えばナトリウム、カリウムの
如きアルカリ金属、あるいは有機塩基と塩を形成させる
ことができる。

【００１０】本発明によって得られる一般式（Ｉ）の化
合物、特にそれのナトリウム塩の水に対する溶解性は、
対応する硫酸エステル型でない化合物に比べ大巾に上昇
し、水に対し易溶となった。

【００１１】次に、一般式（Ｉ）で表される本発明の化
合物のナトリウム塩がマウス遅延型過敏症に対する抑制
効果を示し、従って免疫抑制活性を有することを次の試
験例により示す。

【００１２】試験例１ＣＤＦ₁マウスに羊赤血球（１０⁵個／マウス）を静注
して免疫後、４日目に羊赤血球（１０⁸個／マウス）を
足蹠に皮下注射し遅延型過敏症を惹起した。供試化合物
は免疫後０〜４日目まで経口投与し、感作５日目にマウ
ス足蹠の厚さを測定することにより抑制効果を判定し
た。この抑制効果は次式で算出される阻害率（％）で評
価した。阻害率（％）＝１００−（Ｔ／Ｃ−１００）ただし、Ｔは供試化合物を投与した時の足蹠の厚さを表
し、Ｃは供試化合物無投与の時の足蹠の厚さを表す。

【００１３】

【表１】

【００１４】以下に実施例により本発明の一般式（Ｉ）
の化合物の製造例を具体的に説明する。

【００１５】実施例１ＭＪ２０２−７３Ｆ３−Ａ′物質３５０ｍｇを５ｍｌの
クロロホルムに溶解した溶液に、無水硫酸ピリジン複合
塩５２５ｍｇをＮ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド３ｍｌ
に溶解したものを添加し、室温にて２４時間攪拌し反応
させた。反応液中のクロロホルムを減圧下留去した後、
１０％クエン酸と酢酸エチルにて液液分配抽出を行っ
た。目的化合物を含む酢酸エチル層を飽和食塩水で洗滌
した後、無水硫酸ナトリウムで脱水処理し、減圧下濃縮
するとＴＬＣ上で単一なスポットとなるＭＪ２０２−７
２Ｆ３−Ａ′硫酸エステル４０４ｍｇ（収率９６％）が
得られた。

【００１６】以下、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′硫酸エ
ステルの物理化学的性状を示す。（１）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ 0.65 （展開溶媒：２−プロパノール／アンモニア
水／水＝９：１：２）Ｒｆ 0.15 （展開溶媒：クロロホルム／メタノール／ア
ンモニア水＝４０：１０：１）（２）呈色反応：バニリン硫酸に対して陽性（３）物質の色および性状：無色〜白色、固体（４）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₀Ｏ₈ＮＳＮａ（５）元素分析：Ｃ₂₉Ｈ₄₀Ｏ₈ＮＳＮａ・２Ｈ₂ＯとしてＣＨＯＮＳＮａ実測値 55.83 6.81 N.D. 1.94 5.06 N.D. 計算値 56.03 7.13 25.73 2.25 5.15 3.70 （N.D.は測定していないことを表す）。

【００１７】（６）分子量：５８５（７）負イオン高分解能ＦＡＢ(Fast Atom Bombardmen
t) マススペクトル：Ｃ₂₉Ｈ₄₀Ｏ₈ＮＳＮａ（（Ｍ−Ｎ
ａ）^-，ｍ／ｚ）として実測値 562.2471 計算値 562.2475 （８）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中に測定
した結果を示す。（９）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）： (10) ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：δ8.
0(1H,m), 6.0(2H,m),5.4〜5.6(4H,m), 5.0(1H,s),4.2(1
H,m),3.0(3H,m), 2.3〜2.6(3H,m), 2.0(2H,m),1.6〜1.8
(4H,m),1.4〜1.5(4H,m),1.5(3H,d), 0.9〜1.0(9H,m),0.
7(3H,d) 重クロロホルム中ＴＭＳ（０ｐｐｍ）を基準物質として
測定した。 (11) ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：δ21
2.1(s),204.4(s),169.3(s),136.4(d),134.1(d),130.7
(d),129.9(d),128.3(d),126.8(d),85.9(d),78.6(d),71.
0(s),54.1(s),47.2(t),46.0(d),44.4(d),43.8(d),42.4
(t),40.4(d),39.3(d),35.5(d),33.2(d),32.0(t),22.1
(t,q),19.5(q),17.3(q),17.1(q),9.9(q) 重クロロホルム中クロロホルム（７７．００ｐｐｍ）を
基準物質として測定した。 (12) 溶解性：水、メタノール、酢酸エチル、クロロホ
ルムに可溶、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶
である。

