JPS63267282A - リグナンの回収法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は植物の組織培養法を利用して、大量のリグナン
を製造する方法に関し、とくに培養物からのリグナンの
回収方法に関する。

従来の技術 多くの植物が、リグナンと呼ばれる化合物を生産するこ
とは報告されている。例えば、コール（Ｊ、　Ｒ，００
１＠）らは、４６科、８７属、１４６種のリグナン生産
植物を報告している〔ケミストリイ・オブ・リグナン（
Ｃｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ　ｏｆ　ｌｉｇｎａｎｓ）第２章、
１９７８年〕。

また、すでに２００種以上のリグナンが分離同定されて
おり、種々の生理活性を有するリグナンが存在すること
が知られている〔ファイトケミストリイ（Ｐｈｙｔｏｃ
ｈｅｍｉｇｔｒｙ）　２３．１２０７−１２２０（１９
８４））。

リクナントハ、ｎ　−フェニルプロノｑンがｎ−プロピ
ル側鎖のβ位で２分子結合したβ、ｒ−ジベンジルブタ
ン骨格をもつ物質の総称であり、例えば、ポドフィロト
キシン、ジャスティシリンＡルプトスタキオールアセテ
ートなト種々のものがあげられる。第１表に、リグナン
を生産する植物、リグナンおよびリグナンの生理活性を
例示する。

第　　１　　表 リグナン生産能を有する野生植物の細胞壁からリグナン
を抽出することは公知であるが、方法が複雑で、生産収
率も低い。

他方において、植物の組織培養法すなわち植物から無菌
的に組織片または細胞集団を取り出して、ガラス器内で
培養する方法（ｉｎ　ｖｉｔｒ。

ａｕｌｔｕｒ・）は、均一な細胞集団を短時間に大量に
得ることができるので、例えばイチビ、ユリ、ベゴニア
、キャベツ、ブロッコリ、サイコ、ツバ争・ウリ等の各
種の植物の大量栽培に用いられている。

組織培養には各種の方法があり、振とう培養や照明下で
の培養も知られている。ムラシゲ・スクーグ氏培地、リ
ンスマイヤー・スクーグ氏培地、ホワイト氏培地、クノ
ツゾ氏液、ヘラ−培地、ニラチェ培地などの組織培養用
の合成液体培地が広く用いられている。これらの培地は
、所望くよシ、カイネチン、ゼアチン、ベンジルアデニ
ンなどのサイトカイニンａ％２１４−ジクロロフェノキ
シ酢酸、ナフタレン酢酸、インゾール酢酸などのオーキ
シン類、必要に応じてジベレリン、アブシリン酸などの
生長ホルモン類などを程よく含有する。

しかし、組織培養法を用いて、大量のリグナンを製造す
ることは知られていない。

本発明は、リグナン生産能を有する植物を特定の培地を
用いて組織培養すると、細胞壁中のリグナンが培養液中
に大量に蓄積されるという知見に基いている。

発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、植物の組織培養法により、大量のリグ
ナンを容易に製造する方法を提供することにある。

問題点を解決するための手段 本発明は、リグナン生産能を有する植物の組織を培地く
培養し、培養液中にリグナンを蓄積させ、培養物からリ
グナンを採取する工程からなる、リグナンの製造方法を
提供する。

本発明を次に詳しく説明する。

本発明で用いる植物としては、リグナンを生産する植物
であれば、いずれの植物でも用いることができる。具体
的には、トガクシショクマ属、キツネノマゴ属、トウヒ
属、トマト属、マツブサ属、タラノキ属、ハエドクソウ
属に属する植物が用いられる。これらの植物から、組織
、器官、カルスなどを取得し、組織培養することＫよシ
、リグナンを製造することができる。

組織培養法は、常法、例えば振とう培養法などによるこ
とができる。培地は、ムラシゲ・スクーグ氏培地、リン
スマイヤー・スクーグ氏培地、ホワイト氏培地、クツツ
ブ氏培地、ヘラ−培地、ニラチェ培地などの組織培養用
の合成液体培地〔「植物組織培養」行内王室、石原愛也
、古谷力、朝倉書店刊、７０−８１頁（１９７２年）〕
が用いられる。実用的な培地の例は、下記の組成を有す
るＰＭ培地やムラシゲ・スクーグ氏培地（以下、ＭＳ培
地という）が好適に用いられる。

ｐＭ培地組成 ＫＮＯ３１９０ｍＱ／ｌ　、　　ＣａＣ１ｚ・２Ｈ２０
４，４１１。

１１Ｊｇｓｏ　、・７Ｈ２０３７■／ｌ、　　ＫＨ２Ｐ
Ｏ４１，７ｒｒｕ；ｊ／ｌ。

ＦｅＳＯ４−７Ｈ２０２，７８ｍＭ！、　　Ｈ，Ｂｏ、
　　０．６２１Ａ。

ＭｎＳＯ４’４Ｈ２００，２２３ＷＩＶｌ、　　Ｚｔｉ
ＳＯ４’７Ｈ２００，０８６Ｔｎｆ’ｌ、　　ＫＩ　　
００ｏｏｓ３ｒＩｖｌ、　Ｎａ２ＭｏＯ，−２Ｈ２００
，００２５ｗｆ’ｌ　、　　ＣｕＳＯ４・５Ｈ２００，
００２５ｍ９／ｌ　。

Ｇｏに１２・６Ｈ２００，０００２５ｍ９／ｌ　、サイ
アミン塩酸塩　０．００４９／ｌｌ　（／　シト−／’
　　ＩＴＮＶｌ。

ピリｒキシンーｍ酸０．０５１１　、　　ニコチン酸　
０．００５　Ｉｌｌ　、　グリシ７　０．００２１１０
本発明の方法に好適な培地は、炭素源として糖類、例え
ばシュクロースなどを０．５−９％を含有するものであ
る。培地の濃度は、ＭＳ培地の場合は０．１−３倍濃度
、ＰＬＲ培地の場合は０．５−４００倍濃となるように
する。また、所望罠よシ、植物ホルモンを添加すること
もで話る。

る。さらく、微量金属イオン、アミノ酸、ビタミンなど
を含有することもできる。

培養は通常、温度２０−３０℃で行なう。植物の種類や
用いられる組織によって培養時間は異なるが、例えば１
５−９０日間である。

培養液中に蓄積されたリグナンの分離は、培養物を除い
た培養液からエーテル抽出、液体クロマトグラフィーな
ど公知の手法を単独または組合わせて用いることができ
る。

実施例１ ハエドクソク種子を１０００　ｐｐｍ　’）　ヘＬ／　
ＩＪ　ン（１６時間処理）で休眠打破した後、７０％エ
タノール（１分間処理）で無菌化し、発芽させた無菌幼
植物体の頂芽を、ＭＳ培地の１７濃度（し。

・　２ ＭＳ　　）、３ｅｓシ’Ｅ！糖、０．ｌｐｐｍす７りＬ
’／酢酸（ＮＡＡ）、１０ｐｐｍベンジルアデニン（Ｂ
Ａ）および０．８チ寒天（ｐＨ６，２）の培地で培養し
、腋芽を増殖させた。同培地で増殖した一部を継代し、
２０代経過した腋芽（０，６５，！Ｉ７湿重量）を、１
／２ＭＳ　（ただし、ＮＨ４Ｎｏ、　　およびＥＤＴＡ
は含まない）、３％ショ糖、１ｐｐｍＮ人人（ｐＨ６，
２）の液体培地（１ｏｏｍｊ）で３２日間、２５℃、２
５００Ｉｕｃ　ｓ　１２０　ｒｐｍ振とり数で培養した
。培養終了後、培養物を除いた培養液から、３回エーテ
ル抽出した。その後、５　Ｚ　ＮａＨＣＯｓ　　を添加
し、酸性分画を除去した後、３回水洗した。洗浄後、エ
ーテルを蒸発させ、リグナン分画を得た。これを０．５
１アセトニトリルに溶かし、高速液体クロマトグラフィ
によシ各種リグナンを定量した。結果を第２表に示す。

実施例２ 実施例１に記載した継代腋芽の１５代目上、ホルモンを
含まない１／ＭＳ・３チシヨ糖・寒天０．８　％　（ｐ
Ｈ６，２）で培養し、地上部および根部を生育させた後
、その葉、茎および根部の切片を１５　ＭＳ、　ｏ、ｓ
％シヨ糖、０．１　ｐｐｍ　ＮＡＡおよび１　ｐｐｍ　
ＢＡ　（ｐＨ６，２＞の液体培地で培養し、その切り口
からカルスを得た。これらのカルスの継代を、同じ培地
で５代行なった後のカルス（０，０７８，９）を、同じ
液体培地で実施例１と同じ培養方法によシ、２８日間培
養した。培養終了後、実施例１と同様に抽出した。得ら
れたりグナンの定量結果を第２表に示す。表示した結果
は根由来のカルスであるが、茎および葉由来のカルスも
ほぼ同じ結果を得た。

実施例３ 実施例１に記載した継代腋芽の１２代目上、実施例２と
同様にホルモンを含まない培地で培養し、得られた根部
を適轟に切断して、１／２Ｍ５１３チショ糖、０．２　
ｐｐｍＮＡＡおよび０．１　ｐｐｍ　ＢＡ（ｐＨ６，２
）で、実施例１と同じ培養方法で根の器官培養を３２日
間行なった。培養終了後、実施例１と同様に抽出し、リ
グナンを定量した（第２表）。

実施例４ 実施例ＩＫ記載した２０代０の継代腋芽（２，６１湿重
量）を、４ノジヤーを用いて、１／２Ｍ５（ただし、Ｎ
Ｈ４Ｎｏ、は含まない）および３チシヨ糖培地で９８日
間培養した。培養終了後、実施例１と同様にリグナンを
定量し、その結果を第２表に示す。

第　　２　　表 参考例 実施例１記載の方法において、培地の濃度とショ糖量と
を変更して得られたリグナンの量（μｍ１／Ｉｌｌ　）
は次表のとおりである。

第　　３　　表 発明の効果 本発明により、リグナンを生産する植物を組織培養する
ことによシ、リグナンを培養液中に蓄積させ、収率よく
容易にリグナンを得ることができる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）リグナン生産能を有する植物の組織を培地に培養
   し、培養液中にリグナンを蓄積させ、培養物からリグナ
   ンを採取する工程からなるリグナンの回収法。
2. （２）培地が糖０．５−９％を有効成分として含有する
   特許請求の範囲第１項記載の方法。
3. （３）植物がハエドクソウ属である特許請求の範囲第１
   項記載の方法。