JPH0622761A

JPH0622761A - 固定化酵素

Info

Publication number: JPH0622761A
Application number: JP5102263A
Authority: JP
Inventors: Jos J P Webbers; イェーペーウェッベルスヨス; John Krijgsman; クレイフスマンジョン
Original assignee: Gist Brocades NV
Current assignee: Gist Brocades NV
Priority date: 1992-04-29
Filing date: 1993-04-28
Publication date: 1994-02-01
Also published as: ATE230436T1; DE69332597D1; EP0577162A1; EP0577162B1; DE69332597T2; DK0577162T3; US5916789A; ES2187502T3

Abstract

(57)【要約】【目的】より硬い粒子の固定化酵素を提供する。【構成】架橋結合を有するゲル化剤及び活性炭を含
み、酵素並びに該活性炭が該ゲル化剤を介して均一に分
布している、固定化酵素配合物。【効果】適用される条件下でカラムを詰まらせる危険
なしにより小さな粒子を使用するのを可能にし、反応器
容積当たりの活性を増加する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、固定化酵素及びその製
造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】今日、数々の固定化酵素配合物が製造プ
ロセスにおいて商業的に応用されている。考えられるも
の１つは、例えば、ゼラチンとグルタルジアルデヒドを
使用する酵素のための固定化方法である。米国特許第
3,838,007号を参照のこと。ゼラチンは、他のゲル化剤
に比較して相対的に安価であり豊富にあるので、ゲル化
剤としてしばしば選ばれる。例えば、グルタルジアルデ
ヒドでの架橋が、充分に硬い粒子を得るために行われ
る。この方法では、非蛋白分解性の酵素を固定化するこ
とが可能であった。

【０００３】該固定化方法は、以下の工程を含む： (1) 約４％(W/V）のバイオマスを含有する粗酵素をゲル
化剤と混合し、該ゲル化剤の融点より僅かに高い温度に
加熱する。ゼラチンの場合は４０℃より僅かに高い温度
である。該ゲル化剤の最終濃度は約８％(W/V）である； (2) 次いで、該ゲル化剤−水−酵素及び／または微生物
細胞含有混合物を冷たい水非混和性溶媒、例えば、酢酸
ブチル中に粒状化する； (3) 凝集した球状の酵素含有粒子を集めた後、該粒子を
部分的に脱水するために水混和性有機溶媒、例えば、ア
セトンまたはエタノールで数回洗浄してもよい。このよ
うにして形成した酵素粒子は１２〜１５℃の温度でその
形態を保持する。 (4) これら洗浄後、過剰の有機溶媒を濾過、重力沈降、
遠心分離またはデカンテーションによって除去した後、
冷やした水及びアセトンまたはエタノールの混合液中に
再懸濁し、グルタルジアルデヒドの如き二官能性または
多官能性蛋白試薬で架橋する。例えば、0.５〜５％(V/
V）の濃度のグルタルジアルデヒドで充分である； (5) 最後に、過剰の架橋剤及び他の溶解性不純物を水で
洗浄して除き、固定化酵素粒子を、例えば、エタノール
で脱水した後に乾燥するか、流動床中で直接に乾燥する
か、ドライヤーで転がすか、または好ましくはポリエチ
レングリコール−水混合物に移して、該粒子中で少なく
とも２５％(V/V）濃度になるように水をはかせる。

