JPH061798A - 強心配糖体の製造方法 - Google Patents
強心配糖体の製造方法Info
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- JPH061798A JPH061798A JP4158326A JP15832692A JPH061798A JP H061798 A JPH061798 A JP H061798A JP 4158326 A JP4158326 A JP 4158326A JP 15832692 A JP15832692 A JP 15832692A JP H061798 A JPH061798 A JP H061798A
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- Japan
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- culture
- pregnane
- cardiac glycoside
- dione
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 強心配糖体を産生する植物の茎葉器官培養株
の組織培養培地中に５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ン及び／又は５β−プレグナン−３β−オール−２０ー
オンを添加して組織培養を行い、培養物より強心配糖体
を採取することを特徴とする強心配糖体の製造方法。 【効果】 本発明方法は、強心配糖体の増量生産を可能
にする。
の組織培養培地中に５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ン及び／又は５β−プレグナン−３β−オール−２０ー
オンを添加して組織培養を行い、培養物より強心配糖体
を採取することを特徴とする強心配糖体の製造方法。 【効果】 本発明方法は、強心配糖体の増量生産を可能
にする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、植物の組織培養により
ジギトキシン、ジゴキシン等の強心配糖体を製造する方
法に関する。
ジギトキシン、ジゴキシン等の強心配糖体を製造する方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ジギトキシン、ジゴキシン等の強心配糖
体は、心筋に対し著しい親和性をもち、その収縮力を強
め、同時に強力な利尿作用を現わすので、心筋興奮性強
心剤、特に欝血性心不全に対するきわめて強力な治療剤
である。これらの強心配糖体はゴマノハグサ科ジギタリ
ス属の２年生植物であるジギタリス（Digitalis purpu
rea）やケジギタリス（Digitalis lanata）の葉に含ま
れているステロイド配糖体であり、天然の又は栽培され
た植物中から抽出して製造されている。しかし天然物を
原料としているため、その生産は天候に左右されるこ
と、収穫時期が限定されていること等が問題となってい
る。そのため、これらの化合物を植物の組織培養によっ
て生産する研究が数多く行われている。R. M. Garve ら
の報告［Planta Med., 40, 92-103(1980)］やM. Hagimo
ri らの報告［Plant & Cell Physiol., 23, 1205-1211
(1982) ］によると、これらの化合物は、分化した茎葉
器官で生産されるが、未分化な培養細胞では、その生産
性が非常に低い。また、茎葉器官においても、天然の植
物葉に比べ非常に低いのが現状である。
体は、心筋に対し著しい親和性をもち、その収縮力を強
め、同時に強力な利尿作用を現わすので、心筋興奮性強
心剤、特に欝血性心不全に対するきわめて強力な治療剤
である。これらの強心配糖体はゴマノハグサ科ジギタリ
ス属の２年生植物であるジギタリス（Digitalis purpu
rea）やケジギタリス（Digitalis lanata）の葉に含ま
れているステロイド配糖体であり、天然の又は栽培され
た植物中から抽出して製造されている。しかし天然物を
原料としているため、その生産は天候に左右されるこ
と、収穫時期が限定されていること等が問題となってい
る。そのため、これらの化合物を植物の組織培養によっ
て生産する研究が数多く行われている。R. M. Garve ら
の報告［Planta Med., 40, 92-103(1980)］やM. Hagimo
ri らの報告［Plant & Cell Physiol., 23, 1205-1211
(1982) ］によると、これらの化合物は、分化した茎葉
器官で生産されるが、未分化な培養細胞では、その生産
性が非常に低い。また、茎葉器官においても、天然の植
物葉に比べ非常に低いのが現状である。
【０００３】一方、強心配糖体の生合成に関する研究で
は、植物を用いたトレーサー実験により、メバロン酸由
来のコレステロール、プレグネノロン、プロゲステロ
ン、５β−プレグナン−３，２０−ジオン、５β−プレ
グナン−３β−オール−２０−オン、５β−プレグナン
−３β，１４β−ジオール−２０−オン等が生合成中間
体と考えられている。J.H.C.Lui ら［Phytochemistry,
18, 1913-1916(1979) ］は、培養した茎葉器官にプロゲ
ステロンを添加することにより、ジゴキシンの生産性が
