CZ300153B6 - Metabolicky kontrolovaný proces fermentace pri výrobe lovastatinové hydroxykyseliny - Google Patents
Metabolicky kontrolovaný proces fermentace pri výrobe lovastatinové hydroxykyseliny Download PDFInfo
- Publication number
- CZ300153B6 CZ300153B6 CZ0412199A CZ412199A CZ300153B6 CZ 300153 B6 CZ300153 B6 CZ 300153B6 CZ 0412199 A CZ0412199 A CZ 0412199A CZ 412199 A CZ412199 A CZ 412199A CZ 300153 B6 CZ300153 B6 CZ 300153B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fermentation
- stage
- vol
- aspergillus
- glucose
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 66
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 11
- LXZBFUBRYYVRQJ-UHFFFAOYSA-M Lovastatin hydroxy acid Chemical compound [Na+].C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC([O-])=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 LXZBFUBRYYVRQJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 title description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 36
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 29
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 15
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims abstract description 11
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 47
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 18
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 18
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 16
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 16
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 15
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 15
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 10
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 claims description 10
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 claims description 8
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 8
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 6
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 6
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 2
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 10
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 9
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 abstract description 9
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 abstract description 6
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 33
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 14
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 14
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 7
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 4
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 4
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 3
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical class [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 2
- 239000003529 anticholesteremic agent Substances 0.000 description 2
- 229940127226 anticholesterol agent Drugs 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 150000001261 hydroxy acids Chemical group 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Chemical class 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 2
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N (R)-mevalonic acid Chemical compound OCC[C@](O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 1
- 241000694440 Colpidium aqueous Species 0.000 description 1
- 241001312183 Coniothyrium Species 0.000 description 1
- KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N DL-mevalonic acid Natural products OCCC(O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 241001330696 Leptosphaeria coniothyrium Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical class [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019759 Maize starch Nutrition 0.000 description 1
- 241000228347 Monascus <ascomycete fungus> Species 0.000 description 1
- 241000031003 Monascus ruber Species 0.000 description 1
- 235000007685 Pleurotus columbinus Nutrition 0.000 description 1
- 240000001462 Pleurotus ostreatus Species 0.000 description 1
- 235000001603 Pleurotus ostreatus Nutrition 0.000 description 1
- 241000392433 Pleurotus sapidus Species 0.000 description 1
- AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N SJ000287055 Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 125000000422 delta-lactone group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229960000673 dextrose monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- SYKWLIJQEHRDNH-CKRMAKSASA-N glutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CCCC(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 SYKWLIJQEHRDNH-CKRMAKSASA-N 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Chemical class 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N mevastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=CCC[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N 0.000 description 1
- 229950009116 mevastatin Drugs 0.000 description 1
- BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N mevastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C21 BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021048 nutrient requirements Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Zpusob fermentace pro výrobu lovastatinu, který se provádí za použití kmene rodu Aspergillus v ponorené kulture, pri pH mezi 5,2 a 7,0, pri teplote 24 až 30 .degree.C, na médiu obsahujícím asimilovatelné zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli, a zahrnuje stadium ockovací kultury a stadium hlavní fermentace, pricemž ve stadiu hlavní fermentace se za úcelem zachování kultury ve "stabilním stavu" použije metabolicky rízený zpusob tak, že - organický zdroj uhlíku se dodává ve stadiu rostoucího pH,po dosažení jeho minimální hodnoty; - pH v produkcní fázi se udržuje v rozmezí od 5,2 do 6,2 dodáváním zdroje uhlíku a/nebo báze; - alespon jednou sedodává organický zdroj dusíku po zapocetí dodávání zdroje uhlíku; - hladina rozpušteného kyslíku seudržuje minimálne na 40 % nasycení pomocí aerace a míchání; - alespon jednou se provádí cástecná sklizen.
Description
(57) Anotace
/.působ fermentace pm výrobu lovaslatinu. který se provádí za použiti kmene rodu Aspergillus v ponořené kultuře, při pl i me/i 5.2 a 7.0. při teplotě 24 až 30 V. na médiu obsahujícím asimilovatelné zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli. a zahrnuje stadium očkovací kultury a stadium hlav ní fermentace. přičemž v e stadiu hlav ni fermentace sc za účelem zachování kultury ve stabilním stavu použije metaboliekv řízený způsob tak. že
- organický zdroj uhlíku se dodavá ve stadiu rostoucího pl E po dosažení jeho minimální hodnotv;
- pl 1 v produkční fázi se udržuje v rozmezí od 5.2 do 6.2 dodav áním zdroje uhlíku adiebo báze:
- alespoň jednou se dodává organický zdroj dusík ti po započetí dodávání zdrtí je uhlíku;
- hladina rozpuštěného kvslíku se udržuje minimálně na 40 % nasveení pomocí aerace a míchání:
- alespoň jednou se provádí částečná sklizeň.
Metabolický kontrolovaný proces fermentace při výrobě lovastatinové hydroxykyseliny
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká obecně biosyntézy činidel snižujících hladinu cholesterolu. Přesněji se předkládaný vynález týká biosyntézy mev inol inu, což je činidlo snižující hladinu cholesterolu, pomocí mikroorganismů.
Dosavadní stav techniky
Mevinolin (lovastatin; monakolin K; δ-lakton kyseliny (Tb-díhydro\y-7-[ 1,2,6,7,8,8a hexaio hydro-2.6-dimethy 1-8-( 2-methy lbutyry loxy )naftalen-l-yl]heptanové) je jedním z nedůležitějších činidel snižujících hladinu cholesterolu. Podle předkládaného vynálezu zahrnuje termín mevinolin jak formu laktonu, tak formu volné hydroxykyseliny.
