JPH05255371A - α−グリコシル カテコールアミン類とその製造方法並びに用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 カテコールアミン類の有する欠点を解消し、
還元性を示さず、安定性に優れ、毒性の懸念もなく、加
えて、生体内で生理活性を充分発揮しうるカテコールア
ミン類誘導体を得ることを目的とする。 【構成】 本発明は、還元性を示さず、アンスロン−硫
酸法で緑色を呈するα−グリコシル カテコールアミン
類と、カテコールアミン類とα−グルコシル糖化合物と
を含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコ
アミアーゼとを作用させてα−グリコシル カテコール
アミン類を生成せしめ、これを採取することを特徴とす
るα−グリコシル カテコールアミン類の製造法並びに
この方法によって得られるα−グリコシル カテコール
アミン類を含有せしめた組成物に関する。本発明のα−
グリコシル カテコールアミン類は、安全性の高い血圧
降下剤等として、注射剤、錠剤等の医薬品等として有効
に利用される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規α−グリコシル
カテコールアミン類とその製造方法並びに用途関し、更
に詳細には、還元性を示さず、アンスロン−硫酸法で緑
色を呈するα−グリコシル カテコールアミン類と、カ
テコールアミン類とα−グルコシル糖化合物とを含有す
る溶液に糖転移酵素を作用させてα−グリコシル カテ
コールアミン類を生成せしめ、これを採取することを特
徴とするα−グリコシル カテコールアミン類の製造方
法並びにその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】カテコールアミン類は、ニュー イング
ランド ジャーナル オブ メデスン（Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）
第２８０号， 第３３７頁 （１９６９年）、プロシ
ーディングス オブ ザ ナショナル アカデミー オ
ブ サイエンシーズ オブ ザ ユナイティド ステイ
ツ オブ アメリカ （Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＵｎｉｔｅｄＳｔａ
ｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）， 第６９号， 第２
１４５頁 （１９７２年）、「アミノ酸代謝と生体アミ
ン（１）」、生化学実験講座、第１１巻、第７２５〜７
５３頁、日本生化学会編、東京化学同人発行、（１９７
７年）等にも記載されているように、生理活性アミンの
一種であり、多様な薬理作用を示すことが知られてお
り、抗パーキンソン剤、散瞳剤、血圧降下剤、鎮咳去た
ん剤、副腎髄質ホルモン、血管収縮剤、自律神経用剤、
強心剤等に用いられている。

【０００３】しかしながら、カテコールアミン類は、還
元性を有しており、酸性水溶液中では比較的安定なもの
の、通常、アルカリ性溶液では空気中で容易に酸化さ
れ、変色し、沈殿を生じるため、使用上、大きな制限を
余儀なくされている。また、光に対しても不安定であ
り、保存には遮光が必要である。さらに、カテコールア
ミン類は、フェノール性の水酸基を有するため、経口投
与されると、消化管壁を通過する際に抱合、メチル化、
酸化等の代謝をかなり受けるという欠点を持っている。

【０００４】配糖化カテコールアミン類は、インセクト
バイオケミストリー（Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ）、第５号、第４８７〜４８９頁（１９８４
年）、コンパラティブ バイオケミストリー アンド
フィジオロジー、パート ビー、コンパラティブ バイ
オケミストリー（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｐａ
ｒｔ Ｂ，Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ）、第３号、第５６３〜５６７頁（１９９０
年）等に記載されているように、β−グルコシル配糖体
が天然物中に見いだされているが、この化合物はまだ人
工的に酵素合成されておらず、工業的生産は困難であ
る。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従来のカテコールアミ
ン類の欠点を解消し、生体内で重篤な副作用なく生理活
性を充分発揮しうるカテコールアミン類誘導体の実現が
強く望まれている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記欠点を解
消するためになされたものであって、とりわけ、生化学
的手法を利用して、新規カテコールアミン類誘導体を目
指して鋭意研究した。その結果、カテコールアミン類と
α−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素
を作用させることにより、安定性が高く、生体内で加水
分解される、非還元性の新規α−グリコシル カテコー
ルアミン類が生成しうることを見い出だし、その製造方
法を確立して本発明を完成した。

【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。本発明で
いうカテコールアミン類とは、化１で示されるカテコー
ル核にエチルアミン側鎖を有する化合物をいう。

【化１】 但し、Ｒ１は−Ｈおよび−ＯＨから、Ｒ２およびＲ３は
−Ｈ、−ＣＯＯＨおよび炭素数１乃至４の低級アルキル
基から、Ｒ４は−Ｈおよび炭素数１乃至４の低級アルキ
ル基から選ばれる基をそれぞれ示す。

【０００８】本発明で使用されるカテコールアミン類と
しては、化１において、例えば、Ｒ１が−Ｈ、Ｒ２およ
びＲ３は異なって−Ｈまたは−ＣＯＯＨ、Ｒ４が−Ｈで
あるドパ（ｄｏｐａ）、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が
いずれも−Ｈであるドパミン（ｄｏｐａｍｉｎｅ）、Ｒ
１が−Ｈ、Ｒ２およびＲ３は異なって−ＣＨ３または−
ＣＯＯＨ、Ｒ４が−Ｈであるメチルドパ（α−ｍｅｔｈ
ｙｌ−ｄｏｐａ）、Ｒ１が−ＯＨ、Ｒ２およびＲ３は異
なって−Ｈまたは−ＣＯＯＨ、Ｒ４が−Ｈであるドロキ
シドパ（ｔｈｒｅｏ−ＤＯＰＳ）、Ｒ１が−ＯＨ、Ｒ２
およびＲ３は同一で−Ｈ、Ｒ４が−ＣＨ３であるアドレ
ナリン（ａｄｒｅｎａｌｉｎｅ、別名エピネフリン）、
Ｒ１が−ＯＨ、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がいずれも−Ｈで
あるノルアドレナリン（ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ、
別名ノルエピネフリン）、Ｒ１が−ＯＨ、Ｒ２およびＲ
３は同一で−Ｈ、Ｒ４がＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３であるイ
ソプロテレノール（ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ）など
が適しており、これらカテコールアミン類の塩酸塩、酒
石酸塩、硫酸塩等も有利に使用できる。

