JPH05276965A - 発酵法によるｄ−アラニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｄ−アラニンの製造法Info
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- JPH05276965A JPH05276965A JP8244092A JP8244092A JPH05276965A JP H05276965 A JPH05276965 A JP H05276965A JP 8244092 A JP8244092 A JP 8244092A JP 8244092 A JP8244092 A JP 8244092A JP H05276965 A JPH05276965 A JP H05276965A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 Ｄ−アラニン生産能を有し、かつＤ−シクロ
セリンに対して耐性を有するブレビバクテリウム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物をポリア
ルキレングリコール類の存在下に培養して、培養液中に
光学純度の高いＤ−アラニンを生成蓄積せしめ、前記培
養液よりＤ−アラニンを採取することを特徴とする発酵
法によるＤ−アラニンの製造法。 【効果】 高い光学純度と高い生産速度でＤ−アラニン
を生成蓄積させることが可能になり、より安価にＤ−ア
ラニンを製造することが可能となる。
セリンに対して耐性を有するブレビバクテリウム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物をポリア
ルキレングリコール類の存在下に培養して、培養液中に
光学純度の高いＤ−アラニンを生成蓄積せしめ、前記培
養液よりＤ−アラニンを採取することを特徴とする発酵
法によるＤ−アラニンの製造法。 【効果】 高い光学純度と高い生産速度でＤ−アラニン
を生成蓄積させることが可能になり、より安価にＤ−ア
ラニンを製造することが可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は発酵法によるＤ−アラニ
ンの製造法に関するものである。
ンの製造法に関するものである。
【０００２】Ｄ−アラニンはペプチドなどの合成原料と
してあるいはそれ自体試薬として有用な物質である。
してあるいはそれ自体試薬として有用な物質である。
【０００３】
【従来の技術】従来、発酵法によりＤ−アラニンを選択
的に製造する方法として、Ｄ−シクロセリンに耐性を有
するブレビバクテリウム属に属する微生物を用いる方法
が知られている（特開平１−１８７０９１号公報）。
的に製造する方法として、Ｄ−シクロセリンに耐性を有
するブレビバクテリウム属に属する微生物を用いる方法
が知られている（特開平１−１８７０９１号公報）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、この方
法によるＤ−アラニンの生産速度および蓄積濃度は十分
に満足できるものではなく、生産速度を上げようとする
とＬ−アラニンの副生が増加しＤ−アラニンの光学純度
が低下してしまう問題がある。
法によるＤ−アラニンの生産速度および蓄積濃度は十分
に満足できるものではなく、生産速度を上げようとする
とＬ−アラニンの副生が増加しＤ−アラニンの光学純度
が低下してしまう問題がある。
【０００５】本発明は、高い光学純度と生産速度を両立
させたＤ−アラニンの製造法を開発し、より安価にＤ−
アラニンを製造することを目的とするものである。
させたＤ−アラニンの製造法を開発し、より安価にＤ−
アラニンを製造することを目的とするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】前記の課題を解決するた
め、鋭意研究した結果、Ｄ−シクロセリンに耐性を有す
るブレビバクテリウム属に属する微生物を、ポリアルキ
レングリコール類の存在下に培養すると、光学純度の高
いＤ−アラニンが高い生産速度で生成蓄積されることを
見いだし本発明を完成した。
め、鋭意研究した結果、Ｄ−シクロセリンに耐性を有す
るブレビバクテリウム属に属する微生物を、ポリアルキ
レングリコール類の存在下に培養すると、光学純度の高
いＤ−アラニンが高い生産速度で生成蓄積されることを
見いだし本発明を完成した。
【０００７】すなわち本発明は、Ｄ−アラニン生産能を
有し、かつＤ−シクロセリンに対して耐性を有するブレ
ビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に
属する微生物をポリアルキレングリコール類の存在下に
培養して、培養液中に光学純度の高いＤ−アラニンを生
成蓄積せしめ、前記培養液よりＤ−アラニンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＤ−アラニンの製造法で
ある。