Jeho forma volnc hydroxykyseliny je účinným inhibitorem enzymu 3-hydroxy-3-methyl15 glutarylkoenzym A reduktázy, který katalyzuje vznik kyseliny mevalonové. což je časný meziprodukt při biosyntéze cholesterolu. Mevinolin je zvláště výhodný, protože jako následek jeho aplikace se biosyntetická meziprodukty s toxickým steroidním skeletem, vznikající v pozdějších stadiích špatně akumulují. Mevinolin zvyšuje počet LDL receptorů na povrchu buněčné membrány, která odstraňuje LDL cholesterol obíhající v krvi, a lak vyvolává snížení hladiny cholesterolu v krvi.
Obecně se aktivní látka vyrábí pomocí fermentace. GB 2046737 popisuje, že aktivní složka se může vyrábět pomocí různých kmenů, patřících do rodu Monascus, například M. ruber 1005, kultivovaných při 7 až 40 °C. Jako kultivační médium se použije vodný roztok glukózy, peptonu, kukuřičný výluh a chlorid amonný. Lermentace se provádí 10 dní za anaerobních podmínek a
2> získá se 87 mg mevinolinu z filtrátu 5 litrů roztoku.
US patent 4 294 926 popisuje biosyntézu mevinolinu s výhodou pomocí aplikace mikroorganismů uložených pod čísly ATCC 20541 nebo 20542, patřících do rodu Aspcrgillus terreus, do kultivačního média obsahujícího cukry', například glukózu, fruktózu, maltózu, jako zdroj uhlíku, so zdroj dusíku, například kvasinky, hydro lyžované kvasinky, hydrolyzovaný kasein, kapalinu po máčení kukuřice a minerální soli, například uhličitan vápenatý, síran hořečnatý, soli kobaltu, železa, hořčíku, při teplotě 20 až 37 °C. Podobné postupy jsou popsány například v patentu číslo
US 4 420 491, US 4 342 767, US 4 319 039 a US 4 294 846, kde se fermentace provádí 3 až 5 dní v médiu obsahujícím 1 až 6 % cukrů a 0,2 až 6 % zdrojů dusíku.
Německý patent číslo DE 4 402 591 popisuje biosyntézu mevinolinu pomocí mikroorganismů patřících do rodu Plcurotus, například Pleurotus ostreatus, P. sapidus. P. saca, při 25 až 35 °C během 7 až 14 dní kultivace na povrchu nebo při ponoření do média.
ío Kanadský patent číslo CA 2 129 416 popisuje přípravu mevinolinu nebo zejména mevastatinu, pomocí mikroorganismů patřících do rodu Coniothyrium, například uložených pod číslem Coniothyrium fuckelii ATCC 74227, v kultivačním médiu obsahujícím 3 až 15 % glukózy, 0,5 až 4 % peptonu, 0,5 až 5 % amylázy, 0,2 až 1 % síranu amonného, 0,01 až 1 % síranu horečnatého, 0,05 až 0,2% antipěnícího činidla, 0,2 až 1,5% L-izoleiicinii. 0,2 až 1,5% I.-asparagovč kyseliny při pH 5 až 6, Podle příkladů je koncentrace aktivní složky v bujónu 19 až 430 mg/litr.
Maďarský patent číslo HU 208 997 popisuje aplikaci holotypového kmene Aspergillus obscurus očíslovaného jako MV 1, uloženého pod číslem NCAIM(P)F 001189. Fermentace se s výhodou provádí v médiu obsahujícím kvasinkový extrakt a/nebo pepton a/nebo kasein jako zdroj dusíku a glukózu a/nebo maltózu nebo sacharózu jako zdroj uhlíku. Aktivita bujónu na konci kultivace v laboratorním měřítku se pohybuje mezi 400 až 850 mg/litr.
- 1 CZ 300153 B6
Dokument EP 0 556 699 popisuje způsob, při kterém se výroba lovastatinu provádí za použití geneticky modifikovaného kmene Aspergillus oryzae, a neobsahuje žádnou zmínku o udržování „stabilních podmínek po dlouhou dobu.
Dokument WO 97/05269 popisuje způsob přípravy lovastatinu. při kterém se využívá alternativní kmen (Aspergillus terreus var, aureus) namísto Aspergillus lerreus, jehož výsledkem jsou vynikající výtěžky, pokud je na počátku fermentace přítomna vysoká koncentrace zdroje uhlíku.
7, předchozí diskuse je zřejmé, že se výzkumné práce při biosyntéze mcvínolinu zaměřovaly spíše io na nové mikroorganismy produkující mevinolin. než na vývoj samotného procesu fermentace.
Některé odkazy popisují, žc sc fermentace může provádět v běžných a známých médiích za použití jak povrchové kultivace, tak kultivace v pevném stavu. Použily se vsádkové postupy, kdy chování při postupu záviselo na počátečních podmínkách. Avšak technická omezení, například udržení nej výhodnějších množství složek, optimálně rozpuštěný zdroj kyslíku a pH a tak dále, i? ztěžovaly zavedení kontinuálních korekčních aktiontů pro zajištění výhodných podmínek. Daný mikroorganismus během hlavního kroku fermentace, v závislosti na jeho metabolismu, vyžaduje různé podmínky/složení média, aby bylo možné zajistit optimální růst a produkci aktivní složky.
Autoři předkládaného vynálezu ze svých pokusů vyvodili, že při očkování kultury a na začátku hlavní fermentace, je množství aktivní biomasy velmi malé a proměnlivé. Výtěžek fermentace je tedy relativně malý a proměnlivý. Výtěžky dosažené na konci fermentace, které samozřejmě závisí na kmenu, nepřevyšovaly koncentraci mevinolinu 850 mg/litr. Autoři předkládaného vynálezu provedli detailní analýzu celého procesu fermentace od kroku přípravy očkovací kultury až do konec fermentace. Bylo zjištěno, že při kroku přípravy očkovací kultury', v případě známého média a provedení procesuje množství biomasy příliš malé. Proto tedy během hlavní fermentace
2? nejsou metabolismus mikroorganismů a kultivace dostačující.
Podstata vynálezu
Cílem předkládaného vynálezu je tedy zlepšit účinnost postupu fermentace při výrobě mevinolinu pomocí zesílení produkční schopnosti mikroorganismu pomocí zrněny podmínek a provádění fermentace.
