JPH0892114A - 薬用人参未分化培養細胞から得られるサポニン類の製造方法 - Google Patents
薬用人参未分化培養細胞から得られるサポニン類の製造方法Info
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- JPH0892114A JPH0892114A JP6251509A JP25150994A JPH0892114A JP H0892114 A JPH0892114 A JP H0892114A JP 6251509 A JP6251509 A JP 6251509A JP 25150994 A JP25150994 A JP 25150994A JP H0892114 A JPH0892114 A JP H0892114A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 薬用人参植物体より分裂組織を摘出し、植物
ホルモンを含むカルス誘導用培地で該分裂組織のカルス
を誘導し、該カルス誘導用培地で継代培養後、該カルス
誘導用培地のホルモン組成を変更した再分化誘導用培地
で継代培養を行い、該継代培養時に再分化してくる細胞
塊を分別除去することによって得られる未分化細胞塊
を、培養して成分抽出を行うことを特徴とするサポニン
類の製造方法。 【効果】 本発明のサポニンの製造方法により、年間を
通じてサポニンを安定供給でき、食品、生薬、あるいは
医薬分野の製薬原料として利用することができる。
ホルモンを含むカルス誘導用培地で該分裂組織のカルス
を誘導し、該カルス誘導用培地で継代培養後、該カルス
誘導用培地のホルモン組成を変更した再分化誘導用培地
で継代培養を行い、該継代培養時に再分化してくる細胞
塊を分別除去することによって得られる未分化細胞塊
を、培養して成分抽出を行うことを特徴とするサポニン
類の製造方法。 【効果】 本発明のサポニンの製造方法により、年間を
通じてサポニンを安定供給でき、食品、生薬、あるいは
医薬分野の製薬原料として利用することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、サポニンの製造方法、
サポニンを生産する未分化細胞塊及びその製造方法に関
する。
サポニンを生産する未分化細胞塊及びその製造方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】サポニンなど植物界に広く分布する配糖
体は、植物に含まれる成分としては、微量であり、それ
らを大量に必要とする場合は、大量の植物を必要とし
た。そのため、近年では、植物細胞の大量培養により抽
出されている。
体は、植物に含まれる成分としては、微量であり、それ
らを大量に必要とする場合は、大量の植物を必要とし
た。そのため、近年では、植物細胞の大量培養により抽
出されている。
【０００３】例えば、薬用人参培養細胞でのサポニン合
成法では、成分抽出原料となる培養細胞は、一部、ある
いは全体が形態的に分化した培養細胞を利用している(F
uruya, T., et al., Planta medica, 48, 83(1983)）
が、これらの培養細胞から得られるサポニンは植物体含
有のサポニンと同一の配糖数の多いサポニンが多く、し
かもそれらの培養細胞の増殖活性は低かった。配糖数の
少ないサポニンは、従来のサポニンにはない薬理効果が
期待されるが、その合成は、通常の配糖数の多いサポニ
ンの糖鎖を化学的又は酵素的に加水分解し、得られるア
グリコンの再配糖化を行う必要があり、容易には得られ
なかった。
成法では、成分抽出原料となる培養細胞は、一部、ある
いは全体が形態的に分化した培養細胞を利用している(F
uruya, T., et al., Planta medica, 48, 83(1983)）
が、これらの培養細胞から得られるサポニンは植物体含
有のサポニンと同一の配糖数の多いサポニンが多く、し
かもそれらの培養細胞の増殖活性は低かった。配糖数の
少ないサポニンは、従来のサポニンにはない薬理効果が
期待されるが、その合成は、通常の配糖数の多いサポニ
ンの糖鎖を化学的又は酵素的に加水分解し、得られるア
グリコンの再配糖化を行う必要があり、容易には得られ
なかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、薬用人参植