顕著に増大することを見いだしている。しかし、中間体
であってもフィードバック阻害等により必ずしも強心配
糖体の生産性増大に効果があるかどうか不明であった。
は、植物を用いたトレーサー実験により、メバロン酸由
来のコレステロール、プレグネノロン、プロゲステロ
ン、５β−プレグナン−３，２０−ジオン、５β−プレ
グナン−３β−オール−２０−オン、５β−プレグナン
−３β，１４β−ジオール−２０−オン等が生合成中間
体と考えられている。J.H.C.Lui ら［Phytochemistry,
18, 1913-1916(1979) ］は、培養した茎葉器官にプロゲ
ステロンを添加することにより、ジゴキシンの生産性が
顕著に増大することを見いだしている。しかし、中間体
であってもフィードバック阻害等により必ずしも強心配
糖体の生産性増大に効果があるかどうか不明であった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、植物組織培
養により、強心配糖体を簡便に製造する方法を提供する
ことを目的とする。
養により、強心配糖体を簡便に製造する方法を提供する
ことを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、強心配糖体を産生する植物の茎葉器官培養株の
培地中に５β−プレグナン−３，２０−ジオン及び／又
は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンを添加
して組織培養を行うと、強心配糖体の生産性が増大する
ことを見いだし、本発明を完成するに至った。
の結果、強心配糖体を産生する植物の茎葉器官培養株の
培地中に５β−プレグナン−３，２０−ジオン及び／又
は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンを添加
して組織培養を行うと、強心配糖体の生産性が増大する
ことを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００６】即ち、本発明の強心配糖体の製造方法は、
強心配糖体を産生する植物の茎葉器官培養株の組織培養
培地中に５β−プレグナン−３，２０−ジオン及び／又
は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンを添加
して組織培養を行い、培養物より強心配糖体を採取する
ことを特徴とするものである。本発明の製造方法の対象
となる強心配糖体としては、例えばジギトキシン、ジゴ
キシン、ラナトシドＡ，Ｂ，Ｃ、デスラノシド、ジギコ
リンが挙げられる。
強心配糖体を産生する植物の茎葉器官培養株の組織培養
培地中に５β−プレグナン−３，２０−ジオン及び／又
は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンを添加
して組織培養を行い、培養物より強心配糖体を採取する
ことを特徴とするものである。本発明の製造方法の対象
となる強心配糖体としては、例えばジギトキシン、ジゴ
キシン、ラナトシドＡ，Ｂ，Ｃ、デスラノシド、ジギコ
リンが挙げられる。
【０００７】本発明の製造方法において組織培養に用い
られる強心配糖体を産生する植物としては、前記強心配
糖体を産生する植物であれば特に制限はなく、例えばジ
ギトキシン、ジゴキシン等の強心配糖体を産生するゴマ
ノハグサ科ジギタリス属のDigitalis purpurea, Digita
lis lanata, Digitalis lutea, Digitalis mertonesi
s, Digitalis ambigua等が挙げられる。
られる強心配糖体を産生する植物としては、前記強心配
糖体を産生する植物であれば特に制限はなく、例えばジ
ギトキシン、ジゴキシン等の強心配糖体を産生するゴマ
ノハグサ科ジギタリス属のDigitalis purpurea, Digita
lis lanata, Digitalis lutea, Digitalis mertonesi
s, Digitalis ambigua等が挙げられる。
【０００８】前記植物の組織培養は、本発明により５β
−プレグナン−３，２０−ジオン及び／又は５β−プレ
グナン−３β−オール−２０−オンを添加する以外は、
普通の手段によって行うことができる。５β−プレグナ
ン−３，２０−ジオン及び５β−プレグナン−３β−オ
ール−２０−オンは、培地における濃度が0.01〜2mM、
好ましくは0.05〜0.5mM になる量で使用される。
−プレグナン−３，２０−ジオン及び／又は５β−プレ
グナン−３β−オール−２０−オンを添加する以外は、
普通の手段によって行うことができる。５β−プレグナ
ン−３，２０−ジオン及び５β−プレグナン−３β−オ
ール−２０−オンは、培地における濃度が0.01〜2mM、
好ましくは0.05〜0.5mM になる量で使用される。
【０００９】本発明で使用される培地は、前記５β−プ
レグナン−３，２０ー ジオン及び／又は５β−プレグナ
ン−３β−オール−２０−オンの他に普通の培地成分を
含有する。このような成分として一般に炭素源及び無機
成分が用いられ、これに植物ホルモン類、ビタミン類を
添加し、更に必要に応じてアミノ酸類を添加することが
できる。炭素源としては、シュクロース、マルトース、
ラクトース等の二糖類、グルコース、フルクトース、ガ
ラクトース等の単糖類、デンプンあるいはこれら糖源の
２種類以上を適当な比率で混合したものを使用できる。
