JPH0618779B2 - 造血機能回復促進剤 - Google Patents
造血機能回復促進剤Info
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- JPH0618779B2 JPH0618779B2 JP62010037A JP1003787A JPH0618779B2 JP H0618779 B2 JPH0618779 B2 JP H0618779B2 JP 62010037 A JP62010037 A JP 62010037A JP 1003787 A JP1003787 A JP 1003787A JP H0618779 B2 JPH0618779 B2 JP H0618779B2
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- Japan
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- leu
- ala
- ser
- gln
- gly
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はヒト顆粒球コロニー刺激因子（以下Ｇ−ＣＳＦ
と略す）を有効成分とする骨髄移植後の造血機能回復促
進剤に関する。
と略す）を有効成分とする骨髄移植後の造血機能回復促
進剤に関する。
骨髄移植（以下ＢＭＴと略す）とは先天的または後天的
な造血障害を示す患者に対し、健康な他人または自己の
骨髄を移植することをいう。
な造血障害を示す患者に対し、健康な他人または自己の
骨髄を移植することをいう。
近年このＢＭＴは白血病、悪性リンパ腫などの血液疾患
や、ある種のガンに対する治療法として精力的に行われ
るようになってきている。そして、その効果もあがりつ
つある。〔臨床と研究、61巻、1480-1487,(1984); エク
スペリメンタル ヘマトロジー(Exp.Hematol.)，12 205
-215(1984)参照〕 しかし、この治療法も臨床上いくつかの問題点がある。
や、ある種のガンに対する治療法として精力的に行われ
るようになってきている。そして、その効果もあがりつ
つある。〔臨床と研究、61巻、1480-1487,(1984); エク
スペリメンタル ヘマトロジー(Exp.Hematol.)，12 205
-215(1984)参照〕 しかし、この治療法も臨床上いくつかの問題点がある。
ＢＭＴ直後の感染、間質性肺炎（ＩＰ）、移植片対宿主
病（ＧＶＨＤ）等がその主なものである。
病（ＧＶＨＤ）等がその主なものである。
このうち感染はＢＭＴ直後の無造血期におこるもので、
これに対する対策としては現在、無菌室療法がとられて
いる。ところが、患者の造血機能が回復してくるまでに
３週間程度の期間が必要であり、遅い場合には１ヶ月以
上かかることがある。
これに対する対策としては現在、無菌室療法がとられて
いる。ところが、患者の造血機能が回復してくるまでに
３週間程度の期間が必要であり、遅い場合には１ヶ月以
上かかることがある。
この間患者を無菌室内において治療するわけであるが、
この治療は高価であり、患者にとって経済的な負担が過
大になるのみならず、医師にとっても多大の労力を余儀
無くされるという問題点を有している。
この治療は高価であり、患者にとって経済的な負担が過
大になるのみならず、医師にとっても多大の労力を余儀
無くされるという問題点を有している。
ＩＰは移植成立後発症する場合が多い。ＩＰに対する対
策としてはスルファメトキサゾール−トリメトプリム
（Sulfamethoxazole-Trimethoprim）の、いわゆるＳＴ
合剤の予防的投与が実施されているが、ＳＴ合剤には骨
髄抑制作用があるため、造血機能が充分回復した患者で
ないと使用できない〔臨床免疫第15巻、第9 号、700-70
7(1983);臨床免疫第15巻、第9 、687-699(1983);Exp.He
matol.第12巻、205 〜215(1984)参照〕。又、ＧＶＨＤ
は移植片生着後おこる急性ＧＶＨＤが警戒すべきもので
あるが、この予防に投与されるメトトレキセート（ＭＴ
Ｘ）にも骨髄抑制があり、又、最近使用されるようにな
ったシクロスポリンＡ（ＣＳＡ）にも強い腎毒性がある
という問題をかかえている〔臨床と研究、第61巻、第5
号、1480-1487(1984)参照〕。いずれにしてもこの様な
状況下にあってＢＭＴ後の造血機能の早期回復が強く望
まれるところである。
策としてはスルファメトキサゾール−トリメトプリム
（Sulfamethoxazole-Trimethoprim）の、いわゆるＳＴ
合剤の予防的投与が実施されているが、ＳＴ合剤には骨
髄抑制作用があるため、造血機能が充分回復した患者で
ないと使用できない〔臨床免疫第15巻、第9 号、700-70
7(1983);臨床免疫第15巻、第9 、687-699(1983);Exp.He
matol.第12巻、205 〜215(1984)参照〕。又、ＧＶＨＤ
