JPH06239896A - 混成タンパク質 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生体内における好ましくない細胞を特異的に
死滅させる混成タンパク質を提供すること。 【構成】 毒素をコードする遺伝子の断片と、細胞特異
性ポリペプチドをコードする遺伝子の断片を結合させた
融合遺伝子を発現させて、上記の混成タンパク質を製造
する。該混成タンパク質は、２つのポリペプチドがペプ
チド結合で結合されている点に特徴がある。
死滅させる混成タンパク質を提供すること。 【構成】 毒素をコードする遺伝子の断片と、細胞特異
性ポリペプチドをコードする遺伝子の断片を結合させた
融合遺伝子を発現させて、上記の混成タンパク質を製造
する。該混成タンパク質は、２つのポリペプチドがペプ
チド結合で結合されている点に特徴がある。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＤＮＡ組換え技術の使
用による混成(hybrid)タンパク質分子の製造及び当該分
子の医療疾患の治療への適用に関するものである。
用による混成(hybrid)タンパク質分子の製造及び当該分
子の医療疾患の治療への適用に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】文献には、混成タンパク質を暗号化する
融合遺伝子の多くの例が含まれている。例えば、ビラー
コマロフ(Ｖilla−Ｋomaroff)等(１９７８)のＰ.Ｎ.Ａ.
Ｓ.Ｕ.Ｓ,Ａ.７５巻、３７２７−３７３１頁は、非細胞
質の細菌遺伝子に融合した真核性構造遺伝子で作った融
合遺伝子について記載している。融合遺伝子は細胞質の
外に運ばれる混成タンパク質を暗号化する。
融合遺伝子の多くの例が含まれている。例えば、ビラー
コマロフ(Ｖilla−Ｋomaroff)等(１９７８)のＰ.Ｎ.Ａ.
Ｓ.Ｕ.Ｓ,Ａ.７５巻、３７２７−３７３１頁は、非細胞
質の細菌遺伝子に融合した真核性構造遺伝子で作った融
合遺伝子について記載している。融合遺伝子は細胞質の
外に運ばれる混成タンパク質を暗号化する。
【０００３】また、混成タンパク質はＤＮＡ組換え技術
を含まない方法、例えば２種の異るタンパク質分子のカ
ップリングによっても作られてきた。例えば、選ばれた
種類の細胞に特異的に結合することができる配位子に毒
素をカップルして成る治療用混成タンパク質をカップリ
ングによって形成することが提案されてきた。チャン等
(１９７７）のＪ.Ｂiol,Ｃhem．２５２巻、１５１５−
１５２２頁に報告されている混成タンパク質を作る１つ
の試みは、二硫化結合を通して橋かけすることによって
人間の胎盤性催乳ホルモンにジフテリア毒素Ａ鎖をカッ
プルしてなる混成物となった。混成タンパク質は、ラク
トジェン(lactogen）受容体を含有する細胞に結び付け
られているが、それらの細胞におけるタンパク質合成を
阻止しなかった。
を含まない方法、例えば２種の異るタンパク質分子のカ
ップリングによっても作られてきた。例えば、選ばれた
種類の細胞に特異的に結合することができる配位子に毒
素をカップルして成る治療用混成タンパク質をカップリ
ングによって形成することが提案されてきた。チャン等
(１９７７）のＪ.Ｂiol,Ｃhem．２５２巻、１５１５−
１５２２頁に報告されている混成タンパク質を作る１つ
の試みは、二硫化結合を通して橋かけすることによって
人間の胎盤性催乳ホルモンにジフテリア毒素Ａ鎖をカッ
プルしてなる混成物となった。混成タンパク質は、ラク
トジェン(lactogen）受容体を含有する細胞に結び付け
られているが、それらの細胞におけるタンパク質合成を
阻止しなかった。
【０００４】また、同様に二硫化結合を通して橋かけす
ることによってリシンＡ毒素を妊娠尿性腺刺激ホルモン
(human chorionic gonadotropin hormone)にカップ
ルして成る混成タンパク質も報告されている;特異性を
有すると述べられているが、その結合容量が報告された
ことはなく、ラットライディヒ腫瘍細胞におけるタンパ
ク質合成を顕著に抑制するのに極めて高い濃度を必要と
し、エンドシト−シスによって引き起こされる“非特異
的な"入り込みと標的赤血球の細胞質膜を横切る混成物
の毒素部分の輸送によって引き起こされる“特異的な"
入り込みとを区別するのを困難にさせた（オエルトマン
等(１９７９)Ｊ.Ｂiol．Ｃheim．,２５４巻、１０２８
−１０３２頁）。同じ欠点がシスタミンを橋かけ剤とし
て用いてインシュリンにカップルさせたジフテリアＡか
ら成る混成物に見出された（ミスキミンズ等(１９７９)
Ｂiochem．Ｂiophys．Ｒes．Ｃommun．,９１巻、１４５
−１５１頁）。また、異種二官能価(heterobifunctiona
l)橋かけ剤によって表皮成長因子(ＥＧＦ)にカップルし
たリシンＡから成る混成物も作ったが、ＥＧＦによって
付与した結合特性は特異の細胞に制約されずに広範囲に
細胞型を包含する（コーリー等(１９８０)Cell、２２
巻、５６３−５７０頁）。
ることによってリシンＡ毒素を妊娠尿性腺刺激ホルモン
(human chorionic gonadotropin hormone)にカップ
ルして成る混成タンパク質も報告されている;特異性を
有すると述べられているが、その結合容量が報告された
ことはなく、ラットライディヒ腫瘍細胞におけるタンパ
ク質合成を顕著に抑制するのに極めて高い濃度を必要と
し、エンドシト−シスによって引き起こされる“非特異
的な"入り込みと標的赤血球の細胞質膜を横切る混成物
の毒素部分の輸送によって引き起こされる“特異的な"
入り込みとを区別するのを困難にさせた（オエルトマン
等(１９７９)Ｊ.Ｂiol．Ｃheim．,２５４巻、１０２８
−１０３２頁）。同じ欠点がシスタミンを橋かけ剤とし
て用いてインシュリンにカップルさせたジフテリアＡか
ら成る混成物に見出された（ミスキミンズ等(１９７９)
Ｂiochem．Ｂiophys．Ｒes．Ｃommun．,９１巻、１４５
−１５１頁）。また、異種二官能価(heterobifunctiona
l)橋かけ剤によって表皮成長因子(ＥＧＦ)にカップルし
たリシンＡから成る混成物も作ったが、ＥＧＦによって
付与した結合特性は特異の細胞に制約されずに広範囲に
細胞型を包含する（コーリー等(１９８０)Cell、２２
巻、５６３−５７０頁）。
【０００５】タンパク質を単一単位として合成する、即
ち、断片を橋かけでなくペプチド結合によって互いに結
合する優れたジフテリア毒素／ホルモン混成タンパク質
を作り得ることを今見出した。本発明は図面を参照する
ことによって最も良く理解されよう。図において、第１
図はジフテリア毒素分子の図式的説明であり;第２図は
本発明の混成タンパク質分子の図式的説明であり;第３
図はコリネファージ(corynephage)βトックスの３.９kb
Ｂam Ｈ−Ｉ制限断片におけるジフテリアトックス(to
x)オペロンの位置及び配置を示す制限図(restriction
map)(以下に一層詳細に説明するように、野生型トック
ス対立遺伝子に見られず、突然変異体トックス228対立
遺伝子のみに見られるＮＲＵＩサイトを含む)であり;第
４図は本発明の混成タンパク質を暗号化する本発明の融
合遺伝子の図式的説明である(暗号化されたタンパク質
断片を参照にして、遺伝子断片に標識を付ける)。
ち、断片を橋かけでなくペプチド結合によって互いに結
合する優れたジフテリア毒素／ホルモン混成タンパク質
を作り得ることを今見出した。本発明は図面を参照する
ことによって最も良く理解されよう。図において、第１
図はジフテリア毒素分子の図式的説明であり;第２図は
本発明の混成タンパク質分子の図式的説明であり;第３
図はコリネファージ(corynephage)βトックスの３.９kb
Ｂam Ｈ−Ｉ制限断片におけるジフテリアトックス(to
x)オペロンの位置及び配置を示す制限図(restriction
map)(以下に一層詳細に説明するように、野生型トック
ス対立遺伝子に見られず、突然変異体トックス228対立
遺伝子のみに見られるＮＲＵＩサイトを含む)であり;第
４図は本発明の混成タンパク質を暗号化する本発明の融
合遺伝子の図式的説明である(暗号化されたタンパク質
断片を参照にして、遺伝子断片に標識を付ける)。
【０００６】第１図を参照すれば、ジフテリア毒素分子
はいくつかの官能“領域"から成り、該領域は分子のア
ミノ末端に始まり、疎水性リーダー信号シーケンスs、
酵素活性フラグメントＡ、開裂領域を含有する１４個の
アミノ酸が露出したプロテアーゼ感受性ジスルフィドル
ープ(ＳＤＬ)l1,及び疎水性領域h,ＤＳＬ l2,メークア
ップaであるカルボキシ末端を含む断片Ｂを持つことを
特徴とする。
はいくつかの官能“領域"から成り、該領域は分子のア
ミノ末端に始まり、疎水性リーダー信号シーケンスs、
酵素活性フラグメントＡ、開裂領域を含有する１４個の
アミノ酸が露出したプロテアーゼ感受性ジスルフィドル
ープ(ＳＤＬ)l1,及び疎水性領域h,ＤＳＬ l2,メークア
ップaであるカルボキシ末端を含む断片Ｂを持つことを
特徴とする。
【０００７】ジフテリア毒素が感受性真核細胞を中毒さ
せる方法は、少くとも次の工程を含む:(i)ジフテリア毒
素が感受性細胞の表面で特異レセプターに結合し;(ii)
毒素分子はそのレセプターに結合しながら、エンドシト
−シス(endocytic)小胞内に内在化され;(iii)内在化に
先立つか或はエンドシト−シス小胞の内で、毒素分子を
Ｎ−末端より４７,０００ダルトンの範囲内のサイトで
開裂(又は処理)し;(iv)エンドシト−シス小胞のpＨが６
より下に低下するにつれて、毒素の構造中間体はそのレ
セプターに依然結合したまま膜の中に挿入され;(v)膜の
中に一旦埋め込まれて疎水性領域hは細孔を形成し;(vi)
フラグメントＡとＢの間のl1においてタンパク質分解開
裂が起こり;(vii)その後でフラグメントＡ又はフラグメ
ントＡを含有するポリペプチドをシトソール(cytosol)
の中に放出し;(viii)フラグメントＡの触媒活性、即
ち、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド−伸長因子
(Ｅlongation Ｆacton)２のアデノシンジホスフェート
リボシル化は中毒した細胞の死を引き起こす。シトソー
ルに導入したフラグメントＡの単一分子が細胞を殺すの
に十分であることは明らかである。
せる方法は、少くとも次の工程を含む:(i)ジフテリア毒
素が感受性細胞の表面で特異レセプターに結合し;(ii)
毒素分子はそのレセプターに結合しながら、エンドシト
−シス(endocytic)小胞内に内在化され;(iii)内在化に
先立つか或はエンドシト−シス小胞の内で、毒素分子を
Ｎ−末端より４７,０００ダルトンの範囲内のサイトで
開裂(又は処理)し;(iv)エンドシト−シス小胞のpＨが６
より下に低下するにつれて、毒素の構造中間体はそのレ
セプターに依然結合したまま膜の中に挿入され;(v)膜の
中に一旦埋め込まれて疎水性領域hは細孔を形成し;(vi)
フラグメントＡとＢの間のl1においてタンパク質分解開
裂が起こり;(vii)その後でフラグメントＡ又はフラグメ
ントＡを含有するポリペプチドをシトソール(cytosol)
の中に放出し;(viii)フラグメントＡの触媒活性、即
ち、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド−伸長因子
(Ｅlongation Ｆacton)２のアデノシンジホスフェート
リボシル化は中毒した細胞の死を引き起こす。シトソー
ルに導入したフラグメントＡの単一分子が細胞を殺すの
に十分であることは明らかである。
【０００８】本発明の混成タンパク質は、混成タンパク
質のアミノ末端に始まり、順番にペプチド結合によって
互いに接合した次のペプチド断片を含む: a) ジフテリア毒素の酵素活性フラグメントＡ(タンパ
ク質を分泌する間に切られるリーダーフラグメントsを
持たない)、 b) ジフテリア毒素の前記フラグメントＡに隣接した開
裂領域l1を含む断片、 c) l1とトックス228対立遺伝子のＮＲＵＩサイトのト
ックスオペロンの位置から約９０塩基対上流の位置との
間のトックスオペロンの遺伝子断片を暗号化するフラグ
メントＢの部分によって暗号化されたジフテリア毒素の
フラグメントＢの少くとも部分から成る断片と、 d) 細胞特異性ポリペプチド配位子の一部分から成る断
片で、該部分はポリペプチド配位子の結合領域の少くと
も一部分を含み、結合領域の該部分は混成タンパク質を
ジフテリア毒素の酵素活性フラグメントＡによって攻撃
される所定の種類の細胞に選択的に結合させるのに有効
である。
質のアミノ末端に始まり、順番にペプチド結合によって
互いに接合した次のペプチド断片を含む: a) ジフテリア毒素の酵素活性フラグメントＡ(タンパ
