CZ412199A3 - Metabolicky kontrolovaný proces fermentace při výrobě lovastatinové hydroxykyseliny - Google Patents
Metabolicky kontrolovaný proces fermentace při výrobě lovastatinové hydroxykyseliny Download PDFInfo
- Publication number
- CZ412199A3 CZ412199A3 CZ19994121A CZ412199A CZ412199A3 CZ 412199 A3 CZ412199 A3 CZ 412199A3 CZ 19994121 A CZ19994121 A CZ 19994121A CZ 412199 A CZ412199 A CZ 412199A CZ 412199 A3 CZ412199 A3 CZ 412199A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fermentation
- main fermentation
- glucose
- stage
- controlling
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 102
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 102
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 12
- LXZBFUBRYYVRQJ-UHFFFAOYSA-M Lovastatin hydroxy acid Chemical compound [Na+].C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC([O-])=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 LXZBFUBRYYVRQJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 title description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 43
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 28
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 26
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 24
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims abstract description 17
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 76
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 19
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 229910052757 nitrogen Chemical class 0.000 claims description 17
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 16
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 16
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 15
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 14
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 claims description 12
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 11
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical class [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 8
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims description 8
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910052742 iron Chemical class 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical class [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical class [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000011777 magnesium Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims 1
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 11
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 abstract description 11
- 230000035611 feeding Effects 0.000 abstract 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 33
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 13
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 13
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 5
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 5
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Inorganic materials [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 3
- 239000003529 anticholesteremic agent Substances 0.000 description 3
- 229940127226 anticholesterol agent Drugs 0.000 description 3
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 150000001261 hydroxy acids Chemical group 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 2
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 2
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 2
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N (R)-mevalonic acid Chemical compound OCC[C@](O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 102100029077 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase Human genes 0.000 description 1
- 101710158485 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001312183 Coniothyrium Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N DL-mevalonic acid Natural products OCCC(O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000228347 Monascus <ascomycete fungus> Species 0.000 description 1
- 241000031003 Monascus ruber Species 0.000 description 1
- 241000222350 Pleurotus Species 0.000 description 1
- 235000007685 Pleurotus columbinus Nutrition 0.000 description 1
- 240000001462 Pleurotus ostreatus Species 0.000 description 1
- 235000001603 Pleurotus ostreatus Nutrition 0.000 description 1
- 241000392433 Pleurotus sapidus Species 0.000 description 1
- AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N SJ000287055 Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 229960000673 dextrose monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N mevastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=CCC[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N 0.000 description 1
- 229950009116 mevastatin Drugs 0.000 description 1
- BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N mevastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C21 BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021048 nutrient requirements Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 235000021395 porridge Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004886 process control Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
177438/HK • · • '· '·· • · • • · ·. · • * 0 · • • • • 1 • * Ml · • t • ·· · • · · • • • • « • • 0 ·· · ··· • · « · *pV &ζι~ή*ί
Metabolicky kontrolovaný proces ferítientace při výrobě lovasta-tinové hydroxykyseliny
Oblast techniky Předkládaný vynález se týká obecně biosyntézy činidel snižujících hladinu, cholesterolu. Přesněji se předkládaný vynález týká biosyntézy mevinolinu, což je činidlo snižující hladinu cholesterolu, pomocí mikroorganismů.
Dosavadní stav techniky
Mevinolin (lovastatin; monakolin K; δ-lakton kyseliny β,δ-di-hydroxy-7- [1,2,6,7,8,8a-hexahydro-2,6-dimethyl-8- (2-methylbu-tyryloxy)naftalen-l-yl]heptanové) je jedním z nej důležitějších činidel snižujících hladinu cholesterolu. Podle předkládaného vynálezu zahrnuje termín mevinolin jak formu laktonu, tak formu volné hydroxykyseliny.·
Jeho forma volné hydroxykyseliny. je účinným inhibitorem enzymu 3-hydroxy-3-methylglutarylkoenzym A reduktázy, který katalyzuje vznik kyseliny mevalonové, což je časný meziprodukt při bio-syntéze cholesterolu. Mevinolin je zvláště výhodný, protože jako následek jeho aplikace se biosyntetickě meziprodukty s toxickým steroidním skeletem, vznikající v pozdějších stádiích špatně akumulují. Mevinolin zvyšuje počet LDL receptorů na povrchu buněčné membrány, která odstraňuje LDL cholesterol obíhající v krvi, a tak vyvolává snížení hladiny cholesterolu v krvi.
