JPH0533039B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は酵素法によるＬ−２−アミノ−４−フ
エニル酪酸の新規製法に関する。

（従来技術） 本発明の目的化合物Ｌ−２−アミノ−４−フエ
ニル酪酸は高血圧治療剤である２−オキソイミダ
ゾリジン誘導体の合成中間体として重要な物質で
あり、又、必須アミノ酸Ｌ−フエニルアラニンの
類似化合物として生化学分野で代謝拮抗作用など
の種々の用途を有する有用な物質である。

従来、Ｌ−２−アミノ−４−フエニル酪酸の製
法としては、２−オキソ−４−フエニル酪酸にア
クロモバクター属又はアシネトバクター属などの
微生物の培養液、該培養液から得た菌体又は該菌
体の処理物を作用させる生化学手法を用いる方法
（特開昭第60−156394号）が知られているが、こ
の方法は原料が高価であるため、必ずしも工業的
に有利な方法であるとはいえず、新しい方法の開
発が嘱望されていた。

（発明の構成及び効果） 本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、フラボバ
クテリウム属に属する微生物又はその処理物を用
いてDL−５−フエネチルヒダントインをＬ−２
−アミノ−４−フエニル酪酸へ転換させうること
を見出し、本発明を完成するに至つた。

即ち、本発明によれば、Ｌ−２−アミノ−４−
フエニル酪酸は、DL−５−フエネチルヒダント
インからＬ−２−アミノ−４−フエニル酪酸を生
成する能力を有するフラボバクテリウム属微生物
の培養液、該培養液から得た菌体又は菌体処理物
をDL−５−フエネチルヒダントインに作用させ
ることにより製造することができる。

本発明に使用されるフラボバクテリウム属微生
物としてはDL−５−フエネチルヒダントインか
らＬ−２−アミノ−４−フエニル酪酸を生成する
能力を有するものであればよく、例えばフラボバ
クテリウム・エスピー（Flavobacterium sp.）
−３（微工研菌寄第6901号）が好ましい。本発
明で使用する微生物を培養する培地としては特に
限定されず、この分野で微生物の培養に用いるこ
とができるものであればよい。例えば、培地の炭
素源としては微生物が利用可能なものであれば、
いずれも使用でき、具体的にはグルコース、ラク
トース、シユクロース、マルトース、デキストリ
ン、グリセリン、ソルビトールなどの糖もしくは
糖アルコール、フマール酸、クエン酸などの有機
酸を好適に用いることができる。かかる炭素源の
培地への添加量は通常0.1〜10％程度とするのが
好ましい。窒素源としては、塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、炭酸アンモニウム等の無機酸アンモ
ニウム塩、フマール酸アンモニウム、クエン酸ア
ンモニウム等の有機酸アンモニウム塩等を使用す
ることができる。更に、肉エキス、酵母エキス、
コーンステイープリカー、カゼイン加水分解物等
の天然有機窒素源も好適に使用することができ、
これらの天然有機窒素源は多くの場合、窒素源で
あるとともに炭素源としても用いることができ
る。窒素源の添加量は通常0.1〜10％の範囲が好
適である。また、無機塩類としては、例えば硫酸
第一鉄、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、リン
酸一カリウム、リン酸二ナトリウム、塩化ナトリ
ウム等を適宜使用することができる。その使用量
は通常0.001〜１％の範囲が好適である。更に、
DL−５−（インドール−３−イル−メチル）ヒダ
ントイン等のヒダントイン化合物をDL−５−フ
エネチルセダントインからＬ−２−アミノ−４−
フエニル酪酸生成能力の誘導物質として培地に少
量添加することにより、好結果を得ることができ
る。

微生物の培養は常法により実施すればよく、例
えば、培地のPHを５〜９、好ましくは６〜８に調
製した後、菌株を接種し、20〜33℃、好ましくは
26〜30℃で通気又は攪拌下好気的に16〜72時間培
養する。

このようにして得られる培養液はそのままLD
−５−フエネチルヒダントインからＬ−２−アミ
ノ−４−フエニル酪酸への転換反応に用いても良
いが、該培養液から採取した菌体あるいは該菌体
の処理物（例えば、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥
菌体、菌体磨砕物、菌体処理物など）を酵素源と
して用いることもできる。又、菌体あるいは菌体
処理物を例えば含硫多糖類ゲル法（カラギーナン
ゲル法等）、ポリアクリルアミドゲル法、アルギ
ン酸ゲル法または寒天ゲル法などの公知方法によ
り固定化して使用することもできる。更に菌体抽
出物から公知方法を組み合わせて精製取得した酵
素も用いることができる。