【０００９】本発明に用いるα−グルコシル糖化合物
は、同時に用いる糖転移酵素によって、カテコールアミ
ン類からα−グリコシル カテコールアミン類が生成す
ることのできるものであればよく、例えば、アミロー
ス、デキストリン、シクロデキストリン、マルトオリゴ
糖等の澱粉部分分解物、更には、液化澱粉、糊化澱粉等
が適宜選ばれる。

【００１０】従って、α−グリコシル カテコールアミ
ン類の生成を容易にするためには、糖転移酵素に好適な
α−グルコシル糖化合物が選ばれる。例えば、糖転移酵
素として、α−グルコシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．２
０）を用いる際には、マルトース、マルトトリオース、
マルトテトラオース等のマルトオリゴ糖、またはＤＥ約
１０乃至７０の澱粉部分分解物等が好適であり、シクロ
マルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ
２．４．１．１９）を用いる際には、シクロデキスト
リンまたはＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約６０の澱
粉部分分解物等が、α−アミラーゼ（ＥＣ ３．２．
１．１）を用いる際には、ＤＥ１以下の澱粉糊化物から
ＤＥ約３０のデキストリン、澱粉部分分解物等が好適で
ある。

【００１１】また、反応時のα−グルコシル糖化合物濃
度は、カテコールアミン類に対して約０．５乃至１００
倍、望ましくは約２乃至２０倍の範囲が好適である。反
応時のカテコールアミン類含有液は、カテコールアミン
類をできるだけ高濃度に含有するものが望ましく、例え
ば、カテコールアミン類を、懸濁状で、または、高温で
溶解させた、若しくは、有機溶媒存在下で溶解させた溶
液状で高濃度に含有する溶液が適しており、その濃度は
約１Ｗ／Ｖ％以上の高濃度、望ましくは、約２乃至２
０．０Ｗ／Ｖ％含有している溶液を意味する。

【００１２】本発明に用いる糖転移酵素は、カテコール
アミン類とこの酵素に好適な性質のα−グルコシル糖化
合物とを含有する溶液に作用させる時、カテコールアミ
ン類を分解せずにα−グリコシル カテコールアミン類
を生成するものであればよい。

【００１３】例えば、α−グルコシダーゼは、ブタの肝
臓、ソバの種子等の動植物組織由来の酵素、または、ム
コール（Ｍｕｃｏｒ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉ
ｌｌｉｕｍ）属等に属するカビ、または、サッカロミセ
ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属等に属する酵母等
の微生物を栄養培地で培養し得られる培養物由来の酵素
が、シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、クレブシ
ーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属等に属する細菌培養物
由来の酵素が、α−アミラーゼは、バチルス属等に属す
る細菌、または、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ）属等に属するカビ培養物由来の酵素等が適宜選択
できる。

【００１４】これらの糖転移酵素は、前記の条件を満足
しさえすれば、必ずしも精製して使用する必要はなく、
通常は、粗酵素で本発明の目的を達成することができ
る。必要ならば、公知の各種方法で精製して使用しても
よい。また、市販の糖転移酵素を利用することもでき
る。

【００１５】使用酵素量と反応時間とは、密接な関係が
あり、通常、経済性の点から約５乃至８０時間で反応を
終了するように酵素量が選ばれる。また、固定化された
糖転移酵素をバッチ式で繰り返し、または連続式で反応
に利用することも適宜選択できる。また、反応溶液中の
カテコールアミン類の分解を防ぐために、反応はできる
だけ遮光、嫌気下条件で行うことが望ましい。

【００１６】このようにして生成せしめたα−グリコシ
ル カテコールアミン類は、ゲル濾過剤による分子篩効
果を利用して、α−グリコシル カテコールアミン類と
未反応のカテコールアミン類やα−グルコシル糖化合物
等の夾雑物とを分離して精製することができる。

【００１７】分離されたα−グリコシル カテコールア
ミン類は、還元性を示さず、「澱粉科学ハンドブッ
ク」、第１９０頁、朝倉書店発行、（１９８４年）、メ
ソッズイン カーボハイドレイト ケミストリー（Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ）、第１巻、第４７８頁、（１９６２年）
等に記載されているアンスロン−硫酸法にて緑色に呈す
るのに対して、未反応のカテコールアミン類は還元性を
有し、さらに、アンスロン−硫酸法にて呈色しないこと
から、容易に両者を区別することができる。また、α−
グリコシル カテコールアミン類は、波長２８０ｎｍ付
近に紫外線吸収を有することから、容易にα−グルコシ
ル糖化合物とも区別することもできる