は移植片生着後おこる急性ＧＶＨＤが警戒すべきもので
あるが、この予防に投与されるメトトレキセート（ＭＴ
Ｘ）にも骨髄抑制があり、又、最近使用されるようにな
ったシクロスポリンＡ（ＣＳＡ）にも強い腎毒性がある
という問題をかかえている〔臨床と研究、第61巻、第5
号、1480-1487(1984)参照〕。いずれにしてもこの様な
状況下にあってＢＭＴ後の造血機能の早期回復が強く望
まれるところである。
しかしながら、現在のところ、これに答うべき適切な薬
剤がないため、患者の造血機能が自然に回復してくるの
を待っているという状態である。
剤がないため、患者の造血機能が自然に回復してくるの
を待っているという状態である。
このような状況を打開するべく検討を重ねた結果、本出
願人が先に出願し製造に成功した純粋なヒトＧ−ＣＳＦ
を利用することに着想し、これを実現すべく研究を更に
進めた。
願人が先に出願し製造に成功した純粋なヒトＧ−ＣＳＦ
を利用することに着想し、これを実現すべく研究を更に
進めた。
なお、ＣＳＦとはヒト又は動物の骨髄細胞の顆粒球系幹
細胞に作用して単球・マクロファージ及び好中球への分
裂増殖と分化とを誘導する因子であって、〔Metcalf
等; エクスペリメンタル ヘマトロジー(Exp.Hematol.)
1,185,(1973)参照〕、ヒト−ＣＳＦに関しても、これま
でに多数の報告が既になされている。〔Stanley 等，フ
ェデラルプロシーデング(Fed.Proc.)35.2272(1975); Bu
rgess等，ブラッド(Blood) 49.573(1977)，その他多数
あり〕 しかし、前述のＣＳＦは完全に純化されたものではな
く、又純粋で均質の大量生産可能な取得法も確立してい
なかった。
細胞に作用して単球・マクロファージ及び好中球への分
裂増殖と分化とを誘導する因子であって、〔Metcalf
等; エクスペリメンタル ヘマトロジー(Exp.Hematol.)
1,185,(1973)参照〕、ヒト−ＣＳＦに関しても、これま
でに多数の報告が既になされている。〔Stanley 等，フ
ェデラルプロシーデング(Fed.Proc.)35.2272(1975); Bu
rgess等，ブラッド(Blood) 49.573(1977)，その他多数
あり〕 しかし、前述のＣＳＦは完全に純化されたものではな
く、又純粋で均質の大量生産可能な取得法も確立してい
なかった。
ＢＭＴ後の造血機能回復を促進する薬剤の開発のために
は、大量均一なＧ−ＣＳＦの取得が前提であり、本出願
人の先の成功（特願昭59−153273号，特願昭60−220450
号，特願昭60−269455号，特願昭60−269456号，特願昭
60−270838号，特願昭60−270839号参照）はこれを一挙
に可能にしたのである。
は、大量均一なＧ−ＣＳＦの取得が前提であり、本出願
人の先の成功（特願昭59−153273号，特願昭60−220450
号，特願昭60−269455号，特願昭60−269456号，特願昭
60−270838号，特願昭60−270839号参照）はこれを一挙
に可能にしたのである。
そこで、本発明者は該ヒトＧ−ＣＳＦをマウスに連日投
与したところ造血機能の昂進があることを認めた。（実
験例１参照） ついで、Ｇ−ＣＳＦをＢＭＴ後の造血機能回復促進剤と
して用いうるか否かについて検討を行ったところＧ−Ｃ
ＳＦ投与群にＣＦＵ−Ｓの増加が認められた。これによ
ってＧ−ＣＳＦにＢＭＴ後の造血機能促進効果のあるこ
とが確認されたのである。（実験例２参照） 又、造血機能の回復が遅い実験系においては、コントロ
ール群で生存率が33％であるのに対し、Ｇ−ＣＳＦ投与
群は75％の高率を示す事が確認された。これはＧ−ＣＳ
Ｆの造血機能促進効果の表れである。（実験例３参照） 本発明者は以上の知見に基づき本発明を完成した。
与したところ造血機能の昂進があることを認めた。（実
験例１参照） ついで、Ｇ−ＣＳＦをＢＭＴ後の造血機能回復促進剤と
して用いうるか否かについて検討を行ったところＧ−Ｃ
ＳＦ投与群にＣＦＵ−Ｓの増加が認められた。これによ
ってＧ−ＣＳＦにＢＭＴ後の造血機能促進効果のあるこ
とが確認されたのである。（実験例２参照） 又、造血機能の回復が遅い実験系においては、コントロ
ール群で生存率が33％であるのに対し、Ｇ−ＣＳＦ投与
群は75％の高率を示す事が確認された。これはＧ−ＣＳ
Ｆの造血機能促進効果の表れである。（実験例３参照） 本発明者は以上の知見に基づき本発明を完成した。
本発明はヒトＧ−ＣＳＦを有効成分とするＢＭＴ後の造
血機能回復促進剤を提供するものである。
血機能回復促進剤を提供するものである。
本発明の有効成分であるヒトＧ−ＣＳＦは純度が高く単
離されたヒトＧ−ＣＳＦであればその由来は問わない
が、本出願人が先に出願した方法によって取得された下
記のヒトＧ−ＣＳＦが特に好ましく用いられる。
離されたヒトＧ−ＣＳＦであればその由来は問わない
が、本出願人が先に出願した方法によって取得された下
記のヒトＧ−ＣＳＦが特に好ましく用いられる。
(1) 次の理化学的性質を有するヒトＧ−ＣＳＦ。
