JPH05308968A - 液状の尿酸オキシダーゼ酵素の安定化方法 - Google Patents
液状の尿酸オキシダーゼ酵素の安定化方法Info
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- JPH05308968A JPH05308968A JP4124820A JP12482092A JPH05308968A JP H05308968 A JPH05308968 A JP H05308968A JP 4124820 A JP4124820 A JP 4124820A JP 12482092 A JP12482092 A JP 12482092A JP H05308968 A JPH05308968 A JP H05308968A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0044—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 尿酸の臨床分析測定用のウリカーゼ酵素（尿
酸オキシダーゼ）含有液状製剤の長期安定性を改善する
こと。 【構成】 ウリカーゼ酵素の液状製剤中にＣ2 〜Ｃ5 、
好ましくはＣ4 またはＣ5 の置換または非置換ジカルボ
ン酸を添加する。 【効果】 製剤の安定性が向上し、しかも尿酸分析に伴
なう反応の進行が妨害されることがない。
酸オキシダーゼ）含有液状製剤の長期安定性を改善する
こと。 【構成】 ウリカーゼ酵素の液状製剤中にＣ2 〜Ｃ5 、
好ましくはＣ4 またはＣ5 の置換または非置換ジカルボ
ン酸を添加する。 【効果】 製剤の安定性が向上し、しかも尿酸分析に伴
なう反応の進行が妨害されることがない。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は尿酸オキシダーゼ（通常
はウリカーゼと称され、以下そのように称する）の安定
化に関する。
はウリカーゼと称され、以下そのように称する）の安定
化に関する。
【０００２】ウリカーゼは、ヒトを除くほとんどの動物
の肝臓、ひ臓及び腎臓中に存在する酵素であり、酵素の
存在下では、下記の反応に従って尿酸をアラントインに
転化すると共に過酸化水素を発生させる。
の肝臓、ひ臓及び腎臓中に存在する酵素であり、酵素の
存在下では、下記の反応に従って尿酸をアラントインに
転化すると共に過酸化水素を発生させる。
【０００３】 主として微生物起源のウリカーゼは、一般に、生体液中
の尿酸を測定するために臨床分析研究室で使用される。
の尿酸を測定するために臨床分析研究室で使用される。
【０００４】尿酸はプリン異化代謝の最終生成物であ
り、ヒトはそれをさらに異化代謝できないので血液及び
尿中にそれは見出される。生体液中の尿酸の測定方法
は、尿酸を血液中に蓄積させる過剰産生または低減分泌
の症状（いわゆる高尿酸血）に関連する独特の臨床的重
要事項を推測する。この異常病理状態の典型例は、痛風
によって代表され、この場合には尿酸濃度の増大に引き
続いて尿酸ナトリウム結晶が軟骨中に沈澱する。
り、ヒトはそれをさらに異化代謝できないので血液及び
尿中にそれは見出される。生体液中の尿酸の測定方法
は、尿酸を血液中に蓄積させる過剰産生または低減分泌
の症状（いわゆる高尿酸血）に関連する独特の臨床的重
要事項を推測する。この異常病理状態の典型例は、痛風
によって代表され、この場合には尿酸濃度の増大に引き
続いて尿酸ナトリウム結晶が軟骨中に沈澱する。
【０００５】血清中の尿酸を臨床的に測定するために一
般的に用いられる一方法は、上記の反応を、光度測定可
能な着色（有色）化合物の生成をもたらす第２の反応
（いわゆるトリンダー：Ｔｒｉｎｄｅｒ反応のような反
応）と組合せて利用する。
般的に用いられる一方法は、上記の反応を、光度測定可
能な着色（有色）化合物の生成をもたらす第２の反応
（いわゆるトリンダー：Ｔｒｉｎｄｅｒ反応のような反
応）と組合せて利用する。
【０００６】すべての酵素がそうであるように、ウリカ
ーゼは、劣った安定性を有し、従って通常は、凍結乾燥
粉末のような固体状態で市販されている。固体状態より
も低い酵素安定性を有するが、液状調剤は製造するのが
より容易であり、敏感かつ有毒な粉末と接触することが
少ないので人身に対する危険が少なく、そしてより快適
に使用されうる。
ーゼは、劣った安定性を有し、従って通常は、凍結乾燥
粉末のような固体状態で市販されている。固体状態より
も低い酵素安定性を有するが、液状調剤は製造するのが
より容易であり、敏感かつ有毒な粉末と接触することが
少ないので人身に対する危険が少なく、そしてより快適
に使用されうる。
【０００７】経費のかかる製造方法を伴なわず、その酵
素を製造または使用する人への危険を防止し、そしてそ
の使用を簡易化（例えば試薬の調製のために必要とされ
る時間を短縮することにより）するウリカーゼ酵素の液
状製剤を達成することの重要性は、従って明かである。
