RU2691611C1 - Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана - Google Patents

Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана Download PDF

Info

Publication number
RU2691611C1
RU2691611C1 RU2018142931A RU2018142931A RU2691611C1 RU 2691611 C1 RU2691611 C1 RU 2691611C1 RU 2018142931 A RU2018142931 A RU 2018142931A RU 2018142931 A RU2018142931 A RU 2018142931A RU 2691611 C1 RU2691611 C1 RU 2691611C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
chitosan
bromelain
food
succinate
buffer
Prior art date
Application number
RU2018142931A
Other languages
English (en)
Inventor
Марина Геннадьевна Холявка
Светлана Сергеевна Ольшанникова
Валерий Григорьевич Артюхов
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") filed Critical федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ")
Priority to RU2018142931A priority Critical patent/RU2691611C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2691611C1 publication Critical patent/RU2691611C1/ru

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана или сукцината хитозана включает иммобилизацию бромелайна в буферном растворе на матрицу хитозана в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 5 мг/мл на 1 г носителя; инкубирование при комнатной температуре с периодическим перемешиванием; промывку образовавшегося осадка 50 мМ трис-HCl буфером (рН 7,5) до отсутствия в промывных водах белка, отличающийся тем, что иммобилизацию проводят на матрицу пищевого хитозана с молекулярной массой менее 100 кДа или сукцината хитозана; в качестве буферного раствора для иммобилизации используют либо 0,05 М глициновый буфер с рН 8,6 для пищевого хитозана или с рН 9,0-9,5 для сукцината хитозана; либо 0,05 М ацетатный буфер с рН 5,5 для пищевого хитозана или 5,0 для сукцината хитозана; инкубирование проводится в течение 2 часов. Изобретение позволяет увеличить скорость ферментативной реакции и повысить эффективность использования полученного препарата, в том числе при осуществлении реакции на твердых поверхностях. 3 ил.