物体から、従来のサポニンにはない薬理効果が期待され
る短糖鎖サポニンを得るためのサポニン類の製造方法及
び該サポニン類を生産する細胞を提供するものである。
物体から、従来のサポニンにはない薬理効果が期待され
る短糖鎖サポニンを得るためのサポニン類の製造方法及
び該サポニン類を生産する細胞を提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記技術に
鑑み、研究を重ねた結果、薬用人参植物体から誘導され
たカルスを、一定期間以上の脱分化状態を経させ、次い
で、再分化条件にて培養を行い、再分化する細胞塊を除
去することにより、高増殖性を示し、かつ均一な未分化
細胞塊の培養細胞系統を確立し、この未分化培養細胞が
生産するサポニンを得ることができた。
鑑み、研究を重ねた結果、薬用人参植物体から誘導され
たカルスを、一定期間以上の脱分化状態を経させ、次い
で、再分化条件にて培養を行い、再分化する細胞塊を除
去することにより、高増殖性を示し、かつ均一な未分化
細胞塊の培養細胞系統を確立し、この未分化培養細胞が
生産するサポニンを得ることができた。
【０００６】即ち、本発明は、薬用人参植物体の組織
を、カルス誘導用培地で継代培養後、得られたカルスを
再分化誘導用培地で継代培養をし、該継代培養時に再分
化してくる細胞塊を除去することによって得られる未分
化細胞塊を、培養して成分抽出を行うことを特徴とする
サポニン類の製造方法である。
を、カルス誘導用培地で継代培養後、得られたカルスを
再分化誘導用培地で継代培養をし、該継代培養時に再分
化してくる細胞塊を除去することによって得られる未分
化細胞塊を、培養して成分抽出を行うことを特徴とする
サポニン類の製造方法である。
【０００７】また、本発明は、薬用人参植物体から誘導
されるカルスを、カルス誘導用培地で継代培養し、軟質
化したカルスを再分化誘導用培地で培養し、再分化した
細胞塊を除去することを特徴とする未分化細胞塊の製造
方法である。
されるカルスを、カルス誘導用培地で継代培養し、軟質
化したカルスを再分化誘導用培地で培養し、再分化した
細胞塊を除去することを特徴とする未分化細胞塊の製造
方法である。
【０００８】さらに、本発明は、再分化誘導用培地で再
分化しない、薬用人参植物体から誘導される未分化細胞
塊でもある。
分化しない、薬用人参植物体から誘導される未分化細胞
塊でもある。
【０００９】本発明において、薬用人参植物体とは、ウ
コギ科（Araliaceae）のPanax 属の植物で、例えば、オ
タネニンジン（Panax ginseng C.A.Meyer)、トチバニン
ジン（Panax japonicus C.A.Meyer)等が挙げられ、特に
トチバニンジンが好ましい。
コギ科（Araliaceae）のPanax 属の植物で、例えば、オ
タネニンジン（Panax ginseng C.A.Meyer)、トチバニン
ジン（Panax japonicus C.A.Meyer)等が挙げられ、特に
トチバニンジンが好ましい。
【００１０】本発明に用いられるカルス誘導用培地は、
植物ホルモンを含んだ、一般的に植物細胞の培養に用い
られる培地が使用でき、例えば、ＭＳ基本培地やＢ５基
本培地に植物ホルモンを添加したものが使用できる。
植物ホルモンを含んだ、一般的に植物細胞の培養に用い
られる培地が使用でき、例えば、ＭＳ基本培地やＢ５基
本培地に植物ホルモンを添加したものが使用できる。
【００１１】上記培地は、通常、硝酸塩、アンモニウム
塩、燐酸塩、硫酸塩、Ｋ、Ｆｅ、Ｍｇ塩等の無機栄養塩
類、ビタミン類（ニコチン酸等）、アミノ酸（グリシン
等）、ミオイノシトール等の有機物質、及び１〜５％の
炭素源（ショ糖、グルコース、フルクトース、マルトー
ス等）を含み、その他に０．５〜１％の寒天を添加し、
固形培地としてもよい。
塩、燐酸塩、硫酸塩、Ｋ、Ｆｅ、Ｍｇ塩等の無機栄養塩
類、ビタミン類（ニコチン酸等）、アミノ酸（グリシン
等）、ミオイノシトール等の有機物質、及び１〜５％の
炭素源（ショ糖、グルコース、フルクトース、マルトー
ス等）を含み、その他に０．５〜１％の寒天を添加し、
固形培地としてもよい。
【００１２】上記培地に添加する植物ホルモンとして
は、オーキシンとサイトカイニン類が挙げられ、オーキ
シン及びサイトカイニンを併用するのが好ましい。
は、オーキシンとサイトカイニン類が挙げられ、オーキ
シン及びサイトカイニンを併用するのが好ましい。