ク質を分泌する間に切られるリーダーフラグメントsを
持たない)、 b) ジフテリア毒素の前記フラグメントＡに隣接した開
裂領域l1を含む断片、 c) l1とトックス228対立遺伝子のＮＲＵＩサイトのト
ックスオペロンの位置から約９０塩基対上流の位置との
間のトックスオペロンの遺伝子断片を暗号化するフラグ
メントＢの部分によって暗号化されたジフテリア毒素の
フラグメントＢの少くとも部分から成る断片と、 d) 細胞特異性ポリペプチド配位子の一部分から成る断
片で、該部分はポリペプチド配位子の結合領域の少くと
も一部分を含み、結合領域の該部分は混成タンパク質を
ジフテリア毒素の酵素活性フラグメントＡによって攻撃
される所定の種類の細胞に選択的に結合させるのに有効
である。
【０００９】含まれる毒素分子の必要な部分は、第１図
の線yとxとの間の分子の部分として表わされる。混成タ
ンパク質は、好ましくは、また、毒素分子のプロテアー
ゼ感受性ＤＳＬ l2、即ち線xとzとの間の分子の部分も
含まれる。線zは、好ましくは、Ｂのカルボキシ末端か
ら４７アミノ酸の点、即ち、l2の端よりも遠くにあって
フラグメントＢの普遍化真核結合サイトが排除されるの
を確実にし、それゆえ、結合は細胞特異性配位子の結合
領域によって制御されるであろう。有効な毒素として作
用するため１／２よりやや多くのフラグメントＢを分子
に付与しなければならないことが証明された。
の線yとxとの間の分子の部分として表わされる。混成タ
ンパク質は、好ましくは、また、毒素分子のプロテアー
ゼ感受性ＤＳＬ l2、即ち線xとzとの間の分子の部分も
含まれる。線zは、好ましくは、Ｂのカルボキシ末端か
ら４７アミノ酸の点、即ち、l2の端よりも遠くにあって
フラグメントＢの普遍化真核結合サイトが排除されるの
を確実にし、それゆえ、結合は細胞特異性配位子の結合
領域によって制御されるであろう。有効な毒素として作
用するため１／２よりやや多くのフラグメントＢを分子
に付与しなければならないことが証明された。
【００１０】本発明の混成タンパク質分子の図式的説明
である第２図を参照すれば、ジフテリア毒素のy−z部分
をペプチド結合によって細胞特異性ポリペプチド配位子
のフラグメントrに結合している。即ち、ポリペプチド
は、ジフテリア毒素分子の酵素活性フラグメントＡによ
って攻撃されるべき所定の種類の細胞に選択的に結合し
ている。フラグメントrは配位子全体又は配位子の結合
領域の全体又は結合領域の有効な部分を含む配位子の一
部から成ることができる。
である第２図を参照すれば、ジフテリア毒素のy−z部分
をペプチド結合によって細胞特異性ポリペプチド配位子
のフラグメントrに結合している。即ち、ポリペプチド
は、ジフテリア毒素分子の酵素活性フラグメントＡによ
って攻撃されるべき所定の種類の細胞に選択的に結合し
ている。フラグメントrは配位子全体又は配位子の結合
領域の全体又は結合領域の有効な部分を含む配位子の一
部から成ることができる。
【００１１】用いる配位子が大きい場合、分子の結合領
域をフラグメントＢの疎水性領域hの近くに位置させる
ために、配位子の非結合部分はできるだけ少なくするこ
とが望ましい。また、配位子分子の結合領域の全部又は
ほとんどを含むのが望ましい。アミノ酸１３の小さいペ
プチドであるαメラニン細胞刺激ホルモン(ＭＳＨ)又は
アミノ酸１７を含有するβＭＳＨの場合には、分子のカ
ルボキシ末端に９個のアミノ酸から成る分子の部分又は
分子全体を用いることができる。結合領域がある細胞特
異性配位子内の領域は多数の該配位子について現在知ら
れている。更に、固体相ポリペプチド合成における最近
の進歩は、当業者が配位子の種々の断片を合成してそれ
らについて攻撃される細胞の種類に結合する能力の試験
を行うことによって、該配位子の実際的に全ての結合領
域を求めることを可能にする。
域をフラグメントＢの疎水性領域hの近くに位置させる
ために、配位子の非結合部分はできるだけ少なくするこ
とが望ましい。また、配位子分子の結合領域の全部又は
ほとんどを含むのが望ましい。アミノ酸１３の小さいペ
プチドであるαメラニン細胞刺激ホルモン(ＭＳＨ)又は
アミノ酸１７を含有するβＭＳＨの場合には、分子のカ
ルボキシ末端に９個のアミノ酸から成る分子の部分又は
分子全体を用いることができる。結合領域がある細胞特
異性配位子内の領域は多数の該配位子について現在知ら
れている。更に、固体相ポリペプチド合成における最近
の進歩は、当業者が配位子の種々の断片を合成してそれ
らについて攻撃される細胞の種類に結合する能力の試験
を行うことによって、該配位子の実際的に全ての結合領
域を求めることを可能にする。
【００１２】本発明の混成タンパク質分子は、配位子結
合領域が結合する特定種類の細胞を除いて全ての哺乳類
細胞に対し実質的に非毒性である。このように、発明の
混成タンパク質は、他の多数の治療剤、例えば、一般の
細胞毒素(cytotoxic)抗癌剤よりもずっと特異的であ
る。断片がペプチド結合を介して接合する発明の混成タ
ンパク質は、また、端かけした混成物よりも優れてい
る。何故なら、発明のタンパク質は均質試料で与えるこ
とができ、均質試料では全ての同一分子は特別の種類の
細胞にとって有効かつ選択的であるからである。
合領域が結合する特定種類の細胞を除いて全ての哺乳類
細胞に対し実質的に非毒性である。このように、発明の
混成タンパク質は、他の多数の治療剤、例えば、一般の
細胞毒素(cytotoxic)抗癌剤よりもずっと特異的であ
る。断片がペプチド結合を介して接合する発明の混成タ
ンパク質は、また、端かけした混成物よりも優れてい
る。何故なら、発明のタンパク質は均質試料で与えるこ
とができ、均質試料では全ての同一分子は特別の種類の
細胞にとって有効かつ選択的であるからである。
【００１３】発明の混成タンパク質によって結合されか
つ攻撃される特定の種類の細胞は、混成分子の結合領域
を供給する特定のポリペプチド配位子によって求められ
る。攻撃されるべき特別の種類の細胞に対して特異的な
結合領域を有する任意の細胞特異性ポリペプチド配位子
を用いることができる。ポリペプチドホルモンは有用な
当該配位子である。例えば、α又はβＭＳＨの結合領域
の一部を用いて作った混成物は選択的にメラニン細胞(m
elanocyte)に結合して混成物を黒色腫の治療に有用なも
のにする。その他の配位子は異る特異性を与える;例え
ば、物質Ｐの結合領域は痛みの伝達に含まれるニューロ
ンの表面に受容体を認め、それゆえに物質Ｐを用いて作
った混成物は該ニューロンを破壊して慢性痛を和らげる
のに用いることができる。これらの混成物は、また、物
質Ｐレセプターを含有する神経系統の地図面にも用いる
ことができる。使用することができるその他の特異性・
結合配位子はソモトスタチン(somotostatin),インター
ルーキン(interleukin)Ｉ,インタールーキンＩＩ,イン
タールーキンＩＩＩを含む。インタールーキンＩＩは活
性化Ｔ細胞を含むアレルギー反応や狼瘡等の自己免疫性
病におけるその役割の故に特に重要である。加えて、イ
ンタールーキンの全てがＴ細胞に対して特異的であるか
ら、インタールーキンを用いて作った混成物を用いて免
疫系統を含む癌を治療したり、移植した器官の距離を抑
制できよう。細胞特異性結合領域を有するその他の有用
なポリペプチド配位子は、濾胞刺激ホルモン(卵巣細胞
に対して特異的)、黄体形成ホルモン(卵巣細胞に対して
特異的)、甲状腺刺激ホルモン(甲状腺細胞に対して特異
的);パソプレシン(子宮細胞、並びに膀胱及び腸細胞に
対して特異的);プロラクチン(乳房細胞に対して特異
的);及び成長ホルモン(所定の骨細胞に対して特異的)で
ある。
つ攻撃される特定の種類の細胞は、混成分子の結合領域
を供給する特定のポリペプチド配位子によって求められ
る。攻撃されるべき特別の種類の細胞に対して特異的な
結合領域を有する任意の細胞特異性ポリペプチド配位子
を用いることができる。ポリペプチドホルモンは有用な
当該配位子である。例えば、α又はβＭＳＨの結合領域
の一部を用いて作った混成物は選択的にメラニン細胞(m
elanocyte)に結合して混成物を黒色腫の治療に有用なも
のにする。その他の配位子は異る特異性を与える;例え
ば、物質Ｐの結合領域は痛みの伝達に含まれるニューロ
ンの表面に受容体を認め、それゆえに物質Ｐを用いて作
った混成物は該ニューロンを破壊して慢性痛を和らげる
のに用いることができる。これらの混成物は、また、物
質Ｐレセプターを含有する神経系統の地図面にも用いる
ことができる。使用することができるその他の特異性・
結合配位子はソモトスタチン(somotostatin),インター
ルーキン(interleukin)Ｉ,インタールーキンＩＩ,イン
タールーキンＩＩＩを含む。インタールーキンＩＩは活
性化Ｔ細胞を含むアレルギー反応や狼瘡等の自己免疫性
病におけるその役割の故に特に重要である。加えて、イ
ンタールーキンの全てがＴ細胞に対して特異的であるか
ら、インタールーキンを用いて作った混成物を用いて免
疫系統を含む癌を治療したり、移植した器官の距離を抑
制できよう。細胞特異性結合領域を有するその他の有用
なポリペプチド配位子は、濾胞刺激ホルモン(卵巣細胞
に対して特異的)、黄体形成ホルモン(卵巣細胞に対して
特異的)、甲状腺刺激ホルモン(甲状腺細胞に対して特異
的);パソプレシン(子宮細胞、並びに膀胱及び腸細胞に
対して特異的);プロラクチン(乳房細胞に対して特異
的);及び成長ホルモン(所定の骨細胞に対して特異的)で
ある。
【００１４】発明の混成タンパク質は、好ましくは、混
成タンパク質を暗号化する所望の融合遺伝子を形成し、
次に、従来の方法を用いて融合遺伝子を表現することを
含むＤＮＡ組換え技術を用いて作る。第３図を参照し
て、コリネファーゼβトックス＋の３.９kb Ｂam Ｈ−
Ｉ制限断片上のジフテリアトックスオペロンの位置及び
配置はトックスオペロンを所望の位置で開裂させ、かつ
オペロンの所望の部分を選択したポリペプチド配位子に
ついて遺伝子の所望の部分に融合させる。トックスオペ
ロンについての一層詳細な説明及びフラグメントＡのク
ローニングについての説明はレオング等(１９８３)サイ
エンス２２０巻,５１５頁に載っており、参照して本明
細書に援用している。本明細書において説明するように
クローンを発生させてプラスミドpＤＴ２０１を作るフ
ラグメントＡを１９８３年５月、メリーランド,ロック
ビル,アミリカンタイプカルチュアコレクションに寄託
してＡＴＣＣ受入れ(Ａccession)第 号を
与えられた。
成タンパク質を暗号化する所望の融合遺伝子を形成し、
次に、従来の方法を用いて融合遺伝子を表現することを
含むＤＮＡ組換え技術を用いて作る。第３図を参照し
て、コリネファーゼβトックス＋の３.９kb Ｂam Ｈ−
Ｉ制限断片上のジフテリアトックスオペロンの位置及び
配置はトックスオペロンを所望の位置で開裂させ、かつ
オペロンの所望の部分を選択したポリペプチド配位子に
ついて遺伝子の所望の部分に融合させる。トックスオペ
ロンについての一層詳細な説明及びフラグメントＡのク
ローニングについての説明はレオング等(１９８３)サイ
エンス２２０巻,５１５頁に載っており、参照して本明
細書に援用している。本明細書において説明するように
クローンを発生させてプラスミドpＤＴ２０１を作るフ
ラグメントＡを１９８３年５月、メリーランド,ロック
ビル,アミリカンタイプカルチュアコレクションに寄託
してＡＴＣＣ受入れ(Ａccession)第 号を
与えられた。
【００１５】第３図及び４図を参照して、発明の混成タ
ンパク質を暗号化する融合遺伝子(第４図)を作るのに用
いられるジフテリアトックスオペロン(第３図)の部分
は、好ましくは、フラグメントＤを描く点線によって示
す部分、即ち、初めのＳau３Ａ ＩサイトからＳＰＨＩ
サイトまでのトックス遺伝子の部分である。このよう
に、フラグメントＤはフラグメントＡを暗号化する８３
１塩基対(bp)遺伝子断片(プロモーターを含む構造遺伝
子に先んじる１７７bpシーケンス及び第１図の信号シー
ケンス、Ｓを暗号化する部分を含む);フラグメントＢの
疎水性領域を暗号化する遺伝子断片の部分;及びＤＳＬ
l2を暗号化する遺伝子断片を含む。第３図に示すよう
に、フラグメントＡを暗号化する遺伝子断片の初めの１
７７bpは、トックスプロモーターに先んじてトックスオ
ペロンの部分ではないあるＤＮＡを含む。このＤＮＡは
不適切であって転写されない;このＤＮＡは、単に、遺
伝子断片を暗号化するフラグメントＡの初めにあるＳau
３Ａ Ｉサイトがトックスプロモーター(Ｈind ＩＩＩ
の頂度左側の線として表わされる)に近い最も便利な制
限サイトであるが故に含まれる。
ンパク質を暗号化する融合遺伝子(第４図)を作るのに用
いられるジフテリアトックスオペロン(第３図)の部分
は、好ましくは、フラグメントＤを描く点線によって示
す部分、即ち、初めのＳau３Ａ ＩサイトからＳＰＨＩ
