JPH0622780A - 新規真菌株及びそれを用いた抗生物質産生方法 - Google Patents

新規真菌株及びそれを用いた抗生物質産生方法

Info

Publication number
JPH0622780A
JPH0622780A JP5061492A JP6149293A JPH0622780A JP H0622780 A JPH0622780 A JP H0622780A JP 5061492 A JP5061492 A JP 5061492A JP 6149293 A JP6149293 A JP 6149293A JP H0622780 A JPH0622780 A JP H0622780A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
lovastatin
aspergillus
producing
strain
fungal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP5061492A
Other languages
English (en)
Inventor
S Dahya Jaguruupu
ジャグループ・エス・ダヒヤ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Teva Canada Ltd
Original Assignee
Novopharm Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from CA002062023A external-priority patent/CA2062023A1/en
Application filed by Novopharm Ltd filed Critical Novopharm Ltd
Publication of JPH0622780A publication Critical patent/JPH0622780A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A20/00—Water conservation; Efficient water supply; Efficient water use
    • Y02A20/40—Protecting water resources
    • Y02A20/402—River restoration

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 新規なロバスタチン生産性真菌変異株を作成
し、ロバスタチンの発酵生産に使用する。 【構成】 アスペルギルス・オリゼのような非ロバスタ
チン発現アスペルギルス株中にロバスタチン生産菌であ
るアスペルギルス・テレウスのＤＮＡをプロトプラスト
形質転換法により導入して得られたロバスタチン生産菌
を用いて、ロバスタチンを発酵生産させる。 【効果】 生成されたロバスタチンにより生産菌の細胞
壁が破壊されるので、抽出前に溶菌させる必要がなく、
ロバスタチン以外の夾雑物が少いためエステルや塩を形
成することなく溶媒抽出で回収できるので、抽出・精製
が容易である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は新規な遺伝子操作によって得られ
た真菌株と抗生物質製造におけるその使用に関する。更
に詳しくは、本発明はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ）の新規遺伝子操作株と薬物ロバスタチン及び
そのアナログの製造におけるそれらの使用に関する。
【０００２】ロバスタチンは化学的に〔１Ｓ−〔１α
（Ｒ＊），３α，７β，８β（２Ｓ＊，４Ｓ＊），８α
β〕〕−２−メチル酪酸１，２，３，７，８，８ａ−ヘ
キサヒドロ−３，７−ジメチル−８−〔２−（テトラヒ
ドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２
−イル）エチル〕−１−ナフタレニルエステルであり、
下記化学式を有する： ◎
【化１】 これは抗高コレステロール血症剤として有用であり、コ
レステロール生合成における律速酵素であるＨＭＧ−Ｃ
ｏＡレダクターゼの強力な阻害剤であり、選択された真
菌株を用いた発酵プロセスにより産生される真菌代謝産
物である。
【０００３】ロバスタチンのような抗生物質はその合成
にいくつかの酵素がセットで必要な代謝産物である。抗
生物質産生微生物を分子クローニングして抗生物質を産
生するためには数種の酵素の対応遺伝子の単離・分析が
必要でおそらく修正も要する。このような真菌種からこ
のような遺伝子を単離する試みではこれまでそのセット
の個別的遺伝子又は不完全な遺伝子セットを有するクロ
ーンしか得られていない。Ｍａｌｐａｒｔｉｄａ，Ｈｏ
ｐｗｏｏｄ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
ｏｆ ｔｈｅ Ｗｈｏｌｅ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
Ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ａ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ａｎｄ ｉｔｓ Ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａ Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ
Ｈｏｓｔ”（ストレプトミセス抗生物質の全生合成経路
の分子クローニング及び異種宿主におけるその発現），
Ｎａｔｕｒｅ（１９８４），３０９ｐｐ４６２−４６４
参照。
【０００４】Ｅｎｄｏのカナダ特許第１，１２９，７９
４号明細書は真菌種モナスカス・ルバー（Ｍｏｎａｓｃ
ｕｓ ｒｕｂｅｒ）の株を用いた発酵によるロバスタチ
ンの製造について記載している。Ｍｏｎａｇｈａｎらの
カナダ特許第１，１６１，３８０号明細書は真菌種にア
スペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔ
ｅｒｒｅｕｓ）の株を用いた発酵によるロバスタチンの
製造について記載している。
【０００５】これら従来技術プロセスではロバスタチン
はかなりの量の他の非常に類似した化合物と一緒に産生
されるため、それらの分離が必要となる。モナスカス・
ルバーを用いた場合、ロバスタチンはモナコリンＪと同
時に生じる。アスペルギルス・テレウスを用いた場合、
ロバスタチンはジヒドロロバスタチン及びそのヒドロキ
シ酸と同時に生産される。ヒドロキシ酸はロバスタチン
に容易にラクトン化されうるが、ジヒドロロバスタチン
は分離されねばならない。
【０００６】ロバスタチンを産生する発酵プロセスにお
いて使用できる新規な遺伝子工学変異真菌株を提供する
ことが本発明の目的である。このような株を用いた発酵
によるロバスタチンの新規製造方法を提供することも本
発明のもう１つの目的である。本発明の一面によればア
スペルギルス属の適切な種の新規変異真菌株が提供され
るが、これはロバスタチンを発現及び分泌できるもので
ある。これらの株はロバスタチン産生アスペルギルス・
テレウス株のＤＮＡに由来する機能的に関連したロバス
タチン産生酵素セットの遺伝子を含む。Ａ．オリゼ
（Ａ．ｏｒｙｚａｅ）、Ａ．フミガタス（Ａ．ｆｕｍｉ
ｇａｔｕｓ）、Ａ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、Ａ．ニ
ジュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びＡ．フラブス
（Ａ．ｆｌａｖｕｓ）から選択される他の非ロバスタチ
ン産生アスペルギルス種を、適切な選択マーカーを有す
るロバスタチン産生アスペルギルス・テレウス株からの
ＤＮＡによりプロトプラスト形質転換させ、選択マーカ
ーに基いてこうして形成された形質転換株を選択し、ロ
バスタチン産生形質転換株を同定及び単離し、そのサブ
クローニングを行うプロセスによりこれら変異真菌株は
作られる。
【０００７】本発明のもう１つの面によれば、アスペル
ギルス・テレウスに由来しロバスタチン産生酵素の一組
をコードする遺伝子を含む形質転換アスペルギルス菌に
より栄養培地を発酵させ、生成したロバスタチンを回収
することからなるロバスタチン製造方法が提供される。
本発明のプロセスはアスペルギルス・テレウスを用いた
プロセスと比較してロバスタチンと同時に生産される夾
雑ジヒドロロバスタチン及びヒドロキシ酸誘導体の量が
有意に少ない。
【０００８】本発明の形質転換株を得るプロセスにおい
ては、選択された非ロバスタチン産生アスペルギルス株
のプロトプラストを製造する標準技術とロバスタチン産
生アスペルギルス・テレウス株からＤＮＡを抽出する標
準技術が使用できる。これらの技術は当業者に周知であ
り、ここでは詳細な説明を要しない。同様に、ここで有
用なプロトプラスト形質転換の技術及び操作も公知かつ
標準的である。
【０００９】非ロバスタチン産生アスペルギルス株の好
ましい選択はアスペルギルス・オリゼの株であるが、但
しこれは本発明の実施に成功するために重要でない。ア
スペルギルスの他の種、即ちＡ．ニガー、Ａ．ニジュラ
ンス、Ａ．フミガタス及びＡ．フラブスも使用できる。
Ａ．オリゼは不活性であって研究所及び商業的規模発酵
での取扱いが容易かつ安全であるため、好ましい種とし
て選択される。
【００１０】プロトプラスト形質転換プロセス後に非形
質転換株から形質転換微生物を選択するためには、Ａ．
テレウスからのＤＮＡは選択マーカーを含有している必
要がある。熟練研究者により利用及び選択可能な選択マ
ーカーの選択肢は広く、厳密な選択は本発明の実施に成
功するために重要でない。アンピシリン耐性、リファン
ピシン耐性、ストレプトマイシン耐性等のような抗生物
質耐性のマーカーが使用でき、得られた形質転換株及び
非形質転換株混合物を適切な抗生物質を含有した培地で
培養すると選択マーカーを含む形質転換株のみが生き残
って単離される。便利さからシクロヘキシミド耐性が選
択マーカーとして特に好ましい。シクロヘキシミドはタ
ンパク質合成の阻害剤であり、そのため培養ブロス中に
おけるシクロヘキシミド耐性株又は形質転換株の存在は
容易に検出される。
【００１１】選択マーカーに基づく形質転換株の選択後
に、それらはロバスタチンを発現及び分泌する株に関し
てスクリーニングされる。プロトプラスト形質転換プロ
セスで産生された全形質転換株のうち比較的少数のみが
この能力を有する。それらは標準培養ブロス中で別々に
培養し、ＨＰＬＣなどで得られた培地の分析をしてロバ
スタチン存在を検出することにより認知される。ロバス
タチンの存在に関して試験陽性の株は継代培養して増殖
させ、アスペルギルス属、好ましくはアスペルギルス・
オリゼ種の新規ロバスタチン産生形質転換真菌微生物の
クローンを形成する。本発明は下記実験例において説明
目的のため更に記載されている。
【実施例】
【００１２】実施例１ 物質及び方法 真菌培養物−本研究で用いられる真菌単離株アスペルギ
ルス・テレウス及びＡ．オリゼはアグリカルチャー・カ
ナダ、リサーチステーション（カナダ・アルバータ州、
ビーバーロッジ）から集められた蘭土壌サンプルから単
離した。シクロヘキシミド耐性変異株の選択 双方のアスペルギルス単離株をシクロヘキシミド（濃度
０．１〜５ｍＭ）含有ツァペック・ドックス（Ｃｚａｐ
ｅｋ’ｓ ｄｏｘ）培地上２８±２℃で６日間増殖さ
せ、各Ａ．テレウス及びＡ．オリゼの胞子（１０８）を
１０ｍＭシクロヘキシミドツァペック・ドックスブロス
（５０ｍｌ）中に入れ、３０分間インキュベートし、１
０，０００ｇで１０分間遠心し、しかる後無菌蒸留水に
再懸濁した。それらを撹拌により３回洗浄し、遠心で再
沈降させた。次いで胞子を無菌１％（ｖ／ｖ）トリトン
Ｘ−１００溶液に懸濁し、一部をとり数を血球計数器で
測定した。適切な希釈液を１０ｍＭシクロヘキシミド選
択培地にまいて、耐性変異株を２８±２℃で１０日間の
インキュベート後に単離した。単離株をロバスタチン産
生に関して試験した。Ａ．テレウスのシクロヘキシミド
耐性ロバスタチン産生単離株を更に形質転換研究のため
に選択した。
