JPH05229983A - レトロジヒドロカルコン化合物 - Google Patents
レトロジヒドロカルコン化合物Info
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- JPH05229983A JPH05229983A JP4034969A JP3496992A JPH05229983A JP H05229983 A JPH05229983 A JP H05229983A JP 4034969 A JP4034969 A JP 4034969A JP 3496992 A JP3496992 A JP 3496992A JP H05229983 A JPH05229983 A JP H05229983A
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- JP
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- water
- estrogen
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- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】式（Ｉ）：
の化合物またはその塩、及び式（ＩＩ）：
の化合物またはその塩。さらにタイ産の生薬チャン・デ
ングより式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物を単離する該化
合物の製造法。 【効果】化合物はエストロジェンリセプターに結合する
ことによりエストロジェン作用を発揮する新規なレトロ
ジヒドロカルコン化合物でエストロジェン剤として、例
えばエストロジェンの欠乏に起因する婦人科疾患、骨粗
鬆症、前立腺癌及び前立腺肥大症の治療剤の用途に使用
できる。
ングより式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物を単離する該化
合物の製造法。 【効果】化合物はエストロジェンリセプターに結合する
ことによりエストロジェン作用を発揮する新規なレトロ
ジヒドロカルコン化合物でエストロジェン剤として、例
えばエストロジェンの欠乏に起因する婦人科疾患、骨粗
鬆症、前立腺癌及び前立腺肥大症の治療剤の用途に使用
できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はエストロジェンリセプタ
ーに結合することによりエストロジェン作用を発揮す
る、新規なレトロジヒドロカルコン化合物及びその製造
法に関する。
ーに結合することによりエストロジェン作用を発揮す
る、新規なレトロジヒドロカルコン化合物及びその製造
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】エストロジェンは、女性ホルモンの一種
で、発情作用を示すホルモン及び類似の作用をもつ物質
の総称である。
で、発情作用を示すホルモン及び類似の作用をもつ物質
の総称である。
【０００３】ステロイド系のエストロジェンとしては、
エストラジオール、エストロン、エストリオール、エキ
リン、ホモエストロン及びエチニルエストラジオールな
どが知られている。
エストラジオール、エストロン、エストリオール、エキ
リン、ホモエストロン及びエチニルエストラジオールな
どが知られている。
【０００４】一方、非ステロイド系のエストロジェンと
しては、例えば、ジエチルスチルベストロールやヘキセ
ステロールなどが知られている。
しては、例えば、ジエチルスチルベストロールやヘキセ
ステロールなどが知られている。
【０００５】これらのエストロジェン剤は、エストロジ
ェンの減少に起因する無月経、無排卵周期症、機能性子
宮出血、子宮発育不全などが適応となっている。また、
これは更年期障害や乳汁分泌抑制などにも用いられる。
ェンの減少に起因する無月経、無排卵周期症、機能性子
宮出血、子宮発育不全などが適応となっている。また、
これは更年期障害や乳汁分泌抑制などにも用いられる。
【０００６】一方、非ステロイド系エストロジェン剤は
前立腺癌及び前立腺肥大症などの疾患の治療薬として使
われている。
前立腺癌及び前立腺肥大症などの疾患の治療薬として使
われている。
【０００７】フラボノイド化合物のうちで特にイソフラ
ボン類の中にはエストロジェン様の活性を示す化合物が
多く知られている。このうちでゲニステイン、ダイゼイ
ン、ミロエストロールなどは比較的強いエストロジェン
様活性を示すとされている（梅原千治、佐藤武雄 著、
ステロイドホルモン、製剤生理臨床、卵胞ホルモン、南
江堂、昭４１）。
ボン類の中にはエストロジェン様の活性を示す化合物が
多く知られている。このうちでゲニステイン、ダイゼイ
ン、ミロエストロールなどは比較的強いエストロジェン
様活性を示すとされている（梅原千治、佐藤武雄 著、
ステロイドホルモン、製剤生理臨床、卵胞ホルモン、南
江堂、昭４１）。
【０００８】レトロジヒドロカルコンは広義のフラボノ
イド化合物であって、これまで例えば、次のような化合
物の存在が知られている（D.Meksuriyen and G.A. Cord