素を製造または使用する人への危険を防止し、そしてそ
の使用を簡易化（例えば試薬の調製のために必要とされ
る時間を短縮することにより）するウリカーゼ酵素の液
状製剤を達成することの重要性は、従って明かである。
【０００８】
【従来の技術】公知ウリカーゼ溶液は、例えばＨ．Ｕ．
ベルグメーヤー（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ）編の「Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ」Ｖｏｌ，ＶＩＩ、第３版（ＶＣＨ Ｖｅｒｌａｇｓ
ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｈｅｉｍ，１９８５
年第３２３頁）に記載されており、５０ｍＭのグリセリ
ン及び１３０ｍＭの炭酸ナトリウムを含み、ｐＨ１０．
２の５０％グリセリン水溶液が記載されており、４℃で
数ケ月間安定であると述べられている。
ベルグメーヤー（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ）編の「Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ」Ｖｏｌ，ＶＩＩ、第３版（ＶＣＨ Ｖｅｒｌａｇｓ
ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｈｅｉｍ，１９８５
年第３２３頁）に記載されており、５０ｍＭのグリセリ
ン及び１３０ｍＭの炭酸ナトリウムを含み、ｐＨ１０．
２の５０％グリセリン水溶液が記載されており、４℃で
数ケ月間安定であると述べられている。
【０００９】英国ケンブリッジのＥｎｚｙｍａｔｉｃ
Ｌｔｄは、５０ｍＭリン酸塩緩衝液中のｐＨ７．５のウ
リカーゼ組成物を製造しており、このものは４℃及び常
温の両方において数ケ月安定であると言われる。しかし
該酵素は、より高い温度では低安定性であるから、臨床
実験者は、一般の非冷蔵式輸送手段による輸送中、ある
いは使用前の酵素の貯蔵中に発生しうる酵素貯蔵温度の
変化により低減された活性ないしは無活性となった酵素
を使用するというリスクに曝されることとなる。
Ｌｔｄは、５０ｍＭリン酸塩緩衝液中のｐＨ７．５のウ
リカーゼ組成物を製造しており、このものは４℃及び常
温の両方において数ケ月安定であると言われる。しかし
該酵素は、より高い温度では低安定性であるから、臨床
実験者は、一般の非冷蔵式輸送手段による輸送中、ある
いは使用前の酵素の貯蔵中に発生しうる酵素貯蔵温度の
変化により低減された活性ないしは無活性となった酵素
を使用するというリスクに曝されることとなる。
【００１０】多様な物質の安定化効果についての実験も
実施されてきている。例えば、カルボン酸類のような広
範な化合物群はワイズマン（Ｗｉｓｅｍａｎ）の文献
「Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」１９７３年８月号
第１４頁において特定の場合に安定化効果を与えうると
述べられている。しかしながら、これらの薬剤の安定化
能力と特定の酵素との間の関連性は全く見出されておら
ず、そして事実多くの場合に、カルボン酸及びその他の
試薬の酵素に対する効果（架橋）は安定化に向かわずむ
しろ反対に酵素の不活性化をもたらすことが明示的に認
識されている。
実施されてきている。例えば、カルボン酸類のような広
範な化合物群はワイズマン（Ｗｉｓｅｍａｎ）の文献
「Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」１９７３年８月号
第１４頁において特定の場合に安定化効果を与えうると
述べられている。しかしながら、これらの薬剤の安定化
能力と特定の酵素との間の関連性は全く見出されておら
ず、そして事実多くの場合に、カルボン酸及びその他の
試薬の酵素に対する効果（架橋）は安定化に向かわずむ
しろ反対に酵素の不活性化をもたらすことが明示的に認
識されている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の一目的
は、ウリカーゼ酵素の製剤が従来の製品よりも大きな経
時安定性を示し、製造経済性を示し、そして使用容易性
を示すように、ウリカーゼ酵素製剤を安定化する方法を
提供することである。
は、ウリカーゼ酵素の製剤が従来の製品よりも大きな経
時安定性を示し、製造経済性を示し、そして使用容易性
を示すように、ウリカーゼ酵素製剤を安定化する方法を
提供することである。
【００１２】本発明の別のさらに詳しい目的は、初期尿
酸の分析測定のために、酵素ウリカーゼにより触媒作用
を受ける反応中に発生される過酸化水素を利用するのに
必要な試薬を含む即使用可能な単液式試薬液におけるウ
リカーゼを安定化する方法を提供することである。
酸の分析測定のために、酵素ウリカーゼにより触媒作用
を受ける反応中に発生される過酸化水素を利用するのに