Description

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в химико-фармацевтической промышленности, медицинской практике, исследовательских целях и ветеринарии при изготовлении лекарственных средств, обладающих регенерирующим и ранозаживляющим действием.
Бромелайн (КФ 3.4.22.32) - протеолитический растительный фермент, получаемый из ананаса. Коммерческий препарат бромелайна представляет собой смесь разных тиол-эндопептидаз и других, еще не полностью охарактеризованных компонентов: фосфатаз, глюкозидаз, пероксидаз, целлюлаз, гликопротеинов и углеводов. Его готовят из охлажденного ананасового сока, используя центрифугирование, ультрафильтрацию и лиофилизацию. На выходе получают желтоватый порошок, ферментативную активность которого определяют с помощью различных субстратов, таких как казеин, желатин или хромогенные трипептиды [H.R. Maurer Bromelain: biochemistry, pharmacology and medical use // CMLS Cellular and Molecular Life Sciences. - 2001. - V. 58. - P. 1234-1245].
Бромелайн относится к группе высокоактивных протеолитических ферментов. Он оказывает противовоспалительное действие, способствует улучшению пищеварения и является мощным катализатором важнейших процессов углеводного и белкового обменов, способствует быстрому расщеплению жиров, тормозит жировую инфильтрацию печени. Известны его противораковые свойства и способность предотвращать образование тромбов [Патент RU 2256334, МПК А23С 23/00, опубл. 20.07.2005].
Ферменты часто являются неустойчивыми к воздействию денатурирующих факторов окружающей среды, легко инактивируются, поэтому целесообразно иммобилизовать их на матрице нерастворимых носителей. Иммобилизация приводит к увеличению термической стабильности фермента, дает возможность осуществлять его адресную доставку, фиксацию в определенном участке организма.
На сегодняшний день известно множество методов иммобилизации ферментов, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Иммобилизация ферментов на синтетических носителях ограничивает сферы их применения в фармакологии и пищевой промышленности [А.А. Shakeel, Н. Qayyum Potential applications of enzymes immobilized on/in nano materials: A review // Biotechnology Advances. - 2012. - V. 30. - P. 512-523], поэтому мы использовали в качестве носителей для иммобилизации бромелайна пищевой хитозан с молекулярной массой менее 100 кДа и сукцинат хитозана.
Хитозан представляет собой аминополисахарид, получаемый из хитина панцыря ракообразных. В зависимости от источника и метода получения, средняя молекулярная масса хитозана может составлять от 50 до 1000 кДа. Хитозан представляет собой полукристаллический полимер, степень кристаллизации которого зависит от степени деацетилирования. Из-за стабильной кристаллической структуры хитозан, как правило, нерастворим в водных растворах с рН выше 7. Однако в разбавленных кислотах аминогруппы протонируют, и молекула становится полностью растворимой при рН ниже 5. Растворимость хитозана, зависящая от значения рН среды, обеспечивает удобный механизм для его использования в прикладных целях. Одной из наиболее перспективных функций хитозана является очень высокая способность к переработке его матрицы в пористые структуры для использования при трансплантации клеток и регенерации тканей. Кроме того, хитозан обладает антибактериальными и противогрибковыми свойствами. Благодаря вышеперечисленному, хитозан является перспективным носителем для иммобилизации ферментов медицинского и ветеринарного назначения [J.-K. Francis Suh, Howard W.T. Matthew Application of chitosan-based polysaccharide biomaterials in cartilage tissue engineering: a review // Biomaterials. -2000. - V. 21. - P. 2589-2598].
В качестве прототипа служил способ получения гетерогенного препарата различной дисперсности на основе бромелайна и хитозана, изложенный авторами настоящего изобретения в заявке №2017123458 на патент РФ. Способ включает иммобилизацию бромелайна на матрицу кислоторастворимого хитозана среднемолекулярного (200 кДа) или высокомолекулярного (350 кДа) в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 5 мг/мл на 1 г указанной матрицы; при этом в качестве буферного раствора для иммобилизации используют 50 мМ трис-глициновый буфер с рН 8.5-9.0 для среднемолекулярного и с рН 8.5 для высокомолекулярного хитозана; инкубирование при комнатной температуре в течение 4 часов для среднемолекулярного и 5 часов для высокомолекулярного хитозана; промывание образовавшегося осадка 50 мМ трис-HCl буфером с рН 7.5 до отсутствия в промывных водах белка.
Недостатком прототипа является получение порошкового средства, не позволяющего проводить ферментативные реакции на твердых субстратах.
Технический результат заявленного изобретения заключается в увеличении скорости ферментативной реакции и повышении эффективности использования препарата на основе бромелайна и хитозана, в том числе при осуществлении реакции на твердых поверхностях.
В своей работе мы использовали в виде носителей для иммобилизации пищевой хитозан с молекулярной массой менее 100 кДа и его производное сукцинат хитозана, а бромелайн иммобилизовали путем включения в гель, благодаря чему фермент становится более стабильным и обладает пролонгированным действием.
Технический результат достигается тем, что в способе получения гетерогенного препарата в виде гелей на основе бромелайна и пищевого хитозана или сукцината хитозана, включающем иммобилизацию бромелайна в буферном растворе на матрицу хитозана в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 5 мг/мл на 1 г носителя; инкубирование при комнатной температуре с периодическим перемешиванием; промывку образовавшегося осадка 50 мМ трис-HCl буфером (рН 7.5) до отсутствия в промывных водах белка, согласно изобретению, иммобилизацию проводят на матрицу пищевого хитозана с молекулярной массой менее 100 кДа или сукцината хитозана; в качестве буферного раствора для иммобилизации используют либо 0.05 М глициновый буфер с рН 8.6 для пищевого хитозана или с рН 9.0-9.5 для сукцината хитозана; либо 0.05 М ацетатный буфер с рН 5.5 для пищевого хитозана или 5.0 для сукцината хитозана; инкубирование проводится в течение 2 часов.