分子量：ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法による測定で19000 ±1000。
ドゲル電気泳動法による測定で19000 ±1000。
等電点：ｐＩ＝5.5 ±0.1 ，ｐＩ＝5.8 ±0.1 ，ｐＩ
＝6.1 ±0.1 の三つの等電点のうち少なくとも１つを有
する。
＝6.1 ±0.1 の三つの等電点のうち少なくとも１つを有
する。
紫外部吸収：280ｎｍに極大吸収を有し、250ｎｍに極
少値を持つ。
少値を持つ。
Ｎ末端から２１番目迄のアミノ酸配列が次の如くであ
る。
る。
H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-Leu-Pro-Gln-Se
r-Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-Gln-Val- (2) 次のアミノ酸配列またはその一部で表わされるポリ
ペプチドを有するヒトＧ−ＣＳＦ。
r-Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-Gln-Val- (2) 次のアミノ酸配列またはその一部で表わされるポリ
ペプチドを有するヒトＧ−ＣＳＦ。
(Met)n Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gln
Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gln Val Arg Lys I
le Gln Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gln Glu Lys X Cys
Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Le
u Leu Gly His Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu
Ser Ser Cys Pro Ser Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gly Cy
s Leu Ser Gln Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gln
Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly Ile Ser Pro Glu Le
u Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gln Leu Asp Val Ala
Asp Phe Ala Thr Thr Ile Trp Gln Gln Met Glu Glu Le
u Gly Met Ala Pro Ala Leu Gln Pro Thr Gln Gly Ala
Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gln Arg Arg Ala Gl
y Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln Ser Phe Leu
Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gln Pr
o（式中ＸはLeu 又はLeu-Val-Ser-Glu を示し、ｎは０
又は１を示す） なお、上記のヒトＧ−ＣＳＦで糖鎖部分を持つ糖蛋白質
の形をとるものが最も好ましいものである。
Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gln Val Arg Lys I
le Gln Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gln Glu Lys X Cys
Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Le
u Leu Gly His Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu
Ser Ser Cys Pro Ser Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gly Cy
s Leu Ser Gln Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gln
Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly Ile Ser Pro Glu Le
u Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gln Leu Asp Val Ala
Asp Phe Ala Thr Thr Ile Trp Gln Gln Met Glu Glu Le