【００１３】プロトプラスト及びＤＮＡ作製 アスペルギルス・オリゼ及びシクロヘキシミド耐性・ロ
バスタチン産生Ａ．テレウス（ここではＪＡＧ−４７０
３と命名される）単離株をツァペック・ドックスブロス
５０ｍｌ中で別々に培養した。培養物をロータリーシェ
ーカー〔ニュー・ブランスウィック・サイエンティフィ
ック社（Ｎｅｗ ＢｒｕｎｓｗｉｃｋＳｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ Ｉｎｃ．）〕上２８±２℃、２００ｒｐｍで５８
時間インキュベートしてから回収し、反復遠心により無
菌蒸留水で洗浄した。双方の種の培養物からのプロトプ
ラストは通常Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＆ Ｉｓｅｎｂｅｒ
ｇ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１２８，ｐ．６
５１−６５４（１９８２）の方法に従い、細胞壁を除去
するためノボジム２３４（Ｎｏｖｏｚｙｍ ２３４）
〔ノボ−ノルディスク（Ｎｏｖｏ−Ｎｏｒｄｉｓｋ）、
ノボ・アレ（Ｎｏｖｏ Ａｌｌｅ）、ＤＫ２８８０、バ
グスバード，デンマーク〕を用い１０〜１２時間作用さ
せることで得た。どちらの種のプロトプラストも蒸留水
５０ｍｌ中に寒天〔ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）〕０．１
ｇ、ソルボース５ｇ及びＥＤＴＡ０．３５ｇを含有する
再生培地（Ｒ）中で２８℃で２４時間後に生存単細胞で
細胞壁を有する胞子に再生した。発芽後これらの胞子は
それら親株のすべての培養特徴を示した。
【００１４】全ＤＮＡをＳｃｈｌｉｅｆ ＆ Ｗｅｎｓ
ｉｎｋ，”Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（分子生物学
における実際的方法）、３３ ２１−２９，１９８１）
に記載された操作に従いアスペルギルス・テレウスプロ
トプラストから単離した。そのプロトプラストを１０ｍ
ｇ／ｍｌＳＤＳ、０．１Ｍ ＮａＣｌ及び０．１Ｍトリ
スＨＣｌ，ｐＨ９．０からなる溶液に懸濁した。トリス
ＨＣｌ緩衝液で飽和された等容量のフェノールを加え、
混合液をエッペンドルフ遠心管〔ブリンクマン・インス
トルメンツ、カナダ社（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ Ｉｎｓｔ
ｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃａｎａｄａ Ｌｔｄ．）、レクスデ
ール、オンタリオ〕中１２，０００ｇで１０分間遠心し
た。ＤＮＡ含有上層を取って９５％エタノールと混合し
て−２０℃に６０分間置いた。しかる後前記のように１
０分間遠心した。ペレットをｐＨ７．０の緩衝液に再懸
濁し、フェノールで処理したＲＮアーゼ〔シグマ（Ｓｉ
ｇｍａ）、セントルイス、ＭＯ、Ｕ．Ｓ．Ａ．〕と共に
インキュベートし、ＤＮＡを水層から沈降させた。１０
ｍＭトリスＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．５及び０．３Ｍ Ｎ
ａＣｌに前浸漬しパスツールピペット中に充填したＤＥ
ＡＥ−セルロース（ＤＥ−５２、ワットマン）上に単離
したＤＮＡを吸着させ洗浄して精製した。ＤＮＡはｐＨ
７．５の１．５Ｍ ＮａＣｌ含有１０ｍＭトリスＨＣｌ
緩衝液で溶出させた。この溶液を０．２Ｍ ＮａＣｌと
なるまで希釈し、ＤＮＡを２倍容量のエタノールで沈降
させた。ＤＮＡの純度は２００〜３２０ｎｍスペクトル
からＡ２６０／Ａ２８０吸光度比を決定して評価した。
比が１．５０〜２．００であるＤＮＡのみを形質転換に
用いた。各単離ＤＮＡ０．１ｍｇの６サンプルを再生培
地中でインキュベートして生存プロトプラストが存在し
ないことを確認したところ、それらはいずれもコロニー
を形成しなかった。
【００１５】プロトプラスト−ＤＮＡインキュベート 血球計数器でカウントして計数された約５．２×１０４
のＡ．オリゼプロトプラストを前記の組成の再生培地５
ｍｌ中でＡ．テレウスのＤＮＡ１０〜１００ｎｇと共に
インキュベートし、前記のように再生させた。ロバスタ
チン発現に関してＤＮＡが有する可能性のある化学的効
果について研究するため、１０〜１００μｇの子ウシ胸
腺ＤＮＡ（シグマ・ケミカル社、セントルイス、ＭＯ、
Ｕ．Ｓ．Ａ．）、ＤＮＡ〔ベセスダ・リサーチ・ラボラ
トリーズ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ゲイザーバーグ、ＭＤ、Ｕ．
Ｓ．Ａ．〕及び同種Ａ．オリゼＤＮＡを同様のＡ．オリ
ゼプロトプラストのロットと共にインキュベートした。
ＤＮＡをインキュベート中に含有させた場合はプロトプ
ラスト再生は１０％以下に減少し、このように処理され
たプロトプラスト（１０５）はいかなるシクロヘキシミ
ド耐性を生じなかった。
【００１６】ロバスタチン産生及びアッセイ Ａ．テレウスＤＮＡと共にインキュベートしたＡ．オリ
ゼプロトプラストから得られた胞子の懸濁液を１０ｍＭ
シクロヘキシミド含有ツァペック・ドックス寒天培地上
にペトリ皿当り１ｍｌ接種した。２８±２℃で４８時間
のインキュベート後に培養物は６〜８ｍｍの径に達し
た。各コロニーはこれらの条件下で単一胞子から別々に
生じたものである。シクロヘキシミド培地上で生育した
ものを、ツァペック・ドックス培地ブロス（５００ｍｌ
エルレンマイヤーフラスコ中５０ｍｌ）中に個別に接種
し、ロータリーシェーカー（２００ｒｐｍ）上２８±２
℃で１２日間インキュベートした。各増殖培地を下記操
作及びＨＰＬＣ分析によりロバスタチン産生に関して試
験した。
【００１７】抽出 発酵ブロス（５０ｍｌ）を１７Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０
に酸性化した後酢酸エチル（１００ｍｌ、３ｘ）で抽出
した。プールした酢酸エチル分画を減圧下３０℃で乾燥
し、残渣をアセトニトリル（５ｍｌ）で集め、しかる後
ＨＰＬＣ分析に付した。
【００１８】ＨＰＬＣ分析 ＨＰＬＣ装置（ベックマンモデル４２０）はベックマン
・インストルメンツ（トロント・カナダ）の製品で、ア