Применение хитозана с меньшей молекулярной массой в совокупности с использованием 0.05 М ацетатного буфера позволило получить гелеобразный препарат, и кроме того, сократило необходимое время инкубации фермента с носителем на 3 часа. Гелеобразный препарат, в отличие от порошкового, позволяет проводить ферментативные реакции не только в растворах, но и на твердых субстратах, что в свою очередь облегчает нанесение препарата в область раны или ожога, увеличивает эффективность.
На Фиг. 1. изображена диаграмма значений содержания белка (в мг на 1 г носителя) в препаратах иммобилизованного бромелайна; на фиг. 2 - Диаграмма значений общей активность (в ед на 1 мл раствора) препаратов иммобилизованного бромелайна; на фиг. 3 - Диаграмма значений удельной активности (в ед на 1 мг белка в пробе) препаратов иммобилизованного бромелайна, где 1 - бромелайн, иммобилизованный на пищевом хитозане с использованием ацетатного буфера; 2 - бромелайн, иммобилизованный на сукцинате хитозана с использованием ацетатного буфера; 3 - бромелайн, иммобилизованный на пищевом хитозане с использованием глицинового буфера; 4 - бромелайн, иммобилизованный на сукцинате хитозана с использованием глицинового буфера.
Пример реализации способа.
В качестве объекта исследования был выбран бромелайн фирмы «Sigma-Aldrich», субстратом для гидролиза служил азоказеин фирмы «Sigma-Aldrich». В качестве носителей для иммобилизации применяли два вида хитозана (ЗАО «Биопрогресс»): хитозан пищевой с молекулярной массой менее 100 кДа и сукцинат хитозана.
Иммобилизацию бромелайна на матрице хитозана осуществляли путем включения в гель. К 1 г хитозана добавляли 20 мл раствора фермента (в концентрации 5 мг/мл), инкубировали в течение 2 часов. После окончания инкубации образовавшийся осадок (в виде геля) промывали 50 мМ трис-HCl буфером (рН 7.5) до отсутствия в промывных водах белка (контроль осуществляли на спектрофотометре СФ-2000 при λ=280 нм).
Содержание белка в иммобилизованных препаратах бромелайна определяли методом Лоури [Lowry О.Н., Rosebrough N.J., Faar A.L., Randall R.J. Protein measurement with folin-phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193. - P. 265-275]. Определение протеолитической активности фермента проводили на субстрате азоказеине (Fluka). К 50 мг образца добавляли 200 мкл трис-HCl буфера (рН 7.5), 800 мкл азоказеина (0.5% в 50 мМ трис-HCl буфере, рН 7.5) и инкубировали 2 часа при 37°С. Далее добавляли 800 мкл ТХУ (5%), инкубировали 10 минут при -4°С, затем центрифугировали в течение 3 мин при 13000 об/мин для удаления негидролизованного азоказеина. К 1200 мкл супернатанта добавляли 240 мкл 3% NaOH для нейтрализации кислоты, после чего измеряли оптическую плотность опытной пробы при 410 нм в 1 см кювете. Контрольная проба содержала 800 мкл азоказеина, 800 мкл ТХУ, 50 мг образца и 200 мкл трис-HCl буфера. За единицу каталитической активности принимали количество фермента, которое в условиях эксперимента гидролизует 1 мкМ субстрата за 1 мин. Удельную протеолитическую активность бромелайна рассчитывали по формуле:
ПА=D* 1000/120/200/Ср,
где ПА - протеолитическая активность, мкМ/мин на 1 мг белка,
D - оптическая плотность пробы при 410 нм,
Ср - концентрация белка в пробе, мг/мл, измеренная по методу Лоури,
120 - время инкубации в минутах,
200 - объем пробы,
1000 - пересчет в мкМ.
Статистическую обработку полученных результатов проводили при уровне значимости 5% с использованием t-критерия Стьюдента.
На первом этапе экспериментов для получения гетерогенных биокатализаторов на основе бромелайна, иммобилизованного путем включения в гель на основе сукцината хитозана и пищевого хитозана, в качестве иммобилизационной среды мы использовали ацетатные буферные растворы с рН в диапазоне от 4.0 до 5.8 и глициновые буферные растворы с рН в диапазоне от 8.6 до 10.5. Результаты для наиболее подходящих буферных систем отражены на фиг. 1-3.
Анализ содержания белка в гетерогенных препаратах показал, что наибольшее количество бромелайна (в мг на г носителя), иммобилизованного путем включения в гель на основе пищевого хитозана, наблюдается при использовании глицинового буфера с рН 8.6 и ацетатного буфера с рН 4.0-4.5. При иммобилизации на сукцинате хитозана количество бромелайна оказалось выше при использовании глицинового буфера с диапазоном рН 8.6-10.5 и ацетатного буфера с рН 5.5-5.8 (фиг. 1).
Общая активность (в ед на мл раствора) бромелайна, иммобилизованного путем включения в гель на основе пищевого хитозана, оказалась выше при использовании следующих буферов: глициновый с рН 8.6, ацетатный с рН 4.0, 4.5, 5.5. При иммобилизации на матрице сукцината хитозана общая активность бромелайна оказалась выше при использовании глицинового буфера с рН 9.0, 9.5, 10.5 и ацетатного буфера в диапазоне рН 5.0-5.8 (фиг. 2).
Наибольшую удельную активность показали препараты бромелайна, иммобилизованные путем включения в гель на основе пищевого хитозана при использовании глицинового буфера с рН 8.6 и ацетатного буфера с рН 5.5. При иммобилизации на сукцинате хитозана удельная активность оказалась выше при использовании глицинового буфера с рН 9.0, 9.5, 10.5, а также ацетатного буфера с рН 5.0 (фиг. 3).
Оптимальное соотношение содержания белка (мг на г носителя), общей активности (в ед на мл раствора) и удельной активности (в ед на мг белка) выявлено при иммобилизации бромелайна на матрице пищевого хитозана и сукцината хитозана при использовании глицинового буфера с рН 8.6 и 9.0-9.5 соответственно и 0.05 М ацетатного буфера с рН 5.5 и 5.0 соответственно.
Из вышеизложенного материала следует, что среди апробированных нами вариантов иммобилизации для создания гетерогенных препаратов на основе бромелайна и хитозана наиболее перспективным является включение фермента в гель на основе пищевого хитозана с молекулярной массой менее 100 кДа или сукцината хитозана при использовании соответственно 0.05 М глицинового буфера с рН 8.6 и 9.0-9.5 или 0.05 М ацетатного буфера с рН 5.5 и 5.0.
Таким образом, была разработана методика получения гетерогенного биокатализатора на основе бромелайна, иммобилизованного на матрице пищевого хитозана с молекулярной массой менее 100 кДа и сукцината хитозана путем включения в гель.