サイトまでのトックス遺伝子の部分である。このよう
に、フラグメントＤはフラグメントＡを暗号化する８３
１塩基対(bp)遺伝子断片(プロモーターを含む構造遺伝
子に先んじる１７７bpシーケンス及び第１図の信号シー
ケンス、Ｓを暗号化する部分を含む);フラグメントＢの
疎水性領域を暗号化する遺伝子断片の部分;及びＤＳＬ
l2を暗号化する遺伝子断片を含む。第３図に示すよう
に、フラグメントＡを暗号化する遺伝子断片の初めの１
７７bpは、トックスプロモーターに先んじてトックスオ
ペロンの部分ではないあるＤＮＡを含む。このＤＮＡは
不適切であって転写されない;このＤＮＡは、単に、遺
伝子断片を暗号化するフラグメントＡの初めにあるＳau
３Ａ Ｉサイトがトックスプロモーター(Ｈind ＩＩＩ
の頂度左側の線として表わされる)に近い最も便利な制
限サイトであるが故に含まれる。
【００１６】フラグメントＤはそれを単に励起させるこ
とによってトックスオペロンからＳau ３Ａ Ｉ及びＳＰ
ＨＩにおける開裂を経て得ることができるはずである。
代りに、遺伝子断片を次の通りに互いに融合することが
できる。初めにフラグメントＡを暗号化する遺伝子断片
を得る。次に、Ｓau ３Ａ ＩからＳau ３Ａ Ｉまで(第
３図のＢ')フラグメントＢのほとんどを暗号化する遺伝
子断片を得る。フラグメントＢ'を暗号化する遺伝子を
プラスミドpＵＣ８中でクローンを発生させてプラスミ
ドpＤＴ３０１を作り、１９８３年５月 日メリーラ
ンド・ロックビル,アメリカンタイプカルチャーコレク
ションに寄託し、ＡＴＣＣ受け入れ第号を与えられた。
フラグメントＢ'は酵素Ｄal ３ １を用いてトックス228
の上のＮＲＵＩサイト(野生型トックス対立遺伝子はＮ
ＲＵＩサイトを持たない)の位置まで約２００bp切り返
してＢ"(第３図)を与える。フラグメントＡ及びＢ"を融
合し、l2を暗号化する断片をＢ"に融合し、ポリペプチ
ド配位子の所望の部分を暗号化する断片をl2に融合す
る。
とによってトックスオペロンからＳau ３Ａ Ｉ及びＳＰ
ＨＩにおける開裂を経て得ることができるはずである。
代りに、遺伝子断片を次の通りに互いに融合することが
できる。初めにフラグメントＡを暗号化する遺伝子断片
を得る。次に、Ｓau ３Ａ ＩからＳau ３Ａ Ｉまで(第
３図のＢ')フラグメントＢのほとんどを暗号化する遺伝
子断片を得る。フラグメントＢ'を暗号化する遺伝子を
プラスミドpＵＣ８中でクローンを発生させてプラスミ
ドpＤＴ３０１を作り、１９８３年５月 日メリーラ
ンド・ロックビル,アメリカンタイプカルチャーコレク
ションに寄託し、ＡＴＣＣ受け入れ第号を与えられた。
フラグメントＢ'は酵素Ｄal ３ １を用いてトックス228
の上のＮＲＵＩサイト(野生型トックス対立遺伝子はＮ
ＲＵＩサイトを持たない)の位置まで約２００bp切り返
してＢ"(第３図)を与える。フラグメントＡ及びＢ"を融
合し、l2を暗号化する断片をＢ"に融合し、ポリペプチ
ド配位子の所望の部分を暗号化する断片をl2に融合す
る。
【００１７】上記のスキームにおいて、遺伝子断片を暗
号化するフラグメントＢ'はＮＲＵＩの正確な位置にま
で切り返すのが好ましいが、また、ＮＲＵＩより９０bp
先の位置とl2暗号化領域の端との間(即ち、ＮＲＵＩの
９０bp先の位置とl2暗号化領域の始まりとの間の２０８
bp領域内)の任意の位置にまで切り返すこともできる。
又はＢ'暗号化断片をl2暗号化領域のカルボキシ末端(Ｎ
ＲＵＩから１２９bp下流)にまで切り返すこともできよ
う。この場合、合成l2暗号化領域の融合は不必要であ
る。(Ｂ'暗号化領域を切り返してそれに合成l2暗号化断
片を融合する場合、通常、ＮＲＵＩとＳＰＨＩとの間に
一般に見られ融合遺伝子中に存在しない塩基対が多少あ
るであろう。それゆえ、厳密に言えば、第３図のＤの内
の全て又は第１及び第２図のy−zの内の全てが必ずしも
含まれないであろう。)
号化するフラグメントＢ'はＮＲＵＩの正確な位置にま
で切り返すのが好ましいが、また、ＮＲＵＩより９０bp
先の位置とl2暗号化領域の端との間(即ち、ＮＲＵＩの
９０bp先の位置とl2暗号化領域の始まりとの間の２０８
bp領域内)の任意の位置にまで切り返すこともできる。
又はＢ'暗号化断片をl2暗号化領域のカルボキシ末端(Ｎ
ＲＵＩから１２９bp下流)にまで切り返すこともできよ
う。この場合、合成l2暗号化領域の融合は不必要であ
る。(Ｂ'暗号化領域を切り返してそれに合成l2暗号化断
片を融合する場合、通常、ＮＲＵＩとＳＰＨＩとの間に
一般に見られ融合遺伝子中に存在しない塩基対が多少あ
るであろう。それゆえ、厳密に言えば、第３図のＤの内
の全て又は第１及び第２図のy−zの内の全てが必ずしも
含まれないであろう。)
【００１８】上記のスキーム程には好適ではないが、代
りの方法は、配位子暗号化遺伝子断片をl2暗号化断片を
用いないで直接Ｂ'に融合することである。l2−暗号化
断片を含むか又か省略するかどちらかの融合遺伝子は、
代りに、野生型対立遺伝子よりもむしろ突然変異体トッ
クス228対立遺伝子からＢ"暗号化遺伝子断片を用いて作
ることができる。ＮＲＵＩサイトを含むトックス228対
立遺伝子を容易に処理してＢ"暗号化断片を与える。ト
ックス228対立遺伝子はウチダ等(１９７３)Ｊour.Ｂiol
og．Ｃhem．２４８巻,３８３８頁に記載されており、参
照して本明細書に援用している。より詳細には、発明の
混成タンパク質を暗号化する融合遺伝子は次のようにし
て作ることができる。
りの方法は、配位子暗号化遺伝子断片をl2暗号化断片を
用いないで直接Ｂ'に融合することである。l2−暗号化
断片を含むか又か省略するかどちらかの融合遺伝子は、
代りに、野生型対立遺伝子よりもむしろ突然変異体トッ
クス228対立遺伝子からＢ"暗号化遺伝子断片を用いて作
ることができる。ＮＲＵＩサイトを含むトックス228対
立遺伝子を容易に処理してＢ"暗号化断片を与える。ト
ックス228対立遺伝子はウチダ等(１９７３)Ｊour.Ｂiol
og．Ｃhem．２４８巻,３８３８頁に記載されており、参
照して本明細書に援用している。より詳細には、発明の
混成タンパク質を暗号化する融合遺伝子は次のようにし
て作ることができる。
【００１９】ベクター 好適なベクターはプラスミドpＵＣ７,pＵＣ８,pＵＣ９,
pＢＲ３２２である。ピエラ等(１９８２)Ｇene１９巻,
２５９頁(参照して本明細書中に援用している)に記載さ
れているpＵＣプラスミドは融合遺伝子を明瞭に作らせ
る方法であるがダブル分解(ダイジエスト)クローニング
に特によく適している。
pＢＲ３２２である。ピエラ等(１９８２)Ｇene１９巻,
２５９頁(参照して本明細書中に援用している)に記載さ
れているpＵＣプラスミドは融合遺伝子を明瞭に作らせ
る方法であるがダブル分解(ダイジエスト)クローニング
に特によく適している。
【００２０】融合遺伝子 以下は、トックスシーケンスと配位子(この場合、ＭＳ
Ｈ)シーケンスとの間にプロテアーゼ感受性ループl2を
含有するジフテリア毒素−ＭＳＨ融合遺伝子を組み立て
るフローチャートである。
Ｈ)シーケンスとの間にプロテアーゼ感受性ループl2を
含有するジフテリア毒素−ＭＳＨ融合遺伝子を組み立て
るフローチャートである。
【表１】 上記のフローチャートを参照して、工程(i)では、初め
にフラグメントＡ暗号化遺伝子断片を前記サイエンス誌
（２２０巻，５１５頁）に記載されているように得て精
製する。なお、Ｓau３Ａ１は当該技術分野でよく知られ
た制限部位であり、Ｓau３Ａ１-２とは２個所のＳau３
Ａ１部位で切断された断片を示す。工程(ii)では、フラ
グメントＢ"暗号化断片は、酵素Ｂal ３ １を用いて一
層大きなフラグメントＢ'暗号化領域を切り返すことに
よって得る。
にフラグメントＡ暗号化遺伝子断片を前記サイエンス誌
（２２０巻，５１５頁）に記載されているように得て精
製する。なお、Ｓau３Ａ１は当該技術分野でよく知られ
た制限部位であり、Ｓau３Ａ１-２とは２個所のＳau３
Ａ１部位で切断された断片を示す。工程(ii)では、フラ
グメントＢ"暗号化断片は、酵素Ｂal ３ １を用いて一
層大きなフラグメントＢ'暗号化領域を切り返すことに
よって得る。
【００２１】第３図に示すように、フラグメントＢ'を
暗号化する遺伝子断片は２個所のＳau ３Ａ １の間の
１,０２３bp領域であって、初めのＳau ３Ａ １はl1内
の第３アルギニンを暗号化するＤＮＡシーケンスにあ
り、２番目のＳau ３Ａ １はトックス構造遺伝子の端よ
り４９bp前である。前述のようにＢ'を暗号化する遺伝
子断片をpＵＣ８中でクローンした。配向（転写配向）
がlac Ｚ遺伝子のそれと同じである断片を配置で持って
いるプラスミドをpＤＴ３０１と定義した:(lac Ｚ及び
Ｂ'遺伝子はpＤＴ３０１上のわく外である)。再度、上
記フローチャートを参照して、pＤＴ３０１をＨind Ｉ
ＩＩ分解を経て開き、次に、Ｂ'暗号化断片をエキソニ
ュークレアーゼＢal ３ １に種々の時間露出することに
よって切り返す。次に、得られた縮小(種々の長さの)遺
伝子断片の端をＥco Ｒ １及びＰst １リンカーとの平
滑末端連結に付し、次いでこの断片をＳau３Ａ１で分解
する。これはＢ'の部分を暗号化する遺伝子断片の不均
一(大きさに関し)集団となる。
暗号化する遺伝子断片は２個所のＳau ３Ａ １の間の
１,０２３bp領域であって、初めのＳau ３Ａ １はl1内
の第３アルギニンを暗号化するＤＮＡシーケンスにあ
り、２番目のＳau ３Ａ １はトックス構造遺伝子の端よ
り４９bp前である。前述のようにＢ'を暗号化する遺伝
子断片をpＵＣ８中でクローンした。配向（転写配向）
がlac Ｚ遺伝子のそれと同じである断片を配置で持って
いるプラスミドをpＤＴ３０１と定義した:(lac Ｚ及び
Ｂ'遺伝子はpＤＴ３０１上のわく外である)。再度、上
記フローチャートを参照して、pＤＴ３０１をＨind Ｉ
ＩＩ分解を経て開き、次に、Ｂ'暗号化断片をエキソニ
ュークレアーゼＢal ３ １に種々の時間露出することに
よって切り返す。次に、得られた縮小(種々の長さの)遺
伝子断片の端をＥco Ｒ １及びＰst １リンカーとの平
滑末端連結に付し、次いでこの断片をＳau３Ａ１で分解
する。これはＢ'の部分を暗号化する遺伝子断片の不均
一(大きさに関し)集団となる。
【００２２】次に、これらの断片をpＵＣ８のＢamＨ １
−Ｐst１か又はＢamＨ １−Ｅco Ｒ１のどちらかのサイ
トで再びクローンを発生させる。これらのサイト中での
クローニングは、単に、一端にＢamＨ １(Ｓan ３Ａ
１)を有し、他端にＰst １又Ｅco Ｒ １を有するクロー
ンの選択を与えるにすぎない。また、二重分解したpＵ
Ｃ８におけるクローニングはただ１種の断片配置のみを
許し、Ｘ−Ｇ板上青色コロニー(lac Ｚを表現するもの)
の選択は短縮したＢ'暗号化領域とlac Ｚとの間のわく
内接合を立証している。好適なクローンは、Ｂ'暗号化
領域の長さが８３０bpであるもの;即ち、遺伝子をトッ
クス228上のＮＲＵＩの位置にまで２００bp切り返した
ものである。
−Ｐst１か又はＢamＨ １−Ｅco Ｒ１のどちらかのサイ
トで再びクローンを発生させる。これらのサイト中での
クローニングは、単に、一端にＢamＨ １(Ｓan ３Ａ
１)を有し、他端にＰst １又Ｅco Ｒ １を有するクロー
ンの選択を与えるにすぎない。また、二重分解したpＵ
Ｃ８におけるクローニングはただ１種の断片配置のみを
許し、Ｘ−Ｇ板上青色コロニー(lac Ｚを表現するもの)
の選択は短縮したＢ'暗号化領域とlac Ｚとの間のわく
内接合を立証している。好適なクローンは、Ｂ'暗号化
領域の長さが８３０bpであるもの;即ち、遺伝子をトッ
クス228上のＮＲＵＩの位置にまで２００bp切り返した
ものである。
【００２３】次の工程(iii)はプロテアーゼ感受性ルー
プl2を暗号化する遺伝子断片の試験管内合成である。こ
れは、従来の固相オリゴニュークレオチド合成方法によ
って行う。合成した後に付着させるＰst １及びＥco Ｒ
１リンカーを含むこの断片のシーケンスを下に示す：
プl2を暗号化する遺伝子断片の試験管内合成である。こ
れは、従来の固相オリゴニュークレオチド合成方法によ
って行う。合成した後に付着させるＰst １及びＥco Ｒ
１リンカーを含むこの断片のシーケンスを下に示す：
【化１】
【００２４】次の工程（ｉｖ）は、工程(ii)からのＢ"
暗号化断片と工程(iii)からのl2暗号化断片とをpＵＣ８
上のＢam Ｈ１−Ｅco Ｒ １サイトにクローンするもの
である。次に天然源からか或はオリゴニュークレオチド
合成によるかして細胞特異性配位子の一部を暗号化する
所望の断片を与える。例えば、α及びβＭＳＨの特定の
結合部分を暗号化する遺伝子断片は従来の固相オリゴニ
ュークレオチド合成を経て合成することができる。それ
らの遺伝子断片のＤＮＡシーケンスを適当なリンカーと