【００１８】実施例２ＭＪ２０２−７３Ｆ３−Ｂ′物質１０ｍｇを１ｍｌのク
ロロホルムに溶解した溶液に、無水硫酸ピリジン複合塩
１５ｍｇをＮ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド１ｍｌに溶
解したものを添加し、室温にて２０時間攪拌し反応させ
た。反応液中のクロロホルムを減圧下留去した後、１０
％クエン酸と酢酸エチルにて液液分配抽出を行った。目
的化合物を含む酢酸エチル層を飽和食塩水で洗滌した
後、無水硫酸ナトリウムで脱水処理し、減圧下濃縮する
とＴＬＣ上で単一なスポットとなるＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｂ′硫酸エステル６．６ｍｇが得られた。

【００１９】以下、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ′硫酸エ
ステルの物理化学的性状を示す。

【００２０】（１）薄層クロマトグラフィー（メルク社
製シリカゲル６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ 0.19 （展開溶媒：クロロホルム／メタノール／ア
ンモニア水＝４０：１０：１）（２）呈色反応：バニリン硫酸に対して陽性（３）物質の色および性状：無色〜白色、固体（４）分子式：Ｃ₃₀Ｈ₄₂Ｏ₈ＮＳＮａ（５）分子量：５９９

【００２１】（６）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マ
ススペクトル：ｍ／ｚ５７６（Ｍ−Ｎａ）^- （７）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中に測定
した結果を示す。（９）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）： (10) ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：δ5
3.0(q),85.9(d) 重クロロホルム中クロロホルム（７７．００ｐｐｍ）を
基準物質として測定した。 (11) 溶解性：水、メタノール、酢酸エチル、クロロホ
ルムに可溶、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶
である。

【００２２】実施例３ＭＪ２０２−７３Ｆ３−Ｃ′物質１２ｍｇを１ｍｌのク
ロロホルムに溶解した溶液に、無水硫酸ピリジン複合塩
１８ｍｇをＮ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド１ｍｌに溶
解したものを添加し、室温にて２０時間攪拌し反応させ
た。反応液中のクロロホルムを減圧下留去した後、１０
％クエン酸と酢酸エチルにて液液分配抽出を行った。目
的化合物を含む酢酸エチル層を飽和食塩水で洗滌した
後、無水硫酸ナトリウムで脱水処理し、減圧下濃縮する
とＴＬＣ上で単一なスポットとなるＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｃ′硫酸エステル７．９ｍｇが得られた。

【００２３】以下、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ′硫酸エ
ステルの物理化学的性状を示す。（１）薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル
６０Ｆ₂₅₄Ａｒｔ．５５５４使用）：Ｒｆ 0.27 （展開溶媒：クロロホルム／メタノール／ア
ンモニア水＝４０：１０：１）（２）呈色反応：バニリン硫酸に対して陽性（３）物質の色および性状：無色〜白色、固体（４）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₄₀Ｏ₇ＮＳＮａ（５）分子量：５６９

【００２４】（６）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マ
ススペクトル：ｍ／ｚ５４６（Ｍ−Ｎａ）^- （７）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中に測定
した結果を示す。（８）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：（９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）：δ3.
9(1H,d),3.7(1H,d) 重クロロホルム中ＴＭＳ（０ｐｐｍ）を基準物質として
測定した。 (10) ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）：δ5.
9(t),86.1(d) 重クロロホルム中クロロホルム（７７．００ｐｐｍ）を
基準物質として測定した。 (11) 溶解性：水、メタノール、酢酸エチル、クロロホ
ルムに可溶、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶
である。