【０００４】酵素、細胞及び／またはそれらの組み合わ
せを固定化するもう１つの方法は、米国特許第 4,163,6
91号に記載されている。約５５℃未満の温度でグルコー
スイソメラーゼ、細胞内酵素を含有する微生物細胞のス
ラリー及びゼリー化剤としての３〜２０重量％のゼラチ
ンの混合物をダイに通して、冷水中で細線を形成する。
この冷水は該細線をゼリー化する。水に代えて、エタノ
ール、メタノール、アセトンのような有機溶媒、及び酢
酸エチル、酢酸ブチル及び石油エーテルのような水非混
和性溶媒との混合溶媒を使用してもよく、多くの場合、
それらは活性の損失を軽減する。該細線は約0.４〜２mm
の直径を有する。続いて、該細線をスラリーの出発量を
基準にして0.５〜５％のグルタルジアルデヒドで架橋
し、次いで、該架橋した細線を0.４〜１０mmの長さの断
片に切断する。実施例は、商業規模での固定化されたグ
ルコースイソメラーゼの調製法である。微生物細胞が存
在しまたは存在しない他の酵素も、この技術を使用して
固定化できる。米国特許第 3,834,988号に記載されてい
るように、酵素グルコースイソメラーゼのソースとし
て、アクチノプラネス・ミズーリエンシス（Actinoplan
es missouriensis）の株を使用することができる。好気
条件下、中性ｐＨで液内醗酵を行う。

【０００５】該固定化したグルコースイソメラーゼは、
４０〜５０℃の温度でプラグフローまたは充填床（pack
ed bed）反応器に適用できる。この反応器内で、固定化
酵素の充填されたカラムを流れ落ちる間に、グルコース
はフルクトースに転化される。約５ｍの高さの充填床が
しばしば使用される。固定化酵素粒子の機械的強度（圧
縮率）は、カラム全体に認められる圧力低下を決定す
る。ゼラチン中に固定化されたグルコースイソメラーゼ
を使用した場合、粒子は、粒状化工程については1.４mm
またはそれより大きいサイズを有し、押し出された粒子
については２〜１０mmの長さを有する。より小さな粒子
は、カラム全体の圧力低下の影響で変形し、続いてカラ
ムを詰まらせるだろう。それに対して、より大きな粒子
を使用すると、工程を制限する転化反応の速度が粒子内
での拡散によって決定されるので、低転化率になるだろ
う。上記のシステムは、１９７０年代の初期または中頃
まで遡り、今までこのシステムに対する何の改良もなさ
れなかった。より高い転化速度を得るために、粒子はよ
り小さく、従って、硬くあるべきである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、より
硬い粒子の固定化酵素を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】より硬い粒子を提供する
ために、固定化酵素粒子に以下の化合物を添加して、そ
れらが粒子の硬度を高めるか否かを確認した：酸化アル
ミニウム類、シリケート類、硫黄、濾過助剤、カゼイ
ン、酵母細胞、スターチ、寒天、リグノセルロース、ア
ルギン酸塩及びペクチン。しかしながら、これら添加剤
のいずれも効果はなかった。酵素／ゲル化剤／添加剤の
粒状化または押し出しは、高い粘度または表面張力の変
化によってしばしば効果が少ない。ある場合には、弱い
粒子をも形成した。本発明者らは、驚いたことに、活性
炭、好ましくは粉末形態にある活性炭を粒子中に取り込
むと、粒子の強度がかなり向上することを見出した。従
って、本発明は、架橋結合を有するゲル化剤及び活性炭
を含む固定化酵素配合物を提供する。従って、該酵素は
架橋したゲル化剤及び活性炭からなるマトリックス中に
固定化されている。

【０００８】本発明は、また、以下の工程を含む固定化
酵素の製造法を提供する。 (a) 微生物の株を醗酵して酵素を含有する液体培地を製
造し； (b) 工程(a) で製造した液体培地にゲル化を添加し； (c) １〜５％(W/V）の活性炭を添加し； (d) 酵素−ゲル化剤調製物を粒子形態に形成し；そして (e) 該ゲル化剤を架橋する工程該方法は、酵素並びに炭素が該ゲル化剤を介して均一に
分布しているゲル化剤をもたらす。本発明の態様によれ
ば、粒子の直径は、許容できない粒子の変形なしに、反
応器カラム中で0.６〜1.３mm、好ましくは0.８〜1.２mm
に低下させることができる。粒子の強度の増加は、適用
される条件下でカラムを詰まらせる危険なしにより小さ
な粒子を使用するのを可能にする。本発明のもう１つの
態様によれば、より小さな粒子を使用するので、反応器
容積当たりの活性が増加する。活性炭を使用することに
よるもう１つの利点は、固定化酵素の製造のために使用
される装置を実質的に変更しなくてもよいことである。