共に以下に示す:α−ＭＳＨ:
暗号化断片と工程(iii)からのl2暗号化断片とをpＵＣ８
上のＢam Ｈ１−Ｅco Ｒ １サイトにクローンするもの
である。次に天然源からか或はオリゴニュークレオチド
合成によるかして細胞特異性配位子の一部を暗号化する
所望の断片を与える。例えば、α及びβＭＳＨの特定の
結合部分を暗号化する遺伝子断片は従来の固相オリゴニ
ュークレオチド合成を経て合成することができる。それ
らの遺伝子断片のＤＮＡシーケンスを適当なリンカーと
共に以下に示す:α−ＭＳＨ:
【化２】 なお、上記したＰst１リンカー、ＥcoＲ１リンカー及び
ＢamＨ１リンカーは、それぞれ制限酵素Ｐst１、ＥcoＲ
１及びＢamＨ１で認識される部位を持ったＤＮＡの短鎖
を指称し、ニュー・イングランド・バイオラブス（New
England Biolabs.)から入手可能である。
ＢamＨ１リンカーは、それぞれ制限酵素Ｐst１、ＥcoＲ
１及びＢamＨ１で認識される部位を持ったＤＮＡの短鎖
を指称し、ニュー・イングランド・バイオラブス（New
England Biolabs.)から入手可能である。
【００２５】pＵＣ８の独特のＰst １及びＥco Ｒ １サ
イトは、上記合成ＭＳＨシーケンスのどちらかのl2暗号
化断面より下流をサブクローニングさせる。最終的に
(工程vi)、フラグメントＡ暗号化遺伝子断片をβ"−l2
−ＭＳＨを暗号化する遺伝子断片に融合して第４図(暗
号化したタンパク質断片に関して標識をつける)に示す
ように遺伝子融合を完了し、選択した種類の細胞(この
場合、メラニン細胞)に選択的に結合して攻撃する混成
タンパク質に遺伝情報を指定する。
イトは、上記合成ＭＳＨシーケンスのどちらかのl2暗号
化断面より下流をサブクローニングさせる。最終的に
(工程vi)、フラグメントＡ暗号化遺伝子断片をβ"−l2
−ＭＳＨを暗号化する遺伝子断片に融合して第４図(暗
号化したタンパク質断片に関して標識をつける)に示す
ように遺伝子融合を完了し、選択した種類の細胞(この
場合、メラニン細胞)に選択的に結合して攻撃する混成
タンパク質に遺伝情報を指定する。
【００２６】適当なポリペプチド配位子の別の例は物質
Ｐであり、それの利用については先に説明している。α
又はβＭＳＨ遺伝子よりもむしろ物質Ｐ遺伝子を含有す
る融合遺伝子を基本的には先に概説したように作る。物
質Ｐ遺伝子は従来の固相オリゴニュークレオチド合成を
用いて合成する。物質Ｐ遺伝子シーケンスは、CGTCCTAA
ACCTCAGCAGTTCTTCGGTCGGTCTGATGである。上記から明ら
かなように、ポリペプチド配位子についての遺伝シーケ
ンスの部分は対応するアミノ酸シーケンスが混成タンパ
ク質を所定の種類の細胞に結合させ得るに十分なもので
なければならない。好ましくは、ポリペプチドホルモン
についての遺伝子は配位子の結合領域についての遺伝シ
ーケンスの全て又はほとんどを含むであろう。
Ｐであり、それの利用については先に説明している。α
又はβＭＳＨ遺伝子よりもむしろ物質Ｐ遺伝子を含有す
る融合遺伝子を基本的には先に概説したように作る。物
質Ｐ遺伝子は従来の固相オリゴニュークレオチド合成を
用いて合成する。物質Ｐ遺伝子シーケンスは、CGTCCTAA
ACCTCAGCAGTTCTTCGGTCGGTCTGATGである。上記から明ら
かなように、ポリペプチド配位子についての遺伝シーケ
ンスの部分は対応するアミノ酸シーケンスが混成タンパ
ク質を所定の種類の細胞に結合させ得るに十分なもので
なければならない。好ましくは、ポリペプチドホルモン
についての遺伝子は配位子の結合領域についての遺伝シ
ーケンスの全て又はほとんどを含むであろう。
【００２７】上記実施例のように、一般に、クローニン
グベクター、例えばファージ又はプラスミドを用いて巧
妙な操作を行う。ポリペプチド配位子の結合領域に遺伝
情報を指定する遺伝物質はクローン化ＤＮＡ或は合成オ
リゴニュークレオチドシーケンスのどちらかにすること
ができ、どちらも用いる特別の配位子遺伝子に対して一
層便利である。融合遺伝子は、通常、培養微生物を形質
転換するのに用いられるクローニングベクター、例えば
プラスミド又はファージの上に存在する。次に、従来技
術を用いて混成タンパク質を細胞の培養基から採取す
る。
グベクター、例えばファージ又はプラスミドを用いて巧
妙な操作を行う。ポリペプチド配位子の結合領域に遺伝
情報を指定する遺伝物質はクローン化ＤＮＡ或は合成オ
リゴニュークレオチドシーケンスのどちらかにすること
ができ、どちらも用いる特別の配位子遺伝子に対して一
層便利である。融合遺伝子は、通常、培養微生物を形質
転換するのに用いられるクローニングベクター、例えば
プラスミド又はファージの上に存在する。次に、従来技
術を用いて混成タンパク質を細胞の培養基から採取す
る。
【００２８】発明の混成タンパク質を、ポリペプチド配
位子が選択的に結合することができる望ましくない種類
の細胞の存在を特徴とする医療疾患、例えば癌にかかっ
ている哺乳動物、例えば人間に投与する。タンパク質の
投与量は、病気の種類、病気の広がり、病気にかかって
いる哺乳動物の大きさ及び種と共に変わる。量は、通
常、癌の治療に用いられるその他の細胞毒性剤について
用いられる量の範囲にあるが、ある場合には混成タンパ
ク質の特異性から一層少い量を必要とするであろう。
位子が選択的に結合することができる望ましくない種類
の細胞の存在を特徴とする医療疾患、例えば癌にかかっ
ている哺乳動物、例えば人間に投与する。タンパク質の
投与量は、病気の種類、病気の広がり、病気にかかって
いる哺乳動物の大きさ及び種と共に変わる。量は、通
常、癌の治療に用いられるその他の細胞毒性剤について
用いられる量の範囲にあるが、ある場合には混成タンパ
ク質の特異性から一層少い量を必要とするであろう。
【００２９】混成タンパク質は、任意の従来方法、例え
ば、注射、時限放出挿入管(timed−releuse implunt)に
よる方法を用いて投与することができる。ＭＳＨ混成物
の場合、局所クリームを用いて初期癌細胞を殺すことが
できる。注射又は挿入管を用いて転移細胞を殺すことが
できる。混成タンパク質を毒性の無い、製薬上容認し得
る任意の担体物質と組み合わせることができる。
ば、注射、時限放出挿入管(timed−releuse implunt)に
よる方法を用いて投与することができる。ＭＳＨ混成物
の場合、局所クリームを用いて初期癌細胞を殺すことが
できる。注射又は挿入管を用いて転移細胞を殺すことが
できる。混成タンパク質を毒性の無い、製薬上容認し得
る任意の担体物質と組み合わせることができる。
【図１】 ジフテリア毒素分子の図式的説明である。
【図２】 本発明の混成タンパク質分子の図式説明であ
る。
る。
【図３】 コリネファージ(corynephage)βトックスの
３.９kb Ｂam Ｈ−Ｉ制限断片におけるジフテリアトッ
クス(tox)オペロンの位置及び配置を示す制限図(restri
ction map)(野生型トックス対立遺伝子に見られず、突
然変異体トックス228対立遺伝子のみに見られるＮＲＵ
Ｉサイトを含む)である。
３.９kb Ｂam Ｈ−Ｉ制限断片におけるジフテリアトッ
クス(tox)オペロンの位置及び配置を示す制限図(restri
ction map)(野生型トックス対立遺伝子に見られず、突
然変異体トックス228対立遺伝子のみに見られるＮＲＵ
Ｉサイトを含む)である。
【図４】 本発明の混成タンパク質を暗号化する本発明
の融合遺伝子の図式的説明である(暗号化されたタンパ
ク質断片を参照にして、遺伝子断片に標識を付ける)。
の融合遺伝子の図式的説明である(暗号化されたタンパ
ク質断片を参照にして、遺伝子断片に標識を付ける)。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年６月３０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１４】発明の混成タンパク質は、好ましくは、混
成タンパク質を暗号化する所望の融合遺伝子を形成し、
次に、従来の方法を用いて融合遺伝子を表現することを
含むＤＮＡ組換え技術を用いて作る。第３図を参照し
て、コリネファーゼβトックス＋の３.９kb Ｂam Ｈ−
Ｉ制限断片上のジフテリアトックスオペロンの位置及び
配置はトックスオペロンを所望の位置で開裂させ、かつ
オペロンの所望の部分を選択したポリペプチド配位子に
ついて遺伝子の所望の部分に融合させる。トックスオペ
ロンについての一層詳細な説明及びフラグメントＡのク
ローニングについての説明はレオング等(１９８３)サイ
エンス２２０巻,５１５頁に載っており、参照して本明
細書に援用している。本明細書において説明するように
クローンを発生させてプラスミドpＤＴ２０１を作るフ
ラグメントＡを１９８３年５月１１日、メリーランド,
ロックビル,アミリカンタイプカルチュアコレクション
に寄託してＡＴＣＣ受入れ(Ａccession)第３９３５９号
を与えられた。
成タンパク質を暗号化する所望の融合遺伝子を形成し、
次に、従来の方法を用いて融合遺伝子を表現することを
含むＤＮＡ組換え技術を用いて作る。第３図を参照し
て、コリネファーゼβトックス＋の３.９kb Ｂam Ｈ−
Ｉ制限断片上のジフテリアトックスオペロンの位置及び
配置はトックスオペロンを所望の位置で開裂させ、かつ
オペロンの所望の部分を選択したポリペプチド配位子に
ついて遺伝子の所望の部分に融合させる。トックスオペ
ロンについての一層詳細な説明及びフラグメントＡのク
ローニングについての説明はレオング等(１９８３)サイ
エンス２２０巻,５１５頁に載っており、参照して本明
細書に援用している。本明細書において説明するように
クローンを発生させてプラスミドpＤＴ２０１を作るフ
ラグメントＡを１９８３年５月１１日、メリーランド,
ロックビル,アミリカンタイプカルチュアコレクション
に寄託してＡＴＣＣ受入れ(Ａccession)第３９３５９号
を与えられた。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１６】フラグメントＤはそれを単に励起させるこ
とによってトックスオペロンからＳau ３Ａ Ｉ及びＳＰ
ＨＩにおける開裂を経て得ることができるはずである。
代りに、遺伝子断片を次の通りに互いに融合することが
できる。初めにフラグメントＡを暗号化する遺伝子断片
を得る。次に、Ｓau ３Ａ ＩからＳau ３Ａ Ｉまで(第
３図のＢ')フラグメントＢのほとんどを暗号化する遺伝
子断片を得る。フラグメントＢ'を暗号化する遺伝子を
プラスミドpＵＣ８中でクローンを発生させてプラスミ
ドpＤＴ３０１を作り、１９８３年５月１１日メリーラ
ンド・ロックビル,アメリカンタイプカルチャーコレク
ションに寄託し、ＡＴＣＣ受け入れ第３９３６０号を与
えられた。フラグメントＢ'は酵素Ｄal ３ １を用いて
トックス228の上のＮＲＵＩサイト(野生型トックス対立
遺伝子はＮＲＵＩサイトを持たない)の位置まで約２０
０bp切り返してＢ"(第３図)を与える。フラグメントＡ
及びＢ"を融合し、l2を暗号化する断片をＢ"に融合し、
ポリペプチド配位子の所望の部分を暗号化する断片をl2
に融合する。
とによってトックスオペロンからＳau ３Ａ Ｉ及びＳＰ
ＨＩにおける開裂を経て得ることができるはずである。
代りに、遺伝子断片を次の通りに互いに融合することが
できる。初めにフラグメントＡを暗号化する遺伝子断片
を得る。次に、Ｓau ３Ａ ＩからＳau ３Ａ Ｉまで(第
３図のＢ')フラグメントＢのほとんどを暗号化する遺伝
子断片を得る。フラグメントＢ'を暗号化する遺伝子を
プラスミドpＵＣ８中でクローンを発生させてプラスミ
ドpＤＴ３０１を作り、１９８３年５月１１日メリーラ
ンド・ロックビル,アメリカンタイプカルチャーコレク
ションに寄託し、ＡＴＣＣ受け入れ第３９３６０号を与
えられた。フラグメントＢ'は酵素Ｄal ３ １を用いて
トックス228の上のＮＲＵＩサイト(野生型トックス対立
遺伝子はＮＲＵＩサイトを持たない)の位置まで約２０
０bp切り返してＢ"(第３図)を与える。フラグメントＡ
及びＢ"を融合し、l2を暗号化する断片をＢ"に融合し、
ポリペプチド配位子の所望の部分を暗号化する断片をl2
に融合する。
Claims (31)
- 【請求項１】 ペプチド結合によって互いに結合した、
毒素の断片と細胞特異性ポリペプチド配位子の断片を含
む、混成タンパク質であって、 タンパク質の断片が毒性効果を示す上記毒素の酵素活性
部分を含み、かつ上記毒素の普遍化された真核性結合部
位部分をコードする領域を含まず、 上記配位子の断片が少なくとも上記混成タンパク質を予
定された類の細胞に選択的に結合させるのに効果がある
上記配位子の部分を含んでおり、 これによって上記混成タンパク質が予定された類の細胞
に選択的に結合し、当該細胞を死滅させる混成タンパク
