JPH0614873B2 - モノクローナル抗体 - Google Patents

モノクローナル抗体

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JPH0614873B2
JPH0614873B2 JP57082306A JP8230682A JPH0614873B2 JP H0614873 B2 JPH0614873 B2 JP H0614873B2 JP 57082306 A JP57082306 A JP 57082306A JP 8230682 A JP8230682 A JP 8230682A JP H0614873 B2 JPH0614873 B2 JP H0614873B2
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oncofetal
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト胎盤由来のヒト腫瘍胎児性フェリチン抗
原のエピトープと結合するが成人の脾又は肝のフェリチ
ン抗原のエピトープとは結合しないモノクローナル抗体
に係る。
本発明は更に、ヒト乳癌及び／又はホジキン氏病を発見
するために、ヒト腫瘍胎児性フェリチンが存在しそうな
体組織及び／又はリンパ球を患者から取出して選択的に
定量するアッセイに係る。
本発明の特定具体例によれば、ヒト腫瘍胎児性フェリチ
ンの有無が細胞障害アッセイによって判定される。
本発明の別の特定具体例によれば、ヒト腫瘍胎児性フェ
リチンの有無がラジオイムノアッセイによって判定され
る。
本発明のアッセイは、特定のモノクローナル抗体の使用
に基く。該抗体は、腫瘍胎児性フェリチンの有無を判定
するのに適したアッセイであればいかなるタイプのアッ
セイにも使用することが可能であり、フェリチンの存在
は第１期もしくは第２期の乳癌又はホジキン氏病の指標
とされる。
本発明の好ましい具体例によれば、患者の血流中のリン
パ球の表面上の腫瘍胎児性フェリチンの存在が判定さ
れ、フェリチンの存在が乳癌又はホジキン氏病の指標と
される。
フェリチンは、主として組織に貯蔵された鉄タンパク質
であり、血漿中で少量(65−150ng/ml)が検出され得る。
正常組織のフェリチンを等電点電気泳動で分析すると、
かなりの異質性が見られる。MarcusとZimberg(Arch.Bio
chem.Biophysic.162,493,1974)は乳腫瘍組織から単離さ
れたフェリチンが成人肝フェリチンには見られない酸性
イソフェリチンを含有することを発表し、DrysdaleとSi
nger(Cancer Res.44,3352,1974)はHela腫瘍細胞と胎盤
細胞とに酸性イソフェリチンが存在することを発表し
た。彼らは、このようなイソフェリチンを“腫瘍胎児
性”イソフェリチンと指称し得ると考えた。
MarcusとZimberg(Clin.Res.23,A447,1975)及びJacobsら
(Br.J.Cancer 34,286,1976)は、乳癌患者では血清中の
フェリチン濃度が増すことを報告し、フェリチンの定量
が乳癌発見の指標となり得ると考えた。しかしながら、
異種の抗フェリチン血清は、成人フェリチンの抗原決定
基及び腫瘍胎児性フェリチンの抗原決定基の双方と交叉
反応するので、これらの２種のイソフェリチンを判別す
ることができない。従って、フェリチンレベルが正常範
囲より高い（＞200ng/ml）患者の場合にのみ有意な結果
が得られる。最近の研究では、Morozら(Cancer Immuno
l.and Immunotherapy3,101,1977)は、乳癌患者において
表面にフェリチンを有するリンパ球のサブ集団を同定し
た。このフェリチンは腫瘍胎児性フェリチンであり、こ
れらのフェリチンが陽性のリンパ球は乳癌の初期（第１
期〜第２期）に現れる。このようなリンパ球は、良性の
乳疾患患者又は健康人では検出されない（Gillerら，Su
rgery Gyn.Obst.149,655,1979）。
リンパ球に付着したフェリチン又は組織液中に存在する
フェリチンの同定に基いて、乳癌が早期に発見される。
近年、マウスミエローマ細胞と超免疫マウス脾細胞との
融合方法が開発された（Kohler及びMilstein,Nature,25
6：495：1975）。形成されたハイブリドーマは、１個の
抗原決定基にのみ反応する１個の抗体を産生し得る。こ
のようなハイブリドーマをクローニングすると、１個の
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマのクロー
ンが得られる。
本発明は、腫瘍胎児性フェリチンのみが有しており成人
フェリチンが有していない１個の抗原決定基に反応する
モノクローナル抗体の産生に関する。本発明のモノクロ
ーナル抗体を用いた成人の（血漿又はリンパ球での）イ
ソフェリチンの同定は、悪性疾患を発見するためのより
特異的でより感受性の高い手段となり得る。その結果、
血清中の成人フェリチンが増加する良性疾患が悪性疾患
と診断されるエラーが少なくなる。
本発明は、夫々がヒト胎盤フェリチンの別個の抗原決定
基に特異的な２種のマウスモノクローナル抗体の製造に
係る。
１）ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトープと結合
するＣＭ−ＯＦ−Ｈ９（フランスのCollection Nationa
le de Cultures de Microorganiset of the Institut P
asteurにＩ−256として寄託）。
２）ヒト腫瘍胎児性フェリチン及び成人脾フェリチンに
対する相互決定基に反応するＣＭ−ＯＦ−３。
本発明は更に、乳癌を早期発見するための感受性アッセ
イに係る。このアッセイは更に、ホジキン氏病をも発見
し得る。乳癌の早期発見又はホジキン氏病の発見のため
に、血清中及び他の体液中に存在するか又はリンパ球に
付着した“腫瘍胎児性”フェリチンの同定に基くテスト
が行なわれる。
モノクローナル抗体ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９は腫瘍胎児性フェ
リチンにのみ特異性を有しいるため、癌による血清フェ
リチンの増加と正常フェリチン又は良性疾患（例えば地
中海貧血）によるフェリチンの増加とを判別し得る。Ｃ
Ｍ−ＯＦ−３は、正常フェリチン及び良性疾患によるフ
ェリチンの増加を検出し得る。両方の抗体を用いたテス
トによって悪性疾患と悪性でない疾患とを判別し得る。
実施例 腫瘍胎児性フェリチンの調製 Beawishらの方法(J.Clin.Path.24,581,1971)を修正して
ヒト胎盤からフェリチンを取出した。胎盤組織(500gr)
を切片し、全容2000mlになるまで水を添加した。組織懸
濁液を均質化し、75℃で20分間加熱した。冷却し10,000
rpmで15分間遠心分離して得た上清を酢酸で処理してpH
4.6にした。10,000rpmで15分間遠心分離して沈殿タンパ
ク質を除去し、透明な上清を希ＮａＯＨで中性pHに調整
した。透明な褐色上清を100,000ｇで240分間超遠心し、
懸濁フェリチンを管底部に小粒として収集した。沈殿物
を0.9％食塩水溶液に再溶解し、更にSephadex G 200カ
ラムに通して精製した。
このカラムより得たフェリチン画分を、pH7.5、濃度勾
配0.02〜0.5Ｍのトリス−ＨＣｌバッファを用いＤＥＡ
Ｅセルロースアニオン交換樹脂に通した。３個のタンパ
クピークが生じた。最も酸性のピークｐＩ＝4.8(No. II
I)を収集して分析した。等電点電気泳動と、抗フェリチ
ン血清及び抗ヒト全血清に対する免疫電気泳動とによっ
て純度を測定した。得られたフェリチンを下記の如くマ
ウスに免疫接種した。
ハイブリドーマの調製 ミエローマ細胞： 細胞融合用のミエローマ細胞ＰＢ／ＮＳ１／１−Ａｇ４
−１を20％胎児性仔牛血清（ＦＣＳ）を含むＲＰＭＩ−
1640中で増殖させた。
マウス： Balb/cメス（テスト開始時に５−６週令）。
免疫プロトコル： 完全フロイントアジュバンド中の酸性フェリチン50μｇ
を週１回の割合で３回接種し最後にフェリチン10μｇを
注射して３日後に細胞融合を行なった。少くとも１カ月
経過後に超免疫マウスに最終的なブースターを行なっ
た。
細胞調製 脾細胞： ａ．マウスの脾をＲＰＭＩ−Ｏで取出した。
ｂ．ペトリ皿でＲＰＭＩ−Ｏで２回洗った。
ｃ．18ゲージの針を用いＲＰＭＩ−Ｏ中で切開した。
ｄ．細胞懸濁液を試験管に移し、多量の組織を沈殿させ
た。
ｅ．セル懸濁液を新しい管に移し、800rpm(160xg)で５
分間回転させた。
赤血球をpH7.5の0.83％ＮＨ４Ｃｌで溶解させた。
ｆ．細胞をＲＰＭＩ−Ｏで３回洗浄し、ＲＰＭＩ−Ｏに
再び懸濁させた。
ｇ．トリパンブルーで細胞をカウントした。
ミエローマ細胞： ａ．培養フラスコから細胞を50mlのFalcon／Corning管
にピペットで静かに移した。
ｂ．900rpm(200ｇ）で５分間回転させた。
ｃ．ＲＰＭＩ−Ｏで１回洗浄し、ＲＰＭＩ−Ｏに再び懸
濁させトリパンブルーでカウントした。
脾細胞−ミエローマ細胞の融合： ａ．50ml円錐形ファルコン／コーニングを使い捨て遠心
管で脾細胞とミエローマ細胞とを10：１で融合した。
ｂ．900rpm(200xg)で５分間回転し細胞をペレット化し
た。
ｃ．培地をできるだけ完全に吸引した。
ｄ．以後の溶液及び培地は全て室温で使用された。
細胞ペレットを入れた管を37℃の浴に浸漬し、穏やかに
攪拌しながら0.2mlの33％ＰＥＧ1500を１分間で添加
し、200ｇで５分間遠心した。細胞を再び懸濁させ、１
分間穏やかに攪拌し、次に穏やかに攪拌しながら５mlの
ＲＰＭＩ−Ｏを添加し、20％胎児性仔牛血清（ＦＣＳ）
を含む５mlのＲＰＭＩ−Ｏを添加した。このときに、ハ
イブリッド混合物は僅かに再懸濁し多数の小擬集塊を含
む細胞懸濁液の状態であった。
ｅ．混合物を200ｇで５分間回転してペレット化した。
ｆ．濃度３×10６／ccのＲＰＭＩ−ＨＹ−ＨＡＴＤ（37
℃）に細胞を入れ細胞ペレットに培地をかけながら再び
懸濁させた。
ｇ．５mlのピペットから細胞懸濁液を２滴添加するか又
は（約65マイクロリットルの）カットオフチップを用い
たマルチピペッタによって、96個のウェルプレートの平
底に100-120ＲＰＭＩ−ＨＹ−ＨＡＴＤ（約２×10５細
胞）を含むハイブリッドを塗抹した。
ｈ．１×10６×mlでＮＳ−１細胞＋ＲＰＭＩ−ＨＹ−Ｈ
ＡＴＤを含む対照ウェルを用意した。
ｉ．プレートを７日間培養した。
ｊ．８日間及び以後週に２回の割合で培地を慎重に吸引
して除去し、80−100マイクロリットルのＲＰＭＩ−Ｈ
Ｙ−ＨＴ培地を補給した。
ｋ．細胞融合(hybridization)の３及び４週後に陽性の
ウェルをスクリーニングした。
培地及び溶液： １．ＲＰＭＩ−Ｏ（ＦＣＳを含まない） ２．ＲＰＭＩ 1640−ＨＹ 500ＭＬの無菌蒸留水 55mlの１０倍ＲＰＭＩ−1640 ６mlの1.0Ｎの水酸化ナトリウム 14mlの7.5％重炭酸ナトリウム ３．ＲＰＭＩ−ＨＹ−ＨＡＴＤ：０日目→７日目 培地10ml当り 95mlのＲＰＭＩ−1640＋20％ＦＣＳ 1.0mlのピルビン酸塩（100倍） 2.0mlの５０倍ＨＡＴ 2.0mlの50倍デオキシシチジン ４．ＲＰＭＩ−ＨＹ−ＨＴ：８日目→14日目 培地100ml当り 97mlのＲＰＭＩ−1640＋20％ＦＣＳ 2.0mlの50倍ＨＴ 1.0mlのピルビン酸塩（100倍） 15日目以後のハイブリッドに対しては、ＲＰＭＩ−1640
＋20％ＦＣＳとピルビン酸塩とを使用するか、又はＲＰ
ＭＩ−ＨＹ−ＨＴ中に維持する。
５．ＰＥＧ33及び25重量／容量％ 無臭白色でなければならない。100mlオートクレーブに
対し適量（重量グラム）をガラスびんに入れ15 1bsにし
て10〜15分間維持する。びんが手で持てる程度（約50
℃）に冷えてから、ＲＰＭＩ−1640−Ｏを添加して100m
lにし、振って混合し、ＲＴで貯蔵する。
６．ＨＡＴＤ−試薬の最終濃度 Ｈ＝ヒポキサンチン 10-4Ｍ Ａ＝アミノプテリン 10-6Ｍ Ｔ＝チミジン ２×10-5Ｍ Ｄ＝デオキシシチジン ２×10-6Ｍ ＨＴ原液の100倍溶液−100cc チミジン（分子量242.33） 0.04846ｇ ヒポキサンチン（分子量 136.1）0.1361ｇ 100mlまでddＨ２Ｏを添加し60−70℃に加熱して溶解す
る。ddＨ２Ｏを添加して最終量を再調整する。50倍に希
釈しフィルタ（0.2μ）殺菌する。２mlアリコートを作
成し−20℃で貯蔵する。
Ａ原液の1000倍溶液−100cc アミノプテリン（分子量 440.4）0.44ｇ ddＨ２Ｏを添加して50mlにし、アミノプテリンが溶解す
るまで0.1ＮのＮａＯＨを滴下する。
ddＨ２Ｏを添加して最終量を100mlにする。調製量100ml
をフィルタ（0.2μ）殺菌し、−20℃で貯蔵する。
Ｄ原液の100倍溶液−100cc デオキシシチジン（分子量 227.2） 0.00454ｇ ddＨ２Ｏに溶解し、100ccに調製し原液の50倍に希釈
し、フィルタ（0.2μ）殺菌する。２mlし、−20℃で貯
蔵する。
ＨＡＴの50倍液−200ml 100倍ＨＴ100mlと100倍Ａ10ml＋ddＨ２Ｏ90mlとを合せ
て50倍ＨＡＴを調製し、フィルタ（0.2μ）殺菌し、２m
lアリコートを作成し−20℃で冷凍する。
血球凝集反応テストによってモノクローナル抗体の特異
性のスクリーニングと定量とを実施した。
腫瘍胎児性フェリチン及び成人脾フェリチンをＣｒＣｌ
２よってＯｘ赤血球細胞（ＯｘＲＢＣ）に結合した。
（１：10から初めて）ハイブリードーマ培地の希釈度を
増していき、該培地の上清50μを１０μの成人又は
胎児性フェリチンＯｘＲＢＣと混合し、血球凝集反応を
定量した。
少くとも１：1000の血液凝集素価を与えるクローンの上
清を選択した。
選択クローンをＣＭ−ＯＦ−３と指称する。
クローンＣＭ−ＯＦ−３は腫瘍胎児性フェリチンに特異
的であり成人フェリチン及び腫瘍胎児性フェリチンの双
方と交叉反応する。
得られたモノクローナル抗体ＣＭ−ＯＦ−３を使用し、
腫瘍胎児性フェリチンと成人フェリチンとの交叉反応決
定基を阻害して、胎児性決定基のみに反応する別のモノ
クローナル抗体ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９を生成した。
下記の免疫接種方法を使用した。
Ａ．免疫接種及び融合プロトコル： ヒト胎盤から単離した腫瘍胎児性フェリチン即ちＰＩ
4.8のタンパク質を下記の割合でモノクローナル抗体Ｃ
Ｍ−ＯＦ−３と反応させた。腫瘍胎児性フェリチン（Ｐ
ＢＳ中90μｇ）を抗フェリチンモノクローナル抗体ＣＭ
−ＯＦ−３（10mgr／ml）を含むＢＡＬＢ／ｃマウスの
腹水液と混合した。
混合物を37℃で30分間インキュベートし、次いで４℃で
１晩インキュベートした。混合物を10000ｇ遠心し、形
成された沈殿物を廃棄し、上清を用いて免疫接種を実施
した。前記上清を完全フロイントアジュバントと混合
し、週１回の皮内注射を３回実施して各ＢＡＬＢ／ｃマ
ウスに免疫を与えた。ブースターとして、前記の１／５
の用量を腹腔内に注射した。
ブースターから３日後、マウスの脾を無菌的に取出し
て、前記のハイブリダイゼーション方法に従い10８個の
脾細胞を10７個のＰ３−ＮＳＩ／１−Ａｇ４ミエローマ
細胞と共にインキュベートして融合を生起し、以後も前
記方法に準じて処理して陽性のクローンを同定した。得
られたクローンをＣＭ−ＯＦ−Ｈ９と指称する。
Ｂ．得られたモノクローナル抗体の定性 モノクローナル抗体ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９は下記の特性を有
する。
ＩｇＧ１クラスに属する。フェリチンと共に沈殿物を形
成しない。ラビット補体と結合する。得られた腹水液中
の抗体含量は約７mg／mlであった。１mlの腹水液は約２
mgの腫瘍胎児性フェリチンと結合するが、成人の脾又は
肝のフェリチンとは結合しない。
血清学的テスト方法の原理 リンパ球付着フェリチン（ＬＢＦ）の定量： リンパ球付着フェリチン(lynphocyte bound ferritin)
は、ヒト患者の乳癌の存在の指標となる。
フェリチンは下記の如く定量される。
ａ．リンパ球を末梢血から単離する。
ｂ．ヒト胎盤由来のフェリチンに特異的なモノクローナ
ル抗体を使用し、慣用のアッセイによってリンパ球付着
フェリチンを定量する。
テストを下記の如く実施するのが好ましい。
ａ．Ficoll-Hypaque濃度勾配遠心法によって末梢血から
リンパ球を単離する。
ｂ．慣用のアッセイ、例えば細胞障害テスト又はラジオ
イムノアッセイによってＬＢＦの有無を検査する。
血清又は他の体液を用いて前記の如きアッセイを実施す
ることも可能である。
乳癌及びホジキン氏病の早期発見用テスト 細胞の収集と調製： １．ヘパリンを入れた15mlの採血管。
２．25mlの円錐形遠心管。
３．パスツールピペット及びバルブ。
４．ｐＨ7.2のＰＢＳ（燐酸ナトリウム緩衝食塩水）。
５．Ficoll-Hypaque濃溶液1.077gm／ml。
細胞の収集方法： １．ヘパリンを入れた採血管に血液15mlを採取しｐＨ7.
2のＰＢＳで１：２に希釈する。
２．細胞懸濁液の下層に10mlのFicoll-Hypaque濃溶液を
入れる。
３．室温で300gで30分間遠心する。
４．Ficoll-Hypaque：培地の界面からパスツールピペッ
トで単核細胞を収集し、新しい15mlの管に移す。
５．15mlのウォッシュ培地に懸濁させてセルの洗浄を３
回繰返し、４℃で300gの遠心を10分間行なう。
６．ウォッシュ培地に再び懸濁させて細胞数をカウント
する。
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ） 付加的所要材料 １．100×15mmのMinsorp試験管 ２．ＲＰＭＩ 1640 ３．ナトリウムアジド0.025％含有のｐＨ7.2のＰＢＳ中
のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）５％ ４．正常ラビット血清（ＮＲＳ） ５．ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９モノクローナル抗体 ６．白色腹水液 ７．125Ｉの抗マウスＩｇＧ ラジオイムノアッセイ−１ Ficoll-Hypaque濃度勾配遠心によって末梢血単核細胞を
単離する。
３組のテストを実施する。
１．６個の試験管の夫々に２×10６〜３×10６個の細胞
を分け入れ、300ｇで10分間遠心して細胞をペレット化
する。
２．ＰＢＳで１：10に希釈したＮＲＳ20μを添加し、
４℃で60分間インキュベートする。
３．３個の試験管の夫々に（５％ＢＳＡで10−５に希釈
した）腹水液30μを添加する。
Ａ＝腫瘍胎児性フェリチンと反応しない非特異的モノク
ローナル抗体ＩｇＧ１を含む対照腹水液 Ｂ＝ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９モノクローナル抗体 十分に混合して室温で２時間インキュベートする。
４．10mlのＲＰＭＩ−1640と共に４℃で300gの遠心を10
分間行なって細胞を２回洗浄する。
５．0.1μCiの125Ｉラビット抗マウスＩｇＧ（125Ｉ−
ラビットＩｇＧ １μCi／μｇ）を添加し、４℃で60分
間インキュベートし、冷たいＲＰＭＩ−1640で４と同様
に２回洗浄し、放射能をカウントする。
（ＡのｃｐｍＡ）−（ＢのｃｐｍＢ）＜500のとき、陽
性（＋）と判定する。
ラジオイムノアッセイ−２ ＲＩＡ−１の段階１の処理後に下記の方法でテストす
る。Utsumi及びKarush(Biochem.1965,4,1766)の方法に
従ってＣＭ−ＯＦ−Ｈ９をペプシン消化してＣＭ−ＯＦ
−Ｈ９のＦ′（ａｂ）２を得、同様に非特異的ＩｇＧ１
（ＲＩＡ−１の対照）のＦ（ａｂ）２を得る。これらの
Ｆ（ａｂ）２断片を下記の如く使用する。
試験管Ａ＝0.025％のナトリウムアジドを含むpH7.2のＰ
ＢＳ中の５％ＢＳＡ中の対照Ｆ（ａｂ）２ 試験管Ｂ＝0.025％のナトリウムアジドを含むpH7.2のＰ
ＢＳ中の５％ＢＳＡ中のＣＭ−ＯＦ−Ｈ９のＦ（ａｂ）
２ 室温で60分間インキュベートし、ｐＨ7.2のＰＢＳ中の
１％ＢＳＡ２mlで１回洗浄する。
試験管Ａ，Ｂに125Ｉ−標識腫瘍胎児性フェリチン又は
125Ｉ−ポリクロナル抗腫瘍胎児性フェリチンと腫瘍胎
児性フェリチンとの複合体を添加する（約10５cpmを与
える）。抗原／抗体のモル比１：１又は１：２までの複
合体を調製し、室温で１時間夫々プレインキュベートす
る。標識腫瘍胎児性フェリチンを細胞と共に室温で１時
間インキュベートし、ｐＨ7.2のＰＢＳ中の１％ＢＳＡ
で２回洗浄し、未結合の標識腫瘍胎児性フェリチンを取
出してカウントする。
Ｂのカウント数がＡより多いと陽性（＋）と判定する。
細胞障害アッセイ ２組のテストを実施する。
１．濃度５×10６細胞／mlでＰＢＬをＲＰＭＩ−1640に
懸濁させる。
２．12×75mmの試験管４本に対しＰＢＬを150μずつ
入れ、（希釈度10−４の）腹水液（30μ）を添加す
る。
Ａ＝対照腹水液 Ｂ＝ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９ Ａを入れた試験管２本とＢを入れた試験管２本とを４℃
で45分間インキュベートする。
３．ラビット補体を添加し（ＰＢＳで１：５に希釈して
100μ）、穏やかに攪拌しながら37℃で60分間インキ
ュベートする。
４．トリパンブルーで生細胞をカウントする。
陽性テスト： 上記したアッセイ方法に従って、正常人または患者由来
のフェリチンについてテストした結果は次表の通りであ
る。
２種の抗体によって、乳癌とホジキン氏病とを迅速且つ
適切に発見し、更に、これらの病気と、やはりフェリチ
ンの増加を生じる地中海貧血とを判別することが可能で
ある。
細胞障害アッセイ用キット １．モノクローナル抗体ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９ ２．腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合しないモノクロー
ナル抗体 ３．ラビット補体 ４．標準溶液中の従来のアジュバント ＲＩＡアッセイ用キット １．ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９のＦ（ａｂ）２ ２．腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合しないモノクロナ
ルのＦ（ａｂ）２ ３．125Ｉ−標識腫瘍胎児性フェリチン ＲＩＡ−１アッセイ用キット １．モノクローナル抗体ＣＭ−ＯＦ−Ｈ９ ２．腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合しないモノクロー
ナル抗体 ３．125Ｉ−抗マウスＩｇＧ１ ４．アジュバント及び標準溶液
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトー
    プと結合するがヒトの脾フェリチン抗原のエピトープ又
    はヒトの肝フェリチン抗原のエピトープとは結合しない
    モノクローナル抗体。
  2. 【請求項２】抗体がＩｇＧモノクローナル抗体である特
    許請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体。
  3. 【請求項３】抗体がマウス抗体である特許請求の範囲第
    １項に記載のモノクローナル抗体。
  4. 【請求項４】抗体がＦ(ab)２フラグメントである特許請
    求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体。
  5. 【請求項５】抗体がマウスのＩｇＧモノクローナル抗体
    である特許請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗
    体。
  6. 【請求項６】抗体がマウスのモノクローナル抗体のＦ(a
    b)２フラグメントである特許請求の範囲第１項に記載の
    モノクローナル抗体。
  7. 【請求項７】ヒトの乳癌又はホジキン氏病を発見するた
    めの細胞障害アッセイを実施するためのキットであっ
    て、ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトープと結合
    するがヒトの脾フェリチン抗原のエピトープ又はヒトの
    肝フェリチン抗原のエピトープとは結合しないモノクロ
    ーナル抗体と、腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合しない
    モノクローナル抗体と、ラビット補体とを含む前記キッ
    ト。
  8. 【請求項８】腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合するモノ
    クローナル抗体がマウスのＩｇＧモノクローナル抗体で
    ある特許請求の範囲第７項に記載のキット。
  9. 【請求項９】ヒトの乳癌又はホジキン氏病を発見するた
    めのラジオイムノアッセイを実施するためのキットであ
    って、ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトープと結
    合するがヒトの脾フェリチン抗原のエピトープ又はヒト
    の肝フェリチン抗原のエピトープとは結合しないモノク
    ローナル抗体と、腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合しな
    いモノクローナル抗体と、前記腫瘍胎児性フェリチン抗
    原と結合するモノクローナル抗体と結合する125Ｉ−抗
    イムノグロブリンとを含む前記キット。
  10. 【請求項１０】前記腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合す
    るモノクローナル抗体がマウスのＩｇＧモノクローナル
    抗体である特許請求の範囲第９項に記載のキット。
  11. 【請求項１１】ヒトの乳癌又はホジキン氏病を発見する
    ためのラジオイムノアッセイを実施するためのキットで
    あって、ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトープと
    結合するがヒトの脾フェリチン抗原のエピトープ又はヒ
    トの肝フェリチン抗原のエピトープとは結合しないモノ
    クローナル抗体のＦ(ab)２フラグメントと、腫瘍胎児性
    フェリチン抗原と結合しないモノクローナル抗体のＦ(a
    b)２フラグメントと、125Ｉ標識腫瘍胎児性フェリチン
    とを含む前記キット。
  12. 【請求項１２】前記腫瘍胎児性フェリチン抗原と特異的
    に結合するモノクローナル抗体がマウスのＩｇＧモノク
    ローナル抗体である特許請求の範囲第１１項に記載のキ
    ット。
  13. 【請求項１３】ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原と結合す
    るがヒトの脾フェリチン抗原又はヒトの肝フェリチン抗
    原とは結合しないモノクローナル抗体の産生方法であっ
    て、 (a)ヒト患者の胎盤由来の腫瘍胎児性フェリチンをヒト
    腫瘍胎児性フェリチン及びヒト成人脾フェリチンの抗原
    上の共通の結合サイトと反応するモノクローナル抗体と
    反応させて、前記結合サイトを前記モノクローナル抗体
    との反応によりブロックしたフェリチンを形成し、 (b)ヒトを除く動物に、工程(a)の反応生成物であるフェ
    リチンを免疫接種し、 (c)前記した動物の感作リンパ球をミエローマ細胞と融
    合し、 (d)ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトープと結合
    するがヒトの脾フェリチン抗原のエピトープ又はヒトの
    肝フェリチン抗原のエピトープとは結合しないモノクロ
    ーナル抗体を産生するハイブリドーマクローンを選択
    し、 (e)前記クローンを培養し、 (f)クローンをヒトを除く動物に注射し、モノクローナ
    ル抗体を含有する腹水を取出す ことからなる前記モノクローナル抗体の産生方法。
  14. 【請求項１４】ヒト患者のリンパ球、体組織又は血清上
    もしくはその中の腫瘍胎児性フェリチンの存在を検出す
    るためのアッセイ方法であって、前記リンパ球、体組織
    又は血清を、ヒト腫瘍胎児性フェリチン抗原のエピトー
    プと結合するがヒトの脾フェリチン抗原のエピトープ又
    はヒトの肝フェリチン抗原のエピトープとは結合しない
    モノクローナル抗体と混合し、前記抗体の前記リンパ
    球、体組織又は血清との結合の程度を測定することから
    なる前記アッセイ方法。
  15. 【請求項１５】モノクローナル抗体がマウスのモノクロ
    ーナル抗体である特許請求の範囲第１４項に記載のアッ
    セイ方法。
  16. 【請求項１６】モノクローナル抗体がマウスのＩｇＧモ
    ノクローナル抗体である特許請求の範囲第１４項に記載
    のアッセイ方法。
  17. 【請求項１７】結合の程度をヒトの乳癌又はホジキン氏
    病の存在もしくは不在の指標とする特許請求の範囲第１
    ４項に記載のアッセイ方法。
  18. 【請求項１８】前記結合の程度を細胞障害アッセイによ
    り測定する特許請求の範囲第１７項に記載のアッセイ方
    法。
  19. 【請求項１９】モノクローナル抗体がマウスのモノクロ
    ーナル抗体である特許請求の範囲第１７項に記載のアッ
    セイ方法。
  20. 【請求項２０】モノクローナル抗体がＩｇＧモノクロー
    ナル抗体である特許請求の範囲第１７項に記載のアッセ
    イ方法。
  21. 【請求項２１】モノクローナル抗体がマウスのＩｇＧモ
    ノクローナル抗体である特許請求の範囲第１７項に記載
    のアッセイ方法。
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