【００１８】本発明でいうゲル濾過剤とは、α−グリコ
シル カテコールアミン類と未反応のカテコールアミン
類やα−グルコシル糖化合物等の夾雑物とを分離できる
分子量分画範囲を有するものであればよく、例えば、市
販されている東ソー株式会社製造の商品名トヨパールＨ
Ｗ−３５、トヨパールＨＷ−４０、ファルマシア（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ）社製造の商品名セファデックスＧ−１
０、セファデックスＧ−１５、バイオ−ラド（Ｂｉｏ−
Ｒａｄ）社製造の商品名バイオゲルＰ−２等がある。

【００１９】また、吸着剤による吸着性の差を利用し
て、α−グリコシル カテコールアミン類と未反応のカ
テコールアミン類やα−グルコシル糖化合物等の夾雑物
とを分離して精製することもできる。

【００２０】吸着剤は、α−グリコシル カテコールア
ミン類と未反応のカテコールアミン類やα−グルコシル
糖化合物等の夾雑物とを分離できるものであればよく、
例えば、陽イオン交換体、陰イオン交換体、非イオン性
多孔性合成樹脂、シリカ系吸着剤等がある。

【００２１】必要ならば、糖転移酵素反応終了後、反応
液中の不溶物や加熱して生じる不溶物を濾過して除去し
たり、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、アルミン酸マグ
ネシウム等で処理して反応液中の蛋白性物質などを吸着
除去したり、水酸化アルミニウム、アルミナ等で処理し
て未反応のカテコールアミン類を吸着除去するなどの精
製方法を組み合わせて利用することも随意である。

【００２２】このようにして得られるα−グリコシル
カテコールアミン類は、体内の酵素によりカテコールア
ミン類とグルコースとに加水分解され、カテコールアミ
ン類本来の生理活性を示す。しかし、α−グリコシル
カテコールアミン類は、フェノール性水酸基とグルコー
スとが結合しているため、分解を受けるまでは抱合、メ
チル化、酸化等の代謝を受けにくいことが期待される。

【００２３】これらの特徴からα−グリコシル カテコ
ールアミン類およびその薬理学的に許容され得る酸附加
塩は安全性の高い抗パーキンソン剤、散瞳剤、血圧降下
剤、鎮咳去たん剤、副腎髄質ホルモン、血管収縮剤、自
律神経用剤、強心剤等として有利に利用することができ
る。

【００２４】またα−グリコシル カテコールアミン類
は還元性を示さず、カテコールアミン類と比較して、安
定性が大きいことが特徴であり、その点においてもカテ
コールアミン類に比べて有利である。

【００２５】本明細書でいう還元性を示さずとは、ジャ
ーナル オブ バイオロジカル ケミストリー（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ）、第１５３号、第３７５〜３８０頁（１９４４
年）記載のネルソン−ソモジ法にて呈色しないことを意
味する。

【００２６】α−グリコシル カテコールアミン類およ
びその薬理学的に許容され得る酸附加塩は経口または、
注射、座薬等の非経口の通常用いられる方法によって投
与することが可能である。α−グリコシル カテコール
アミン類およびその薬理学的に許容され得る酸附加塩
は、それ自体に影響をおよぼさない液体あるいは固体の
担体と合わせて製剤として投与される。

【００２７】製剤形としては、例えばシロップ剤、懸濁
剤、注射剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、あるい
はバッカル剤等が挙げられる。α−グリコシル カテコ
ールアミン類およびその薬理学的に許容され得る酸附加
塩に混合可能な固体担体としては、トウモロコシ澱粉、
乳糖、マンニトール、プルラン、タルク、ステアリン、
マグネシウムステアレート、ゴム質等がある。

【００２８】注射剤、懸濁剤等に使用され得る液体担体
としては、例えば、水、植物油、乳化剤、界面活性剤等
を挙げることができる。

【００２９】薬理学的に許容され得る酸附加塩として
は、α−グリコシル カテコールアミン類を適当な有機
酸または無機酸と反応させて製造される無毒性の酸附加
塩を意味し、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、重
亜硫酸塩、酢酸塩、蓚酸塩、バレリアン酸塩、オレイン
酸塩、ラウリン酸塩、乳酸塩、こはく酸塩、酒石酸塩等
を挙げることができる。

【００３０】投与量は、含量、投与経路、投与頻度等に
よって適宜調節することができる。通常、α−グリコシ
ル カテコールアミン類として、成人一日当り、約０．
００１乃至１０．０グラムの範囲が好適である。以下、
本発明を実験で詳細に説明する。

【００３１】

【実験１】 カテコールアミン類の代表例としてメチル
ドパへの糖転移

【００３２】

【実験１−１】 α−グリコシル メチルドパ

【００３３】（１）酵素反応 メチルドパ１重量部およびα−シクロデキストリン４重
量部に水２０重量部を加えて、ｐＨ５．５に調整した
後、これにバチラス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）
由来のシクロマルトデキストリン グルカノトランスフ
ェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をα−シ
クロデキストリングラム当り５０単位加え、５０℃にて
１６時間酵素反応させた後、加熱失活させた。