質。 - 【請求項２】 毒素の断片が当該毒素のインターナリゼ
ーションを原因する当該毒素の成分を含み、混成タンパ
ク質が予定した類の細胞に選択的に結合し、それが結合
した細胞内によってインターナライズされ、当該細胞を
死滅させるものである請求項１記載の混成タンパク質。 - 【請求項３】 毒素のインターナリゼーションを原因す
る当該毒素の部分が疎水性である、請求項２記載の混成
タンパク質。 - 【請求項４】 毒素の部分が開裂ドメインを含んでい
る、請求項１〜３のいずれかに記載の混成タンパク質。 - 【請求項５】 毒素がジフテリア毒素である、請求項１
〜４のいずれかに記載の混成タンパク質。 - 【請求項６】 ジフテリア毒素の部分が（ａ）ジフテリ
ア毒素の酵素活性断片Ａをコードする領域、（ｂ）ジフ
テリア毒素の断片Ａに隣接した開裂ドメインｌ1を含む
断片をコードする領域、および（ｃ）ジフテリア毒素の
断片Ｂの疎水性ドメインの少なくとも一部を含み、上記
断片Ｂの普遍化された真核性結合部位を含まない断片を
コードする領域を含んでいる、請求項５記載の混成タン
パク質。 - 【請求項７】 ポリペプチド配位子がインターロイキン
である、請求項１記載の混成タンパク質。 - 【請求項８】 インターロイキンがインターロイキン−
IIである、請求項７記載の混成タンパク質。 - 【請求項９】 ポリペプチド配位子がホルモンである、
請求項１記載の混成タンパク質。 - 【請求項１０】 ポリペプチドホルモンの部分が混成タ
ンパク質を悪性メラニン細胞に結合させるのに有効なα
またはβメラニン細胞刺激ホルモンの部分である、請求
項９記載の混成タンパク質。 - 【請求項１１】 ポリペプチドホルモンの部分が混成タ
ンパク質をＴ細胞に結合させるのに有効なインターロイ
キン−Iの部分である、請求項９記載の混成タンパク
質。 - 【請求項１２】 ポリペプチドホルモンの部分が混成タ
ンパク質をＴ細胞に結合させるのに有効なインターロイ
キン−IIの部分である、請求項９記載の混成タンパク
質。 - 【請求項１３】 ポリペプチドホルモンの部分が混成タ
ンパク質をＴ細胞に結合させるのに有効なインターロイ
キン−IIIの部分である、請求項９記載の混成タンパク
質。 - 【請求項１４】 ペプチド結合によって互いに接合した
タンパク質断片から成る混成タンパク質であって、該混
成タンパク質のアミノ末端に始まり、順番に、 a) ジフテリア毒素の酵素活性なフラグメントＡと、 b) ジフテリア毒素の該フラグメントＡに隣接した開裂
領域l1を含む断片と、 c) l1とトックス228対立遺伝子のＮＲＵ1サイトのトッ
クスオペロン上の位置から約９０塩基対上流の位置との
間のトックスオペロンの遺伝子断片を暗号化するフラグ
メントＢの部分によって暗号化されたジフテリア毒素の
フラグメントＢの少くとも部分から成る断片と、 d) 細胞特異性ポリペプチド配位子の一部分から成り、
該部分は該ポリペプチド配位子の結合領域の少くとも一
部分を含み、該結合領域の該部分は該混成タンパク質を
所定の種類の細胞に選択的に結合させて該酵素活性なフ
ラグメントＡによって攻撃されるようにするのに有効で
ある断片とから成る請求項１記載の混成タンパク質。 - 【請求項１５】 前記断片c)をl1とＮＲＵ1サイトの前
記位置との間の遺伝子断片を暗号化するフラグメントＢ
の部分によって暗号化する請求項１４記載の混成タンパ
ク質。 - 【請求項１６】 断片c)とd)との間の断片l2から成る請
求項１４又は１５記載の混成タンパク質。 - 【請求項１７】 前記混成タンパク質を、前記タンパク
質断片を暗号化する領域から成る融合遺伝子によって暗
号化する請求項１４記載の混成タンパク質。 - 【請求項１８】 前記ポリペプチド配位子がホルモンで
ある請求項１４記載の混成タンパク質。 - 【請求項１９】 前記ポリペプチドホルモンの前記部分
が、前記混成タンパク質を悪性のメラノサイト細胞に結
合させるに有効なα又はβメラニン細胞刺激ホルモンで
ある請求項１８記載の混成タンパク質。 - 【請求項２０】 前記ポリペプチドホルモンの前記部分
が前記混成タンパク質を痛みレセプターニューロンに結
合させるのに有効な物質Ｐの部分である請求項１８記載
の混成タンパク質。 - 【請求項２１】 前記ポリペプチドホルモンの前記部分
が前記混成タンパク質をＴ細胞に結合させるのに有効な
インターロイキンIの一部である請求項１８記載の混成
タンパク質。 - 【請求項２２】 前記ポリペプチドホルモンの前記部分
が前記混成タンパク質をＴ細胞に結合させるのに有効な
インターロイキンIIの一部である請求項１８記載の混成
タンパク質。 - 【請求項２３】 前記ポリペプチドホルモンの前記部分
が前記混成タンパク質をＴ細胞に結合させるのに有効な
インターロイキンIIIの一部である請求項１８記載の混
成タンパク質。 - 【請求項２４】 混成タンパク質をコードする遺伝子を
ベクターに挿入し、このベクターで宿主細胞を形質転換
し、この形質転換された細胞を培養して混成タンパク質
を産生せしめ、この産生した混成タンパク質を回収する
ことからなる混成タンパク質の製造法において、 当該遺伝子が、毒素をコードする遺伝子断片と細胞特異
性ポリペプチド配位子をコードする遺伝子の断片を含む
融合遺伝子であって、 毒素遺伝子の断片が当該毒素の酵素活性部分をコードす
る領域を含み、かつ当該毒素の普遍化された真核性結合
部位部分をコードする領域を含まず、 上記ポリペプチド配位子をコードする遺伝子の断片が混
成タンパク質を予め予定された類の細胞に選択的に結合
させるのに有効である配位子の部分をコードしているも
のである方法。 - 【請求項２５】 毒素遺伝子断片が当該毒素のインター
ナリゼーションを原因する当該毒素の部分をコードする
領域を含んでいる、請求項２４記載の方法。 - 【請求項２６】 毒素のインターナリゼーションを原因
する当該毒素の部分をコードする領域が疎水性である、
請求項２５記載の方法。 - 【請求項２７】 毒素の部分が開裂ドメインをコードす
る領域を含んでいる、請求項２４記載の方法。 - 【請求項２８】 当該毒素がジフテリア毒素である、請
求項２４記載の方法。 - 【請求項２９】 上記ジフテリア毒素遺伝子の断片が
（ａ）ジフテリア毒素の酵素活性断片Ａをコードする領
域、（ｂ）ジフテリア毒素の断片Ａに隣接した開裂ドメ
インｌ1を含む断片をコードする領域、（ｃ）少なくと
もジフテリア毒素の断片Ｂの疎水性ドメインの一部を含
み、上記断片Ｂの普遍化された真核性結合部位を含まな
い断片をコードする領域を含んでいる、請求項２８記載
の方法。 - 【請求項３０】 ポリペプチド配位子がインターロイキ
ンである、請求項２４記載の方法。 - 【請求項３１】 インターロイキンがインターロイキン
−IIである、請求項３０記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US37738682A | 1982-05-12 | 1982-05-12 | |
| US377386 | 1995-01-23 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58502198A Division JP2534222B2 (ja) | 1982-05-12 | 1983-05-12 | 混成タンパク質生産用融合遺伝子 |
Publications (1)
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|---|---|
| JPH06239896A true JPH06239896A (ja) | 1994-08-30 |
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Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58502198A Expired - Lifetime JP2534222B2 (ja) | 1982-05-12 | 1983-05-12 | 混成タンパク質生産用融合遺伝子 |
| JP5150349A Pending JPH06239896A (ja) | 1982-05-12 | 1993-06-22 | 混成タンパク質 |
| JP8022430A Pending JPH08228777A (ja) | 1982-05-12 | 1996-02-08 | 混成タンパク質生産用融合遺伝子 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58502198A Expired - Lifetime JP2534222B2 (ja) | 1982-05-12 | 1983-05-12 | 混成タンパク質生産用融合遺伝子 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8022430A Pending JPH08228777A (ja) | 1982-05-12 | 1996-02-08 | 混成タンパク質生産用融合遺伝子 |
Country Status (12)
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| JP (3) | JP2534222B2 (ja) |
| AT (1) | ATE25197T1 (ja) |
| AU (1) | AU573529B2 (ja) |
| DE (1) | DE3369466D1 (ja) |
| ES (1) | ES8407097A1 (ja) |
| FI (1) | FI79120C (ja) |
| IT (1) | IT1203672B (ja) |
| NO (1) | NO176575C (ja) |
| NZ (1) | NZ204229A (ja) |
| WO (1) | WO1983003971A1 (ja) |
Families Citing this family (115)
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|---|---|---|---|---|
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| FR2549855B1 (fr) * | 1983-07-29 | 1987-03-27 | Grp Genie Genetique | Sequence nucleotidique codant pour le peptide signal de la toxine diphterique, vecteur contenant cette sequence nucleotidique, leur application a la transformation de micro-organismes et compositions peptidiques obtenues |
| DE3346953A1 (de) * | 1983-12-24 | 1985-08-14 | Organogen Medizinisch-Molekularbiologische Forschungsgesellschaft mbH, 6900 Heidelberg | Cardiodilatin, ein neues peptidhormon und verfahren zu seiner herstellung |
| ATE68703T1 (de) * | 1984-02-08 | 1991-11-15 | Cetus Corp | Toxinkonjugate. |
| US6022950A (en) * | 1984-06-07 | 2000-02-08 | Seragen, Inc. | Hybrid molecules having translocation region and cell-binding region |
| US5668255A (en) * | 1984-06-07 | 1997-09-16 | Seragen, Inc. | Hybrid molecules having translocation region and cell-binding region |
| ES8708014A1 (es) * | 1984-06-07 | 1987-09-01 | Murphy John R | Un procedimiento para preparar un gen fusionado que codifica una proteina hibrida susceptible de marcado y empleo en diagnosis. |
| US5807715A (en) * | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
| GB8422238D0 (en) * | 1984-09-03 | 1984-10-10 | Neuberger M S | Chimeric proteins |