【００２５】なお、本発明による一般式（Ｉ）の硫酸エ
ステル化合物を製造するのに原料として用いられるＭＪ
２０２−７２Ｆ３−Ａ′、−Ｂ′および−Ｃ′物質は、
それぞれに抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂ、
および−Ｃ物質を脱水閉環反応にかけることにより生成
される。

【００２６】抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂ
および−Ｃ物質は、次の方法、すなわちストレプトミセ
ス属に属するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、−Ｂおよび−
Ｃ物質生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ａ物質および／またはＢ物質および／
またはＣ物質を採取することを特徴とする免疫抑制活性
を有する新規な抗生物質、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ物
質、および／または−Ｂ物質および／または−Ｃ物質の
製造法により収得できる。

【００２７】上記の方法に用いるＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ａ、−Ｂおよび−Ｃ物質生産菌はストレプトミセス属
の菌株でＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａおよび／または−Ｂ
および／または−Ｃ物質の生産能を有するものであれば
良く、特に限定されない。使用できるＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ａ、−Ｂおよび−Ｃ物質生産菌の一例には平成２
年１月、山梨県大月市の土壌より分離された放線菌でＭ
Ｊ２０２−７２Ｆ３の菌株番号が付された菌株がある。

【００２８】以下、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株の菌学的性
状について述べる。１．形態ＭＪ２０２−７２Ｆ３株は、分枝した基生菌糸より比較
的長い気菌糸を伸長し、その先端は５〜６回転のらせん
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。気
菌糸の先端には５０個以上の胞子の連鎖を認め、胞子の
大きさは約０．５〜０．７×０．８〜１．２ミクロンで
あった。なお、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状を呈
する。

【００２９】２．各種培地における生育状態色の記載について〔〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（Container Corporation ofAmerica
の color harmony manual ）を用いた。

【００３０】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（３０℃培養）無色〜うす黄の発育上に、部分的に明るい灰〔2fe, Cov
ert Gray〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められな
い。（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（３０℃培
養）発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５、３０℃培養）うす黄〔2gc, Bamboo 〕の発育上に、白の気菌糸をうっ
すらと着生し、溶解性色素は認められない。（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、３
０℃培養）無色〜うす黄の発育上に、明るい灰〔3fe, Silver Gra
y〕の気菌糸をわずかに着生する。溶解性色素は認めら
れない。（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、３０℃培
養）うす黄〔2gc, Bamboo 〕の発育上に、白の気菌糸をうっ
すらと着生し、溶解性色素は認められない。

【００３１】（６）栄養寒天培地（３０℃培養）発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認めら
れない。（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、３０
℃培養）うす黄〔１1/2 ic, Lt Antique Gold 〕の発育上に、部
分的に明るい灰〔f,〜2fe, Covert Gray〕の気菌糸を着
生し、溶解性色素は認められない。（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、３０℃
培養）うす黄の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解
性色素は認められない。（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（３０℃培養）発育は無色〜うす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は
認められない。（10）スターチ寒天培地（３０℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。（11）リンゴ酸石灰寒天培地（３０℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。（12）セルロース（濾紙片添加合成液、３０℃培養）４０日間培養後も生育は認められない。（13）ゼラチン穿刺培養１５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はう
す黄、茶白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は認
められない。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２
７℃培養）の場合、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。

【００３２】（14）脱脂牛乳（３０℃および３７℃培養）３０℃培養で、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。３７℃培養の場合、発育は極め
て悪く、うす黄の発育がわずかに観察されるが、気菌糸
および溶解性色素は認められない。

【００３３】３．生理的性質（１）生育温度範囲グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース１．０
％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、リン酸二カリウム
０．０５％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）を用い、２
０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温
度で試験した結果、５０℃を除き、そのいずれの温度で
も発育したが、３７℃の生育は極めて悪い。なお、生育
至適温度は２７℃〜３０℃付近と思われる。

【００３４】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養）１５％単純ゼラチン培地およびグルコース・ペプトン・
ゼラチン培地のいずれの場合も２１日間の観察で液化性
は認められない。（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
およびスターチ寒天培地、いずれも３０℃培養）いずれの培地においても水解性は認められない。（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３０℃
および３７℃培養）３０℃培養では、培養後２１日目頃より凝固することな
くペプトン化が始まるが、その作用は極めて弱い。３７
℃培養の場合、生育は極めて悪く、それらの作用は観察
されない。