必要な試薬を含む即使用可能な単液式試薬液におけるウ
リカーゼを安定化する方法を提供することである。
【００１３】特に、ペルオキシダーゼ酵素による妨害
（干渉）を最小限化して、ウリカーゼがいわゆるトリン
ダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）反応（この反応にはペルオキシ
ダーゼ酵素の使用が必須である）による尿酸測定のため
の試薬中で使用されうるようにするウリカーゼ酵素安定
化方法を提供することを意図している。
（干渉）を最小限化して、ウリカーゼがいわゆるトリン
ダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）反応（この反応にはペルオキシ
ダーゼ酵素の使用が必須である）による尿酸測定のため
の試薬中で使用されうるようにするウリカーゼ酵素安定
化方法を提供することを意図している。
【００１４】この点に関して本発明は、即使用可能な経
時安定性製剤を得ることができるウリカーゼ酵素の液状
組成物の製造に関している。
時安定性製剤を得ることができるウリカーゼ酵素の液状
組成物の製造に関している。
【００１５】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、ウリカ
ーゼ酵素の液状製剤中に、２〜５個、好ましくは４また
は５個の炭素原子を含む非置換または置換ジカルボン酸
を導入することを特徴とするウリカーゼ酵素の液状製剤
の安定化方法が提供される。
ーゼ酵素の液状製剤中に、２〜５個、好ましくは４また
は５個の炭素原子を含む非置換または置換ジカルボン酸
を導入することを特徴とするウリカーゼ酵素の液状製剤
の安定化方法が提供される。
【００１６】本発明によるウリカーゼ酵素の即使用可能
な安定化液状製剤は、２〜５個、好ましくは４または５
個の炭素原子を含む置換または非置換ジカルボン酸を含
有することを特徴としている。
な安定化液状製剤は、２〜５個、好ましくは４または５
個の炭素原子を含む置換または非置換ジカルボン酸を含
有することを特徴としている。
【００１７】この点に関して、驚くべきことに、Ｃ2 〜
Ｃ5 ジカルボン酸（置換されていてもよい）を５００ｍ
Ｍを超える濃度で、ウリカーゼ酵素含有溶液中に添加す
ると、液状製剤中のウリカーゼ酵素の予想外の安定化効
果が現れるということを発見した。
Ｃ5 ジカルボン酸（置換されていてもよい）を５００ｍ
Ｍを超える濃度で、ウリカーゼ酵素含有溶液中に添加す
ると、液状製剤中のウリカーゼ酵素の予想外の安定化効
果が現れるということを発見した。
【００１８】例示のために、以下にいくつかの本発明に
よる製剤の例を示すが、これらについて行なった実験
は、それらの性質が本発明の目的に適合することを明か
にした。
よる製剤の例を示すが、これらについて行なった実験
は、それらの性質が本発明の目的に適合することを明か
にした。
【００１９】これらの実験結果は表及び図面によって示
されている。
されている。
【００２０】
【実施例１】酵素ウリカーゼを含む溶液（ホウ酸塩緩衝
液で０．２〜０．５Ｕ／ｍｌに稀釈）の０．０５ｍｌ
を、０．０２Ｍホウ酸塩緩衝液中の０．１３ｍＭ尿酸溶
液（ｐＨ９．０、３７℃に保持）に、添加することによ
り、ウリカーゼ活性を測定した。
液で０．２〜０．５Ｕ／ｍｌに稀釈）の０．０５ｍｌ
を、０．０２Ｍホウ酸塩緩衝液中の０．１３ｍＭ尿酸溶
液（ｐＨ９．０、３７℃に保持）に、添加することによ
り、ウリカーゼ活性を測定した。
【００２１】前記反応式による尿酸のアラントインへの
転化を、３分間にわたり２９２ｎｍにおいて追跡した。
転化を、３分間にわたり２９２ｎｍにおいて追跡した。
【００２２】図１のグラフにおいて、すべての場合に非
置換ジカルボン酸を７５０ｍＭの最終濃度及びｐＨ８ま
で添加し、残留活性を、溶液を６０℃で４０分間維持し
た後の促進安定性試験により測定したものである。
置換ジカルボン酸を７５０ｍＭの最終濃度及びｐＨ８ま
で添加し、残留活性を、溶液を６０℃で４０分間維持し
た後の促進安定性試験により測定したものである。
【００２３】その種類は、酸の２〜５個の炭素原子数を
表わし、０はカルボン酸が添加されていないことを表わ
している。他方、縦軸は初期活性値の百分率として表わ
した残留活性値を示す。
表わし、０はカルボン酸が添加されていないことを表わ
している。他方、縦軸は初期活性値の百分率として表わ
した残留活性値を示す。
【００２４】それぞれ２〜５個の炭素原子を含む下記の
カルボン酸を添加した；シュウ酸、マロン酸、シクシン
酸、グルタル酸及びアジピン酸。
カルボン酸を添加した；シュウ酸、マロン酸、シクシン
酸、グルタル酸及びアジピン酸。
【００２５】図１のグラフから、酵素活性回復ピークは
シュウ酸に対応することが判る。
シュウ酸に対応することが判る。
【００２６】６．５〜１０のｐＨ範囲内において、ｐＨ
８はその付近で酵素安定化効果が最適化される値である