Obecně se aktivní látka vyrábí pomocí fermentace. GB 2046737 popisuje, že aktivní složka se může vyrábět pomocí různých kmenů, patřících do rodu Monascus, například M. ruber 1005, kultivovaných při 7 až 40 °C. Jako kultivační médium se použije vodný roztok glukózy, peptonu, kukuřičný výluh a chlorid • » ·♦ ·* • M - · ·* • · ·« · ♦ · · • · · ♦ ♦ · » « ·(%··· ··· • · ♦ ♦ ··· ··♦ ·# ·· amonný. Fermentace se provádí 10 dní za anaerobních podmínek a získá se 87 mg mevinolinu z filtrátu.5 litrů roztoku. US patent 4,294,926 popisuje biosyntézu mevinolinu s výhodou pomocí aplikace mikroorganismů uložených pod čísly ATCC 20541 nebo 20542, patřících do rodu Aspergillus terreus, do kultivačního média obsahujícího cukry, například glukózu, fruktózu, maltózu, jako zdroj uhlíku, zdroj dusíku, například kvasinky, hydrolyzované kvasinky, hydrolyzovaný kasein, kapalinu po máčení kukuřice a minerální soli, například uhličitan vápenatý, síran hořečnatý, soli kobaltu, železa, hořčíku, při teplotě 20 až 37 °C. Podobné postupy jsou popsány například v US patentu číslo 4,420,491, 4,342,767, 4,319,039 a 4,294,846, kde se fermentace provádí 3 až 5 dní v médiu obsahujícím 1 až 6 % cukrů a 0,2 až 6 % zdrojů dusíku. Německý patent číslo 4,402,591 popisuje biosyntézu mevinolinu pomocí mikroorganismů patřících do rodu Pleurotus, například Pleurotus ostreatus, P. sapidus, P. saca, při 25 až 35 °C během 7 až 14 dní kultivace na povrchu nebo při ponoření do média. ' '
Kanadský patent číslo 2,129,416 popisuje přípravu mevinolinu nebo zejména mevastatinu, pomocí 'mikroorganismů patřících do rodu Conióthyrium, například uložených pod číslem Coniothyrium fuckelii ATCC 74227 v kultivačním médiu obsahujícím 3 až 15 % glukózy, 0,5 až 4 % peptonu, 0,5 až 5 % amylázy, 0,2 až 1 % síranu amonného, 0,01 až 1 % síranu hořečnatého, 0,05 až 0,2. % antipěnícího činidla, 0,2 až 1,5 % L-isoileucinu, 0,2 až 1,5 % L-asparagové kyseliny při pH 5 až 6. Podle příkladů je koncentrace aktivní složky v bujónu 19 až 430 mg/litr. Německý patent číslo HU 208,997 popisuje aplikaci holotypového kmene Aspergillus obscurus očíslovaného jako MV-1, uloženého pod číslem NCAIM(P)F 001189. Fermentace se, s výhodou provádí v médiu obsahujícím kvasinkový extrakt a/nebo pepton a/nebo kasein jako zdroj dusíku a glukózu a/nebo maltózu nebo sacha-rózu jako zdroj uhlíku. Aktivita bujónu na konci kultivace v laboratorním měřítku se pohybuje mezi 400 až 850 mg/litr. Z předchozí diskuse je zřejmé, že se výzkumné práce při bio-syntéze mevinolinu zaměřovaly spíše na nové mikroorganismy produkující mevinolin, než na vývoj samotného procesu fermentace. Některé odkazy popisují, že se fermentace může provádět v běžných a známých médiích za použití jak povrchové kultivace, tak kultivace v pevném stavu. Použily se vsádkové postupy, kdy chování při postupu záviselo na počátečních podmínkách. Avšak technická omezení, například udržení nejvýhodnějších množství složek, optimálně rozpuštěný zdroj kyslíku a pH a tak dále, ztěžovaly zavedení kontinuálních korekčních aktiontů pro zajištění výhodných podmínek. Daný . mikroorganismus během hlavního kroku fermentace, v závislosti na jeho metabolismu, vyžaduje různé podmínky/složení média, aby bylo možné zajistit optimální růst a produkci aktivní složky. Autoři předkládaného vynálezu ze svých pokusů vyvodili, že při očkování kultury a na začátku hlavní fermentace, je množství aktivní biomasy velmi malé a proměnlivé. Výtěžek fermentace je tedy relativně malý a proměnlivý. Výtěžky dosažené na konci fermentace, které samozřejmě závisí na kmenu, nepřevyšovaly koncentraci mevinolinu 850 mg/litr. Autoři předkládaného vynálezu provedli detailní analýzu celého procesu fermentace od kroku přípravy očkovací kultury až do konce fermentace. Bylo zjištěno, že při kroku přípravy očkovací kultury, v případě známého média a provedení procesu, je množství biomasy příliš malé. Proto tedy během hlavní fermentace nejsou metabolismus mikroorganismů a kultivace dostačující. 4 • ·« »· ♦ · • · *
Pódstata vynálezu Předmětem podle předkládaného vynálezu je tedy zlepšit účinnost postupu fermentace při výrobě mevinolinu pomocí zesílení produkční schopnosti mikroorganismu pomocí změny podmínek a provádění fermentace.
Dalším předmětem podle předkládaného vynálezu je poskytnout buď krok přípravy očkovací kultury nebo fermentace nebo oba, za nejvhodnějších chemických a fyziologických podmínek pro metabolismus mikroorganismu.
Dalším předmětem podle předkládaného vynálezu je poskytnout při kroku přípravy očkovací kultury nebo fermentace nebo při obou, nejvhodnější chemické a fyziologické podmínky pro metabolismus mikroorganismů pomocí zachování stálých podmínek, rychlosti růstu a potom, po prodlouženou dobu, maximální rychlost tvorby produktu. Těchto a dalších předmětů podle vynálezu bylo dosaženo pomocí provedení podle předkládaného vynálezu poskytnutím způsobu produkce mevinolinu pomocí mikroorganismů při procesu fermentace, která zahrnuje krok přípravy očkovací kultury a hlavní fermentační krok, přičemž tento způsob zahrnuje: . a) kultivaci biomasy mikroorganismu v·kroku přípravy očkovací kultury za vzniku inokula; b) převedení jmenovaného inokula do fermentačního média ve jmenovaném fermentačním kroku; a c) zachování stabilních podmínek při jmenovaném kroku fermentace za vzniku fermentačního bujónu obsahujícího mevinolin.
Ve výhodném provedení podle vynálezu se stabilní podmínky zachovávají při kroku fermentace pomocí dodávání jednoho nebo více zdrojů organických atomů uhlíku; kontrolou glukózy a/nebo 5
·· ·· • * · ψ • t · *
celkového obsahu redukujících cukru; doplňováním organických a/nebo anorganických zdrojů dusíku; kontrolou pH; kontrolou hladiny pěny; kontrolou hmoty' fermentačního bujónu pomocí odvádění a přivádění; a kontrolou hladiny rozpuštěného kyslíku. FermentaČní proces se s výhodou provádí v ponořené kultuře mikroorganismů a· při teplotě 24 až 30 °C. Ve zvláště výhodném provedení podle předkládaného vynálezu je mikroorganismem kmen Aspergillus. V dalším výhodném provedení podle předkládaného vynálezu je zdroj organického uhlíku vybrán ze skupiny, kterou tvoří glukóza, hydrolyzovaný škrob a rostlinný olej; obsah glukózy se od šedesáté hodiny hlavního fermentacního kroku udržuje pod 0,2 %; zdroj dusíku je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kukuřičný výluh a hydroxid amonný; pH se kontroluje na hodnotě 5,2 až 7,0, s výhodou 5,2 až 6,2 pomocí doplňování zdrojů uhlíku a/nebo báze; množství pěny se kontroluje přidáním látky kontrolující hladinu pěny, látka je s výhodou syntetická nebo je to rostlinný olej; a hladina rozpuštěného kyslíku se kontroluje s výhodou mícháním a/nebo aerací fermen-tačního bujónu. V dalším výhodném provedení podle předkládaného vynálezu se inokulum převádí z kroku přípravy očkovací kultury do hlavního fermentačního kroku v době, kdy se pH v kroku přípravy očkovací kultury zvyšuje po dosažení své minimální hodnoty.