レグナン−３，２０ー ジオン及び／又は５β−プレグナ
ン−３β−オール−２０−オンの他に普通の培地成分を
含有する。このような成分として一般に炭素源及び無機
成分が用いられ、これに植物ホルモン類、ビタミン類を
添加し、更に必要に応じてアミノ酸類を添加することが
できる。炭素源としては、シュクロース、マルトース、
ラクトース等の二糖類、グルコース、フルクトース、ガ
ラクトース等の単糖類、デンプンあるいはこれら糖源の
２種類以上を適当な比率で混合したものを使用できる。
【００１０】無機成分としては、例えばリン、窒素、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸一水素カリウム、リン酸二水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸一水素カリウム、リン酸二水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。
【００１１】植物ホルモンとしては、例えばインドール
酢酸(IAA) 、ナフタレン酢酸(NAA)、ｐ−クロロフェノ
キシイソ酪酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸(2,4-
D) 等のオーキシン類、ベンジルアミノプリン、カイネ
チン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン
類が用いられる。ビタミン類としては、例えばビオチ
ン、チアミン（ビタミンＢ1）、ピリドキシン（ビタミ
ンＢ6）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等
が用いられる。
酢酸(IAA) 、ナフタレン酢酸(NAA)、ｐ−クロロフェノ
キシイソ酪酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸(2,4-
D) 等のオーキシン類、ベンジルアミノプリン、カイネ
チン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン
類が用いられる。ビタミン類としては、例えばビオチ
ン、チアミン（ビタミンＢ1）、ピリドキシン（ビタミ
ンＢ6）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等
が用いられる。
【００１２】アミノ酸類としては、例えばグリシン、ア
ラニン、グルタミン、システイン等を添加できる。一般
に前記の各成分は、炭素源が約１〜約30g/l 、無機成分
が約0.1 μM 〜100mM 、植物ホルモン類が約0.01〜約10
μM 、ビタミン類及びアミノ酸類がそれぞれ約0.1 〜約
100mg/l の濃度で用いられる。
ラニン、グルタミン、システイン等を添加できる。一般
に前記の各成分は、炭素源が約１〜約30g/l 、無機成分
が約0.1 μM 〜100mM 、植物ホルモン類が約0.01〜約10
μM 、ビタミン類及びアミノ酸類がそれぞれ約0.1 〜約
100mg/l の濃度で用いられる。
【００１３】本発明の組織培養に用いられる培地として
は、従来から知られている植物の組織培養に用いられる
培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962 年) 〔Murashig
e &Skoog 〕の培地、リンスマイヤー・スクーグ(1965
年) 〔Linsmaier Skoog 〕の培地、ホワイト(1954 年)
〔White 〕の培地、ガンボルグ〔Gamborg 〕のＢ−５培
地、三井のＭ−９培地等に前記の植物ホルモンを添加
し、更に必要に応じて前記した炭素源、ビタミン類、ア
ミノ酸等を添加して調製される培地を例示できるが、こ
の中でも特にムラシゲ・スクーグの培地を用いて調製さ
れる培地が好ましい。
は、従来から知られている植物の組織培養に用いられる
培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962 年) 〔Murashig
e &Skoog 〕の培地、リンスマイヤー・スクーグ(1965
年) 〔Linsmaier Skoog 〕の培地、ホワイト(1954 年)
〔White 〕の培地、ガンボルグ〔Gamborg 〕のＢ−５培
地、三井のＭ−９培地等に前記の植物ホルモンを添加
し、更に必要に応じて前記した炭素源、ビタミン類、ア
ミノ酸等を添加して調製される培地を例示できるが、こ
の中でも特にムラシゲ・スクーグの培地を用いて調製さ
れる培地が好ましい。
【００１４】本発明には液体培地及び寒天やゲランガム
等を通常0.1 〜1 ％含有する固形培地のいずれも使用で
きるが、通常は液体培地が好ましい。本発明の組織培養
においては、前記植物の根、生長点、葉、茎、種子、花
粉、葯、がく等の組織片又は細胞、あるいはこれらを前
記培地あるいは他の従来の培地によって組織培養して得
られる茎葉器官を使用することができる。茎葉器官を本
発明により５β−プレグナン−３，２０−ジオン及び／
又は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンを添
加した培地を用いて組織培養すると、強心配糖体含量の
増大した培養組織が得られる。この培養組織から、エタ
ノール等の有機溶媒による抽出によって強心配糖体を分
離することができる。
等を通常0.1 〜1 ％含有する固形培地のいずれも使用で