Dalším cílem předkládaného vynálezu je poskytnout bud’ krok přípravy očkovací kultury nebo fermentace nebo oba. za nej vhodnějších chemických a fyziologických podmínek pro metabolismus mikroorganismu.
Dalším cílem předkládaného vynálezu je poskytnout při kroku přípravy očkovací kultury' nebo fermentace nebo pří obou, nej vhodnější chemické a fyziologické podmínky pro metabolismus mikroorganismů pomocí zachování stálých podmínek, rychlosti růstu a potom, po prodlouženou dobu. maximální rychlost tvorby produktu.
Těchto a dalších cílů vynálezu bylo dosaženo v rámci jednoho provedení předkládaného vynálezu poskytnutím způsobu fermentace pro výrobu lovastatinu, který sc provádí za použili kmene rodu
Aspergillus v ponořené kultuře, při pil mezi 5,2 a 7,0. při teplotě 24 až 30 °C, na médiu obsahujícím asimilovatelné zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli, a zahrnuje stadium očkovací kultury' a stadium hlavní fermentace, přičemž vc stadiu hlavní fermentace se za účelem zachovaní kultury ve „stabilním“ stavu použije metabolicky řízený způsob tak, že
- organický zdroj uhlíku se dodává ve stadiu rostoucího pi l, po dosažení jeho minimální hodnoty;
pH v produkční fázi se udržuje v rozmezí od 5,2 do 6,2 dodáváním zdroje uhlíku a/nebo báze;
- alespoň jednou se dodává organický zdroj dusíku po započetí dodávání zdroje uhlíku;
- hladina rozpuštěného kyslíku se udržuje minimálně na 40 % nasycení pomocí aerace a míchání;
- alespoň jednou se provádí částečná sklizeň.
Stabilní podmínky se zachovávají při kroku fernientaee pomocí dodávání jednoho nebo více zdrojů organických atomů uhlíku; kontrolou glukózy a/nebo celkového obsahu redukujících cukrů: doplňováním organických a/nebo anorganických zdrojů dusíku; kontrolou pH; kontrolou hladiny pěny: kontrolou hmoty fermentačního bujónu pomocí odvádění a přivádění; a kontrolou hladiny rozpuštěného kyslíku. Hodnota pH se pomocí doplňování zdrojů uhlíku a/nebo báze kontroluje na hodnotě 5,2 až 7,0, v produkční fázi na 5,2 až 6,2, s výhodou v rozmezí 5,4 až 5,8, Ve výhodném provedení podle předkládaného vynálezu je zdroj organického uhlíku vybrán ze skupiny, kterou tvoří glukóza a hydro lyžovaný škrob; obsah glukózy se od šedesáté hodiny hlavního fermentačního kroku udržuje pod 0.2 %; zdroj dusíku je vybrán ze skupiny, kterou tvoří io kukuřičný výluh a hydroxid amonný. V dalších výhodných provedeních se kontroluje množství pěny přidáním látky kontrolující hladinu pěny, látka je s výhodou syntetická nebo jeto rostlinný olej; a hladina rozpuštěného kyslíku se kontroluje s výhodou mícháním a/nebo aerací fermentačního bujónu. V dalším výhodném provedení podle předkládaného vynálezu se inokulum převádí z kroku přípravy očkovací kultury do hlavního fermentačního kroku v době, kdy se pil v kroku přípravy očkovací kultury zvyšuje po dosažení své minimální hodnoty 5,0 ±0,5.
Podrobný popis vynálezu
Autoři zjistili, že optimální biosyntéza mev inol inu se muže provést pomocí úpravy jednoho nebo více určitých parametrů způsobu, kroků a/nebo změn při kroku přípravy očkovací kultury' nebo
2o při fermentačním kroku nebo při obou těchto krocích procesu biosyntézy.
Autoři zjistili, že během fáze přípravy očkovací kultury mezi tyto parametry, kroky a/nebo proměnné patří dodání mikroorganismů s potřebnými složkami média ve snadno přizpůsobivé formé a v nejvhodnější koncentraci a při prodlouženém kultivačním čase o asi 1(1 až 25 %.
Autoři zjistili, že, aby se dosáhlo stabilních podmínek během kroku fernientaee, patří mezi tylo
2? parametry procesu, kroky procesu a/nebo proměnné procesu kontrola glukózy a/nebo celkového obsahu redukujících cukrů, zachování zdrojů uhlíku na vhodné minimální úrovni, dodání organických a/nebo anorganických zdrojů dusíku, kontrola pil, kontrola hladiny pěny, kontrola hmoty bujónu pomocí odvádění nebo přivádění a kontrola rozpuštěného množství kyslíku pomocí změn rychlostí míchání a/nebo rychlosti aerace.
Abv se optimalizovala biosyntéza mevinolinu, není nutné upravovat každý z výše uvedených procesních parametrů, kroků a/nebo proměnných pro krok přípravy očkovací kultury nebo pro krok hlavní fernientaee současně. Ve výhodném provedení podle předkládaného vynálezu bude biosyntéza mevinolinu zahrnovat všechny výše uvedené procesní parametry, kroky a/nebo změny. V tomto výhodném provedení se bude provádět rnetabol icky kontrolovaný způsob fernientaee b mevinolinu, kdy se stabilních podmínek, tj. konstantního pil, koncentrace glukózy, rozpuštěného kyslíku, viskozity, objemu a tak dále. dosáhne rychle a stabilní podmínky se budou zachovával po dlouhou dobu za získání výtěžku, který' vysoce překračuje výsledky známých postupů.
Určitých výhod se může dosáhnout v kroku přípravy očkovací kultury' pomocí úpravy jednoho nebo více výše uvedených procesních parametru, kroků a/nebo proměnných v tomto kroku. Mezi tyto výhody patří například snížení doby potřebné k dosažení ..stabilních podmínek pomocí 20 až 30% zvýšení počtu center růstu a aktivní biomasy ve výhodnější morfo logické formě, za vzniku výhodnějších podmínek pro, kultivaci mikroorganismů. Výsledkem těchto výhod a prodloužení kultivačního času je, že se koncentrace biomasy téměř zdvojnásobí.