ルテックス（Ａｌｔｅｘ）ポンプ（モデル１１０Ａ）及
び注入バルブからなる。ＬＣ−ＵＶ検出器は２３７ｎｍ
にセットした。ハイパーシル（ｈｙｐｅｒｓｉｌ）Ｃ−
１８０ＤＳシリカカラム（２５×０．４６ｃｍ，ｉ．
ｄ．）とアセトニトリル及び水（５５：４５，ｖ／ｖ）
の溶媒系（流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ）を用いた。産生さ
れたロバスタチンを作成された標準ロバスタチン曲線と
比較して定量した。
【００１９】実施例１−結果 ７９のシクロヘキシミド耐性単離株が、Ａ．テレウスの
シクロヘキシミド耐性ロバスタチン産生変異株のＤＮＡ
と共にインキュベートした５．２×１０５のＡ．オリゼ
プロトプラストから得られ、そのうちロバスタチン産生
株は４株であった。形質転換実験は６回実施した。結果
を下記表１に示す。
【００２０】◎
【表１】 形質転換培養株の１つＡＯ−ＩＩは６月間にわたりその
本来の形質転換された特徴を保持していた。図１はレシ
ピエントのＡ．オリゼ及びドナーであるＡ．テレウスの
培養物とＡ．テレウスＤＮＡで処理されたＡ．オリゼの
培養物から得られた抽出物のＨＰＬＣ分析について示
す。形質転換単離株によるロバスタチンの産生を下記表
２に示す。
【００２１】
【表２】 ツァペック・ドックスブロス（ｐＨ６．８）におけるアスペルギルス・オリゼ の形質転換単離株によるロバスタチン産生 ─────────────────────────────────── 単離物Ｎｏ． ロバスタチン収量（ｍｇ／リットル） ＡＯ−Ｉ １５．３６±１．７８ ＡＯ−ＩＩ ２６．８９±３．７６ ＡＯ−ＩＩＩ １３．４６±４．５６ ＡＯ−ＩＶ ９．６７±０．７５ ───────────────────────────────────
【００２２】単離株Ｎｏ．ＡＯ−Ｉを５回継代培養して
形質転換株ＡｏＡｔ−ＮＢＪ／５を得たが、これは生存
永久保存菌株としてアメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に参照番号ＡＴＣＣ７
４１３５として１９９２年２月２５日付で寄託された。
ロバスタチンはそのヒドロキシ酸アナログと一緒に産生
されるが、後者は容易にラクトン化され、例えばトルエ
ン中で還流することにより容易にロバスタチンに変換さ
れて、ロバスタチンの収量を上げることができる。ラク
トン化はこれらの実験では実施しなかった。
【００２３】ツァペック・ドックスブロス中Ａ．テレウ
ス親株により産生されたロバスタチンは１６６．７２±
５．９２ｍｇ／リットルであったが、親株Ａ．オリゼは
ロバスタチンを産生しなかった。
【００２４】添付図面の図２はハイブリッド株からＨＰ
ＬＣにより精製されたロバスタチン化合物の１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトル図である。ロバスタチンの既知標準スペク
トルとの比較することによりこの産物のロバスタチンと
の同一性が確認される。添付図面の図３は同産物の質量
スペクトル図であり、ロバスタチンが９９％の純度で得
られたことを示す。
【００２５】５〜２０ｎｇ／ｍｌ培地範囲のＤＮＡ濃度
であれば、Ａ．オリゼプロトプラストの再生能力に影響
せず、Ａ．テレウスＤＮＡとのインキュベートによるシ
クロヘキシミド耐性かつロバスタチン産生性単離株の回
収にも影響を与えなかった。そのデータはこれらの濃度
がロバスタチンの産生に関する制限ファクターでないこ
とを示す。同様に、５ｎｇ〜５μｇ／ｍｌ培地の濃度の
子ウシ胸腺ＤＮＡ、ＤＮＡ及び同種Ａ．オリザエＤＮＡ
は未処理コントロールと比較した場合にＡ．オリゼプロ
トプラストの再生に影響を与えなかった。しかしなが
ら、１０及び１００μｇ／ｍｌ培地のＤＮＡは各々最大
２６％及び１％まで再生率を減少させた。これらのＤＮ
Ａ処理はロバスタチン発現を誘引しなかった。
【００２６】用いた再生培地は、より複雑な無機培地を
用いＡｃｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ．，４５，５１５−５２３（１９６６）により
得られた場合と匹敵するプロトプラスト数を生じた。分
生子及び発芽したばかりの分生子は菌糸体よりも良い収
率で生存プロトプラスト及びＤＮＡを与える。Ａｃｈａ
ら（１９６６）により記載されたプロトプラスト再生中
における細胞凝集物の形成はこの系では観察されなかっ
た。シクロヘキシミド耐性の発現及びロバスタチン発現
に関与するファクターがＡ．テレウスからＡ．オリゼへ
明白に導入されたことは種間ＤＮＡ形質転換を示す。シ
クロヘキシミド耐性及びロバスタチン産生の同時形質転
換は予想以上に満足すべきものであり、このことはこれ
ら性質の発現に関与する遺伝子が物理的に近接していて
クラスターを形成している可能性について示唆してい
る。
【００２７】新規形質転換株ＡｏＡｔ−ＮＢＪ／５の形
態は図４で示され、下記のように特徴付けられる：ＡｏＡｔ−ＮＢＪ／５の形態 円柱状で淡褐色の分生子頭。滑らかな無色の分生子柄。
２層の基底梗子で１／２又は２／３まで覆われた半球状
の頂嚢。球状又は楕円状の分生子、ツァペック寒天上で
非常に急速に増殖する滑らかなコロニーあるいは分生子
の産生により綿毛状又はビロード状のシナモンブラウン
色を呈す。裏面は黄色〜褐色。橙色滲出液。これらの実
験は、原則として１真菌種において遺伝的に決定されて
いる抗生物質産生の性質が別の種でも発現されうること
を証明している。
【００２８】実施例２−製造方法 真菌培養：形質転換アスペルギルス・オリゼＡｏＡｔ／
ＮＢＪ−Ｖ（ＡＴＣＣ＃７４１３５）培養菌を用いてロ
バスタチンを産生した。
【００２９】発酵 種菌調製：真菌培養物（凍結乾燥バイアル）をポテト−
デキストロース寒天斜面上に無菌的に移し、２５℃で４
〜５日間増殖させた。インキュベート終了時に分生子懸
濁液をトリトンＸ−１００（０．０１％）溶液を加えて
調製し、激しく撹拌し、エーレンマイヤーフラスコ（２
５０ｍｌ容量）中に含有された滅菌した米（５０ｇ）上
に分子生懸濁液を移した。フラスコに無菌水１０ｍｌを
更に補充し、激しく撹拌し、２８℃で５〜７日間インキ
ュベートした。インキュベート終了時に無菌水（５０ｍ