きるが、通常は液体培地が好ましい。本発明の組織培養
においては、前記植物の根、生長点、葉、茎、種子、花
粉、葯、がく等の組織片又は細胞、あるいはこれらを前
記培地あるいは他の従来の培地によって組織培養して得
られる茎葉器官を使用することができる。茎葉器官を本
発明により５β−プレグナン−３，２０−ジオン及び／
又は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンを添
加した培地を用いて組織培養すると、強心配糖体含量の
増大した培養組織が得られる。この培養組織から、エタ
ノール等の有機溶媒による抽出によって強心配糖体を分
離することができる。
【００１５】本発明の組織培養の好ましい一例として
は、次の方法が挙げられる。先ず、ジギタリス属に属す
る植物の植物体、例えば根、生長点、葉、茎、種子等か
ら採取される植物片を殺菌処理後、寒天で固めたムラシ
ゲ・スクーグの固体培地上に置床し、10〜35℃で７〜30
日程度経過させて組織片の一部より茎葉器官を分化させ
る。このようにして得られた茎葉器官を継代培養すると
生育速度が漸次高まり安定化した茎葉器官が得られる。
この茎葉器官を増殖に適した液体培地、例えばムラシゲ
・スクーグの液体培地に移して増殖させる。液体培地に
おいて更に生育速度が高められる。この安定化した茎葉
器官を、本発明により５β−プレグナン−３，２０−ジ
オン及び／又は５β−プレグナン−３β−オール−２０
−オンを含有する液体培地に添加して培養する。
は、次の方法が挙げられる。先ず、ジギタリス属に属す
る植物の植物体、例えば根、生長点、葉、茎、種子等か
ら採取される植物片を殺菌処理後、寒天で固めたムラシ
ゲ・スクーグの固体培地上に置床し、10〜35℃で７〜30
日程度経過させて組織片の一部より茎葉器官を分化させ
る。このようにして得られた茎葉器官を継代培養すると
生育速度が漸次高まり安定化した茎葉器官が得られる。
この茎葉器官を増殖に適した液体培地、例えばムラシゲ
・スクーグの液体培地に移して増殖させる。液体培地に
おいて更に生育速度が高められる。この安定化した茎葉
器官を、本発明により５β−プレグナン−３，２０−ジ
オン及び／又は５β−プレグナン−３β−オール−２０
−オンを含有する液体培地に添加して培養する。
【００１６】本発明の組織培養における５β−プレグナ
ン−３，２０−ジオン及び／又は５β−プレグナン−３
β−オール−２０−オンの添加時期としては、培養初期
〜１０日目が好適である。本発明の組織培養における培
養温度としては、通常は約10〜約35℃、特に約23〜28℃
が好適である。約10℃未満では増殖速度が小さく、約35
℃より高くても同様に増殖速度が小さい。本発明の組織
培養を行うに当たっては、光が必要であり、光の照度は
１０００〜１００００ルクスが好適である。
ン−３，２０−ジオン及び／又は５β−プレグナン−３
β−オール−２０−オンの添加時期としては、培養初期
〜１０日目が好適である。本発明の組織培養における培
養温度としては、通常は約10〜約35℃、特に約23〜28℃
が好適である。約10℃未満では増殖速度が小さく、約35
℃より高くても同様に増殖速度が小さい。本発明の組織
培養を行うに当たっては、光が必要であり、光の照度は
１０００〜１００００ルクスが好適である。
【００１７】本発明の方法において液体培地を用いた場
合には、培養終了後に培養組織を濾過等の方法によって
培地から分離し、このものから目的とする強心配糖体を
有機溶媒による抽出等の方法によって分離することがで
きる。
合には、培養終了後に培養組織を濾過等の方法によって
培地から分離し、このものから目的とする強心配糖体を
有機溶媒による抽出等の方法によって分離することがで
きる。
【００１８】
【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明を更に
具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限
定されるものではない。 実施例１ インドール酢酸及びベンジルアミノプリンをそれぞれ1p
pmの濃度になるように添加した改変ムラシゲ・スクーグ
の寒天培地（寒天0.8 重量％）に、前もって2％アンチ
ホルミン溶液又は70％エタノール溶液等で滅菌処理した
ケジギタリス（Digitalis lanata）の葉片を置床し、25
℃で明所（１５００〜３０００ルクス）にて静置培養す
ると、カルスが生じた後、一部より茎葉器官が分化し
た。茎葉器官を切取り、３〜４週間毎に継代培養を繰り
返すことにより、安定な茎葉器官培養株を得た。
具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限
定されるものではない。 実施例１ インドール酢酸及びベンジルアミノプリンをそれぞれ1p
pmの濃度になるように添加した改変ムラシゲ・スクーグ
の寒天培地（寒天0.8 重量％）に、前もって2％アンチ
ホルミン溶液又は70％エタノール溶液等で滅菌処理した
ケジギタリス（Digitalis lanata）の葉片を置床し、25
℃で明所（１５００〜３０００ルクス）にて静置培養す
ると、カルスが生じた後、一部より茎葉器官が分化し
た。茎葉器官を切取り、３〜４週間毎に継代培養を繰り
返すことにより、安定な茎葉器官培養株を得た。
【００１９】このようにして得られた茎葉器官培養株0.
5g（新鮮重）を、インドール酢酸及びベンジルアミノプ