【００１３】上記オーキシンとしては、天然オーキシン
（Indole-3-acetic acid、Indole-3-acetonitrile 等）
と、合成オーキシン（2,4-Dichlorophenoxyacetic aci
d、Indole-3-butyric acid 等）が挙げられ、ジベレリ
ンは除く。同濃度であれば、2,4-Dichlorophenoxyaceti
c acidを用いるのがよく、カルスを効率よく誘導でき
る。
（Indole-3-acetic acid、Indole-3-acetonitrile 等）
と、合成オーキシン（2,4-Dichlorophenoxyacetic aci
d、Indole-3-butyric acid 等）が挙げられ、ジベレリ
ンは除く。同濃度であれば、2,4-Dichlorophenoxyaceti
c acidを用いるのがよく、カルスを効率よく誘導でき
る。
【００１４】上記サイトカイニン類としては、天然サイ
トカイニン（Zeatin等）と合成サイトカイニン（Kineti
n,6-Benzylamino purine等）が挙げられ、6-Benzylamin
o purineを用いるのが好ましい。
トカイニン（Zeatin等）と合成サイトカイニン（Kineti
n,6-Benzylamino purine等）が挙げられ、6-Benzylamin
o purineを用いるのが好ましい。
【００１５】上記植物ホルモンは、オーキシンを必須と
し、少なくとも一種以上含んでいればよい。
し、少なくとも一種以上含んでいればよい。
【００１６】上記植物ホルモンの添加濃度は、１０-7〜
１０-5Ｍ、好ましくは、１０-6〜１０-5Ｍである。
１０-5Ｍ、好ましくは、１０-6〜１０-5Ｍである。
【００１７】また、オーキシンとサイトカイニン類を併
用する場合は、サイトカイニン類の濃度は、１０-7〜１
０-5Ｍであり、オーキシン濃度がサイトカイニン類の濃
度以上であることが好ましい。
用する場合は、サイトカイニン類の濃度は、１０-7〜１
０-5Ｍであり、オーキシン濃度がサイトカイニン類の濃
度以上であることが好ましい。
【００１８】本発明の再分化誘導用培地は、上記カルス
誘導用培地のオーキシンを、ジベレリンンを除く天然オ
ーキシン又はその誘導体に替えたものであり、その濃度
は、１０-7〜１０-5Ｍ、好ましくは、１０-7〜１０-6Ｍ
である。また、サイトカイニン類の添加濃度は、添加オ
ーキシンの１／１０〜１／１００とするのが好ましい。
誘導用培地のオーキシンを、ジベレリンンを除く天然オ
ーキシン又はその誘導体に替えたものであり、その濃度
は、１０-7〜１０-5Ｍ、好ましくは、１０-7〜１０-6Ｍ
である。また、サイトカイニン類の添加濃度は、添加オ
ーキシンの１／１０〜１／１００とするのが好ましい。
【００１９】上記ジベレリンンを除く天然オーキシン又
はその誘導体は、具体的には、Indole-3-acetic acid、
Indole-3-butyric acid 、Indole-3-acetonitirile、In
dole-3-propionic acid 、4-Chloroindole-3-acetic ac
id、Indole-1-acetic acid、2-Methyl-indole-3-acetic
acid 、α-Naphthaleneacetic acid が挙げられ、好ま
しくは、Indole-3-butyric acid である。
はその誘導体は、具体的には、Indole-3-acetic acid、
Indole-3-butyric acid 、Indole-3-acetonitirile、In
dole-3-propionic acid 、4-Chloroindole-3-acetic ac
id、Indole-1-acetic acid、2-Methyl-indole-3-acetic
acid 、α-Naphthaleneacetic acid が挙げられ、好ま
しくは、Indole-3-butyric acid である。
【００２０】また、サイトカイニン類は、カルス誘導用
培地と同じものを使用できるが、Kinetin が好ましい。
培地と同じものを使用できるが、Kinetin が好ましい。
【００２１】本発明では、先ず、薬用人参植物体の組織
を、カルス誘導用培地で継代培養を行うが、該継代培養
は、通常、継代周期が、４〜６週間毎で３〜１０世代、
好ましくは、４〜５週間毎で、３〜７世代である。
を、カルス誘導用培地で継代培養を行うが、該継代培養
は、通常、継代周期が、４〜６週間毎で３〜１０世代、
好ましくは、４〜５週間毎で、３〜７世代である。
【００２２】尚、３世代以上経過したカルスは、誘導初
期のカルスと比較して軟質となる。
期のカルスと比較して軟質となる。
【００２３】この軟質のカルスを、カルス誘導用の培地
から、寒天を除いた液体培地に継代し、１８〜２７℃、
好ましくは、２０〜２５℃での暗所、１００〜１２０ｒ
ｐｍの旋回振盪培養を行う。
から、寒天を除いた液体培地に継代し、１８〜２７℃、
好ましくは、２０〜２５℃での暗所、１００〜１２０ｒ
ｐｍの旋回振盪培養を行う。
【００２４】この液体振盪培養でカルスは、直径０．３
〜２ｃｍの球状細胞塊の形態で盛んに増殖する。
〜２ｃｍの球状細胞塊の形態で盛んに増殖する。
【００２５】次に、得られた球状細胞塊を再分化誘導用
培地で継代培養を行うが、該継代培養期間は、２〜５週
間毎で１世代以上、好ましくは、２〜３週間毎で、２世
代以上である。
培地で継代培養を行うが、該継代培養期間は、２〜５週
間毎で１世代以上、好ましくは、２〜３週間毎で、２世
代以上である。
【００２６】上記再分化誘導用培地での培養では、培養
時に再分化する細胞塊があるが、このような細胞塊は取
り除き、再分化しない未分化細胞塊のみを培養する。
時に再分化する細胞塊があるが、このような細胞塊は取
り除き、再分化しない未分化細胞塊のみを培養する。
【００２７】再分化する細胞塊を取り除く方法として
は、ピンセットや金属針などでつまみ上げたり、０．５
〜２ｃｍの穴を有するメッシュを使用してもよい。
は、ピンセットや金属針などでつまみ上げたり、０．５
〜２ｃｍの穴を有するメッシュを使用してもよい。
【００２８】数回の分別除去で得られた未分化細胞塊
は、再分化することなく、均一な培養細胞系統として継
代維持されている。
は、再分化することなく、均一な培養細胞系統として継
代維持されている。
【００２９】さらに、上記未分化細胞塊を、１８〜２７
℃、好ましくは、２０〜２５℃で、１００〜１２０ｒｐ
ｍの旋回振盪培養を行う。
℃、好ましくは、２０〜２５℃で、１００〜１２０ｒｐ
ｍの旋回振盪培養を行う。
【００３０】上記未分化細胞塊又はその培養液からサポ
ニンを抽出する方法としては、カラムやＨＰＬＣなどの
公知の方法に従う。
ニンを抽出する方法としては、カラムやＨＰＬＣなどの
公知の方法に従う。
【００３１】尚、本発明の製造方法を、トチバニンジン
で行った場合は、サポニンは、２種類得られ、一つは構
造既知の化合物であるが、もう一つは、トチバニンジン
からは得られない化合物である。
で行った場合は、サポニンは、２種類得られ、一つは構
造既知の化合物であるが、もう一つは、トチバニンジン
からは得られない化合物である。
【００３２】本発明の製造方法により得られる一般式
（１）、（２）及び（３）で表わされる化合物におい
て、１−ヘキソースとしては、グルコース、ガラクトー
ス、マンノースが例示される。
（１）、（２）及び（３）で表わされる化合物におい
て、１−ヘキソースとしては、グルコース、ガラクトー
ス、マンノースが例示される。
【００３３】また、一般式（２）及び（３）で表わされ
る化合物において、Ｒ1 、Ｒ2 の組み合わせとしては、
Ｒ1 及びＲ2 が水素、Ｒ1 がヘキソースでＲ2 が水素、
Ｒ1が水素でＲ2 がヘキソース、の三種類が挙げられ、
好ましくはＲ1 及びＲ2 が水素である。
る化合物において、Ｒ1 、Ｒ2 の組み合わせとしては、
Ｒ1 及びＲ2 が水素、Ｒ1 がヘキソースでＲ2 が水素、
Ｒ1が水素でＲ2 がヘキソース、の三種類が挙げられ、
好ましくはＲ1 及びＲ2 が水素である。
【００３４】本発明では、未分化細胞塊の大量培養は、
再分化誘導用培地で行うが、再分化誘導用培地に、炭素
源、酢酸メバロン酸経路上の各物質、植物ステロール生
合成阻害剤、サポニン生産を向上させる細菌等の微生物
又はその抽出成分を、単独又は組み合わせて添加して大
量培養することもできる。
再分化誘導用培地で行うが、再分化誘導用培地に、炭素
源、酢酸メバロン酸経路上の各物質、植物ステロール生
合成阻害剤、サポニン生産を向上させる細菌等の微生物
又はその抽出成分を、単独又は組み合わせて添加して大
量培養することもできる。
【００３５】
【発明の効果】本発明によれば、上記組織培養方法によ
り薬用人参植物体から高増殖活性を持ち、且つサポニン
を生産する培養細胞系統が得られることにより、年間を
通じてサポニンを安定供給でき、食品、生薬、あるいは
医薬分野の製薬原料として利用することができる。
り薬用人参植物体から高増殖活性を持ち、且つサポニン
を生産する培養細胞系統が得られることにより、年間を
通じてサポニンを安定供給でき、食品、生薬、あるいは
医薬分野の製薬原料として利用することができる。
【００３６】
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。
る。
【００３７】実施例１ 京都府内山林に自生のトチバニンジン（Panax japonicu
s C.A.Meyer)植物体を採集した。植物体の根茎を、70%
MeOH、１％次亜塩素酸、３％過酸化水素水の順で表面殺
菌し、根茎の分裂組織部分を、１９６２年のMurashige
and Skoog (MS)の栄養塩（表１）、２％Sucrose 、１０
-6Ｍ ２，４−Ｄ(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid)、
１０-6Ｍ ＢＡＰ（6-Benzyl-amino purine)、０．７％
寒天の組成のファルコンシャーレのカルス誘導用培地に
植えた。２５℃の暗所で培養を行ったところ、約２週間
後に組織片から不定形の細胞塊（カルス）が生じた。
s C.A.Meyer)植物体を採集した。植物体の根茎を、70%
MeOH、１％次亜塩素酸、３％過酸化水素水の順で表面殺
菌し、根茎の分裂組織部分を、１９６２年のMurashige
and Skoog (MS)の栄養塩（表１）、２％Sucrose 、１０
-6Ｍ ２，４−Ｄ(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid)、
１０-6Ｍ ＢＡＰ（6-Benzyl-amino purine)、０．７％
寒天の組成のファルコンシャーレのカルス誘導用培地に
植えた。２５℃の暗所で培養を行ったところ、約２週間
後に組織片から不定形の細胞塊（カルス）が生じた。
【００３８】約１ヶ月後、生じたカルスのみを同一の新
鮮培地に移植し、以後、４週間毎に継代培養を行った。
カルス誘導から３〜４代目にカルスが白色軟質となり、
さかんに増殖するようになった。
鮮培地に移植し、以後、４週間毎に継代培養を行った。
カルス誘導から３〜４代目にカルスが白色軟質となり、
さかんに増殖するようになった。
【００３９】誘導より６代目に、カルス誘導用培地から
寒天を除いた組成の１００ｍｌフラスコ（培地量：４０
ｍｌ）の液体培地にカルスを移植し、２３℃、暗所、１
２０rpm の液体旋回振盪培養を開始した。２０日後、培
養器を５００ｍｌフラスコ（培地量：１２０ｍｌ）にス
ケールアップし、以後、２０日毎に継代培養した。この
液体振盪培養細胞は、直径３〜２０ｍｍの球状細胞塊の
形態で増殖した。
寒天を除いた組成の１００ｍｌフラスコ（培地量：４０
ｍｌ）の液体培地にカルスを移植し、２３℃、暗所、１
２０rpm の液体旋回振盪培養を開始した。２０日後、培
養器を５００ｍｌフラスコ（培地量：１２０ｍｌ）にス
ケールアップし、以後、２０日毎に継代培養した。この
液体振盪培養細胞は、直径３〜２０ｍｍの球状細胞塊の
形態で増殖した。
【００４０】液体振盪培養を開始して３代目の球状細胞
塊を、ＮＨ4 態窒素（ＮＨ4 ＮＯ3）を除いたＭＳ栄養
塩（ＮＨ4 freeＭＳ）、2% Sucrose、１０-6Ｍ ＩＢＡ
（3-Indole butyric acid)、１０-7Ｍ Kinetin の液体
培地（再分化誘導用培地）に植えかえたところ、継代２
〜３代目で球状細胞塊の中には不定根が生じた細胞塊が
確認された。球状細胞塊と不定根の発生が見られる細胞
塊との分離を継代培養毎に繰り返した結果、球状細胞塊
系統と不定根系統の２種類の培養細胞系統が得られた。
塊を、ＮＨ4 態窒素（ＮＨ4 ＮＯ3）を除いたＭＳ栄養
塩（ＮＨ4 freeＭＳ）、2% Sucrose、１０-6Ｍ ＩＢＡ
（3-Indole butyric acid)、１０-7Ｍ Kinetin の液体
培地（再分化誘導用培地）に植えかえたところ、継代２
〜３代目で球状細胞塊の中には不定根が生じた細胞塊が
確認された。球状細胞塊と不定根の発生が見られる細胞
塊との分離を継代培養毎に繰り返した結果、球状細胞塊
系統と不定根系統の２種類の培養細胞系統が得られた。
【００４１】不定根系統は、再分化誘導用培地の栄養塩
を１９７５年のＢ５培地の栄養塩（表１）に変更した液
体培地（液体振盪継代用培地）で、良好に根を伸長し、
根の分枝も観察された。
を１９７５年のＢ５培地の栄養塩（表１）に変更した液
体培地（液体振盪継代用培地）で、良好に根を伸長し、
根の分枝も観察された。
【００４２】同様に、球状細胞塊も液体振盪継代用培地
でよく成長し、２０日間の培養で、継代時の植え込み量
２．５ｇに対して、約４０ｇの新鮮重量増加（約１６
倍）を示した。
でよく成長し、２０日間の培養で、継代時の植え込み量
２．５ｇに対して、約４０ｇの新鮮重量増加（約１６
倍）を示した。
【００４３】
【表１】
【００４４】液体振盪継代用培地で、２０日間培養を行
った球状細胞塊を乾燥させ、MeOHでソックスレー抽出を
行った（２．５〜３時間）。抽出液を乾固し、日本ミリ
ポア社製Sep-Pak C18 カートリッジに保持させて水洗浄
を行った。その後のMeOH溶出の分画をHPLCのSampleとし
た。
った球状細胞塊を乾燥させ、MeOHでソックスレー抽出を
行った（２．５〜３時間）。抽出液を乾固し、日本ミリ
ポア社製Sep-Pak C18 カートリッジに保持させて水洗浄
を行った。その後のMeOH溶出の分画をHPLCのSampleとし
た。
【００４５】HPLC分析は、ネオス社製Fluofix カラム
（４mm径×１５０mm）、カラム温度：４０℃、移動相：
２０％から８０％のＣＨ3 ＣＮのグラジュエント（20mM
リン酸緩衝液を含む。）、流速：１ml/min、検出：ＵＶ
（203nm ）の条件で行った。
（４mm径×１５０mm）、カラム温度：４０℃、移動相：
２０％から８０％のＣＨ3 ＣＮのグラジュエント（20mM
リン酸緩衝液を含む。）、流速：１ml/min、検出：ＵＶ
（203nm ）の条件で行った。
【００４６】ＴＬＣ分析は、Merck 社製Kieselgel ６０
Ｆ254 を用い、Sampleをスポットした後、ＣＨＣ
ｌ3 ：ＣＨ3 ＯＨ：Ｈ2 Ｏ＝６５：３５：１０（下層）
で展開し、濃硫酸噴霧後、１２０℃で加熱して発色させ
た。植物体根茎から抽出したチクセツサポニン群は、赤
−青紫の発色を示し、ＵＶ下で蛍光を発した。
Ｆ254 を用い、Sampleをスポットした後、ＣＨＣ
ｌ3 ：ＣＨ3 ＯＨ：Ｈ2 Ｏ＝６５：３５：１０（下層）
で展開し、濃硫酸噴霧後、１２０℃で加熱して発色させ
た。植物体根茎から抽出したチクセツサポニン群は、赤
−青紫の発色を示し、ＵＶ下で蛍光を発した。
【００４７】HPLC分析では、２０以上のピークが検出さ
れた。個々のピークをHPLCで分取し、ＴＬＣ分析を行っ
たところ、赤紫の発色とＵＶ下での蛍光を示すのは、２
ピークだけだった。以下、この２ピークの物質（高極性
の方をTSB1、低極性の方をTSB2とした。）について、更
に分取を重ね、２物質をそれぞれ単離精製した（図
１）。
れた。個々のピークをHPLCで分取し、ＴＬＣ分析を行っ
たところ、赤紫の発色とＵＶ下での蛍光を示すのは、２
ピークだけだった。以下、この２ピークの物質（高極性
の方をTSB1、低極性の方をTSB2とした。）について、更
に分取を重ね、２物質をそれぞれ単離精製した（図
１）。
【００４８】TSB2の 1Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、ol
eanoric acidの基本骨格の１２、１８位Ｈの特徴的ピー
クと、糖の５つのピークが見られ、積分値からoleanori
c acidの一配糖体であることが解った。更に、oleanori
c acidから合成されたoleanoric acid 3-O-glucosideの
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルと非常に類似しており、３位Ｈ
のピークが一致していること、glucoside の６´位Ｈの
特徴的ピークが見られないことなどから、３位のＯＨ基
にglucronic acidが配糖していることが解った。このol
eanoric acid 3-O-glucronide は砂糖大根(Suger beet)
にその存在が知られているが、チクセツニンジンから
は、このようなサポニンは報告されていない。
eanoric acidの基本骨格の１２、１８位Ｈの特徴的ピー