ｌ）を加えた。分生子懸濁液を無菌モスリン布に通し、
濾液（１×１０８分生子／ｍｌ含有）を種培地３０リッ
トル含有種発酵槽（５０リットル容量）に移した。用い
られる種培地の組成は下記のとおりであった：
【００３０】
【表３】 Ｄ−グルコース ２０ｇ／リットル 麦芽エキス ２０ｇ／リットル ネオペプトン ３ｇ／リットル 水道水 １リットル
【００３１】ｐＨ６．８（１０％ＮａＯＨで調整）。培
地は１２１℃で３０分間〔１５ｐｓｉ（約１ｋｇ／ｃｍ
２）〕滅菌した。種菌は２８℃（通気速度０．３〜０．
５ｖｖｍ）、８０〜１００％溶存酸素（２００ｒｐｍ）
で１７〜２０時間増殖させた。
【００３２】ロバスタチンの産生 種菌（３０リットル）を産生培地含有産生発酵槽容器
（作業容量１０００リットル）に移した。産生培地組成
は下記のとおりであった：
【００３３】
【表４】 ラクトース ６０ｇ／リットル アルダミンｐＨ １０ｇ／リットル 大豆タンパク質 ２ｇ／リットル ＫＣｌ ２ｇ／リットル ＫＨ２ＰＯ４ ０．８ｇ／リットル ＭｎＳＯ４４Ｈ２Ｏ ０．０３ｇ／リットル ベタイン ０．６ｇ／リットル Ｐ２０００ ２ｍｌ 水道水 １リットル
【００３４】ｐＨ６．８（滅菌前に１０％ＮａＯＨ／Ｈ
２ＳＯ４で調整）−１２１℃、１５〜２０ｐｓｉ（１〜
１．４ｋｇ／ｃｍ２）で１時間滅菌。接種後に培養物を
ｐＨ６．０〜６．２（１０％Ｈ２ＳＯ４）にコントロー
ルしながら２８℃で７〜８日間生育させた。通気速度は
０．７〜１．０ｖｖｍ（溶存酸素８０〜１００％）に保
った。
【００３５】第二産生段階 ７日目発酵ブロス（５０リットル）を種培地（前記組
成）１５００リットル含有種発酵槽（作業容量２０００
リットル）中に無菌的に移した。種菌を２８℃（２００
ｒｐｍ）、Ｄ．０．８０〜１００％で２４時間増殖させ
た。ブロス（２００リットル）を産生培地１８，０００
リットル含有生産発酵槽（３０，０００リットル）（作
業容量２０，０００リットル）に無菌的に移した。培養
物をｐＨ６．０〜６．２にコントロールしながら２８℃
で更に７〜９日間増殖させた。６０時間の発酵後はｐＨ
コントロールは行わなかった。発酵ブロスに５日間にわ
たりフィード培地を速度１０リットル／ｈｒで補充し
た。フィード培地組成は下記のとおりであった：
【００３６】
【表５】 Ｄ−グルコース ２８５．７ｇ／リットル アルダミンｐＨ ７１．４ｇ／リットル 大豆タンパク質 １４．３ｇ／リットル 水道水 １リットル
【００３７】ｐＨ６．８（滅菌前）−１２１℃で３０〜
４５分間滅菌。発酵終了時にブロスを１０Ｎ ＨＣｌで
ｐＨ４．０に耐性化し、遠心した。真菌ケークを５５℃
で乾燥し、抽出に付した。
【００３８】抽出及び精製 乾燥真菌ケーク（２０ｋｇ）を冷酢酸エチルと共にホモ
ジナイズし（１０〜１５分間）、ホモジナイズされた物
質を８０〜８５℃で４〜６時間還流し、冷却し、濾過し
た。濾液を黒色タール状物質（２．５〜３ｋｇ）にまで
減圧乾燥した。黒色タール状物質をシリカゲル（２．５
ｋｇ）及びＣＨ２Ｃｌ２（５リットル）と混ぜた。ＣＨ
２Ｃｌ２を減圧蒸発させ、シリカとまざった粗製タール
状物質をシリカゲルガラスカラム（１００ｃｍ長×２
２．５ｃｍ径）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：２
ｖ／ｖ）で展開した。サンプル（２０００ｊｌ、１２
ｘ）を集めた。２４時間後に溶離溶媒混合液をＥｔＯＡ
ｃ：ヘキサン（１：１ｖ／ｖ）に変え、更に２４時間溶
出した。産物含有サンプルをプールし、乾燥し（２８０
ｇ）、メタノールで結晶化させた。
【００３９】結晶 黄色乾燥産物（２８０ｇ）をメタノール２．８リットル
に溶解し、６０〜６５℃で４０〜６０分間沸騰させた。
熱メタノール混合液を濾過し、濾液を４℃で４〜６時間
インキュベートした。白色結晶針状物を母液から分離
し、冷メタノールで洗浄した。結晶を減圧乾燥し、秤量
し（１９０ｇ）、デシケーター中４℃で保った。本発明
のプロセスは新規アスペルギルス・オリゼ形質転換株の
細胞壁を破壊するのに十分な高いロバスタチン収量を生
じるため、この方法ではロバスタチン回収前の細胞溶解
工程は省くことができる。これは続く回収及び精製プロ
セスを相当に簡素化する。前記のように、本プロセスに
よるロバスタチンは回収過程でそのエステル、塩等を形
成させる必要性なしに溶媒抽出プロセスにより回収でき
る。溶媒抽出はクロマトグラフィーよりもかなり簡単で
経済的な回収及び精製プロセスである。本発明は具体的
な実験を参考にして詳細に記載されてきたが、それに制
限されないと理解すべきである。その範囲は請求の範囲
により規定される。
【図面の簡単な説明】
【図１】前記実施例１の実験に従い産生された粗製真菌
抽出物のＨＰＬＣ分析を示す図である。 （Ａ）Ａ．オリゼ（親株）からの抽出物。 （Ｂ）Ａ．テレウス（親株）からの抽出物。 （Ｃ）標準ロバスタチン。 （Ｄ）形質転換Ａ．オリゼからの抽出物。
【図２】ハイブリッド株から得られ及び精製されたロバ
スタチン化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
【図３】同化合物の質量スペクトルを示す図である。
【図４】新規形質転換株ＡｏＡｔ／ＮＢＪ−Ｖの形態学
的特徴を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:685） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:68） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:67） (Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｒ 1:69） (Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｒ 1:685） (Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｒ 1:68） (Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｒ 1:67）