【０００９】活性炭は固定化酵素の製造の間に、例え
ば、粒状化または押し出し工程の直前に導入される。全
ての種類の活性炭が使用できる。しかしながら、ある場
合には、それらは食品用銘柄であって、含まれる酵素に
対し併用可能なものであるべきである。基質に関して不
活性ではない不純物を含有しないのが好ましい。該活性
炭は、一般に、５００μｍまたはそれ未満の粒子サイ
ズ、好ましくは２５０μｍより小さい粒子サイズを有す
る粉末の形態である。混合工程における活性炭とゲル化
剤の量は、形成される生成物を決定する：あまりに少な
い量のゲル化剤を添加しても該混合物は固体化せず、あ
まりに多いゲル化剤を添加しても該混合物は粘稠過ぎる
ようになる。例えば、ゼラチンの場合には：３％(W/V）
未満のゼラチンでは、溶液は粒状化の際に凝集しない；
１０％(W/V）を越えるゼラチンでは、溶液は粘稠過ぎ
る；炭素添加に関しては：１％(W/V）の活性炭は、形成
された粒子の強度を向上させる；５％(W/V）を越える活
性炭では、溶液は粘稠過ぎる。従って、通常は３〜１０
％(W/V）のゼラチンと１〜５％(W/V）、好ましくは３％
(W/V）の活性炭が、例えば、粒状化によって加工される
酵素含有液体中に存在する。

【００１０】酵素濃度は２〜１０％(W/V）で存在するバ
イオマスに関連しており、１０％(W/V）を越えるバイオ
マスを含有する醗酵液体培地は適用される微生物のタイ
プに依存して粘稠過ぎるかも知れず、特別な粘度軽減工
程が必要になるであろう。これに対して、２％(W/V）未
満の微生物細胞濃度はあまりに低い粘度と酵素濃度をも
たらすであろう。酵素ソースとして、酵母、カビ及びバ
クテリア、好ましくはストレプトミセス、アクチノプラ
ネス及びバチルス種由来の全ての工業用株が適用でき
る。粒子中での酵素の濃度は、酵素の種類及びその用途
に依存する。グルコースイソメラーゼについては、活性
範囲は標準条件下で２０〜５００ユニット／グラム固定
化物質のオーダーである。１ユニットは、順流カラム運
転条件（６０℃）下で、最初の１時間で１ｇのグルコー
ス乾燥物質を４５％のフルクトース含量を有するグルコ
ース／フルクトース混合物に異性化する酵素の量として
定義される。酵素または微生物をゲル化剤と混合する前
に、存在する微生物を殺すために、酵素または微生物を
好ましくは加熱処理（例えば、低温滅菌）する。

【００１１】押し出しの場合には、該方法は粘度に関し
てより柔軟性がある。２０重量％までのゼリー化剤及び
２０重量％までの微生物細胞及び１０重量％までの活性
炭を使用することができる。固定化酵素の全種類の形態
を製造することができる。粒子の形状は、球状または殆
ど球状の粒子の形状であってもよい。しかしながら、本
明細書は一般に球状または殆ど球状の粒子の形状に言及
しているとはいえ、粒子の形状は、例えば、棒状または
繊維状、例えば、押し出された棒状の形状であってもよ
い。一般に「粒子の形状」は、0.６〜1.３mm、好ましく
は0.８〜1.２mmの粒状粒子または直径が0.４〜1.５mm、
好ましくは0.８〜1.５mmで長さが２〜１０mmの形状の棒
状粒子を有する酵素調製物の形状を意味する。ここで使
用している「ゲル化剤」という用語は、その水溶液が特
別な処理、例えば、ゼラチンを使用した場合には冷却、
または新鮮な卵白を使用した場合には加熱、またはｐＨ
６以下で綿状の固まりになるキトサンの場合にはｐＨを
下げることによって固体または半固体状態に転換する化
合物を意味する。本発明で使用することのできるゲル化
剤には、ゼラチン、卵白、キトサン、アルギン酸塩また
はそれらの混合物が挙げられる。好ましくはゼラチンが
使用される。ゲル化剤は、使用する酵素によって崩壊ま
たは破壊されず、かつ、該酵素を失活させないものが使
用される。例えば、蛋白質加水分解性酵素の場合には、
そのゲル化剤は蛋白質ではない。