【００３５】（５）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培
地、ＩＳＰ−培地７；いずれも３０℃培養）いずれの培地でも陰性である。（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培
地、ＩＳＰ−培地９；３０℃培養） D-グルコース、イノシトールを利用して生育し、シュク
ロース、D-マンニトール、ラクトースは利用しない。D-
キシロース、D-フルクトースの利用の存否は判然とせ
ず、L-アラビノース、ラムノース、ラフィノースは、お
そらく利用しないと思われる。（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地、３
０℃培養）培養後７日目頃より、リンゴ酸石灰の溶解が認められ、
その作用は中等度である。（８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ＩＳＰ−培地８、３０℃培養）陰性である。（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、３０℃培
養）４０日間培養の観察では生育せず、分解は認められな
い。

【００３６】以上の性状を要約すると、ＭＪ２０２−７
２Ｆ３株の形態は、分枝した基生菌糸より５〜６回転の
らせん形成を有する気菌糸を伸長し、輪生枝および胞子
のうは認められない。気菌糸の先端には５０個以上の胞
子を連鎖し、胞子の表面はとげ状あるいはいぼ状であ
る。種々の培地で、発育は無色〜うす黄、気菌糸の着生
は悪いが、２〜３の培地では、明るい灰の気菌糸を部分
的に着生する。溶解性色素は認められない。生育至適温
度は２７℃〜３０℃付近である。メラニン様色素の生成
は陰性、スターチの水解性は認められず、蛋白分解力は
弱い。また、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノピメリ
ン酸はＬＬ−型であった。

【００３７】これらの性状より、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
株は、ストレプトミセス（Streptom yces）属に属すると
考えられる。ストレプトミセス属の既知菌種を検索する
と近縁の種として、ストレプトミセス・アルブルス（St
reptomyces albulus ，文献，International Journal
of Systematic Bacteriology，２２巻，２７１頁，１９
７２年；同誌，３０巻，３７１頁，１９８０年）および
ストレプトミセス・ナタレンシス（Streptomyces nata
lensis，文献，International Journal of Systematic
Bacteriology，２２巻，３２３頁，１９７２年）があげ
られた。現在、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株と上記２種の本
研究所保存菌株とを実地に比較検討中である。そこで現
時点では、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株をストレプトミセス
・エスピー（Streptomyces sp.）ＭＪ２０２−７２Ｆ３
とする。

【００３８】なお、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株を工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託申請し、平成３年１２月
２４日、ＦＥＲＭＰ−１２６７４として受託された。

【００３９】前記の抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ａ、ＢおよびＣ物質は、ストレプトミセス属に属するＭ
Ｊ２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣ生産菌を適当な培
地で培養することにより、好ましくは好気的条件下に培
養することにより、培地中に目的物質を産生、蓄積さ
せ、次いで培養物から目的物質を採取することにより製
造することができる。

【００４０】培地はＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、Ｂおよ
びＣ生産菌が利用しうる任意の栄養源を含有するもので
ありうる。具体的には、例えば、炭素源としてグルコー
ス、イノシトール、マルトースおよび油脂類などが使用
でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母エキス、
ポリペプトンおよびコーンスティープリカーなどの有機
物並びにアンモニウム塩または硝酸塩、例えば硫酸アン
モニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなど
の無機物が利用できる。また必要に応じて食塩、塩化カ
リウム、炭酸カルシウム、リン酸塩、重金属塩などの無
機塩類を添加することができる。発酵中の発泡を抑制す
るために常法に従って適当な消泡剤、例えばシリコーン
系消泡剤を添加することもできる。

【００４１】培養方法としては、一般に行なわれている
生理活性抗生物質等の生産のための培養方法であればよ
く、特に好気的液体深部培養法が適している。培養温度
は２０〜３７℃が適当であるが、２７〜３０℃が好まし
い。この方法でＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣ
物質の生産量は、振盪培養、通気攪拌培養共に培養５〜
７日間で最高に達する。このようにしてＭＪ２０２−７
２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣ物質の蓄積された培養物が得ら
れる。