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 アスペルギルス・オリゼ、Ａ．ニガー、
    Ａ．ニジュランス、Ａ．フミガタス及びＡ．フラブス種
    から選択されるロバスタチン非生産性のアスペルギルス
    株を形質転換して、ロバスタチンを合成できる酵素セッ
    ト及び選択マーカーをコードする外来ＤＮＡを含むよう
    にした真菌微生物により栄養培地を発酵させ、栄養培地
    からロバスタチンを回収することからなるロバスタチン
    の製造方法。
  2. 【請求項２】 形質転換された微生物がロバスタチン産
    生アスペルギルス・テレウス種に由来する外来ＤＮＡを
    含む、請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 アスペルギルス株がＡ．オリゼ種であ
    る、請求項２記載の方法。
  4. 【請求項４】 形質転換株中に導入された外来ＤＮＡが
    選択マーカーとしてシクロヘキシミド耐性遺伝子を含
    む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
  5. 【請求項５】 形質転換株がＡＴＣＣ７４１３５である
    Ａ．オリゼＡｏＡｔ−ＮＢＪ／５である、請求項１〜４
    のいずれかに記載の方法。
  6. 【請求項６】 発酵プロセスで形成されるヒドロキシ酸
    アナログをラクトン化してロバスタチンに転換する追加
    工程を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
  7. 【請求項７】 ロバスタチンの回収が溶媒抽出により行
    われる、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
  8. 【請求項８】 ロバスタチンを合成しうる酵素セットを
    発現できる新規真菌形質転換株であって、 元来ロバスタチンを発現できないＡ．オリゼ、Ａ．ニガ
    ー、Ａ．ニジュランス、Ａ．フミガタス及びＡ．フラブ
    スから選択されるアスペルギルス種の株であるが、ロバ
    スタチン合成できる酵素セットをコードする遺伝子を含
    む外来ＤＮＡを有する真菌形質転換株。
  9. 【請求項９】 アスペルギルス種がＡ．オリゼ、Ａ．ニ
    ガー、Ａ．ニジュランス及びＡ．フミガタスからなる群
    より選択される、請求項８記載の真菌形質転換株。
  10. 【請求項１０】 アスペルギルス種がＡ．オリゼであ
    る、請求項９記載の真菌形質転換株。
  11. 【請求項１１】 外来ＤＮＡがアスペルギルス・テレウ
    ス種のロバスタチン発現株に由来する、請求項１０記載
    の真菌形質転換株。
  12. 【請求項１２】 Ａ．テレウス株の全ＤＮＡを用いた
    Ａ．オリゼ株プロトプラスト形質転換により生じた、請
    求項１１記載の真菌形質転換株。
  13. 【請求項１３】 ロバスタチン生産性Ａ．テレウスのＤ
    ＮＡによる形質転換により得られたロバスタチン生産性
    アスペルギルス・オリゼＡｏＡｔ−ＮＢＪ／５（ＡＴＣ
    Ｃ７４１３５）。
JP5061492A 1992-02-10 1993-02-10 新規真菌株及びそれを用いた抗生物質産生方法 Pending JPH0622780A (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US83349692A 1992-02-10 1992-02-10
CA833496 1992-02-27
CA002062023A CA2062023A1 (en) 1992-02-10 1992-02-27 Novel fungal strains and use thereof in antibiotic production
CA2062023-4 1992-02-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH0622780A true JPH0622780A (ja) 1994-02-01