ことが確認された。
８はその付近で酵素安定化効果が最適化される値である
ことが確認された。
【００２７】実験は、「安定剤のミリモル値／ｌ」：
「酵素の活性単位／ｌ」の比が、酵素安定性の顕著な変
化を生じさせることなく、１：３から１：０．２まで変
動しうることも示した。
「酵素の活性単位／ｌ」の比が、酵素安定性の顕著な変
化を生じさせることなく、１：３から１：０．２まで変
動しうることも示した。
【００２８】実用的酵素濃度、すなわち１００Ｕ／ｌな
いし１０００Ｕ／ｌの溶液については、５００ｍＭのジ
カルボン酸濃度は、その付近で酵素に対するジカルボン
酸の安定化効果が実質的に出現し始める値であることが
確認された。
いし１０００Ｕ／ｌの溶液については、５００ｍＭのジ
カルボン酸濃度は、その付近で酵素に対するジカルボン
酸の安定化効果が実質的に出現し始める値であることが
確認された。
【００２９】再び、７５０ｍＭのジカルボン酸濃度は、
その付近で酵素に対するジカルボン酸の安定化効果が実
用目的のために満足である値として確認された。
その付近で酵素に対するジカルボン酸の安定化効果が実
用目的のために満足である値として確認された。
【００３０】
【実施例２】実施例１に述べた非置換ジカルボン酸以外
に、酒石酸及びアスパラギン酸のような置換ジカルボン
酸も試験した。
に、酒石酸及びアスパラギン酸のような置換ジカルボン
酸も試験した。
【００３１】図２はアスパラギン酸濃度の関数としての
ウリカーゼ活性（促進試験）のグラフである。このグラ
フは、アスパラギン酸（位置２においてアミノ置換基を
有するＣ4 ジカルボン酸）の種々の濃度をもつ溶液を６
０℃で４０分間インキュベーートした後のウリカーゼ活
性を測定することにより得られたものである。ウリカー
ゼ活性は実施例１のようにして測定した。
ウリカーゼ活性（促進試験）のグラフである。このグラ
フは、アスパラギン酸（位置２においてアミノ置換基を
有するＣ4 ジカルボン酸）の種々の濃度をもつ溶液を６
０℃で４０分間インキュベーートした後のウリカーゼ活
性を測定することにより得られたものである。ウリカー
ゼ活性は実施例１のようにして測定した。
【００３２】図２のグラフから、溶液中のウリカーゼの
活性に対する安定化効果が、約５００ｍＭのアスパラギ
ン酸濃度のところで生じ始めることが判る。
活性に対する安定化効果が、約５００ｍＭのアスパラギ
ン酸濃度のところで生じ始めることが判る。
【００３３】
【実施例３】アスパラギン酸の安定化効果は、この実施
例によって明かに示される。この実施例においては、前
記の英国ケンブリッジのＥｎｚｙｍａｔｉｃ Ｌｔｄ製
のリン酸塩緩衝液中のウリカーゼ溶液を、アスパラギン
酸を添加し、または添加することなく試験することによ
り、下記表１のデータを得た。
例によって明かに示される。この実施例においては、前
記の英国ケンブリッジのＥｎｚｙｍａｔｉｃ Ｌｔｄ製
のリン酸塩緩衝液中のウリカーゼ溶液を、アスパラギン
酸を添加し、または添加することなく試験することによ
り、下記表１のデータを得た。
【００３４】
【表１】 ６０℃で４０分後の残留活性 リン酸塩緩衝液のみ ２２％ リン酸塩緩衝液にアスパラギン酸添加 ５５％ 前述のように、尿酸がアラントインに変化する反応（ウ
リカーゼによる触媒作用を受ける）中の過酸化水素の生
成は、その生成過酸化水素を比色測定するためのトリン
ダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）反応：すなわち、 と組合せて利用できるようにする。トリンダー反応は、
発生水素をペルオキシダーゼ酵素と特定のクロモーゲン
とを用いて比色的に測定する反応を一般的に意味するも
のである。トリンダー反応についてのより詳しい情報は
我々の米国特許第５，１０８，７３３号明細書（１９９
２年４月２８日）に記載されている。
リカーゼによる触媒作用を受ける）中の過酸化水素の生
成は、その生成過酸化水素を比色測定するためのトリン
ダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）反応：すなわち、 と組合せて利用できるようにする。トリンダー反応は、
発生水素をペルオキシダーゼ酵素と特定のクロモーゲン
とを用いて比色的に測定する反応を一般的に意味するも
のである。トリンダー反応についてのより詳しい情報は
我々の米国特許第５，１０８，７３３号明細書（１９９
２年４月２８日）に記載されている。
【００３５】ウリカーゼ酵素、トリンダー試薬及び上述
の置換または非置換ジカルボン酸の一つを含む、尿酸臨
床測定用の液体製剤を本方法で試験した。
の置換または非置換ジカルボン酸の一つを含む、尿酸臨
床測定用の液体製剤を本方法で試験した。
【００３６】この試験は、溶液中のウリカーゼを安定化
させるのに有用なカルボン酸のうちの若干のものが、ト
リンダー試薬中に存在するペルオキシダーゼ酵素の機能
に負の作用を及ぼし、かくして、分析目的のために発生