Určitých výhod se může dosáhnout při hlavním fermentačním kroku pomocí úpravy jednoho nebo více procesních parametrů, kroků a/nebo proměnných při tomto kroku. Mezi tyto výhody patří například rychlejší a méně kolísavá fáze růstu a rychlý vznik stabilního stavu, který je možné zachovávat dlouhou dobu. Výsledkem těchto výhod jc značné zvýšená aktivita fernientaee,
Předkládaný vynález je zaměřen na postup fernientaee při výrobě mevinolinu s kmenem patřícím so do rodu Aspergillus v ponořené kultuře, při pH 5.2 až 7,0, při teplotě 24 až 30 °C. v médiu obsahujícím upraví telné zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli, kdy se při hlavní íermentační fázi použije meta holicky kontrolovaný postup, čímž se zachová kultura ve „stabilním stavu. V tomto
- 3 CZ 300153 B6 provedení se s výhodou kontroluje celkový obsah redukujícího cukru. Ve zdroji hlavní fěrmentace se s výhodou doplňují zdroj organického uhlíku, například glukóza, hydrofyzovaný škrob a rostlinný olej. S výhodou se koncentrace glukózy udržuje nižší než 0,2 % od šedesáte hodiny fermentace. Během postupu se doplňují zdroje dusíku, jako je kukuřičný výluh a roztok hydroxidu amonného. pH se v produkční fázi udržuje na hodnotě v rozmezí 5.2 až 6,2, s výhodou v rozmezí 5.4 až 5.8, pomocí doplňování zdroje uhlíku a/nebo báze. například hydroxidu amonného a/nebo hydroxidu sodného. Množství pěny ve fermentéru se muže také kontrolovat pomocí doplňování rostlinného oleje, například slunečnicového oleje a/nebo sójového oleje a/ncbo syntetických antipčnivýeh činidel do bujónu. Rozpuštěný kyslík se s výhodou kontroluje změnou rychlosti io míchání a/nebo rychlosti aerace. Během fcrmentace se provádí jedno nebo více odčerpání.
Ve výhodném provedení se hlavní kultivační médium inokuluje očkovací kulturou, která má následující složení:
| Složka | Množství (hmotnost/objem) |
| glukóza | 2-6 |
| kyselina fosforečná 1 | 0,002-0,006 |
| kyselý kasein | 0,2-0,8 |
| kukuřičný výluh | 1,5-5 |
| slunečnicový olej | 0,05-0,18 |
| polypropylenglykol | 0,05-0,18 |
| pankreatin* | 0,002-0,008 |
^čtyřnásobná aktivita podle Ph Jív.Vil.
Kultivační médium o výše uvedeném složení se doplní o běžně používané mikro a makroelementární soli. například anorganické soli sodíku, draslíku, hořčíku a železa. Hlavní kultivační médium se inokuluje očkovací kulturou, jejíž kultivační čas je prodloužen o 10 až 25%. Při stupni přenosu naočkované kultury je pl I ve fázi růstu po dosažení jeho minimální hodnoty.
Pro fermentaci se s výhodou použije kmen Aspergillus obscurus. jeho varianty nebo jeho mutant nebo výhodněji holotypový kmen Aspergillus obscurus n. sp. MV-i uložený pod kódovým číslem NCA1M(P)F 001189.
Očkovací kultura se inokuluje do sterilního hlavního fermentačního média při prodlouženém čase kultivace ve fázi rostoucího pH po dosažení jeho minimální hodnoty. V hlavním fcrmentačním stupni se mohou stabilní podmínky s maximální produkcí aktivní složky zachovat po delší dobu pomocí přivádění zdrojů uhlíku a dusíku, aby se vyhovělo požadavkům na živiny; kontroly sn koncentrace glukózy, aby se zabránilo nežádoucímu zahušťování kultury a zvýraznil se růst biomasy; kontroly rychlosti míchání a rychlosti aerace podle požadavků na kyslík; kombinace vhodného materiálu splňujícího jak požadavky pro kontrolu množství pěny. tak požadavky na zdroj uhlíku, například směs rostlinného oleje, a syntetického činidla; udržení hodnoty pH mezi
5.2 až 6,2 pomocí přivádění zdroje uhlíku, například glu kozového sirupu nebo báze; a provedení 55 jednoho nebo více odčerpání, pokud se dosáhne maximálního pracovního objemu fermentéru nebo pokud se dosáhne ekonomicky dostatečné koncentrace mevinolinu pro provádění souproudého procesu.
Za použití těchto prvků se může dosáhnout mnohostranně kontrolovatelného postupu fermeniace, 40 který7 v závislosti na životním cyklu může poskytnout dobré konstantní okolní podmínky pro mikroorganismus.
Podle výhodného provedení popsaného výše poskytuje postup podle předkládaného vynálezu výtěžky převyšující výtěžky známých postupů, využívá významně menší množství surovin a
-4 CZ 300153 B6 energie, snižuje množství odpadního materiálu znečišťujícího životní prostředí na jednotku hmoty aktivního materiálu a lépe využívá fermentér.
V následujících příkladech je biosyntéza mevinolinu podle způsobu popsaného v HU 208997 5 (porovnávací příklad 1) porovnána se způsobem podle výhodného provedení podle předkládaného vynálezu (příklad 2).