Family

ID=25674996

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP5061492A Pending JPH0622780A (ja) 1992-02-10 1993-02-10 新規真菌株及びそれを用いた抗生物質産生方法

Country Status (18)

Country Link
EP (1) EP0556699A1 (ja)
JP (1) JPH0622780A (ja)
CN (1) CN1076965A (ja)
AU (1) AU667498B2 (ja)
BG (1) BG61180B1 (ja)
BR (1) BR9300467A (ja)
CZ (1) CZ17293A3 (ja)
EE (1) EE03048B1 (ja)
FI (1) FI930561A (ja)
HR (1) HRP930134A2 (ja)
HU (1) HUT67061A (ja)
IL (1) IL104481A0 (ja)
LV (1) LV10502B (ja)
NO (1) NO930446L (ja)
NZ (1) NZ245713A (ja)
PL (1) PL297691A1 (ja)
SI (1) SI9300068A (ja)
SK (1) SK5593A3 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009195254A (ja) * 1997-02-20 2009-09-03 Koninkl Dsm Nv 化学的に明確な培地を用いた工業的規模での有用化合物の発酵生産

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5766939A (en) * 1989-05-05 1998-06-16 Baylor College Of Medicine Production of recombinant lactoferrin and lactoferrin polypeptides using CDNA sequences in various organisms
IL94183A (en) 1989-05-05 2003-09-17 Baylor College Medicine cDNA SEQUENCE CODING FOR HUMAN LACTOFERRIN PROTEIN OR PORTION THEREOF AND LACTOFERRIN PROTEIN PRODUCED FROM SAID SEQUENCE
US5849881A (en) * 1989-05-05 1998-12-15 Baylor College Medicine Production of recombinant lactoferrin and lactoferrin polypeptides using cDNA sequences in various organisms
US5571691A (en) * 1989-05-05 1996-11-05 Baylor College Of Medicine Production of recombinant lactoferrin and lactoferrin polypeptides using CDNA sequences in various organisms
US6100054A (en) * 1989-05-05 2000-08-08 Baylor College Of Medicine Production for recombinant lactoferrin and lactoferrin polypeptides using DNA sequences in various organisms
SI9300303A (en) * 1993-06-08 1994-12-31 Krka Tovarna Zdravil Process for isolation of hypolipemic effective substance
CA2175461A1 (en) 1993-11-02 1995-05-11 Victor A. Vinci Dna encoding triol polyketide synthase
CA2199104A1 (en) 1996-03-05 1997-09-05 Tsuneaki Hida Xanthene derivatives, their production and use
US6111081A (en) * 1996-05-31 2000-08-29 Baylor College Of Medicine Lactoferrin variants and uses thereof
CZ300153B6 (cs) * 1998-03-20 2009-02-25 Teva Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság Metabolicky kontrolovaný proces fermentace pri výrobe lovastatinové hydroxykyseliny
US6391583B1 (en) 1998-12-18 2002-05-21 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of producing antihypercholesterolemic agents
EP1176208A1 (en) * 2000-07-28 2002-01-30 Société des Produits Nestlé S.A. Koji molds and use thereof for preparing cholesterol-lowering products
AU2002235885A1 (en) 2001-02-09 2002-08-28 Unilever N.V. Process for the preparation of one or more statins by fermentation
KR100423892B1 (ko) * 2001-12-03 2004-03-22 씨제이 주식회사 스타틴의 제조에 있어서 새로운 락톤화 방법
WO2006035295A1 (en) * 2004-09-27 2006-04-06 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the purification of lovastatin
CN102533893A (zh) * 2010-12-09 2012-07-04 浙江海正药业股份有限公司 一种制备莫那可林j的方法
CN104277980B (zh) * 2013-07-09 2020-04-21 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 分离纯化米曲霉转化子的方法
CN105602856B (zh) * 2015-12-16 2019-04-16 浙江师范大学 黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株及其用于洛伐他汀的生产的用途和发酵方法
CN108118042B (zh) * 2016-11-30 2021-01-15 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 2-甲基丁酸侧链水解酶和产莫纳可林j的曲霉菌株及其构建方法与应用
CN111117894B (zh) * 2019-11-26 2023-11-10 漳州大北农农牧科技有限公司 一株米曲霉菌株及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GR69216B (ja) * 1979-06-15 1982-05-07 Merck & Co Inc
JPS63502636A (ja) * 1985-12-17 1988-10-06 ルブリゾル　ジエネテイクス，インコ−ポレイテツド ポリケチド抗生物質生合成用遺伝子の単離
FI104984B (fi) * 1988-08-11 2000-05-15 Dsm Nv Menetelmä biosynteettisten tai säätelygeenien identifioimiseksi ja käyttämiseksi sekundääristen metaboliittien tuoton parantamiseksi