【００３４】 （２）薄層クロマトグラフィーによる分離・検出 （１）の方法で得た反応液を濾過し、濾液を水で４倍に
希釈した後、薄層、商品名キーゼルゲル６０Ｆ２５４
（Ｍｅｒｃｋ社製造）にスポットし、乾燥した。展開溶
媒として ブタノール：酢酸：水が容量比で４：１：１
の混合液を用い、室温にて一回展開した。基質であるカ
テコールアミン類と酵素反応によって生成したα−グリ
コシル メチルドパの検出は、ニンヒドリン発色法を用
いた。即ち、展開した薄層を乾燥させた後、ニンヒドリ
ン試薬（０．１モル濃度クエン酸緩衝液、ｐＨ ５．
０、で飽和させた５０ｍｌのｎ−ブタノールに０．２グ
ラムのニンヒドリンを溶解させたもの）を噴霧し、再
度、薄層を乾燥させた。これを１００℃で５分間加熱す
ることにより、カテコールアミン類とα−グリコシル
メチルドパを発色させた。

【００３５】メチルドパおよびα−グリコシル メチル
ドパの移動度を測定した結果は、表１に示す。

【００３６】

【表１】

【００３７】表１の結果から明らかなごとく、メチルド
パとは移動度の異なる種々のα−グリコシル メチルド
パが薄層上に検出され、酵素反応によってα−グリコシ
ルメチルドパが生成することが判明した。

【００３８】

【実験１−２】 α−グルコシル メチルドパの生成 実験１−１の方法で得た反応液を濾過し、これにグルコ
アミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．３、生化学工業株式会
社販売）をα−シクロデキストリングラム当り１０単位
加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持して１６時間反応させ
た。反応液を加熱して酵素失活させ、濾過し、濾液を実
験１−１の方法と同様に薄層クロマトグラフィーによる
分離・検出を行った。

【００３９】メチルドパおよびα−グルコシル メチル
ドパの移動度を測定した結果は、表２に示す。

【００４０】

【表２】

【００４１】表２の結果から明らかなごとく、表１に示
される種々のα−グリコシル メチルドパは、グルコア
ミラーゼで加水分解され、メチルドパとは移動度の異な
る２種のα−グルコシル メチルドパを蓄積生成するこ
とが判明した。

【００４２】

【実験２】 α−グルコシル メチルドパの確認 メチルドパ１重量部およびα−シクロデキストリン４重
量部に水２０重量部を加えて、ｐＨ５．５に調整した
後、実験１の方法と同様に糖転移反応・グルコアミラー
ゼ反応を行ってα−グルコシル メチルドパ含有液を得
た。

【００４３】この液をゲル濾過剤、商品名トヨパールＨ
Ｗ−４０（東ソー株式会社製造）を充填したカラムにＳ
Ｖ０．２で通液し、水で溶出させた。その結果、溶液中
のα−グルコシル メチルドパは未反応メチルドパより
早くカラムより溶出し、未反応メチルドパと分離するこ
とができた。

【００４４】α−グルコシル メチルドパ画分を採取
し、減圧濃縮し、粉末化して、白色のα−グルコシル
メチルドパ標品を固形分当り原料のメチルドパ重量に対
して約６０％の収率で得た。

【００４５】次いで、α−グルコシル メチルドパ標品
を水に５Ｗ／Ｖ％に溶解し、逆相カラムクロマトグラフ
ィー用カラム、商品名ワイエムシーパックＯＤＳ−５
（株式会社ワイエムシー販売）に通液し、２０ミリモル
濃度の酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）で溶出さ
せた。

【００４６】α−グルコシル メチルドパ標品は溶出位
置の異なる２成分に分離し、先に溶出する成分をα−グ
ルコシル メチルドパ［Ｉ］として、後に溶出する成分
をα−グルコシル メチルドパ［ＩＩ］として回収し、
それぞれを減圧濃縮し、粉末化して、白色のα−グルコ
シル メチルドパ標品［Ｉ］およびα−グルコシルメチ
ルドパ標品［ＩＩ］を固形分当り原料のメチルドパ重量
に対して約３０％の収率（α−グルコシル メチルドパ
［Ｉ］）、約２０％の収率（α−グルコシルメチルドパ
［ＩＩ］）で得た。

【００４７】

【実験３】 α−グルコシル メチルドパの理化学的性
質

【００４８】（１）溶剤に対する溶解性 α−グルコシル メチルドパ標品［Ｉ］および標品［Ｉ
Ｉ］とも、水に易溶、メタノール、エタノールに微溶、
エーテル、ベンゼン、クロロホルムに不溶。

【００４９】（２）呈色反応 アンスロン−硫酸反応で緑色を呈する。 ネルソン−ソ
モジ法による還元反応は陰性。

【００５０】（３）紫外線吸収スペクトル α−グルコシル メチルドパ標品をメチルドパの場合と
比較するため、０．１規定塩酸溶液を用いて紫外線吸収
スペクトルを調べた。標品［Ｉ］及び標品［ＩＩ］は、
いずれも、メチルドパの場合と同様に２８０ｎｍ付近に
吸収極大を有していた。

【００５１】（４）赤外線吸収スペクトル ＫＢｒ錠剤法によって、α−グルコシル メチルドパ標
品の赤外線吸収スペクトルを調ベた。α−グルコシル
メチルドパ標品［Ｉ］および標品［ＩＩ］の結果をそれ
ぞれ図１、図２に示す。対照としてメチルドパの結果を
図３に示す。

【００５２】（５）シリカゲル薄層クロマトグラム α−グルコシル メチルドパ標品［Ｉ］ ： Ｒｆ＝
０．１８ α−グルコシル メチルドパ標品［ＩＩ］ ： Ｒｆ＝
０．２１