【００４２】培養物中では、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ａ、ＢおよびＣ物質は菌体中および培養濾液中に存在す
るが、菌体中により多く存在する。このような培養物か
らＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣを採取するに
は、合目的な任意の方法が利用可能である。そのひとつ
の方法は、抽出の原理に基づくものであって、具体的に
は、例えば、培養濾液中のＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、
ＢおよびＣ物質については水不混和性の有機溶媒、例え
ば酢酸ブチル、ｎ−ブタノールなどで抽出する方法、あ
るいは菌体内のＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣ
物質については濾過または遠心分離などで得た菌体集体
をメタノール、エタノール、アセトンなどで処理して回
収する方法がある。

【００４３】このようにして得られるＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ａおよび／またはＢおよび／またはＣ物質の粗標
品を更に精製するためには、上記の抽出法および吸着法
を必要に応じて組み合わせ必要回数行なえばよい。例え
ば、ダイヤイオンＨＰ−２０、セファデックスＬＨ−２
０などの吸着剤またはゲル濾過剤を用いたカラムクロマ
トグラフィー、ＣＰＣを用いた遠心液々分配クロマトグ
ラフィー、シリカゲルを用いた順相クロマトグラフィー
およびヌクレオシル５Ｃ₁₈などを用いた高速液体クロマ
トグラフィーを適宜組合わせて実施することができる。

【００４４】上記の抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ａ、ＢまたはＣ物質を有機溶媒中で撹拌すると、閉環反
応が起きて抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′、Ｂ′
またはＣ′物質を生成する。この反応を行うには、原料
としてＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ物質、−Ｂ物質または
−Ｃ物質を有機溶剤、例えばメタノール、エタノール、
ｎ−ブタノールまたはアセトンにとかし、その溶液へ無
機酸、例えば塩酸または硫酸を加えて室温または加温下
に反応することができる。反応液から目的物質を採取す
るのには、溶剤を留去後に、得られた残渣を各種のクロ
マトグラフィー法にかけることにより行い得る。

【００４５】以下、参考例を示す。以下の参考例で
「％」は「ｗ／ｖ，％」を示す。

【００４６】参考例１本例は培養による抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、
ＢおよびＣ物質の製造例を示す。

【００４７】（１）種母の調製使用した培地は、下記の組成の成分を１ｌの水に溶解し
たものである。ｐＨは無調整とした。

【００４８】グルコース１．５％酵母エキス（大五栄養社製）０．２５％カザミノ酸（ディフコ社製）０．２５％炭酸カルシウム０．４％

【００４９】上記培地１１０ｍｌを５００ｍｌの三角フ
ラスコに分注し殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＭ
Ｊ２０２−７２Ｆ３株（微工研菌寄第１２６７４号）を
スラントより１白金耳摂取し、３０℃、１８０ｒｐｍの
ロータリーシェーカーにて７２時間回転培養したものを
種母とした。

【００５０】（２）培養使用した培地は、下記の組成の成分を１ｌの水に溶解し
たものである。ｐＨは無調整とした。この培地を１１０
ｍｌずつ５００ｍｌの三角フラスコへ分注殺菌したもの
へ、上記種母２．２ｍｌを添加し、ロータリーシェーカ
ーを用いて２７℃、１８０ｒｐｍにて回転培養を行なっ
た。

【００５１】グルコース３．０％酵母エキス（大五栄養社製）０．５％カザミノ酸（ディフコ社製）０．５％ＮａＮＯ₃ ０．２％ＫＣｌ０．２％ＣａＣＯ₃ ０．４％

【００５２】（３）抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ
および／またはＢおよび／またはＣ物質の採取上記（２）の条件で６日間の培養の後、培養液約２０ｌ
を遠心分離し（３０００ｒｐｍ、１５分間）、菌体をメ
タノール処理後、メタノールを溜去した後、残った水層
をｎ−ブタノールにて抽出し、ｎ−ブタノール層を減圧
下にて濃縮乾固した。得られた粗抽出物約３ｇを遠心液
々分配クロマトグラフ（ＣＰＣ，三鬼エンジニアリン
グ）に付す。クロロホルム／メタノール／水（２／２／
１）の下層を固定相とし、上層を移動相として２０℃、
４００ｒｐｍ、１ml/minの条件下、上昇法にて分離精製
を行なった。正溶出画分にＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、
ＢおよびＣ物質は溶出され、これを減圧下濃縮乾固し
た。