u Gly Met Ala Pro Ala Leu Gln Pro Thr Gln Gly Ala
Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gln Arg Arg Ala Gl
y Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln Ser Phe Leu
Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gln Pr
o（式中ＸはLeu 又はLeu-Val-Ser-Glu を示し、ｎは０
又は１を示す） なお、上記のヒトＧ−ＣＳＦで糖鎖部分を持つ糖蛋白質
の形をとるものが最も好ましいものである。
上記(1) のＧ−ＣＳＦは特願昭59−153273号明細書又は
特願昭60−220450号明細書に記載された製造法によって
得ることができる。
特願昭60−220450号明細書に記載された製造法によって
得ることができる。
前者には、ヒト口腔底癌由来の細胞株ＣＨＵ−１の培養
上清から単離取得する方法が詳述されており、また後者
には同じくヒト口腔底癌由来の細胞株ＣＨＵ−２〔仏国
パスツール研（C.N.C.M.）寄託番号Ｉ−483 〕の培養上
清から製造する方法が記載されている。
上清から単離取得する方法が詳述されており、また後者
には同じくヒト口腔底癌由来の細胞株ＣＨＵ−２〔仏国
パスツール研（C.N.C.M.）寄託番号Ｉ−483 〕の培養上
清から製造する方法が記載されている。
詳しくは夫々の明細書を参照されたい。
又(2) のＧ−ＣＳＦは特願昭60−269455号，特願昭60−
269456号，特願昭60−270838号及び特願昭60−270839号
の各明細書に記載された製造方法によって得ることがで
きる。これ等の各明細書に記載されている方法はいわゆ
る遺伝子組換え技術による方法である。
269456号，特願昭60−270838号及び特願昭60−270839号
の各明細書に記載された製造方法によって得ることがで
きる。これ等の各明細書に記載されている方法はいわゆ
る遺伝子組換え技術による方法である。
最初の２件には、Ｅ．ｃｏｌｉ等の原核生物を宿主細胞
とする方法が、又後の２件には、動物細胞を宿主とする
方法が開示されているので詳しくは夫々の明細書を参照
していただきたい。
とする方法が、又後の２件には、動物細胞を宿主とする
方法が開示されているので詳しくは夫々の明細書を参照
していただきたい。
なお、前述した糖鎖部分を有する糖蛋白質の形をとるＧ
−ＣＳＦは動物細胞を宿主とする方法によって製造する
ことができる。
−ＣＳＦは動物細胞を宿主とする方法によって製造する
ことができる。
得られたヒトＧ−ＣＳＦは凍結保存とするか又は凍結乾
燥、真空乾燥等の手段により水分を除去して保存するこ
とができる。
燥、真空乾燥等の手段により水分を除去して保存するこ
とができる。
又、所望によりヒトＧ−ＣＳＦを適当な緩衝液に溶解し
た後にミリポアフィルター等で無菌濾過して注射剤とす
ることもできる。
た後にミリポアフィルター等で無菌濾過して注射剤とす
ることもできる。
更に本発明の造血機能回復促進剤は医薬製剤としての形
態をとるために必要な製剤担体や賦形剤を、更には安定
化剤、吸着防止剤を含むことができる。
態をとるために必要な製剤担体や賦形剤を、更には安定
化剤、吸着防止剤を含むことができる。
本発明の造血機能回復促進剤に含まれるヒトＧ−ＣＳＦ
の投与量及び投与回数は対象の疾患患者の病状を配慮し
て決めることができるが、通常成人一人当り 0.1〜 500
μｇ、好ましくは５〜100 μｇのヒトＧ−ＣＳＦを含有
する製剤を１週間に１〜７回投与することができる。し
かし本発明はヒトＧ−ＣＳＦの含有量によって限定され
るものではない。
の投与量及び投与回数は対象の疾患患者の病状を配慮し
て決めることができるが、通常成人一人当り 0.1〜 500
μｇ、好ましくは５〜100 μｇのヒトＧ−ＣＳＦを含有
する製剤を１週間に１〜７回投与することができる。し
かし本発明はヒトＧ−ＣＳＦの含有量によって限定され
るものではない。
以下本発明を参考例（Ｇ−ＣＳＦの製造例）、実験例
（薬理効果）、実施例（製剤例）をあげて説明するが、
本発明はこれ等に限定されるものではない。
（薬理効果）、実施例（製剤例）をあげて説明するが、
本発明はこれ等に限定されるものではない。
参考例〔動物細胞（マウスＣ１２７細胞）を用いたヒト
Ｇ−ＣＳＦの製造例〕 特願昭60−269456号明細書の実施例１〜12に記載された
方法でＰＴＮ−Ｖ２プラスミドを得、これをＢａｍＨＩ
で処理しておく。即ち、ｐＴＮ−Ｖ２プラスミド20μｇ
を10 mM Ｔｒｉｓ−Ｈｃｌ（ｐＨ 8.0），７ mM Ｍｇ
Ｃｌ2 ， 100 mM ＮａＣｌ，２ mM ２−メルカプトエ
タノール，0.01％ＢＳＡ100 μｌに溶解せしめＢａｍＨ
Ｉ（宝酒造社製）20単位で処理し、フェノール処理、エ
ーテル処理、エタノール沈澱を行っておく。