【００５３】（６）加水分解に対する安定性 （ａ）α−グルコシル メチルドパ標品［Ｉ］および標
品［ＩＩ］とも、ブタの肝臓由来のα−グルコシダーゼ
（ＥＣ ３．２．１．２０）により加水分解され、メチ
ルドパとＤ−グルコースとを生成する。 （ｂ）β−グルコシダーゼによっては加水分解されな
い。

【００５４】（７）ＮＭＲ 炭素核磁気共鳴分析（１３Ｃ−ＮＭＲ）により、α−グ
ルコシルメチルドパ標品［Ｉ］および標品［ＩＩ］から
それぞれ１６本の１３Ｃシグナルが得られ、１６個の炭
素はすべて異なる化学シフトを示した。

【００５５】標準物質、３−Ｏ−メチルドパ、４−Ｏ−
メチルドパ、およびメチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
の化学シフトより、各炭素を帰属し、α−グルコシル
メチルドパ標品［Ｉ］は、３−〔４−ヒドロキシ−（３
−α−Ｄ−グルコピラノシル）〕−２−メチルアラニ
ン、すなわち、炭素第３位の水酸基にＤ−グルコース残
基が等モル結合（以下、３−α−Ｄ−グルコシルと略称
する。）したメチルドパの構造を有し、α−グリコシル
メチルドパ標品［ＩＩ］は、３−〔３−ヒドロキシ−
（４−α−Ｄ−グルコピラノシル）〕−２−メチルアラ
ニン、すなわち、炭素第４位の水酸基にＤ−グルコース
残基が等モル結合（以下、４−α−Ｄ−グルコシルと略
称する。）したメチルドパの構造を有しているものと判
断される。

【００５６】このように、本願発明のα−グルコシル
メチルドパはメチルドパの炭素第３位と第４位のいずれ
かの水酸基にＤ−グルコース残基がα−結合した非還元
性の新規メチルドパ糖誘導体であって、生体内に摂取さ
れると、α−グルコシダーゼによって容易に加水分解さ
れ、メチルドパ本来の生理活性を発揮する。

【００５７】

【実験４】 α−グルコシル メチルドパの安定性 濃度１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ８．０）５０ｍｌ
ずつを５０ｍｌ容フラスコに分注し、各々のフラスコに
濃度が１００ｐｐｍとなるようにα−グルコシル メチ
ルドパ標品［Ｉ］および［ＩＩ］を添加した後、２５℃
で保存し、経日的にその安定性を調べた。

【００５８】対照として、メチルドパを用いた。各々の
フラスコから所定の時間間隔をおいて５ｍｌずつ試料を
採取し、メチルドパの酸化に起因する試料溶液の着色度
を波長４００ｎｍにおいて測定した。その測定結果を表
３に示す。

【００５９】

【表３】

【００６０】表３に示す結果から、α−グルコシル メ
チルドパ標品［Ｉ］および［ＩＩ］は、メチルドパより
遙かに優れた安定性を示した。

【００６１】

【実験５】 急性毒性 ７週令のｄｄ系マウスを使用して、α−グルコシル メ
チルドパ標品［Ｉ］および［ＩＩ］を経口投与して急性
毒性テストをしたところ、それぞれ体重キログラム当た
り５ｇまで死亡例は見られなかった。従って、両物質の
毒性は極めて低いことが判明した。

【００６２】

【実験６】 その他のカテコールアミン類への糖転移 カテコールアミン類（ドパ、ドパミン、ドロキシドパ、
エピネフリン、ノルエピネフリン、イソプロテレノー
ル）１重量部およびα−シクロデキストリン４重量部に
水２０重量部を加えて、実験１と同様に糖転移反応・グ
ルコアミラーゼ反応を行った後、それぞれの反応液につ
いて薄層クロマトグラフィーによる分離・検出を行っ
た。

【００６３】各カテコールアミン類・各α−グルコシル
カテコールアミン類の移動度を測定した結果は、表４
に示す。

【００６４】

【表４】

【００６５】表４の結果から明らかなごとく、カテコー
ルアミン類とは移動度の異なるα−グルコシル カテコ
ールアミン類が薄層上に検出され、酵素反応によってα
−グルコシル カテコールアミン類が生成することが判
明した。

【００６６】更に、α−グルコシル メチルドパの場合
と同様に、それぞれ移動度の異なる２種のα−グルコシ
ル カテコールアミン類を生成することが判明した。

【００６７】これらを、同様に単離して、それぞれを試
験したところ、α−グルコシル メチルドパの場合と同
様に、いずれも、アンスロン−硫酸法で縁色に呈色し、
ネルソン−ソモジ法による還元反応は陰性で、α−グル
コシダーゼで等モルのグルコースと等モルのカテコール
アミン類を生成し、β−グルコシダーゼでは加水分解さ
れず、それらの水溶液は優れた安定性を示した。

【００６８】以上の結果から、本発明のα−グリコシル
カテコールアミン類は、化２で示される構造を有して
いるものと判断される。

【００６９】

【化２】 但し、Ｒ１は−Ｈおよび−ＯＨから、Ｒ２およびＲ３は
−Ｈ、−ＣＯＯＨおよび炭素数１乃至４の低級アルキル
基から、Ｒ４は−Ｈおよび炭素数１乃至４の低級アルキ
ル基から選ばれる基をそれぞれ示し、ＸおよびＹは、い
ずれか一方がＤ−グルコース残基の等モル以上のα−結
合を示し、他方が−Ｈを示す。