ell,J. Natural Products, 51, (6), 1129, (1988)
）。
イド化合物であって、これまで例えば、次のような化合
物の存在が知られている（D.Meksuriyen and G.A. Cord
ell,J. Natural Products, 51, (6), 1129, (1988)
）。
【０００９】(1) loureirin A ; 4'-hydroxy-2,4-dimet
hoxyretrodihydrochalcone (2) loureirin B ; 4'-hydroxy-2,4,6-trimethoxyretro
dihydrochalcone (3) loureirin C ; 4,4'-dihydroxy-2-methoxyretrodih
ydrochalcone (4) loureirin D ; 4,4',6-trihydroxy-2-methoxyretro
dihydrochalcone また、次の化合物の存在も報告されている（A.C.Waiss,
Jr and L.Jurd,Chemistry and Industry, (23), 743,
(1968) ）。
hoxyretrodihydrochalcone (2) loureirin B ; 4'-hydroxy-2,4,6-trimethoxyretro
dihydrochalcone (3) loureirin C ; 4,4'-dihydroxy-2-methoxyretrodih
ydrochalcone (4) loureirin D ; 4,4',6-trihydroxy-2-methoxyretro
dihydrochalcone また、次の化合物の存在も報告されている（A.C.Waiss,
Jr and L.Jurd,Chemistry and Industry, (23), 743,
(1968) ）。
【００１０】(5) 2-hydroxy-4,4',6-trimethoxyretrodi
hydrchalcone これら公知のレトロジヒドロカルコンの持つ生物活性に
関しては知られておらず、上記文献にて単離構造決定の
報告及び合成研究の報告があるのみである。
hydrchalcone これら公知のレトロジヒドロカルコンの持つ生物活性に
関しては知られておらず、上記文献にて単離構造決定の
報告及び合成研究の報告があるのみである。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】現在使用されているエ
ストロジェン剤は、どれも胃腸障害や血栓症、子宮出
血、肝障害などの副作用を示し、長期に連用すると子宮
体癌、乳癌などの発現するなどの作用のあることが知ら
れている。従ってこれらの副作用の少ないエストロジェ
ン剤が望まれている。
ストロジェン剤は、どれも胃腸障害や血栓症、子宮出
血、肝障害などの副作用を示し、長期に連用すると子宮
体癌、乳癌などの発現するなどの作用のあることが知ら
れている。従ってこれらの副作用の少ないエストロジェ
ン剤が望まれている。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、タイ産の
生薬チャン・デング[Chan Daeng: "Pramual Sapphakhun
Ya Thai(Medicinal Uses of Thai Drugs)", ed.by Pho
l Phaetthanesura, Samakhon Rongrien Phaet Boran(Th
e Association of the School of Old-style Medicin
e), Bangkok, Thailand(1964, 1967 and 1969)] の抽出
液に強いエストロジェンリセプター結合活性が存在する
ことを見出し、該抽出液より新規なレトロジヒドロカル
コン化合物を単離・精製し、これらの化合物がエストロ
ジェン活性（アゴニスト活性）を有することを見い出し
本発明を完成した。
生薬チャン・デング[Chan Daeng: "Pramual Sapphakhun
Ya Thai(Medicinal Uses of Thai Drugs)", ed.by Pho
l Phaetthanesura, Samakhon Rongrien Phaet Boran(Th
e Association of the School of Old-style Medicin
e), Bangkok, Thailand(1964, 1967 and 1969)] の抽出
液に強いエストロジェンリセプター結合活性が存在する
ことを見出し、該抽出液より新規なレトロジヒドロカル
コン化合物を単離・精製し、これらの化合物がエストロ
ジェン活性（アゴニスト活性）を有することを見い出し
本発明を完成した。
【００１３】すなわち、本発明は、下記式（Ｉ）：
【００１４】
【化３】
【００１５】で表わされる化合物又はその塩に関するも
のであり、また、下記式（ＩＩ）：
のであり、また、下記式（ＩＩ）：
【００１６】
【化４】
【００１７】で表わされる化合物又はその塩に関するも
のであり、さらには、タイ産の生薬チャン・デングより
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表わされる化合物を単離するこ