【００５３】得られた粗精製物８３０ｍｇをセファデッ
クスＬＨ−２０（ファルマシア社製）を用いたゲルクロ
マトグラフィーに付した。メタノールにて溶出を行ない
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＢおよびＣ画分を集め減圧
下にて濃縮乾固した。得られたＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ａ、ＢおよびＣ粗精製物８１３ｍｇをメタノールに溶解
し、その一定量をカプセルパック５Ｃ18（資生堂社製）
のカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）を用いた高速液体
クロマトグラフィーにかけ、メタノール／２５ｍＭ酢酸
アンモニウム／アセトニトリル（６０／１０／３０）に
て溶出し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−ＡおよびＢおよびＣ
物質の各フラクションを得た。

【００５４】これらフラクションを各々減圧下濃縮乾固
後、少量のメタノールに溶解後、セファデックスＬＨ−
２０を用いたゲルクロマトグラフィーに付し、ＭＪ２０
２−７２Ｆ３−ＡまたはＢまたはＣ物質を含むフラクシ
ョンを減圧下濃縮乾固するとＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ
物質の無色〜白色の固体３２０ｍｇ、ＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ｂ物質の無色〜白色の固体３０ｍｇ、ＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｃ物質の無色〜白色の固体１３ｍｇが得ら
れた。

【００５５】参考例２本例はＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ物質の脱水閉環による
抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′物質の製造を示
す。

【００５６】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ物質２２０ｍｇ
をメタノール３ｍｌに溶解後、１Ｎ塩酸１ｍｌを添加し
室温にて一晩攪拌した。ＴＬＣにて原料のＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ａ物質が残っていないことを確認の後、減圧
下濃縮乾固した。得られた残渣２７７ｍｇを少量のメタ
ノールに溶解後、シリカゲルカラム（２０ｍｍφ×２５
０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、
ｎ−ヘキサン／クロロホルム／アセトニトリル（６０／
２７／１３）にて溶出し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′
物質のフラクションを得た。

【００５７】このフラクションを減圧下濃縮乾固後、少
量のメタノールに溶解後、カプセルパック５Ｃ18（資生
堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）を用いた
高速液体クロマトグラフィーにかけ、メタノール／水
（８０／２０）にて溶出し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ａ′物質のフラクションを得た。これを減圧下濃縮乾固
すると６４ｍｇの粉末が得られた。さらにこれを少量の
メタノールに溶解後、セファデックスＬＨ−２０を用い
たゲルクロマトグラフィーに付し、ＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ａ′物質を含むフラクションを減圧下濃縮乾固する
とＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′物質の無色〜白色の固体
５６．５ｍｇが得られた。

【００５８】参考例３本例はＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ物質の脱水閉環による
抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ′物質の製造を示
す。

【００５９】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ物質約２００ｍ
ｇをメタノール３ｍｌに溶解後、１Ｎ塩酸１ｍｌを添加
し室温にて一晩攪拌した。ＴＬＣにて原料のＭＪ２０２
−７２Ｆ３−Ｂ物質が残っていないことを確認の後、減
圧下濃縮乾固した。これを少量のメタノールに溶解後、
シリカゲルカラム（２０ｍｍφ×２５０ｍｍ）を用いた
高速クロマトグラフィーにかけ、ｎ−ヘキサン／クロロ
ホルム／アセトニトリル（６０／２７／１３）にて溶出
し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ′物質のフラクションを
減圧下濃縮乾固した。

【００６０】得られたＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ′の粗
精製物６５ｍｇを少量のメタノールに溶解後、カプセル
パック５Ｃ18（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍφ×２
５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにか
け、メタノール／水（８０／２０）にて溶出し、ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｂ′物質のフラクションを得た。これ
を減圧下濃縮乾固すると４３ｍｇの粉末が得られた。こ
れを少量のメタノールに溶解後、セファデックスＬＨ−
２０を用いたゲルクロマトグラフィーに付し、ＭＪ２０
２−７２Ｆ３−Ｂ′物質を含むフラクションを減圧下濃
縮乾固するとＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ′物質の無色〜
白色の固体３４．６ｍｇが得られた。

