JPH05219973A

JPH05219973A - 血管拡張剤および化合物ｍｓ−２８２

Info

Publication number: JPH05219973A
Application number: JP2005892A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Nakanishi; 聡中西; Yoichi Uosaki; 洋一宇於崎; Yutaka Saito; 裕斎藤; Mayumi Koda; 真由美好田; Katsunori Kita; 克則北; Akira Kaihara; 明貝原; Koji Yamada; 耕二山田; Isao Kawamoto; 勲川本; Yuzuru Matsuda; 譲松田
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1992-02-05
Filing date: 1992-02-05
Publication date: 1993-08-31

Abstract

(57)【要約】【目的】血管拡張作用を有する化合物を提供する。【構成】ストレプトミセス属に属する微生物を培地で
培養することにより得られる化合物を有効成分として含
有する血管拡張剤および化合物ＭＳ−２８２。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ストレプトミセス(Str
eptomyces)属に属する微生物により生産される化合物を
有効成分として含有する血管拡張剤および化合物ＭＳ−
２８２に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＭＳ−２８２に類似した構造を有する物
質として、

【０００３】

【化３】

【０００４】が、ジャーナル・オブ・アンチビオティク
ス（J. Antibiotics）誌32巻673-678頁1979年、

【０００５】

【化４】

【０００６】が、J. Antibiotics誌41巻1196-1204頁198
8年、

【０００７】

【化５】

【０００８】が、テトラヘドロン・レターズ（Tetrahed
ron Letters）誌28巻5861-5864頁1987年、

【０００９】

【化６】

【００１０】が、Tetrahedron Letters誌32巻3087-3090
頁1991年、および

【００１１】

【化７】

【００１２】が、天然有機化合物討論会要旨627-634頁1
991年に報告されており、これら五つの物質は抗菌作用
および放線菌の気菌糸誘導作用を有することが知られて
いる。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、血管
拡張作用を有する生理活性物質を提供することにある。

【００１４】

【課題を解決するための手段】新規な血管拡張作用物質
を取得するために、数多くの微生物の生産物について研
究を行った結果、ストレプトミセス属に属する微生物を
培地に培養することにより得られる物質が、血管拡張作
用を有する生理活性物質であることを見出した。

【００１５】以下に本発明を詳細に説明する。本発明に
よれば、式（Ｉ）

【００１６】

【化８】

【００１７】（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は同一または
異なって、メチルまたはエチルを表し、Ｒ⁴は水素また
はメチルを表し、ｎは２〜４の整数を意味する）で表さ
れる化合物〔以下、化合物（Ｉ）という〕またはその塩
を有効成分として含有することを特徴とする血管拡張
剤、および式（II）

【００１８】

【化９】

【００１９】（式中、Ｒ²がメチルのときｍは４を表
し、Ｒ²がエチルのときｍは３を表す）で表される化合
物ＭＳ−２８２またはその塩を提供することができる。
化合物（Ｉ）は本発明実施例記載の方法または公知の方
法、例えばJ. Antibiotics 32巻673-678頁1979年、同誌
41巻1196-1204頁1988年、Tetrahedron Letters28巻5861
-5864頁1987年、同誌32巻3087-3090頁1991年、および天
然有機化合物討論会要旨627-634頁1991年に記載の方法
により取得することができる。化合物（Ｉ）の具体例を
第１表に示す。

【００２０】

【表１】

【００２１】また、上記式（II）で表されるＭＳ−２８
２には、下記に示すような理化学的性質より、ＭＳ−２
８２においてＲ²がメチルのときｍが４である化合物
（化合物１；以下、ＭＳ−２８２ａという）、およびＭ
Ｓ−２８２においてＲ²がエチルのときｍが３である化
合物（化合物２；以下、ＭＳ−２８２ｂという）が含ま
れ、両化合物共に新規化合物であることが判明した。

【００２２】以下に示す理化学的性質は、後述の実施例
に示す方法によって調製した試料に関するものである。
なお、測定は次の機器によって行った。旋光度：日本分光工業社 DIP-370型旋光計マススペクトル（EIおよびセカンダリーイオンマススペ
クトル）：日立製作所M-80Bスペクトロメーターマススペクトル（FABマススペクトル）：日本電子社 J
MS-SX102スペクトロメーター紫外部吸収スペクトル：日立製作所 200-20型分光光度
計赤外部吸収スペクトル：日本電子社 JIR-RFX3001型分
光光度計¹ Hおよび¹³C-NMRスペクトル：ブルカー社 AM500および
AM400スペクトロメーター

【００２３】ＭＳ−２８２ａの理化学的性質性状：無色油状固体比旋光度：［α］_D ²¹ ＝ +6.1゜（c=0.30,クロロホル
ム） EIマススペクトル：m/z 635(M⁺),592,578,564,522,32
4,282,240,212,128 高分解能EIマススペクトル：m/z 測定値：635.4717(M⁺) 計算値：635.4757(C₃₇H₆₅NO₇として) セカンダリーイオンマススペクトル（マトリックス：m-
ニトロベンジルアルコール）：m/z 636(M+H)⁺,564,52
2,324,310,282,270,268,240,212,210 高分解能FABマススペクトル（マトリックス： m-ニト
ロベンジルアルコール）：m/z 測定値：636.4828(M+H)⁺ 計算値：636.4839(C₃₇H₆₆NO₇として)

【００２４】紫外部吸収スペクトル（メタノール溶
液）：末端吸収を示すのみである。赤外部吸収スペクトル（クロロホルム溶液法）：ν cm
^-1 2962,2935,2873,1728,1460,1269,1126,1111,1055¹³ C-NMRスペクトル（125MHz, CDCl₃溶液）：δ ppm 17
3.4,173.2,81.8,81.0,78.7,77.3,76.7,76.6,74.8,71.2,
62.1,47.2,41.8,40.3,40.1,40.1,39.3,38.7,36.5,35.5,
32.1,31.7,31.5,29.9,29.6,28.8,27.7,27.3,26.6,22.6,
18.1,14.3,14.2,14.1,11.2,9.9,9.3¹ H-NMRスペクトル（500MHz, CDCl₃溶液）：δ ppm 4.9
2(1H,m),4.91(1H,dd,J=7.2Hz),4.12(1H,dt,J=7.9,7.9H
z),4.11(1H,m),3.84(1H,m),3.82(1H,m),3.78(1H,m),3.7
3(1H,m),2.73(1H,m),2.58(1H,dq,J=2.8,7.0Hz),2.37(6
H,s),2.32(1H,dq,J=9.5,7.0Hz),1.98-1.86(5H,m),1.85-
1.57(8H,m),1.56-1.36(8H,m),1.36-1.24(9H,m),1.10(3
H,d,J=7.0Hz),1.08(3H,d,J=7.0Hz),0.898(3H,d,J=7.0H
z),0.894(3H,t,J=7.3Hz),0.891(3H,t,J=7.1Hz),0.81(3
H,d,J=7.0Hz) 溶解性：メタノール、クロロホルム、酢酸エチル、エー
テルに可溶、n-ヘキサン、水に不溶。呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素、リンモリ
ブデン酸による各呈色反応およびドラーゲンドルフ反応
に陽性、ブロムクレゾールグリーン試薬、2,4-ジニトロ
フェニルヒドラジンおよびニンヒドリンによる各呈色反
応に陰性。

【００２５】ＭＳ−２８２ｂの理化学的性質性状：無色油状固体比旋光度：［α］_D ²¹ ＝ +3.6゜（c=0.14,クロロホル
ム） EIマススペクトル：m/z 635(M⁺),592,578,522,324,282,
240,213,198,171,143,114 高分解能EIマススペクトル：m/z 測定値：635.4718(M⁺) 計算値：635.4757(C₃₇H₆₅NO₇として) セカンダリーイオンマススペクトル（マトリックス：m-
ニトロベンジルアルコール）：m/z 636(M+H)⁺,522,32
4,310,282,270,268,240

【００２６】紫外部吸収スペクトル（メタノール溶
液）：末端吸収を示すのみである。赤外部吸収スペクトル（クロロホルム溶液法）：ν cm
^-1 2962,2933,2873,1734,1466,1269,1126,1111,1055¹³ C-NMRスペクトル（100MHz, CDCl₃溶液：主なシグナル
を記す）：δ ppm 173.5,173.2,81.9,80.4,78.7,77.2,
76.9,76.3,74.7,71.2,47.3,47.2,41.8,40.2,40.2,39.6,
38.7,36.7,35.2,31.54,31.51,30.0,28.9,28.7,28.6,27.
4,23.0,19.7,18.1,14.22,14.19,14.01,13.96,11.1,9.0¹ H-NMRスペクトル（400MHz, CDCl₃溶液：主なシグナル
を記す）：δ ppm 4.91(1H,dd,J=7.7,3.7Hz),4.89(1H,
m),4.17(1H,dt,J=2.3,7.3Hz),4.10(1H,m),3.87(1H,m),
3.80(1H,m),3.75(1H,m),3.68(1H,m),2.56(1H,dq,J=2.7,
6.9Hz),2.48(6H,br.s),2.29(1H,dq,J=9.7,7.0Hz),2.05-
1.85(5H,m),1.85-1.64(8H,m),1.64-1.25(15H,m),1.10(3
H,d,J=6.9Hz),1.08(3H,d,J=7.0Hz),0.95(3H,t,J=7.6H
z),0.90(3H,t,J=7.5Hz),0.89(3H,t,J=7.4Hz),0.89(3H,
t,J=6.9Hz)

【００２７】溶解性：メタノール、クロロホルム、酢酸
エチル、エーテルに可溶、n-ヘキサン、水に不溶。呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素、リンモリ
ブデン酸による各呈色反応およびドラーゲンドルフ反応
に陽性、ブロムクレゾールグリーン試薬、2,4-ジニトロ
フェニルヒドラジン、およびニンヒドリンによる各呈色
反応に陰性。つぎに、下記の各種展開剤によるＭＳ−２８２の薄層ク
ロマトグラフィーのＲｆ値を第２表に示す。検出はヨウ
素反応により行った。

【００２８】

【表２】

【００２９】実験１薄層：キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （メルク社製、Art.562
8）展開溶媒：クロロホルム：メタノール：濃アンモニア＝
７６：２０：４展開方法：室温、上昇法、１５〜３０分実験２薄層：キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ （メルク社製、Art.562
8）展開溶媒：酢酸エチル：メタノール：濃アンモニア＝８
８：１０：２展開方法：室温、上昇法、１５〜３０分ＭＳ−２８２は、種々の酸と公知の方法により反応させ
て酸付加塩を形成させることができる。この目的に使用
される実用的な酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、
硝酸、蟻酸、酢酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、
コハク酸、酒石酸、クエン酸、蓚酸、メタンスルホン
酸、トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン
酸などがあげられる。

【００３０】つぎに、ＭＳ−２８２の製造法について説
明する。ＭＳ−２８２は、ストレプトミセス属に属し、
ＭＳ−２８２生産能を有する微生物を培地に培養し、培
養液中にＭＳ−２８２を生成蓄積させ、該培養物からＭ
Ｓ−２８２を採取することによって得ることができる。
ＭＳ−２８２生産性微生物としては野生株または野生株
を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照射、変
異誘発剤処理などによって変異させた変異株あるいは自
然的に変異した変異株など、ストレプトミセス属に属し
ＭＳ−２８２生産能を有していればいずれの微生物でも
用いることができる。

【００３１】具体的に好適な例としては、ア・ガイド・
フォー・ザ・ディターミネイション・オブ・アクチノミ
セーテス、ジェネラ・ストレプトミセス・ストレプトバ
ーティシリウム・アンド・カイニア、ナウカ、モスク
ワ、ユーエスエスアール、1983年出版（A guide for th
e determination of actinomycetes. Genera Streptomy
ces, Streptoverticillium, and Chainia. Nauka, Mosc
ow, USSR）に記載されたストレプトミセス・タウリカス
(Streptomyces tauricus) Gause, Preobrazhenskaya, S
veshnikova, Terekhova and Maximova 1986のKCC-S 083
7 (=ATCC 27470)株があげられる。

【００３２】なお、本菌株は工業技術院微生物工業技術
研究所に平成４年１月２２日付けで微工研条寄第3716号
（FERM BP-3716）として寄託してある。微生物の培養に
際しては放線菌の培養に用いられる通常の培養方法が適
用される。用いられる培地は菌の資化しうる炭素源、窒
素源、無機物などを程よく含有する培地であれば天然培
地、合成培地いずれでも用いることができる。

【００３３】炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノー
ス、マルトース、糖蜜などの炭水化物、クエン酸、リン
ゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、エ
タノールなどのアルコール、メタン、エタン、プロパ
ン、ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタミン酸など
のアミノ酸あるいはグリセロールなどが用いられる。

【００３４】窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムな
どのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シ
スチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リ
カー、大豆粉、ソルブル・ベジタブル・プロテイン、綿
実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディアな
どが用いられる。

【００３５】無機物としてはリン酸一水素カリウム、リ
ン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸
マグネシウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン
酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミ
ニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化
コバルト、食塩などが用いられる。

【００３６】その他必要に応じて培地にビタミン、例え
ばサイアミンなど菌体の増殖あるいはＭＳ−２８２の生
産性を促進する物質を加えることもできる。用いられる
微生物が特定の物質を要求する場合は、生育に必要なも
のを加えることが必要である。培養は振盪培養法、通気
攪拌培養法などにより、温度１５〜３５℃で、中性付近
のｐＨにて行われる。３〜１５日間の培養によって、Ｍ
Ｓ−２８２の蓄積は最大に達する。

【００３７】培養物中に蓄積したＭＳ−２８２を培養液
から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質を培
養液から採取する方法が適用される。すなわち、アセト
ン、メタノールなどの有機溶媒による菌体成分の抽出、
ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹脂、シリカ
ゲル、シラナイズドシリカゲル、逆層シリカゲル、アル
ミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ酸マグネシウ
ム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂などを用いるカラムク
ロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィーによ
る活性物質の吸脱着処理、適当な溶媒系による分配など
によってＭＳ−２８２は単離される。

【００３８】培養液からＭＳ−２８２を単離する一例は
次の通りである。培養液をろ過もしくは遠心分離するこ
とによって菌体を分離する。得られる菌体をメタノー
ル、アセトンなどの適当な溶剤で処理することにより菌
体抽出液を得る。該菌体抽出液を水で希釈した後に、得
られる希釈液をダイアイオンＨＰ−２０などの吸着樹脂
を充填したカラムに吸脱着させ、試料の濃縮と精製を行
う。カラムから溶出した液をさらに減圧下で濃縮した
後、酢酸エチルなどの水と混和しない溶媒を用いて抽出
を行う。ついで、得られる抽出液を減圧下で濃縮した
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返して
行うことにより活性物質を精製する。溶出溶媒として
は、クロロホルム、酢酸エチル、メタノール、アセト
ン、濃アンモニア、酢酸などの適当な溶剤を単独あるい
は混合したものを用いる。活性物質を含む溶出液を減圧
下で濃縮し、メタノールなどの適当な溶媒に再溶解した
後、活性炭で処理することにより不純物である色素成分
を除去することができる。ついで、シリカゲルカラムを
用いた液体クロマトグラフィーを行うことにより、ＭＳ
−２８２が得られる。なお、液体クロマトグラフィーの
溶出溶媒としては、クロロホルム、酢酸エチル、メタノ
ール、アセトン、濃アンモニア、酢酸などの適当な溶剤
を単独あるいは混合したものを用いる。たとえば、酢酸
エチル：メタノール：濃アンモニア（８５：１５：１）
が有効な一例である。上記精製工程中のＭＳ−２８２の
検出は、蛍光剤入りシリカゲル（キーゲルゼルＦ₂₅₄ 、
メルク社製）を用いた薄層クロマトグラフィーに付し、
ヨウ素反応により行う。

【００３９】つぎに、化合物（Ｉ）の血管拡張作用を試
験例で説明する。試験例１ウサギ胸部大動脈標本における血管収縮抑
制作用白色雑系ウサギ（雄、体重２〜３kg）の腹部正中線を切
開し、大動脈を腹部から約２〜２.５cmの長さで切り出
し、幅３〜４mmの螺旋状条片を作成した。両端を絹糸で
結紮し、下端は固定棒、上端は張力トランスデューサー
（日本光電社製ＴＢ−６１２Ｔ）につなぎ、初期張力
１.５ｇで懸垂した。標本をマグヌス管に入れた３２℃
のクレブス・ハンゼライト（Krebs-Henzeleit）液（NaC
l 6.92g/l，KCl 0.35g/l，MgSO₄・7H₂O 0.29g/l，CaCl₂・
2H₂O 0.37g/l，KH₂PO₄ 0.16g/l，NaHCO₃ 2.1g/l，グル
コース 1.0g/l）中に浸し、９５％Ｏ₂，５％ＣＯ₂ガス
を通じた。標本を１〜２時間安定させた後、実験に供し
た。

【００４０】血管収縮物質として塩化カリウムを終濃度
４０mMになるようにマグヌス管に添加した。惹起された
収縮反応は、張力トランスデューサーを介して等尺性に
ポリグラフ（日本光電社製ＡＭ−６０００）に記録し
た。試験化合物は３０mg／mlとなるようにジメチルスル
ホキシドに溶解させ、塩化カリウム添加の３０分前にマ
グヌス管に添加した。試験化合物無添加のときの収縮高
を１００％として、試験化合物を３０μｇ／ml添加した
ときの収縮高の割合（収縮率）を第３表に示す。

【００４１】

【表３】

【００４２】第３表から明らかなように、ＭＳ−２８２
は摘出血管の収縮抑制作用を有することが確認された。
化合物（Ｉ）またはその薬理的に許容される塩はそのま
まあるいは各種の製薬形態で使用することができる。本
発明の製薬組成物は、活性成分として有効な量の化合物
（Ｉ）またはその薬理的に許容される塩を薬理的に許容
される担体と均一に混合して製造できる。これらの製薬
組成物は、経口的または注射による投与に対して適する
単位服用形態にあることが望ましい。

【００４３】経口服用形態にある組成物の調製において
は、何らかの有用な薬理的に許容される担体が使用でき
る。例えば懸濁剤およびシロップ剤は、水、シュークロ
ース、ソルビトール、フラクトース等の糖類、ポリエチ
レングリコール、プロピレングリコール等のグリコール
類、ゴマ油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロ
キシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレ
ーバー、ペパーミントなどのフレーバー類等を使用して
製造できる。粉剤、丸剤、カプセル剤および錠剤は、ラ
クトース、グルコース、シュークロース、マンニトール
等の賦形剤、でん粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、ス
テアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニ
ルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチ
ン等の結合剤、脂肪酸エステル等の表面活性剤、グリセ
リン等の可塑剤等を用いて製造できる。錠剤およびカプ
セル剤は投与が容易であるという理由で、最も有用な単
位経口投与剤である。

【００４４】また、注射剤は、蒸留水、塩溶液、グルコ
ース溶液または塩水とグルコース溶液の混合物から成る
担体を用いて調製することができる。この際、常法に従
い適当な助剤を用いて、溶液、懸濁液または分散液とし
て調製される。化合物（Ｉ）またはその薬理的に許容さ
れる塩は前記製薬形態で経口的にまたは注射剤として非
経口的に投与することができ、その有効容量および投与
回数は、投与形態、患者の年齢、体重、症状等により異
なるが、通常１日当り、0.１〜５０mg／kgを３〜４回に
分けて投与する。

【００４５】

【実施例】

実施例１錠剤実施例５で得られたＭＳ−２８２ａ４０ｇ、ラクトース
２８６.８ｇおよび馬鈴薯でんぷん６０ｇを混合した
後、これにヒドロキシプロピルセルロースの１０％水溶
液１２０ｇを加えた。この混合物を常法により練合し、
造粒して乾燥させた後、整粒し打錠用顆粒とした。これ
にステアリン酸マグネシウム1.２ｇを加えて混合した
後、径８mmの杵をもった打錠機（菊水社製ＲＴ−１５
型）で打錠を行って、錠剤２０００錠（１錠あたり活性
成分２０mgを含有する）を得た。

【００４６】実施例２細粒剤実施例５で得られたＭＳ−２８２ａ２０ｇ、ラクトース
６５５ｇおよびとうもろこしでんぷん２８５ｇを混合し
た後、これにヒドロキシプロピルセルロースの１０％水
溶液４００ｇを加えた。この混合物を常法により練合
し、造粒した後乾燥させて、細粒剤１０００包（１包あ
たり活性成分２０mgを含有する）を得た。

【００４７】実施例３カプセル剤実施例５で得られたＭＳ−２８２ａ２００ｇ、アビセル
（旭化成工業製）９９５ｇおよびステアリン酸マグネシ
ウム５ｇを常法により混合した。この混合物をカプセル
充填機（Zanasi社製、ＬＺ−６４型）により、ハードカ
プセル４号（１カプセルあたり１２０mg容量) に充填
し、カプセル剤１0,０００カプセル（１カプセルあたり
活性成分２０mgを含有する）を得た。

【００４８】実施例４注射剤実施例５で得られたＭＳ−２８２ａ１ｇを精製ダイズ油
１００ｇに溶解させた後、これに精製卵黄レシチン１２
ｇおよび注射用グリセリン２５ｇを加えた。この混合物
を常法により注射用蒸留水で1,０００mlとして練合・乳
化した。得られた分散液を0.２μm のディスポーザブ型
メンブランフィルターを用いて無菌濾過した後、ガラス
バイアルに２mlずつ無菌的に充填して、注射剤５００バ
イアル（１バイアルあたり活性成分２mgを含有する）を
得た。

【００４９】実施例５ＭＳ−２８２ａの製造種菌として、ストレプトミセス・タウリカス(Streptomy
ces tauricus) FERM BP-3716株を用いた。種菌一白金耳
を２５０ml容三角フラスコに入れた種培地〔グルコース
１g/dl、可溶性デンプン１g/dl、ペプトン０.５g/dl、
酵母エキス０.５g/dl、肉エキス０.３g/dl、リン酸一カ
リウム０.１g/dl、硫酸マグネシウム７水塩０.０５g/dl
および炭酸カルシウム０.２g/dl （ｐＨ７.１）〕５０m
lに植菌し、２８℃で３日間振盪培養した（第一種培
養）。

【００５０】第一種培養により得られた培養液（第一種
培養液）の一部２５mlを２リットル容三角フラスコに入
った３００mlの種培地に植菌した（第二種培養）。第二
種培養は２８℃で２日間振盪培養により行った。得られ
た第二種培養液１.８リットル（三角フラスコ６本分）
を２００リットルタンクに入った１００リットルの種培
地に植菌した（第三種培養）。第三種培養は２８℃で２
日間通気攪拌培養により行った。