とから成る該化合物の製造法に関するものである。
のであり、さらには、タイ産の生薬チャン・デングより
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表わされる化合物を単離するこ
とから成る該化合物の製造法に関するものである。
【００１８】本発明の化合物のうち、式（Ｉ）の化合物
は、 2、4'- ジヒドロキシー4、6ー ジメトキシレトロジヒドロカ
ルコン (2,4'-dihydroxy-4,6-dimethoxyretrodihydrochalcone)
であり、本発明においては化合物１と定義する。
は、 2、4'- ジヒドロキシー4、6ー ジメトキシレトロジヒドロカ
ルコン (2,4'-dihydroxy-4,6-dimethoxyretrodihydrochalcone)
であり、本発明においては化合物１と定義する。
【００１９】式（ＩＩ）の化合物は、 4、4'- ジヒドロキシー2、6ー ジメトキシレトロジヒドロカ
ルコン (4,4'-dihydroxy-2,6-dimethoxyretrodihydrochalcone)
であり、本発明においては化合物２と定義する。
ルコン (4,4'-dihydroxy-2,6-dimethoxyretrodihydrochalcone)
であり、本発明においては化合物２と定義する。
【００２０】本発明の化合物１及び化合物２は、塩にす
ることができ、そのような塩としては、ナトリウム塩、
カリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マ
グネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩等の金属塩を
挙げることができる。
ることができ、そのような塩としては、ナトリウム塩、
カリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マ
グネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩等の金属塩を
挙げることができる。
【００２１】本発明の化合物１又は化合物２は、生薬チ
ャン・デングより抽出することによって得られる。
ャン・デングより抽出することによって得られる。
【００２２】抽出は一般動植物で採用されている方法に
準じて行われる。
準じて行われる。
【００２３】すなわち、生薬チャン・デングを細切し、
水、メタノール、エタノールのようなアルコール類、酢
酸エチルのような有機酸エステル類、メチレンクロリ
ド、クロロホルムのようなハロゲン化炭化水素類、ベン
ゼン、トルエンのような芳香族炭化水素類、叉はこれら
の混合溶剤で抽出し、得られた抽出液を適当な量まで濃
縮する。
水、メタノール、エタノールのようなアルコール類、酢
酸エチルのような有機酸エステル類、メチレンクロリ
ド、クロロホルムのようなハロゲン化炭化水素類、ベン
ゼン、トルエンのような芳香族炭化水素類、叉はこれら
の混合溶剤で抽出し、得られた抽出液を適当な量まで濃
縮する。
【００２４】ついで、得られた残留物に必要に応じて水
を加えた後、該水溶液をｎ−ヘキサン、石油エーテルな
どの該水溶液と二相に分かれる低極性有機溶剤で抽出し
て有機溶剤に移行する脂溶性成分を除去し、ついで含水
アルコール層を留去する。このようにして得られた残渣
を水に溶解し、クロロホルム、エーテル、酢酸エチルな
どの水と二相に分かれる低極性溶剤で抽出し、有機溶剤
層を減圧下で留去すると、主に化合物１又は化合物２を
含む画分が得られる。
を加えた後、該水溶液をｎ−ヘキサン、石油エーテルな
どの該水溶液と二相に分かれる低極性有機溶剤で抽出し
て有機溶剤に移行する脂溶性成分を除去し、ついで含水
アルコール層を留去する。このようにして得られた残渣
を水に溶解し、クロロホルム、エーテル、酢酸エチルな
どの水と二相に分かれる低極性溶剤で抽出し、有機溶剤
層を減圧下で留去すると、主に化合物１又は化合物２を
含む画分が得られる。
【００２５】このようにして得られた画分は、さらに分
配を利用した各種の向流分配クロマトグラフィーにより
精製することができる。例えば遠心液液クロマトグラフ
ィー(K.Hostettman et al., "Preparative Chromatogra
phy Techniques", SpringerVerlag, Berlin, 1986) に
より、二相に分かれる溶剤系、例えば水、低級アルコー
ルなどの極性溶剤とクロロホルム、酢酸エチルなどの低
極性有機溶剤とを適宜混合して得られる溶剤系、を固定
相と移動相として用いて効果的に精製することができ
る。あるいは、アビセルなどのセルロース、セファデッ
クスＬＨ２０（ファルマシア製）、ダイアイオン（三菱
化成（株）製）、などを用いる分配カラムクロマトグラ
フィー、またはシリカゲル、アルミナ、マグネシウム−
シリカゲル系のフロリジルのような担体を用いる吸着ク
ロマトグラフィー等で精製することもできる。
配を利用した各種の向流分配クロマトグラフィーにより
精製することができる。例えば遠心液液クロマトグラフ
ィー(K.Hostettman et al., "Preparative Chromatogra