【００６１】参考例４本例はＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ物質の脱水閉環による
抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ′物質の製造を示
す。

【００６２】ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ物質約３０ｍｇ
をメタノール３ｍｌに溶解後、１Ｎ塩酸１ｍｌを添加し
室温にて一晩攪拌した。ＴＬＣにて原料のＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ｃ物質が残っていないことを確認の後、減圧
下濃縮乾固した。これを少量のメタノールに溶解後、カ
プセルパック５Ｃ18（資生堂社製）のカラム（２０ｍｍ
φ×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィー
にかけ、メタノール／水（８０／２０）からメタノール
のグラジエントにて溶出し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−
Ｃ′物質のフラクションを得た。

【００６３】このフラクションを減圧下濃縮乾固する
と、１１ｍｇの粉末が得られた。さらにこれを少量のメ
タノールに溶解後、セファデックスＬＨ−２０を用いた
ゲルクロマトグラフィーに付し、ＭＪ２０２−７２Ｆ３
−Ｃ′物質を含むフラクションを減圧下濃縮乾固すると
ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ′物質の無色〜白色の固体
９．８ｍｇが得られた。

【００６４】

【発明の効果】以上詳細に説明した通り、本発明により
免疫抑制活性を有するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′、−
Ｂ′、−Ｃ′物質の新規な水溶性エステル物質が得ら
れ、またそれらの製造方法が提供された。

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【手続補正書】

【提出日】平成５年１０月８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２４】（６）ＦＡＢ(Fast Atom Bombardment) マ
ススペクトル：ｍ／ｚ５７６（Ｍ−Ｎａ）^- （７）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中に測定
した結果を示す。（８）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：（９）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）： δ3.9(1H,d), 3.7(1H,d) 重クロロホルム中ＴＭＳ（０ｐｐｍ）を基準物質として
測定した。 (10) ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）： δ50.9 (t), 86.1(d) 重クロロホルム中クロロホルム（７７．００ｐｐｍ）を
基準物質として測定した。 (11) 溶解性：水、メタノール、酢酸エチル、クロロホ
ルムに可溶、エーテル、ｎ−ヘキサンに難溶または不溶
である。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３８】なお、ＭＪ２０２−７２Ｆ３株を工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託申請し、平成３年１２月
２４日、ＦＥＲＭＰ−１２６７４として受託された。
現在ＭＪ２０２−７２Ｆ３株はブダベスト条約の規約下
に寄託を移行されて上記の微生物工業技術研究所（現在
は生命工学工業技術研究所と改称）に寄託番号「ＦＥＲ
ＭＢＰ−４０７９」と寄託されてある。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００６４】

【発明の効果】以上詳細に説明した通り、本発明により
免疫抑制活性を有するＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ′、−
Ｂ′、−Ｃ′物質の新規な水溶性エステル物質が得ら
れ、またそれらの製造方法が提供された。なお、本明細
書の前記の記載では、本発明に関連する新規な抗生物質
をそれぞれ抗生物質ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ａ、ＭＪ２
０２−７２Ｆ３−Ｂ、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ、ＭＪ
２０２−７２Ｆ３−Ａ′、ＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｂ′
およびＭＪ２０２−７２Ｆ３−Ｃ′の名称で説明してあ
るけれども、最近以降はＭＪ２０２−７２Ｆ３の名称の
代りにデラミノマイシン(Delaminomycin) の新名称を用
いることにする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/10 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者前田謙二東京都目黒区五本木２丁目46番11号 (72)発明者竹内富雄東京都品川区東五反田５丁目１番11号ニューフジマンション701

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の一般式（Ｉ）（式中、Ｒは硫酸基（−ＳＯ₃Ｈ）またはその製薬学的
に許容される塩を示し、また、ＸはＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ａ′ではヒドロキシル基を、またＭＪ２０２−７２
Ｆ３−Ｂ′ではメトキシ基を、またＭＪ２０２−７２Ｆ
３−Ｃ′では水素原子を示す）で表されるＭＪ２０２−
７２Ｆ３−Ａ′、Ｂ′およびＣ′の新規エステル、また
はその製薬学的に許容される塩。