かくして得られる微生物の培養液、該培養液か
ら採取した菌体もしくはその処理物とDL−５−
フエネチルヒダントインとの酵素反応は水溶液系
で実施することができる。

また、DL−５−フエネチルヒダントインは該
水溶液中で約0.1〜30W／Ｖ％となるように用い
るのが好ましい。

反応は約20〜60℃、とりわけ約30〜45℃で、PH
は約６〜10、とりわけ７〜９の条件下で好適に進
行する。

更に、本発明方法においては、反応液中に適宜
界面活性剤（例えば臭化セチルトリメチルアンモ
ニウム、トリトンＸ−100等）、有機溶媒（例え
ば、エタノール、ジメチルスルホキシド等）、無
機イオン（例えば、マンガンイオン、コバルトイ
オン等）を添加することにより反応時間の短縮あ
るいはＬ−２−アミノ−４−フエニル酪酸の蓄積
量の増加に有効な場合がある。

かくして、生成したＬ−２−アミノ−４−フエ
ニル酪酸は水に殆ど不溶であるため、そのまま採
取することができ、また、反応終了液に酸又はア
ルカリを加えて溶解させた後、濾過して不溶物を
除き、濾液を中和してＬ−２−アミノ−４−フエ
ニル酪酸結晶を析出させ、分離採取することもで
きる。

以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
る。なお、実施例中のDL−５−フエネチルヒダ
ントイン及びＬ−２−アミノ−４−フエニル酪酸
の定量は高速液体クロマトグラフイー法により行
い、Ｌ−２−アミノ−４−フエニル酪酸の確認は
反応液から取得した結晶の元素分析値並びに予め
合成したＮ−アセチル−DL−２−アミノ−４−
フエニル酪酸に市販のＬ型のみに作用するアミノ
アシラーゼを作用させて調製したＬ−２−アミノ
−４−フエニル酪酸と比旋光度、NMR及びIRス
ペクトルを比較するなどして行つた。

実施例 １ デキストリン２％、塩化アンモニウム0.4％、
酵母エキス0.1％、ペプトン0.1％、リン酸一カリ
ウム0.3％、リン酸二カリウム0.7％、硫酸マグネ
シウム・７水和物0.01％、硫酸第一鉄・７水和物
0.001％、硫酸マンガン・４〜６水和物0.003％、
DL−５−（インドール−３−イル−メチル）ヒダ
ントイン0.2％から成る培地50ml（PH7.0）を500
ml容振とうフラスコに充填し、120℃で10分間滅
菌した。該培地にフラボバクテリウム・エスピー
（Flavobacterium sp.）−３（微工研菌寄第
6901号）を接種後、28℃で24時間振とう培養し
た。該培養終了液にDL−５−フエネチルヒダン
トイン2.5gを加え、PHを水酸化ナトリウムで常に
8.5に保ち、37℃で２日放置し、Ｌ−２−アミノ
−４−フエニル酪酸2.1gを含む反応液を得た（転
換率84％）。該液に濃塩酸を加えてPH0.5とし、濾
過した後、濾液を水酸化ナトリウムで中和し、析
出した結晶を濾取することにより、Ｌ−２−アミ
ノ−４−フエニル酪酸の結晶1.9gを得た。（収率
90％） 融点；286〜288℃（分解） 旋光度；〔α〕²² _D＝＋47°（Ｃ＝１，1N−HCl） 実施例 ２ Dl−５−フエネチルヒダントイン5.0gを約40ml
の0.02％臭化セチルトリメチルアンモニウム水溶
液に懸濁し、水酸化ナトリウムを加えて溶解し
た。次いで、塩酸を加えてDL−５−フエネチル
ヒダントインをアモロフオス状とし、PHを8.5に
調製した後、水を加えて50mlとした。これに実施
例１と同様にして得た微生物の培養液100mlから
遠心分離にて採取した菌体を加えて懸濁した。該
懸濁液のPHを常に8.5に保ちながら37℃で２日間
放置しＬ−２−アミノ−４−フエニル酪酸4.7gを
含む反応液を得た（転換率94％）。以下、実施例
１と同様にしてＬ−２−アミノ−４−フエニル酪
酸の結晶4.3gを得た。（収率91％） 旋光度；〔α〕²² _D＝＋47°（Ｃ＝１，1N−HCl）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ フラボバクテリウム属に属し、DL−５−フ
   エネチルヒダントインからＬ−２−アミノ−４−
   フエニル酪酸を生成させる能力を有する微生物の
   培養液、該培養液から採取した菌体又は該菌体の
   処理物をDL−５−フエネチルヒダントインに作
   用させ、生成したＬ−２−アミノ−４−フエニル
   酪酸を採取することを特徴とするＬ−２−アミノ
   −４−フエニル酪酸の製法。