Podrobný popis vynálezu
Autoři zjistili, že optimální biosyntéza mevinolinu se může provést pomocí úpravy jednoho nebo více určitých parametrů způsobu, kroků a/nebo změn při kroku přípravy očkovací kultury nebo při fermentačním kroku nebo při obou těchto krocích procesu biosyntězy.
Autoři zjistili, že během fáze přípravy očkovací kultury mezi tyto parametry, kroky a/nebo proměnné patří dodání mikroorganismů ’s potřebnými složkami média ve snadno přizpůsobivé formě a v nejvhodnější koncentraci a při prodlouženém kultivačním čase o asi 10 až 25 %.
Autoři zjistili, že, aby se dosáhlo stabilních podmínek během kroku fermentace, patří mezi tyto parametry procesu, kroky procesu a/nebo proměnné procesu kontrola glukózy a/nebo celkového obsahu .redukujících cukrů, zachování zdrojů uhlíku na vhodné minimální úrovni, dodání organických a/nebo anorganických zdrojů dusíku, kontrola pH, . kontrola hladiny pěny, kontrola hmoty bujónu pomocí odvádění nebo přivádění a kontrola rozpuštěného množství kyslíku pomocí změn rychlosti míchání a/nebo rychlosti aerace.
Aby se optimalizovala biosyntéza mevinolinu, není nutné upravovat každý z výše uvedených procesních parametrů, kroků a/nebo proměnných pro krok přípravy očkovací kultury nebo pro krok hlavní fermentace současně. Ve výhodném provedení podle předkládaného vynálezu bude biosyntéza mevinolinu zahrnovat všechny výše uvedené procesní parametry, kroky a/nebo změny. V tomto výhodném provedení se bude provádět metabolicky kontrolovaný způsob fermentace mevinolinu, kdy se stabilních podmínek, tj . při konstantního pH, koncentrace glukózy, rozpuštěného kyslíku, viskozity, objemu, a tak dále, dosáhne rychle a stabilní podmínky se budou zachovávat po dlouhou dobu za', získání výtěžku, který vysoce překračuje výsledky známých postupů.
Určitých výhod se může dosáhnout, v kroku přípravy očkovací kultury pomocí úpravy jednoho nebo více výše uvedených procesních parametrů, kroků a/nebo proměnných v tomto kroku. Mezi tyto výhody patří například snížení doby potřebné k dosažení „stabilních" podmínek pomocí 20 až 30% zvýšení počtu center růstu a aktivní biomasy ve výhodnější morfologické formě, za vzniku výhodnějších podmínek pro kultivaci mikroorganismů. 7 7 • «· Φ· · · • · · ·· t • · ··· ♦«
• · ·» ·* ♦ ♦ · t • « t ·
*♦# »M Výsledkem těchto výhod a prodlouženi kultivačního času je, že se koncentrace biomasy téměř zdvojnásobí.
Určitých výhod se může dosáhnout při hlavním fermentačním kroku pomocí úpravy jednoho nebo více procesních parametrů, kroků a/nebo proměnných při tomto kroku. Mezi tyto výhody patří například rychlejší a méně kolísavá fáze růstu a rychlý vznik stabilního stavu, který je možné zachovávat dlouhou dobu. Výsledkem těchto výhod je značně zvýšená aktivita fermentace. V jednom provedení je předkládaný vynález zaměřen na postup fermentace při výrobě mevinolinu s kmenem patřícím do rodu Aspergillus v ponořené kultuře, při pH 5,2 až 7,0, při teplotě 24 až 30 °C, v médiu obsahujícím upravitelné. zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli, kdy se při hlavní fermentační fázi použije metabolicky kontrolovaný postup, čímž; se zachová kultura ve „stabilním" stavu. V tomto provedení se s výhodou kontroluje celkový obsah redukujícího cukru. Ve zdroji hlavní fermentace se s výhodou doplňují zdroj organického uhlíku, například glukóza, hydrolyzovaný škrob a rostlinný olej. S výhodou se koncentrace glukózy udržuje nižší než 0,2 % od šedesáté hodiny fermentace. Během postupu se doplňují zdroje dusíku, jako je kukuřičný výluh a roztok hydroxidu amonného. pH se s výhodou udržuje na hodnotě v rozmezí 5,2 až 6,2 pomocí doplňování zdroje uhlíku a/nebo báze, například hydroxidu amonného a/nebo hydroxidu sodného. Množství pěny ve fermentéru se může také kontrolovat pomocí doplňování rostlinného oleje, například slunečnicového oleje a/nebo sójového oleje a/nebo syntetických antipěnivých činidel do bujónu. Rozpuštěný kyslík se s výhodou kontroluje změnou rychlosti míchání a/nebo rychlosti aerace. Během fermentace se provádí jedno nebo více odčerpání . • t ·· • ♦ · » • · · · ·#· ♦·· • · ·· «· • ·· · · ·« « · ♦♦ ·· • · · · · • ··· · · * • · · · ···' ·· ······
Ve výhodném provedení se hlavní kultivační médium inokuluje očkovací kulturou, která má následující složení:
Složka Množství (hmotnost/objem) glukóza 2-6 kyselina fosforečná 0,002-0,006 kyselý kasein 0,2-0,8 kukuřičný výluh 1,5-5 slunečnicový olej 0,05-0,18 polypropylenglykol 0,05-0,18 pankreatin* 0,002-0,008 *čtyřnásobná aktivita podle Ph.Hv.VII.
Kultivační médium o výše uvedeném složení se doplní o běžně používané mikro- a makroelementární soli, například anorganické soli sodíku, draslíku, hořčíku a železa. Hlavní' kultivační médium se inokuluje očkovací kulturou, jejíž kultivační čas je prodloužen o 10 až 25 %. Při stupni přenosu naočkované kultury je pH ve fázi růstu po dosažení jeho minimální hodnoty.