過酸化水素を利用するためにペルオキシダーゼ酵素の使
用を伴なう試薬の処方物を、使用できなくすることがあ
りうることを明かにした。
させるのに有用なカルボン酸のうちの若干のものが、ト
リンダー試薬中に存在するペルオキシダーゼ酵素の機能
に負の作用を及ぼし、かくして、分析目的のために発生
過酸化水素を利用するためにペルオキシダーゼ酵素の使
用を伴なう試薬の処方物を、使用できなくすることがあ
りうることを明かにした。
【００３７】アスパラギン酸は、ウリカーゼ酵素を著し
く安定化させると同時にトリンダー試薬を妨害しないと
いう二重の機能において、他のジカルボン酸よりも良好
であることが示された。
く安定化させると同時にトリンダー試薬を妨害しないと
いう二重の機能において、他のジカルボン酸よりも良好
であることが示された。
【００３８】下記の実施例は、トリンダー試薬を含み、
アスパラギン酸で安定化された、尿酸測定用の即時使用
可能単液式試薬の性能を示すために、促進化安定度試験
に関して興味ある実験データを与えるものである。
アスパラギン酸で安定化された、尿酸測定用の即時使用
可能単液式試薬の性能を示すために、促進化安定度試験
に関して興味ある実験データを与えるものである。
【００３９】
【実施例４】下記の処方物を使用した。
【００４０】 アスパラギン酸 ７５０ｍＭ ＤＰＴＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸） ２．５ｍＭ ＮａＯＨ ＰＨ８．０とする量 ＴＯＯＳ〔Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３ −スルホプロピル）−ｍ−トルイジン ２．４ｍＭ ４−ＡＡ（４−アミノアンチピリン） １．６ｍＭ アジド・ナトリウム塩 １ ｇ／ｌ ペルオキシダーゼ ５０００Ｕ／ｌ ウリカーゼ ６００Ｕ／ｌ トリンダー試薬の自発着色に対する抑制剤としてのＤＰ
ＴＡの使用についての情報は、米国特許第５，１０８，
７３３号明細書に記載されている。ＴＯＯＳ及び４−Ａ
Ａはトリンダー試薬のクロモーゲンであり、アジド・ナ
トリウム塩は抗微生物剤である。
ＴＡの使用についての情報は、米国特許第５，１０８，
７３３号明細書に記載されている。ＴＯＯＳ及び４−Ａ
Ａはトリンダー試薬のクロモーゲンであり、アジド・ナ
トリウム塩は抗微生物剤である。
【００４１】６．５〜１０のｐＨ範囲の中で、ｐＨ８は
両方の反応のために最適値に近いことが認められた。こ
のタイプの液体組成物についても、５００ｍＭのジカル
ボン酸濃度は、酵素へのジカルボン酸の安定化効果が表
れ始める値に近いことが確認された。
両方の反応のために最適値に近いことが認められた。こ
のタイプの液体組成物についても、５００ｍＭのジカル
ボン酸濃度は、酵素へのジカルボン酸の安定化効果が表
れ始める値に近いことが確認された。
【００４２】また７５０ｍｌのジカルボン酸濃度は組成
物中に含まれるトリンダー試薬への妨害を生じることな
くジカルボン酸の安定化効果が最大となる値に近いこと
が確認された。さらには、実験は、「安定剤のミリモル
／ｌ」：「酵素の単位／ｌ」の比が、酵素の安定性を著
しく変えることなく、１：１から１：０．２までの間で
変動できることも示した。我々が製造しているモナーク
（Ｍｏｎａｒｃｈ）ケミストリィ・アナライザーを用い
て分析及び性能試験を実施した。安定化されていない凍
結乾燥試薬を尿酸測定のために参照試料として用いた。
物中に含まれるトリンダー試薬への妨害を生じることな
くジカルボン酸の安定化効果が最大となる値に近いこと
が確認された。さらには、実験は、「安定剤のミリモル
／ｌ」：「酵素の単位／ｌ」の比が、酵素の安定性を著
しく変えることなく、１：１から１：０．２までの間で
変動できることも示した。我々が製造しているモナーク
（Ｍｏｎａｒｃｈ）ケミストリィ・アナライザーを用い
て分析及び性能試験を実施した。安定化されていない凍
結乾燥試薬を尿酸測定のために参照試料として用いた。
【００４３】機器試験データは下記の通りであった： 温度 ３７℃ 試料容積 ８μｌ 試料稀釈剤 ３２μｌ 試薬容積 ５０μｌ 試薬稀釈剤 １１０μｌ 方法：二波長法（バイクロマチズム）（最終−初期） ６９０ｎｍ−５５０ｎｍ 遅延 ２３０秒 間隔 １５秒 一点キャリブレーション ６ｍｇ／ｄｌ 直線性のために、尿酸の２ｍｇ／ｄｌ、６ｍｇ／ｄｌ及
び１２ｍｇ／ｄｌの標準品（Ｐｒｅｃｉｓｅｔ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉａ）を用い、２０ｍｇ／ｄｌ点のものは我々
の実験室で調製した。
び１２ｍｇ／ｄｌの標準品（Ｐｒｅｃｉｓｅｔ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉａ）を用い、２０ｍｇ／ｄｌ点のものは我々
の実験室で調製した。
【００４４】これらの標準品は、血清中の生理学的及び