【００７０】このように、本願発明のα−グルコシル
カテコールアミン類は、カテコールアミン類の炭素第３
位と第４位のいずれかの水酸基にＤ−グルコース残基が
α−結合した、還元性を示さない、安定な新規カテコー
ルアミン糖誘導体であって、生体内に摂取されると、α
−グルコシダーゼによって容易に加水分解され、カテコ
ールアミン類本来の生理活性を発揮する。

【００７１】なお、これらのα−グルコシル カテコー
ルアミン類について、急性毒性テストを行ったところ、
α−グルコシル メチルドパの場合と同様に毒性の低い
ものであった。以下、本発明の実施例として、製造例を
実施例Ａで、用途例を実施例Ｂで述べる。

【００７２】

【実施例Ａ−１】 α−グルコシル メチルドパ

【００７３】メチルドパ１重量部およびデキストリン
（ＤＥ１０）４重量部に水２０重量部を加えて、ｐＨ
５．５に調整した後、これにバチラス・ステアロサーモ
フィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍ
ｏｐｈｉｌｕｓ）由来のシクロマルトデキストリン グ
ルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り５
０単位加え、５５℃にて１６時間酵素反応させた後、加
熱失活させ、濾過し、これにグルコアミラーゼ（ＥＣ
３．２．１．３、生化学工業株式会社販売）をデキスト
リングラム当り５単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持
して１６時間反応させた。

【００７４】反応液を加熱して酵素失活させ、濾過し、
濾液をゲル濾過剤、商品名トヨパールＨＷ−４０（東ソ
ー株式会社製造）を充填したカラムにＳＶ０．２で通液
し、水で溶出させた。

【００７５】α−グルコシル メチルドパ画分を採取
し、減圧濃縮し、粉末化して、白色のα−グルコシル
メチルドパ標品を固形分当り原料のメチルドパ重量に対
して約５５％の収率で得た。α−グルコシル メチルド
パ標品を高速液体クロマトグラフィーで分析したとこ
ろ、約６０％が３−α−グルコシル メチルドパであ
り、約４０％が４−α−グルコシル メチルドパであっ
た。

【００７６】本品は安定性の高い注射剤、懸濁剤、顆粒
剤、錠剤等として、血圧降下剤等の医薬品等に有利に利
用することができる。

【００７７】

【実施例Ａ−２】 α−グルコシル メチルドパ

【００７８】実施例Ａ−１の方法に準じて調製したα−
グルコシル メチルドパ製品１重量部を水１０重量部に
溶解し、逆相カラムクロマトグラフィー用充填剤、商品
名ワイエムシーゲルＯＤＳ−Ａ１２０（株式会社ワイエ
ムシー販売）を充填したカラムに通液し、２０ミリモル
濃度の酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）で溶出さ
せ、３−α−グルコシル メチルドパ画分と４−α−グ
ルコシル メチルドパ画分とをそれぞれ別に回収し、減
圧濃縮し、粉末化して、白色の３−α−グルコシル メ
チルドパおよび４−α−グルコシル メチルドパを固形
分当り原料のメデルドパ重量に対して３−α−グルコシ
ル メチルドパを約３０％の収率で、４−α−グルコシ
ル メチルドパを約２０％の収率で得た。

【００７９】両α−グルコシル メチルドパは、安定性
の高い注射剤、懸濁剤、顆粒剤、錠剤等として、血圧降
下剤等の医薬品等に有利に利用することができる。

【００８０】

【実施例Ａ−３】 α−グルコシル メチルドパ

【００８１】（１）α−グルコシダーゼ標品の調製

【００８２】マルトース４Ｗ／Ｖ％、リン酸１カリウム
０．１Ｗ／Ｖ％、硝酸アンモニウム０．１Ｗ／Ｖ％、硫
酸マグネシウム０．０５Ｗ／Ｖ％、塩化カリウム０．０
５Ｗ／Ｖ％、ポリペプトン０．２Ｗ／Ｖ％、炭酸カルシ
ウム１Ｗ／Ｖ％（別に乾熱滅菌して植菌時に無菌的に添
加）および水からなる液体培地５００重量部にムコール
・ジャバニカス（Ｍｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ）Ｉ
ＦＯ ４５７０を温度３０℃で４４時間振盪培養した。
培養終了後、菌糸体を採取し、その湿菌糸体４８重量部
に対して、０．５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．３）に溶解し
た４Ｍ尿素液５００重量部を加え、３０℃で４０時間静
置した後、遠心分離した。

【００８３】この上清を流水中で一夜透析した後、硫安
０．９飽和とし、４℃で一夜放置して生成した塩析物を
濾取し、０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．３）５０重量
部に懸濁溶解した後、遠心分離して上清を採取し、α−
グルコシダーゼ標品とした。

【００８４】（２）α−グルコシル メチルドパの調製

【００８５】メチルドパ１重量部およびデキストリン
（ＤＥ３０）１０重量部に水４０重量部を加えて、ｐＨ
５．５に調整した後、（１）の方法で調製したα−グル
コシダーゼ標品５重量部を加え、５０℃にて４０時間酵
素反応させた。反応液を高速液体クロマトグラフィーで
分析したところ、メチルドパの約１５％が３−および４
−α−グルコシル メチルドパ混合物に転換していた。
反応液を実施例Ａ−１と同様に精製し、濃縮、粉末化し
て３−および４−α−グルコシル メチルドパ混合製品
を約２０％の収率で得た。本品は、実施例Ａ−１の場合
と同様に、安定性の高い注射剤、懸濁剤、顆粒剤、錠剤
等として、血圧降下剤等の医薬品等に有利に利用するこ
とができる。