【００１２】使用することのできる好適な酵素の例は、
インベルターゼ類、アミログルコシダーゼ類、ラクター
ゼ類、マルターゼ類、アミラーゼ類、ウレアーゼ類、リ
パーゼ類、エステラーゼ類、グルコースイソメラーゼ
類、グルコースオキシダーゼ類、デヒドロゲナーゼ類、
Ｌ−アミノアシラーゼ類、Ｌ−アスパルターゼ類及びペ
ニシリナーゼである。好ましくは、酵素はグルコースイ
ソメラーゼである。より好ましくは、放線菌類の株、好
ましくはアクチノプラネスまたはストレプトミセス属の
株由来のグルコースイソメラーゼである。最も好ましく
は、グルコースイソメラーゼはアクチノプラネス・ミズ
ーリエンシスから得られる。得られた酵素−ゲル化剤粒
子が２またはより多くの酵素反応を同時に行うのに使用
できるように、酵素の混合物を該方法において使用する
こともできる。酵素が、不都合な形状、例えば、粉末で
ある場合のような不溶性酵素も使用することができ、微
生物及び胞子含有酵素も該方法で使用することができ
る。

【００１３】本発明の方法で出発原料として使用される
酵素−ゲル化剤混合物は、ゲル化剤水溶液中に酵素を溶
解または懸濁することによって調製することができる。
ゲル化剤水溶液の温度は、酵素が活性を維持する温度範
囲に依存する。従って、約２０〜５０℃の温度が殆どの
酵素に好ましく、最高温度は一般に約６０〜６５℃であ
るが、６５℃を越えて活性な酵素にはより高い温度が使
用される。架橋工程は、酵素及び／またはゲル化剤と共
有結合を形成する２官能性または多官能性蛋白試薬で行
われる。好適な２官能性試薬の例は、架橋剤、例えば、
グルタルジアルデヒド、アクロレインまたはクロトンア
ルデヒドの如きアルデヒド類；クロロギ酸エステルの如
きエステル類；酸クロライドの如き酸ハライド類；エピ
クロルヒドリンの如きエポキシド類；ジメチルアジピン
酸の誘導体；カルボジイミド類；フェノール−2,４−ジ
スルホニルクロライド；ブロモシアナイド；酸ハライド
類のブロモシアナイド活性化合物の如き活性剤、または
これら化合物の２またはそれを越える化合物の混合物で
ある。好ましくは、グルタルジアルデヒドの水溶液が、
５〜２０℃、好ましくは１０〜１５℃の温度で、１０〜
１２０分、好ましくは１５〜６０分、より好ましくは約
３０分の反応時間で使用される。