Přík 1 ady provedení vynálezu o Porovnávací příklad 1
Biosyntéza mevinolinu podle HU 208997
V 6001itrové nádobě se připraví médium pro očkovací kulturu o následujícím složení:
| Složka | Množství (%) |
| glukóza | 4/0 |
| kasein pepton | 0,5 |
| NaNO3 | 0,3 |
| KH2PÓ4 | 0,2 |
| KČl | 0,05 |
| MgSO4*7H2O | 0,05 |
| Fe$Q4*7H2Q | 0,001 |
Očkování i nok ula se provádí pomocí suspenze zárodečných buněk kmene Aspergillus obseurus o počtu zárodečných buněk 6,5x109. Procesní parametry očkovací kultury byly následující:
| Parametr | Hodnota |
| Obj em | 400 litru |
| Teplota | 27 °C |
| Rychlost aerace | 20 normálních m3/h |
| Vnitřní tlak | 50 kPa |
| Rychlost míchání | 320 otáček za minutu |
n Přenos očkovací kultury do hlavního fermentačního média se provádí podle standardního postupu ve věku 36 hodin, kdy se pH nachází ve fázi růstu na hodnotě 5,6. Odstředěný objem buněk biomasy (PCV)je 14 %.
Očkovací kultura popsaná výše se inokuluje do hlavního fermentačního média značeného MEF.5 03 při poměru i noku láce 10 %. Složení hlavního fermentačního média je následující:
- S CZ 300153 B6
| Složka | Množství (%) |
| Monohydrát dextrózy | 1/0 |
| Kyselý kasein | 0/2 |
| Kukuřičný škrob | 8 |
| Sójová moučka | 1/5 |
| Kukuřičný výluh (50 %) | 1 |
| Chlorid sodný | 1 |
| Dihydrógenfósforečnan draselný | 0,2 |
| Glutaman sodný | 1/2 |
| Slunečnicový olej | 0,16 |
| Polypropylenglykol | 0,16 |
| Pankreatin* | 0,002 |
| Enzym BAM 240 | 0,007 |
| Chlorid vápenatý | 0, 02 |
| Hydroxid draselný | pro úpravu pH |
^čtyřnásobná síla podle Ph.Hg.VII.
Objem v 0 hodin: 500 litrů.
Fermentaee se provádí 7 dní. Aerace a míchání jsou následující:
| Aerace* | Rychlost míchání* |
| 18-25 normálních ms/h | 180-320 otáček za minutu |
* Rozpuštěny kyslík se udržuje na hodnotě nad 40 % nasycení.
o
Během fermentaee se přidají 50kg podíly enzymaticky zkapalněného kukuřičného škrobu podle rozvrhu ve věku 50, 73. 90 a 108 hodin.
Data pro produkci aktivní složky:
Doba fermentaee 164 hodin. Aktivita měřená podle HPLC: 927 mg/kg. Množství bujónu: 580 kg. Podle údajů uvedených výše je množství fermentovanc aktivní složky 0,58 tun*927 g/tuna/1000/1 m' = 0.54 kg/m‘ celkového objemu.
Příklad 2 o Biosyntéza mevinolinu se sirupem glukózy a přiváděním zdroje dusíku a za kontroly pH hydroxidem sodným nebo hydroxidem amonným
V 6001 nádobě se připraví očkovací kultivační médium, kterc má následující složení:
-6C.7. 300153 Bó
| Složka | % |
| glukóza | 4,0 |
| kasein pepton | 0,5 |
| kukuřičný výluh (50 %) | 3,0 |
| NaNÚ3 | 0,3 |
| KH2PO4 | 0,2 |
| KC1 | 0,05 |
| MgSQ4*7H2 | 0,05 |
| FeSO4*7H2O | 0,001 |
| pankreatin* | 0,005 |
| polypropylenglykol | 00,1 |
| slunečnicový olej | 0,1 |
^Čtyřnásobná síla podle Ph.Hg.VIl.
Očkování se provádí pomocí suspenze zárodečných buněk kmene Aspergillus obscurus o poctu zárodečných buněk 6.5x109. Procesní parametry očkovací kultury jsou stejné, jako je uvedeno pro porovnávací příklad 1.
Avšak přenesení očkovací kultury se provádí jiným způsobem než je popsáno v porovnávacím příkladu 1. Věk při přenosu je 40 hodin. pH dosáhlo, minimální hodnoty (pH 4,9) a přenos se io provedl ve fázi, kdy pH začalo růst a dosáhlo hodnoty asi 5,0. Tedy, pH se zvýšilo asi o 0,1 vzhledem k minimální hodnotě. Odstředěný objem buněk biomasy (PCV) je asi 24 %.
Výše popsaná očkovací kultura se inokulujc do hlavního fermentačního média při poměru inokulace 10 %. Složení fermentačního média je následující:
| Složka | Množství (¾) |
| kukuřičný škrob | 3 |
| glukózový sirup* | 1,0 |
| kyselý-kasein | 0,2 |
| sójová moučka | 1,5 |
| kukuřičný výluh (50 %} | 1 |
| chTorid sodný | 1 |
| dihydrogenfosřorečnan draselný | 0,2 |
| glutaman sodný | 1,2 |
| slunečnicový olej | 0 , 16 |
| polypropylenglykol | 0 , 16 |
| pankreatin** | 0,002 |
| hydroxid draselný | pro úpravu pH |
*25 kg se přidá ve formě 25% glukózového syrupu **etyřnásobná síla podle Ph.Hg.VIl.
Fermentace se provádí 13 dní. Aerace a rychlost míchání jsou následující:
| Aerace* | Rychlost míchání* |
| min. 12, max. 32 normálních | min. 220, max. 400 otáček |
| m3/h | za minutu |
* Rozpuštěny kyslík se udržuje na hodnotě 40 % nasycení pomocí výhodného způsobu aerace.
Během fermentaee je udržení stupně rozpuštění kyslíku velmi důležité, V nejintenzivnějším stupni sc jej může dosáhnout použitím rychlosti aerace 25 až 32 normálních m7h a rychlosti míchání
300 až 400 otáček za minutu.
Během hlavního fcrmentačního stupně je teplota 27 + 2 °C, vnitřní tlak je 40 kPa a doba kultivace 309 hodin.
