JPH05504950A - フィブリン シーラント供給方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 フィブリン　シーラント供給方法 発明の背景 供給方法に関するものであり、この方法は一つのみの供給装置の使用を可能にす るものである。この方法は、ヒトおよび動物の種々の外科的処置用の、同厚の、 単独ドナーの、集団ドナーの、あるいは細胞由来のフィブリンシーラントに使用 することができる。本発明はまた、このような方法に使用するのに適するキット に関するものン　ゲルまたは塊状物を生じさせる複雑な一連の蛋白質および因子 からなる。このプロセスの最終段階では、フィブリノーゲンがトロンビンによっ て分解されて、フィブリン　モノマーを生じさせる。このフィブリン　モノマー は急速に重合し、次いて活性化したＸ（１【因子によって架橋され、フィブリン 　マトリックスを生成する。

フィブリノーゲンおよびトロンビンを包含するヒト凝血因子の製剤が過去１０年 にわたって、外科において広く使用されている（Ｓｃｈｌａｇ等（纏）、Ｆｉｂ ｒｉｎ　５ｅａｌａｎｔ　ｉｎ　０ｐｅｒａ　−ｔｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、 １〜７巻、Ｓｐｒ　ｉｎｇｅｒ出版社、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）ｏこれらの生物 学的フィブリン　シーラント（ｓｅａｌａｎｔｓ）は、組織、縫合、ステーブル およびプロテーゼからの漏出を密閉することによって、止血および傷の治癒を促 進し、ヘパリン投与患者における関心手術中に特に有用である。これらのシーラ ントはまた、組織結合のための接着剤としても使用することができ、手術中の出 血を制御することによって、潅流に要する血液の量を減少させる。それらの効果 は、心臓血管系手術、形成手術、整形外科、泌尿器科、産科および婦人科、歯科 、上顎顔面および眼の手術を包含するこれらが使用されている広範囲の手術的用 途で発揮される。

集めたヒト血漿フィブリノーゲン／ＸＩ目因子から調製され・たフィブリン　シ ーラント製品はヨーロッパで市販されている（Ｔｉｓｓｕｃｏｌ／Ｔｉ５ｓｅｌ 。

Ｉｍｍ＋＋ｎｏ　ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕ５ｔｒｉａおよびＢｅｒｉｐｌａｓ ｔ　Ｂ、Ｈｏｅｃｈｓｔ。

Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒｍａｎｙ）ｏ　しかしながら、これらの製品は、Ｕ、Ｓ、Ｆｏ ｏｄ　ａｎｄ　ＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎの認可を受けていない。

代替製品として、若干の病院ではフィブリノーゲンおよびＸ　ＩＩＩ因子の供給 源として、患者自身の血液（同厚）または単一のドナー（相同）の血漿を用いて 、病院内でフィブリン　シーラントを製造している。

フィブリン　シーラントの血漿フィブリノーゲン／Ｘ１［＋因子成分は代表的に は、血漿を一２０°ＣＬ、！下の温度で一夜にわたり凍結させ、この材料を０〜 ４°Ｃてゆっくり解凍し、遠心処理し、次いてこのクリオ沈殿をシリンジまたは 噴霧容器に移すことによって調製される（Ｄｒｅｓｄａｌｅ等によるＡｎｎ、Ｔ ｈｏｒａｃＳｕｒｇ、４０：３８５．１９８５＋および米国特許第４、　６２７ ．　８７９）。通常では牛胎児血漿から精製されたトロンビン成分は市場で入手 することができ、代表的には別のシリンジまたは噴霧容器て製造される。使用に 際して、これら２種の溶液を同時的に、または交互に施用して、傷の部位でフィ ブリン　ツーラントを生しさせる。別法としては、このシーラントをコラーゲン 　マトリックス（たとえば、ＧｅｌｆｏａｍまたはＡｖｉｔｅｎｅ）に施用し、 次いでその部位に押し付ける（Ｌｕｐ　ｉｎｅ　ｔ　ｔ　ｉ等によるＴｈｏｒａ ｃ。

Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ、Ｓｕｒｇ、９０：５０２．１９８５：および米国特許第 ４，４５３，９３９）。

損傷部位におけるフィブリン　シーラントの生成は、２種のソリンシ系を用いて 行なうことができる。しかしながら、このような系は、損傷部位における充填か やりにくく、かつまた供給装置の取り扱いが難しいことから、満足なものではな い。更に、二種の溶液の不適切な混合という問題を伴って居り、結果として若干 の凝固か形成される。別法として、２個のシリンジを、これらの溶液が針に入る 以前に混合されるようにデザインされたボルダ−中に置くこともできる（米国特 許４，７３５，６１６．４，３５９，０４９および４，６３１，０５５）。

この方法を用いて得られる凝固物の強度は再現させつるがこの針はしばしば詰ま り、繰り返し取り換えなければならない。

現在利用できるフィブリン　シーラント供給法における固有の問題点から、簡単 で再現性を有する技術に対する要求が明らかに存在する。このような技術は、使 用が簡便でなければならず、かつまた特定の部位に適当な強度の凝土塊を生成す るものでなければならない。本明細書に記載されている本発明によって、このよ うな供給技術が提供される。

発明の要旨 本発明の一般的目的は、当技術で既知の方法が付随する問題を解消して、血液凝 固成分からフィブリン　シーラントを形成する方法を提供することにある。

本発明の特定の目的は、フィブリン　シーラントを損傷部位に供給する方法を提 供することにあり、この方法は、フィブリノーゲン／ＸＩＩ［因子に冨む沈殿（ またはフィブリノーゲン／Ｘ［ｌＩ因子　混合物）およびトロンビンを、土塊形 成が防止されるような条件の下に、シーラント生成か望まれる時間まで、−緒に 混合する。

本発明のもう一つの目的は、上記方法で使用するのに適するキットを提供するこ とにある。

本発明のさらに完全な理念およびその利点は下記の記載を読むことによって、当 業者に容易に理解されるであろう。

一４Ｍ様において、本発明は、身体部位において、フィブリン　シーラントの生 成を行なう方法に関する。この方法は、　Ｉ）　容器手段内において、フィブリ ノーゲン、Ｘ　Ｉ［＋因子および成熟トロンヒンからなる水性溶液を、トロンヒ ン土塊形成活性が阻害される条件の下に混合し、次いて自）工程ｌ）から生成す る生成物を、トロンビン土塊形成活性か保有され、かつまたフィブリン　シーラ ントが生成される条件の下に、身体部位に施用することからなる。

もう一つの態様において、本発明は身体部位においてフィブリン　ツーラントの 生成を行なう方法に関し、この方法は、　ｉ）フィブリノーゲンおよびＸ　ＩＩ Ｉ因子からなる第−相とトロンビンからなる第二相とを含む懸濁液を形成し、そ して１１）この懸濁液を、フィブリノーゲン、Ｘ［（（因子およびトロンビンの 混合によって、フィブリン　シーラントが生成される条件の下に、身体部位に施 用することからなる。

さらにもう一つの態様において、本発明は、フィブリン　シーラントの生成に使 用するためのキットに関する。

このキットは、　ｌ）フィブリノーゲン、Ｘ［］［因子および成熟トロンビンか らなる溶液をその中に含有している収容手段：およびｉｌ）この収容手段に操作 可能に連結されている排出手段からなるアプリケーターを包含する。

発明の詳細な説明 本発明は、フィブリン　シーラントの成分（カルシウム、成熟トロンビン（プロ トロンピンとは異なるものとして）および血漿由来フィブリノーゲン／Ｘ目Ｉ因 子沈殿）を、土塊形成か行なわれるような方法で、身体部位に供給する方法およ びまたこのような方法に使用するのに適するキットに関するものである。（本Ｆ ｉＡ細書で使用されているものとして、「身体部位」の用語は、傷または切開の 領域の組織、ならびにこの領域中に挿入される移植可能な組織または成分、たと えば人工血管、骨またはコラーゲン　バッドを包含するものとする）。下記の記 載において、単離された形態のフィブリノーゲンおよびＸ　Ｉｌｌ因子の組合せ を、血漿由来沈殿の代りに使用できることは明白であろう。

本発明の方法においては、フィブリノーゲン／Ｘ［Ｉ［因子に富む沈殿と成熟ト ロンビンとを、トロンビンおよび（または）　Ｘ、ＩＩＩ因子が不活性化され（ あるいは以下で説明するカルシウム欠失状態におけるように、トロンビンは活性 形態で存在するが、利用できないような状態にされ）、これによって、土塊形成 が防止される条件の下に、−緒に混合する。この混合物を次いで、酵素活性が復 元される（あるいはトロンビン利用性が復元される）条件の下に、身体部位に供 給する。

−態様においては、トロンビンとフィブリノーゲン／Ｘ　Ｉ１１因子沈殿との混 合物は、低いｐＨ緩衝の下に調製する（トロンビンによるフィブリノーゲンの土 塊形成は低ｐＨ（５，５より低いｐＨ）によって阻止される）。この態様では、 この混合物を医薬的に許容される緩衝剤により中和すると、あるいはまた、この 混合物が患者自身の体液と接触すると、トロンビン活性が復元され、土塊形成か 急速に開始される。この態様では、フィブリノーゲン／Ｘ［［［因子沈殿を低ｐ Ｈで調製することができ、あるいは別法として、血漿沈殿および凍結トロンビン の溶解に、低ｐＨの緩衝液を使用することができる。どちらの場合にも、この混 合物は供給容器（たとえば、噴霧ビンまたはシリンジなと）に移すことができ、 次いで患者の体液が、混合物のｐＨを土塊形成が生しる点にまで高めるのに充分 であるような状態の場合には、直接に身体部位に施用することができる。患者の 体液が沈殿／トロンビン混合物のｐＨをトロンビン活性が復元される点まで高め るには充分てない状態の場合には、酸性混合物が装置から流出するように、装置 の内部に塗布されている緩衝剤塩と接触するように設計されている供給装置を使 用することができる。この緩衝剤塩は、酸性混合物と接触されると、溶解が生し て、ｐＨを土塊形成が生しる点まで高めるように選択する。たとえば、供給装置 （アプリケーター）として、シリンジを使用することかでき、この場合のシリン ジは、処分可能な先端を備えており、その内側表面に適当な緩衝剤塩が塗布され ている。酸性混合物がこの塗布先端を通過するにしたがい、この緩衝剤（たとえ ば、結晶形態またはゲル形態）が酸性混合物を中和し、これによってトロンビン 活性が復元され、そして所望の部位における土塊形成が生じる。土塊形成はこの 先端で生じるので、この先端部分は簡単に取り除くことができ、そして新しい塗 布先端部分を取りつけることができる。

もう一つの態様においては、フィブリノーゲンとＸ　ＩＩＩ因子との沈殿／トロ ンビン　混合物を、カルシウム欠失緩衝液中で調製することができる。急速な土 塊形成にはカルシウム　イオンの存在が必要であるから、カルシウムが除去され ると、フィブリン重合は阻止される（Ｃａｒｒ等によるＢｉｏｃｈｅｍ　Ｊ、（ １９８６）、２３９：５１３；Ｋａｍｉｎｓｋｉ等による　Ｊ。

Ｂ１１１．Ｃｈｅｍ、（１９８３）、２５８：１０５３０；Ｋａｎａｉｄｅ等に よる（１９８２）、１３：２２９参照）。フィブリノーゲンとＸ　ＩＩ＋因子と の沈殿に使用される溶液および（または）緩衝剤の溶解液に、カルシウム　キレ ート化剤（カルシウムが堅固に結合し、カルシウムを利用不能にする、クエン酸 ナトリウムまたはエチレンジアミンテトラ酢酸などの化合物）を添加することか できる。活性を復元させるためには、容器（たとえば、シリンジ）に処分可能な 無菌の先端部分を付けることができ、この先端部分の内側表面には、キレート化 剤を飽和するのに充分のカルシウム塩を内面塗布する。

混合物がこの先端部分を通過して、遊離カルシウム濃度が増加すると、この身体 部位て土塊形成か生しる。

さらにもう一つの態様においては、沈殿／トロンビン複合体中のトロンビンの土 塊形成活性を感光性阻止剤の使用によって阻止することができる。たとえば、ト ロンビンを室温で光の不存在の下に、２６時間より長時間、不活性にするために 、光感受性のシンナモイル誘導体を使用することができる（Ｔｕｒｎｅｒ等によ るＪ、Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１０９　：１２７４〜１２７５　（１９８７）；Ｔｕｒｎｅ ｒ等によるＪ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、＋１０：２４４〜２５０　（１９８８））。これらの同一トロンビン阻 害剤複合体は、１〜２秒内の照射（低強度）によりトロンビンを活性にすること ができる。

これらの阻害剤は活性部位セリン　ヒドロキシルを含むアシル−酵素複合体の生 成に係り公知である（ＳＥＲ１９５）。照射すると、このシンナモイル誘導体は 光異性化を受けて、クマリンを放出し、次いで活性セリンヒドロキシルか再生さ れる。クマリン誘導体は良好なトロンビン阻害剤ではないので、この光源化反応 は酵素溶液から阻害剤を効果的に分離する。したがって、フィブリノーゲン／Ｘ Ｉ［［因子に冨む沈殿の溶液を、暗い環境（たとえば、不透明または着色シリン ジあるいは容器なと）の下に、凍結乾燥した阻害剤、トロンビン複合体と混合す ることができる。この酵素の活性化、これによる土塊形成は、この溶液が普通の 室内光にさらされることによって、傷に供給された時点て生じる。別法としてま た、活性化は、照光条件の変化か種々の土塊形成をもたらさないように、たとえ ばアプリケーターに直接に取り付けた、光源によって制画することもてきる。

さらにもう一つの態様において、早過ぎる土塊形成を防止するために、フィブリ ノーゲンおよびＸ　［ｒｒ因子／トロンビンを供給する前に、このトロンビンを フィブリノーゲン／ＸＩｌ［因子沈殿から物理的に分離しておくこともてきる。

この態様では、２相系を使用して、物理的分離を行なうことができる。この態様 に適する液体は非混合性て、２相に容易に分離できるものである。各施用の前に 、これらの２相を混合して懸濁液を生成し、傷に施用する。患者の体液が非水性 相の可溶性成分を抽出する場合には、混合を身体部位で行ない、次いで土塊形成 を開始させる。成分の適当な混合が誘発されない状態の場合には、懸濁液が装置 から流出する際に、懸濁液が装置の内部部分に塗布されている可溶化剤と接触す るように設計された供給装置を使用することができる。この可溶化剤は、懸濁液 と接触すると、溶解が生じて、土塊形成が生じる程度にまで混合が生起する結果 が得られるように選択する。たとえば、シリンジに処分可能な先端部分を付け、 この先端部分の内側表面に適当な相転移剤（１種または２種以上）を塗布する。

懸濁液がこの塗布先端部分を通過すると、この相転移剤（たとえば、結晶形態の もの）は混合プロ°セスを助け、これによって血塊形成を生じさせる。土塊形成 は起ったとしてもこの先端部分て生しるので、この先端部分は容易に取り除くこ とができ、そして新しい先端部分を付けることができる。

本発明はまた、フィブリン　シーラント成分を損傷部位に供給する、前記方法で 使用するのに適するキットに関する。好適態様において、このキットは、フィブ リノーゲン／Ｘ目【因子沈殿とトロンビンとを単−相で混合できるように設計さ れたアプリケーターを包含する。このアプリケーターは、フィブリン　シーラン トの成分を、たとえばフィルムまたは薄い糸状物の形で身体部位に施用すること ができるものである。別様には、ポンプまたはエアゾル噴霧アプリケーターを使 用することもてきる。

上記で示唆されているように、このアプリケーターは、例えば処分可能な先端部 を有するガラスまたはプラスチックのシリンジの形態であることがてきる。この 先端部分の形状は、諸成分の供給形態によって決定される。平らで広い末端を有 する先端部分は、薄く広いステーブル状のフィブリン　シーラントの供給に使用 することができ、他方、狭い管状先端部分は円形スレッドの形態のシーラントの 供給に使用することかできる。たとえば網状スクリーンにより制限されている先 端部分に混合物を通すことによって強制的圧力を適用して、噴霧状にし、細いガ ラス状のフィブリン　シーラントを生成させることができる。もう一つの態様は 前記光感受性トロンビン阻害剤を使用する場合に特に適しており、このアプリケ ーターは、シーラントの成分か装置を出る時に、これらの成分が光にさらされる ような状態で具備されている光源を有するポンプまたはエアゾル噴霧形態のアプ リケーターであることかてきる。使用する光の波長は、光感受性成分に依存する 。

このキットはフィブリン　シーラントの諸成分を分離するための各保存容器を有 するように形成することができる。このキットはまた、溶剤、緩衝剤などを包含 するいずれか必要な助剤がその中に配置されている１個または２個以上の別の貯 蔵容器を包含していてもよい。

本発明は下記の非制限的例によって、さらに詳細に理解されるであろう。

例 フィブリノーゲンおよびＸｌ［［因子を含有する沈殿を下記のとおりにして調製 した・ ４５０マドクロリツターの１Ｍ硫酸アニン原溶液を、凝血防止処理した（チトレ ート　ホスフェート　デキストロース　アデニン（ＣＰＤＡ−１）　）ヒト血漿 ５［１１１に加えた。この溶液を、渦巻状にしないで、充分に混合し、次いて５ 分間、２，０００〜９，０００ｇで遠心処理した。上澄液を傾斜により除去した 。

土塊形成の阻止および再活性化は下記の方法のいずれかによって達成した Ａ、　酸阻止−凍結乾燥した牛脂児トロンビンを、１００Ｕ／ｍｌの濃度に、ク エン酸塩緩衝液（５００ｍＭ　クエン酸、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、および２０ｍ Ｍ　ＥＡＣＡ、ｐＨ４，５）中に溶解した。沈殿したフィブリノーゲンをトリス 緩衝液（５０ｍＭｌ−リス、２５０ｍＭ　クエン酸ナトリウム、１５０ｍＭ　塩 化ナトリウム、５０ｍＭアルギニン（Ａ　ｒ　ｇ）および２０ｍＭ　ε−アミノ −カプロン酸（ＥＡＣＡ）　、ｐＨ７，４）中に溶解し、約１５．０ｍｇ／ｍ１ の濃度にした。このフィブリノーゲン原液を次いて、クエン酸塩緩衝液で約２５ 倍に稀釈した。このフィブリノーゲン溶液２００マイクロリツターおよびトロン ビン１００マイクロリツターに係る土塊形成時間は、土塊形成を示さない標準条 件の下に、ＢｅｃｔｏｎＤｊｃｋｉｎｓｏｎ　ＢＢＬ　Ｆｉｂｒｏｓｙｓｔｅｍ フィブロメーターにおいて、９０秒を超えた。ＩＮ水酸化ナトリウム７０マイク ロリッターを添加すると、３．８秒（１０の試料の平均値）で土塊が生成した。

損傷部位に対する施用には、次の方法を使用することができる； 体液が沈殿とトロンビンとの酸性混合物の中和に充分である場合には、この混合 物は損傷部位に直接に施用することができる。別様には、中和性の塩またはゲル （たとえば、トリス（Ｔｒｉｓ））がその内部に塗布されている処分可能な先端 部分を、供給装置に連結することもてきる。緩衝剤塩による酸性溶液の中和によ って、トロンビンは活性化され、土塊形成活性が復元される。

Ｂ、　キレート色剤阻止−沈殿させたフィブリノーゲンおよび凍結乾燥した牛脂 児トロンビンをトリス緩衝液（５０ｍｌｌｌトリス、２５０ｍＭ　クエン酸ナト リウム、１５０ｍＭ　塩化ナトリウム、５０ｍＭＡｒｇおよび２０ｍＭＥＡＣＡ 、ｐＨ７，４）中に溶解して、それぞれ、約１５　、　０　ｍｇ／ｍｌおよび１ ００Ｕ／ｍｌの濃度にした。このフィブリノーゲン原溶液を次いて、５００＋＋ ＋Ｍ　クエン酸ナトリウムを含有するトリス緩衝液で２５倍に稀釈した。

このフィブリノーゲン溶液２００マイクロリ・ツタ−およびトロンビン１００マ イクロリツターを含有する溶液の土塊形成時間は、標準条件の下に、ＢｅＣｔＯ ｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ　ＢＢＬ　フィブロシステム　フィブロメーターで９０秒 を超えた。Ｉ　Ｍ　Ｃａ　Ｃ１ｘ溶液５０マイクロリッターを添加すると、１． ８秒（１０の試料の平均値）で土塊形成が生じた。

損傷部位への施用には、下記の方法を使用することができる： 供給装置に、カルシウム塩またはゲルが内部に塗布されている使い捨て先端部分 を連結する。混合物がこの先端部分を通過すると、モル過剰のカルシウムがキレ ート化剤を飽和し、これによって土塊形成が加速される。

Ｃ１光感受性阻止−光の遮断の下に、５〜２０倍過剰の４−アミジノ−フェニル −２−ヒドロキシ−４−ジエチルアミノ−アルファーメチルシンナムエート　塩 酸塩（Ｐｏｒｔｅｒ等によるＪ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、ＩＩ　Ｉ　ニア６１６　（１９８９））を、緩衝液中のトロンビン（５ ０ｍＭ　トリス、２５０ｍＭ　塩化ナトリウム、２５０ｍＭ　クエン酸ナトリウ ム、２０ｍＭＥＡＣＡ、５０ｍＭ　アルギニン（または尿素）　、ｐＨ７，４中 の約１００　Ｕ／ｍｌ、最終メタノール濃度＜１０％）に加えた。阻止は室温で 少なくとも１時間の経過を許した。

最低量のこの溶液を使用し、沈殿フィブリノーゲン／Ｘ　ＩＩＩ因子を溶解させ た。このシーラントは、通常の操作用光源の下で、完全土塊生成に約２〜３分を 要した。

これに対し、暗所で保持された試料混合物は、９０分後にも土塊を生成しなかっ た。

１ｉ１への施用には、次の方法を使用することができる 光感受性阻止剤−トロンビン複合体は、活性化性波長の光を透さない着色供給装 置中で、沈殿フィブリノーゲン／Ｘ　ＩＩＩ因子と混合することかできる。この 混合物を照射されている損傷部位に施用すると、土塊形成が生じる。

Ｄ、２相懸濁液−凍結乾燥した牛胎児トロンビンを乳化剤中に溶解し、最終濃度 を約１００Ｕ／ｍｌにする。沈殿フィブリノーゲン／ＸＩＩ［因子を最低量の緩 衝液（５０１１１Ｍトリス、１５０ｍＭ　塩化ナトリウム、２５０ｍＭクエン・ 酸ナトリウム、２０＋ｒ＋Ｍ　ＥＡＣＡ、５０ｍＭＡｒ　ｇ、Ｉ）８７．４）中 に溶解させる。不混和性液体の懸濁液か生成される。損傷表面における体液は、 両成分を溶解させるのに充分であることができ、適当な混合および土塊形成を促 進する。

上記で引用した刊行物のそれぞれの全内容を引用によって、ここに組入れる。

本発明を明瞭にし、理解するために、幾分詳細に説明したが、本明細書の記載を 読むことによって、種々の変更か本発明の真の範囲から逸脱することなく、その 形態および詳細に係りなしうることは、当業者にとって明白であろう。

浄書（内容に変更なし） 、要　約　書 本発明は、一つのみの供給系におけるフィブリン　シーラントの生成方法に関す るものである。この方法は、フィブリノーゲン／Ｘｌ［＋因子沈殿溶液を、トロ ンビンの土塊形成活性か阻害される条件の下に、トロンビンと混合し、次いてこ の混合物を、トロンビンが活性化され、フィブリノーゲンかフィブリン　シーラ ントに変換される条件の下に、身体部位に施用することを包含する。このフィブ リン　シーラント組成物の施用には、単一の装置、シリジンまたは容器を使用す ることができる。

手続補正書泪幻 １、事件の表示 フィブリン　シーラント供給方法 ４−代理人 ６、補正により増加する請求項の数 ７−補正の対象 ＥＡＩＩＩＩ書、請求のＩＩ囲及び要約書翻訳文８−　補正の内容　別紙のとお り 明細書、請求の範囲及び要約嘗翻訳文の浄１（内容に変更なし）国際調査報告

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. １．身体部位において、フィブリン　シーラントの形成を生じさせる方法であっ て、 ｉ）容器手段内で、フィブリノーゲン、ＸＩＩＩ因子および成熟トロンビンを含 有する水性溶液を、トロンビンの血塊形成活性が阻止されている条件の下に、混 合し、次いで ｉｉ）工程ｉ）から生成する組成物を、トロンビンの血塊形成活性が復元され、 上記フィブリン　シーラントが形成される条件の下に、上記身体部位に施用する 、ことからなる方法。
2. ２．上記水性溶液が、医薬的に許容されるカルシウム塩を、工程（ｉｉ）におけ る上記フィブリン　シーラントの形成を生じさせるのに充分な量でさらに含有す る、請求項１に記載の方法。
3. ３．工程（ｉ）を５．５より小さいｐＨにおいて行ない、それによって、トロン ビンの血塊形成活性を阻止する、請求項１に記載の方法。
4. ４．工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）から生成する上記組成物のｐＨを、トロ ンビンの血塊形成活性が復元されるように高める、請求項３に記載の方法。
5. ５．工程（ｉ）から生成する上記組成物のｐＨを、上記身体部位に存在する患者 の体液と上記組成物との接触によって高める、請求項４に記載の方法。
6. ６．工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）から生成する上記組成物のｐＨを、ｐＨ を高めることができる緩衝剤との接触によって高める、請求項４に記載の方法。
7. ７．上記工程（ｉ）の溶液が、トロンビンの血塊形成活性の光感受性阻害剤を、 トロンビンの血塊形成活性を阻止するのに充分の量で含有する、請求項１に記載 の方法。
8. ８．工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）から生成する上記組成物に、上記光感受 性阻害剤を不活性化する波長の光を照射し、これによって、トロンビンの血塊形 成活性を復元させる、請求項７に記載の方法。
9. ９．工程（ｉ）の条件が、フィブリン　シーラント形成を生じさせるのに充分な カルシウム　イオンが存在しないことによって、トロンビンの血塊形成活性が阻 止された条件である、請求項１に記載の方法。
10. １０．工程（ｉｉ）における条件が、フィブリン　シーラント形成を生じさせる のに充分なカルシウム　イオンを存在させる条件である、請求項９に記載の方法 。
11. １１．上記工程（ｉ）の溶液が、この溶液中の遊離カルシウム　イオンを、フィ ブリン　シーラント形成を生じさせるのには不充分なレベルにまで減少させるに 充分な量のカルシウム　キレート化剤を含有する、請求項９に記載の方法。
12. １２．工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）から生成される上記組成物を、フィブ リン　シーラント形成を生じさせるのに充分な量のカルシウム　イオンと接触さ せる、請求項１０に記載の方法。
13. １３．患者の身体部位でフィブリン　シーラントの形成を生じさせる方法であっ て、 ｉ）フィブリノーゲンおよびＸＩＩＩ因子を含有する第一相およびトロンビンを 含有する第二相からなる懸濁液を形成し、次いで ｉｉ）上記フィブリノーゲン、ＸＩＩＩ因子およびトロンビンの混合が行なわれ 、これによって上記フィブリンシーラントが形成される条件の下に、上記懸濁液 を上記身体部位に施用する、 ことからなる方法。
14. １４．工程（ｉｉ）における、上記混合を、上記身体部位に存在する上記患者の 体液中で生起させる請求項１３に記載の方法。
15. １５．工程（ｉｉ）において、上記工程（ｉ）の懸濁液を相転移剤と接触させ、 上記第一相と上記第二相との混合を生じさせ、これによって上記フィブリン　シ ーラントを形成させる、請求項１３に記載の方法。
16. １６．フィブリン　シーラントの調製に使用するためのキットであって、 ｉ）フィブリノーゲン、ＸＩＩＩ因子および成熟トロンビンを含有する溶液をそ の中に配置して有する容器手段、および ｉｉ）上記容器手段に操作可能に連結されている出口手段、 からなるアプリケーターを含むキット。
17. １７．上記溶液が、カルシウム　キレート化剤をさらに含有する、請求項１６に 記載のキット。
18. １８．上記出口手段が、そこに配置されているカルシウム塩を有する、請求項１ ７に記載のキット。
19. １９．上記溶液が約５．５より小さいｐＨを有する、請求項１６に記載のキット 。
20. ２０．上記出口手段が、そこに配置されている中和性緩衝剤塩を有する、請求項 １９に記載のキット。
21. ２１．上記溶液がトロンビンの血塊形成活性の光感受性阻害剤をさらに含有して おり、そして上記容器手段および上記出口手段が、上記阻害剤が感受性である波 長の光を透過させない材料から形成されている、請求項１６に記載のキット。
22. ２２．上記出口手段が、作動すると、上記光感受性阻害剤を不活性化する波長の 光を発射する光源を有する、請求項２１に記載のキット。