【００１４】本発明の一態様によれば、酵素−ゲル化剤
粒子を脱水する。好適な脱水剤は水に高い溶解性を有す
る液体であるか水と混和性であって、それらは酵素と融
和性でなければならない。好適な脱水剤の例は、メタノ
ール、エタノールまたはイソプロパノールの如き３つま
での炭素原子を有するアルコール、アセトン、または２
またはそれを越えるこれら化合物の混合物である。脱水
工程は、一般に、５〜２０℃、好ましくは約１０℃で行
われる。架橋剤の２官能性または多官能性試薬を、この
液体に添加してもよくまたは該脱水工程の後に該粒子に
適用しいてもよい。該脱水工程は、懸濁工程に使用され
る有機液体から粒子を分離する前または後に行ってもよ
い。脱水工程は、酵素−ゲル化剤粒子のサイズを小さく
し、脱水された粒子を２官能性または多官能性試薬の水
／有機溶液の中に加えたときに架橋反応を促進する。脱
水工程の後、酵素−ゲル化剤粒子は一般に0.５〜1.３mm
の粒子サイズを有する。

【００１５】最後に、本発明によって粒状形態で得られ
る酵素−ゲル化剤調製物を好ましくは洗浄する。好適な
洗浄用液体の例は、水または酵素に依存するｐＨを有す
る緩衝溶液である。一般に、粒状形態の調製物の乾燥は
不要であるが、特別な場合には、乾燥工程が含まれる。
一般に、洗浄工程の温度は、５〜３０℃、好ましくは約
１５℃である。一般に、乾燥工程の温度は、３０〜６０
℃、好ましくは約４０℃である。特別な応用について
は、架橋工程は最適な物理的性質を得るために繰り返し
てもよい。本発明による粒状形態の水不溶性酵素−ゲル
化剤調製物は、例えば、カラムまたは反応器で使用して
もよい。該酵素−ゲル化剤粒子は、反応混合物から容易
に分離でき、繰り返して使用することができる。該粒状
形態の水不溶性の酵素−ゲル化剤調製物は、一般に、溶
解性酵素が従来から使用されている全ての方法において
使用することができる。例えば、ビールの製造における
ように、インベルターゼ−ゲル化剤調製物をサッカロー
スの転化に使用することができ、アミログルコシダーゼ
はスターチ及びデキストリン類の加水分解に使用でき
る。更に、粒状形態にある本発明の水不溶性の酵素−ゲ
ル化剤調製物は、溶解性酵素が経済的に使用することが
できない場合に使用することができ、また、他の理由で
適用することができる。強度の向上とは別に、炭素の添
加のもう１つの利点は、炭素が処理液体及び生成物を適
用している間に一定の範囲まで脱色することである。か
くして、脱色された処理液体はより容易にリサイクルす
ることができる。例えば、脱水剤のリサイクルに使用さ
れる蒸留カラムは、炭素含有粒子を使用した場合はあま
り洗浄しなくてもよい。

【００１６】本明細書で引用した全ての刊行物及び特許
出願は、あたかも各個々の刊行物または特許出願が参照
によって組み込まれていることが具体的及び個別的に示
されているように、参照によって本明細書に組み込まれ
る。上記の発明は、明確さ及び理解のために説明し例を
挙げることによって幾分詳細に記載してきたが、本発明
の技術に照らして請求項の精神及び範囲から逸脱するこ
となしに一定の変更及び修飾を行うことができるという
ことは、当業者にとって容易に理解できるであろう。以
下の実験データは、本発明を説明するために示すもので
ある。この方法に詳しい当業者は、本発明の目的に等し
く使用することができる他のグルコースイソメラーゼ産
生株を使用することができるということが理解されなけ
ればならない。これら変更は本発明の範囲に含まれる。

【００１７】

【実施例】実施例１ 4.５％細胞固形物（cell-solid）及びグルコースイソメ
ラーゼを含有するアクチノプラネス・ミズーリエンシス
NRRL B-3342（米国特許第 3,834,988号）の醗酵マッシ
ュに、攪拌下室温で添加した：

【００１８】

【表１】 ──────────────────────────── ％活性炭％ゼラチン乾燥粉末 ──────────────────────────── Ａ０ 8.１Ｂ 1.０ 7.４Ｃ 2.０ 6.７Ｄ 3.０ 6.０ ────────────────────────────