リンをそれぞれ1ppmの濃度になるように添加した改変ム
ラシゲ・スクーグの液体培地20ml入りの100 容三角フラ
スコに移し、25℃で明所（１５００〜３０００ルクス）
にて振盪培養し、培養２日目に５β−プレグナン−３，
２０−ジオンを0.3mM の濃度になるよう添加し、更に９
日間25℃で振盪培養した。
5g（新鮮重）を、インドール酢酸及びベンジルアミノプ
リンをそれぞれ1ppmの濃度になるように添加した改変ム
ラシゲ・スクーグの液体培地20ml入りの100 容三角フラ
スコに移し、25℃で明所（１５００〜３０００ルクス）
にて振盪培養し、培養２日目に５β−プレグナン−３，
２０−ジオンを0.3mM の濃度になるよう添加し、更に９
日間25℃で振盪培養した。
【００２０】培養終了後、ケジギタリス茎葉器官を濾過
により採取し、凍結乾燥した後、その乾燥重量を測定
し、液体培地１Ｌ当りの培養物の生育重量を求めた。得
られた乾燥培養物からエタノール等を用いて強心配糖体
を抽出し、ＥＬＩＳＡ法により強心配糖体含量を測定し
た。その結果を表１に示す。 比較例１ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンを添加しない以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表１に示す。 比較例２ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりにプレグネノロン 0.3mMを２日目に添加した
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１に示
す。 比較例３ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりにプロゲステロン 0.3mMを２日目に添加した
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１に示
す。 比較例４ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５α−プレグナン−３，２０−ジオン 0.3
mMを２日目に添加した以外は該実施例と同様に操作し
た。その結果を表１に示す。 実施例２ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの濃度を0.15mM、添加時期を１０日目に変更し、更に
１１日間培養した以外は該実施例と同様に操作した。そ
の結果を表１に示す。 実施例３ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５β−プレグナン−３β−オール−２０−
オン 0.15mM を１０日目に添加した以外は該実施例と同
様に操作した。その結果を表１に示す。 比較例５ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンを添加しない以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表１に示す。 比較例６ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりにプロゲステロン 0.15mM を１０日目に添加
した以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１
に示す。 比較例７ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５α−プレグナン−３，２０−ジオン 0.1
5mM を１０日目に添加した以外は該実施例と同様に操作
した。その結果を表１に示す。 比較例８ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５α−プレグナンー ３β- オール- ２０ー
オン 0.15mM を１０日目に添加した以外は該実施例と同
様に操作した。その結果を表１に示す。
により採取し、凍結乾燥した後、その乾燥重量を測定
し、液体培地１Ｌ当りの培養物の生育重量を求めた。得
られた乾燥培養物からエタノール等を用いて強心配糖体
を抽出し、ＥＬＩＳＡ法により強心配糖体含量を測定し
た。その結果を表１に示す。 比較例１ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンを添加しない以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表１に示す。 比較例２ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりにプレグネノロン 0.3mMを２日目に添加した
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１に示
す。 比較例３ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりにプロゲステロン 0.3mMを２日目に添加した
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１に示
す。 比較例４ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５α−プレグナン−３，２０−ジオン 0.3
mMを２日目に添加した以外は該実施例と同様に操作し