Claims (1)

  1. Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана или сукцината хитозана, включающий иммобилизацию бромелайна в буферном растворе на матрицу хитозана в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 5 мг/мл на 1 г носителя; инкубирование при комнатной температуре с периодическим перемешиванием; промывку образовавшегося осадка 50 мМ трис-HCl буфером (рН 7,5) до отсутствия в промывных водах белка, отличающийся тем, что иммобилизацию проводят на матрицу пищевого хитозана с молекулярной массой менее 100 кДа или сукцината хитозана; в качестве буферного раствора для иммобилизации используют либо 0,05 М глициновый буфер с рН 8,6 для пищевого хитозана или с рН 9,0-9,5 для сукцината хитозана; либо 0,05 М ацетатный буфер с рН 5,5 для пищевого хитозана или 5,0 для сукцината хитозана; инкубирование проводится в течение 2 часов.
RU2018142931A 2018-12-04 2018-12-04 Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана RU2691611C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018142931A RU2691611C1 (ru) 2018-12-04 2018-12-04 Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018142931A RU2691611C1 (ru) 2018-12-04 2018-12-04 Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2691611C1 true RU2691611C1 (ru) 2019-06-14

Family

ID=66947624

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018142931A RU2691611C1 (ru) 2018-12-04 2018-12-04 Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2691611C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2788454C1 (ru) * 2022-08-01 2023-01-19 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") Способ получения гибридного препарата бромелайна и карбоксиметилцеллюлозы в виде густого раствора

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1814764A3 (ru) * 1990-04-20 1995-03-20 Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения АН СССР Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран
US5916789A (en) * 1992-04-29 1999-06-29 Genencor International, Inc. Immobilized enzyme
CN102108352A (zh) * 2009-12-25 2011-06-29 南通远大生物科技发展有限公司 一种菠萝蛋白酶的固定化方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1814764A3 (ru) * 1990-04-20 1995-03-20 Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения АН СССР Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран
US5916789A (en) * 1992-04-29 1999-06-29 Genencor International, Inc. Immobilized enzyme
CN102108352A (zh) * 2009-12-25 2011-06-29 南通远大生物科技发展有限公司 一种菠萝蛋白酶的固定化方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ILLARIA B. et al. Pineapple stem bromelain immobilized on different supports: catalytic properties in model wine, Biotechnol. prog., 2012, Vol.28, N 6, pp.1472-1477. *
ДОСАДИНА Э.Э., БЕЛОВ А.А. Иммобилизация бромелаина на целлюлозные носители, Успехи в химии и химической технологии, 2016, Т.30, N 9, С.7-9. *
ДОСАДИНА Э.Э., БЕЛОВ А.А. Иммобилизация бромелаина на целлюлозные носители, Успехи в химии и химической технологии, 2016, Т.30, N 9, С.7-9. ILLARIA B. et al. Pineapple stem bromelain immobilized on different supports: catalytic properties in model wine, Biotechnol. prog., 2012, Vol.28, N 6, pp.1472-1477. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2788454C1 (ru) * 2022-08-01 2023-01-19 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") Способ получения гибридного препарата бромелайна и карбоксиметилцеллюлозы в виде густого раствора
RU2819793C1 (ru) * 2023-10-31 2024-05-24 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") Способ получения гибридного препарата бромелайна и аскорбата хитозана в виде густого раствора

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ilyina et al. Enzymic preparation of acid-free-water-soluble chitosan
Altun et al. Immobilization of pepsin on chitosan beads
Martinou et al. Chitin deacetylation by enzymatic means: monitoring of deacetylation processes
Pangburn et al. Lysozyme degradation of partially deacetylated chitin, its films and hydrogels
Krajewska Application of chitin-and chitosan-based materials for enzyme immobilizations: a review
Chiou et al. Immobilization of Candida rugosa lipase on chitosan with activation of the hydroxyl groups
Jafary et al. Stability improvement of immobilized alkaline phosphatase using chitosan nanoparticles
JPH0220292A (ja) 低分子化キトサンの製造方法
Magnin et al. Immobilization of enzymes into a polyionic hydrogel: Chitoxan
Rezakhani et al. Immobilization of protease in biopolymers (mixture of alginate-chitosan)
RU2677858C2 (ru) Способ получения гетерогенного ферментного препарата на основе фицина, обладающего ранозаживляющими и регенерирующими свойствами
RU2691611C1 (ru) Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана
Bracey et al. Relating the microstructure of enzyme dispersions in organic solvents to their kinetic behavior
RU2711786C1 (ru) Способ получения гетерогенного препарата бромелайна, ковалентно связанного с матрицей хитозана
RU2712690C1 (ru) Способ получения препарата папаина в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана
Ueoka et al. Effects of flavonoids in hybrid membranes on the activity of tripeptide as an enzyme model and their inhibition of hybridoma growth in vitro
RU2771183C1 (ru) Способ получения препарата фицина в геле на основе карбоксиметилцеллюлозы
RU2712528C1 (ru) Способ получения препарата коллагеназы в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана
CN110684211B (zh) 制备抵抗α-葡萄糖苷酶水解的交联右旋糖苷凝胶的方法
RU2788455C1 (ru) Способ получения композиционного препарата папаина и альгината натрия в виде густого раствора
JP3062893B2 (ja) キチン含有材料の酵素的分解法
Wang et al. Immobilization of lipase on epoxy activated (1→ 3)-α-d-glucan isolated from Penicillium chrysongenum
RU2792783C1 (ru) Способ получения гибридного препарата фицина и ацетата хитозана в виде густого раствора
RU2792785C1 (ru) Способ получения композиционного препарата бромелайна и альгината натрия в виде густого раствора
RU2792784C1 (ru) Способ получения гибридного препарата фицина и n-малеоилхитозана в виде густого раствора