phy Techniques", SpringerVerlag, Berlin, 1986) に
より、二相に分かれる溶剤系、例えば水、低級アルコー
ルなどの極性溶剤とクロロホルム、酢酸エチルなどの低
極性有機溶剤とを適宜混合して得られる溶剤系、を固定
相と移動相として用いて効果的に精製することができ
る。あるいは、アビセルなどのセルロース、セファデッ
クスＬＨ２０（ファルマシア製）、ダイアイオン（三菱
化成（株）製）、などを用いる分配カラムクロマトグラ
フィー、またはシリカゲル、アルミナ、マグネシウム−
シリカゲル系のフロリジルのような担体を用いる吸着ク
ロマトグラフィー等で精製することもできる。
【００２６】このようにして得られる本発明の化合物１
又は化合物２は、さらにオクタデシルやオクチル化され
たシリカゲルを担体に用いた逆相クロマトグラフィーに
付し、水もしくは低級アルコール、または水もしくはア
セトニトリル等を適宜混合した溶剤を展開溶剤として用
いて精製することもできる。あるいは目的化合物と混在
する不純物との溶剤に対する分配率の差を利用した抽出
精製法などで精製することもできる。
又は化合物２は、さらにオクタデシルやオクチル化され
たシリカゲルを担体に用いた逆相クロマトグラフィーに
付し、水もしくは低級アルコール、または水もしくはア
セトニトリル等を適宜混合した溶剤を展開溶剤として用
いて精製することもできる。あるいは目的化合物と混在
する不純物との溶剤に対する分配率の差を利用した抽出
精製法などで精製することもできる。
【００２７】以上の精製操作を、単独または適宜組み合
わせて反復して行うことにより目的化合物の純品を得る
ことができる。
わせて反復して行うことにより目的化合物の純品を得る
ことができる。
【００２８】本発明の化合物１又は化合物２はエストロ
ジェン活性を示す。その投与形態としては、皮下注射、
静脈注射、筋肉注射などによる非経口投与法、または、
錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などによる経口投与法
があげられる。投与量は、対象疾患、投与経路、投与回
数などによって異なるが、例えば、成人にたいして、通
常１日１ｍｇないし１０００ｍｇを１回または数回に分
けて投与するのが好ましい。
ジェン活性を示す。その投与形態としては、皮下注射、
静脈注射、筋肉注射などによる非経口投与法、または、
錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などによる経口投与法
があげられる。投与量は、対象疾患、投与経路、投与回
数などによって異なるが、例えば、成人にたいして、通
常１日１ｍｇないし１０００ｍｇを１回または数回に分
けて投与するのが好ましい。
【００２９】
【実施例】以下に実施例をあげて本発明についてさらに
詳しく記載するが、本発明はこの実施例に限定されるも
のではない。
詳しく記載するが、本発明はこの実施例に限定されるも
のではない。
【００３０】(1) 化合物１及び化合物２の分離、精製 タイのバンコク市場で購入したチャン・デング ４．６
Ｋｇについて、３５Ｌのメタノールを用いて抽出操作を
行った。この抽出液を減圧下濃縮乾固し、これに５Ｌの
酢酸エチルと水１０Ｌとで分配した。酢酸エチル層は減
圧下、濃縮乾固し、水層はさらにｎ−ブタノールで分配
した。得られた酢酸エチル画分（７９７ｇ）のうち３
３．５ｇを遠心液液分配クロマトグラフィーを用いて分
画を行った。すなわち分配液の組成はｎ−ヘキサン：メ
タノール：水＝５：４：１、回転数は１１００ｒｐｍ、
流速５ml/min、上昇法で展開した。得られた画分につい
てエストロジェンリセプター結合活性を測定し、活性画
分として２６．７ｇを得た。この画分を逆相系ローバー
カラム（メルク社製；RP-18, φ37mm x 440mm）に供与
し、逆相分配クロマトグラフィーを行った。溶媒として
はアセトニトリル：水＝３：７を用いた。活性画分を集
めて溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（メルク社製; Art9385, φ40mm x 160mm, 展開溶
媒、クロロホルム：メタノール＝９９：１）にて分画し
た。さらに高速液体クロマトグラフィーにて分離精製を
行った。すなわち逆相系センシューパックODSー5251ーD
（センシュー科学社製）、メタノール：水＝３：７、流
速 １５ml/min、検出波長 ２８０nmの条件で分画し、
活性物質である化合物１及び化合物２をそれぞれ３３ｍ
ｇ、５５ｍｇ得た。
Ｋｇについて、３５Ｌのメタノールを用いて抽出操作を
行った。この抽出液を減圧下濃縮乾固し、これに５Ｌの
酢酸エチルと水１０Ｌとで分配した。酢酸エチル層は減
圧下、濃縮乾固し、水層はさらにｎ−ブタノールで分配
した。得られた酢酸エチル画分（７９７ｇ）のうち３
３．５ｇを遠心液液分配クロマトグラフィーを用いて分
画を行った。すなわち分配液の組成はｎ−ヘキサン：メ
タノール：水＝５：４：１、回転数は１１００ｒｐｍ、
流速５ml/min、上昇法で展開した。得られた画分につい
てエストロジェンリセプター結合活性を測定し、活性画
分として２６．７ｇを得た。この画分を逆相系ローバー