Ｇ−ＣＳＦの製造例〕 特願昭60−269456号明細書の実施例１〜12に記載された
方法でＰＴＮ−Ｖ２プラスミドを得、これをＢａｍＨＩ
で処理しておく。即ち、ｐＴＮ−Ｖ２プラスミド20μｇ
を10 mM Ｔｒｉｓ−Ｈｃｌ（ｐＨ 8.0），７ mM Ｍｇ
Ｃｌ2 ， 100 mM ＮａＣｌ，２ mM ２−メルカプトエ
タノール，0.01％ＢＳＡ100 μｌに溶解せしめＢａｍＨ
Ｉ（宝酒造社製）20単位で処理し、フェノール処理、エ
ーテル処理、エタノール沈澱を行っておく。
一方、マウスＣ１２７細胞は10％牛胎児血清（ＧＩＢＣ
Ｏ）を含むDulbecco′s minimal essential培地中で増
殖させる。径５cmのプレートに増殖したＣ１２７細胞
に、プレート当たり上記調製ＤＮＡを10μｇの割り合い
でリン酸−カルシウム法（Haynes,J＆Weissmann,C(198
3)Nucleic Acid Res,11,687−706 参照）にて形質転換
を行い、グリセロール処理の後、12時間37℃でインキュ
ベートした。
Ｏ）を含むDulbecco′s minimal essential培地中で増
殖させる。径５cmのプレートに増殖したＣ１２７細胞
に、プレート当たり上記調製ＤＮＡを10μｇの割り合い
でリン酸−カルシウム法（Haynes,J＆Weissmann,C(198
3)Nucleic Acid Res,11,687−706 参照）にて形質転換
を行い、グリセロール処理の後、12時間37℃でインキュ
ベートした。
次に、この細胞を３枚の新しい径５cmのプレートに移
し、１週間２回の割り合いで培地交換をした。16日目に
Ｆｏｃｉ（集塊）を形成した部分をそれぞれ新しいプレ
ートに移し、上述の培地で継代培養し、Ｇ−ＣＳＦ生産
能の高いクローンを選別した。その結果〜１mg／のレ
ベルのＧ−ＣＳＦ生産があった。
し、１週間２回の割り合いで培地交換をした。16日目に
Ｆｏｃｉ（集塊）を形成した部分をそれぞれ新しいプレ
ートに移し、上述の培地で継代培養し、Ｇ−ＣＳＦ生産
能の高いクローンを選別した。その結果〜１mg／のレ
ベルのＧ−ＣＳＦ生産があった。
なお、回収、精製、検定方法については上記の特願昭60
−269456号明細書の該当実施例に開示してある通りのも
のを用いた。
−269456号明細書の該当実施例に開示してある通りのも
のを用いた。
実験例１ Ｇ−ＣＳＦ連日投与と造血機能の関係（マウス） Ｇ−ＣＳＦサンプル0.1 ml（ＣＨＵ−２由来のＧ−ＣＳ
Ｆ2.5 μｇ、ｎ−プロパノール１％、同系マウス血清10
％を含む生理食塩液）をマウス（Ｃ５７ＢＬ ８Ｗ、オ
ス）に１日１回連日投与し下記の夫々の日に殺して脾臓
中のＣＦＵ−Ｃ数、ＣＦＵ−Ｓ数及び末梢好中球数を測
定しコントロールサンプル0.1 ml（ｎ−プロパノール１
％、同系マウス血清10％を含む生理食塩液）を投与した
マウスのそれらと比較した。結果を表−１、表−２及び
表−３に示す。ＣＦＵ−Ｓとは赤血球、好中球、巨核
球、好酸球、単球に分化し得る能力を持つ幹細胞のこと
であり、ＣＦＵ−Ｃとは好中球、単球（マクロファー
ジ）そして場合によっては好酸球に分化し得る能力を持
つ幹細胞をいう。
Ｆ2.5 μｇ、ｎ−プロパノール１％、同系マウス血清10
％を含む生理食塩液）をマウス（Ｃ５７ＢＬ ８Ｗ、オ
ス）に１日１回連日投与し下記の夫々の日に殺して脾臓
中のＣＦＵ−Ｃ数、ＣＦＵ−Ｓ数及び末梢好中球数を測
定しコントロールサンプル0.1 ml（ｎ−プロパノール１
％、同系マウス血清10％を含む生理食塩液）を投与した
マウスのそれらと比較した。結果を表−１、表−２及び
表−３に示す。ＣＦＵ−Ｓとは赤血球、好中球、巨核
球、好酸球、単球に分化し得る能力を持つ幹細胞のこと
であり、ＣＦＵ−Ｃとは好中球、単球（マクロファー
ジ）そして場合によっては好酸球に分化し得る能力を持
つ幹細胞をいう。
表−１、表−２、表−３から明らかな通りＧ−ＣＳＦを
マウスに連日投与すると造血機能の昂進が認められる。
マウスに連日投与すると造血機能の昂進が認められる。
実験例２ Ｇ−ＣＳＦのＢＭＴ後の造血機能回復促進効果 マウス（Ｃ５７ＢＬ ８Ｗ、オス）に９５０ＲのＸ線を
全身照射し、直ちに同系マウスの骨髄細胞２×１０５個
を尾静脈より移植した。このマウスについて、移植後５
日目より実験例１で用いたコントロール又はＧ−ＣＳＦ
サンプル0.1 mlを連日投与し、投与開始後６日目及び12
日目の脾及び骨髄のＣＦＵ−Ｓ数を数えた。
全身照射し、直ちに同系マウスの骨髄細胞２×１０５個
を尾静脈より移植した。このマウスについて、移植後５
日目より実験例１で用いたコントロール又はＧ−ＣＳＦ
サンプル0.1 mlを連日投与し、投与開始後６日目及び12
日目の脾及び骨髄のＣＦＵ−Ｓ数を数えた。
結果は表−４、表−５に示す。
実験例３ 造血能回復の遅い実験系での生存率 マウス（Ｃ５７ＢＬ ８Ｗ、オス）に９５０ＲのＸ線を
全身照射し、直ちに同系マウスの骨髄細胞７．５×１０
４個を尾静脈より移植した。このマウスについて、移植