【００１９】活性炭は、粉末形態で添加した（９９％の
炭素が２５０μｍ未満の粒子サイズを有する）。この混
合物を４０℃に加熱してゼラチンを融解した後、冷やし
た酢酸ブチル（１０℃）中に公知の方法（米国特許第
3,838,007号）によって粒状化し、その後、１０℃で３
０分間、3.５％グルタルアルデヒドで架橋した。全部で
４バッチの試験を、４５％グルコースシロップを有する
標準充填床カラムフローテスト中で６０℃で行った。フ
ロー抵抗は硬い粒子について以下のように計算すること
ができる：Ｖ_SＨη＝ΔＰε³ｄ_p ²／１８０（１−ε）² （１）Ｖ_S（シロップフロー）の関数としてΔＰをプロットす
ると、Ｈ（床の高さ）η（シロップ粘度）は直線を形成
する。しかしながら、変形し易い粒子については、気孔
関数（ε）は適用された圧力の関数である。変形し易い
粒子を含有する充填床の圧力低下は以下の式を使用して
計算できるということが数学的に証明できる：

【００２０】

【数１】

【００２１】ここで、本発明者らは、多孔性の指数的減
衰を適用された局部的な圧力の関数として仮定した。Ｋ
₁及びＫ₂は実験的に決定される定数である。その曲線
の当初の傾きは、これら定数によって与えられる。この
値が高ければ高いほど、フロー抵抗は小さい。Ｋ₂値が
高ければ高いほど、カラムの許容できる圧力低下は高く
なる。Ｋ₁及びＫ₂の実験値に基づき、表１はカラムの
圧力低下0.８バールでのＶ_SＨη値の結果を示すもので
ある。

【００２２】

【表２】表１ ──────────────────────────── ％活性炭 0.８バールでのＶ_SＨη ──────────────────────────── Ａ０ 3.０×１０^-5 Ｂ１ 5.３×１０^-5 Ｃ２ 5.３×１０^-5 Ｄ３ 6.３×１０^-5 ────────────────────────────

【００２３】この結果は３％炭素の場合にＶ_SＨηが２
倍になることを示しており、それは充填床カラム中にこ
の生成物を適用すると、炭素を含まない生成物に比較し
て、２倍の高さになるか、シロップフローは２倍になる
かまたは２倍のシロップ粘度になるかのいずれかになる
ことを意味する。実施例２ストレプトミセス・リビダンス GIT 101は、アクチノプ
ラネス・ミズーリエンシスのグルコースイソメラーゼの
蛋白−変異体を産生する。その変異体中では、該酵素の
アミノ酸配列の位置２５３でリジンがアルギニンによっ
て置き換えられている（EP 0351029, バイオ／テクノロ
ジー，９, (8) 738, 1991 ）。ストレプトミセス・リビ
ダンス GIT 101は、ストレプトミセス・リビダンス TK
21〔ジョン・インネス・インスティチュート(John Inne
s Institute), ノリッジ，UK〕をプラスミドｐＷＧｘ．
ＧＩＴで形質転換することによって得られた。このプラ
スミドは、公知のベクターｐＩＪ７０２（カッツら，J.
Gen. Microbiol. 129, 2703, 1983 ）の複製機能及び
チオストレプトン抵抗性遺伝子と突然変異グルコースイ
ソメラーゼＧＩＴをコードする1.７ｋｂの挿入体からな
る。ストレプトミセス・リビダンス GIT 101のサンプル
を、１９９２年４月２８日に受託番号ＣＢＳ２２3.９２
で寄託した。４％細胞固形物及びグルコースイソメラー
ゼを含有するストレプトミセス・リビダンス(GIT 101）
の醗酵マッシュの１つの部分に、攪拌下６％のゼラチン
を添加し、他の部分に３％の活性炭と６％のゼラチンを
添加した。４０℃に加熱した後、先に記載した方法で両
方の部分から粒子をつくり、標準充填床テストカラムで
試験した。表２は、カラムの圧力低下0.８バールでのＶ
_SＨη値の結果を示すものである。