有し、かつＤ−シクロセリンに対して耐性を有するブレ
ビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に
属する微生物をポリアルキレングリコール類の存在下に
培養して、培養液中に光学純度の高いＤ−アラニンを生
成蓄積せしめ、前記培養液よりＤ−アラニンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＤ−アラニンの製造法で
ある。
【０００８】次に本発明を詳細に説明する。
【０００９】本発明で用いられるポリアルキレングリコ
ール類を具体的に示すと、たとえばポリエチレングリコ
ール、ポリプロピレングリコール、ポリテトラメチレン
グリコールなどが挙げられる。ポリプロピレングリコー
ルについては平均分子量３０００以上を使用することが
好ましい。同様にポリエチレングリコールについては平
均分子量１０００以上、ポリテトラメチレングリコール
については平均分子量２０００以上を使用することが好
ましい。
ール類を具体的に示すと、たとえばポリエチレングリコ
ール、ポリプロピレングリコール、ポリテトラメチレン
グリコールなどが挙げられる。ポリプロピレングリコー
ルについては平均分子量３０００以上を使用することが
好ましい。同様にポリエチレングリコールについては平
均分子量１０００以上、ポリテトラメチレングリコール
については平均分子量２０００以上を使用することが好
ましい。
【００１０】ポリアルキレングリコール類の添加量は培
養液に対して、通常０．０１〜２重量％とする。
養液に対して、通常０．０１〜２重量％とする。
【００１１】本発明に用いられる微生物は、Ｄ−アラニ
ン生産能を有し、かつＤ−シクロセリンに対して耐性を
有するブレビバクテリウム属に属する微生物である。か
かる性質を有していれば他の要求性、薬剤抵抗性等の性
質を持つものでも本発明に含まれる。
ン生産能を有し、かつＤ−シクロセリンに対して耐性を
有するブレビバクテリウム属に属する微生物である。か
かる性質を有していれば他の要求性、薬剤抵抗性等の性
質を持つものでも本発明に含まれる。
【００１２】本発明で用いられる微生物の代表的なもの
としては、例えばブレビバクテリウム・ラクトファーメ
ンタムＤＣＳＲ−２６（微工研条寄第２０２３号）（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−２０２３）、ブレビバクテリウム・ラク
トファーメンタムＤＣＳＲ１７−２（微工研条寄第２０
２４号）（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０２４）、ブレビバクテ
リウム・フラバムＤＣＳＲ２−２（微工研条寄第２０４
７号）（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０４７）、ブレビバクテリ
ウム・ラクトファーメンタムＨＲ５−４３（微工研菌寄
第１２５５７号）（ＦＥＲＭ Ｐ−１２５５７）が挙げ
られる。
としては、例えばブレビバクテリウム・ラクトファーメ
ンタムＤＣＳＲ−２６（微工研条寄第２０２３号）（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−２０２３）、ブレビバクテリウム・ラク
トファーメンタムＤＣＳＲ１７−２（微工研条寄第２０
２４号）（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０２４）、ブレビバクテ
リウム・フラバムＤＣＳＲ２−２（微工研条寄第２０４
７号）（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０４７）、ブレビバクテリ
ウム・ラクトファーメンタムＨＲ５−４３（微工研菌寄
第１２５５７号）（ＦＥＲＭ Ｐ−１２５５７）が挙げ
られる。
【００１３】本発明におけるＤ−アラニン生産用の培地
は、通常の微生物の培養における培地と同様である。炭
素源としては、グルコース、フラクトース、でんぷんの
加水分解物、糖密等の糖類、酢酸等の有機酸類、エタノ
ール、グリセロール等のアルコール類が、窒素源として
は、酢酸アンモニウム等の有機アンモニウム塩、硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、アンモニア
ガス、アンモニア水等が利用できる。また、有機微量栄
養素として、ビオチン、チアミン塩酸塩等のビタミン
類、または味液、コーンスティープリカー、大豆蛋白等
を適宜添加する。これらの他にリン酸カリウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン等の微量成分が
添加される。
は、通常の微生物の培養における培地と同様である。炭
素源としては、グルコース、フラクトース、でんぷんの
加水分解物、糖密等の糖類、酢酸等の有機酸類、エタノ
ール、グリセロール等のアルコール類が、窒素源として
は、酢酸アンモニウム等の有機アンモニウム塩、硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、アンモニア
ガス、アンモニア水等が利用できる。また、有機微量栄
養素として、ビオチン、チアミン塩酸塩等のビタミン
類、または味液、コーンスティープリカー、大豆蛋白等
を適宜添加する。これらの他にリン酸カリウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン等の微量成分が
添加される。
【００１４】培養は、振とうもしくは通気かくはんのよ
うに好気的条件で４８〜９６時間行う。培養温度は通常
２０〜３７℃、とりわけ３０℃付近に制御することが好
ましい。またｐＨは通常５から９に、好ましくは６〜７
に維持することが望ましい。
うに好気的条件で４８〜９６時間行う。培養温度は通常
２０〜３７℃、とりわけ３０℃付近に制御することが好
ましい。またｐＨは通常５から９に、好ましくは６〜７
に維持することが望ましい。
【００１５】生成したＤ−アラニンは、イオン交換、吸
着、晶析など公知の技術を組み合わせることで培養液よ
り採取することができる。例えば、培養液より菌体を除
去した上清液を、強カチオン交換樹脂に通液した後、吸
着成分を希アンモニア水で溶出させ、脱アンモニア後濃
縮する。これにアルコールを添加し、冷却保存下で生成
した結晶を集め、Ｄ−アラニンを得ることができる。
着、晶析など公知の技術を組み合わせることで培養液よ
り採取することができる。例えば、培養液より菌体を除
去した上清液を、強カチオン交換樹脂に通液した後、吸
着成分を希アンモニア水で溶出させ、脱アンモニア後濃
縮する。これにアルコールを添加し、冷却保存下で生成
した結晶を集め、Ｄ−アラニンを得ることができる。
【００１６】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
る。
【００１７】実施例１ 下記組成の培地に、表１に示すポリアルキレングリコー
ル類を０．１重量％の濃度となるように添加し、１２０
℃、２０分間蒸気滅菌した。この培地５０ｍｌを含む１
リットル容三角フラスコに、あらかじめ液体ブイヨン培
地で３０℃、１６時間振とう培養したブレビバクテリウ
ム・ラクトファーメンタムＤＣＳＲ１７−２の培養液
２．５ｍｌを植菌し、３０℃で７２時間振とう培養し
た。
ル類を０．１重量％の濃度となるように添加し、１２０
℃、２０分間蒸気滅菌した。この培地５０ｍｌを含む１
リットル容三角フラスコに、あらかじめ液体ブイヨン培
地で３０℃、１６時間振とう培養したブレビバクテリウ
ム・ラクトファーメンタムＤＣＳＲ１７−２の培養液
２．５ｍｌを植菌し、３０℃で７２時間振とう培養し
た。
【００１８】培養終了後、上清中の総アラニンの量は自
動アミノ酸分析計（日本電子ＪＬＣ３００）で、Ｄ−ア
ラニンの量はＤ−アミノ酸オキシダーゼを用いる酵素法
および光学分割用カラム（住友化学ＯＡ−１０００）を
用いてＨＰＬＣで定量した。その結果、表１に示すよう
な結果を得た。ポリアルキレングリコール類の存在下に
培養したものは、無添加のものに比べて、光学純度およ
び生産速度が明らかに向上している。
動アミノ酸分析計（日本電子ＪＬＣ３００）で、Ｄ−ア
ラニンの量はＤ−アミノ酸オキシダーゼを用いる酵素法
および光学分割用カラム（住友化学ＯＡ−１０００）を
用いてＨＰＬＣで定量した。その結果、表１に示すよう
な結果を得た。ポリアルキレングリコール類の存在下に
培養したものは、無添加のものに比べて、光学純度およ
び生産速度が明らかに向上している。
【００１９】発酵用培地組成 グルコース（別滅菌） １００ｇ／ｌ 硫酸アンモニウム ３５ｇ／ｌ リン酸１カリウム １．５ｇ／ｌ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．３５ｇ／ｌ 硫酸第一鉄・７水和物 ２０ｍｇ／ｌ 硫酸マンガン・４〜５水和物 ２０ｍｇ／ｌ 味液 ３５ｍｌ／ｌ ビオチン ６０μｇ／ｌ チアミン塩酸塩 ４０μｇ／ｌ 炭酸カルシウム（別滅菌） ３０ｇ／ｌ ｐＨ６．５（水酸化ナトリウムで中和）
【００２０】
【表１】
【００２１】実施例２ 液体ブイヨン培地にブレビバクテリウム・ラクトファー
メンタムＤＣＳＲ１７−２を植菌し、３０℃で１６時間
振とう培養し前培養液とした。実施例１の発酵用培地の
うち、硫酸アンモニウムを５ｇ／ｌとし炭酸カルシウム
を除いた培地に平均分子量１００００のポリプロピレン
グリコールを０．１重量％となるように添加し、１２０
℃、２０分間蒸気滅菌した。この培地１１．４ｌを含む
３０リットル容ジャーファーメンターに前記の前培養液
６００ｍｌを植菌し、温度３０℃、かくはん数毎分２５
０回転、通気量０．５ｖｖｍで培養を開始した。ｐＨ調
節および窒素源の供給は２８％アンモニア水で行い、ｐ
Ｈ６．５±０．２に維持した。途中、グルコース９００
ｇ、リン酸１カリウム９ｇ、硫酸マグネシウム・７水和
物２．１ｇとビオチンおよびチアミン塩酸塩を適宜添加
し７２時間培養した。また、比較のためポリプロピレン
グリコール類を添加せずに同様の培養を行った。
メンタムＤＣＳＲ１７−２を植菌し、３０℃で１６時間
振とう培養し前培養液とした。実施例１の発酵用培地の
うち、硫酸アンモニウムを５ｇ／ｌとし炭酸カルシウム
を除いた培地に平均分子量１００００のポリプロピレン
グリコールを０．１重量％となるように添加し、１２０
℃、２０分間蒸気滅菌した。この培地１１．４ｌを含む
３０リットル容ジャーファーメンターに前記の前培養液
６００ｍｌを植菌し、温度３０℃、かくはん数毎分２５
０回転、通気量０．５ｖｖｍで培養を開始した。ｐＨ調
節および窒素源の供給は２８％アンモニア水で行い、ｐ
Ｈ６．５±０．２に維持した。途中、グルコース９００
ｇ、リン酸１カリウム９ｇ、硫酸マグネシウム・７水和
物２．１ｇとビオチンおよびチアミン塩酸塩を適宜添加
し７２時間培養した。また、比較のためポリプロピレン
グリコール類を添加せずに同様の培養を行った。
【００２２】両者の結果を表２に示す。平均分子量１０
０００のポリプロピレングリコール０．１重量％を添加
したものは、無添加のものに比べ光学純度および生産性
が向上している。
０００のポリプロピレングリコール０．１重量％を添加
したものは、無添加のものに比べ光学純度および生産性
が向上している。
【００２３】
【表２】
【００２４】上記のポリプロピレングリコール（平均分
子量１００００）０．１重量％存在下に培養したブレビ
バクテリウム・ラクトファーメンタムＤＣＳＲ１７−２
の培養液より菌体を除き、そのうち１リットルを強カチ
オン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ（Ｈ型）を充填し
たカラムに通した。カラムを水洗した後、２Ｎアンモニ
ア水で吸着成分を溶出させた。Ｄ−アラニンを含む画分
を脱色した後、減圧濃縮し、得られた濃縮液にエタノー
ルを加えて冷却し結晶を析出させた。結晶を採取して乾
燥させたところ、光学純度９９．６％のＤ−アラニンの
結晶４３．７ｇが得られた。
子量１００００）０．１重量％存在下に培養したブレビ
バクテリウム・ラクトファーメンタムＤＣＳＲ１７−２
の培養液より菌体を除き、そのうち１リットルを強カチ
オン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ（Ｈ型）を充填し
たカラムに通した。カラムを水洗した後、２Ｎアンモニ
ア水で吸着成分を溶出させた。Ｄ−アラニンを含む画分
を脱色した後、減圧濃縮し、得られた濃縮液にエタノー
ルを加えて冷却し結晶を析出させた。結晶を採取して乾
燥させたところ、光学純度９９．６％のＤ−アラニンの
結晶４３．７ｇが得られた。
【００２５】
【発明の効果】本発明により高い光学純度のＤ−アラニ
ンを高い生産速度で発酵法により生成蓄積させることが
可能になり、より安価にＤ−アラニンを製造することが
可能となる。
ンを高い生産速度で発酵法により生成蓄積させることが
可能になり、より安価にＤ−アラニンを製造することが
可能となる。
Claims (1)
- 【請求項１】 Ｄ−アラニン生産能を有し、かつＤ−シ
クロセリンに対して耐性を有するブレビバクテリウム
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を
ポリアルキレングリコール類の存在下に培養して、培養
液中に光学純度の高いＤ−アラニンを生成蓄積せしめ、
前記培養液よりＤ−アラニンを採取することを特徴とす
る発酵法によるＤ−アラニンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8244092A JPH05276965A (ja) | 1992-04-03 | 1992-04-03 | 発酵法によるｄ−アラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8244092A JPH05276965A (ja) | 1992-04-03 | 1992-04-03 | 発酵法によるｄ−アラニンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05276965A true JPH05276965A (ja) | 1993-10-26 |
Family
ID=13774606
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8244092A Pending JPH05276965A (ja) | 1992-04-03 | 1992-04-03 | 発酵法によるｄ−アラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05276965A (ja) |
-
1992
- 1992-04-03 JP JP8244092A patent/JPH05276965A/ja active Pending
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