| US6103243A (en) * | 1985-05-15 | 2000-08-15 | Biotechnology Australia Pty, Ltd | Oral vaccines |
| IL78775A (en) * | 1985-05-15 | 1992-06-21 | Biotech Australia Pty Ltd | Oral vaccines |
| US5169939A (en) * | 1985-05-21 | 1992-12-08 | Massachusetts Institute Of Technology & Pres. & Fellows Of Harvard College | Chimeric antibodies |
| US5336489A (en) * | 1985-09-05 | 1994-08-09 | The Beth Israel Hospital Association | Treatment of allograft rejection with IL-2 receptor-specific cytotoxins |
| US5011684A (en) * | 1985-09-05 | 1991-04-30 | Beth Israel Hospital Association | Lysing or blocking unwanted cells with IL-2 receptor-specific binding substance |
| US5618920A (en) * | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
| US5576195A (en) * | 1985-11-01 | 1996-11-19 | Xoma Corporation | Vectors with pectate lyase signal sequence |
| WO1987002987A1 (en) * | 1985-11-13 | 1987-05-21 | Murphy John R | Cys codon-modified dna |
| US4962188A (en) * | 1985-12-06 | 1990-10-09 | Cetus Corporation | Recombinant ricin toxin A chain conjugates |
| US4892827A (en) * | 1986-09-24 | 1990-01-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Recombinant pseudomonas exotoxins: construction of an active immunotoxin with low side effects |
| US6051405A (en) * | 1986-09-24 | 2000-04-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Constructs encoding recombinant antibody-toxin fusion proteins |
| US5082927A (en) * | 1986-09-24 | 1992-01-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Selectively cytotoxic IL-4-PE40 fusion protein |
| US6893625B1 (en) | 1986-10-27 | 2005-05-17 | Royalty Pharma Finance Trust | Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen |
| IL84285A (en) * | 1986-10-27 | 1993-03-15 | Int Genetic Engineering | Chimeric antibody with specificity to human tumor antigen |
| IL85035A0 (en) * | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
| US5149788A (en) * | 1987-05-19 | 1992-09-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Purification of chimeric proteins containing an IL-2 moiety by receptor-affinity chromatography |
| US5270199A (en) * | 1987-08-20 | 1993-12-14 | The Children's Medical Center Corporation | Human mannose-binding protein |
| ATE165980T1 (de) * | 1987-08-20 | 1998-05-15 | Childrens Medical Center | Nukleinsaürefragmente, die mannose bindende fragmente vom menschlichen mannosebindenden protein kodieren |
| US5792458A (en) * | 1987-10-05 | 1998-08-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Mutant diphtheria toxin conjugates |
| US5084556A (en) * | 1987-10-23 | 1992-01-28 | Genetics Institute, Inc. | Composition of M-CSF conjugated to cytotoxic agents and a method for treating cancers characterized by over-expression of the c-fms proto-oncogene |
| AU2728588A (en) * | 1987-10-23 | 1989-05-23 | Genetics Institute Inc. | Composition and method for treating cancers characterized by over-expression of the c-fms proto-oncogene |
| US6004781A (en) * | 1988-01-22 | 1999-12-21 | The General Hospital Corporation | Nucleic acid encoding Ig-CD4 fusion proteins |
| FI102355B (fi) * | 1988-02-11 | 1998-11-30 | Squibb Bristol Myers Co | Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi |
| US5827934A (en) * | 1988-03-08 | 1998-10-27 | The University Of Wyoming | Cytotoxic diphtheria toxin fragments |
| US5582862A (en) * | 1988-04-04 | 1996-12-10 | General Hospital Corporation | Antibodies that bind to α2-antiplasmin crosslinked to fibrin which do not inhibit plasma α2-antiplasmin |
| US5372812A (en) * | 1988-04-04 | 1994-12-13 | The General Hospital Corporation | Composition and method for acceleration of clot lysis |
| US5290914A (en) * | 1988-04-28 | 1994-03-01 | Mycogen Corporation | Hybrid diphtheria-B.t. pesticidal toxins |
| WO1989011287A1 (en) * | 1988-05-19 | 1989-11-30 | The Beth Israel Hospital Association | Induction of tolerance to a foreign antigen |
| US5152980A (en) * | 1988-05-19 | 1992-10-06 | The Beth Israel Hospital Association | Induction of tolerance to a foreign antigen IL-2 receptor-binding substances |
| US5260422A (en) * | 1988-06-23 | 1993-11-09 | Anergen, Inc. | MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| US6106840A (en) * | 1988-06-23 | 2000-08-22 | Anergen, Inc. | MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| US5194425A (en) * | 1988-06-23 | 1993-03-16 | Anergen, Inc. | Mhc-mediated toxic conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| US5468481A (en) * | 1988-06-23 | 1995-11-21 | Amergen, Inc. | MHC class II-peptide conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| AU627477B2 (en) * | 1988-07-05 | 1992-08-27 | Amgen, Inc. | Interleukin ii analogs |
| US5169933A (en) * | 1988-08-15 | 1992-12-08 | Neorx Corporation | Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging |
| US5135736A (en) * | 1988-08-15 | 1992-08-04 | Neorx Corporation | Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging |
| US5609869A (en) * | 1988-08-19 | 1997-03-11 | The General Hospital Corporation | Hybrid immunoglobulin-thrombolytic enzyme molecules which specifically bind a thrombus, and methods of their production and use |
| US5811265A (en) * | 1988-08-19 | 1998-09-22 | The General Hospital Corporation | Hybrid immunoglobulin-thrombolytic enzyme molecules which specifically bind a thrombus, and methods of their production and use |
| US5632991A (en) * | 1988-11-14 | 1997-05-27 | Brigham & Women's Hospital | Antibodies specific for E-selectin and the uses thereof |
| JPH02169521A (ja) * | 1988-12-22 | 1990-06-29 | Ajinomoto Co Inc | 自己免疫疾患治療剤 |
| DE4004573A1 (de) * | 1989-02-17 | 1990-08-23 | Tanabe Seiyaku Co | Neues versuchstier und seine herstellung |