Bčhcm íermentace se přidávají následující živiny:
1.1 lydrolyzovaný kukuřičný škrob (glukózový sirup) se připraví pomocí enzymatického zpracoío vání a zpracování pomocí kyseliny chlorovodíkové a přidá se. Suroviny použité pro přípravu glukózo vého sirupu jsou následující: 25 % kukuřičného škrobu, 0,3 až 0.4 chloridu vápenatého,
OJ až 0.2 amylázového enzymu (BAN) a 1 % koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Přidávání glukózovčlio sirupu se zahájí ve stadiu růstu pH. po dosažení jeho minimální hodnoty (5.0) ve věku 45 hodin a při hodnotě pil 5,6. Přidávání se provádí kontinuálně, pil se udržuje v rozmezí i? 5.4 až 5.8. Minimální rychlost přidávání je 0.5 litru/hodina a maximální rychlost přidávání je litru/hodina.
2. pH se kontroluje pomocí přidávání hydroxidu sodného a hydroxidu amonného, pokud hodnota pil poklesne pod 5,5, kromě toho se rychlost přidávání glukózovčho sirupu sníží na minimální.
3. Kukuřičný výluh (1 %) se přidá vc věku íermentace 100 hodin (vzhledem k objemu v čase 2o 0 hodin)
Údaje pro produkci aktivní složky:
Doba fermentaee: 309 hodin. Aktivita měřená pomocí HPLC: 2 868 mg/kg. Množství bujónu:
680 kg. Podle údajů uvedených výše je množství fermentované aktivní složky
0,68 tun*2868 g/tuna/1000/1 n? - 1,95 kg/m' celkového objemu.
Příklad 3
Biosyntéza mevinolinu s přidáváním, kontrolou a odváděním
Holotypový kmen Aspergillus obscurus n, sp. MV-1 se kultivuje ve sterilním inokulačním médiu o následujícím složení:
| Složka | % |
| glukóza | i 4 , 0 |
| kyselina fosforečná | [ 0,0035 1 |
| kyselý kasein | 0 . 5 |
| kukuřičný výluh (50 %) | 3 , 0 |
| NaN03 | 0 , 3 |
| kh2po« | 0,2 |
| kci | 0, 05 |
| MgSO4 +7H2 | 0, 05 |
| FeSO4*7K2O | 0 , 001 |
| slunečnicový olej | 0 , 1 |
| polypropylenglykol | 0,1 |
-8CZ 300153 B6
| pankreat in* | '0,005 |
| hydroxid draselný | pro úpravu pH |
| kyselina chlorovodíková | pro úpravu pH |
* čtyřnásobně silný podle Ph.Hg.VII
Během i noku laěn ího stupně sc použily následující parametry:
| Parametr | Hodnota |
| Obj em | |
| Rychlost míchání | 120 otáček za minutu |
| Aerace | 40Q±50 normálních m3/hod |
| Vnitřní tlak | 40±10 kPa |
| Teplota | 27+2 °C |
Inokulum se přenese poté, co hodnota pl 1 dosáhla minima (pH 4,8) a když je hodnota pH vyšší o 0,1 než jc minimální hodnota, tj. když pH dosáhne hodnoty 4,9. Odstředěný objem buněčné biomasy (PCV) je 24%. Při rychlosti přenosu 8% se výše uvedené inokulum přenese do o hlavního fermeniaěního média, které má následující složení:
| Složka | Množství (%) |
| Sójová moučka | 1,28-1,57 |
| Celkem kukuřičného nebo pšeničného škrobu | 9 |
| Kyselý kasein | 0,20 |
| Kukuřičný výluh (50 %) | 0,857-1,14 |
| chlorid sodný | 1,0 |
| dihydrogenfosforečnan draselný | 0,2 |
| glutaman sodný | 1,14-1,20 |
| chlorid vápenatý | 3,8xl0'3 |
| BAN enzym | 2,2xl0'3 |
| slunečnicový olej | 0, 10 |
| polypropylenglykol | 0, 10 |
| pankreatin* | 2,0xl(P |
| hydroxid draselný nebo kyselina chlorovodíková | pro úpravu pR |
Čtyřnásobná síla podle Ph.Hg.VII
-9 CZ 300153 Bó
Během hlavního fermentačního stupně se použily následující parametry;
| Parametr | Hodnota |
| Vnitřní tlak | 20+5 kPa |
| Teplota | 27+2 °C |
| Rychlost míchání . | 60-35 otáček za minutu |
| Rychlost aerace | 1000+4000 normálních m3/hod |
Přidávané látky:
1. Zdroj uhlíku: Asi 40 tun hydrolyzovaného škrobu, degradovaného do velké míry až vznikne glukóza (glukózový sirup) v 25% formě, která sc kontinuálně přivádí. Suroviny použité pro přípravu glukózového sirupu jsou následující: 25 % kukuřičného nebo pšeničného škrobu, 0,3 % chloridu vápenatého. 0,3 % BAN 240 enzymu a asi 2 % kyseliny chlorovodíkové.
2. Zdroj dusíku: Pro přípravu se použije kukuřičný výluh (50%) v množství 1 % vzhledem k fennentačnimu objemu v Čase 0 hodin v 5 m1 sterilního objemu.
3. Báze pro kontrolu pH. Pro kontrolu pH se použije nesterilizovaný 25 až 30% roztok hydroxidu sodného a hydroxidu amonného.
Přidávání:
1. Glukózový sirup: Přidávání se zahájí asi v 50 hodinách ve stadiu růstu pH, poté, co dosáhne první minimální hodnoty. Glukózový sirup se přidává proto, aby se kontrolovala hodnota pH v rozmezí 5,4 až 5,8. Přidávání glukózy se provádí pomocí dávkovacího způsobu nebo kontinuálně. Glukózový sirup se přidává rychlostí v rozmezí 40 až 1 000 kg/hod, s výhodou rychlostí 150 až 500 kg/hod. Pokud není možné udržet minimální pH dokonce i při minimální rychlosti přidávání glukózy, je pro kontrolu pH nutné přidávat bázi.