【００２４】

【表３】表２ ──────────────────────────── 活性炭 0.８バールでのＶ_SＨη ──────────────────────────── 活性炭なし 4.５×１０^-5 ３％活性炭 9.１×１０^-5 ────────────────────────────

【００２５】この結果は３％炭素の場合にＶ_SＨηが２
倍になることを示しており、それは充填床カラム中にこ
の製品を適用すると、炭素を含まない製品に比較して、
２倍の高さになるか、シロップフローは２倍になるかま
たは２倍のシロップ粘度になるかのいずれかになること
を意味する。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】架橋結合を有するゲル化剤及び活性炭を
含み、酵素並びに該活性炭が該ゲル化剤を介して均一に
分布している、固定化酵素配合物。
【請求項２】該ゲル化剤が蛋白試薬との架橋結合を有
する、請求項１記載の配合物。
【請求項３】該蛋白試薬が、アルデヒド類、エステル
類、酸ハライド類、エポキシド類、ジメチルアジピン酸
の誘導体、カルボジイミド類、フェノール−2,４−ジス
ルホニルクロライド、ブロモシアナイド、酸ハライド類
のブロモシアナイド活性化合物、またはこれら化合物の
２またはそれを越える化合物の混合物から選ばれる、請
求項２記載の配合物。
【請求項４】該アルデヒドがグルタルジアルデヒドで
ある、請求項３記載の配合物。
【請求項５】 0.６〜1.３mmの粒子サイズを有する粒状
形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の配合
物。
【請求項６】直径が0.８〜1.５mmで長さが２〜１０mm
の棒状形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載
の配合物。
【請求項７】該酵素が、インベルターゼ、アミログル
コシダーゼ、ラクターゼ、マルターゼ、アミラーゼ、ウ
レアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、グルコースイソメ
ラーゼ、グルコースオキシダーゼ、デヒドロゲナーゼ、
Ｌ−アミノアシラーゼ及びＬ−アスパルターゼの少なく
とも１つである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の
配合物。
【請求項８】該酵素が、放線菌の株から得ることので
きるグルコースイソメラーゼである、請求項７記載の配
合物。
【請求項９】該放線菌の株がアクチノプラネス・ミズ
ーリエンシスである、請求項８記載の配合物。
【請求項１０】該ゲル化剤が、ゼラチン、卵白、キト
サンまたはそれらの混合物である、請求項１〜９のいず
れか１項に記載の配合物。
【請求項１１】該ゲル化剤がゼラチンである、請求項
１０記載の配合物。
【請求項１２】該活性炭が５００μｍ以下の粒子サイ
ズを有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の配
合物。
【請求項１３】１〜１０％(W/V）の活性炭を含有す
る、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の配合物。
【請求項１４】３〜２０％(W/V）のゲル化剤を含有す
る、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の配合物。
【請求項１５】２〜１０％の酵素含有バイオマスを含
有する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の配合
物。
【請求項１６】実施例のいずれか１つに実質的に記載
した配合物。
【請求項１７】請求項１〜１６のいずれか１項に記載
した配合物の製造方法。
【請求項１８】以下の工程を含む固定化酵素の製造方
法。 (a) 微生物の株を醗酵して酵素を含有する液体培地を製
造し； (b) 工程(a) で製造した液体培地にゲル化を添加し； (c) １〜５％(W/V）の活性炭を添加し； (d) 酵素−ゲル化剤調製物を粒子形態に形成し；そして (e) 該ゲル化剤を架橋する工程
【請求項１９】グルコースをフルクトースに転化する
方法であって、請求項８または９の配合物を使用するこ
とを含む方法。
【請求項２０】実施例２に実質的に記載した固定化酵
素配合物を製造する方法。