病理学的尿酸濃度の範囲、すなわち２〜６ｍｇ／ｄｌ及
び６ｍｇ／ｌ以上に関して使用した。得られたデータを
表２に示す。各値は、三回の繰返し試験のメジアン値で
ある。
病理学的尿酸濃度の範囲、すなわち２〜６ｍｇ／ｄｌ及
び６ｍｇ／ｌ以上に関して使用した。得られたデータを
表２に示す。各値は、三回の繰返し試験のメジアン値で
ある。
【００４５】
【表２】 上記の「Ｐｒｅｃｉｎｏｒｍ Ｕ」（商標）及び「Ｐｒ
ｅｃｉｐａｔｈ Ｕ」（商標）は市販血清であり、それ
ぞれ４．２ｍｇ／ｄｌ及び１０．３ｍｇ／ｄｌの尿酸濃
度を有するものである。
ｅｃｉｐａｔｈ Ｕ」（商標）は市販血清であり、それ
ぞれ４．２ｍｇ／ｄｌ及び１０．３ｍｇ／ｄｌの尿酸濃
度を有するものである。
【００４６】表２のデータからトリダー試薬を含む液体
組成物の活性に対するアスパラギン酸の安定化効果の数
値的に明示される。
組成物の活性に対するアスパラギン酸の安定化効果の数
値的に明示される。
【００４７】液体組成物そのもの（空：ブランク）につ
いて測定した吸光度と対比して、このタイプのウリカー
ゼ液体組成物についてのアスパラギン酸のさらに著しい
効果が明かである。すなわち安定剤を添加すると、試薬
の自発着色を抑制するという作用も発揮される。また実
験は、アスパラギン酸の両方の立体異性体の同等な安定
性能も明かにした。
いて測定した吸光度と対比して、このタイプのウリカー
ゼ液体組成物についてのアスパラギン酸のさらに著しい
効果が明かである。すなわち安定剤を添加すると、試薬
の自発着色を抑制するという作用も発揮される。また実
験は、アスパラギン酸の両方の立体異性体の同等な安定
性能も明かにした。
【００４８】さらには、実験は、安定剤としてアスパラ
ギン酸を添加するか、添加してない参照試薬についての
４５０ｎｍスペクトル及び６００ｎｍスペクトルの曲線
は、試薬と尿酸とを反応させた後に、実用的には同一と
なることを示す。このような二つの曲線の実用的同一性
は、安定剤の存在が上記二反応の進行を如何ようにも妨
害しないことを明かにするものである。
ギン酸を添加するか、添加してない参照試薬についての
４５０ｎｍスペクトル及び６００ｎｍスペクトルの曲線
は、試薬と尿酸とを反応させた後に、実用的には同一と
なることを示す。このような二つの曲線の実用的同一性
は、安定剤の存在が上記二反応の進行を如何ようにも妨
害しないことを明かにするものである。
【図１】ウリカーゼ酵素液に添加したジカルボン酸中の
炭素原子数（横軸）の関数としてのウリカーゼ安定度
（残留活性％；縦軸）のグラフ。
炭素原子数（横軸）の関数としてのウリカーゼ安定度
（残留活性％；縦軸）のグラフ。
【図２】アスパラギン酸濃度（ｍＭ：横軸）の関数とし
てのウリカーゼ安定度（残留活性％；縦軸）のグラフ。
てのウリカーゼ安定度（残留活性％；縦軸）のグラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マウロ・パパンニ イタリア共和国 21052 バレセ，ブス ト・アルシッツィオ，ビア・ベルガモ 11
Claims (22)
- 【請求項１】 ウリカーゼ酵素の液状製剤中に、２〜５
個の炭素原子を含む非置換または置換ジカルボン酸を導
入することを特徴とするウリカーゼ酵素の液状製剤の安
定化方法。 - 【請求項２】 非置換または置換ジカルボン酸が４また
は５個の炭素原子を含むことを特徴とする請求項１の方
法。 - 【請求項３】 「ジカルボン酸のｍＭ／ｌ」：「ウリカ
ーゼのＵ／ｌ」の比が１：３ないし１：０．２であるこ
とを特徴とする請求項１の方法。 - 【請求項４】 ジカルボン酸濃度が５００ｍＭ／ｌを超
えることを特徴とする請求項３の方法。 - 【請求項５】 ジカルボン酸濃度が約７５０ｍＭ／ｌで
あることを特徴とする請求項４の方法。 - 【請求項６】 ジカルボン酸がアスパラギン酸であるこ
とを特徴とする請求項２の方法。 - 【請求項７】 液状製剤が、ウリカーゼによる触媒作用
を受ける反応行程中に生成される過酸化水素の比色測定
のために適当なトリンダー試薬を含むことを特徴とする
請求項２の方法。 - 【請求項８】 ジカルボン酸がアスパラギン酸であるこ
とを特徴とする請求項７の方法。 - 【請求項９】 液状製剤のｐＨが６．５〜１０．０の範
囲内であり、好ましくは約８．０であることを特徴とす
る請求項８の方法。 - 【請求項１０】 「安定剤のｍＭ／ｌ」：「酵素のＵ／
ｌ」の比が１：１ないし１：０．２であることを特徴と
する請求項８の方法。 - 【請求項１１】 アスパラギン酸濃度が約７５０ｍｌ／
ｌであることを特徴とする請求項８の方法。 - 【請求項１２】 ２〜５個の炭素原子を含む置換または
非置換ジカルボン酸を含むことを特徴とする安定化され
たウリカーゼ酵素の液状製剤。 - 【請求項１３】 置換または非置換ジカルボン酸が４ま
たは５個の炭素原子を含むことを特徴とする請求項１２
の安定化液状製剤。 - 【請求項１４】 「ジカルボン酸のｍＭ／ｌ」：「ウリ