【００８６】

【実施例Ａ−４】 α−グルコシル ドパミン ドパミン塩酸塩１重量部およびデキストリン（ＤＥ１
０）４重量部に水２０重量部を加えて、ｐＨ５．５に調
整した後、これにバチラス・ステアロサーモフィルス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉ
ｌｕｓ）由来のシクロマルトデキストリン グルカノト
ランスフェラーゼをデキストリングラム当り５０単位加
え、５５℃にて１６時間酵素反応させた後、加熱失活さ
せ、濾過し、これにグルコアミラーゼ（ＥＣ ３．２．
１．３、生化学工業株式会社販売）をデキストリングラ
ム当り５単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持して１６
時間反応させた。

【００８７】反応液を加熱して酵素失活させ、濾過し、
濾液をゲル濾過剤、商品名トヨパールＨＷ−４０（東ソ
ー株式会社製造）を充填したカラムにＳＶ０．２で通液
し、水で溶出させた。α−グルコシル メチルドパ画分
を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、白色のα−グルコ
シル ドパミン標品を固形分当り原料のドパミン重量に
対して約６０％の収率で得た。

【００８８】α−グルコシル ドパミン標品をシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラ
フィーで分析したところ、α−グルコシル メチルドパ
の場合と同様に、２種のα−グルコシル ドパミンに転
換していた。

【００８９】本品は安定性の高い注射剤、懸濁剤、顆
粒、錠剤剤等として、強心剤等の医薬品等に有利に利用
することができる。

【００９０】

【実施例Ａ−５】 α−グルコシル ドロキシドパ ドロキシドパ１重量部およびデキストリン（ＤＥ１０）
４重量部に水２０重量部を加えて、実施例Ａ−１と同様
に糖転移反応、グルコアミラーゼ反応、ゲル濾過による
精製、濃縮、粉末化を行い、白色のα−グルコシル ド
ロキシドパ標品を固形分当り原料のドロキシドパ重量に
対して約４５％の収率で得た。

【００９１】α−グルコシル ドロキシドパ標品をシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーおよび高速液体クロマト
グラフィーで分析したところ、α−グルコシル メチル
ドパの場合と同様に、２種のα−グルコシル ドロキシ
ドパに転換していた。

【００９２】本品は安定性の高い注射剤、懸濁剤、顆
粒、錠剤剤等として、抗パーキンソン剤等の医薬品等に
有利に利用することができる。

【００９３】

【実施例Ａ−６】 α−グルコシル イソプロテレノー
ル イソプロテレノール塩酸塩１重量部およびデキストリン
（ＤＥ１０）４重量部に水２０重量部を加えて、実施例
Ａ−１と同様に糖転移反応、グルコアミラーゼ反応、ゲ
ル濾過による精製、濃縮、粉末化を行い、白色のα−グ
ルコシル イソプロテレノール標品を固形分当り原料の
イソプロテレノール重量に対して約３５％の収率で得
た。

【００９４】α−グルコシル イソプロテレノール標品
をシリカゲル薄層クロマトグラフィーおよび高速液体ク
ロマトグラフィーで分析したところ、α−グルコシル
メチルドパの場合と同様に、２種のグルコシル イソプ
ロテレノールに転換していた。

【００９５】本品は安定性の高い注射剤、懸濁剤、顆
粒、錠剤剤等として、鎮咳去たん剤等の医薬品等に有利
に利用することができる。

【００９６】

【実施例Ａ−７】 α−グルコシル アドレナリン ドレナリン塩酸塩１重量部およびデキストリン（ＤＥ１
０）４重量部に水２０重量部を加えて、実施例Ａ−１と
同様に糖転移反応、グルコアミラーゼ反応を行って、α
−グルコシル アドレナリン含有液を得た。

【００９７】この液をシリカ系吸着剤、商品名ワコーゲ
ル Ｃ−２００（和光純薬工業株式会社販売）を充填し
たカラムにＳＶ０．２で通液し、α−グルコシル アド
レナリンおよび未反応のアドレナリンを吸着させた。こ
のカラムにブタノール：酢酸が容量比で１：１の混合液
を通液することにより未反応のアドレナリンを溶出さ
せ、その後、メタノール：酢酸が容量比で１：１の混合
液を通液することによりα−グルコシル アドレナリン
を溶出させた。

【００９８】それを減圧濃縮し、粉末化して、白色のα
−グルコシル アドレナリン標品を固形分当り原料のア
ドレナリン重量に対して約３５％の収率で得た。α−グ
ルコシル アドレナリン標品をシリカゲル薄層クロマト
グラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーで分析し
たところ、α−グルコシル メチルドパの場合と同様
に、２種のα−グルコシル アドレナリンに転換してい
た。

【００９９】本品は安定性の高い注射剤、懸濁剤、顆
粒、錠剤剤等として、散瞳剤、副腎髄質ホルモン剤、血
管収縮剤等の医薬品等に有利に利用することができる。

【０１００】

【実施例Ｂ−１】 経口用水剤 実施例Ａ−４の方法で得た粉末状α−グルコシル ドパ
ミン１０重量部に単シロップ４００重量部、グリコール
４００重量部、パラネキシ安息香酸エチル２重量部およ
びオレンジエッセンス１重量部を均一に混合した後、常
法により経口用水剤を調製した。

【０１０１】

【実施例Ｂ−２】 注射剤 実施例Ａ−２の方法で得た粉末状３−α−グルコシル
メチルドパを水に溶解し、常法に従って、精製濾過して
パイロゲンフリーとし、この溶液を２０ｍｌ容アンプル
に３−α−グルコシル メチルドパ１００ｍｇになるよ
うに分注し、これを凍結乾燥し、封入して製造した。

【０１０２】本注射剤は、単体で、または、ビタミン、
ミネラル等と混合して筋肉内又は静脈内に投与できる。
また、本品は、遮光や低温貯蔵の必要もなく、使用に際
しての生理食塩水などへの溶解性は極めて良好である。

【０１０３】

【実施例Ｂ−３】 点眼剤 実施例Ａ−７の方法で得た粉末状α−グルコシル アド
レナリン１．２５重量部、ホウ酸２重量部、ベンザルコ
ニウムコロライド０．２重量部を水１００重量部に溶解
し、膜濾過器で濾過の後、溶液を１０ｍｌ容ビンに充填
して製造した。

【０１０４】本点眼剤は、変色・沈殿し難く、遮光や低
温貯蔵の必要もなく、安定性は極めて良好である。

【０１０５】

【実施例Ｂ−４】 顆粒剤 実施例Ａ−５の方法で得た粉末状α−グルコシル ドロ
キシドパ１０重量部に乳糖８重量部、トウモロコシ澱粉
５重量部および結晶セルロース５重量部を均一に混合し
た後、ハイドロキシプロピルセルロース１重量部および
エタノール９重量部を加えて練合し、押出造粒法で整粒
し、次いで５０℃の乾燥機で乾燥する。

【０１０６】乾燥上がり顆粒を粒度２９７μｍ〜１４６
０μｍにふるい分けて製造した。１分包量を５００ｍｇ
とする。

【０１０７】

【実施例Ｂ−５】 錠剤 実施例Ａ−２の方法で得た粉末状４−α−グルコシル
メチルドパ３０重量部にトウモロコシ澱粉３００重量
部、ステアリン酸５重量部およびハイドロキシプロピル
セルロース５重量部を均一に混合した後、常法に従い１
錠中４−α−グルコシル メチルドパ１００ｍｇ含有の
錠剤を調製した。

【０１０８】

【発明の効果】本文でのべたごとく、本発明は、カテコ
ールアミン類とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶
液に、糖転移酵素を作用させる生化学的手法により、炭
素第３位と第４位のいずれか一方にＤ−グルコースを等
モル以上α−結合したα−グリコシル カテコールアミ
ン類を容易に生成できること、このα−グリコシル カ
テコールアミン類は還元性を有さないため、酸化に対し
て不安定である欠点を解消できること、加えて、生体内
で容易にカテコールアミン類とＤ−グルコースとに加水
分解され、カテコールアミン類本来の生理活性を発揮す
ることなどの特長を有する。

【０１０９】従って、本発明のα−グリコシル カテコ
ールアミン類は、安定性、安全性の高い抗パーキンソン
剤、散瞳剤、血圧降下剤、鎮咳去たん剤、副腎髄質ホル
モン、血管収縮剤、自律神経用剤、強心剤などとして、
有利に利用することができる。

【１１０】従って、本発明によるα−グリコシル カテ
コールアミン類の工業的製造法並びに用途の確立は、医
薬品産業やそれに関わる化学産業等における工業的意義
が極めて大きい。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のα−グリコシル カテコールアミン類
の一例として、３−α−グルコシル メチルドパの赤外
線吸収スペクトル図。

【図２】本発明のα−グリコシル カテコールアミン類
の一例として、４−α−グルコシル メチルドパの赤外
線吸収スペクトル図。

【図３】対照としてのメチルドパの赤外線吸収スペクト
ル図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 19/44 7432−4Ｂ

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 還元性を示さず、アンスロン−硫酸法で
   緑色を呈するα−グリコシル カテコールアミン類。
2. 【請求項２】 α−グリコシル カテコールアミン類が
   カテコールアミン類の炭素第３位と第４位のいずれか一
   方の水酸基にＤ−グルコース残基が等モル以上α−結合
   した請求項１記載のα−グリコシル カテコールアミン
   類。
3. 【請求項３】 α−グリコシル カテコールアミン類が
   α−グルコシル カテコールアミン類であることを特徴
   とする請求項２記載のα−グリコシル カテコールアミ
   ン類。
4. 【請求項４】 カテコールアミン類とα−グルコシル糖
   化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素
   とグルコアミラーゼとを作用させてα−グリコシル カ
   テコールアミン類を生成せしめ、これを採取することを
   特徴とするα−グリコシル カテコールアミン類の製造
   方法。
5. 【請求項５】 α−グリコシル カテコールアミン類が
   還元性を示さず、アンスロン−硫酸法で緑色を呈するこ
   とを特徴とする請求項４記載のα−グリコシル カテコ
   ールアミン類の製造方法。
6. 【請求項６】 α−グリコシル カテコールアミン類が
   カテコールアミン類の炭素第３位と第４位のいずれか一
   方の水酸基にＤ−グルコース残基が等モル以上α−結合
   していることを特徴とする請求項５記載のα−グリコシ
   ル カテコールアミン類の製造方法。
7. 【請求項７】 α−グリコシル カテコールアミン類を
   含有せしめた組成物。