カラム（メルク社製；RP-18, φ37mm x 440mm）に供与
し、逆相分配クロマトグラフィーを行った。溶媒として
はアセトニトリル：水＝３：７を用いた。活性画分を集
めて溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（メルク社製; Art9385, φ40mm x 160mm, 展開溶
媒、クロロホルム：メタノール＝９９：１）にて分画し
た。さらに高速液体クロマトグラフィーにて分離精製を
行った。すなわち逆相系センシューパックODSー5251ーD
（センシュー科学社製）、メタノール：水＝３：７、流
速 １５ml/min、検出波長 ２８０nmの条件で分画し、
活性物質である化合物１及び化合物２をそれぞれ３３ｍ
ｇ、５５ｍｇ得た。
【００３１】(2) 物理化学的性質 本発明の化合物１及び化合物２の物理化学的性質を以下
に示す。
に示す。
【００３２】化合物１：2、4'- ジヒドロキシー4、6ー ジ
メトキシレトロジヒドロカルコン （２，４’−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−４，６−ｄｉｍｅｔ
ｈｏｘｙｒｅｔｒｏｄｉｈｙｄｒｏｃｈａｌｃｏｎｅ） １．無色針状晶、融点 １５８−１６０℃(decomp., ac
etone/water)。 ２．紫外吸収スペクトル：λmax nm(log ε) 206(4.6
2), 278(4.11) 。
メトキシレトロジヒドロカルコン （２，４’−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−４，６−ｄｉｍｅｔ
ｈｏｘｙｒｅｔｒｏｄｉｈｙｄｒｏｃｈａｌｃｏｎｅ） １．無色針状晶、融点 １５８−１６０℃(decomp., ac
etone/water)。 ２．紫外吸収スペクトル：λmax nm(log ε) 206(4.6
2), 278(4.11) 。
【００３３】メタノール中で測定した。
【００３４】３．マススペクトル EIMS m/z 302(M+),
283, 181, 167, 154, 137, 121, 109,93 。
283, 181, 167, 154, 137, 121, 109,93 。
【００３５】４．1H-NMRスペクトル(acetone-d6/TMS) p
pm 2.90(2H, t, J=7Hz),3.15(2H, t, J=7Hz), 3.72(3H,
s), 3.79(3H, s), 6.10(2H, s), 6.92(2H, d, J=9Hz),
7.95(2H, d, J=9Hz), 8.75(2H, bs, D2O exchangeabl
e)。 ５．13C-NMR スペクトル(acetone-d6/TMS) ppm 18.57
(t), 39.02(t), 55.38(q), 55.87(q), 91.23(d), 95.0
6(d), 109.17(s), 116.05(d),129.90(s),131.57(d), 15
7.26(s), 160.14(s), 160.60(s), 162.87(s), 200.37
(s) 。
pm 2.90(2H, t, J=7Hz),3.15(2H, t, J=7Hz), 3.72(3H,
s), 3.79(3H, s), 6.10(2H, s), 6.92(2H, d, J=9Hz),
7.95(2H, d, J=9Hz), 8.75(2H, bs, D2O exchangeabl
e)。 ５．13C-NMR スペクトル(acetone-d6/TMS) ppm 18.57
(t), 39.02(t), 55.38(q), 55.87(q), 91.23(d), 95.0
6(d), 109.17(s), 116.05(d),129.90(s),131.57(d), 15
7.26(s), 160.14(s), 160.60(s), 162.87(s), 200.37
(s) 。
【００３６】６．溶解性：メタノール、エタノール、ア
セトンに可溶。クロロホルムに比較的難溶。ｎ−ヘキサ
ン、水に難溶。
セトンに可溶。クロロホルムに比較的難溶。ｎ−ヘキサ
ン、水に難溶。
【００３７】７．高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシューパック ODS-1151-D 、粒子径５
ミクロン、カラムサイズφ4.6mm x 150mm （センシュー
科学社製） 移動相； アセトニトリル：水＝4:6 流速； １ml/min 検出波長； UV 280nm カラム温度35゜Cの時、溶出時間7.00分の位置に化合物１
のピークを観測することができた。
ミクロン、カラムサイズφ4.6mm x 150mm （センシュー
科学社製） 移動相； アセトニトリル：水＝4:6 流速； １ml/min 検出波長； UV 280nm カラム温度35゜Cの時、溶出時間7.00分の位置に化合物１
のピークを観測することができた。
【００３８】化合物２：4、4'- ジヒドロキシー 2、6ージ
メトキシレトロジヒドロカルコン (4,4'-dihydroxy-2,6-dimethoxyretrodihydrochalcone) １．物質の性状、無色粉末、中性。
メトキシレトロジヒドロカルコン (4,4'-dihydroxy-2,6-dimethoxyretrodihydrochalcone) １．物質の性状、無色粉末、中性。
【００３９】２．紫外吸収スペクトル：λmax nm(log
ε) 206(4.65), 278(4.15). メタノール中で測定し
た。
ε) 206(4.65), 278(4.15). メタノール中で測定し
た。
【００４０】３．マススペクトル EIMS m/z 302(M+),
181, 167, 154, 121, 107, 93. ４．1H-NMRスペクトル(acetone-d6/TMS) ppm 2.91(4H,
m), 3.75(6H, s),6.14(2H,s), 6.92(2H, J=9Hz), 7.92
(2H, d, J=9Hz), 8.60(2H, bs, D2O exchangeable). ５．13C-NMR スペクトル(acetone-d6/TMS) ppm 19.32
(t), 39.09(t), 55.81(q),92.68(d), 108.91(s), 115.9
5(d), 130.19(s), 131.33(d), 158.15(s), 159.70(s),
162.42(s), 198.88(s). ６．溶解性：メタノール、エタノール、アセトンに可
溶。クロロホルムに比較的難溶。ｎ−ヘキサン、水に難
溶。
181, 167, 154, 121, 107, 93. ４．1H-NMRスペクトル(acetone-d6/TMS) ppm 2.91(4H,
m), 3.75(6H, s),6.14(2H,s), 6.92(2H, J=9Hz), 7.92
(2H, d, J=9Hz), 8.60(2H, bs, D2O exchangeable). ５．13C-NMR スペクトル(acetone-d6/TMS) ppm 19.32
(t), 39.09(t), 55.81(q),92.68(d), 108.91(s), 115.9
5(d), 130.19(s), 131.33(d), 158.15(s), 159.70(s),
162.42(s), 198.88(s). ６．溶解性：メタノール、エタノール、アセトンに可
溶。クロロホルムに比較的難溶。ｎ−ヘキサン、水に難
溶。
【００４１】７．高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシューパック ODS-1151-D 、粒子径５
ミクロン、カラムサイズφ4.6mm x 150mm （センシュー
科学社製） 移動相； アセトニトリル：水＝35:65 流速； １ml/min 検出波長； UV 280nm カラム温度35゜Cの時、溶出時間8.03分の位置に化合物２
のピークを観測することができた。
ミクロン、カラムサイズφ4.6mm x 150mm （センシュー
科学社製） 移動相； アセトニトリル：水＝35:65 流速； １ml/min 検出波長； UV 280nm カラム温度35゜Cの時、溶出時間8.03分の位置に化合物２
のピークを観測することができた。
【００４２】(3) 生物活性 本発明の化合物１及び化合物２の生物活性について述べ
る。
る。
【００４３】エストラジオール拮抗活性 エストラジオール拮抗活性はThibodeau,S.N.らの方法
（Clin. Chem. 27, 687-691(1981) ）を一部改変し用い
ることにより測定した。すなわちマウス子宮を摩砕し、
100,000gで１時間超遠心して得られる細胞可溶性画分中
のエストロジェンリセプター（エストロジェン結合蛋
白）を用いて試験を行った。ＧＴＥ緩衝液（10mM トリ
ス塩酸緩衝液 pH8.0、1mM エチレンジアミン四酢酸、10
% グリセロールを含む）80μl 、20nM[3H]エストラジオ
ール 5μl(15,000cpm)、上記細胞可溶画分 10 μl 、検
体溶液（もしくは溶媒のみ）5 μl を含む反応液はよく
撹拌後4℃の状態で一晩放置した。非特異的結合測定の
ためには、検体溶液の代わりにエストラジオールの200
倍過剰のジエチルスチルベストロールを添加し、同様の
処理をした。
（Clin. Chem. 27, 687-691(1981) ）を一部改変し用い
ることにより測定した。すなわちマウス子宮を摩砕し、
100,000gで１時間超遠心して得られる細胞可溶性画分中
のエストロジェンリセプター（エストロジェン結合蛋
白）を用いて試験を行った。ＧＴＥ緩衝液（10mM トリ
ス塩酸緩衝液 pH8.0、1mM エチレンジアミン四酢酸、10
% グリセロールを含む）80μl 、20nM[3H]エストラジオ
ール 5μl(15,000cpm)、上記細胞可溶画分 10 μl 、検
体溶液（もしくは溶媒のみ）5 μl を含む反応液はよく
撹拌後4℃の状態で一晩放置した。非特異的結合測定の
ためには、検体溶液の代わりにエストラジオールの200
倍過剰のジエチルスチルベストロールを添加し、同様の
処理をした。
【００４４】検体のエストラジオール拮抗活性は遊離の
[3H]エストラジオールをデキストラン（Dextran T70、
ファルマシア社製）被覆活性炭（C4386、シグマ社製）で
吸着除去した後、エストロジェンリセプターに結合した
[3H]エストラジオールのみを液体シンチレーションカウ
ンターで測定した。拮抗活性は[3H]エストラジオールの
エストロジェンリセプターに対する結合の阻害率とし
て、次式： 100 - ( b/a × 100 ) a : 検体添加の cpm - 非特異的結合の cpm b : 検体非添加の cpm - 非特異的結合の cpm で表記した。
[3H]エストラジオールをデキストラン（Dextran T70、
ファルマシア社製）被覆活性炭（C4386、シグマ社製）で
吸着除去した後、エストロジェンリセプターに結合した
[3H]エストラジオールのみを液体シンチレーションカウ
ンターで測定した。拮抗活性は[3H]エストラジオールの
エストロジェンリセプターに対する結合の阻害率とし
て、次式： 100 - ( b/a × 100 ) a : 検体添加の cpm - 非特異的結合の cpm b : 検体非添加の cpm - 非特異的結合の cpm で表記した。
【００４５】その結果、本発明の化合物１および化合物
２が[3H]エストラジオールの結合を５０％拮抗的に阻害
する濃度（IC50）はそれぞれ 4.9μM および 0.57 μM
であった。
２が[3H]エストラジオールの結合を５０％拮抗的に阻害
する濃度（IC50）はそれぞれ 4.9μM および 0.57 μM
であった。
【００４６】エストロジェン活性および細胞毒性 エストロジェンに感受性であるヒト乳癌由来細胞株ＭＣ
Ｆ−７を用いて本発明の化合物１及び化合物２のエスト
ロジェン様活性を試験した。
Ｆ−７を用いて本発明の化合物１及び化合物２のエスト
ロジェン様活性を試験した。
【００４７】即ち、内在性のエストロジェンを活性炭で
除去したウシ胎児血清を１０％含むダルベッコ氏変法Ｍ
ＥＭ培地に懸濁したＭＣＦ−７細胞２０００個を９６穴
のマイクロテストプレートの各穴にまき、化合物１また
は化合物２を加え、３７℃で４日間培養した。培養後、
ＭＣＦ−７細胞の増殖の度合いをJ.Carmichaelらの方法
（Cancer res.、 47、936ー942(1987) ）に従いＭＴＴ（3ー
(4、5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazo
lium Bromide）を用いて、波長 550 nm における吸光度
を指標として検出した。
除去したウシ胎児血清を１０％含むダルベッコ氏変法Ｍ
ＥＭ培地に懸濁したＭＣＦ−７細胞２０００個を９６穴
のマイクロテストプレートの各穴にまき、化合物１また
は化合物２を加え、３７℃で４日間培養した。培養後、
ＭＣＦ−７細胞の増殖の度合いをJ.Carmichaelらの方法
（Cancer res.、 47、936ー942(1987) ）に従いＭＴＴ（3ー
(4、5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazo
lium Bromide）を用いて、波長 550 nm における吸光度
を指標として検出した。
【００４８】増殖促進率は以下の式により求めた。
【００４９】増殖促進率 ＝ b/a × 100 a : 試料無添加における吸光度 b : 各試料濃度における吸光度 エストロジェン活性を示す対照化合物にはエストラジオ
ール及びエストロジェンアゴニストであるダイゼインを
用いた。この結果を表１に示す。
ール及びエストロジェンアゴニストであるダイゼインを
用いた。この結果を表１に示す。
【００５０】
【表１】 各化合物を添加したときのＭＣＦ−７細胞の反応 化合物 濃度(nM) 吸光度の変化（％） 無添加 - 100 ±14 化合物１ 100 88 ± 9 1000 102 ± 8 10000 139 ±13* 化合物２ 100 111 ±20 1000 150 ±17* 10000 158 ±25* エストラジオール 0.1 148 ±16* 1 158 ±15* ダイゼイン 100 102 ±12 1000 142 ±21* 表中、吸光度の変化は無添加の時を100%として表現し
た。また、無添加 に比較して危険率0.1%で有意である
ものは* 印で示した。
た。また、無添加 に比較して危険率0.1%で有意である
ものは* 印で示した。
【００５１】この結果より、化合物１を10μＭ加えたと
き、または、化合物２を1 から10μＭ加えたときに、Ｍ
ＣＦ−７細胞はエストラジオールを 0.1 nM から 1 nM
添加したときと同程度の数値を示した。また、ダイゼイ
ンを１μＭ添加したときに同程度の数値が観察された。
き、または、化合物２を1 から10μＭ加えたときに、Ｍ
ＣＦ−７細胞はエストラジオールを 0.1 nM から 1 nM
添加したときと同程度の数値を示した。また、ダイゼイ
ンを１μＭ添加したときに同程度の数値が観察された。
【００５２】すなわち、化合物１及び２はダイゼインの
約１／１０ないしダイゼインとほぼ同程度のエストロジ
ェン作用を有していた。
約１／１０ないしダイゼインとほぼ同程度のエストロジ
ェン作用を有していた。
【００５３】細胞毒性は以下のようにして測定した。す
なわちヒト子宮頚癌細胞(HeLa S3)を5% 牛胎児血清を
含むイーグルのＭＥＭ培地（ペニシリン100 単位/ml,
ストレプトマイシン100 μg/ml含有）, 37℃ 5% CO2 下
で培養し、1 x 105 cells/mlの浮遊液を作成する。これ
を100 μl ずつ96穴平底プレートに分注し、37℃ 5%CO2
下で一日培養する。これに試料を添加し、37℃ 5% CO2
下で四日培養後、ギムザ染色し、染色された細胞を溶
解し、色素を溶出させ、700nm にて吸光度を測定した。
増殖抑制率は以下の式により求めた。
なわちヒト子宮頚癌細胞(HeLa S3)を5% 牛胎児血清を
含むイーグルのＭＥＭ培地（ペニシリン100 単位/ml,
ストレプトマイシン100 μg/ml含有）, 37℃ 5% CO2 下
で培養し、1 x 105 cells/mlの浮遊液を作成する。これ
を100 μl ずつ96穴平底プレートに分注し、37℃ 5%CO2
下で一日培養する。これに試料を添加し、37℃ 5% CO2
下で四日培養後、ギムザ染色し、染色された細胞を溶
解し、色素を溶出させ、700nm にて吸光度を測定した。
増殖抑制率は以下の式により求めた。
【００５４】増殖抑制率(%)=100-(b/a x 100) a: 試料非添加における吸光度 b: 各試料濃度における吸光度 本試験による本発明の化合物１および化合物２の50% 増
殖抑制濃度はそれぞれ16.1μg/ml、 24.1 μg/mlであっ
た。
殖抑制濃度はそれぞれ16.1μg/ml、 24.1 μg/mlであっ
た。
【００５５】
【発明の効果】以上のように、本発明の化合物１および
２はエストラジオールの受容体と強く結合し、アゴニス
ト活性を示すが、細胞毒性は見られない。従って、本発
明化合物１及び化合物２は、医薬の分野でエストロジェ
ン剤として、例えば、エストロジェンの欠乏に起因する
婦人科疾患、骨粗鬆症、前立腺癌及び前立腺肥大症の治
療剤の用途に使用することができる。
２はエストラジオールの受容体と強く結合し、アゴニス
ト活性を示すが、細胞毒性は見られない。従って、本発
明化合物１及び化合物２は、医薬の分野でエストロジェ
ン剤として、例えば、エストロジェンの欠乏に起因する
婦人科疾患、骨粗鬆症、前立腺癌及び前立腺肥大症の治
療剤の用途に使用することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＣＶ 8413−4Ｃ ＡＤＵ 8413−4Ｃ ＡＥＫ 8413−4Ｃ (72)発明者 飯島 康輝 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 瀧 基彦 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内
Claims (3)
- 【請求項１】下記式（Ｉ）： 【化１】 で表わされる化合物又はその塩。
- 【請求項２】下記式（ＩＩ）： 【化２】 で表わされる化合物又はその塩。
- 【請求項３】タイ産の生薬チャン・デングより請求項１
又は２記載の化合物を単離することから成る該化合物の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4034969A JPH05229983A (ja) | 1992-02-21 | 1992-02-21 | レトロジヒドロカルコン化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4034969A JPH05229983A (ja) | 1992-02-21 | 1992-02-21 | レトロジヒドロカルコン化合物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05229983A true JPH05229983A (ja) | 1993-09-07 |
Family
ID=12428975
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4034969A Pending JPH05229983A (ja) | 1992-02-21 | 1992-02-21 | レトロジヒドロカルコン化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05229983A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011505385A (ja) * | 2007-12-03 | 2011-02-24 | ヴォロファーム・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | 良性前立腺過形成の治療のための医薬製剤 |
-
1992
- 1992-02-21 JP JP4034969A patent/JPH05229983A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011505385A (ja) * | 2007-12-03 | 2011-02-24 | ヴォロファーム・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | 良性前立腺過形成の治療のための医薬製剤 |
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