| US5621078A (en) * | 1989-03-22 | 1997-04-15 | Merck & Co., Inc. | Modified pseudomonas exotoxin PE40 |
| AU5355790A (en) * | 1989-04-19 | 1990-11-16 | Cetus Corporation | Multifunctional m-csf proteins and genes encoding therefor |
| AU641392B2 (en) * | 1989-04-21 | 1993-09-23 | Protein Design Laboratories, Inc. | Recombinant antibody-toxin fusion protein |
| IE901736L (en) * | 1989-05-17 | 1990-11-17 | Fuller H B Licensing Financ | Polypeptide-antibody conjugate for inhibiting cell adhesion |
| JPH04506662A (ja) * | 1989-07-14 | 1992-11-19 | アメリカン・サイアナミド・カンパニー | 接合体ワクチンのためのサイトカイニンおよびホルモンのキヤリヤー |
| US6207798B1 (en) | 1989-08-03 | 2001-03-27 | Merck & Co., Inc. | Modified PE40 toxin fusion proteins |
| AU648041B2 (en) * | 1989-08-23 | 1994-04-14 | General Hospital Corporation, The | Non-human primate CD4 polypeptides, fusions thereof, DNA encoding, and uses thereof |
| WO1991009871A1 (en) * | 1989-12-22 | 1991-07-11 | Seragen Incorporated | Hybrid molecules having translocation region and cell-binding region |
| US5340935A (en) * | 1990-01-05 | 1994-08-23 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | DNAS encoding proteins active in lymphocyte-medicated cytotoxicity |
| US5110912A (en) * | 1990-03-02 | 1992-05-05 | Seragen, Inc. | Purification of il-2-containing hybrid compounds |
| CA2076678C (en) * | 1990-03-02 | 1999-09-28 | Diane Williams | Improved chimeric toxins |
| US5137877B1 (en) * | 1990-05-14 | 1996-01-30 | Bristol Myers Squibb Co | Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production |
| EP0535088A4 (en) * | 1990-06-13 | 1994-11-23 | Univ Hospital Department Of Me | Chimeric toxins with improved inter-domain geometry |
| IL98528A0 (en) * | 1990-06-21 | 1992-07-15 | Merck & Co Inc | Pharmaceutical compositions containing hybrid for killing bladder cancer cells |
| NO175188C (no) * | 1990-06-27 | 1994-09-14 | Sjur Olsnes | Fremgangsmåte for fremstilling av et peptidkonjugat med evne til å trenge inn i cellecytosol |
| US5273889A (en) * | 1990-08-22 | 1993-12-28 | University Of Saskatchewan | Gamma-iterferon-leukotoxin gene fusions and uses thereof |
| US5594107A (en) * | 1990-08-22 | 1997-01-14 | University Of Saskatchewan | Chimeric protein comprising an RTX-family cytotoxin and interferon-2 or interferon |
| US5238823A (en) * | 1990-08-22 | 1993-08-24 | Veterinary Infectious Disease Organization | Interleukin-2-leukotoxin gene fusions and uses thereof |
| WO1992004455A1 (en) * | 1990-08-29 | 1992-03-19 | Genetics Institute, Inc. | Multidomain hematopoiesis stimulators |
| CA2069746A1 (en) * | 1990-09-28 | 1992-03-29 | Jonathan I. Rosen | Hybrid growth factors |
| WO1992006117A1 (en) * | 1990-09-28 | 1992-04-16 | Seragen, Inc. | Inhibiting unwanted immune responses |
| US5328984A (en) * | 1991-03-04 | 1994-07-12 | The United States As Represented By The Department Of Health & Human Services | Recombinant chimeric proteins deliverable across cellular membranes into cytosol of target cells |
| BR9205967A (pt) * | 1991-05-03 | 1994-07-26 | Seragen Inc | Moléculas marcadas com receptor de interleucina tratamento de artrite inflamatória |
| WO1993000917A1 (en) * | 1991-07-05 | 1993-01-21 | Seragen, Inc. | Epidermal growth factor receptor targeted molecules for treatment of inflammatory arthritis |
| US6146850A (en) * | 1991-11-04 | 2000-11-14 | Xoma Corporation | Proteins encoding gelonin sequences |
| US5837491A (en) * | 1991-11-04 | 1998-11-17 | Xoma Corporation | Polynucleotides encoding gelonin sequences |
| US5621083A (en) * | 1991-11-04 | 1997-04-15 | Xoma Corporation | Immunotoxins comprising ribosome-inactivating proteins |
| US5571507A (en) * | 1992-02-25 | 1996-11-05 | Seragen, Inc. | Methods of treating diabetes |
| GB9219562D0 (en) | 1992-03-11 | 1992-10-28 | Prendergast Kennet F | Anti-viral peptides |
| AU683413B2 (en) * | 1992-04-13 | 1997-11-13 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies specific for carcinoma-associated antigens |
| DK96493D0 (da) * | 1993-08-26 | 1993-08-26 | Mouritsen Og Elsner Aps | Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden |
| US5804452A (en) * | 1995-04-27 | 1998-09-08 | Quidel Corporation | One step urine creatinine assays |
| WO1997013410A1 (en) * | 1995-10-13 | 1997-04-17 | Boston Medical Center Corporation | Hybrid molecules containing amidated polypeptide binding ligands |
| DK0871490T3 (da) * | 1995-12-22 | 2003-07-07 | Bristol Myers Squibb Co | Forgrenede hydrazonlinkere |
| EP0833666B1 (en) * | 1996-04-10 | 2003-12-10 | Sangstat Medical Corporation | Cytomodulating conjugates of members of specific binding pairs |
| WO1998012329A2 (en) * | 1996-09-20 | 1998-03-26 | The General Hospital Corporation | Composition and method for enhancing fibrinolysis using antibodies to alpha-2-antiplasmin |
| AU6587998A (en) * | 1997-03-27 | 1998-10-20 | Demeter Biotechnologies, Ltd. | Ligand/lytic peptide compositions and methods of use |
| US6635740B1 (en) | 1997-03-27 | 2003-10-21 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Ligand/lytic peptide compositions and methods of use |
| US7741435B2 (en) * | 1997-07-09 | 2010-06-22 | Advanced Targeting Systems, Inc. | Substance P-saporin (SP-SAP) conjugates and methods of use thereof |
| US6251866B1 (en) | 1997-08-05 | 2001-06-26 | Watson Laboratories, Inc. | Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor |
| US6680058B1 (en) | 1997-09-03 | 2004-01-20 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Compositions and methods for contraception in or sterilization of mammals |
| US6399575B1 (en) * | 1998-11-10 | 2002-06-04 | Auburn University | Methods and compositions for targeting compounds to the central nervous system |