後５日目より実験例１で用いたコントロール又はＧ−Ｃ
ＳＦサンプル0.1 mlを連日11日投与し、その後の生存率
（照射後40日目）をみた。結果は以下に示す通りであっ
た。
全身照射し、直ちに同系マウスの骨髄細胞７．５×１０
４個を尾静脈より移植した。このマウスについて、移植
後５日目より実験例１で用いたコントロール又はＧ−Ｃ
ＳＦサンプル0.1 mlを連日11日投与し、その後の生存率
（照射後40日目）をみた。結果は以下に示す通りであっ
た。
生存率 ｃｏｎｔｒｏｌ群 ３３．３％（ｎ＝12） Ｇ−ＣＳＦ処置群 ７５．０％（ｎ＝12） 生存率の顕著な向上はＧ−ＣＳＦの造血能回復促進効果
によるものと推定される。
によるものと推定される。
実施例１（製剤例） 参考例によって得られたヒトＧ−ＣＳＦを無菌処理した
後−20℃で凍結された凍結物を用いて注射剤とした。
後−20℃で凍結された凍結物を用いて注射剤とした。
実施例２（製剤例） 参考例によって得られたヒトＧ−ＣＳＦを無菌操作で10
mlバイアル瓶に５ml充填し、−20℃で凍結乾燥後ゴム栓
にて施栓した凍結乾燥物を用いて注射剤とした。
mlバイアル瓶に５ml充填し、−20℃で凍結乾燥後ゴム栓
にて施栓した凍結乾燥物を用いて注射剤とした。
本発明の造血機能回復促進剤は、造血障害をおこしてい
る患者への治療法である骨髄移植を行なった後の造血機
能回復を促進させる効果があり、これによって白血病等
の多くの難病患者の治癒に対する期待が高まった。
る患者への治療法である骨髄移植を行なった後の造血機
能回復を促進させる効果があり、これによって白血病等
の多くの難病患者の治癒に対する期待が高まった。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭53−121916（ＪＰ，Ａ) 特開 昭54−140707（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−137417（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−114525（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−36326（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−132899（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−174026（ＪＰ，Ａ) 特表 昭63−500636（ＪＰ，Ａ)
Claims (3)
- 【請求項１】骨髄移植後において、幹細胞（ＣＦＵ−
Ｓ）を増殖促進させることを特徴とするヒト顆粒球コロ
ニー刺激因子を有効成分とする造血機能回復促進剤。 - 【請求項２】ヒト顆粒球コロニー刺激因子が以下の理化
学的性質を有するものであることを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の造血機能回復促進剤。 〔理化学的性質〕 分子量：ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法による測定で19000±1000。 等電点：ｐＩ＝5.5 ±0.1 ，ｐＩ＝5.8 ±0.1 ，ｐＩ
＝6.1 ±0.1 の三つの等電点のうち少なくとも１つを有
する。 紫外部吸収：280ｎｍに極大吸収を有し、250ｎｍに極
少値を持つ。 - 【請求項３】ヒト顆粒球コロニー刺激因子が、以下のア
ミノ酸配列又はその一部で表わされるポリペプチドを有
するものであることを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の造血機能回復促進剤。 (Met)n Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gln
Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gln Val Arg Lys I
le Gln Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gln Glu Lys Leu (Va
l Ser Glu)m Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Gl
u Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Ile Pro
Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gln Ala Leu Gl
n Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gln Leu His Ser Gly Leu
Phe Leu Tyr Gln Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly Il
e Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gln
Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr Ile Trp Gln Gl
n Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gln Pro
Thr Gln Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gl
n Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu
Gln Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg Hi
s Leu Ala Gln Pro （式中ｎ，ｍは０又は１を示す。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62010037A JPH0618779B2 (ja) | 1986-01-22 | 1987-01-21 | 造血機能回復促進剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61-10280 | 1986-01-22 | ||
| JP1028086 | 1986-01-22 | ||
| JP62010037A JPH0618779B2 (ja) | 1986-01-22 | 1987-01-21 | 造血機能回復促進剤 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7286407A Division JP2838867B2 (ja) | 1986-01-22 | 1995-10-09 | 幹細胞増殖促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62252729A JPS62252729A (ja) | 1987-11-04 |
| JPH0618779B2 true JPH0618779B2 (ja) | 1994-03-16 |
Family
ID=26345198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62010037A Expired - Lifetime JPH0618779B2 (ja) | 1986-01-22 | 1987-01-21 | 造血機能回復促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0618779B2 (ja) |
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| JPS6030291B2 (ja) * | 1978-03-20 | 1985-07-16 | 森永乳業株式会社 | 人顆粒球の分化増殖を促進するｈｇｉ糖蛋白質、ｈｇｉ糖蛋白質の製造法及びｈｇｉ糖蛋白質を含有する白血球減少症治療剤 |
| JPS6030654B2 (ja) * | 1980-12-31 | 1985-07-17 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒトコロニ−刺激因子の製造方法 |
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| JPS62236497A (ja) * | 1985-09-17 | 1987-10-16 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 顆粒球コロニー刺激因子活性を有する糖蛋白質の製造方法 |
| JPH0618778B2 (ja) * | 1985-10-04 | 1994-03-16 | 中外製薬株式会社 | 白血球減少症治療剤 |
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| JPH0618778A (ja) * | 1992-06-30 | 1994-01-28 | Kyocera Corp | 自動焦点検出装置 |
| JPH0615477A (ja) * | 1992-07-02 | 1994-01-25 | Tanaka Kikinzoku Kogyo Kk | Ａｇろう |
-
1987
- 1987-01-21 JP JP62010037A patent/JPH0618779B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62252729A (ja) | 1987-11-04 |
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|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |