JPH0552293B2 - - Google Patents

Description

請求の範囲 １ 接触アレルギを検出するための閉鎖性上皮テ
ストに使用するための接触アレルギーテスト物質
を担持した少なくとも１個のパツチを有するテス
トストリツプであつて、テスト物質がストリツプ
の少なくとも１個のパツチ上にフイルムとして作
成されたビヒクル中に混入されており、ビヒクル
はフイルム形成性物質としてテストストリツプの
使用時に被検皮膚領域からの水分を吸収し得るフ
イルム形成性ポリマーを含有していることを特徴
とするテストストリツプ。 ２ テストストリツプが複数のパツチを有してい
る請求の範囲１のテストストリツプ。 ３ 少なくとも１個のパツチの大きさが0.2〜４
cm²である請求の範囲１のテストストリツプ。 ４ フイルムの厚さが0.25mm未満である請求の範
囲１のテストストリツプ。 ５ フイルムの厚さが0.10mm未満である請求の範
囲１のテストストリツプ。 ６ ビヒクルが少なくとも１種の親水性フイルム
形成性ポリマーからなる請求の範囲１のテストス
トリツプ。 ７ 複数のパツチの中の少なくとも１個のパツチ
上のフイルム形成性ポリマーが複数のアルコール
基を有するかまたはその親水性フイルム形成性誘
導体である請求の範囲２または６のテストストリ
ツプ。 ８ 複数のパツチの中の少なくとも１個のパツチ
上の接触アレルギーテスト物質が金属塩である請
求の範囲２のテストストリツプ。 ９ 複数のパツチの中の少なくとも１個のパツチ
上のフイルム形成性ポリマーがメチル化及びヒド
ロキシ−プロピル化セルロース並びにその混合物
から選択される請求の範囲２のテストストリツ
プ。 明細書 本発明は、閉鎖性上皮テスト（occlusive
epicutaneous tests）（パツチテスト）を実施す
るための新規な手段に関する。この種のテスト
は、ある特定の物質（アレルゲン）に対する接触
アレルギー（接触感作）を検知するために、或い
は物質のアレルギー性および／または刺激性をテ
ストするために使用されている。簡潔のために、
本発明方法を“真（TRUE）テスト”と呼称す
る。 “パツチテスト”なる用語は、当初テストを実
施するために被検物質を浸漬させた布製もしくは
紙製パツチが使用された事実に由来する。何年も
の間各種パツチが使用されてきた。本発明との関
連において、パツチなる用語はテスト物質を担持
したエリア（area）を主に指すものとする。 上皮テスト方法では、アレルギー性もしくは刺
激性を有するか疑わしい物質を或る期間閉鎖状態
下で正常な皮膚に適用する。この適用は、適当な
処方および濃度のテスト物質を用いてコントロー
ルしながら行われる。接触アレルギーの症例では
テストエリアでアレルギー湿疹が生ずる。刺激性
物質があると、同様の性質を有する刺激性湿疹反
応が生ずる（Manual of Contact Dermatitis；
Fregert Ｓ、第２版、Munksgaard コペンハー
ゲン／1981／p.71−76）。通常テスト物質はペト
ロラタムあるいは水のような適当なビヒクル中に
処方されている。パツチテスト法における“パツ
チ”は従来はアルミニウム箔の小カツプが一般的
であり、テストを実施するときこのカツプに適当
に処方されたテスト物質を充填し、テストが閉鎖
状態で実施されるように適用される。しばしば複
数のパツチが脱着自在な保護ホイルを被覆した粘
着テープに貼着される。 パツチテストで通常使用されている方法および
材料は安全性の点で不満足である。このことは使
用された材料および方法が金属塩のときにとくに
あてはまる。従つて改良が望まれている。Cp.
Kalimo、K.ら、Contact Dermatitis 10（1984）、
p.25−29：Schmidt H.ら、Contact Permatits
６（1980）、p.91−94。アレルギーテスト方法では
刺激反応が一般的に生じ、特にテスト物質を刺激
閾値に近い濃度で使用したときには一般的であ
る。この原因の少なくとも一部は、テスト物質が
皮膚接触エリアに均一に分布されないことにあ
る。標準のパツチテスト材料を顕微鏡検査する
と、推奨されるペテロラタムビヒクル中に挿入さ
れたアレルゲンの多くは様々な大きさの小滴ある
いは粒子の形状で不均一に分散されていることが
知見された（Vannestre D.ら、Contact
Dermatitis ６（1980）、p.197−203；Fossereau
J.ら、Occupational Contact Dertitis、
Munksgaards、コペンハーゲン／1982／p.45）。
これら封入体の最大直径は0.5mm以上である。こ
うした粒子が汗で溶解すると局在的に高濃度のア
レルゲンが生じ、毛包の周囲に孔炎症
（“poritis”）が生じる。別の欠点としては、標準
パツチテストで適用されるテスト物質の量が６段
階（sixth−power range）でしか変更されない
ことである（Fisher T.ら、Contact Dermatitis
１／1984／p.285−87）。上記から、パツチテスト
方法で使用されるべき材料の薬理学的特性の改善
が高く望まれていることは明らかである。 TRUEテストは上記した問題の多くを解決し、
テスト物質の正確な用量、均質な表面分布および
高い生体効率（bioavaila bility）が得られる。
従つて、TRUEテストは、ペトロラタムをビヒ
クルとして使用したときにしばしば生ずる低い生
体効率、不正確な用量および不均一な表面分布の
問題の解決手段を提供する。 本発明は閉鎖性パツチテストに適用可能な方法
を提供する。前記方法では、(a)テスト物質の所要
量を最小にしかつ用量精度（dosage precision）
を高める（用量／単位面積）；(b)貯蔵安定なテス
ト精剤を製造しうる；及び(c)各々が複数のテスト
物質を含む予調製テストストリツプを相互クロス
汚染の危険を少くして作成することができる。 TRUEテストを各種非閉鎖性技法と混同して
はならないことを指摘したい。閉鎖性技法では、
包囲されたスペースでテスト物質と皮膚とを接触
させる。このことは、空気および湿気を除外し、
テスト皮膚エリアからの水分（汗）がテスト物質
と共に封入されることを意味する。このことを達
成するために、シーリング材料例えばアルミニウ
ム箔もしくは不透過性プラスチツクホイルが使用
される。この閉鎖されたスペース手法により、閉
鎖性技術を容易に標準化することができ、信頼で
きる結果が得られることが証明された（Pirila¨
Ｖ、Contact Dermatitis １／1975／p.48−52）。
非閉鎖性技法では以前はフイルム形成性ポリマー
が使用されてきた（取得No.31888／prov A358／
Central Patents Index Section Ｂ、Farmdoc、
Derwent Publications Ltd、ロンドン 1968）。 本発明では、上記した問題を、実質的に水およ
び湿気を透過せずかつテスト物質が均質に分布さ
れる薄くて柔軟なフイルムから成るビヒクル中に
配合されたテスト物質を含むパツチを使用するこ
とにより解決する。このパツチを以後“フイルム
キヤリヤ”と称する。“柔軟な（supple）”なる用
語は、フイルムをTRUEテストで使用したとき
破けるほどもろく（brittle）ないことを意味す
る。用時にフイルムは、閉鎖状態下で皮膚に適用
しながら皮膚からの排出物を吸収しうる程親水性
でありかつ十分に乾燥していなければならない。 正確に“フイルム”とみなされるために層の厚
さは0.25mm（0.01インチ）未満でなければならな
い。Encyclopedia of Polymer Science and
Technology、Plastics、Resins、Rubbers、
Fibers、Vol.6、p.764（1967）；Jonn Wiley ＆
Sons Inc.、USA参照。従つて本発明の好まし
い具体例では、0.25mm未満、好ましくは約0.1mm
未満例えば約0.05mm未満の厚さを有するフイルム
を使用する。これらの厚さは、皮膚に適用する
前、即ち皮膚から何も吸収されていない段階以前
のフイルムについて示した値である。各パツチの
フイルムエリアは部分エリアに区分されうる。フ
イルムエリアが全面に密着していることが望まし
い。 テスト物質 本発明はまず接触アレルギーの検知に有用であ
り、従つてテスト物質は、アレルギーを起こすか
或いは起こす疑いのあるアレルゲンの中から主に
選択される。刺激性物質も使用されうる。潜在的
に、物質が固体か液体か、有機物質か無機物質、
金属塩か非金属塩か、（例えば水に）可溶性か不
溶性かに拘らず、全ゆるかつ任意の種類の接触ア
レルゲンおよび刺激性物質が本発明で使用されう
る。 パツチテストを容易に実施するために、各種地
域（georaphical regions）で最も共通のアレル
ゲンを各地域毎に選択した。従つて北アメリカで
は、American Academy of Dermatologyによ
り1984年にまとめられた標準トレー（“tray”）
（リスト）があり、この中には次の物質が列挙さ
れている。ベンゾカイン（５％ペトロラタム）、
イミダゾリジニルウレア（２％水）、チウラムミ
ツクス（１％ペトロラタム）、シンナムアルコー
ル（５％ペトロラタム）、ジブカイン（１％ペト
ロラタム）、メルカプトベンゾチアゾール（１％
ペトロラタム）、硫酸ネオマイシン（20％ペトロ
ラタム）、ｐ−フエニレンジアミン（１％ペトロ
ラタム）、テトラカイン（１％ペトロラタム）、ｐ
−tert.ブチルフエノールホルムアルデヒドレジン
（１％ペトロラタム）、チオメルサール（0.1％ペ
トロラタム）、ホルムアルデヒド（２％水）、ヒド
ロキシシトロネラール（４％ペトロラタム）、カ
ルバ・ミツクス（３％ペトロラタム）、シンナム
アルデヒド（２％ペトロラタム）、ロジン（松脂）
（20％ペトロラタム）、PPDミツクス（黒色ラバ
ーミツクス）（0.6％ペトロラタム）、羊毛
（Wool）（ラノリン）アルコール（30％ペトロラ
クタム）、シクロメチカイン（１％ペトロラタ
ム）、オイゲノール（４％ペトロラタム）、クオー
タニウム−15（２％ペトロラタム）、イソオイゲノ
ール（４％ペトロラタム）、メルカプト・ミツク
ス（１％ペトロラタム）、エポキシ樹脂（１％ペ
トロラタム）、重クロム酸カリウム（0.5％ペトロ
ラタム）、カイン・ミツクス・レス・ベンゾカイ
ン（３％ペトロラタム）、エチレンジアミン二塩
酸塩（１％ペトロラタム）、ベンゾイルペルオキ
サイド（１％ペトロラタム）、ペルーバルサム
（25％ペトロラタム）、クオータニウム−15（２％
水）、柏こけ（abs.mousse de chene）（５％ペト
ロラタム）、硫酸ニツケル（2.5％ペトロラタム）。
ヨーロツパの1984年推奨トレー（リスト）には次
の物質が含まれている（但しここでは簡潔のため
に濃度およびビヒクルを省略した）。硫酸ネオマ
イシン、重クロム酸カリウム、羊毛アルコール、
メルカプト・ミツクス、ベンゾカイン、硫酸ニツ
ケル、エポキシ樹脂、エチレンジアミン二塩酸
塩、塩化コバルト、ペルーバルサム、チウラム・
ミツクス、パラベン（ミツクス）、ｐ−フエニレ
ンジアミン二塩酸塩、松脂、キノリン・ミツク
ス、黒色ラバーミツクス、ｐ−tert.ブチルフエノ
ール・ホルムアルデヒドレジン、カルバ・ミツク
ス、芳香性物質（fragrance）ミツクス、クオー
タニウム−15、プリミン、ホルムアルデヒド。
種々の体部位における接触皮膚炎状態例えば下肢
部の皮膚炎用の標準トレーは次の通りである。硫
酸ネオマイシン、キノホルム、ベンゾカイン、羊
毛アルコール、ペルーバルサム、クロロキナドー
ル、パラベン（ミツクス）、無水ユーセリン、松
脂。 これらのいわゆる“標準アレルゲン”は多くの
患者に対して使用される。彼／彼女のテストシリ
ーズに特別に更にどんなアレルゲンを含めるかを
決めるために、患者の病歴もしばしば参照され
る。パツチテスト法用に興味がもたれているアレ
ルゲンは更に約2000ある。 本発明では、テスト物質が均質で柔軟な固体相
中に組み込まれ、前記相中で物質が所要により微
粒子の形態であつてもよい。フイルム面の粒子サ
イズは100μｍ未満、例えば50μｍ未満である。フ
イルム面に対して直角では粒子サイズは10μｍ未
満、例えば5μｍ未満でありうる。 ビヒクル ビヒクルはフイルム形成能を有する物質の中か
ら選択される。通常ビヒクルは、水の如き揮発性
液体と一緒になつてゲルもしくは融合性エマルジ
ヨンを形成し、その中に選択されたテスト物質が
溶解、結晶化、微粒子化、乳化あるいは分散状態
で均一に分布しうるポリマーである。本発明の最
も実際的な具体例では、このポリマーは展開され
たとき前記ゲルもしくはエマルジヨンが乾燥によ
りフイルムを形成するように選択される。ビヒク
ルは使用時に水分を吸収するように親水性でなけ
ればならない。 ビヒクルの親水性を示す各種特性に関する情報
は、ハンドブツクおよび製品から提供されうる。
例えばEncyclopedia of Polymer Science and
Technology、Plastics、Rubbers、Pesins、
Fibers；John Wiley ＆ Sons Inc.、Vol.6、
p.778−779（1967）参照。（ASTM D570.63に準
じて測定したとき）0.5％を超える、好ましくは
１％を超える吸水量（24時間）を有するポリマー
が特に適当である。従つて、本発明において意図
されるフイルム形成性ポリマーは、極性基構造を
複数含むポリマーの中から選択されるのが好まし
い。前記極性基構造としては例えばカルボキシル
および／又はエステル基（ポリ（メタ）アクリレ
ート等）、アミド基（ポリ（メタ）アクリルアミ
ドおよびポリアミド等）、エーテル基（高級ポリ
エチレン−およびポリプロピレングリコール等）、
完全にアルキル化されたポリサツカライド（完全
にメチル化されたセルロース等）、アルコール基
（ポリビニルアルコールおよびポリサツカライド
等、例えば澱粉、これは任意にヒドロキシアルキ
ル化および部分アルキル化された形態の如き誘導
体（ヒドロキシプロピルセルロースやメチルセル
ロース等）の形であつてもよい。ポリマーの親水
度を決定する因子は極性基の含量である。従つ
て、例えばポリプロピレンやポリスチレン等のポ
リマーは実質的に無視できる程度の吸水能しか持
たないが、近接して多くの極性構造を有するポリ
マー（フイルム形成性ポリサツカライド、ポリビ
ニルアルコール等）は高い吸水量を示すので本発
明により適している。天然に存在するポリマーを
ベースとするフイルム形成性ポリマー（バイオポ
リマー）は概して高い親水性を有する。 ビヒクルは各ケース毎に特に使用されるテスト
物質およびフイルムキヤリヤに依存して正確に選
択される。テスト物質はビヒクル中に均質に分散
されなければならない。ビヒクルおよびフイルム
キヤリヤは互いに接着するように選択されなけれ
ばならない。親水性テスト物質（例えば水、エタ
ノール、メタノールの如き極性揮発性溶媒に可溶
性の物質）では通常より多くの水を吸収しうるビ
ヒクル（より親水性のビヒクル）が必要とされ
る。これに対して疎水性テスト物質を使用したと
きには単に親水性であるだけでなくある程度親油
性のビヒクルが要求される。疎水性テスト物質と
しては、コールタール、バルサムや多くの芳香性
物質が列挙されうる。まず最初にテスト物質の化
学的構造を考え、次いで幾つかの簡単なテストを
行えば、検査技師は個々のケースで最も適当なビ
ヒクルを見つけ出すことができる。金属塩や親水
性テスト物質の場合には、極性揮発性溶媒好まし
くは水、エタノール、メタノール等或いはその均
質混合物と組合せてフイルムを形成しうるフイル
ム形成性ポリマーを選択することが必須であるこ
とに注目されたい。上記した種類のテスト物質で
は、適当なポリマーはフイルム形成性ポリサツカ
ライド類例えばアルキル化もしくはヒドロキシア
ルキル化セルロースの中から選択される。前記ビ
ヒクルが部分的にメチル化されたセルロースであ
つてもよく、このビヒクルは親水性−疎水性バラ
ンスが極めて良好であることに加えて、極めて良
好なフイルム形成性を有しかつヒトの皮膚に対し
て非刺激性である。 ビヒクルは上記ポリマーの混合物から成るもの
であつてもよい。即ち、ビヒクル中に上記ポリマ
ーが少なくとも１種含まれるものでもよい。しか
しこの場合にも、混合物は上皮テストのように閉
鎖的に適用したとき膨潤しうるフイルムを形成し
うるものでなければならない。 本願出願時本発明の最良の具体例は、実施例２
および３のメチル化セルロースやヒドロキシプロ
ピル化セルロースを使用する例と考えられてい
た。 ビヒクルを選択するときに考慮しなければなら
ない重要な点は、ビヒクルが薬理学的に許容さ
れ、皮膚に対して非刺激性であつてフイルムキヤ
リヤに不活性でなければならず、加えてテスト物
質のアレルギー性および／又は刺激性を実質的に
変えるものであつてはならないことである。 液体は、使用されるテスト物質がフイルム内に
留まつている温度でキヤリヤを壊すことなく蒸発
しうるときに“揮発性”であると言う。一般に、
室温で比較的高い蒸気圧を有する液体を使用する
ことができる。 フイルムキヤリヤ フイルムキヤリヤは実質的に湿気および水を透
過させないものがよいが、完全にそうである必要
はない。フイルムキヤリヤが、皮膚に刺激を与え
る物質を含んでいてはならない。本発明において
適当な材料が多くの会社から販売されている。例
えば、プラスチツク塗装紙（Reynolds plastic−
coated freezer paper、Reynolds Metal Co.、
リツチモンド、バージニア）、SaranR “ブリリ
アント”紙、SaranR “つや消し”紙（Dow
Chemical Co.、Mildland、ミシガン）、疎水性
プラスチツクフイルム（例えばポリエステル／
MylarR ）およびアルミニウム箔である。フイ
ルムキヤリヤは本発明に臨界的な方法で選択され
るのではない。技師は上記した一般的なアウトラ
インに従つて所与の材料が意図する目的に適して
いるか否かを簡単に決定することができる。湿気
透過性フイルムキヤリヤを選択するときには、閉
鎖状態下で適用しうる手段を準じることが重要で
ある。 テストパツチの製造 製造方法には２つの重要なステツプがあり、良
い結果を得るためには特に重要である。(1)テスト
アレルゲンがフイルム形成性材料中に均一に分散
されていなければならない。(2)フイルムキヤリヤ
は均一厚さのフイルムで再現可能に被覆されてい
なければならない。親水性ビヒクルをかなり疎水
性のフイルムキヤリヤ上に使用すべく選択したと
きには、キヤリヤをビヒクルで均一に被覆するこ
とはむずかしい。そのような場合には、キヤリヤ
を処理してより親水性にすればよい。従つて例え
ば、ポリエステルフイルムを電場で短時間処理
（例：コロナ放電処理）するか、或いはポリエチ
レンフイルムを部分的に酸化して極性構造を導入
すればよい。 一般に良く知られたフイルムの製造方法では、
揮発性液体中に溶解もしくはゲル化したフイルム
形成性ポリマー（ビヒクル）中にテスト物質を添
加する。テスト物質が液体に可溶性のときには、
ポリマーを含有する混合物中に直接添加してもよ
い。不溶性のときには、微細状態で混合物中に均
質に分散あるいは乳化させればよい。いずれの場
合にも、ゲル中に存在する液体と混和性の揮発性
液体の少量中にテスト物質を予め分散させておく
こともできる。次いでフイルムキヤリヤを均一な
ゲル層で被覆し、乾燥させ、その後この材料を好
ましくは同じ形状およびサイズ（面積）の複数の
パツチに裁断する。形成された被覆パツチのフイ
ルムサイズが斜めあるいは丸いエツヂを有してい
ることが好ましい。乾燥したフイルムの厚さは、
被覆ゲルの種類に応じて例えば0.2、0.1、0.05あ
るいは0.01mmでありうる。パツチの面積は0.2−
４cm²である。フイルム中の（フイルムの単位面積
あたりの）テスト物質の量はアレルゲンの種類に
応じて変更される。アレルゲンの中には他に比べ
て強力なものがある。従つて、技師は思考錯誤を
繰り返しながら単位面積あたりの適当な有効量を
決定する。TRUEテストでは、閉鎖法では適当
であると以前に経験的に求められてきた値から一
般的な基準値を導き出すことができるが、本発明
では単位面積あたりの所要量が生体効率が改良さ
れているために閉鎖法で要求されている量より少
なくて済むことを念頭に入れておかなければなら
ない。“単位面積あたりの有効量”なる用語は、
テスト物質をテストに使用したとき敏感なヒトあ
るいは正常人の多くにアレルギー反応もしくは刺
激性反応を引き起こす量を指す。一般的なテスト
物質の量は10mg／cm²未満であり、例えば１mg／cm²
未満である。ニツケルの場合には、有効量は
0.5μmol／cm²（TRUEテスト、ビヒクル＝メチル
セルロース）である。 場合によつては患者のいわゆる閾値を求めるこ
とが望ましい。このためには同じアレルゲンで単
位面積あたりの量を変化させた幾つかのパツチを
用意する。 次いでパツチを感圧型粘着性保護材（skeet
material）上に置く。前記保護材は各パツチの周
りに少なくとも約５mm、好ましくは少なくとも約
１cm突き出した縁が設けられている（各パツチの
フイルム被覆面は粘着性シート材から離れて対面
するように設置する）。パツチは10cm未満の間隔
で離間して設置される。本発明においてその形状
は特に限定されない。従つて原則的にはパツチの
形状とは別の形状のストリツプを使用することが
できる。 粘着材は、フイルムキヤリヤが不透過性のとき
には水分透過性のものがよく、皮膚にやさしく適
応する性質を有するものでなければならない。 テストを容易に実施するために、個々に別のア
レルゲンを設けたおよび／又は同じアレルゲンを
単位面積あたりの量を変えて設けた複数のパツチ
を１つの共通な粘着剤ピース上に予め用意するこ
ともできる。このようなパツチを用いると、複数
のアレルゲンおよび／又は同じアレルゲンについ
て単位面積あたりの異なる量について患者を同時
にテストすることが可能なテストストリツプが得
られる。前記ストリツプは標準トレイに応じたパ
ツチを含んでいる。各ストリツプに最高25個、好
ましくは最高12個のパツチを含ませてもよい。 よつて、本発明のストリツプは粘着剤（自己粘
着性、感圧型粘着剤）から成り、その粘着面上の
少なくとも１つのエリア（パツチ）がテスト物質
を含んだフイルムで被覆されている。ストリツプ
が使用直前に引きはがすことができる保護シート
で覆われていてもよい。 輸送および販売のために、所望により保護シー
トを設けたストリツプを、空気、湿気、温度およ
び光の侵入に対して密閉させるべく窒素ガス雰囲
気の如き不活性雰囲気中で包装することができ
る。 テスト方法 この方法は、本発明のパツチを使用する以外は
公知の方法で実施される。１個あるいは複数の
TRUEテストストリツプ（前記した如く粘着剤
上に設けたパツチ）をフイルムがテスト領域で皮
膚と接触するように患者の皮膚を載せ、皮膚に対
して所定位置でストリツプを密接に圧着させる。 本発明を幾つかの非限定的実施例に基いて説明
する。 実施例 １ 予備実験として、モデル物質（メチレンブル
ー）をセルロースおよびポリエチレングリコール
をベースとする各種フイルム形成性ビヒクルに混
入し、これをフイルムキヤリヤに適用し、本発明
に従つて使用した。こうして得られたフイルムの
インプリント（imprints）からモデル物質が均一
に分布していることが示され、適当なフイルムキ
ヤリヤと適当なテスト物質を含むビヒクルが本発
明方法を実施するのに有用であることが判明し
た。メチルセルロースのフイルム形成性は断然良
好であることが知見された。従つて、今後の実験
はこのセルロース誘導体を用いて実施した。 実施例 ２ テスト材料 ペトロラタム（西独、ハンブルグ、Reinbek
b.、Hermal−Chemie）中の塩化コバルト１％、
硫酸ニツケル５％、重クロム酸カリウム0.5％ Scanpor 上のFinn Chambers （フインラ
ンド、Epicon Oy） Scanpor （ノルウエー、Morgesplaster Ａ／
Ｓ） 化学物質： 分析用（pro analysi）塩化コバルト、分析用
塩化ニツケル、分析用硫酸ニツケル、分析用重ク
ロム酸カリウム、分析用水酸化ナトリウム、ジメ
チルグリオキシム、クリスタリン（crystalline）
（米国、セントルイス、Sigma Chemical Co.） ドデシル硫酸ナトリウム（＝ラウリル硫酸ナト
リウム）テクニカルグレード（米国、オハイオ
州、Norwood、Matheson Coleman ＆ Bell） Methocel A4M（メチルセルロース）メチ
レン度27−30％／グルコース単位（米国、ミシガ
ン州、ミツドランド、Dow Chemical Co.） 白色ペトロラタム（西独、ハンブルグ、
Reinbek ｂ、Hermal−Chemie） プラスチツク箔およびプラスチツク塗装紙（フ
イルムキヤリヤ） レイノルズ プラスチツク塗装フリーザー紙
（米国、バージニア州、リツチモンド、Reynolds
Metal Co.） ポリエステル0.03mm（Mylar ） Saran ブリリアント35CIS／10 SARAN／
15PEおよびつや消し45ペーパー／15PE（米国、
ミシガン州、ミツドランド、Dow Chemical
Co.） ニツケルに対して過敏症の６名のボランテイア テスト材料の調製 Methocel ゲル（３％ｗ／ｖ）を熱水法で調
製した（Methocel を沸騰水によくかき混ぜ
る；得られた混合物を冷却するとゲルが形成され
る）。金属塩−結晶性または水に溶解させた−を
ゲル中に混入させた。水に添加してMethocel
の最終濃度を2.4％ｗ／ｖとした。次いで塩が均
質に分散、溶解するまでゲルを磁気攪拌機を用い
て十分に攪拌した。適用する前にゲルを遠心し、
気泡のない状態とした。 これらのゲルを次の金属塩濃度で調製した。 希釈段階（mol／）0.8、0.4、0.2、0.1、
0.05、0.025、0.013、0.0063、0.0031、0.0016、
0.00078、0.00039、0.00020、0.00010および
0.000049. NiCl₂：0.8〜0.000049 NiSO₄：0.2〜0.000049 CoCl₂：0.2〜0.0031 K₂Cr₂O₇：0.1〜0.0031 ドデシル硫酸ナトリウム（重量％）4.0、2.0、
1.0および0.5 予めエタノールで洗浄したフイルムキヤリヤ上
にゲルを均一厚さ（約0.1mm）の層として展開さ
せた。ゲル層を（約0.01mmのフイルム厚さを与え
る）室温で放置乾燥後、鋭利なナイフで四角いパ
ツチに裁断した。 比較のために、標準パツチテスト材料を12の希
釈段階（５％、2.5％、1.3％…0.0025％の12段階）
でペトロラタムと混合して硫酸ニツケルの希釈シ
リーズを調製した。 ニツケル分析 上記した各種フイルムキヤリヤ上に0.1M硫酸
ニツケルゲルのフイルムを担持したパツチ（1.0
×1.0cm）10個を分析した。これらを脱イオン水
８ml中に入れ、１分間の超音波処理後、0.1N水
酸化ナトリウムの脱イオン水溶液と１％ジメチル
グリオキシムのエタノール溶液を等部で含む指示
薬溶液12mlを添加した。４時間後サンプルを分光
光度計（470nｍ）で検査した。 パツチテスト法 ペトロラタム／硫酸ニツケル含むテスト材料お
よび上記の如きパツチを各人の背中上部に夫々
Scanpor テープ上のFinn Chambers あるい
はScanpor テープのみを用いて貼着し、48時間
そのままとした。48時間および72時間目に調べ
た。 結 果 ニツケル分析 0.1M硫酸ニツケルゲルを含む４種のテスト紙
（1.0×1.0cm）およびペトロラタム中５％硫酸ニ
ツケルを含む９−16mgサンプルにおけるニツケル
量

【表】 硫酸ニツケル
これらのニツケル分析の結果から、本発明のテ
スト材料により従来方法よりも高い用量精度
（dosage precision）が得られることが示される。 顕微鏡検査で検出可能な結晶は全て、フイルム
面では約90μｍ未満であり、フイルム面に垂直な
面では約10μｍ未満であつた。 パツチテスト ニツケルに対して過敏症の６名（うち１名はコ
バルトに対しても過敏症）に、ペトロラタム中の
硫酸ニツケルの希釈シリーズおよび本発明の硫酸
ニツケル、塩化ニツケル、塩化コバルト、重クロ
ム酸カリウム及びラウリル硫酸ナトリウム含有パ
ツチを用いてパツチテストを施した。本発明のパ
ツチの大きさは１cm²であつた。３名には更に、ポ
リエステルおよびSaran 上に硫酸ニツケルを含
むパツチ（両方とも１cm²）を用いてテストした。
２名には、プラスチツク塗装紙上に硫酸ニツケル
を含むパツチ0.7×0.7cm（0.5cm²）を用いてテスト
した。 本発明のテスト方法では、Finn Chambers
を用いるテストに比べてより大きくかつより均一
に分布したテスト反応が得られた。このことは、
パツチが非常に希釈された形でアレルゲンを含ん
でいる場合に最も顕著に認められる。ペトロラタ
ム中５％硫酸ニツケルを用いるテスト反応の強度
は、0.05M硫酸ニツケルゲル（0.3μmol Ni／cm²）
を含む本発明パツチに相当した。0.7×0.7cmパツ
チは、1.0×1.0cmパツチの場合と同じ反応強度
（intensity）および同じ希釈シリース終止点を示
すが、評価はより困難であつた。ポリエステルや
Saran のテストシリーズでの反応は、紙／プラ
スチツクシリーズの反応と同一であつた。コバル
トに過敏症の人では、ペトロラタム中１％塩化コ
バルトでテストしたときもプラスチツク塗装紙上
の0.013M塩化コバルトゲルでテストしたときも
反応強度は等しかつた。0.1M塩化コバルトゲル
並びに重クロム酸カリウムを用いる本発明方法で
は、（正常のヒトに対して行つたテスト）ペトロ
ラタム中５〜10％の塩でテストしたときと同強度
の過敏反応を示した。 皮膚刺激剤のラウリル硫酸ナトリウムを本発明
のフイルムに（0.5−４％）混入させると、同一
物質を水溶液中に含む（0.25−２％）従来のパツ
チテストで得られる反応に対応する過敏反応を呈
した。 TRUEパツチを被験者に貼付した位置にその
まま保持している間にフイルムの膨潤がみとめら
れた。これによりフイルム−皮膚の接触が増大
し、多分テスト物質の皮膚への浸透が容易になる
であろう。水溶性物質は皮膚の水相へより容易に
接近し、脂溶性物質は皮膚の脂肪相へより容易に
入り込むからである。本実施例から、固体の柔軟
なフイルムがビヒクルとして使用されうることが
知見された。 フイルムMethocel に混入させて臨床的に首
尾よく評価された他のテスト物質としては、硫酸
ネオマイシン、エチレンジアミン塩酸塩およびペ
ルーバルサムが挙げられる。 実施例 ３ 実施例２と同様にして、各種テスト物質を含有
するKlucel （ヒドロキシプロピル化セルロー
ス、米国、Hercules Inc.）のゲルを調製し、フ
イルムキヤリヤに適用し、乾燥させた。使用した
溶媒は水とエタノールの各種混合物であり、各エ
タノール濃度は使用した特定のテスト物質を溶解
させるに十分量とした。

【表】 フイルムキヤリヤは、フイルムとの接着性を高
めるべくコロナ放電処理により親水性にしたポリ
エステルフイルムであつた。乾燥フイルムを顕微
鏡観察したところ、結晶の形成は検出されなかつ
た。皮膚で得られたテスト結果の判定は容易であ
つた。 Klucel のフイルムに混入させて臨床的に首
尾よく評価された他のテスト物質としては、硫酸
ニツケル、重クロム酸カリウム、カインミツクス
（caine mix）、ペルーバルサム、エチレンジアミ
ン塩酸塩、塩化コバルト、チウラムミツクスおよ
びエポキシ樹脂が挙げられうる。 被験物質の中でペルーバルサムおよび芳香性物
質（Fragrances）混合物は揮発性成分を含む。 実施例 ４ 水中でスラリー化した微粉ハイドロコルチゾン
アセテート（主に好脂性の物質の例）（10％ｗ／
ｖ）を、熱水法で調製したMethocel ゲルに添
加した。次いでフイルムの形態でゲルをプラスチ
ツク塗装紙（実施例２）に適用した。顕微鏡検査
から、ヒドロコルチゾンアセテートがフイルム中
に均一に分布していることが判明した。