Pro fermentaci se s výhodou použije kmen Aspergillus obscurus, jeho varianty nebo jeho mutant nebo výhodněji holotypový kmen Aspergillus obscurus n. sp. MV-1 uložený pod kódovým číslem NCAIM(P)F 001189. Očkovací kultura se inokuluje do sterilního hlavního fermen-tačního média při prodlouženém čase kultivace ve fázi rostoucího pH po dosažení jeho minimální hodnoty. V hlavním fermen-tačním stupni se mohou „stabilní" podmínky s maximální produkcí aktivní složky zachovat po delší dobu pomocí přivádění zdrojů uhlíku a dusíku, aby se vyhovělo požadavkům na živiny; kontroly koncentrace glukózy, aby se zabránilo nežádoucímu zahušťování kultury a zvýraznil se růst biomasy; kontroly rychlosti míchání a rychlosti aerace podle požadavků na kyslík; kombinace vhodného materiálu splňujícího· jak požadavky pro kontrolu množství pěny, tak požadavky na zdroj uhlíku, I I ·· ·· ·· ·· » · · · • · · ♦ ♦ · I « · Μ· ♦·« ·· · I I · · ··· ··· ·· ·· například směs rostlinného oleje á syntetického . činidla; udržení hodnoty pH mezi 5,2 až 6,2 pomocí přivádění zdroje uhlíku, například glukózového sirupu nebo báze; a provedení jednoho nebo více odčerpání, pokud se -dosáhne maximálního pracovního objemu fermentéru nebo pokud se dosáhne ekonomicky dostatečné koncentrace mevinolinu pro provádění souproudého procesu.
Za použití těchto prvků se může dosáhnout mnohostranně kontrolovatelného postupu fermentace, který v závislosti na životním cyklu může poskytnout dobré konstantní okolní podmínky pro mikroorganismus.
Podle výhodného provedení popsaného výše poskytuje postup podle předkládaného vynálezu výtěžky převyšující výtěžky, známých postupů, využívá významně menší množství surovin a energie, snižuje množství odpadního materiálu znečišťujícího životní prostředí na jednotku hmoty aktivního materiálu a lépe využívá fermentér. V následujících příkladech je biosyntéza mevinolinu podle způsobu popsaného v HU 208997 (porovnávací příklad 1) porovnána, se způsobem podle výhodného provedení podle předkládaného vynálezu (příklad 2). Příklady provedení vynálezu
Porovnávací příklad 1
Biosyntéza mevinolinu podle HU 208997 V 6001itróvé nádobě se připraví médium pro očkovací kulturu médium o následujícím složení:
Složka Množství (%) glukóza 4,0 kasein pepton 0,5 NaN03 0,3 « * ·· ·· • · ·· • * • · • • • · • · • t ··· • • • ··* ·* ·« t *♦ ·· t · • · · t ··· 10 ··· *·* kh2po4 0,2 KC1 0,05 MgS04*7H20 0,05 FeS04*7H20 0,001 Očkování inokula se provádí pomocí suspenze zárodečných buněk kmene Aspergillus obscurus o počtu zárodečných buněk 6,5xl09. Procesní parametry očkovací kultury byly následující:
Parametr Hodnota Objem 400 litrů Teplota to Ό o O Rychlost aerace 20 normálních nť/h Vnitřní tlak 50 kPa Rychlost míchání 320 otáček za minutu Přenos očkovací kultury do hlavního fermentačního média se provádí podle standardního postupu ve věku 36 hodin, kdy se pH nachází ve fázi růstu na hodnotě 5,6. Odstředěný objem buněk biomasy (PCV) je 14 %. Očkovací kultura popsaná výše se inokuluje do hlavního fermentačního média značeného MEF-03 při poměru inokůlace 10 %. Složení hlavního fermentačního média je následující:
Složka Množství (%) Monohydrát dextrózy 1,0 Kyselý kasein 0,2 Kukuřičný Škrob 8 Sójová moučka 1/5 Kukuřičný výluh (50 %) 1 Chlorid sodný 1 Dihydrogenfosforečnan draselný 0,2 Glutaman sodný 1,2 Slunečnicový olej 0,16 Polypropylenglykol 0,16 11 11 ·» • ♦ ·· ·# »· • · · • · ♦ · • « ♦♦· ·♦ ♦ ♦ ·♦· ·· ♦# • · ··· ♦ • ·♦
Pankreatin* 0,002 Enzym BAN 240 0,007 Chlorid vápenatý 0,02 Hydroxid draselný pro úpravu pH *čtyřnasobná síla podle Ph.Hg.VII.
Objem v 0 hodin: 500 litrů.
Fermentace se provádí 7 dní. Aerace a míchání jsou následující:
Aerace* Rychlost míchání* 18-25 normálních m3/h 180-320 otáček za minutu ♦Rozpuštěný kyslík se udržuje na hodnotě nad 40 % nasycení. Během fermentace se přidají 50kg podíly enzymaticky zkapalněného kukuřičného škrobu podle rozvrhu ve věku 50, 73, 90 a 108 hodin.
Data pro produkci aktivní složky:
Doba fermentace 164 hodin. Aktivita měřená podle HPLC: 927 mg/kg. Množství bujónu: 580 kg. Podle údajů uvedených výše je množství fermentované aktivní složky 0,58 tun*927 g/tu- na/1000/l m3 = 0,54 kg/m3 celkového objemu. Příklad 2
Biosyntéza mevinolinu se sirupem glukózy a přiváděním zdroje dusíku, a za kontroly pH hydroxidem sodným nebo hydroxidem amonným V 6001 nádobě se připraví očkovací kultivační médium, které má následující složení:
Složka % glukóza 4,0 kasein pepton 0,5 kukuřičný výluh (50 %) 3,0
NaN03 . ; 0,3 KH2P04 0,2 t KC1 0,05 MgS04*7H2 0,05 FeS04*7H20 0,001 pankreatin* 0,005 polypropylenglykol 00,1 slunečnicový olej 0,, 1 *čtyřnásobná síla podle Ph.Hg.VII. Očkování se provádí pomocí suspenze zárodečných buněk kmene Aspergillus obscurus o počtu, zárodečných buněk 6,5xl09. Proces^ ní parametry očkovací kultury jsou stejné, jako je uvedeno pro porovnávací příklad 1.
Avšak přenesení očkovací kultury se provádí jiným způsobem než je popsáno v porovnávacím přikladu 1. Věk při přenosu je 40 hodin.· pH dosáhlo minimální hodnoty (pH 4,9) a přenos se provedl ve fázi, kdy pH začalo růst a dosáhlo hodnoty asi 5,0. Tedy, pH se zvýšilo asi o 0,1 vzhledem k minimální hodnotě. Odstředěný objem buněk biomasy (PCV) je asi 24 %. Výše popsaná očkovací kultura se inokuluje do hlavního fermen-tačního média při poměru inokulace 10 %. Složení fermentačního média je následující:
Složka - Množství (%) kukuřičný škrob 8 glukózový sirup* 1,0 kyselý kasein 0,2 sój ová moučka 1,5 kukuřičný výluh (50 %) 1 chlorid sodný 1 dihydrogenfosforečnan draselný 0,2 glutaman sodný 1,2
slunečnicový olej f 0,16 po1ypropy1englyko1 0,16 pankréatin** 0,002 hydroxid draselný pro úpravu pH *25 kg se přidá ve formě 2 5% glukózového s.yrupu **čtyřnásobná síla'podle Ph.Hg.VII.