カーゼのＵ／ｌ」の比が１：３ないし１：０．２である
ことを特徴とする請求項１２の安定化液状製剤。 - 【請求項１５】 ジカルボン酸濃度が５００ｍＭ／ｌを
超えることを特徴とする請求項１４の安定化液状製剤。 - 【請求項１６】 ジカルボン酸濃度が約７５０ｍＭ／ｌ
であることを特徴とする請求項１５の安定化液状製剤。 - 【請求項１７】 ジカルボン酸がアスパラギン酸である
ことを特徴とする請求項１３の安定化液状製剤。 - 【請求項１８】 ウリカーゼによる触媒作用を受ける反
応行程中に生成される過酸化水素の比色測定に適当なト
リンダー試薬を含むことを特徴とする請求項１３の安定
化液状製剤。 - 【請求項１９】 ジカルボン酸がアスパラギン酸である
ことを特徴とする請求項１８の安定化液状製剤。 - 【請求項２０】 液状製剤のｐＨが６．５〜１０．０の
範囲内であり、好ましくは約８．０であることを特徴と
する請求項１９の安定化液状製剤。 - 【請求項２１】 「安定剤のｍＭ／ｌ」：「酵素のＵ／
ｌ」が１：１ないし１：０．２であることを特徴とする
請求項１９の安定化液状製剤。 - 【請求項２２】 アスパラギン酸濃度が約７５０ｍＭ／
ｌであることを特徴とする請求項１９の安定化液状製
剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT91A001366 | 1991-05-17 | ||
| ITMI911366A IT1247946B (it) | 1991-05-17 | 1991-05-17 | Stabilizzazione in forma liquida dell'enzima urato ossidasi |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05308968A true JPH05308968A (ja) | 1993-11-22 |
Family
ID=11359924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4124820A Pending JPH05308968A (ja) | 1991-05-17 | 1992-05-18 | 液状の尿酸オキシダーゼ酵素の安定化方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5266472A (ja) |
| EP (1) | EP0513914A1 (ja) |
| JP (1) | JPH05308968A (ja) |
| CA (1) | CA2068496A1 (ja) |
| IT (1) | IT1247946B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8569004B2 (en) | 2005-11-10 | 2013-10-29 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for improving heat stability of composition containing water-soluble coenzyme-bound glucose dehydrogenase (GDH) |
Families Citing this family (6)
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| CA2306554A1 (en) * | 1998-08-06 | 2000-02-17 | Jin Po Lee | Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition |
| US6811628B1 (en) * | 2000-10-03 | 2004-11-02 | 3M Innovative Properties Company | Method of finishing a wood substrate |
| DK1899462T3 (da) | 2005-07-02 | 2011-06-06 | Arecor Ltd | Stabile vandige systemer omfattende proteiner |
| US20110171268A1 (en) * | 2008-03-24 | 2011-07-14 | Althea Technologies, Inc. | Uricase compositions and methods of use |
| EP2283027B2 (en) | 2008-05-01 | 2018-04-18 | Arecor Limited | Protein formulation |
| EP2328607A1 (en) | 2008-07-16 | 2011-06-08 | Arecor Limited | Stable formulation of a therapeutic protein |