| EP1233781A1 (en) * | 1999-11-24 | 2002-08-28 | Oklahoma Medical Research Foundation | Assays and therapies for latent viral infection |
| AU5697001A (en) * | 2000-03-31 | 2001-10-15 | Purdue Research Foundation | Method of treatment using ligand-immunogen conjugates |
| AU7593001A (en) * | 2000-07-14 | 2002-01-30 | Zycos Inc | Alpha-msh related compounds and methods of use |
| KR20030068536A (ko) * | 2000-09-11 | 2003-08-21 | 다나-파버 캔서 인스티튜트 | Ｍｕｃ1 세포외 도메인 및 이로부터 유래된 암 치료조성물과 방법 |
| EP1531842A4 (en) * | 2000-12-22 | 2007-03-07 | Dana Farber Cancer Inst Inc | REGULATION OF CELL GROWTH BY MUC1 |
| CA2443666A1 (en) * | 2001-04-06 | 2002-10-17 | University Of Rochester | Suppression of androgen receptor transactivation through new pathways to ar and ar coactivators and repressors |
| GB0112687D0 (en) * | 2001-05-24 | 2001-07-18 | Microbiological Res Authority | Pharmaceutical use of secreted bacterial effector proteins |
| EP1409551A4 (en) * | 2001-06-21 | 2004-10-13 | Uab Research Foundation | CHEMICAL CAPSIDE PROTEINS AND USES THEREOF |
| US20040002058A1 (en) * | 2001-06-21 | 2004-01-01 | Uab Research Foundation | Chimeric capsid proteins and uses thereof |
| US20030124742A1 (en) * | 2001-08-22 | 2003-07-03 | Prakash Ramesh K. | Conjugates targeted to target receptors |
| ATE451935T1 (de) * | 2001-09-28 | 2010-01-15 | Purdue Research Foundation | Behandlungsverfahren mit liganden- immunogenkonjugaten |
| US6846484B2 (en) | 2001-12-28 | 2005-01-25 | Regents Of The University Of Minnesota | DTAT fusion toxin |
| WO2004092339A2 (en) * | 2003-04-11 | 2004-10-28 | Ilex Products, Inc. | Modulation of muc1 mediated signal transduction |
| US20060257428A1 (en) * | 2003-08-22 | 2006-11-16 | Harley John B | Assays and therapies for latent viral infection |
| WO2005042573A1 (en) | 2003-10-24 | 2005-05-12 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Modulation of the interaction of muc1 with muc1 ligands |
| US7585942B2 (en) * | 2003-11-25 | 2009-09-08 | Anjin Corporation | Diphtheria toxin variant |
| US20070202134A1 (en) * | 2004-02-23 | 2007-08-30 | Kufe Donald W | Muc1 Antagonist Enhancement of Death Receptor Ligand-Induced Apoptosis |
| WO2006115509A2 (en) | 2004-06-24 | 2006-11-02 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Small molecule immunopotentiators and assays for their detection |
| CA3007075C (en) | 2006-09-07 | 2019-10-15 | Arthur E. Frankel | Methods and compositions based on diphtheria toxin-interleukin-3 conjugates |
| WO2008097840A2 (en) | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions relating to the regulation of muc1 by hsf1 and stat3 |
| US7871784B2 (en) * | 2007-02-02 | 2011-01-18 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions relating to the regulation of apoptosis by MUC1 and BH3-containing proapoptotic proteins |
| ES2631507T3 (es) | 2008-10-29 | 2017-08-31 | China Synthetic Rubber Corporation | Procedimientos y agentes para el diagnóstico y tratamiento del carcinoma hepatocelular |
| WO2012068463A2 (en) | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Beth Israel Deaconess Medicall Center, Inc. | Methods of treating obesity by inhibiting nicotinamide n-methyl transferase (nnmt) |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4201770A (en) * | 1973-05-07 | 1980-05-06 | The Ohio State University | Antigenic modification of polypeptides |
| US4302386A (en) * | 1978-08-25 | 1981-11-24 | The Ohio State University | Antigenic modification of polypeptides |
| US4082613A (en) * | 1976-04-23 | 1978-04-04 | The Regents Of The University Of Minnesota | Process for the production of insulin by genetically transformed fungal cells |
| EP0000938B1 (en) * | 1977-08-22 | 1984-10-17 | National Research Development Corporation | Macromolecular covalent conjugates, methods for preparing and pharmaceutical compositions containing them |
| US4336336A (en) * | 1979-01-12 | 1982-06-22 | President And Fellows Of Harvard College | Fused gene and method of making and using same |
| JPS5616418A (en) * | 1979-07-20 | 1981-02-17 | Teijin Ltd | Antitumor protein complex and its preparation |
| JPS5686121A (en) * | 1979-12-14 | 1981-07-13 | Teijin Ltd | Antitumor proten complex and its preparation |
| FR2493846A1 (fr) * | 1980-11-10 | 1982-05-14 | Delbarre B | Derives du 4h-benzo(4,5)cyclohepta(1,2-b)furanne, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments |
| US4394443A (en) * | 1980-12-18 | 1983-07-19 | Yale University | Method for cloning genes |
| FR2504010B1 (fr) * | 1981-04-15 | 1985-10-25 | Sanofi Sa | Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation |
-
1983
- 1983-05-12 ES ES522315A patent/ES8407097A1/es not_active Expired
- 1983-05-12 EP EP83902148A patent/EP0108146B1/en not_active Expired
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- 1983-05-12 DE DE8383902148T patent/DE3369466D1/de not_active Expired
- 1983-05-12 IT IT67525/83A patent/IT1203672B/it active
- 1983-05-12 WO PCT/US1983/000723 patent/WO1983003971A1/en active IP Right Grant
- 1983-05-12 AU AU17062/83A patent/AU573529B2/en not_active Expired
- 1983-05-13 NZ NZ204229A patent/NZ204229A/en unknown
-
1984
- 1984-01-11 NO NO840089A patent/NO176575C/no unknown
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-
1985
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-
1993
- 1993-06-22 JP JP5150349A patent/JPH06239896A/ja active Pending
-
1996
- 1996-02-08 JP JP8022430A patent/JPH08228777A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| JPS59500814A (ja) | 1984-05-10 |
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| ES8407097A1 (es) | 1984-08-16 |
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