2. Kukuřičný výluh: Kukuřičný výluh se přidá v jedné dávce asi ve 100 hodinách. Pokud je to nutné, muže se přidat další dávka.
3. Hydroxid sodný nebo hydroxid amonný: Pro kontrolu pH se báze přidávají, pokud pH klesne pod 5,5 i při minimální rychlosti přidávání glukózového sirupu.
Množství pěny se kontroluje pomocí přidávání směsi slunečnicového oleje:PPG v poměru 95:5 tak, aby množství pěny nepřekročilo 25 % pracovního objemu fennenteru.
Odvádění z fermentéru se provedlo ve věku 112, 138, 178, 204 hodin pomocí odebrání 4m’ bujónu čtyřikrát.
Údaje pro produkci aktivní složky:
Doba fermentaee: 226 hodin. Aktivita měřená podle HPLC (matečný podíl); 1825 mg/kg. Aktivita sklizené části (s odebíráním); 1788 mg/kg. Podle údajů uvedených vyse je množství fermentované aktivní složky 95 tun* 1788 g/tuna/1000/105 m' celkového objemu.
Claims (15)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob fermcntace pro výrobu lovastatinu, vyznačující se tím, že sc provádí za 5 použití kmene rodu Aspergillus v ponořené kultuře, při pH mezi 5.2 a 7,0, při teplotě 24 až30 °C. na médiu obsahujícím asimilovatelné zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli. a zahrnuje stadium očkovací kultury a stadium hlavní fermentace, přičemž ve stadiu hlavní fermentace se za účelem zachování kultury ve „stabilním“ stavu použije rnetabolicky řízený způsob tak. že-organický zdroj uhlíku se dodává ve stadiu rostoucího pH, po dosažení jeho minimální io hodnoty:- pil v produkční fázi se udržuje v rozmezí od 5,2 do 6,2 dodáváním zdroje uhlíku a/nebo báze;- alespoň jednou se dodává organický zdroj dusíku po započetí dodávání zdroje uhlíku;- hladina rozpuštěného kyslíku se udržuje minimálně na 40 % nasycení pomocí aerace a míchání;- alespoň jednou se provádí částečná sklizeň.
- 2. Způsob podle nároku I. vyznačující se tím. že se pH udržuje v rozmezí od 5.4 do 5.8.
- 3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že sc zdroj uhlíku přidává v množ20 ství 0,01 až 0,4 hmotn./hmotn. %/h. vypočteno v ekvivalentu uhlíku a na hmotnost fěrmentačního bujónu v čase 0 hodin.
- 4. Způsob podle nároku 1. vyznačující se tím, že se jako organický zdroj uhlíku přidává hydrolyzovaný škrob a/nebo glukóza.
- 5. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se organický zdroj dusíku přidává v množství min. 0,01 hmotn./hmotn. %, vypočteno v ekvivalentu dusíku a na hmotnost fermentačního bujónu v čase 0 hodin.3o
- 6. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se jako zdroj dusíku přidává kukuřičný výluh.
- 7. Způsob podle nároku !, vyznačující se tím, že se jako báze použije hydroxid amonný a/nebo hydroxid alkalického kovu.
- 8. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se během částečné sklizně odebírá 5 % počátečního objemu.
- 9, Způsob podle nároku 1, vy zn ač u j í c í se t í m . že se ve fermentéru reguluje hladina pěny.
- 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se hladina pěny reguluje pomocí rostlinného oleje a/nebo syntetického odpěňovaeího činidla.45
- 11. Způsob podle nároku 10. v y z n a č uj í c í se t í m . že rostlinným olejem je slunečnicový olej a/nebo sójový olej.
- 12. Způsob podle nároku 1, vyznačující s c tím, že sc mikroorganismus Aspergillus. který' se má převést do hlavní fermentace, kultivuje v inokulačním médiu následujícího složení:50 glukóza 2 až 6 obj.% kyselina fosforečná 0.002 až 0.006 obj. % kyselý kasein 0,2 až 0,8 obj. % kukuřičný výluh 50 % 1,5 až 5 obj. % slunečnicový olej 0.05 až 0.18 obj. % polypropy lenglykol 0,05 až 0,18 obj. % pankrcatin, čtyřnásobná aktivita podle Ph.Ilg. Vil 0.002 až 0,008 obj. %5 doplněném vodou a běžně používanými mikro- a makroelemcn tární mi solemi.
- 13. Způsob podle nároku EvyznaČující sc tím, že se převod inokulačního média do hlavní fermentace provádí po dosažení minimální hodnoty pH 5.0 ± 0.5 ve stadiu rostoucí hodnoty pH.io
- 14. Způsob podle nároku 1. vyznačující se tím, žc použitým kmenem Aspergillus je kmen Aspergillus obscurus.