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| US4094744A (en) * | 1976-11-18 | 1978-06-13 | W. R. Grace & Co. | Water-dispersible protein/polyurethane reaction product |
| DE2718588C3 (de) * | 1977-04-26 | 1979-11-08 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure |
| JPS5664788A (en) * | 1979-10-27 | 1981-06-02 | Unitika Ltd | Method for imparting enzyme activity to solid surface |
| JPS5886083A (ja) * | 1981-11-12 | 1983-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | グリセロ−ル−３−リン酸オキシダ−ゼの安定化剤 |
| JPS60108753A (ja) * | 1983-11-18 | 1985-06-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | 多層化学分析要素 |
| US4766106A (en) * | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| ATE89171T1 (de) * | 1987-06-11 | 1993-05-15 | Kabi Pharmacia Ab | Jod enthaltende emulsion. |
| JPH01240188A (ja) * | 1988-03-18 | 1989-09-25 | Fuji Photo Film Co Ltd | 機能性有機薄膜 |
| US5116729A (en) * | 1989-03-10 | 1992-05-26 | Miles Inc. | Stabilization of oxidase enzyme-based test strips |
| JPH02268681A (ja) * | 1989-04-07 | 1990-11-02 | Green Cross Corp:The | ウロキナーゼ前駆体の安定化方法及び乾燥製剤 |
| EP0456088B1 (en) * | 1990-05-09 | 1996-08-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Stabilized uric acid reagent |
-
1991
- 1991-05-17 IT ITMI911366A patent/IT1247946B/it active IP Right Grant
-
1992
- 1992-05-07 US US07/880,057 patent/US5266472A/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-11 EP EP92201321A patent/EP0513914A1/en not_active Withdrawn
- 1992-05-12 CA CA002068496A patent/CA2068496A1/en not_active Abandoned
- 1992-05-18 JP JP4124820A patent/JPH05308968A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8569004B2 (en) | 2005-11-10 | 2013-10-29 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for improving heat stability of composition containing water-soluble coenzyme-bound glucose dehydrogenase (GDH) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0513914A1 (en) | 1992-11-19 |
| CA2068496A1 (en) | 1992-11-18 |
| US5266472A (en) | 1993-11-30 |
| ITMI911366A0 (it) | 1991-05-17 |
| IT1247946B (it) | 1995-01-05 |
| ITMI911366A1 (it) | 1992-11-17 |
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