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009195254A (ja) * 1997-02-20 2009-09-03 Koninkl Dsm Nv 化学的に明確な培地を用いた工業的規模での有用化合物の発酵生産
JP2014087365A (ja) * 1997-02-20 2014-05-15 Koninkl Dsm Nv 化学的に明確な培地を用いた工業的規模での有用化合物の発酵生産

Also Published As

Publication number Publication date
HRP930134A2 (en) 1995-10-31
HUT67061A (en) 1995-01-30
CN1076965A (zh) 1993-10-06
FI930561A0 (fi) 1993-02-09
LV10502B (en) 1995-08-20
NZ245713A (en) 1994-12-22
NO930446D0 (no) 1993-02-09
BG97421A (bg) 1994-03-24
BR9300467A (pt) 1993-08-17
PL297691A1 (en) 1994-01-24
FI930561A (fi) 1993-08-11
LV10502A (lv) 1995-02-20
AU3212193A (en) 1993-08-12
EP0556699A1 (en) 1993-08-25
CZ17293A3 (en) 1993-12-15
HU9300330D0 (en) 1993-04-28
BG61180B1 (bg) 1997-02-28
SI9300068A (en) 1993-09-30
NO930446L (no) 1993-08-11
IL104481A0 (en) 1993-05-13
AU667498B2 (en) 1996-03-28
EE03048B1 (et) 1997-10-15
SK5593A3 (en) 1993-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0622780A (ja) 新規真菌株及びそれを用いた抗生物質産生方法
US20020137152A1 (en) Fermentation process for epothilones
CN115197172B (zh) 二倍半萜化合物、其合成基因簇与合成方法
NO300730B1 (no) Heksahydronaftalenesterderivater og farmasöytiske preparater inneholdende disse
US5362638A (en) Fungal strains and use thereof in antibiotic production
EP0099692A1 (en) New furanone derivatives, process for the preparation thereof and use thereof
EP1015600A1 (en) Statin production by fermentation
CN112409372B (zh) 玉红霉素类似物、制备方法及其应用
WO2020177568A1 (zh) 新型LL-D49194 α1类似物，及其制备方法和应用
KR100186758B1 (ko) 프라바스타틴(pravastatin)전구체의제조방법
CN112029700B (zh) 微生物发酵生产hip-ipa的方法、基因工程菌及应用
US20030195146A1 (en) FO-6979 substances and process for producing the same
KR100260542B1 (ko) 광학활성 노르보르네올의 제조방법
KR100725559B1 (ko) 스트렙토마이세스 플라비도비렌스 ｄｓｍ 14455를 이용한프라바스타틴 나트륨염의 제조 방법
EP0284358B1 (en) Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them
KR100313651B1 (ko) 미크로모노스포라카르보나세아로부터의신규한오르토소마이신
CN118063531A (zh) 大环内酯类化合物PA-46101s C-E的制备及其应用
CN114672510A (zh) 一种利用米曲霉制备l-色氨酸-l-丙氨酸环二肽的方法
JP3779719B2 (ja) サッカロスリックス新株、これを用いてプラバスタチンを生産する方法及び（ＨＭＧ）−ＣｏＡリダクターゼの単離方法
JP4224404B2 (ja) 破骨細胞分化抑制物質
AU2001279025B2 (en) Fermentation process for epothilones
JPH0592967A (ja) １０員環ラクトン構造を有する新規な天然物質
Lebe et al. Oxidative Transformations involved during the Biosynthesis of Squalestatin S1
EP0527646A1 (en) New compounds named the adenophostins, their preparation and their therapeutic use
JPH05239023A (ja) 生理活性物質ｍｂｐ０３９−０６およびその製造法

Legal Events

Date Code Title Description
S531 Written request for registration of change of domicile

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531

S533 Written request for registration of change of name

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

FPAY Renewal fee payment (prs date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080630

Year of fee payment: 8

RD05 Notification of revocation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D05

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees