JPH05500611A - 非ヒト霊長類ｃｄ４ポリペプチド、グリコシル化可能なヒトｃｄ４分子、その断片、その融合タンパク質、その遺伝子配列および使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 非ヒト霊長類ＣＤ４ポリペプチド、グリコシル化可能なヒトＣＤ４分子、その断 片、その融合タンパク質、その遺伝子配列および使用本発明は組換え遺伝子およ び医薬組成物の分野に関する。

訓り屡 ヒトおよびシミアン免疫不全ウィルスＨＩＶおよびＳＩＶはそれぞれ後天性免疫 不全症候群（Ａ、ＩＤ５）およびシミアン免疫不全症候群（ＳＩＤＳ）の原因と なる媒介物である。Ｃｕｒｒｅｎ、　Ｊ等、３ｃｉｅｎｃｅ　３２９：１３５９ −１３５７（１９８５）：　胃ｅｉｓｓ、Ｒ等、Ｎａｔｕｒｅ　３２４：５７２ −５７５（１９８６）を参照のこと。ＨＩＶウィルスは外被糖タンパク質ｇｐ　 １２０を含有しており、これはヘルパーＴリンパ球、マクロファージおよヒ他の 細胞の表面上に存在するｑ＝Ｄ４タンパク質に結合する（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ等 、　Ｎａｔｕｒｅ、　３１２ニア６３（１９８４乃、ｇｐ＋２０がＣＤ４に結合 した後、外被か媒介するウィルス標的細胞膜の融合によってウィルスの侵入が促 進される。

°　感染の過程で宿主生物は、主要外被糖タンパク質ｇｐ１２０およびｇｌ）４ １を含むウィルスタンパク質に対する抗体を産出する。この体液性の免疫にもか かわらずこの疾患は進行し、多重の日和見感染、寄生虫血症、痴呆および死によ って特徴付けられる致死的な免疫抑制をもたらす。宿主の抗ウイルス抗体がこの 疾患の進行を抑止できないことは、この感染の最も困難で危険な特徴の１つを表 しており、従来の方法論に基づくワクチン化法の見通しを暗くさせている。

免疫不全ウィルスに対する体液性応答の無効性には２つの因子が機能しているで あろう。第１に、他のＲＮＡウィルス（特にレトロウィルス）と同様にこの免疫 不全ウィルスは、抗原の変化が宿主の免疫サーベイランス（監視機構）に応答し て高速で進行することを可能にする高い変異速度を示す。第２に、外被糖タンパ ク質自体が、高親和性抗体結合に適したエピトープをほとんど有さない高度にグ リコリル化された分子である。ウィルス外被か提供する免疫原性の劣る“移動性 ”標的は、宿主が特異的抗体産生によってウィルス感染を制限する機会をほとん ど与えない。

ＨＩｖウィルスに感染した細胞は、その表面上にｇｐ　１２０糖タンパク質を発 現する。ｇｐ　１２０は、ウィルスが非感染細胞に侵入する際と同様の反応によ ってＣＤ４”細胞間の融合を媒介し、これによって短寿命の多核巨大細胞の生成 を導（。シンシチウム（合胞体）の生成は、ｇｐ　１２０外被糖タンパク質とＣ Ｄ４タンパク質との直接的な相互作用に依存する（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ等、同上 ；　Ｈａｔｚｍａｎｎ、　Ｄ。

等、　Ｎａｔｕｒｅ　３１２ニア６３（１９８４）　：　ＭｃＤｏｕｇａｌ、　 Ｊ、　Ｓ、等、５ｃｉｅｎｃｅ、２３１：３８２（１９８５）　；　５ｏｄｒｏ ｓｋｉ、　Ｊ、等、　Ｎａｔｕｒｅ、　３２２：４７０（１９８６）　；　Ｌｉ ｆｓｏｎ、　Ｊ、　Ｄ、等、　Ｎａｔ浮窒■B ３２３ニア２５（１９８６）　；　５ｏｄｒｏｓｋｉ、　Ｊ、等、　Ｎａｔｕｒ ｅ、　３２１　：４１２（１９８６））。

ヒトのＣＤ４タンパク質は、４つの免疫グロブリン様ドメインを含有する３７２ アミノ酸の細胞外領域、膜内領域および４０アミノ酸残基の荷電細胞内領域から 構成されている（Ｍａｄｄｏｎ、　Ｐ、等、Ｃｅ１ｌ　４２：９３（１９８５） ；Ｃ１ａｒｋ、Ｓ、等、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　 ８４：１６４９（１９８７））。

ＣＤ４−ｇｐ　１２０結合が、ＣＤ４抗原を保持している細胞のウィルス感染を 担っているという証拠には、ｇｐｌ　２０とＣＤ４との特異的な複合体が生成す るという発見が含まれている（ＭｃＤｏｕｇａｌ等。

同上）。また他の研究者らは、ヒ）　ＣＤ　４　ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ遺伝子で形質転 換し、これか発現すると、ＨＩＶ非感染細胞株か感染可能細胞株に変換されるこ とを明らかにしている（　Ｍａｄｄｏｎ等、Ｃｅ１ｌ　４７：３３３−３４８（ １９８６））。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ３８１０１３０４（１９８Ｂ）および同 ＷＯ３９１０１９４０（１９８９）は、免疫グロブリン様結合ドメインを含有す る可溶型ヒトＣＤ４が、ＨＩＶ感染の治療または予防に有用であることを開示し ている。

抗体−外被相互作用の主要部とは対照的に、受容体−外被相互作用は高親和性（ Ｋ、＝　１０”　ｌ　／ｍｏ　Ｉ　）の不変会合によって特徴付けられる。さら にこのウィルスのヒトＣＤ４に対する親和性は、ヒトＣＤ４とその固有の配位子 ＭＨＣクラス■抗原との親和性より少な（とも３ケタ大きい。

焼入かの研究者らによって、ハイブリッドタンパク質（雑種タンパク質）の調製 法が開示されている。例えばＭｕｒｐＭ、米国特許第４６７５３８２　（１９８ ７）は、ジフテリア毒素とホルモンなどのポリペプチド配位子とのハイブリッド タンパク質をコードする望ましい融合遺伝子を作成し、その融合遺伝子を発現さ せることによる、ハイブリッドタンパク質分子作成のための組換えＤ　Ｎ　Ａ技 術の使用を開示している。

多くの研究者か組換えＤＮＡ技術によってモノクローナル抗体（単クローン抗体 ）（Ｍａｂ）を調製している。モノクローナル抗体は高度に特異的な分子であり 、その−次構造、三次構造は共によく特徴付けられている。これらは抗原のイン ビトロでの免疫化学的特徴付けおよび定量に広く使用されてきた。Ｍ鎖および軽 鎖の遺伝子を適切な宿主に導入し、これを発現させ、次いでそれぞれの鎖を機能 性抗体分子に再会合させることが行われてきた（例えばＭｕｎｒｏ、　Ｎａｔｕ ｒｅ３１２：５９７（１９８４）　：　Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、　Ｓ、　Ｌ、　、　 ５ｃｉｅｎｃｅ　２２９：１２０２（１９８５）　：　Ｏｉ等、a ｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　４：２１４（１９８６）　；　Ｗｏｏｄ等、Ｎａｔ ｕｒｅ　３１４：４４６−４４９（１９８５）などを参照のこと）。軽鎖および 重鎖の可変領域はクローニングされ、外来宿主中でその結合能を維持したまま発 現している（Ｍｏｏｒｅ等。

欧州特許出願第００８８９９４号（１９８３年９月２１日分開））。

組換えＤＮＡ技術によって、キメラ抗体またはハイブリッド抗体も作成されてい る。０１およびＭｏｒｒｉｓｏｎ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　４：２１４（ １９８６）には、キメラヒトＩｇＧ抗１　ｅｕ３抗体を含むこのようなキメラ抗 体の生産法が記述されている。

Ｇａｓｃｏｉｇｎｅ、　Ｎ、　Ｒ，Ｊ、　、等、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａ ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　８４：２９３６−２９４O（１ ９８７）は、Ｔ−細胞受容体α−鎖可変（Ｖ）　ドメインおよび免疫グロブリン γ２°分子の定常（Ｃ）ｑ域コード配列からなるキメラ遺伝子構築物の作成を開 示している。このキメラ遺伝子でトランスフェクトされた細胞は、プロティンＡ 結合部位と共に免疫グロブリンおよびＴ−細胞受容体抗原性決定基を発現するタ ンパク質産物を合成する。このタンパク質は、正常なえ鎖と会合して、分泌され る見掛は上正常な４量体（Ｈ７Ｌ、；ただしＨは重鎖、Ｌは軽鎖）免疫グロブリ ン分子を形成する。

５ｈａｒｏｎ、　Ｊ等、Ｎａｔｕｒｅ　３０９：５４（１９８４）は、ノーブテ ン　アゾフェニルアルソ不−トに対して特異的なマウス重鎮の可変（Ｖ）領域お よびマウスのに軽鎖（ｖＨｃｘ）の定常（Ｃ）領域をコードするキメラ遺°伝子 の構築を開示している。この遺伝子はマウス骨髄腫細胞株に導入された。このキ メラ遺伝子か発現することにより、その骨髄腫細胞株から分泌される軽鎖を伴っ たタンパク質か生産され、アゾフェニルアルソネートに特異的な抗体分子か得ら れた。

Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、５ｃｉｅｎｃｅ　２２９：１２０２（１９８５）は、可変軽 鎖領域または可変重鎮領域を非Ｉｇ配列に結合させて融合タンパク質を作成でき ることを開示している。この報告は、この融合タンパク質について次の３つの潜 在的使用法を挙げている　（１）検定で使用するための酵素に特異的に抗体を結 合する：　（２）抗原カラムによって非１ｇタンパク質を単離する１　（３）毒 薬を特異的に送達する。

免疫グロブリン遺伝子を骨髄腫細胞中に安定に導入するための最近の技術（Ｂａ ｎｅｒｊｉ、　Ｊ、等、　Ｃｅ１ｌ　３３ニア２９−７４０（１９８３）　；　 Ｐｏｔｔｅｒ、　Ｈ，等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ ＵＳＡ）　８１ニア１６１−７１６５（１９８４））を詳細な構造情報と組み合 わせることによって、新規な性質を有する組換え抗体を生産するためのインビト ロＤ　Ｎ　Ａ法（変異導入法なと）の使用が可能になっている。

ＰＣＴ出願Ｗ○８７１０２６７］は、軽鎖および重鎖の遺伝子クローニングとそ の発現による、望ましい可変領域特異性と定常領域特性を有する遺伝的に操作さ れた抗体の生産法を開示している。望ましい特異性を有するモノクローナル抗体 を産生ずるクローン化／ＳイブリドーマＢ細胞株のｍ　ＲＮ　Ａを、ｃＤＮＡク ローニングのために単離する。軽鎖および重鎖コード配列の作成は、このクロー ン化可変領域を切り出し、これを軽鎖または重鎖モシュールヘクターに連結する ことによって達成される。これは免疫グロブリン鎖をコードするｃＤＮＡ配列を 与える。イントロンか欠如していることは、これらのｃＤＮＡ配列が、細菌なと の原核宿主中で、あるいは酵母なとの下等な真核宿主中で発現することを可能に している。

免疫グロブリンの抗原結合部分が他の部分に融合しているキメラ抗体の産出は例 証されている。抗体に融合した非免疫グロブリン遺伝子の例には、５ｔａｐｈｙ ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓヌクレアーゼ、マウス腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃ、 大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノー断片か含まれる（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、 ￥Ｓ等、　Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６０４−６１２（１９８４）　：　Ｎｅｕｂ ｅｒｇｅｒ、Ｍ、Ｓ、、Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｃｉ ｅｎｃｅ、３４７−３４９（１９８５））　ｏ欧州特許出願第１２０６９４号は 、大腸閑宿主細胞中で発現する免疫グロブリン分子の可変領域および定常領域の 遺伝子操作を開示している。さらにこの文献は、宿主細胞によってその定常ドメ インの１つに別のペプチド部分か結合した免疫グロブリン分子か合成され得るこ とも開示している。このようなペプチド部分は細胞毒あるいは酵素的であると記 述されている。この出願とその実施例は、４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル （ＮＰ）ハプテンに結合するモノクローナル抗体由来のラムタ様鎖の使用につい て記述している。

欧州特許出願第１２５０２３号は、キメラ型の、あるいは他の方法で修飾された 免疫グロブリン分子を生産するための組換えＤＮＡ技術の使用に関する。これら の免疫グロブリン分子に関して記述されている使用法の１つは、特定の標的組織 に対するこれらの抗体の注射による治療および全身診断である。疾患の存在は適 切な標識を抗体に結合させることによって決定できるし、また抗体に適切な薬剤 を付加することによってその疾患組織を攻撃することもてきる。

この出願は、薬剤の特異的送達を目指して加工された抗体を“改変抗体”として 記述している。

ＰＣＴ出願ＷＯ３３／１０１５３３は、免疫グロブリン分子の可変領域が第２の タンパク質の一部（これは酵素の活性部からなっていてもよい）に結合している キメラ抗体について記述している。

Ｂｏｕｌｉａｎｎｅ等、Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６４３（１’１１４）は、ハブ テン　トリニトロフェノール（ＴＮＰ）に特異的なマウスの可変領域をコードす るＤＮＡ断片が、ヒトのミューおよびカッパ領域をコードする断片に結合してい る免疫グロブリン遺伝子を構築した。これらのキメラ遺伝子を発現させることに よって、機能的なＴＮＰ結合キメラＩｇＭが得られた。

Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等、　Ｐ、　Ｎ、　Ａ、　Ｓ、　（ｔｌｓＡ）　８１　：６８ ５１（１９８４）は、ヒトカッパ軽鎖遺伝子のエクソンに結合した抗ホスホリル コリン骨髄腫プロティンＧの重鎖可変領域エクソンを使用するキメラ分子を開示 している。

これらの遺伝子てマウスの骨髄腫細胞株をトランスフェクトすることにより、抗 原結合機能を何するキメラマウス−ヒトＩｇＧを産生する形質転換細胞か作成さ れた。

ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ３９１０２９２２（１９８９）は、ヒトＣＤ４からなる キメラ抗体分子を開示している。このようなキメラ抗体分子を、ＨＩＶ感染を治 療するために、ＨＩＶに感染した患者に投与することかできる。

ＨＩＶ感染の機構に関して達成された進歩にもかかわらず、ＨＩＶウィルス感染 治療法の必要性は存在し続けている。

発明の要約 本発明は、非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはそのＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合 性断片を指定する核酸分子に関する。

具体的には、本発明は、次のＤＮＡ配列：またはその同義性（縮重）変異体から なる、アカゲザルＣＤ４をｔ旨定する核酸分子に関する。

また本発明は、可溶性非ヒト霊長類ＣＤ４断片を指定する核酸分子に関する。具 体的には、本発明は、次のＤＮＡ配列：またはその同義性変異体からなる、ＨＩ ＶまたはＳＩＶｇｐｌ、２０に結合する可溶性アカケサルＣＤ４断片（ドメイン Ｉ）に関する。

さらに本発明は、次のＤ　Ｎ　Ａ配列：またはその同義性変異体からなる、チン パンジーＣＤ４を指定する核酸分子に関する。

さらに本発明は、次のＤ　Ｎ　Ａ配列。

才かはその同義性変異体からなる　）（ＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０を結合する 可溶性チノパンツ−ＣＤ４断片（ドメインＩ）を指定する核酸分子に関する。

さらに本発明は、次のＤＮＡ配列： ［上記の配列中、ＹはＣまたはＴを、ＭはＡまた（まＣを、Ｓ（よＣまたはＧを 表す］ またはその同義性変異体からなる、細胞質ドメインを伴ったチンパン／−ＣＤ４ を指定する核酸分子に関する。

［上記の配列中、ＹはＣまたはＴを、ＭはＡまたはＣを表す］またはその同義性 変異体からなる、チノパンツ−ＣＤ４断片を指定する核酸分子に関する。

さらに本発明は、次のＤＮＡ配列： ＰｈｅＳｅｒＰｈｅＰｒｏＬｅｕＡｌａＰｈｅＴｈｒＶａｌＧｌｕＬｙｓＬｅｕ ＴｈｒＧｌｙＳｅｒＧｌｙＧＴｕＬｅｕＴｒｐＴｒｐ　２１T ［上記の配列中、ＹはＣまたはＴを、ＭはΔまたはＣを表す］またはその同義性 変異体（ただし、ＹがＴてない時、同時にはＭがＣでな℃）からなる、細胞質ド メインを伴ったヒトＣＤ４に関連するグリフンル化が可能なｇ　ｐ　１．２０結 合性分子を指定する核酸分子に関する。

さらに本発明は、次のＤＮＡ配列゛ ［上記の配列中、ＹはＣまたはＴを、ＭはＡまたはＣを表す］またはその同義性 変異体（たたし、ＹがＴでない時、同時にはＭかＣてない）からなる、ヒ１−Ｃ Ｄ４断片に関連するグＩＪコシル化か可能なｇｐ　１２０結合性分子を指定する 核酸分子に関する。

さらに本発明は、 １）非ヒト；長類ＣＤ４もしくはト（ＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０を結合するそ の断片を指定する核酸分子：および、２）免疫グロブリン軽鎖または手鎖を指定 する核酸分子：からなり、該免疫グロブリン鎖の可変領域を指定する核酸分子が 、該非ヒト霊長類ＣＤ４またはその断片を指定する核酸分子に置換されている、 融合タンパク質を指定する核酸分子に関する。

さらに本発明は、 １）細胞毒ポリペプチドを指定する核酸分子、に結合しｔ二、２）非ヒト霊長類 ＣＤ４もしくはＨＩ　ＶまたはＳＩＶｇｐ１２０を結合するその断片を指定する 核酸分子。

からなる、融合タンパク質を指定する核酸分子に関する。

さらに本発明は、本発明の核酸分子を３汀するベクターに関する。

さらに本発明は、本発明のベクターて形質転換した宿主に関する。

具体的には、本発明は、該融合タンパク質核酸分子の発現産物と共に相補性免疫 グロブリン軽鎖または重鎮を発現して、ＨＩＶまたはＳｉＶｇｐ１２０に結合す る免疫グロブリン様分子を産出する宿主に関する。

また本発明は、非ヒ）Ｗ長類ＣＤ４、もしくはＨＩ　ＶまたはＳＩＶｇｐ１２０ に結合するその断片の生産法であって、非ヒト；長類ＣＤ４もしくはＨＩＶまた はＳＩＶｇｐ１２０に結合するその可溶性断片を指定する核酸分子を含有し、さ らに使用する宿主株によって認識される発現シグナルをも含有するベクターで形 質転換した宿主株を、栄養培地中タンパク質生産条件下で培養１７、該非ヒト霊 長類ＣＤ４またはその断片を直接発現さぜ：そのように生産した非ヒト霊長類Ｃ Ｄ４またはその可溶性断片を回収する。

ことからなる方法、に関する。

また本発明は、非ヒトＮ長類ＣＤ４、もしくはｇｐ１２０を結合するその断片、 並びに免疫グロブリン軽鎖または重鎖からなり、その免疫グロブリン鎖の可変領 域が非ヒト霊長類ＣＤ４、もしくはＨ■ｖまたはＳＩＶｇｐｌ２０に結合するそ の断片に置換されている融合タンパク質の生産法であって、 該融合タンパク質を指定し、使用する宿主株によって認識される発現シグナルを 含有するベクターで形質転換した宿主株を栄養培地中夕冫パク質生産条件下で培 養し、該融合タンパク質を直接発現させ； そのように生産した融合タンパク質を回収する；ことからなる方法、に関する。

具体的には、本発明は、免疫グロブリン様分子の製造法であって、該宿主株が免 疫グロブリン軽鎖を産生ずる骨髄腫細胞株であり、該融合タンパク質がクラスｒ ｇＭＳ　ＩｇＧ１またはＩ　ｇＧ３の免疫グロブリン重鎮からなり、該融合タン パク質からなる免疫グロブリン様分子を生産する方法、に関する。さらに本発明 は、免疫グロブリン様分子の製造法であって、該宿主が免疫グロブリン軽鎖から なる該融合タンパク質と共に、クラスＩｇＭ，ＩｇＧ１およびＩ　ｇＧ３の免疫 グロブリン重鎮を産出して、ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐｌ２０に結合する免疫グロ ブリン様分子を与える方法、に関する。

（以下余白） さらに本発明は、本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４に関する。

具体的には、本発明は、次のアミノ酸配列：ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧ　１　ｙｌ　 １　ｅＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨ　ｊ　ｓＬｅｕＬｅｕＬｅｕＶａＩ　ＬｅｕＧ１　 ｎＬｅｕＡ１　ａＬｅｕkｅｕＰｒｏ Ａｌ　ａＶａ　ＩＴｈｒＧ　１ｎＧ１　ｙＬｙｓＬｙｓＶａＩ　Ｖａ　Ｉ　Ｌｅ ｕＧ１　ｙＬｙｓＬｙｓＧ１　ｙＡｓｐＴｈｒＶａ　ＩＧ　PｕＬｅｕＴｈｒ ＣｙｓＴｈｒＡ１　ａＳｅｒＧ１　ｎＬｙｓ　ＬｙｓＡｓｎＴｈ　ｒＧ１　ｎＰ ｈｅＨ　＋　ｓＴｒｐＬｙｓＡｓｎｓｅｒＡｓｎＧ１　ｎ　P１　ｅ　Ｌｙｓ Ｉ１ｅＬｅｕＧ１ｙＩ１ｅＧ１ｎＧ１ｙＬｅｕＰｈｅＬｅｕＴｈｒＬｙｓＧ１ｙ ＰｒｏｓｅｒＬｙｓＬｅｕＳｅｒＡｓｐＡｒｇＡ１ａＡｓｐ５ｅ　ｒＡｒｇＬｙ ｓＳｅｒＬｅｕＴｒｐＡｓｐＧ　１　ｎＧ１　ｙＣｙｓＰｈｅＳｅｒＨｅｔ　Ｉ 　１　ｅ　Ｉ　１　ｅＬｙｓＡｓ獅kｅｕＬｙｓ １１　ｅＧ１　ｕＡｓｐＳｅｒＡｓｐＴｈｒＴｙｒ　Ｉ　１ｅＣｙｓＧ１ｕＶａ ｌ　Ｇｌ　ｕＡｓｎＬｙｓＬｙｓＧ１　ｕＧ１　ｕＶａ　Ｉf１　ｕＬｅｕ ＬｅｕＶａＩ　ＰｈｅＧ１　ｙＬｅｕＴｈｒＡ１　ａＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒ Ｈｉ　ｓＬｅｕＬｅｕＧ１　ｕＧ１ｙＧ１　ｎｓｅｒＬｅｕsｈｒ Ｌｅｕ　ＴｈｒＬｅｕＧ１　ｕｓｅ　ｒＰｒｏ　ＰｒｏＧ　１　ｙＳｅｒＳｅｒ ＰｒｏＳｅ　ｒＶａ　Ｉ　ＬｙｓＣｙｓＡｒｇＳｅ　ｒＰｒ盾f　ＴｙＧ　１　 ｙ ＬｙｓＡｓｎ　１１　ｅＧ１　ｎＧ１　ｙＧ１　ｙＡｒｇＴｈｒＩ　１　ｅｓｅ ｒＶａＩ　ＰｒｏＧ１　ｎＬｅｕＧ１　ｕＡｒｇＧ　１ｎＡ唐垂rｅｒＧ１　ｙ ＴｈｒＴｒｐＴｈｒＣｙｓＴｈｒＶａ　ＩＳｅｒＧ１　ｎＡｓｐＧ１　ｎＬｙｓ ＴｈｒＶａＩ　Ｇ１　ｕＰｈｅＬｙｓ　Ｉ　１　ｅＡｓ　ｐ@１１　ｅＶａ　Ｉ Ｖａ　Ｉ　ＬｅｕＧ　１　ｙＧ　１ｙＶａｌＡ１　ａＧ１　ｙＬｅｕＬｅｕＬｅ ｕＰｈｅＴｈｒＧ　１　ｙＬｅｕＧ１　ｙｌ　１　ｅＰｈｅ■■■モ凾唐uａｌ からなる、本質的に純枠なアカゲザルＣＤ４に関する。

さらに本発明は、次のアミノ酸配列： ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧ１ｙＶａ１ＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨｊｓＬｅｕＬｅｕＬｅｕ νａｌＬｅｕＧ１ｎＬｅｕＡ１ａＬｅｕＬｅｕＰｒｏＡｌ　ａＡ７　ａ７ｈｒＧ 　１ｎＧ　７　ｙＬｙｓＬｙｓＶａ　Ｉ　Ｖａ　ＩＬｅｕＧ１　ｙＬｙｓＬｙｓ Ｇ　１　ｙＡｓｐＴｈｒＶａ　Ｉ@Ｇ　１ｕＬｅｕＴｈｒ ＣｙｓＴｈｒＡ１　ａｓｅｒＧ１ｎＬｙｓＬｙｓｓｅｒｌ　１ｅＧ１　ｎＰｈｅ 出ｓＴｒｐＬｙｓＡｓｎＳｅｒＡｓｎＧ１ｎＴｈｒＬｙｓ１１　ｅＬｅｕＧ１　 ｙＡｓｎＧ１　ｎＧ１　ｙＳｅｒＰｈｅＬｅｕＴｈｒＬｙｓＧ　１　ｙＰｒｏｓ ｅｒＬｙｓ　ＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡｒ■uａＩ ＡｓｐＳｅｒＡｒｇＡｒｇＳｅ　ｒＬｅｕＴｒｐＡｓ　ｐＧ１　ｎＧ１　ｙＡｓ ｎＰｈｅＴｈ　ｒＬｅｕ　１１　ｅ　ｒ　１　ｅ　Ｌｙ　ｓ`ｓ　ｎ　ＬｅｕＬ ｙｓ １　１　ｅＧ１　ｕＡｓｐｓｅｒＡｓｐＴｈｒＴｙｒｌ　１　ｅｃｙｓＧ１ｕＶ ａ　＋Ｇ１　ｙＡｓｐＧ　１ｎＬｙｓＧ１　ｕＧ１　ｕＶａ@ＩＧ　１ｎＬｅｕ ＬｅｕＶａＩＰｈｅＧ１ｙＬｅｕＴｈｒＡ１ａＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒ｝Ｉ＋ 　ｓＬｅｕＬｅｕＧ１ｎＧ１ｙＧ１ｎｓｅｒＬｅｕＴｈｒＬｅｕＴｈｒＬｅｕＧ １　ｕ　Ｓｅ　ｒＰｒｏＰｒｏＧ１　ｙＳｅｒＳｅ　ｒＰｒｏＳｅ　ｒＶａＩ　 Ｇ１　ｎｃｙｓＡｒｇｓｅ　ｒＰｒｏ`ｒｇＧ１　ｙ ＬｙｓＡｓｎ　１１　ｅＧ１　ｎＧ　１　ｙＧ１　ｙＬｙｓＴｈｒＬｅｕＳｅｒ Ｖａ　Ｉ　ＳｅｒＧ　１　ｎＬｅｕＧ　１　ｕＬｅｕＧ１　獅`ｓｐｓｅｒＧ　 １　ｙ ＴｈｒＴｒｐ丁ｈｒＣｙｓＴｈｒＶａＩＬｅｕＧ１ｎＡｓｎＧ１ｎＬｙｓＬｙｓ ＶａＩＧｌｕＰｈｅＬｙｓＩ１ｅＡｓｐ１１ｅＶａＩＶａｔ　ＬｅｕＡ１　ａＰ ｈｅＧ１ｎＬｙｓＡ１　ａｓｅｒｓｅｒｌ　１　ｅＶａｌ　ＴｙｒＬｙｓＬｙｓ Ｇ１　ｕＧ１　ｙＧ１　ｕＧ１　獅uａｌ　Ｇｌ　ｕ ＰｈｅＳｅｒＰｈｅ　ＰｒｏＬｅｕＡ１　ａＰｈｅＴｈｒＶ　ａ　Ｉ　Ｇ１　ｕ Ｌｙｓ　ＬｅｕＴｈｒＧ　１　ｙＳｅ　ｒＧ１　ｙＧ　１　浮kｅｕＴ　ｒｐＴ ｒｐ Ｇ１ｎＡ１ａＧＴｕＡｒｇＡ１ａｓｅｒｓｅｒｓｅｒＬｙｓｓｅｒＴｒｐＩ１ｅ ＴｈｒＰｈｅＡｓｐＬｅｕＬｙｓＡｓｎＬｙｓＧ１ｕＶａＩ　ＳｅｒＶａＩ　Ｌ ｙｓＡｒｇＶａＩ　ＴｈｒＧ　１　ｎＡｓ　ｐＰｒｏＬｙｓ　ＬｅｕＧ１　ｎＭ ｅ　ｔＧ１　ｙＬｙｓ　Ｌｙｓ　kｅｕＰｒｏＬｅｕ Ｈｉ　ｓＬｅｕＴｈｒＬｅｕＰｒｏＧ　１　ｎＡ１　ａＬｅｕＰｒｏＧ　１　ｎ ＴｙｒＡ１　ａＧ１　ｙＳｅｒＧ　１　ｙＡｓｎＬｅｕＴｈ窒kｅｕＡ１　ａ ＬｅｕＧ　１ｕＡ１　ａＬｙｓＴｈｒＧ１　ｙＬｙｓＬｅｕＨ　＋　ｓＧ１　ｎ Ｇ１　ｕＶａＩ　ＡｓｎＬｅｕＶａ　Ｉ　ＶａＩ　ＭｅｔＡ窒■`ｌ　ａＴｈｒ Ｇ１　ｎＬｅｕＧ１　ｎＬｙｓＡｓ　ｎＬｅｕＴｈｒＣｙｓＧ１　ｕＶａ　Ｉ　 Ｔ　ｒｐＧ１　ｙＰｒｏＴｈｒｓｅ　ｒＰｒｏＬｙｓ　Ｌｅ浮lｅｔ　Ｌｅｕ ＳｅｒＬｅｕＬｙｓＬｅｕＧ１　ｕＡｓｎＬｙｓＧ１　ｕＡ１　ａＬｙｓＶａＩ 　ＳｅｒＬｙｓＡｒｇＧ１　ｕＬｙｓＡ１　ａＶａＩＴｒｐuａＩ ＬｅｕＡｓｎＰｒｏＧ１ｕＡ１ａＧ１ｙＭｅｔＴｒｐＧ１ｎＣｙｓＬｅｕＬｅｕ ＳｅｒＡｓｐＳｅｒＧ１ｙＧ１ｎＶａＩＬｅｕＬｅｕＧｌ　ｕＳｅｒＡｓｎ　１ １　ｅＬｙｓＶａＩ　ＬｅｕＰｒｏＴｈｒＴｒｐＳｅｒＴｈｒＰｒｏＶａＩ　Ｇ ｌ　ｎＰｒｏＭｅｔＡ１　ａＬｅ浮秩@１　ｅ ＶａＩ　ＬｅｕＧ１　ｙＧ１　ｙＶａ　Ｉ　Ａ１ａＧ１　ｙＬｅｕＬｅｕＬｅｕ ＰｈｅＩ　ｌｅ（；ｌ　ｙＬｅｕＧ１　ｙＩ　１　ｅＰｈｅoｈｅｃｙｓｌ／ａ １ ＾ｒｇｃｙｓＡｒｇＨ　ｉ　ｓＡｒｇＡｒｇＡｒｇＧ１　ｎＡ１　ａＧ１　ｎＡ ｒｇＭｅｔｓｅｒＧ１　ｎ　１１　ｅＬｙｓＡｒｇＬｅｕＬ■浮rｅｒ Ｇ１　ｕＬｙｓ　ＬｙｓＴｈ　ｒＣｙｓＧ１　ｎＣｙｓＰｒｏＨｉ　ｓＡｒｇＰ ｈｅＧ１　ｎＬｙｓＴｈ　ｒＣｙｓ　Ｓｅ　ｒＰｒｏ　１　P　ｅ　； からなる、本質的に純枠なチンパンジーＣＤ４に関する。

さらに本発明は、次のアミノ酸配列． ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧ１ｙＶａＩＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨｊｓＬｅｕＬｅｕＬｅｕ ＶａＩＬｅｕＧ１ｎＬｅｕＡ１ａＬｅｕＬｅｕＰｒｏＡｌ　ａＡ１　ａＴｈｒＧ １　ｎＧ１ｙＬｙｓＬｙｓＶａｌ　ＶａＩ　ＬｅｕＧ１ｙＬｙｓＬｙｓＧ１ｙＡ ｓｐＴｈｒＶａＩ　Ｇ１ｕＬｅｕsｈｒ ＣｙｓＴｈ　ｒＡ１　ａＳｅｒＧ１　ｎＬｙｓＬｙｓｓｅｒ　Ｉ　１　ｅＧ１　 ｎＰｈｅＨｉ　ｓＴｒｐＬｙｓＡｓｎｓｅｒＡｓｎＧ１　ｎ|１１−　Ｌｙｓ １１ｅＬｅｕＧ１ｙＡｓｎＧ１ｎＧ１ｙＳｅｒＰｈｅＬｅｕＴｈｒＬｙｓＧ１ｙ ＰｒｏｓｅｒＬｙｓＬｅｕＡｓｎＡｓｐＡｒｇ−＃−ＡｓｐＳｅｒＡｒｇＡｒｇ Ｓｅ　ｒＬｅｕＴｒｐＡｓｐＧ１　ｎＧ］ｙＡｓｎＰｈｅ　−　＄　−　Ｌｅｕ 　１１　ｅ　１１　ｅＬｙｓＡｓ氏@ＬｅｕＬｙｓ １　１ｅＧ　’ｌ　ｕＡｓｐｓｅｒＡｓｐＴｈｒＴｙｒ　Ｉ１ｅＣｙｓＧ１　ｕ Ｖａ　Ｉ　Ｇｌ　ｙＡｓｐＧ１　ｎＬｙｓＧ　１ｕＧ　１　浮uａ　］ＧＩ　ｎ Ｌｅｕ ＬｅｕＶａ　Ｉ　ＰｈｅＧ７　ｙＬｅｕＴｈｒＡ　ｌ　ａＡｓｎｓｅｒＡｓｐＴ ｈｒＨ　＋ｓＬｅｕＬｅｕＧ　７　ｎＧ　１　ｙＧ１　ｎｓ■窒kｅｕＴｈｒ ＬｅｕＴｈｒＬｅｕＧ１　ｕｓｅ　ｒＰｒｏＰｒｏＧ　１　ｙＳｅｒＳｅ　ｒＰ ｒｏＳｅｒＶａＩ　Ｇ１　ｎＣｙｓＡｒｇＳｅｒＰｒｏＡｒ■f１　ｙ ＬｙｓＡｓｎ　Ｉ］ｅＧｌ　ｎＧ１　ｙＧ　ｌ　ｙＬｙｓＴｈｒＬｅｕＳｅｒＶ ａ　Ｉ　ＳｅｒＧ１　ｎＬｅｕＧ　１吐ｅｕＧ１ｎＡｓｐｓ■窒f１ｙ ＴｈｒＴｒｐＴｈｒＣｙｓＴｈｒＶａＩ　ＬｅｕＧ１ｎＡｓｎＧ１ｎＬｙｓＬｙ ｓＶａＩＧ１ｕＰｈｅＬｙｓ１１　ｅＡｓｐＴ１ｅＶａＩＶａＩＬｅｕＡ１　ａ ＰｈｅＧ１ｎＬｙｓＡＴａｓｅｒｓｅｒｌ１ｅＶａｌＴｙｒＬｙｓＬｙｓＧ１ｕ Ｇ１ｙＧ１ｕＧ１ｎＶａＩＧ１ｕＰｈｅＳｅｒＰｈｅＰｒｏＬｅｕＡ　］ａＰｈ ｅＴｈｒＶａＩＧ１ｕＬｙｓＬｅｕＴｈｒＧ１ｙＳｅｒＧ１ｙＧ１ｕＬｅｕＴｒ ｐＴｒｐＧ１　ｎＡ１　ａＧ　１　ｕＡｒｇＡ１　ａｓｅｒｓｅｒｓｅｒＬｙｓ ｓｅｒＴｒｐ　１１　ｅＴｈｒＰｈｅＡｓｐＬｅｕＬｙｓＡｓｎＬｙ唐f　１　 ｕ ＶａＩＳｅｒＶａＩＬｙｓＡｒｇＶａＩＴｈｒＧ１ｎＡｓｐＰｒｏＬｙｓＬｅｕ Ｇ１ｎＭｅｔＧ１ｙＬｙｓＬｙｓＬｅｕＰｒｏＬｅｕＨ　ｊ　ｓＬｅｕＴｈｒＬ ｅｕＰｒｏＧ１　ｎＡ　１　ａＬｅｕＰｒｏＧ　１ｎＴｙｒＡ１　ａＧ１　ｙＳ ｅｒＧ１　ｙＡｓｎＬｅｕＴｈｒkｅｕＡ１　ａ ＬｅｕＧ１　ｕＡ１　ａＬｙｓＴｈｒＧ１ｙＬｙｓＬｅｕＨ＋５Ｇ１　ｎＧ１　 ｕＶａＩＡｓｎＬｅｕＶａＩ　ＶａＩＭｅｔＡｒｇＡ１　ａsｈｒ Ｇ　１　ｎＬｅｕＧ　１　ｎＬｙｓＡｓｎＬｅｕＴｈｒＣｙｓＧ　１　ｕＶａ　 Ｉ　ＴｒｐＧ　１ｙＰｒｏＴｈｒＳｅｒＰｒｏＬｙｓＬｅｕlｅｔＬｅｕ ＳｅｒＬｅｕＬｙｓＬｅｕＧ１ｕＡｓｎＬｙｓＧ１ｕＡｌａＬｙｓＶａ１５ｅｒ ＬｙｓＡｒｇＧ１ｕＬｙｓＡ１ａｈａ１丁ｒｐＶａＩＬｅｕＡｓｎＰｒｏＧ１ｕ Ａ１ａＧ１ｙＭｅｔＴｒｐＧ１ｎＣｙｓＬｅｕＬｅｕＳｅｒＡｓｐＳｅｒＧ１ｙ Ｇ１ｎＶａＩＬｅｕＬｅｕＧ　１　ｕＳｅｒＡｓｎ　Ｉ　１　ｅＬｙｓＶａ　１ ＬｅｕＰｒｏＴｈｒＴｒｐＳｅ　ｒＴｈｒＰｒｏＶａＩ　Ｇ　１　ｎＰｒｏＭｅ ｔＡ１@ａＬｅｕ　Ｉ　１　ｅ ＶａＩＬｅｕＧ１ｙＧ１ｙＶａＩＡ＋　ａＧ１ｙＬｅｕＬｅｕＬｅｕＰｈｅＩ１ ｅＧ１ｙＬｅｕＧ１ｙＴ１ｅＰｈｅＰｈｅＣｙｓＶａＩＡｒｇＣｙｓＡｒｇＨｊ 　ｓＡｒｇＡｒｇＡｒｇＧｌ　ｎＡ１　ａ−％−ＡｒｇＭｅｔＳｅｒＧ　Ｉｎ　 Ｉ　ＴｅＬｙｓＡｒｇＬｅｕＬｅｕrｅ　ｒ Ｇ１　ｕＬｙｓＬｙｓＴｈｒＣｙｓＧ１ｎＣｙｓＰｒｏＨ　１ｓＡｒｇＰｈｅＧ １　ｎＬｙｓＴｈｒＣｙｓＳｅｒＰｒｏＩ１　ｅ　，［上記の配列中、 一〇一はＴｈｒまたはＩｌｅを表し， 一＃一はＶａｔまたはＡｌａを表し： −＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表し． −％一はＧｉｎまたはＧｌｕを表す］ からなる本質的に純枠な非ヒトＣＤ４分子、またはそのグリコシル化誘導体に関 する。

さらに本発明は、次にアミノ酸配列： ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧ　１　ｙＶａ　Ｉ　ＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨ　ｉ　ｓ　Ｌｅ ｕＬｅｕＬｅｕＶａ　Ｉ　ＬｅｕＧ　１　ｎＬｅｕＡ　１　＝@ＬｅｕＬｅｕＰ ｒｏ Ｇ１　ｕＳｅｒＡｓｎ　ＩＴ　ｅＬｙｓＶａ　］ＬｅｕＰｒｏＴｈ　ｒＴｒｐｓ ｅｒＴｈｒＰｒｏＶａ　Ｉ　Ｇ１　ｎＰｒｏＭｅｔＡ１　ａkｅｕ　１１　ｅ ＶａＩＬｅｕＧｌｙＧ１ｙＶａ＋Ａ１ａＧ１ｙＬｅｕＬｅｕＬｅｕＰｈｅｌ１ｅ ＧｌｙＬｅｕＧＴｙｌ１ｅＰｈｅＰｈｅＣｙｓＶａ１［上記の配列中、 一＠一はＴｈｒまたはｌｉｅを表し： 一＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表す］ からなるヒトＣＤ４に関連するｇｐｌ２０結合性分子、またはそのグリコ／ル化 誘導体（たたし−＠−およひ〜＄一の少なくとも１つはＴｈｒである）に関する 。

さらに本発明は、ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐｌ２０に結合する非ヒ［・霊長類ＣＤ ４断片に関ｔる。好ましくは、このような非ヒト霊長ＱＣＤ４断片は水性溶液に 可溶である。

具体的には、本発明は、アカゲザル由来であ−）で次のアミノ酸配列： ＭｅｔＡｓ　ｎＡｒｇＧ　Ｔｙ　Ｉ　Ｔ　ｅＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨ　１ｓ　Ｌｅ ｕＬｅｕＬｅｕＶａ　］ＬｅｕＧ１ｎＬｅｕＡ１　ａＬｅｕkｅｕＰｒｏ Ａｌ　ａＶａ　＋ＴｈｒＧ１ｎＧ　１ｙＬｙｓＬｙｓｌ／ａＩＶａ　１ＬｅｕＧ 　］ｙＬｙｓＬｙｓＧ１　ｙＡｓｐＴｈｒＶａｌ　Ｇ　＋ｕkｅｕＴｈｒ ＣｙｓＴｈｒＡ１　ａＳｅｒＧ１　ｎＬｙｓＬｙｓＡｓｎＴｈｒＧ１　ｎＰｈｅ ＨｊｓＴｒｐＬｙｓＡｓｎＳｅｒＡｓｎＧ１　ｎ　Ｉ　ｌｅ魔凾■ １　１ｅＬｅｕＧ　１　ｙｌ　＋ｅＧ　１ｎＧ　１　ｙＬｅｕＰｈｅＬｅｕＴｈ ｒＬｙｓＧ　１　ｙＰｒｏＳｅｒＬｙｓＬｅｕＳｅｒＡｓｐ`ｒｇＡＴ　ａ Ａｓ　ｐｓｅ　ｒＡｒｇＬｙｓｓｅｒＬｅ　ｕＴｒｐＡｓ　ｐＧ１ｎＧ１　ｙＣ ｙｓ　ＰｈｅＳｅｒＭｅ　ｔ　ｒ　ｌｅ　Ｉ　１ｅＬｙｓＡ唐獅kｅｕＬｙｓ １　１ｅＣ１ｕＡｓｐＳｅｒＡｓｐＴｈｒＴｙｒ　Ｉ　］ｅｃｙｓＧ　Ｔ　ｕＶ ａ　１Ｇ１　ｕＡｓｎＬｙｓＬｙｓＧ１ｕＧ　１ｕＶａ　＋f１ｕＬｅｕ ＬｅｕＶａＩ　ＰｈｅＧ１　ｙＬｅｕＴｈｒＡ１　ａＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒ Ｈｉ　ｓＬｅｕＬｅｕ．からなる可溶性ＣＩ，＋４断片に関する。

さらに本発明は、次のアミノ酸配列： ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧｌｙＶａＩＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨ　１ｓＬｅｕＬｅｕＬｅ ｕＶａ１１ｅｕＧ１ｎＬｅｕＡ１ａＬｅｕＬｅｕＰｒｏＡｌ　ａＡ７ａＴｈｒＧ １ｎＧ１ｙＬｙｓＬｙｓＶａＩＶａＩＬｅｕＧ１ｙＬｙｓＬｙｓＧ１ｙＡｓｐＴ ｈｒＶａＩＧ＋ｕＬｅｕＴｈｒＣｙｓＴｈｒＡ　１　ａｓｅｒＧ　１　ｎＬ　ｙ ｓ　ＬｙｓＳｅ　ｒ　Ｉ　１ｅＧ　１　ｎＰｈｅＨ　ｊｓＴｒｐＬｙｓＡｓ　ｎ ｓｅｒＡｓ獅f　１ｎＴｈｒＬｙｓ １　１ｅＬｅｕＧ　１　ｙＡｓｎＧ　１ｎＧ　１　ｙ５ｅｒＰｈｅＬｅｕＴｈｒ ＬｙｓＧ　１　ｙＰｒｏＳｅｒＬｙｓ　ＬｅｕＡｓｎＡｓ　垂`ｒｇＶａ　Ｉ ＡｓｐＳｅｒＡｒｇＡｒｇｓｅｒＬｅｕＴｒｐＡｓｐＧ１ｎＧ１ｙＡｓｎＰｈｅ ＴｈｒＬｅｕ１１　ｅ　Ｉ１ｅＬｙｓＡｓｎＬｅｕＬｙｓ１　１　ｅＧ　１ｕＡ ｓｐＳｅｒＡｓｐ７ｈｒＴｙｒＪ　１　ｅＣｙｓＧ　１　ｕνａｌＧ？ｙＡｓｐ Ｇ７ｎＬｙｓＧ７ｕＧ７ｕＶａ７Ｇ７獅kｅｕ ＬｅｕＶａ　Ｉ　ＰｈｅＧ　１　ｙＬｅｕＴｈｒＡ　１ａＡｓ　ｎＳｅｒＡｓｐ ＴｈｒＨ　＋ｓ　ＬｅｕＬｅｕ　．からなる、可溶性のチンパンジーＣＤ４断片 に関する。

さらに本発明は、次のアミノ酸配列 ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧ１　ｙＶａＩ　ＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨｊ　ｓＬｅｕＬｅｕ ＬｅｕＶａｌ　Ｌｅｊ＋Ｇ　１　ｎＬｅｕＡ１　ａＬｅｕＬ■浮oｒｏ Ａｌ　＆Ａ１　ａＴｈｒＧ１　ｎＧ１　ｙＬｙｓ　ＬｙｓＶａＩＶａｌ　Ｌｅｕ Ｇ１　ｙＬｙｓＬｙｓＧ１　ｙＡｓｐＴｈｒＶａＩ　Ｇ１　浮kｅｕＴｈｒ ＣｙｓＴｈｒＡ１ａＳｅｒＧ１ｎＬｙｓＬｙｓｓｅｒＩ？ｅＧＴｎＰｈｅＨｉｓ ＴｒｐＬｙｓＡｓｎｓｅｒＡｓｎＧ１ｎ−ＬＬｙｓ１　１　ｅＬｅ　ｕＧ１　ｙ Ａｓ　ｎＧ１　ｎＧ１　ｙｓｅ　ｒＰｈｅ　ＬｅｕＴｈ　ｒＬｙｓＧ１　ｙＰｒ ｏｓｅｒＬｙｓ　ＬｅｕＡｓｎ`ｓｐＡｒｇ　−　＃　一 ＡｓｐＳｅｒＡｒｇＡｒｇＳｅｒＬｅｕＴｒｐＡｓｐＧ１ｎＧ１ｙＡｓｎＰｈｅ −＄−Ｌｅｕ１１ｅＩ１ｅＬｙｓＡｓｎＬｅｕＬｙｓｆｌ　ｅＧ　１’ｕＡｓｐ ＳｅｒＡｓｐＴｈｒＴｙｒｌ　１　ｅｃｙｓＧ１　ｕＶａＩ　Ｇｌ　ｙＡｓｐＧ １　ｎＬｙｓＧ１　ｕＧＴ　ｕＶ＝@ＩＧＩ　ｎＬｅｕ ＬｅｕＶａｌＰｈｅＧ＋ｙＬｅｕＴｈｒＡ１ａＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒＨｊｓ ＬｅｕＬｅｕ［上記の配列中、 一＠一はＴ’ｈｒまたはＩｃｅを表し；−＃一はＶａｌまたはＡｌａを表し， −＄一はＴｈｒまたはＰｒｏを表す］ からなるグリコリル化可能なｇｐ　１　２０結合性分子、そのグリコリル化誘導 体に関する。

さらに本発明は、ヒｌ−ＣＤ４断片に関連するグリコ／ル化が可能なｇｐ　１２ ０結合性分子に関する。具体的には、本発明は、次のアミノ酸配列。

ＭｅｔＡｓｎＡｒｇＧｌ　ｙＶａＩ　ＰｒｏＰｈｅＡｒｇＨｊ　ｓ　ＬｅｕＬｅ ｕＬｅｕＶａＩ　ＬｅｕＧｌ　ｎＬｅｕＡｌ　ａＬｅｕＬｅ浮oｒ。

ＬｅｕＶａｌＰｈｅＧ？ｙＬｅｕＴｈｒＡ１ａＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒＨ４ｓ ＬｅｕＬｅｕ［上記の配列中、 一＠−はＴｈｒまたはＩｌｅを表し； −＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表す］ からなる、グリコジル化されたヒトＣＤ４断片、そのグリフシル化誘導体（ただ し−＠−および一＄−の少なくとも１つはＴｈｒである）に関する。

さらに本発明は、細胞毒ポリペプチドに結合した非ヒト霊長類ＣＤ４もしくは本 発明のｇｐ　１２０結合性分子あるいはそのＨＩＶまたはＳＩＶ結合性断片から なる、融合タンパク質に関する。

さらに本発明は、クラスＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩ　ｇＧ３の重鎮免疫グロブリ ンからなる第２のタンパク質にＣ末端で融合した、非ヒト霊長類ＣＤ４もしくは 本発明のｇｐ　１２０結合性分子あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合 できるその断片からなる融合タンパク質てあって、該重鎮免疫グロブリンの可変 領域がＣＤ４またはそのＨＩＶｇｐ１２０結合性断片に置換されている融合タン パク質に関する。

さらに本発明は、 （１）免疫グロブリン軽鎖：に結合した、（２）非ヒト霊長類ＣＤ４もしくはＨ ＩＶまたはＳＩＶｇｐｌ、２０に結合するその断片と免疫グロブリン重鎖との融 合タンパク質；からなる免疫グロブリン様分子に関する。

さらに本発明は、可変領域が削除された免疫グロブリン軽鎖からなる第２のタン パク質にＣ末端で融合した、非ヒト霊長類ＣＤ４もしくは本発明のｇｐ　ｌ　２ ０結合分子あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するその断片からなる 融合タンパク質に関する。

さらに本発明は、 １）免疫グロブリン重鎮、に結合した、２）非ヒト霊長類ＣＤ４もしくは本発明 のｇｐ　１２０結合分子あるいはＪ（ＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するそ の断片と免疫グロブリン軽鎖との融合タンパク質： からなる免疫グロブリン様分子に関する。

さらに本発明は、 １）治療的に有効な量の非ヒト霊長類ＣＤ４：および２）医薬的に許容される担 体： からなる医薬組成物に関する。

さらに本発明は、 １）治療的に有効な量の可溶性非ヒトＣＤ４断片；および２）医薬的に許容され る担体； からなる医薬組成物に関する。

さらに本発明は、本発明のタンパク質、糖タンパク質、融合タンパク質および免 疫グロブリン様分子からなる医薬組成物に関する。

さらに本発明は、本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４とＨＩＶまたはＳＩＶｇｌ ）１２０との複合体に関する。

さらに本発明は、本発明の非ヒト；長類ＣＤ４断片およびＨＩＶまたはＳＩＶｇ ｐ１２０からなる複合体に関する。

さらに本発明は、本発明の融合タンパク質および免疫グロブリン様分子並ひにＨ Ｉ　ＶまたはＳＴＶｇｐ１２０からなる複合体に関する。

さらに本発明は、グリコジル化可能なｇｐ　１２０結合性分子とＨＩＶまたはＳ ＩＶｇｐ１２０との複合体に関する。

さらに本発明は、ＨＩＶまたＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を必 要とする動物に対して、治療的に有効な量の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４ またはその可溶性断片を投与することからなる方法、に関する。

さらに本発明は、ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を 必要とする動物に対して、治療的に有効な量の本発明の融合タンパク質の１つを 投与することからなる方法、に関する。

さらに本発明は、ＨＩＶまたはＳＩｖ感染の治療法であって、そのような治療を 必要とする動物に対して、治療的に有効な量の本発明の免疫グロブリン様分子の １つを投与することからなる方法、に関する。

さらに本発明は、ＨＩＶまたはＳＩｖ感染の治療法であって、そのような治療を 必要とする動物に対して、治療的に有効な量の本発明のｇｐ１２０結合性分子を 投与することからなる方法、に関する。

さらに本発明は、試料中のＨＩＶまたはＳＩＶｇＴ）１２０の検出法であって、 （ａ）ＨＩＶまたはＳｒＶｇｌ）１２０を含有すると思われる試料を本発明の融 合タンパク質または免疫グロブリン様分子と接触させ：（ｂ）複合体が生成する か否かを検出する：ことからなる方法、に関する。

さらに本発明は、試料中のＨＩ　ＶまたはＳＩＶｇｐ１２０の検出法であっそ、 （ａ）ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０を含有すると思われる試料を、本質的に純 粋な非ヒト霊長類ＣＤ４もしくは［ＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するその 断片と接触させ：（ｂ）複合体が生成したか否かを検出する。

ことからなる方法、に関する。

本発明は、非ヒト霊長類がヒトＣＤ４とはアミノ酸配列が異なるＣＤ４を有する という発見に関連している。または本発明は、非ヒト霊長類ＣＤ４をヒトの細胞 表面上で発現させた場合、ヒトＣＤ４をその細胞表面上で発現させた時と比較し て、多核巨大細胞あるいはシンンチウムの生成が著しく少ないという発見にも関 連している。

さらに本発明は、チンパンジー由来の非ヒト霊長類ＣＤ４の８７位における、ヒ トＣＤ４に存在するグルタミン酸残基ではな（、グリシン残基の存在が、シンシ チウム生成の欠如に寄与しているという発見にも関連している。その結果として 、チンパンジー由来のＣＤ４分子が、ンンンチウム形成の原因となる能力を伴わ ずに治療的応用に使用できることになる。。

また本発明は、チンパンジーＣＤ４か２つのグリコジル部位（位置３２および６ ６（ＡＳＮ））を含有しているという予期しなかった発見にも関連している。こ の発見は、ｇ　ｐｌ、　２０に結合し、インビボての安定性が増大すると見込ま れるグリコジル化されたｇｐ１２０結合性分子およびその断片の調製を可能にす る。有利なことに、このグリコモル化ｇｐ１２０結合性分子およびその断片は、 グリコジル化されていないヒトまたは他の霊長類のＣＤ４分子よりも低い頻度で 動物に投与できる。従って本発明はさらに、１または複数のグリコジル化部位を 有する霊長類（ヒトを含む）のＣＤ４分子、例えばアミノ酸残基３４および６８ 、あるいは３４のみ、あるいは６８のみでのチンパンジー配列、に関する。さら に本発明は、その分子がｇｐ１２０に結合する限りにおいて、異なった位置のグ リコジル化部位を有する他のＣＤ４分子に関する。

好ましい態様の説明 本発明は、非ヒト霊長類ＣＤ４、そのＨＩＶｇｐ１２０結合性断片、そのＨＩ　 Ｖ　ｇ　ｐ　１．２０結合性可溶性断片、その融合タンパク質並びに免疫グロブ リン様分子に関する。また本発明は、グリコジル化され得るｇｐ１２０結合性分 子、そのＨＩ　Ｖ　ｇ　ｐ　１２０結合性断片、その融合タンパク質およびその 免疫グロブリン様分子に関する。

本発明の核酸分子はＤＮＡ分子であるか、もしくはＲＮ　Ａ分子であってもよい 。

“可溶性”なる用語は、界面活性剤を含有しない水性緩衝液、血液、血漿、血清 なとの体液を含む（たたしこれらに限定されない）水性溶液に溶解し得るＣＤ４ 断片を意味する。

また本発明は、タンパク質および糖タンパク質を得るために、形質転換した宿主 中でこれらの新規核酸分子を発現させることにも関する。また本発明は、これら のタンパク質および糖タンパク質をＨＩＶ感染の治療および診断に使用すること に関する。

具体的には、本発明は、免疫グロブリン軽鎖または重鎖からなる融合タンパク質 を指定する該核酸分子を、相補性軽鎖または重鎖免疫グロブリンを発現してＨＩ 　ＶまたはＳ　Ｉ　Ｖｇｐ　１２０に結合する免疫グロブリン様分子Ｇ４える哺 乳類宿主中で発現させることに関する。

本発明のＣＤ４タンパク質、糖タンパク質、ＣＤ４断片、ｇｐ１２０結合性分子 、融合タンパク質および免疫グロブリン様分子を、ＨＩＶまたはＳＩＶ感染を冶 療する目的で動物に投与することができる。“ＨＩＶ感染”なる用語は、ＡＩＤ Ｓ，ＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）を有する状態、もしくは動物がＡＩＤＳウイ ルスを保持しているが、ＡＩＤＳまたはＡＲＣの臨床的症状を示していない状態 を意味する。“ＳＩ■感染”なる用語は、シミアン免疫不全ウイルスに感染して いる状態を意味する。

“動物”なる用語は、本発明のＣＤ４タンパク質、糖タンパク質、ＣＤ４断片、 ｇｐ　１　２０結合性分子、融合タンパク質およひ免疫グロブリン様分子の投与 によって利益を受け得るすべての動物を意味する。そのような動物で最も重要で あるものはヒトであるが、本発明はヒトに限定されない。

“融合タンパク質”゜なる用語は、免疫グロブリン鎖にＣ末端で結合した本発明 のＣＤ４分子もしくはｇｐ　１　２０に結合できるその断片からなり、その免疫 グロブリンのＮ末端部分が非ヒト霊長類ＣＤ４て置換されている融合されたタン パク質を意味する。あるいは、ＣＤ４分子またはその断片かりシンやジフテリア 毒素なとの細胞毒に結合していてもよい。

“非ヒト霊長類”なる用語は、真猿類のヒト科以外のあらゆる構成員を意味する 。このような非ヒト霊長類は、オマキザル上科、オマキザル科（カッラザル、ホ エザル、クモザルおよびリスザルを含む新世界ザル）およびキヌザル科（マーモ セットを含む），オナガザル上科、オナガザル科（マカク、マンドリル、ヒヒ、 テングザルおよびインドセイクレノドハヌマンモンキー（ｓａｃｒｅｄ　ｈａｎ ｕｍａｎ　ｍｏｎｋｅｙｓ　ｏｆ　Ｉｎｄｉａ）を含む）；およびヒト上科、類 人猿科（デナガザル、オランウータン、ゴリラおよびチンパンジーを含む）を包 含する。

アカゲザルはマカクの一種である。

本発明の核酸分子およびタンパク質は、本明細書に開示されている方法に従い、 本明細書に開示されているアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を用いて、よく知られ ている固相合成法で調製することかできる。

以下の実施例によって完全に記述されているように、チンパンジー由来のＣＤ４ の位置８７のｇ　’ｌ　”／残基は、ヒトＣＤ４中に存在しシンンチウム形成に 寄与するＧｌｕ残基とは異なっている。この発見は、シン／チウム形成を媒介し ない新規ＣＤ４分子の製造を可能にする。チンパンシーＣＤ４分子に関連するこ のようなタンノＮ＋ク質の一例は、次のアミノ酸配列： ＬｅｕＶａ　Ｉ　ＰｈｅＧ　１　ｙＬｅ　ｕＴｈｒＡ１　ａＡｓｎｓｅｒＡｓ　 ｐＴｈｒＨ　ｉ　ｓ　Ｌｅｕ　ＬｅｕＧ　１　ｎＧ１　ｙＧ@１　ｎｓｅｒＬｅ ｕＴｈｒ ＬｅｕＴｈｒＬ　ｅｕＧ　１　ｕｓｅ　ｒＰｒｏＰｒｏＧ　１　ｙＳｅｒＳｅｒ ＰｒｏＳｅｒＶａ　ＩＧ１　ｎＣｙｓＡｒｇＳｅ　ｒＰｒｏ`ｒｇＧ　１　ｙ ＬｙｓＡｓｎ　１１　ｅＧ１　ｎＧ１　ｙＧ１　ｙＬｙｓＴｈｒＬｅｕＳｅｒＶ ａＩ　ＳｅｒＧ１　ｎＬｅｕＧ１　ｕＬｅｕＧ１　ｎＡｓｐ唐■窒f１　ｙ ＴｈｒＴｒｐＴｈｒＣｙｓＴｈｒＶａ　Ｉ　ＬｅｕＧ１　ｎＡｓｎＧ１　ｎＬｙ ｓ　ＬｙｓＶａ　Ｉ　Ｇ１　ｕＰｈｅＬｙｓ　Ｉ　１　ｅＡ唐吹@Ｉ　１　ｅＶ ａ　Ｉ Ｖａ　Ｉ　ＬｅｕＡ１　ａＰｈｅＧ　１　ｎＬｙｓＡ１　ａｓｅｒｓｅｒＩ　１ 　ｅＶａｌ　ＴｙｒＬｙｓＬｙｓＧ　１　ｕＧ１　ｙＧ　１@ｕＧ１　ｎＶａ　 Ｉ　Ｇ　１　ｕ ＰｈｅＳｅｒＰｈｅＰｒｏＬｅｕＡ１ａＰｈｅＴｈｒＶａＩＧｌｕＬｙｓＬｅｕ ＴｈｒＧ１ｙｓｅｒＧ７ｙＧ１ｕＬｅｕ丁ｒｐＴｒｐＧ１　ｎＡ１　ａＧ　７　 ｕＡｒｇＡ１　ａｓｅｒｓｅｒ５ｅｒＬｙｓｓｅｒＴｒｐ　Ｉ　１　ｅＴｈｒＰ ｈｅＡｓ　ｐＬｅｕＬｙｓＡｓｎkｙｓＧ１　ｕ ＶａＩＳｅｒＶａＩＬｙｓＡｒｇＶａＩＴｈｒＧ１ｎＡｓｐＰｒｏＬｙｓＬｅｕ Ｇ１ｎＭｅｔＧ１ｙＬｙｓＬｙｓＬｅｕＰｒｏＬｅｕＨｉ　ｓ　ＬｅｕＴｈｒＬ ｅｕＰｒｏＧ１　ｎＡ１　ａＬｅｕ　ＰｒｏＧ１　ｎＴｙｒＡ１　ａＧ１　ｙｓ ｅｒＧ１　ｙＡｓｎＬｅｕＴｈｒkｅｕＡ１　ａ ＬｅｕＧ　１ｕＡ１　ａＬｙｓＴｈｒＧｌ　ｙＬｙｓ　ＬｅｕＨｉ　ｓＧ　１ｎ Ｇ１　ｕＶａｌ　Ａｓ．ｎＬｅｕＶａＩ　ＶａＩ　ＭｅｔＡ窒■`１　ａＴｈｒ Ｇ　１　ｎＬｅｕＧ　１　ｎ　Ｌｙ　ｓＡｓｎＬｅｕＴｈｒＣｙｓＧ　１　ｕＶ ａ　Ｉ　ＴｒｐＧ　１　ｙＰｒｏＴｈ　ｒｓｅｒＰｒｏＬｙ刀@ＬｅｕＭｅ　ｔ Ｌｅｕ ＳｅｒＬｅｕＬｙｓＬｅｕＧ１　ｕＡｓｎＬｙｓＧ１　ｕＡ１　ａＬｙｓＶａ　 Ｉ　ＳｅｒＬｙｓＡｒｇＧ１　ｕＬｙｓＡ１　ａＶａ　Ｉ　sｒｐＶａ　Ｉ ＬｅｕＡｓｎＰｒｏ［；１ｕＡ１ａＧ１ｙＭｅｔＴｒｐＧ１ｎＣｙｓＬｅｕＬｅ ｕＳｅｒＡｓｐＳｅｒＧ１ｙＧ１ｎＶａＩＬｅｕＬｅｕＧｌ　ｕＳｅｒＡｓｎ　 １１　ｅＬｙｓＶａ　Ｉ　ＬｅｕＰｒｏＴｈｒＴｒｐＳｅｒＴｈｒＰｒｏＶａ　 ＩＧ１　ｎＰｒｏＭｅｔＡ１　ａＬ■普@ｒ　ｌｅ Ｖａｌ　ＬｅｕＣ　１ｙＧ１　ｙＶａｌＡ１ａＧ　１ｙＬｅｕＬｅｕＬｅｕＰｈ ｅ　１１　ｅＧ１ｙＬｅｕＧ　ｌｙｌ　１ｅＰｈｅＰｈｅＣ凾唐uａ　Ｉ ＡｒｇＣｙ　ｓＡｒｇＨ　１ｓＡｒｇＡｒｇＡｒｇＧ　１　ｎＡ１　ａ　−％　 −　ＡｒｇＭｅｔ　ＳｅｒＧ１　ｎ　Ｉ］ｅ　ＬｙｓＡｒｇkｅｕＬｅ　ｕＳｅ ｒ Ｇ】ｕＬｙｓＬｙｓＴｈｒＣｙｓＧ１　ｎＣｙｓＰｒｏＨ　ｊ　ｓＡｒｇＰｈｅ Ｇ　＋ｎＬｙｓＴｈｒＣｙｓＳｅｒＰｒｏ　１１　ｅ　，［上記の配列中、 一＠−はＴｈｒまたはｌｉｅを表し， −＃−はＶａｌまたはＡｌａを表し； −＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表し， 一％−はＧｌｎまたはＧｌｕを表す］ またはそのグリフシル化誘導体からなる。

この一群のタンパク質および糖タン／ｆク質をコードする組換えＤＮＡ分子は次 の配列： １２１　ＴＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＣＡＧＡＡＩＩ；ＡＡＧＡＣＣＡＴＡＣＡＡ ＴＴＣＣＡＣＴＧＧＭＡＡＡＣＴＣＣＡＡＣＣＡＧＡＹＡＡ`Ｇ ＡＴＴＣＴＧＧＧＡＡＡＴＣＡＧＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＡＡＣＴＭＡＧＧＴＣ ＣＡ丁ＣＣＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＡＴＣＧＣＧＹＴ２４１　ＧＡＣＴＣＭＧＭＣ ＭＧＣＣＴＴＴＧＧＧＡＣＣＭＧＧＭＡＣＴＴＴ１ｊＣＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＭ ＧＭＴＣＴＴＭＧＡＴＡＧＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＴＡＣＴＴＡＣＡＴＣＴＧＴ［ ｌＡＡＧＴＧＧ［；ＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧｆｕＧＧＡＧＧＴＧＣＭＴＴＧ［，Ｔ ＧＴＣ丁ＧＴＭＡＡＣＧＧＧＴＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＡＧ ＡＴＧＧＧＣＭＧＡＡＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣ８４１　ＣＡＣＣＴＣＡＣＣＣＴＧ ＣＣＣＣＡＧＧＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＴＡＴＧＣ丁ＧＧＣＴＣＴＧＧＭＡＣＣ ＴＣＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＴＧＡＡＧＣＧＡＡＡＡＣＡＧ　ＧＡＡＡＧＴＴ　 ＧＣＡＴＣＡＧ　ＧＡＡＧ　Ｔ　ＧＡＡＣＣＴＣＧＴＧＧＴ　ＧＡＴＧＡＧＡＧ 　ＣbＡＣＴ ９６Ｘ　ＣＡＧＣＴＣＣＡＧＡＡＡＡＡＴＴＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＴＧＴＧ ＧＧＧＡＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴf Ａ　Ｇ　ＣＴＴ　Ｇ　ＡＡＡ　ＣＴ　Ｇ　Ｇ　Ａ　Ｇ　ＡＡ　ＣＡＡ　Ｇ　Ｇ　 Ａ　Ｇ　Ｇ　ＣＡＡＡ　Ｇ　Ｇ　Ｔ　ＣＴ　ＣＧ　ＡＡ　Ｇ@ＣＧ　Ｇ　Ｇ　Ａ 　Ｇ　ＡＡ　Ｇ　Ｇ　ＣＧ　Ｇ　Ｔ　Ｇ　Ｔ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｔ　Ｇ１０８）　Ｃ ＴＧＡＡＣＣＣＴＧＡＧＧＣＧＧ［、ＧＡＴＧＴＧＧＣＡＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧ ＡＧＴＧＡＣＴＣＧＧＧＡ［：ＡＧＧＴＣＣＴfＣＴＧ ＧＭＴＣＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＴＧＣＣＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＡＣＣＣ ＣＧＧＴＧＣＡＧＣＣＡＡＴＧＧＣＣＣＴＧＡＴＴ１２０１　ＣＴＧＣＴＧＧＧ ＧＧＧＣＧＴＣＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＴ丁ＴＣＡｌ’ＴＧ（、ＣＣＴＡ ＧＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧsＧＴＣ ＡＧＧＴＧＣＣＧＧＣＡＣＣＧＭＧＧＣＧＣＣＭＧＣＡＳＡＧＣＧＧＡＴＧＴＣ 丁ＣＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＡＣＴＣＣＴＣＡＧＴ１３２１　ＧＡＧＭＧＡＡＧＡ ＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＡＣＣＧＧＴＴＴＣＡＧＡＡＧＡＣＡＴＧＴＡ ＧＣＣＣＣＡＴＴＴＧＡ［１記の配列中、 ＹはＣまたはＴを表し。

ＷはＡまたはＣを表（７゜ ＳはＣまたはＧを表す］ またはその同義性変異体を有「る。

（以下余白） 一般に免疫グロブリンからなる融合・タンパク質を調製する際に、免疫グロブ１ 月・の削除部分はその可変領域である。本発明の融合タンパク質は、可変領域を 削除し、ＯＤ４分子またはそのＨｉ　Ｖ　ｇｐ１２０結合性断片にＩＮき換スー るたけ以外の免疫グロブリンからなっていでも、よい。例えば、免疫グｖ７プリ ン鎖のｖＩＩおよびＣＨ１領域を削除することもてきる。実際には、免疫グロブ リン重鎖のＮ末端部分は、削除しまた残りの断１″ｌ゛か抗体ｊ、へｆクター機 能または他の機構によっζ細町の死滅を媒介する限りにおいて、どのような爪を 削除し、てもよい。補体の結合に必要な最小の配列はトメ−インＣＨ２およびＣ Ｈ３を包含する。ヒンジ領域によってＦＣ部分を結合させることは、補足結合の 効率を増大させるのに有利である。

本発明のＣ）〕４４分とその融合タンパク質は、完全なＣＤ　４記列、あるいは ３７２アミノ酸の細胞外領域および膜内ドメイン、ち（、＜は細胞外領域のみか らなっていてもよい。さらにこの融合タンパク質か、Ｉ］Ｉ　Ｖ　ｇ　ｐ　１２ ０結合性を維持している細胞外領域の断片からなっていてもよい。ＣＤ４の創胞 夕１、ドメインは４・つの連続した領域から構成されており、それぞれの領域は 免疫軽鎖のり変および結合（Ｖ−Ｊ）ドメイン並びに免疫グロブリン遺伝子上材 （スーパーファミリー）の他の構成要素中の関連した領域に類似したアミノ酸と 構造を灯している。ＣＤ４のこれらの購造丁の類似領域はＶｌ、■、、＼７３お よびＶ４Ｆ・メインと命名されている。Ｐ　ＣＴ’出願公開番号ＷＯ３９１０２ ９２２（１，９８８年１０月３日公開）を参照の１−と。したかゲＣ非ヒト・τ 長類ＣＤ４およびその融合クンバク質は、このような結合領域のどのよ）な紹み 合わぜからなつでいてもよい１−１一般に本発明のＣＤ４タンパク質および糖タ ンパク質の寸・＼ての寥１片は、それらがｇり１２０への結合性を残Ｉ、ている 限り使用することかできる。

ｇ　Ｔ）　１．２０結合性ＣＤ　４断片は、チンバンジ・−ＣＤ４をコードする Ｄ：’Ｊ　Ａ配列を位置６０３のＮｈｅ部位で切断（２・つの結合ドメインをコ ートする１分子が得られる）するか、あるいは位置４０５のＢｓｐＭ１部位で切 断（１ドメインをコードする１分子か得られる）することによって得ることかで きる。あるいは、アカケザルＣＤ４をコートするＤ　Ｎ　Ａ分子を、位置６０： ３のＮｈｅ部位で切断（２つのドメインをコートする１分子か得、−１れる）す るか、または位置４０５のＢ　Ｓ　ｐ　Ｍ　１部位で切断（１トメ、（ンをコー ドする１分子が得られる）するこ、ｌ：ちできる。他σ）断片を例えばｊ−キソ スタレアー、セを用いて得ることかできる。次にこのＤ　ＮＡ断片をクロー−− −ングヘクター中に組ろ入れ、これを宿］二中に導入し、た（（、ｇ　ｐ　１． ２０を結ｆ〒するタンパク質の存在につい【、形質転換し７た宿主をスクリーニ ゛ングすることかできろ。特異的結合活性ｉｌｌ：　−）いてクローン庇−スク リーニングする方法は当業者によく知られている。好ましくは、このようなＣＤ ４断片は水性溶液に可溶である。。

融合タンパク質か免疫グロブリン軽鎖からなる場合、重鎖■ｇと安定な複合体を 形成するのに必要とされる息子にはそのｉｇ鎖を削除しないことが必要Ｓある。

只体的１・”Ｚは、ジスルフィド結合の形成に必要なンスー／イン残基が、重鎖 および軽鎖の画部分に保存されていなければならない。

宿主例えば哺乳類細胞中で発現する場合、その融合タンパク質は、その細胞によ って分泌され、ｇｐ　１２０に結合し得る機能的な免疫グロブリン様分子を与え る他の軽または重１ｇ鎖を伴っていてもよい。このｇｐ　１２０は溶液中にあっ てもよいし、感染した細胞表面上に発現してもよいし、あるいはＨＩＶウィルス 自体の表面上に存在していてもよい。あるいは、この融合タンパク質を、他の軽 または重１ｇ鎖を分泌しない哺乳類細胞中で発現させてもよい。これらの条件下 で発現させた場合、その融合タンパク質はホモ二量体を形成するであろう。

本発明の実施にはゲノム配列またはｃＤＮＡ配列を使用することができる。ゲノ ム配列は天然のプロモーター構造を含有しているので、骨Ｍ腫細胞中で効率よく 発現する。

キメラ免疫グロブリン様分子に用いるクローン化抗体の定常領域は、との哺乳類 供給源由来のものであってもよい。これらは補体結合性またはＡＤＣＣ活性であ り得る。この定常領域を、ＩｇＧ１、Ｉ　ｇＧ３またはＩｇＭを含む適切なイソ タイプのいずれからも導くことかできる。

従来の技術に従い、平滑末端またはスタガード（ｓ　ｔ　ａｇｇｅｒｅｄ）末端 を使用して連結し、適切な末端を得るために制限酵素で消化し、付着末端を適切 に補填し、望ましくない結合を防ぐためにアルカリ性ホスファターゼ処理し、適 切なりガーゼで連結して、種々のＤＮＡ断片の結合を実行する。この遺伝子構築 物は、任意に、その融合タンパク質の効果的な発現を可能にする先導配列をコー ドしていてもよい。例えばＭａｄｄｏｎ等、Ｃｅ１ｌ　４２：９３−１０４（１ ９８５）がヒトＣＤ４発現のために使用した先導配列を使用することができる。

ｃＤＮＡを単離するためには、ｃＤＮＡライブラリーを、例えば相補的プローブ を使用することによって、あるいは発現した本発明のＣＤ４分子をＣＤ４特異的 抗体で検定することによって、スクリーニングすることができる。抗原で動物を 免疫化することによって抗体を調製する方法は、例えばＫｏｈｌｅｒおよびＭｉ ｌｓｔｅｉｎ、　Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　２５６：４９５（１９７５） 　：　ＫｏｈＬｅｒ等、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　６：５１１（１ ９７６）　＋　ｌ［ｏ■撃■ ｒ等、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　６：２９２（１９７６）　；　Ｈ ａｍｍｅｒｌｉｎｇ等、”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎ ｄ　Ｔ−Ｃｅｌｌ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ”、　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、　Ｎ、　Ｙ 、　、　５６３−６８１頁（１９８１）に教示されている。さらに本発明は、本 発明の非ヒトＣＤ４タンパク質、糖タンパク質、およびその可溶性および不溶性 断片に特異的なモノクローナルおよびポリクローナル（ポリクローン）抗体に関 する。

非ヒト霊長類ＣＤ４はヒト科以外の亜目、真猿類のいずれから由来したものであ ってもよい。この非ヒト霊長類ＣＤ４はアカゲザルまたはチンパンジー由来であ ることが好ましいが、本発明はこれらに限定されない。当業者は、ミトゲンで刺 激したある動物の抹消血液単核細胞のポリＡ含有ＲＮＡをＩｉ離することによっ て、その他の霊長類のＣＤ４を得ることができる。ｃＤＮＡを例えば逆転写酵素 で調製した後、そのｃＤＮＡを適切なりローニングベクター中に連結し、これを 適切な宿主の形質転換に使用することができる。次に、本発明のアカゲザルまた はチンパンジーＣＤ４に対するモノクローナル抗体でクローンをスクリーニング し、陽性クローンを選択するか、あるいはチンパンジーまたはアカゲザルＣＤ４ ｃＤＮＡとハイブリッドを形成させることができる。

本発明のＣＤ４分子および融合ハイブリ・ノドタンパク質を発現させるためには 、適切な宿主要素によって認識される転写および翻訳シグナルか必要である。使 用できる真核宿主にはインビトロで培養できる哺乳類細胞、特に白血球、より具 体的には骨髄腫細胞または形質転換した他のリンパ球あるいは腫瘍原性リンパ球 （例えばＥＢ■−形質転換細胞）か含まれる。哺乳類細胞はグリコジル化された ＣＤ４タンパク質を発現させるために有利に使用される。あるいは、細菌、真菌 （例えば酵母、糸状菌なと）などの非哺乳類細胞も使用できる。

融合タンパク質の生産に好ましい宿主は、組織培養中インビトロで生育するか、 もしくは動物中インビボで生育する哺乳類細胞である。哺乳類細胞は、免疫グロ ブリンタンパク質分子に翻訳後の修飾を加え、これにより正しいホールディング （畳み込み）および適切な部位のグリコジル化が得られる。宿主として有用であ り得る哺乳類細胞には、ＶＥＲ○やＣＨＯ−Ｋ　１などの線維芽細胞由来の細胞 、あるいはハイブリドーマＳ　Ｐ　２１０−ＡＧ　１４や骨１１ｔ＠Ｐ３ｘ６３ Ｓｇｈなどのリンパ球様細胞由来の細胞およびこれらの誘導体が含まれる。免疫 グロブリン様分子を調製するためには、可変領域が本発明のＣＤ４分子の１つで 置換されている重鎖免疫グロブリンをコードする遺伝子を含有するプラスミドを 、例えばＪ　５５８　Ｉ−骨髄肺細胞（ラムダ−１軽鎖を発現するが重鎖を発現 しないマウスのプラズマ細胞呻：Ｏ１等、　Ｐ、　Ｎ、　Ａ、　Ｓ、　（ＵＳＡ ）　８０：８２５−８２９（１９ｇ３）を参照のこと）中に導入する。他の好ま しい宿主にはＣＯ８細胞、ＢＨＫ細胞および肝癌細胞が含まれる。

これらの構築物は互いに結合して単一のＤＮＡ断片を形成していてもよいし２、 あるいは単独でまたはベクターと結合して分離した断片として維持されていても よい。

タンパク質をグリコジル化しない場合は、そのタンパク質を発現させるために、 その発現プラスミド中の配列の複製および転写にｉｆ−合するとの宿主を使用し ７てもよい。一般的には複製および転写制御配列を含有するベクターを宿主細胞 と適合する種から誘導し、その宿主と組み合わせて使用するっ通常このベクター は、形質転換した細胞中て表現型選択を提供できる特定の遺（入子と共に、複製 起源を有している。また非ヒト霊長類Ｃｌ）　４分〕−および融合タンパク質の 発現を、非形質転換状態にあるその生物と同種であり得る他の調節配列の制御下 に置くこともてきる。例えばラクト・−ス依存性人腸菌染色体Ｄ　Ｎ　Ａは、酵 素β−カラクトンターセを同化することによってラクト−ス資化性を媒介するラ クト−スオペロンまたは１ａｃオペロンを含有している。このｌａｃ制御要素は 大腸菌に対して感染力のある細菌性ファージｐｌａｃ５から得ることかできる。

このｌａＣプロモーター−−オペレーター系をＩ　ＰＴＧによ２）で誘導するこ とができる。

他のプロモーター／オペし・−ター系や王の一部も同様に使用できる。例えばコ リンンＥ１、ガラクトース、アルカリ性ホスフｒターセ、トリプトファン 哺乳類宿」−に関し７て、い＜ー）かのベクター系か発現に利用できる。

あるベクタ一群は、ウンパビローマウイルス、ポリ４−マウイルス、アテノウイ ルス、ワク／ニアウィルス、バクυウィルス、レト【コウイルス（ＩヱＳＶ．、 ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウィルスなとの動物ウィルスから誘 導されたＤさＪ　Ａ要素を使用し，ている、、このＤＮＡが染色体中に安定（こ 組４込まれている細胞は、形質ヤニ；換した細胞の選択を可能にする１またはＮ 数のマーカー　（標識）を５９人することによー）で選択できる。、二のマーカ ーは栄養要求性宿主にプロトトロビ＝　（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｙ）を提供ｌ、、 でもよいし、、あるいは殺生物剤耐性（例えば抗生物質、銅などの正金属など） を提供するものであってもよい。選択可能なマーカー遺伝子を発現すべきＤＮＡ 配列に直接連結することもできるし、あるいは同時形質転換によーて同じ細胞に 導入することもできる。最適のｍＲＮＡ合成のためにはさらに別の要素が必要と されるかも知れない。これらの要素に（ｊ、転写プロモーター、エンハンサ−お よび終止シグナルと共に、スプライスングナルか含まれ得る。このような要素を 組み込んだｃＤＮＡＤＮＡ発現ヘトターＯｋａｙａｍａ．　Ｈ．　、　Ｍｏ１． 　Ｃｃｌ．　Ｂｉｏｌ．　、　３：２８０（ｉ９ｇ３）およびその他に記述され たものが含まれる。

この構築物を含有するベクターあるいはＤ　Ｎ　Ａ配列を発現用に調製したら、 そのＤ　Ｎ　Ａ構築物を適切な宿主に導入する．：とができる。

プロトプラスト融合、リン酸乃ルンウム沈殿法、電気穿孔法または他の従来技術 など種へ・の技術か利用できる。融合後、その細胞を培地中で１４Ｅ台：〒せ、 適切な活性に−“）いて゛スケリーニンゲする。遺伝子の発現は望ましいタンパ ク質の産出をもたらす。発現し，た産物か融合タンパク質である場合は、次にこ れをざらに免疫グロブリン軽鎖または重鎖と組み立てさせ−こ２免疫グロブリン 様分子を杉成させることかできる。

ＣＤ４タンパク質および糖タンパク質、Ｃ　Ｉ）　４断片および免疫グロブリン を生産するための宿主細物は不死化細胞、主とし、て骨髄腫細胞またはリンパ腫 細胞であり得る。これらの細胞は、培養フラスコ中の適切な栄養培地中で生育で きるし、あるいは共力的な宿主（例えばマウスやラット）や免疫不全宿主または 宿主部位（例えばヌードマウスまたはハムスターの嚢）中に注射することもでき る。具体的には細胞を動物の腹部腔内に導入し，、免疫グロブリン様分子を含有 する腹水液を産出させることができる。あるいは、細胞を皮下注射し、その宿主 の血液からキメラ抗体を採取することもできる。この細胞はハイブリドーマ細胞 と同じ方法で使用できる。Ｄｉａｍｏｎｄ等。

Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３０４：１３４４（１９８１）　；　Ｋｅｎ ｎａｔｔ、　ＭｃＫｅａｒｎおよびＢｅｃｈｔｏｌ（共ｉ）＋　”Ｍｏｎｏｃｌ ｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：旧ｂｒｉｄｏｍａｓニーＡ　Ｎｅｗ　Ｄｉｍ ｅｎｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ”、　Ｐｌｅｎｕｍ 、　１９８０を参照のこと。

（以下余白） 本発明のＣＤ４タンパク質、糖タンパク質、ＣＤ４断片、融合タンパク質および 免疫グロブリン様分子を、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、アフィニティーク ロマトグラフィー、電気泳動などの従来条件に従って単離精製することができる 。例えばＣＤ４タンパク質、糖タンパク質および断片の溶液をｇｐ　ｌ　２０を 固定化したカラムに通すことによってこれらを精製できる（米国特許第４７２５ ６６９号参照のこと）。次に、カオトロピック塩で処理するか、あるいは酢酸水 溶液（ＩＭ）による溶出によって、結合したＣＤ４を溶出させることができる。

Ｉｇ融合タンパク質を含有する溶液を、この融合タンパク質のＦ０部分と選択的 に結合する固定化プロティンＧまたはプロティンＡを含有するカラムに通すこと によって、Ｉｇ融合タンパク質を精製できる。例えばＲｅ１ｓ、　Ｋ、　Ｊ、等 、　Ｊ、　１ｍｍｕｎｏ１．１３２：３０９８−３１０２（１９８４）　；　Ｐ ＣＴ出願公開番号ＷＯ８７１０Ｏ３２９を参照のこと。キメラ抗体は、カオトロ ピック塩で処理することによって、あるいは酢酸水溶液（ＩＭ）での溶出によっ て溶出させることができる。

あるいは、非ヒト霊長類ＣＤ４タンパク質および糖タンパク質、断片、融合タン パク質および免疫グロブリン様分子を、抗ＣＤ４抗体カラムまたは抗免疫グロブ リン抗体カラム上で精製して、本質的に純粋なタンパク質を得ることもてきる。

“本質的に純粋な”という用語は、天然に付随する不純物を含有しないタンパク 質を意味する。本質的な純粋性は電気泳動での単一バンドによって証明できる。

本発明の一態様として、本発明のＣＤ４分子またはｇｐ　１２０を結合するその 断片をコードするＣＤＮＡ配列を、可変領域が削除された抗体をフードする発現 プラスミド中に連結することができる。

免疫グロブリンの重鎮または軽鎖定常領域をコードする遺伝子の調製法は、例え ばＲｏｂｉｎｓｏｎ、　Ｒ，等のＰＣＴ出願公開番号ＷＯ３７−０２６７１に教 示されている。ＣＤ４分子または断片をコードするＣＤＮＡ配列を、軽鎖または 重鎮１ｇ定常領域をコードするｃ　Ｄ　Ｎ　Ａに直接結合させることもできるし 、あるいはリンカ−配列を通して結合させてもよい。このリンカ−配列は、その 個体内での抗原性反応の発生をもたらすタンパク質産物をコードしていないこと が好ましい。

本発明のＣＤ４分子またはその断片からなる好ましい免疫グロブリン様分子は、 ＩｇＭＳ　ＩｇＧ１またはＩ　ｇＧ３抗体の定常領域を含有する。

ＣＤ４タンパク質、糖タンパク質、断片、融合タンパク質および免疫グロブリン 様分子、およびそれらの医薬組成物を、ＨＩＶウィルス感染の治療または予防に 使用することができる。この方法は、ある動物に感染するＨＩＶまたはＳＩＶを Ｔ４”細胞に感染できなくするために、ｇｐｌ　２０と特異的に複合体を形成で きるＣＤ４タンパク質、糖タンパク質、断片、融合タンパク質および免疫グロブ リン様分子、およびその医薬組成物の有効量を、その個体に投与することからな る。　この融合タンパク質および免疫グロブリン様分子は、感染細胞上に発現す るｇｌ）１２０との複合体を形成できる。

本発明は特定の理論によって束縛されるものではないが、この融合タンパク質ま たは免疫グロブリン様分子のＦｃ部分が補体と結合することにより、その細胞の 破壊が媒介される思われる。この機構で感染細胞が破壊されるので、以降のウィ ルス粒子生産が停止する。

ＨＩＶ感染を治療するために、本発明の非ヒト霊長類ＣＤ４分子またはその断片 、融合タンパク質または免疫グロブリン分子が、さらに、ＨＩＶ粒子またはＨＩ 　Ｖ感染細胞の破壊を促進する放射線標識、治療薬または細胞毒ポリペプチドを 含んでいてもよい。

ＨＩＶ治療に使用するための本発明のタンパク質、糖タンパク質、融合タンパク 質、および免疫グロブリン様分子に結合させ得る放射性同位体の例は、Ｉ才Ｊ、 ＋３４、”Ｙ、８７ＣｕＳｔ１７］３　ｉ　、　１目Ａｔ、！＋２ｐ　ｂ、　４ ７５　Ｃ１および”’Ｐｄである。任意に、中性子放射による衝撃によってαお よびβ粒子を放出するホウ素などの標識を使用することもできる。

インビボ診断のために、放射性ヌクレオチドを、ＣＤ４タンパク質、その糖タン パク質または断片、融合タンパク質または免疫グロブリン様分子に、直接に、も しくは仲介官能基を用いて結合させることもてきる。金属カチオンとして存在す る放射性同位体を抗体に結合させるのにしばしば使用される仲介官能基はジエチ レントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）である。この方法で結合される金属カチ オンの典型例は、”′ＩＴ　ｃ　、目３■、ＩＩＪｎ、＋３１■、９７Ｒｕ、ａ ７Ｃｕ、”Ｇ　ａ、および１１８Ｇａである。

さらに、ＣＤ４タンパク質およびその糖タンパク質または断片、融合タンパク質 および免疫グロブリン様分子を、常磁性原子を含有するＮＭＲイメージ化試薬で 標識することもできる。ＮＭＲイメージ化試薬の使用は、ＮＭＲ技術を用いて患 者内のＨＩＶ感染の存在および程度をインビボで診断することを可能にする。こ の方法で特に有用な元素は、１５’Ｇ　ｄ　、　”Ｍ　ｎ　、菫８２Ｄ　ｙ、５ ！ｃｒ１および５ａｐｅである。

本発明の核酸分子を遺伝子療法によって導入することも意図できる。例えばレト ロウィルスや他の手段を用いて適切な標的組織中に、その融合タンパク質を指定 する遺伝物質を導入することかできる。

この態様では、本発明の核酸分子を有する標的組織が、ＣＤ４分子または融合タ ンパク質をインビボで生産するようになるであろう。

ＣＤ４分子またはその断片を指定する核酸分子を、ＨＩＶに感染した個体の免疫 系を再構築するために使用することができる。例えばＨＩ　Ｖに感染した個体の 骨髄細胞を取り出し、その造血幹細胞を混合集団の一部または精製した画分とし て、非ヒト７長類ＣＤ４またはその断片を指定するウィルスまたはＤＮＡ構築物 に感染あるいはトランスフェクトさせることができる。その中に、もしくは異な る遺伝子構築物中に、ヒｈｃＤ４の発現を妨害する遺伝子を含有させることによ り、ヒトＣＤ４の産出を停止させることかできる。このような遺伝子は多くの形 態、例えば調節タンパク質に結合するＲＮＡをコードする遺伝子（非ヒト霊長類 ＣＤ４は別の制御下にあり得るので、その発現は影響を受けないであろう）；ヒ ）ＣＤ４遺伝子に選択的に結合するアンチセンスＲＮＡ　、すでにその調節領域 か除去されているＤＮＡ結合性タンパク質、を取り得る。次に、改良されたこの 幹細胞をその患者に注射して戻すと、これらは骨髄に移動するであろう。好まし くは、放射線照射または毒薬によって、その骨髄細胞から正常造血細胞を取り除 いておく。Ｂｌｔｉｍｏｒｅ、　Ｄ、　Ｎａｔｕｒｅ　３３５：３９５−３９６ （１９８８）を参照のこと。

造血細胞のトランスフェクション法はよく知られており、例えばＷｅｔｈｅｒａ ｌｌ、　Ｄ、　Ｊ、　、　Ｎａｔｕｒｅ　３３１　：ｌ３−１４（１９８８）　 ；　Ｄｉｃｋ、　Ｊ、　Ｅ、　、　Ａｎｎ、　ＮA　Ｙ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　５０７：２４２−２５１（１９８７）　；　Ｅｇｌｉｔｉｓ、　Ｄ、 　Ｂ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　２３０：１３９５−１３９８（P ９８５）　；　Ｇ１１ｌｉｏ、　Ａ等、　Ａｎｎ、　Ｎ、　Ｙ、　Ａｃａｄ、　 Ｓｃｉ、　５１１　：４０６−４１７（１９８７）に教示されている。アンチセ ンスＲ，Ｎ　Ａによる細胞のトランスフェクション法は、例えばＨａｍｂｏｒ、 　Ｊ、　Ｅ、等、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ ）　８５：４０１０−４０１４（１９８ｇ）　：　５ａｎｆｏｒｄ、　Ｊ、　Ｃ −、Ｊ、　Ｔｈｅｏｒ、　Ｂｉｏｌ、　１３０　：４６９−４８０（１９８８） 　；@１ｚａｎ ｔ、　Ｊ、　Ｇ、等、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２９：３４５−３５２（１９８５） 　；　Ｈａｍｂｏｒ、　Ｊ、　Ｅ、等＋　Ｊ、　Ｅｘｐ、　lｅｄ。

１６８：１２３７−１２４５（１９８８）に教示されている。

非ヒト霊長類ＣＤ４、並びに、ＨＩＶまたはｓＩＶｇｐｌ、２０を結合するその 可溶性および不溶性断片を、ヒトＣＤ４産出リンパ球の感染およびンンンチウム 生成を遮断することにょるＨ　Ｉ　Ｖ感染のインビボ治療に使用することもでき る。ＣＤ４産出リンパ球のＨＩＶ感染およびンンンチウム生成を遮断するために □ヒトＣＤ４およびその可溶性断片を使用することに関する議論については、Ｌ ｕｉ、Ｍ、等。

Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　８２：２１７Ｂ−２１８０（１９８８）ま たはＰｉｓｃｈｅｒ、　Ｒ，Ａ、等、　Ｎａｔｕｒｅ３３１　ニア８−７８（１ ９８８）を参照のこと。

ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質および断片および治療薬からなる融合タン パク質を、ＨＩＶＩ、：感染した細胞をインビボで殺すことによるＨＩＶ感染個 体の治療に使用することもできる。治療薬には、例えば細菌毒素ジフテリア毒素 またはリシンなどの細胞毒ポリペプチドが含まれ得る。ジフテリア毒素の断片Ａ からなる融合タンパク質の製造法は米国特許第４６７５３８２号（１９８７）に 教示されており、この文献は本明細書の一部を構成する。ジフテリア毒素は２つ のポリペプチド鎖を有している。そのＢ鎖はこの毒素を細胞表面上の受容体に結 合させる。Ａ鎖は実際に細胞質に侵入し、伸長因子２を不活化することによりタ ンパク質合成を阻害する。この伸長因子２はＡＴＰの加水分解と共役してリポソ ームをｍＲＮＡにそって転移させる。Ｄａｒｎｅｌ　Ｉ、　Ｊ、等、“Ｍｏｒｅ ｃｕｌａｒ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ″＋５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉ ｃａｎ　Ｂｏｏｋｓ、　Ｉｎｃ、　、　６６２頁（１９８６）を参照のこと。あ るいは、毒性レクチンであるリシンからなる融合タンパク質を調製することもで きる。シュードモナス内毒素（エンドトキシン）Ａの活性領域に結合したヒトＣ Ｄ４からなる融合タンパク質の製造法と、ＨＩＶに感染した細胞を選択的に殺す ためのその使用法はＣｈａｕｄｈａｒｙ。

ｖＫｌ等、　１Ｊａｔｕｒｅ　３３５：３６９−３７２（１９８ｇ）に教示され ており、この文献は本明細書の一部を構成する。

ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質および断片、融合タンパク質および免疫グ ロブリン様分子の投与に関する投与量範囲は、ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の症状を 改善する望ましい効果を生み出すのに十分な量である。この投与量は、望ましく ない交差反応やアナフィラキシ−反応などの不利な副作用をもたらすほど多くて はならない。

一般的に、投与量は患者の年令、状態、性別および疾患の程度、カウンターイン ディケーション（ｃｏｕｎｔｅｒ　１ｎｄｉｃａｔｉｏｎ）、もしあれば免疫寛 容および他のそのような変数と共に変化し、個々の医師によって調節されるであ ろう。本発明のＣＤ４分子、ｇｌ）１２０結合性分子またはそれらの断片、融合 タンパク質または免疫グロブリン様分子の投与量は、１または複数投与で１日あ たりＯ，００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを１または数日間の範囲で変更して もよく、好ましくは１または複数投与で１日あたりＯ，１ｍｇ／ｋｇ〜１．Ｏｍ ｇ／ｋｇを１または数日間である。免疫グロブリン様分子を注射によって、ある いは時間をかけて徐々に潅流することによって、非経口的に投与することかでき る。これらは静脈内、腹腔内、筋肉内または皮下に投与できる。

非経口投与用の製剤には、滅菌または水性または非水性溶液剤、懸濁剤および乳 剤が含まれる。非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー ル、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなど注射可能な有機エス テルである。水性担体には、食塩水および緩衝化媒質を含む乳液または懸濁液、 水、アルコール／水性溶液が含まれる。非経口的投与用賦形剤には、塩化ナトリ ウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳 酸側リンゲル、または脂肪油が含まれる。静脈内投与用賦形剤には、液体および 栄養補充物、電解質補充物、リンゲルデキストロースに基つく補充物などが含ま れる。保存剤および他の添加物、例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、不活 性ガスなどが存在してもよい・一般的には“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒ ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ”、第１６版、　Ｍａｃｋ　Ｅｄｓ、　 、　１９８０を参照のこと。

または本発明は、本発明の成分からなり、動物のＨＩＶまたはＳＩＶ感染の療法 に使用される薬物または医薬組成物の製造法にも関する。

本発明のタンパク質および糖タンパク質を、Ａ［）Ｓ、ＡＲＣおよびＨＴＶ感染 の治療で用いられている他の治療法と組み合わせて使用することもできる。例え ば本発明のタンパク質および糖タンパク質を、ＡＺＴ、ＤＤＩ、ＨＰＡ−２３、 ホスホノホルメート、スラミン、リバビリン（ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）、デオキシ シチジンなど逆転写を遮断する抗レトロウィルス薬と同時投与してもよい。ある いは本発明のタンパク質および糖タンパク質を、インターフェロン（α−インタ ーフェロン、γ−インターフェロン、ω−インターフェロンを含む）などの抗ウ ィルス剤またはカルタノスペルミンなどのグリコンダーセ阻害剤と同時投与する こともてきる。このような組み合わせ療法には、毒性を最小限にし、その治療効 果を増大させるために、これらの薬剤をより少量で使用する点て有利であり得る 。

抗原性物質および生物試料の検出および定量には、しばしば免疫検定技術か使用 される。これらの技術は、検定される抗原性物質（例えばｇｐ１２０）と１また は複数の抗体との複合体（複合体構成要素のどちらか１つを検出てきるように標 識できる）の形成に基づいている。本発明では、ＣＤ４タンパク質、その糖タン パク質または断片、免疫グロブリン様分子または融合タンパク質を従来のラベル （標識）で標識することができる。

したがって、ＨＩＶまたはＳ＋Ｖに感染したと思われる動物から得た試料を、Ｃ Ｄ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、融合タンパク質または免疫グロ ブリン様分子と接触させ、ｇｐ　１２０単独との、もしくはＨＩＶ感染細胞表面 上のｇｐ１２０との複合体が形成したか否かを検出することによって、ＣＤ４タ ンパク質、その糖タンパク質または断片、融合タンパク質または免疫グロブリン 様分子を、生物試料のＨＩ　ＶまたはＳＩＶウィルス感染の検定に使用すること もできる。

例えば生物試料をニトロセルロースで処理するか、あるいは細胞、細胞粒子また は可溶性タンパク質を固定化できる他の固体支持体で処理してもよい。次にこの 支持体を適切な緩衝液で洗浄した後、ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質また は断片、融合タンノテク質、または免疫グロブリン様分子（これらはいずれも検 出が可能なように標識できる）で処理することかできる。次にこの同相支持体を 再度緩衝液で洗浄することにより未結合のタンノ＜り質を除去し、標識を検出す ることができる。

ｇｐ１２０を含有する試料について本発明の検定を実施する場合、その方法は次 の工程からなる： ａ）ｇｐ１２０を含有すると推定される試料を固体支持体と接触させることによ り、ｇｐ１２０またはｇｐ１２０がその表面上に発現する細胞の固定化を達成す る： ｂ）該固体支持体を、検出か可能なように標識したＣＤ４タン、ｆり質、ＨＩＶ ｇｐ１２０に結合するその糖タンノ４り質または断片、本発明の免疫グロブリン 様分子または融合タンパク質分子と接触させる； Ｃ）上記の検出可能に標識した分子を該支持体と共に、その検出可能に標識した 分子か、固定化ｇｌｌ　１２０またはその表面上にｇｌ）１２０か発現する固定 化細胞に結合するのに充分な時間インキュヘートする： ｄ）固相支持体を工程Ｃ）のインキュベーション混合物から分離する： ｅ）結合した検出可能に標識された分子を検出することにより、ｇｐ１２０を検 出および定量する。

あるいは、試料中の、検出可能に標識されたＣＤ４タンパク質、その糖タンパク 質または断片、免疫グロブリン様分子または融合タンパク質とｇｐ　１２０との 複合体を、免疫グロブリンに特異的な固定化抗体または固定化タンパク質、例え ばプロティンＡ、プロティンＧ５抗１ｇＭまたは抗ＩｇＧ抗体なとと接触させる ことにより、この複合体を反応混合物から分離することもてきる。このような抗 免疫グロブリン抗体はモノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよい。次 にその固体支持体を適切な緩衝液で洗浄することにより、固定化された複合体か 得られる。次にこの標識を検出することによりｇｐｌ　２０か測定でき、それに よりＩ−（Ｉ　Ｖの存在か検出できる。

本発明のこの側面は、次に示す工程からなる、試料中のＨＩＶまたはＳＩＶウィ ルス感染検出法に関する：（ａ）ｇｐｔ２０を含有すると推測される試料を、非 ヒト霊長類ＣＤ４またはＨＩＶｇｐ１２０に結合するその断片、および免疫グロ ブリン鎖のＦｃ部分からなる融合タンパク質と接触させる：（ｂ）複合体が生成 するか否かを検出する。

また本発明は、さらに次の工程からなる、試料中のｇｐ　１２０検出法に関する （ｃ）工程（ａ）で得た混合物を、固相支持体上に固定化され、該融合タンパク 質に対して特異的なＦＣ結合性分子（例えば抗体、プロティンＡまたはプロティ ンＧ）と接触させることにより、ｇｐ１２０融合タンパク質と固定化抗体との複 合体を得る；（ｄ）工程（Ｃ）で得た固相支持体を洗浄することにより、未結合 の融合タンパク質を除去する： （ｅ）融合タンパク質上の標識を検出する。

もちろん検出可能に標識した免疫グロブリン様分子（または融合タンパク質）お よびｇｌ）１２０の比ａ度、インキュベーションの温度および時間並びに他の検 定条件は、試料中のｇｌ）１２０濃度、試料の性質なと種々の因子に応じて変化 させてもよい。当業者は日常的な実験を用いて、有効で最適な検定条件を決定す ることができるであろう。

特定の状況下で必要な場合には、洗浄、撹拌、振盪、濾過など他の工程を加えて もよい。

ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分子または 融合タンパク質を検出可能に標識する方法の１つは、これらを酵素に結合させる ことである。この酵素は、次にその基質に暴露したときに、例えば分光光度計、 蛍光光度計によって、もしくは目視によって検出できる生成物の生成を触媒する であろう。本発明のＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グロ ブリン様分子または融合タンパク質を検出可能に標識するために使用できる酵素 には、マレートデヒドロケナーゼ、スタフィロコッカスのヌクレアーゼ、δ−Ｖ −ステロイドイソメラーゼ、酵母のアルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロ ホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオセホスフェートイソメラーゼ、西洋ワサ ビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコー スオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタ ラーゼ、グルコース−Ｖｌ−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ 、アセチルコリンエステラーゼが含まれるが、これらに限らない。

γ線計数器またはシンチレーション計数器を使用して、あるいはオートラジオグ ラフィーによって測定できる放射活性同位体で、本発明のＣＤ４タンパク質、そ の糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分子または融合タンパク質を標識 することもできる。本発明のこの目的に特に有用な同位体は３Ｈ１１２５Ｉ、１ ３１１．３２ｐ、　３５３．１４ｃ、！１Ｃｒ、　３１１Ｃｌ、５７Ｃｏ、５Ｂ ｃｏ、５９ｐｅ１フ５Ｓｅである。

ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分子または 融合タンパク質を蛍光化合物で標識することもてきる。蛍光によって標識した免 疫グロブリン様分子を適切な波長の光にさらせば、その色素の蛍光によってその 存在を検出することができる。最もよく使用される蛍光標識化化合物には、フル オレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリスワン、フィコシアニ ン、アロフィコシアニン、０−フタルアルデヒド、フルオレサミン（ｆ　ｌｕｏ ｒｅＳｃａｍｉｎｅ）かある。

＋５′Ｅｕや他のランタニド族などの蛍光発光金属で、本発明のＣＤ４タンパク 質、その糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分子または融合タンパク質 を検出可能に標識することもできる。これらの金属は、ジエチレントリアミンペ ンタ酢酸（ＤＴＰＡ）やエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キ レート化試薬を用いて、ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫 グロブリン様分子または融合タンパク質に結合させることができる。

本発明のＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分 子または融合タンパク質をケミルミネセンス（化学発光）化合物とカップリング させることによって、これらを検出可能に標識することもできる。次に、ケミル ミネセンスで標識されたＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫 グロブリン様分子または融合タンパク質の存在を、化学反応の進行中に生じるル ミネセンスの存在を検出することによって決定する。特に有用なケミルミネセン ス標識化化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマチイック（ｔｈｅ ｒｏｍａｔｉｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩お よびシュウ酸エステルである。

同様に、生物発光化合物を、ＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、 免疫グロブリン様分子または融合タンパク質の標識に使用してもよい。生物発光 は生物系中に認められる化学発光の１形態であり、ここでは触媒的タンパク質が 化学発光反応の効率を増大させている。生物発光タンパク質の存在を、ルミネセ ンスの存在を検出することによって決定する。標識化に重要な生物発光化合物は 、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリン（ａｅｑｕｏｒｉｎ）である 。

例えば検出可能な標識か放射活性なγ線放出物である場合にはシンチレーション 計数器によって、また標識が蛍光物質である場合には蛍光光度計によって、ＣＤ ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分子または融合 タンパク質を検出することができる。酵素標識の場合には、その酵素の基質を使 用する比色法で検出することかできる。または基質の酵素反応の程度を、同様に して調製した標準と目視して比較することによって検出することもできる。

本発明の検定法は、キットの製造に理想的に適している。このようなキットは、 バイアルやチューブなとの容器の１または複数を厳密に密閉して担持するための 区分された運搬装置からなっており、該容器のそれぞれには免疫検定の個別の要 素を含ませることかできる。例えば１つの容器に固相支持体を入れ、別の容器に 検出可能に標識されたＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グ ロブリン様分子または融合タンパク質を入れることができる。さらに別の容器に 、被験体（ｇｐ１２０またはその検出されるへき断片）の連続希釈液からなる標 準溶液か含まれていてもよい。これらの被験体の標準溶液を用いて、ｇｐ１２０ の濃度を横軸にとり、検出信号を縦軸にとった標準曲線をプロットすることがで きる。ｇｐｌ、２０を含有する試料で得た結果を、このようなブロク）から内挿 してｇｐ　ｌ　２０の濃度を決定することができる。

本発明のＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質または断片、免疫グロブリン様分 子または融合タンパク質を組織切片用の染料として使用することもできる。例え ばＣＤ４タンパク質、その糖タンパク質、またはそのＨＩＶｇｌ）１２０結合性 断片からなる標識された分子を、例えば脳の生検襟本などの組織切片と接触させ てもよい。次にこの切片を洗浄し、その標識を検出することができる。

以下の実施例は実例であるが、本発明の方法および組成物を限定するものではな い。当業者に自明の他の適切な改良および適用も本発明の目的と範囲に包含され る。

（以下余白） 実施例− チンパンジー（Ｐａｎ　Ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）およびアカケザル（Ｍａｃｃ ａｃａ　ｍｕｌａｔｔａ）のＣＤ４抗原をコードするｃＤＮＡクローンを単離し 、配列決定し、発現させた。非ヒト霊長類ＣＤ　４　ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａを、これら の動物の、ミトゲンで刺激した抹消血液単核細胞のポリＡ含有ＲＮＡから合成し た。ｃＤＮＡ発現ライブラリーをベクターＣＤＭＳ中で作成し、既に５ｅｅｄ等 、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　８４：３３ ６５−３３６９（１９８７）に記述されている免疫選択を４回行うことにより、 ＣＤ４ｃＤＮＡを単離した。一本鎖および二本鎖テンプレート（鋳型）について ジブオキ／ヌクレオチド連鎖終止技術を用いて配列決定を実行した。

チンパンジーおよびアカゲザルＣＤ４のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を以下に 示す。それぞれの配列とヒトＣＤ４との比較をも示しである。

ヒト配列との相違を記載したアカゲザルＣＤ４コード配列Ｖａｌ Ａ　ＣＧ ■ ■ Ｃ ヒト配列との相違を記載したチノパンツ−ＣＤ４コード配列および予想アミノ酸 配列 Ｇ チンパンジーのＣＤ４ｆ原はヒトのＣＤ４抗原と９９％相同であつラム昼２虚他 １１−宇借的１７作田また−　９つの通Ｒ旧のｑつの１＝Ｓａ的御町て、予想さ れる成熟した４３３アミノ酸のポリペプチド中に５つのアミノ酸置換を有してお り、一方、アカゲザルのＣＤ４はヒトＣＤ４アミノ酸配列と３４の相違を有する ９２％相同であった。抗原の発現を一時的にＣＤ　Ｍ　Ｓ中で達成し、またレト ロウイルスヘクターｐＭＮＣ３を使用して安定に発現させた。

非ヒト霊長類ＣＤ４抗原を、これによってＨＩＶによる感染に感受性になるが、 ヒトｃＤ４抗原を発現するその対応物と比較して多核巨大細胞またはシンシチウ ムの生成が著しく少ないヒト細胞上で発現させた。インビトロ変異導入法を用い て、この表現型を、ヒトおよびチンパンジーのＣＤ４糖タンノ＜り質問の１アミ ノ酸相違に局在化させた。このアミノ酸置換は、これらの抗原がヒト免疫不全ウ ィルスタイプＩ　（ＨＩＶ）の膜外および膜透過タン／　Ｎ＋り質（Ｅ〜ＩＰお よびＴＭＰ）と協奏的に発現する際の、Ｈｅｉ、ａ細胞のシンフチ外アミノ酸配 列変化のそれぞれを単独で、および対で含有する、６つの種間バイブリア１Ｓ’ ＣＤ４抗原を一時的に発現さゼ、次いでワクシニア　（）−（ＩＶｅｎｖ）組換 えウィルスＶＳＣ２５に感染さぜることによって、これを達成した。ヒトＣＤ４ に認められるグルタンミン酸残基の代わりに、チンパンジーＣＤ４に認められる グリシン残基が位置８７に存在すると、多核シン／チウムの形成が本質的に排除 される。逆に、ヒトの位置８７のグルタミンＩｆ残基のチンパンジーＣＤ４への 移植は、ＨＩＶのＥＭＰおよびＴＭＰの存在下でのシンシチウム形成能をもたら した。対照的に、第１免疫グロブリン可変領域相同ドメイン中に、チンパンジー ＣＤ４抗原に特有のグリコジル化部位を創出する２つのアミノ酸置換（アミノ酸 ３４および６８）のどちらかか存在しても、あるいは存在しなくても、この検定 での／ノシチウム生成度には殆どあるいは全く影響かなかった。

これらのハイブリッドＣＤ４糖タンパク質はｌ（Ｉ　ＶのＥＭＰに対して同し親 和性を示すと期待される。なぜならこれらのアミノ酸配列の相違はいずれも、既 に明らかにされているＨＩＶ結合部位中にはないからである。

シンシチウム生成が、ＨＩＶによって誘発される疾患の重要な機構であるとすれ ば、ＨＩＶが媒介するシシンチウム生成のこの遮断は、ＨＩＶによる長期にわた る感染にもかかわらず、チンパンジーが後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の病 理に耐性であることの説明となり得る。

実施例３：ＣＤ４−ｒＧ　ＣＤＮＡ構築物の調製チンパンジーまたはアカゲザル のフード配列の細胞外部分（これは成熟した糖タンパク質のアミノ酸１〜３７２ とシグナルペプチドをコードしている）を、ヒトＩ　ｇＧ　１重鎖定常領域遺伝 子に、合成スプライス供与リンカ−分子を用いて３カ所で融合する。このスプラ イス供与リンカ−を利用するために、まず配列：　ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＧＣＧを 有するＢａｍＨＩリンカ−をＣＤ４前駆前駆列配アミノ酸残基３９５（ヌクレオ チド残基１２９５）に挿入する。ＢａｍＨｌｌよひＨｉｎｄｌｌｌ＋目補末端ｌ こ挟まれた次の合成スプライス供与配列。

を作成し、これを、ＩｇＧ１ゲノム配列のＣＨＩドメインに先行するイントロン 中のＨｉｎｄｌ１１部位、ヒンジドメインに先行するイントロン中のＥｓｐＩ部 位、並びに、ＣＨ２ドメインに先行するＢａｎ１部位に融合する。このＢａｍＨ １部位での連結にょるキメラ遺伝子の組み立てによって、可変（Ｖ）領域、Ｖ＋ ＣＨｌ領域、またはＶ、ＣＨＩおよびヒンジ領域がＣＤ４に置換された分子が得 られる。最後に記載した分子の場合、そのキメラ分子はモノマー（単量体）構造 を形成すると期待され、一方、前者の場合は二量体構造が期待される。

ＣＤ４エピトープに対するモノクローナル抗体のパネルでこれらの融合タンパク 質を免疫沈殿させると、すべてのエピトープが保存されていることが示されるで あろう。弱毒化した（逆転写酵素を削除した）プロウィルス構築物でトランスフ ェクトした細胞、あるいはワタシニア：）（ＩＶ　ｅｎｖ組換えウィルスに感染 した細胞、の表面上に発現したＨＩＶ外被タンパク質と上記のキメラ分子は、特 異的な高親和性会合を示す。

実施Ｉ！ｉ′ｌＩ４：ＣＯ５細胞の上清からの融合タンパク質の調製１０％つ／ 血清および硫酸ゲンタマイシン（１５μｇ／ｍｌ）を補足したＤＭＥ培地中でＣ Ｏ８細胞を成育し、トランスフェクションの前日に、１０％ヌセラム（ＮｕＳｅ ｒｕｍ：Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）およびゲンタマイシ ンを含有するＤＭＥ培地中にこれを分割して、５０％全面生長とする。翌日、（ 、ＳＣ］で精製したプラスミドＤＮＡを最終濃度０１〜２０μｇ／ｍｌで加え、 次いでＤＥＡＥデキストランを４００μｇ／ｍ　ｌ、クロロキンを１００μＭで 加える。

３７°Ｃて４時間の後、培地を吸引し、１０％ジメチルスルホキシドのリン酸緩 衝化食塩水溶液を２分間加え、吸引し、ＤＭＥ／１０％ウシ血清で置換した。８ 〜２４時間後、細胞をトリプシン処理し、１．２に分割する。

放射性標識化のために、トランスフェクション後４０〜４８時間培地を吸引し、 細胞をリン酸緩衝化食塩水で１回洗浄し、システィンまたはメチオニンが欠如し たＤＭＥ培地を加える。３０分後、３５Ｓで標識したシスティンおよびメチオニ ンをそれぞれ最終濃度３０〜６０μＣ１および１ｏＯ〜２ｏｏμｃｌで添加し、 ８〜２４時間以上細胞にラヘル（標識）を取り込ませる。上清を回収し、変性お よび還元の後７．５％ポリアクリルアミドゲルの電気泳動て試験するか、または 変性し、還元せずに５％ポリアクリルアミドゲルで試験する。Ｉ　ｇＧ−ＣＤ４ 融合タンパク質は二量体構造を形成する。

ＣＤｉＴｇＭ融合タンパク質は上記の非還元ゲル系の分解能を越える巨大な多量 体を形成し、還元系では予期された分子質量の単量体を形成する。

トランスフェクション後５〜１０日間、５％ヌセラムおよびゲンタマイシンを含 有するＤＭＥ培地中で上述のように細胞を生育させることにより、非標識タンパ ク質を調製する。その上清を回収し、遠心分離し、プロティンＡトリスアクリル 、プロティンＡアガロース、ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体アガロース、ウサギ抗ヒトＩ ｇＭ抗体アガロース、またはモノクローナル抗ＣＤ４抗体アガロースへのバノチ 吸着によって精製する。抗体アガロース複合体は、製造者の推奨する方法に従い 、１ｍｇ／ｍｌＪ度の精製した抗体を用いて、その抗体を臭化シアン活性化アガ ロースに結合させることによって調製する。回転テーブル上で終夜振盪すること によるハツチ吸着の後、シンタートガラス漏斗中に注ぐことによってそのビーズ を回収し、１％ノンイデ、ト（Ｎｏｎｉｄｅｔ）　Ｐ　４０界面活性剤を含有す るリン酸緩衝化食塩水を用いてその漏斗上で数回洗浄する。ビーズを漏斗から取 り出し、小さい使い捨てプラスチックカラム（Ｑｕｉｋ−Ｓｅｐ　ＱＳ−Ｑｃｏ ｌｕｍｎ、　１ｓｏ１．ａｂ）に注ぎ、少なくとも２０力ラム体積の１％ノンイ デ、）Ｐ２Ｏを含むリン酸緩衝化食塩水、５体積のＯ，１５ＭＮａｃＩ、１ｍＭ 　ＥＤＴＡ　（ｐＨ８０）て洗浄し、Ｏ，１Ｍ酢酸、あるいはＯ，１ＭＮａＣｌ を含むＯ，１Ｍ酢酸、もしくは０．　２５Ｍグリ７ンーＨＣＩ緩衝液（ｐｉ（２ ，５）を加えることによって溶出させる。

実施例５．醇倉タノバク軍丼洟ＡヱヱＹチウム生盛玄ζ所精製した融合タンパク 質または部分精製した融合タンパク質を、ＨＩＶ外被タンパク質をコードするワ タシニアウィルス組換え体に１２時間前に感染したＨ　Ｐ　Ｂ−Ａ　Ｌ　Ｌ細胞 に加える。６〜８時間以上インキュベートした後、細胞をリン酸緩衝化食塩水で 洗浄し、ホルムアルデヒドで固定し、写真を撮った。すへてのフルレングス（全 １）ＣＤ４免疫免疫グロブリンクンパク質かシンンチウム生成の阻害を示すであ ろう。

ここに本発明を完全に記述したので、本発明の目的と範囲またはそのいずれの態 様からも離れることなく、組成、条件、並びに、組換え分子、ベクター、形質転 換宿主およびタンパク質などの調製法について、広範囲にわたる等価なパラメー タのいずれを用いても、同じことを実行できることが当業者には分かるであろう 。

（以下余白） 国際調査報告 １１、ｌｔｅＭｌ　ａｓｍｃｅＩｌ、１１ｍｍ、　Ｐ’Ｃτ／ＵＳ９０１０４３ ２０−聞一一−４−一一一”、ＰＣＴ／ＵＳ９０１０４３２０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．非ヒト霊長類ＣＤ４またはそのＨＩＶｇｐ１２０結合性断片を指定する核酸 分子。 ２．該非ヒト霊長類ＣＤ４断片が水性溶液に可溶である請求項１の核酸分子。 ３．ＤＮＡである請求項１の核酸分子。 ４．ＲＮＡである請求項１の核酸分子。 ５．検出可能なように標識された請求項１の核酸分子。 ６．請求項１の核酸分子に対して相補的である核酸分子。 ７．該非ヒト霊長類がアカゲザルであり、該分子が次のＤＮＡ配列： 【配列があります】またはその同義性変異体からなる請求項１の核酸分子。 ８．該非ヒト霊長類がアカゲザルであり、該核酸断片が次のＤＮＡ配列： 【配列があります】 またはその同義性変異体からなる請求項１の核酸分子。 ９．該非ヒト霊長類がチンパンジーであり、該分子が次のＤＮＡ配列： 【配列があります】 またはその同義性変異体からなる請求項１の核酸分子。 １０．該非ヒト霊長類がチンパンジーであり、該核酸断片が次のＤＮＡ配列： 【配列があります】 またはその同義性変異体からなる請求項１の核酸分子。 １１．次の配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 ＹはＣまたはＴを表し； ＭはＡまたはＣを表し； ＳはＣまたはＧを表す］ またはその同義性変異体からなる組換えＤＮＡ分子。 １２．次のＤＮＡ配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 ＹはＣまたはＴを表し ＭはＡまたはＣを表す］ またはその同義性変異体（ただしＹがＴでない時、同時にはＭがＣでない）から なる、細胞質ドメインを伴ったグリコシル化されたヒトＣＤ４を指定する核酸分 子。 １３．次のＤＮＡ配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 ＹはＣまたはＴを表し； ＭはＡまたはＣを表す］ またはその同義性変異体（ただしＹがＴでない時、同時にはＭがＣでない）から なる、グリコシル化されたヒトＣＤ４断片を指定する核酸分子。 １４．１）免疫グロブリン重鎖を指定する核酸分子；に結合した、２）請求項１ の核酸分子； からなる、融合タンパク質を指定する核酸分子であって、該免疫グロブリン重鎖 の可変領域を指定する核酸配列が、該断片を指定する該核酸分子で置換されてい る核酸分子。 １５．１）免疫グロブリン軽鎖を指定する核酸分子；に結合した、２）非ヒト霊 長類ＣＤ４あるいはそのＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合性断片を指定する核 酸分子； からなる、融合タンパク質を指定する核酸分子であって、該免疫グロブリン軽鎖 の可変領域を指定する核酸配列が、該断片を指定する該核酸分子で置換されてい る核酸分子。 １６．該免疫グロブリン鎖がクラスＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３に属する請 求項１４または１５の核酸分子。 １７．ｉ）細胞毒ポリペプチドを指定する核酸分子；に結合した、２）非ヒト霊 長類ＣＤ４あるいはそのＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合性断片を指定する核 酸分子； からなる、融合タンパク質を指定する核酸分子。 １８．請求項１、１１〜１５または１７のいずれかの核酸分子を含有するベクタ ー。 １９．請求項１８のベクターで形質転換された宿主。 ２０．請求項１４の核酸分子を含有するベクターで形質転換された宿主であって 、該宿主が核酸分子の発現産物と共に免疫グロブリン軽鎖を発現して、ＨＩＶま たはＳＩＶｇＰ１２０に結合する免疫グロブリン様分子を産出する宿主。 ２１．請求項１５の核酸分子を含有するベクターで形質転換された宿主であって 、該宿主が核酸分子の発現産物と共に免疫グロブリン重鎖を発現して、ＨＩＶま たはＳＩＶｇｐ１２０に結合する免疫グロブリン様分子を産出する宿主。 ２２．該免疫グロブリン重鎖が免疫グロブリンクラスＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩ ｇＧ３に属する請求項２１の宿主。 ２３．非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するそ の断片の生産法であって、請求項１の核酸分子を含有しさらに使用する宿主株に よって認識される発現シグナルをも含有するベクターで形質転換された宿主株の 、栄養培地中タンパク質生産条件下での培養および該非ヒト霊長類ＣＤ４の直接 発現；並びに、 そのように生産された非ヒト霊長類ＣＤ４の回収；からなる方法。 ２４．非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはｇｐ１２０に結合するその断片および免疫グ ロブリン重鎖からなり、その免疫グロブリン鎖の可変領域が非ヒト霊長類ＣＤ４ あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するその断片で置換されている融 合タンパク質の製造法であって、 請求項１４の核酸分子を含有しさらに使用する宿主株によって認識される発現シ グナルをも含有するベクターで形質転換された宿主株の、栄養培地中タンパク質 生産条件下での培養および該融合タンパク質の直接発現；並びに、 そのように生産された融合タンパク質の回収；からなる方法。 ２５．該宿主株が、免疫グロブリン軽鎖、並びに、クラスＩｇＭ、ＩｇＧ１また はＩｇＧ３の免疫グロブリン重鎖からなる該融合タンパク質を産出する骨髄腫細 胞株であって、該融合タンパク質からなる免疫グロブリン様分子が生産される請 求項２４の方法。 ２６．非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するそ の断片および免疫グロブリン軽鎖からなり、その免疫グロブリン鎖の可変領域が 非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合するその断片 で置換されている融合タンパク質の製造法であって、 請求項１５の核酸分子を含有しさらに使用する宿主株によって認識される発現シ グナルをも含有するベクターで形質転換された宿主株の、栄養培地中タンパク質 生産条件下での培養および該融合タンパク質の直接発現；並びに、 そのように生産された融合タンパク質の回収；からなる方法。 ２７．該宿主が該融合タンパク質と共にクラスＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ の免疫グロブリン重鎖を産出して、ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合する免 疫グロブリン様分子を産出する請求項２６の方法。 ２８．本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４。 ２９．該非ヒト霊長類がアカゲザルであって、次のアミノ酸配列： 【配列があります】 からなる、請求項２８の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４。 ３０．該非ヒト霊長類がチンパンジーであって、次のアミノ酸配列： 【配列があります】 からなる、請求項２８の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４またはグリコシル化 されたその誘導体。 ３１．次のアミノ酸配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 −＠−はＴｈｒまたはＩｌｅを表し； −＃−はＶａｌまたはＡｌａを表し； −＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表し； −％−はＧｌｎまたはＧｌｕを表す］ からなる、請求項２８の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４またはグリコシル化 されたその誘導体。 ３２．次のアミノ酸配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 −＠−はＴｈｒまたはＩｌｅを表し； −＃−はＶａｌまたはＡｌａを表し； −＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表す］ からなる、請求項２８の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４またはグリコシル化 されたその誘導体。 ３３．次のアミノ酸配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 　−＠−はＴｈｒまたはＩｌｅを表し；−＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表す］ からなる、ｇｐ１２０結合性分子またはグリコシル化されたその誘導体（ただし −＠−および−＄−の少なくとも１つはＴｈｒである）。３４．治療的に有効な 量の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４および医薬的に許容される担体からなる 医薬組成物。 ３５．ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合可能であって、水性溶液に可溶の非 ヒト霊長類ＣＤ４断片。 ３６．ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合可能な非ヒト霊長類ＣＤ４断片。 ３７．該霊長類がアカゲザルまたはチンパンジーである請求項３５または３６の 断片。 ３８．該非ヒト霊長類がアカゲザルであって、次のアミノ酸配列： 【配列があります】 からなる請求項３６の非ヒト霊長類ＣＤ４断片。 ３９．該非ヒト霊長類がチンバンジーであって、次のアミノ酸配列： 【配列があります】 からなる請求項３６の非ヒト霊長類ＣＤ４断片またはグリコシル化されたその誘 導体。 ４０．次のアミノ酸配列： 【配列があります】 ［上記の配列中、 −＠−はＴｈｒまたはＩｌｅを表し； −＄−はＴｈｒまたはＰｒｏを表す］ またはグリコシル化されたその誘導体（ただし−＠−および−＄−の少なくとも １つはＴｈｒを表す）からなるｇｐ１２０結合性分子。 ４１．治療的に有効な量のＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合可能な非ヒト霊 長類ＣＤ４断片；および、医薬的に許容される担体； からなる医薬組成物。 ４２．該断片が水性溶液に可溶である請求項４１の医薬組成物。 ４３．治療的に有効な童の請求項４０のｇｐ１２０結合性分子；および、 医薬的に許容される担体； からなる医薬組成物。 ４４．クラスＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３の免疫グロブリン重鎖からなる第 ２のタンパク質にＣ末端で融合した非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはＨＩＶまたはＳ ＩＶｇｐ１２０に結合可能なその断片からなる融合タンパク質であって、該重鎖 免疫グロブリンの可変領域がＣＤ４またはそのＨＩＶｇｐ１２０結合性断片で置 換されている融合タンパク質。 ４５．検出可能なように標識された請求項４４の融合タンパク質。 ４６．該融合タンパク質が細胞毒ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメー ジ化試薬に結合した請求項４４の融合タンパク質。 ４７．請求項４４の融合タンパク質および免疫グロブリン軽鎖からなる免疫グロ ブリン様分子。 ４８．検出可能なように標識された請求項４７の免疫グロブリン様分子。 ４９．細胞毒ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメージ化試薬に結合した 請求項４７の免疫グロブリン様分子。 ５０．可変領域が削除された免疫グロブリン軽鎖からなる第２のタンパク質にＣ 末端で融合した非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結 合するその断片からなる融合タンパク質。５１．該ＣＤ４断片がアカゲザル由来 であって、次のアミノ酸配列： 【配列があります】 からなる、請求項４４または５０の融合タンパク質。 ５２．該ＣＤ４断片がチンパンジー由来であって、次のアミノ酸配列： 【配列があります】 からなる、請求項４４または５０の融合タンパク質。 ５３．検出可能なように標識された請求項５０の融合タンパク質。 ５４．細胞毒ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメージ化試薬に結合した 請求項５０の融合タンパク質。 ５５．請求項５０の融合タンパク質およびクラスＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ ３の免疫グロブリン重鎖からなる免疫グロブリン様分子。 ５６．検出可能なように標識された請求項５５の免疫グロブリン様分子。 ５７．該融合タンパク質が細胞毒ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメー ジ化試薬に結合した請求項５５の免疫グロブリン様分子。 ５８．細胞毒ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメージ化試薬に結合した 非ヒト霊長類ＣＤ４分子あるいはそのＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合性断片 。 ５９．リシンまたはジフテリア毒素からなる細胞毒ポリペプチドに結合した非ヒ ト霊長類ＣＤ４分子あるいはそのＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合性断片から なる融合タンパク質。 ６０．細胞毒素ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメージ化試薬に結合し た請求項４０のｇｐ１２０結合性断片。 ６１．細胞毒素ポリペプチド、放射性標識またはＮＭＲイメージ化試薬に結合し た請求項４０のｇｐ１２０結合性分子からなる融合タンパク質。 ６２．本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４およびＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０ からなる複合体。 ６３．ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合性非ヒト霊長類ＣＤ４断片およびＨＩ ＶまたはＳＩＶｇｐ１２０からなる複合体。 ６４．ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０結合性非ヒト霊長類ＣＤ４可溶性断片およ びＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０からなる複合体。 ６５．請求項４４の融合タンパク質およびＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０からな る複合体。 ６６．請求項５０の融合タンパク質およびＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０からな る複合体。 ６７．請求項３３のｇｐ１２０結合性分子およびＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０ からなる複合体。 ６８．請求項４０のｇｐ１２０結合性分子およびＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０ からなる複合体。 ６９．該ｇｐ１２０がＨＩＶまたはＳＩＶの一部であるか、あるいはＨＩＶまた はＳＩＶ感染細胞の表面上に発現するか、あるいは溶液中に存在する、請求項６ ２〜６９のいずれかの複合体。 ７０．ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を必要とする 動物に治療的に有効な量の本質的に純粋な非ヒト霊長類ＣＤ４を投与することか らなる方法。 ７１．該動物がヒトである請求項７０の方法。 ７２．ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を必要とする 動物に治療的に有効な量の、ＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０を結合できる非ヒト 霊長類ＣＤ４断片を投与することからなる方法。 ７３．該動物がヒトである請求項７２の方法。 ７４．該断片が水性溶液に可溶である請求項７２の方法。 ７５．ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を必要とする 動物に治療的に有効な量の請求項４４または５０の融合タンパク質を投与するこ とからなる方法。 ７６．ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を必要とする 動物に治療的に有効な量の請求項４７または５５の免疫グロブリン様分子を投与 することからなる方法。 ７７．ＨＩＶまたはＳＩＶ感染の治療法であって、そのような治療を必要とする 動物に治療的に有効な量の請求項３３または４０のｇｐ１２０結合性分子を投与 することからなる方法。 ７８．該動物がヒトである請求項７５の方法。 ７９．該動物がヒトである請求項７６の方法。 ８０．該動物がヒトである請求項７７の方法。 ８１．試料中のＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０の検出法であって、（ａ）ＨＩＶ またはＳＩＶｇｐ１２０を含有すると推測される試料を請求項４４または５０の 融合タンパク質と接触させ；（ｂ）複合体が生成するか否かを検出する；ことか らなる方法。 ８２．該融合タンパク質が検出可能なように標識されている請求項８１の方法。 ８３．試料中のＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０の検出法であって、（ａ）ＨＩＶ またはＳＩＶｇｐ１２０を含有すると推測される試料を非ヒト霊長類ＣＤ４ある いはＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０に結合可能なその断片と接触させ； （ｂ）複合体が生成したか否かを検出する；ことからなる方法。 ８４．該非ヒト霊長類ＣＤ４あるいはその断片が検出可能なように標識されてい る請求項８３の方法。 ８５．試料中のＨＩＶまたはＳＩＶｇｐ１２０の検出法であって、（ａ）ＨＩＶ またはＳＩＶｇｐ１２０を含有すると推測される試料を請求項３３または４０の ｇｐ１２０結合性分子と接触させ；（ｂ）複合体が生成したか否かを検出する； ことからなる方法。 ８６．該ｇｐ１２０結合性分子が検出可能なように標識されている請求項８５の 方法。