クと、糖の５つのピークが見られ、積分値からoleanori
c acidの一配糖体であることが解った。更に、oleanori
c acidから合成されたoleanoric acid 3-O-glucosideの
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルと非常に類似しており、３位Ｈ
のピークが一致していること、glucoside の６´位Ｈの
特徴的ピークが見られないことなどから、３位のＯＨ基
にglucronic acidが配糖していることが解った。このol
eanoric acid 3-O-glucronide は砂糖大根(Suger beet)
にその存在が知られているが、チクセツニンジンから
は、このようなサポニンは報告されていない。
【００４９】TSB1は、植物体に微量検出されるチクセツ
サポニンIVa のHPLCの溶出時間とTLC の移動度が一致
し、同一物質であることが示唆された。更に、TSB1の二
次元 1Ｈ−ＮＭＲ分析（２Ｄ− 1Ｈ−COSY and NOESY）
により、チクセツサポニンIVaとの構造の一致が確認さ
れた。
サポニンIVa のHPLCの溶出時間とTLC の移動度が一致
し、同一物質であることが示唆された。更に、TSB1の二
次元 1Ｈ−ＮＭＲ分析（２Ｄ− 1Ｈ−COSY and NOESY）
により、チクセツサポニンIVaとの構造の一致が確認さ
れた。
【００５０】
【化４】
【００５１】
【化５】
【図１】図１は、球状細胞塊の含有成分のＨＰＬＣ分析
チャートを示す。
チャートを示す。
【図２】図２は、oleanoric acidの 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（重ピリジン）を示す。
トル（重ピリジン）を示す。
【図３】図３は、oleanoric acid 3-O-glucosideの 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（重ピリジン）を示す。
−ＮＭＲスペクトル（重ピリジン）を示す。
【図４】図４は、ＴＳＢ１の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
（重ピリジン）を示す。
（重ピリジン）を示す。
【図５】図５は、ＴＳＢ２の 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
（重ピリジン）を示す。
（重ピリジン）を示す。
【図６】図６は、ＴＳＢ１の二次元 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（ＣＯＳＹ）を示す。
トル（ＣＯＳＹ）を示す。
【図７】図７は、ＴＳＢ１の二次元 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（ＮＯＥＳＹ）を示す。
トル（ＮＯＥＳＹ）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｊ 63/00 7433−4Ｃ Ｃ１２Ｎ 5/04 Ｃ１２Ｐ 19/56 7432−4Ｂ 33/00 9452−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 19/56 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 33/00 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (9)
- 【請求項１】 薬用人参植物体の組織を、カルス誘導用
培地で継代培養後、得られたカルスを再分化誘導用培地
で継代培養をし、該継代培養時に再分化してくる細胞塊
を除去することによって得られる未分化細胞塊を、培養
して成分抽出を行うことを特徴、とするサポニン類の製
造方法。 - 【請求項２】 薬用人参植物体から誘導されるカルス
を、カルス誘導用培地で継代培養し、軟質化したカルス
を再分化誘導用培地で培養し、再分化した細胞塊を除去
することを特徴とする未分化細胞塊の製造方法。 - 【請求項３】 再分化誘導用培地で器官を形成しない、
薬用人参植物体から誘導される未分化細胞塊。 - 【請求項４】 カルス誘導用培地のオーキシン及びサイ
トカイニン類の濃度が、それぞれ１０-7〜１０-5Ｍであ