た。その結果を表１に示す。 実施例２ 実施例１において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの濃度を0.15mM、添加時期を１０日目に変更し、更に
１１日間培養した以外は該実施例と同様に操作した。そ
の結果を表１に示す。 実施例３ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５β−プレグナン−３β−オール−２０−
オン 0.15mM を１０日目に添加した以外は該実施例と同
様に操作した。その結果を表１に示す。 比較例５ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンを添加しない以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表１に示す。 比較例６ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりにプロゲステロン 0.15mM を１０日目に添加
した以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１
に示す。 比較例７ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５α−プレグナン−３，２０−ジオン 0.1
5mM を１０日目に添加した以外は該実施例と同様に操作
した。その結果を表１に示す。 比較例８ 実施例２において、５β−プレグナン−３，２０−ジオ
ンの代わりに５α−プレグナンー ３β- オール- ２０ー
オン 0.15mM を１０日目に添加した以外は該実施例と同
様に操作した。その結果を表１に示す。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【発明の効果】本発明の組織培養による強心配糖体の製
造方法を採用すれば、従来法に比べて強心配糖体を大量
に効率よく生産することができる。
造方法を採用すれば、従来法に比べて強心配糖体を大量
に効率よく生産することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 5/04 (Ｃ１２Ｐ 33/00 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (2)
- 【請求項１】 強心配糖体を産生する植物の茎葉器官培
養株の組織培養培地中に５β−プレグナン−３，２０−
ジオン及び／又は５β−プレグナン−３β−オール−２
０−オンを添加して組織培養を行い、培養物より強心配
糖体を採取することを特徴とする強心配糖体の製造方
法。 - 【請求項２】 強心配糖体を産生する植物がジギタリス
属植物であることを特徴とする請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4158326A JPH0659234B2 (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | 強心配糖体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4158326A JPH0659234B2 (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | 強心配糖体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH061798A true JPH061798A (ja) | 1994-01-11 |
| JPH0659234B2 JPH0659234B2 (ja) | 1994-08-10 |
Family
ID=15669199
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4158326A Expired - Lifetime JPH0659234B2 (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | 強心配糖体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0659234B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8564107B2 (en) | 2009-03-12 | 2013-10-22 | Lg Innotek Co., Ltd. | Lead frame and method for manufacturing the same |
-
1992
- 1992-06-17 JP JP4158326A patent/JPH0659234B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8564107B2 (en) | 2009-03-12 | 2013-10-22 | Lg Innotek Co., Ltd. | Lead frame and method for manufacturing the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0659234B2 (ja) | 1994-08-10 |
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