Fermentace se provádí 13 dní. Aerace a rychlost míchání jsou následující:
Aerace* Rychlost míchání* min. 12, max. 32 normálních m3/h min. 220, max. 400 otáček za minutu *Rozpuštěný kyslík se udržuje na hodnotě 40 % nasycení pomocí výhodného způsobu aerace. Během fermentace je udržení stupně rozpuštění kyslíku velmi důležité. V nej intenzivnějším stupni se jej může dosáhnout použitím rychlosti aerace 25 až 32 normálních m3/h a rychlosti míchání 300 až 400 otáček za minutu. Během hlavního fermentačního stupně je teplota 27±2 °C, vnitřní tlak je 40 kPa a dobá kultivace 309 hodin. Během fermentace se přidávají následující živiny: 1. Hydrolyzovaný kukuřičný škrob (glukózový sirup) se připraví pomocí enzymatického zpracování a zpracování pomocí kyseliny chlorovodíkové a přidá se. Suroviny použité pro přípravu glukózového sirupu jsou následující: 25 % kukuřičného škrobu, 0,3 až 0,4 chloridu vápenatého, 0,1 až 0,2 amylázového enzymu (BAN) a 1 % koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Přidávání glukózového sirupu se zahájí ve stádiu růstu pH, po dosažení jeho minimální hodnoty (5,0) ve věku 45 hodin a při hodnotě pH 5,6. Přidávání se provádí kontinuálně, pH se udržuje v rozmezí
• · · ♦ ♦ • * · ··* · · • 9 » «·♦ «·» 9· ·» 5,4 až 5,8. Minimální rychlost přidávání je 0,5 litru/hodina a maximální rychlost přidávání je 5 litrů/hodina. 2. pH se kontroluje pomocí přidávání hydroxidu sodného a hydroxidu amonného, pokud hodnota pH poklesne pod 5,5, kromě toho se rychlost přidávání glukózového sirupu sníží na minimální. 3. Kukuřičný výluh (l %) se přidá ve věku fermentace 100 hodin (vzhledem k objemu v čase 0 hodin). Údaje pro produkci aktivní složky:
Doba fermentace: 309 hodin. Aktivita měřená pomocí HPLC: 2868-m9/k9· Množství bujónu: 680 kg. Podle údajů uvedených výše je množství fermentované aktivní složky 0,68 tun*286.8 g/tu- na/lOOO/l m3 = 1,95 kg/m3 celkového objemu. Příklad 3
Biosyntéza mevinolinu s přidáváním, kontrolou a odváděním
Holotypový kmen Aspergillus obscurus n. sp. MV-1 se kultivuje ve sterilním inokulačním médiu o následujícím složení:
Složka % glukóza 4,0 kyselina-fosforečná 0,0035 kyselý kasein 0,5 kukuřičný výluh (50 %) 3,0 NaN03 0,3 KH2P04 0,2 KC1 0,05 MgS04*7H2 0,05 FeS04*7H20 0,001 slunečnicový olej 0,1 polypropylenglykol 0,1 • · • ·
··· ··«
pankreatin* . 0,005 hydroxid draselný pro úpravu pH kyselina chlorovodíková pro úpravu pH
♦čtyřnásobně silný podle Ph.Hg.VII Během iňokulačního stupně se použily následující parametry:
Parametr Hodnota Objem 8 m3 Rychlost míchání 120 otáček za minutu Aerace 400±50 normálních m3/hod Vnitřní tlak 40±10 kPa Teplota 27±2 °C
Inokulum se přenese poté, co hodnota pH dosáhla minima (pH 4,8) a když je hodnota pH vyšší o 0,1 než je minimální hodno-> ta, tj . když pH dosáhne hodnoty 4,9. Odstředěný objem buněčné biomasy (PCV) je 24 %. Při rychlosti přenosu 8 % se výše uvedené inokulum přenese do hlavního fermentačního média, které má následující složení:
Složka Množství (%) Sójová moučka 1,28-1,57 Celkem kukuřičného nebo pšeničného škrobu 9 Kyselý kašein 0,20 Kukuřičný výluh (50 %) 0,857-1,14 chlorid sodný 1,0 dihydrogenfosforečnan draselný 0,2 glutaman sodný 1,14—1,20 chlorid vápenatý , 3,8xl0'3 BAN enzym 2,2x1O3 slunečnicový olej 0,10 polypropylenglykol 0,10 pankreatin* 2,0x10 3 ~ hydroxid draselný chlorovodíková nebo kyselina
pro upravu pH
*čtýřnásobná síla podle Ph.Hg.VII Během hlavního fermentačního stupně se použily následující parametry:
Parametr Hodnota Vnitřní tlak 20+5 kPa Teplota 27±2 °C Rychlost míchání 60-85 otáček za minutu Rychlost aerace 1000±4000 normálních m1/hod Při dáváné 1átky: 1. Zdroj uhlíku: Asi 40 tun hydrolyzovaného škrobu, degradovaného do velké míry až vznikne glukóza (glukózový sirup) v 25% formě, která se kontinuálně přivádí. Suroviny použité pro přípravu glukózového sirupu jsou následující: 25 % kukuřičného nebo pšeničného škrobu, 0,3 % chloridu vápenatého, 0,3 % BAN 240 enzymu a asi 2 % kyseliny chlorovodíkové. 2. Zdroj dusíku: Pro přípravu se použije kukuřičný výluh (50 %) v množství l % vzhledem k fermentačnímu objemu v čase 0 hodin v 5 m1 sterilního objemu. 1 Báze pro kontrolu pH. Pro kontrolu pH se použije nesteri-lizovaný 25 až 30% roztok hydroxidu sodného a hydroxidu amonného. Přidávání: 1. Glukózový sirup: Přidávání se zahájí asi v 50 hodinách ve stádiu růstu pH, poté, co dosáhne první minimální hodnoty. Glukózový sirup se přidává proto, aby se kontrolovala hodnota pH v rozmezí 5,4 až 5,8. Přidávání glukózy se provádí pomocí dávkovacího způsobu nebo kontinuálně. Glukózový sirup se 17 • · ·«< •· 0 0 09 0 0 0 0 * ·· ·· 9 0 9 0 090 9 0 0 990 900 09 přidává rychlostí v rozmezí 0 až 1000 kg/hod, s výhodou rychlostí 150 až 500 kg/hod. Pokud není možné udržet minimální pH dokonce i při minimální rychlosti přidávání glukózy, je pro kontrolu pH nutné přidávat bázi. 2. Kukuřičný výluh: Kukuřičný výluh se přidá v jedné dávce asi ve 100 hodinách. Pokud je to nutné, může se přidat další dávka. 3. Hydroxid sodný nebo hydroxid amonný: Pro kontrolu pH se báze přidávají, pokud pH klesne po 5,5 1 při minimální rychlosti přidávání glukózového sirupu.