- 15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že se pro fcrmcntací použije 15 holotypový kmen Aspergillus obscurus n. sp. MV-1 uložený pod kódovým číslem NCAIM(P)F001189.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9800619A HU226966B1 (en) | 1998-03-20 | 1998-03-20 | Fermentation process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ412199A3 CZ412199A3 (cs) | 2000-02-16 |
| CZ300153B6 true CZ300153B6 (cs) | 2009-02-25 |
Family
ID=89996304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0412199A CZ300153B6 (cs) | 1998-03-20 | 1999-03-19 | Metabolicky kontrolovaný proces fermentace pri výrobe lovastatinové hydroxykyseliny |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6500651B1 (cs) |
| JP (1) | JP2001527424A (cs) |
| AU (1) | AU753564B2 (cs) |
| CA (1) | CA2289553C (cs) |
| CZ (1) | CZ300153B6 (cs) |
| IL (1) | IL132822A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ500870A (cs) |
| UA (1) | UA73074C2 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080064076A1 (en) * | 2006-09-11 | 2008-03-13 | Saucedo Victor M | Dissolved Oxygen Profile to Increase Fermentation Productivity and Economics |
| US9976158B2 (en) | 2011-06-30 | 2018-05-22 | Peter Simpson Bell | Method and apparatus for syngas fermentation with high CO mass transfer coefficient |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0556699A1 (en) * | 1992-02-10 | 1993-08-25 | Novopharm Ltd. | Novel fungal strains and use thereof in antibiotic production |
| US5403728A (en) * | 1992-06-17 | 1995-04-04 | Biogal Gyogyszergyar Rt | Microbial process for preparing mevinolin by a strain of aspergillus |
| WO1997005269A1 (en) * | 1995-07-27 | 1997-02-13 | Krka, Tovarna Zdravil, P.O. | Process for the preparation of lovastatin |
| EP0983373A1 (en) * | 1998-03-20 | 2000-03-08 | Biogal Gyogyszergyar Rt. | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5925599B2 (ja) | 1979-02-20 | 1984-06-19 | 三共株式会社 | 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法 |
| US4294926A (en) | 1979-06-15 | 1981-10-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US4319039A (en) | 1979-06-15 | 1982-03-09 | Merck & Co., Inc. | Preparation of ammonium salt of hypocholesteremic fermentation product |
| US4294846A (en) | 1979-09-21 | 1981-10-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and products of preparation |
| US4342767A (en) | 1980-01-23 | 1982-08-03 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products |
| US4420491A (en) | 1980-05-28 | 1983-12-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US5316776A (en) | 1984-01-31 | 1994-05-31 | Arnott's Biscuits Limited | Fermentation method |
| US4945048A (en) | 1987-05-23 | 1990-07-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Process for producing L-sorbose by subculture of seed |
| SI9300047A (en) | 1993-01-29 | 1994-09-30 | Krka | Microbiological method for preparation of lovostatin and/or mevinoline acid |
| US5494808A (en) | 1994-09-15 | 1996-02-27 | Merck & Co., Inc. | Defined medium OMPC fermentation process |
-
1999
- 1999-03-19 NZ NZ500870A patent/NZ500870A/en unknown
- 1999-03-19 CA CA002289553A patent/CA2289553C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-19 CZ CZ0412199A patent/CZ300153B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-03-19 AU AU30466/99A patent/AU753564B2/en not_active Ceased
- 1999-03-19 UA UA99116329A patent/UA73074C2/uk unknown
- 1999-03-19 JP JP54797099A patent/JP2001527424A/ja active Pending
- 1999-03-19 US US09/424,131 patent/US6500651B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-19 IL IL13282299A patent/IL132822A0/xx unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0556699A1 (en) * | 1992-02-10 | 1993-08-25 | Novopharm Ltd. | Novel fungal strains and use thereof in antibiotic production |
| US5403728A (en) * | 1992-06-17 | 1995-04-04 | Biogal Gyogyszergyar Rt | Microbial process for preparing mevinolin by a strain of aspergillus |
| WO1997005269A1 (en) * | 1995-07-27 | 1997-02-13 | Krka, Tovarna Zdravil, P.O. | Process for the preparation of lovastatin |
| EP0983373A1 (en) * | 1998-03-20 | 2000-03-08 | Biogal Gyogyszergyar Rt. | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2001527424A (ja) | 2001-12-25 |
| CA2289553C (en) | 2004-05-18 |
| AU3046699A (en) | 1999-10-18 |
| IL132822A0 (en) | 2001-03-19 |
| NZ500870A (en) | 2002-03-01 |
| AU753564B2 (en) | 2002-10-24 |
| US6500651B1 (en) | 2002-12-31 |
| CA2289553A1 (en) | 1999-09-30 |
| CZ412199A3 (cs) | 2000-02-16 |
| UA73074C2 (en) | 2005-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU762656B2 (en) | Method of producing gamma-decalactone | |
| WO1990000199A1 (en) | Improved fermentation process for carboxylic acids | |
| DK165124B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse | |
| CA2719581A1 (en) | Improved fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid | |
| CN112852891A (zh) | 一种用于生产mcl-PHA的人工双菌体系及其应用 | |
| JP4132253B2 (ja) | アンモニア耐性ｌ（＋）−乳酸産生能菌およびｌ（＋）−乳酸の生産方法 | |
| CN108048503B (zh) | 提高安丝菌素p-3生产的方法 | |
| CZ300153B6 (cs) | Metabolicky kontrolovaný proces fermentace pri výrobe lovastatinové hydroxykyseliny | |
| US6197560B1 (en) | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid | |
| US7439045B2 (en) | pH controlled fermentation process for pseudomonic acid production | |
| CN113832205A (zh) | 一种发酵罐生产两性霉素b的分批补料发酵方法 | |
| WO1998037220A1 (en) | Nitrogen feed in statin fermentation | |
| US4734368A (en) | Process for the bioconversion of fumarate to L-malate | |
| US20060234361A1 (en) | Method for producing L-lactic acid | |
| EP2287324A2 (en) | Fermentation processes with low concentrations of carbon- and nitrogen-containing nutrients | |
| CN118240887B (zh) | 一种利用含铵离子溶液产油脂的方法 | |
| CN106754838B (zh) | 一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法 | |
| JPH05244973A (ja) | アクチノマズラ・フィブロサ種ｎｏｖ．ＮＲＲＬ１８３４８およびアクチノマズラ種ＮＲＲＬ１８８８０からポリエーテル系抗生物質を製造する方法 | |
| CN117757868A (zh) | 一种发酵生产莫纳可林k的方法 | |
| RU2132384C1 (ru) | Способ получения лимонной кислоты | |
| KR0169061B1 (ko) | 배양조건 최적화를 통한 자일리톨의 제조방법 | |
| WO2004029265A2 (en) | Production of 2-kga | |
| CN117106653A (zh) | 一种纳豆激酶液态发酵工艺 | |
| WO2004003212A1 (en) | Novel process for the production of pancreatic lipase inhibitor | |
| SK702019A3 (sk) | Príprava farmaceutickej aktívnej látky lipstatín s použitím produkčného mikroorganizmu Streptomyces toxytricini NRL |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130319 |