り、且つ、オーキシン濃度が、サイトカイニン類の濃度
以上であることを特徴とする、請求項１に記載のサポニ
ン類の製造方法。 - 【請求項５】 カルス誘導用培地での誘導カルスの継代
培養期間が、継代周期４〜６週間毎で、３〜１０世代で
あることを特徴とする、請求項１又は４に記載のサポニ
ン類の製造方法。 - 【請求項６】 再分化誘導用培地のオーキシンの濃度
が、１０-7〜１０-6Ｍであり、サイトカイニン類の濃度
が、オーキシンの濃度の１／１０〜１／１００であるこ
とを特徴とする、請求項１に記載のサポニン類の製造方
法。 - 【請求項７】 再分化誘導用培地に、炭素源、酢酸メバ
ロン酸経路上の各物質、植物ステロール生合成阻害剤、
サポニン生産を向上させる細菌等の微生物、又はその抽
出成分を単独又は組み合わせて添加することを特徴とす
る請求項１に記載のサポニン類の製造方法。 - 【請求項８】 薬用人参植物体がトチバニンジンである
請求項１に記載のサポニン類の製造方法。 - 【請求項９】 請求項８の製造方法により得られる下記
一般式（１）、（２）及び（３）のサポニン類。 【化１】 〔式中、Ｒ1 は、Ｈ又は１−ヘキソースである。〕 【化２】 〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 は、Ｈ又は１−ヘキソースである
が、ともに１−ヘキソースではない。〕 【化３】 〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 は、前記に同じ。〕
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6251509A JPH0892114A (ja) | 1994-09-19 | 1994-09-19 | 薬用人参未分化培養細胞から得られるサポニン類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6251509A JPH0892114A (ja) | 1994-09-19 | 1994-09-19 | 薬用人参未分化培養細胞から得られるサポニン類の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0892114A true JPH0892114A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=17223875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6251509A Pending JPH0892114A (ja) | 1994-09-19 | 1994-09-19 | 薬用人参未分化培養細胞から得られるサポニン類の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0892114A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7645465B2 (en) * | 2002-04-08 | 2010-01-12 | Kuan Industrial Co., Ltd. | Method of preparing a pharmaceutical composition comprising fermented ginseng |
| JP2017043575A (ja) * | 2015-08-28 | 2017-03-02 | 北海道三井化学株式会社 | 皮膚外用剤 |
-
1994
- 1994-09-19 JP JP6251509A patent/JPH0892114A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7645465B2 (en) * | 2002-04-08 | 2010-01-12 | Kuan Industrial Co., Ltd. | Method of preparing a pharmaceutical composition comprising fermented ginseng |
| JP2017043575A (ja) * | 2015-08-28 | 2017-03-02 | 北海道三井化学株式会社 | 皮膚外用剤 |
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