Množství pěny se kontroluje pomocí přidávání směsi slunečnicového oleje:PPG v poměru 95:5 tak, aby množství pěny nepřekročilo 25 % pracovního objemu fermentéru.'
Odvádění z fermentéru se provedlo ve věku 112, 13 8, 178, 204 hodin pomocí odebrání 4 m3 bujónu čtyřikrát. Údaje pro produkci aktivní složky:
Doba fermentace: 226 hodin. Aktivita měřená podle HPLC (matečný podíl): 1825 mg/kg. Aktivita sklizené části (s odebíráním) : 1788 mg/kg. Podle údajů uvedených výše je množství fermentované aktivní složky 95 tun*1788 g/tuna/1000/105 m3 celkového objemu.
Claims (50)
18 6
·· ··· ·♦* *· f\] n ηΐ'Ψ\ NÁROKY PA TENTOV É 1. Způsob fermentace při výrobě mevinolinu vyznačuj í -c í se tím; že se provede pomocí kmene rodu Aspergil-lus v ponořené kultuře, při pH 5,2 až 7,0, při teplotě 24 až 30 °C, v médiu obsahujícím upravitelné zdroje uhlíku a dusíku a minerální soli, kdy se v hlavní fermentační fázi použije metabolicky kontrolovaný způsob za účelem zachování kultury ve „stabilním" stavu.
2. Způsob podle nároku 1 vyznačují cí še tím, že se během hlavní fermentační fáze. kontroluje obsah redukujícího cukru.
3. Způsob podle nároku 1 vyznačující se t í m , že se během hlavní fáze fermentace přidává organický zdroj dusíku.
4. Způsob podle nároku 3 v y z n a č u j í c í se tím, že se jako zdroj uhlíku přidává glukóza.
5. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že se' obsah glukózy kontroluje přidáváním od věku 60 hodin do konce fermentace pod 0,2 %.
6. Způsob podle nároku 3 v y z na č u j í c í se tím, že se jako zdroj uhlíku přidává hydrolyzovaný škrob a/nebo rostlinný olej.
7. Způsob podle nároku 1- vyznačující se tím, že se během hlavní fermentační fáze přidává zdroj dusíku.
8. Způsob podle nároku 7 vyznačující se tím, že se jako zdroj dusíků přidá kukuřičný výluh a/nebo hydroxid amonný. t· · • • · • · * 9 . · ··· * • • A • ··· * * • · · « · ♦ · · · • * ♦ · i • · ·ι· ··· • · · • · * ·« · ·
9. Způsob podle nároku 1 v y z n, a Č^ u jící se tím, že se během hlavní fermentační fáze kontroluje pH na hodnotě mezi 5,2 až 6,2.
10. Způsob podle nároku 9 v y z. naču.j í c í se tím, že se kontrola pH provádí pomocí přidání zdroje uhlíku a/nebo báze.
11. Způsob podle nároku 10 vyznačující se tím, že se jako přidávaná báze použije hydroxid amonný a/nebo hydroxid alkalického kovu.
12. Způsob podle nároku 1- vyznačující· se tí m ., že se ve fermentéru kontroluje pěna.
13. Způsob podle nároku 12 vyznačující setím, že se pěna kontroluje pomocí rostlinného oleje a syntetického Činidla.
14 .Způsob podle nároku 12 vyznačuj í cí se tím, že· rostlinným olejem je slunečnicový olej a/nebo sójový olej .
15. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že se podle množství rozpuštěného kyslíku kontroluje rychlost míchání a/nebo rychlost aerace.
16. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že se během hlavní fáze fermentace provedou částečné odběry kultury.
17. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že se inokulace hlavní fermentační fáze provede pomocí kultury i mikroorganismů Aspergillus kultivované v následujícím médiu pro očkovací kulturu: glukóza 2-6 % hmot./objem kyselina fosforečná 0,002-0,006 % hmot./objem 20 • «« • • »· -'i ♦ ♦ · · · • · 4 · • · ♦ · ♦ · · » • ♦ • · « · * · · • • • «4« • * · 1 fr • • • • • M · * ·»» * · · f · ♦ « 0,,2-0,8 % hmot./objem 1,5-5% hmot./objem 0,05-0,18% hmot./objem 0,05-0,18% hmot./objem 0,002-0,008% hmot./objem kyselý kasein kukuřičný výluh 50 % slunečnicový olej polypropylenglyko.l pankreatin, čtyřnásobná aktivita podle Ph.Hg.VII doplněném vodou a běžně používanými mikro- a makroelementár-ními solemi (například anorganické soli sodíku, draslíku, hořčíku a železa).
18. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že se přenos očkovací kultury do hlavní fermentace provede za použití 10 až 25% prodloužení kultivačního času vzhledem k.normálnímu času a/nebo ve fázi rostoucího pH po dosažení jeho minimálhí hodnoty.
19. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že použitým mikrooganismem je kmen Aspergillus, jeho varianta nebo jeho mutant. >
20. Způsob podle nároku 19 vyznačující se tím, že mikroorganismem použitým při fermentaci je holotypový kmen Aspergillus obscurus MV-1 uložený pod kódovým číslem NCAIM(P)F 001189.
21. Způsob přípravy mevinolinu pomocí mikroorganismu při procesu fermentace zahrnujícím.krok přípravy očkovací kultury a hlavní fe,rmentační krok, kdý se tento způsob vyzná -čuje tím, že zahrnuje: a) kultivaci biomasy mikroorganismu ve jmenované kroku přípravy očkovací kultury za vzniku inokula; b) převedení jmenovaného inokula do fermentačního média ve jmenovaném hlavním fermentačním kroku; •srs rc·
♦ ·· ·# 21 ·· »· * · · I « ψ · · tl» ·»· • · • · «* c) zachování stabilních podmínek při jmenovaném fermentačním kroku za vzniku fermentačního bujónu obsahujícího mevino-lin.
22. Způsob podle nároku 21 vyznačující se tím, že stabilní podmínky se v hlavním fermentačním stupni udržují pomocí přivádění jednoho nebo více zdrojů organického uhlíku; kontroly glukózy a/nebo celkového obsahu redukujícího cukru; přivádění organického a/nebo anorganického zdroje dusíku; kontroly pH; kontroly množství pěny; kontroly hmoty ve fermentačním bujónu pomocí odvádění a dopl- -ňování; a kontroly množství rozpuštěného kyslíku.
23. Způsob podle nároku 22 vyzná c u j í c í se tím, že se stabilní podmínky v hlavním fermentačním stupni udržují pomocí kontroly glukózy a/nebo celkového obsahu redukujícího cukru.
24.. Způsob, podle nároku 22 vy z načující se tím, že se stabilní podmínky v hlavním fermentačním stupni udržují pomocí doplňování organického a/nebo anorganického zdroje dusíku.
25. Způsob podle nároku 22 vyznačující se t. í m , že se stabilní podmínky v hlavním fermentačním stupni udržují pomocí doplňování organického zdroje uhlíku.
26. Způsob podle nároku 25 vyznačující se tím, že se jmenovaný organický zdroj uhlíku vybere ze skupiny, kterou tvoří glukóza, hydrolyzovaný škrob a rostlinný olej.
27. Způsob podle nároku 26 vyznačující se tím, že zdrojem, organického uhlíku je glukóza.
28. Způsob podle nároku 27 vyznačující se tím, že se obsah glukózy udržuje pod 0,2 % od šedesáté hodiny hlavního fermentačního stupně. 888385«! i 22 ♦ * ·· ♦· • · <* · * · t * 9 9 * · ♦ · • M ** « * · t«* t»f • . · Ψ · #*· »«» .·· ♦·
29. Způsob podle nároku 24 v y z n ,a č u j £ c í se tím, že zdroje dusíku jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří kukuřičný výluh a hydroxid amonný.
30. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že se stabilní podmínky v hlavním fermentačním stupni zachovávají pomocí kontroly pH.
31. Způsob podle nároku 30 vyznačující se tím, že se pH udržuje v rozmezí 5,2 až 7,0.
32. Způsob podle nároku 31 vyznačující se tím, že se pH udržuje v rozmezí 5,2 až 6,2.
33. Způsob podle nároku 30 vyznačuj ící se tím, že se pH kontroluje přiváděním zdrojů uhlíku a/nebo báze.
34. .Způsob podle nároku 33 vyznačující se tím, že jmenovaná báze je vybraná ze skupiny, kterou tvoří hydroxid amonný a hydroxid alkalického kovu.
35. Způsob podle nároku 22 v y z n a č u j £ c í s e tím, že se stabilní podmínky v hlavním fermentačním stupni" zachovávají pomocí kontroly množství pěny.·
36. Způsob podle nároku 35 vyznačující se tím, že množství pěny kontroluje přidáním látky kontrolující množství pěny.
37. Způsob podle nároku 36 v y z n a č u j í c í' s e tím, že látkou kontrolující množství pěny je syntetická látka.
38. Způsob podle nároku 36 v y z n a č u j i c í se tím, že látkou kontrolující množství pěny je rostlinný olej.
39. Způsob podle nároku 38 vyznačující se tím, že rostlinný olej je vybrán ze skupiny, kterou tvoří slunečnicový olej a/nebo sójový olej. - 23 23 f· · ♦ ♦
#· · · ·· ·· • «· 4 0 0 0 4 0 4 0 4 4 4 0 0 • 0 44 4 « * 0 404 440 0 0-0 0 0 0 000 04 00· »04 04 04
40. Způsob podle nároku 22 vy z n a č u jící se tím, že se stabilní podmínky v hlavním fermentačním stupni zachovávají pomocí kontroly množství rozpuštěného kyslíku.
41. Způsob podle nároku 40 vyznačující se tím, že se množství rozpuštěného kyslíku kontroluje pomocí míchání a/nebo aerace fermentačního bujónu.
42. Způsob podle nároku 21 vyznačující se tím, že dále zahrnuje periodické odebírání množství fermentačního bujónu během hlavního fermentačního stupně..
43. Způsob podle nároku 21 vy z n a ču j í c í se tím, že se proces fermentace provádí v ponořené kultuře mikroorganismů .
44. Způsob podle nároku 21 vyznačuj í c í se tím, že se proces fermentace provádí při teplotě 24 až 30 °C.
45. Způsob podle nároku 21 vyznačující se tím, že se inokulum převede ze stupně přípravy očkovací do hlavního fermentačního stupně, když pH ve stupni přípravy očkovací kultury roste po dosažení své minimální hodnoty.
46. Způsob podle nároku 21 vyznačující se tím, že jmenovaným mikroorganismem je druh Aspergillus.
47. Způsob podle nároku 46 vyznačující se tím, že jmenovaným mikroorganismem je kmen Aspergillus obscurus nebo jeho varianta nebo mutant.
48. Způsob podle nároku 47 v y z n a č u j í c í se tím, že jmenovaným mikroorganismem je holotypový kmen Aspérgillus obscurus n. sp. MV-1 uložený pod kódovým číslem NCAIM(P)F 001189.
49. Způsob podle nároku 46 vyznačující se tím, že během-stupně přípravy očkovací kultury se biomasa mikro-
* ·« ·· ·· · « » « • · · · i t 9 · · · **·' # · «Μ « · ·*
• *· * φ-φ * φ «· • · · · • ··* * · • · * • •9 «· *t 24 organismů kultivuje v médiu obsahujícím 2 až 6 % hmotn./obj. glukózy, 0,002 až 0,006 % hmotn./obj. kyseliny fosforečné, 0,2 až 0,8 % hmotn./obj. kyselého kaseinu, 1,5 až 5 % hmotn./obj. kukuřičného výluhu (50 %), 0,05 až 0,18 % hmotn./obj., slunečnicového oleje, 0,05 až 0,18 % hmotn./obj. polypropylenglykolu, 0,002 až 0,008 % hmotn./obj. pankrea-tinu (čtyřnásobná aktivita podle Ph.Hg.VII.), vodu a mikro-a makroelementární soli.
50. Způsob podle nároku 49 v y z n a č u j £ c í se tím, že jmenované mikro- a makroelementární soli jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří soli sodíku, draslíku, hořčíku . a železa a jejich směsi.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9800619A HU226966B1 (en) | 1998-03-20 | 1998-03-20 | Fermentation process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ412199A3 true CZ412199A3 (cs) | 2000-02-16 |
| CZ300153B6 CZ300153B6 (cs) | 2009-02-25 |
Family
ID=89996304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0412199A CZ300153B6 (cs) | 1998-03-20 | 1999-03-19 | Metabolicky kontrolovaný proces fermentace pri výrobe lovastatinové hydroxykyseliny |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6500651B1 (cs) |
| JP (1) | JP2001527424A (cs) |
| AU (1) | AU753564B2 (cs) |
| CA (1) | CA2289553C (cs) |
| CZ (1) | CZ300153B6 (cs) |
| IL (1) | IL132822A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ500870A (cs) |
| UA (1) | UA73074C2 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080064076A1 (en) * | 2006-09-11 | 2008-03-13 | Saucedo Victor M | Dissolved Oxygen Profile to Increase Fermentation Productivity and Economics |
| US9725688B2 (en) | 2011-06-30 | 2017-08-08 | Peter Simpson Bell | Bioreactor for syngas fermentation |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5925599B2 (ja) | 1979-02-20 | 1984-06-19 | 三共株式会社 | 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法 |
| US4319039A (en) | 1979-06-15 | 1982-03-09 | Merck & Co., Inc. | Preparation of ammonium salt of hypocholesteremic fermentation product |
| US4294926A (en) | 1979-06-15 | 1981-10-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US4294846A (en) | 1979-09-21 | 1981-10-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and products of preparation |
| US4342767A (en) | 1980-01-23 | 1982-08-03 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products |
| US4420491A (en) | 1980-05-28 | 1983-12-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US5316776A (en) | 1984-01-31 | 1994-05-31 | Arnott's Biscuits Limited | Fermentation method |
| US4945048A (en) | 1987-05-23 | 1990-07-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Process for producing L-sorbose by subculture of seed |
| NZ245713A (en) * | 1992-02-10 | 1994-12-22 | Novopharm Ltd | Production of the antibiotic lovastatin from genetically engineered aspergillus strains |
| HU208997B (en) * | 1992-06-17 | 1994-02-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Microbiological method for producing mevinoline |
| SI9300047A (en) | 1993-01-29 | 1994-09-30 | Krka | Microbiological method for preparation of lovostatin and/or mevinoline acid |
| US5494808A (en) | 1994-09-15 | 1996-02-27 | Merck & Co., Inc. | Defined medium OMPC fermentation process |
| SI9500238A (en) * | 1995-07-27 | 1997-02-28 | Krka Tovarna Zdravil | Procedure for the production of lovastatin |
| HU226966B1 (en) * | 1998-03-20 | 2010-03-29 | Teva Gyogyszergyar Zartkoeruee | Fermentation process |
-
1999
- 1999-03-19 NZ NZ500870A patent/NZ500870A/en unknown
- 1999-03-19 JP JP54797099A patent/JP2001527424A/ja active Pending
- 1999-03-19 IL IL13282299A patent/IL132822A0/xx unknown
- 1999-03-19 CZ CZ0412199A patent/CZ300153B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-03-19 UA UA99116329A patent/UA73074C2/uk unknown
- 1999-03-19 US US09/424,131 patent/US6500651B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-19 CA CA002289553A patent/CA2289553C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-19 AU AU30466/99A patent/AU753564B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU753564B2 (en) | 2002-10-24 |
| IL132822A0 (en) | 2001-03-19 |
| CA2289553A1 (en) | 1999-09-30 |
| CA2289553C (en) | 2004-05-18 |
| AU3046699A (en) | 1999-10-18 |
| CZ300153B6 (cs) | 2009-02-25 |
| NZ500870A (en) | 2002-03-01 |
| US6500651B1 (en) | 2002-12-31 |
| UA73074C2 (en) | 2005-06-15 |
| JP2001527424A (ja) | 2001-12-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Novak et al. | Increased lovastatin formation by Aspergillus terreus using repeated fed-batch process | |
| EP2084290B1 (en) | Production of omega-3 fatty acids in microflora of thraustochytriales using modified media | |
| AU762656B2 (en) | Method of producing gamma-decalactone | |
| CA2719581C (en) | Improved fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid | |
| Jia et al. | Effects of carbon sources on fungal morphology and lovastatin biosynthesis by submerged cultivation of Aspergillus terreus | |
| CZ412199A3 (cs) | Metabolicky kontrolovaný proces fermentace při výrobě lovastatinové hydroxykyseliny | |
| US6165757A (en) | Nitrogen feed in statin fermentation | |
| US6197560B1 (en) | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid | |
| Cheng et al. | Improved riboflavin production by Eremothecium ashbyii using glucose and yeast extract | |
| KR20040026669A (ko) | 슈도몬산을 생성하기 위한 대사 조절된 발효 방법 | |
| RU2096461C1 (ru) | Штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент лимонной кислоты и способ получения лимонной кислоты | |
| CN110468051A (zh) | 一种k252a发酵培养基及其制备方法 | |
| Thitiprasert et al. | Correlative effect of dissolved oxygen and key enzyme inhibitors responsible for L-lactate production by immobilized Rhizopus oryzae NRRL395 cultivated in a static bed bioreactor | |
| WO2004003212A1 (en) | Novel process for the production of pancreatic lipase inhibitor | |
| SK702019A3 (sk) | Príprava farmaceutickej aktívnej látky lipstatín s použitím produkčného mikroorganizmu Streptomyces toxytricini NRL | |
| KR910000453B1 (ko) | 감마-리놀렌산을 생산하는 무코르 속균(Mucor SP) : KCTC 8405P, 및 이를 이용한 감마-리놀렌산의 제조방법 | |
| RU2426793C2 (ru) | Способ биосинтеза цефалоспорина с с использованием нового штамма acremonium chrysogenum вкм f-4081d | |
| WO2004005275A1 (en) | Fed batch solid state fermentation for the production of hmg-coa reductase inhibitors | |
| EP1613760A2 (en) | Fermentation process for the preparation of pravastatin | |
| JPH0690772A (ja) | 光学活性γ−ハイドロキシデカン酸の製造方法 | |
| SK278555B6 (en) | Method of producing l-lactic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130319 |