【００５１】得られた第三種培養液１００リットルを２
klタンクに入った主発酵培地〔マルトース４.０g/dl、
グルコース０.５g/dl、大麦ディスチラーズ・ソルブル
（サングロスＲ−５、サングロス社製）４.０g/dl、リ
ン酸一カリウム０.０５g/dl、硫酸マグネシウム・７水
塩０.０５g/dl、炭酸カルシウム２.０g/dl（ｐＨ６.
５）〕１klに植菌した。主発酵培養は２８℃で７日間通
気攪拌培養により行った。

【００５２】得られた発酵終了液１０００リットルにラ
ジオライト＃６００を６％の割合で添加した後、フィル
タープレスにより濾過を行い、菌体を得た。分別した菌
体に１１００リットルのメタノールを加え攪拌抽出後、
再度フィルタープレスにより濾過した。得られたメタノ
ール抽出液に水を添加して全体の容量を１４００リット
ルとした後に、５０リットルのダイアイオンＨＰ−２０
（三菱化成工業社製）を充填したカラムに通塔した。カ
ラムを１５０リットルの８０％メタノール水溶液、つい
で５００リットルの９０％メタノール水溶液で洗浄した
後に、４００リットルの９５％メタノール水溶液にて活
性物質を溶出した。溶出液を５０リットルずつ分取する
と分画番号２から５番に主な活性物質が溶出された。分
画番号２から５番を集めて減圧下でメタノールを留去し
た後、４リットルの酢酸エチルを用いて抽出を行った。
酢酸エチル層を減圧下で濃縮した後、酢酸エチルを用い
て充填した６リットルのシリカゲルカラム（ワコーゲル
Ｃ−２００、和光純薬工業社製）の上端にのせ、２５リ
ットルの酢酸エチルを用いて活性物質を溶出した。溶出
液を３.６リットルずつ分取すると分画番号６から８番
に主な活性物質が溶出された。分画番号６から８番を集
め、減圧下で濃縮後、メタノールを用いて充填した２リ
ットルのシリカゲルカラム（ワコーゲルＣ−２００）の
上端にのせた。１０リットルのメタノールを用いてカラ
ムを洗浄した後、活性物質を０.５％の酢酸を含む８５
％メタノール水溶液でカラムから溶出した。溶出液を４
００mlずつ分取すると分画番号６と７番に主な活性物質
が溶出された。分画番号６と７番を集めて濃縮乾固後、
少量のメタノールに溶解し、得られたメタノール溶液を
１００mlのクロマトグラフ用活性炭（和光純薬工業社
製）を充填したカラムに通塔した。カラムを１０００ml
のメタノールで洗浄すると洗浄液に活性物質が回収され
た。得られたメタノール溶液を濃縮乾固すると無色油状
固体が９.３ｇ得られた。

【００５３】この固体の一部４５０mgを少量の酢酸エチ
ル：メタノール：濃アンモニア（８５：１５：１）の混
合溶媒に溶解した後、シリカゲルカラム（Develosil Lo
p6045S、45ｘ490mm）を用いた液体クロマトグラフィー
により精製を行った。試料を溶解したのと同じ組成の溶
媒を用いて展開し、溶出液を２０mlずつ分取すると分画
番号１２２から１３２番にＭＳ−２８２ａが溶出され
た。この液体クロマトグラフィーを５回繰り返すことに
より得られた溶液を集めて減圧下で濃縮乾固するとＭＳ
−２８２ａ（化合物１）が９０mg得られた。

【００５４】実施例６ＭＳ−２８２ｂの製造実施例５記載と同様な方法により取得した第二種培養液
１.８リットルを２００リットルタンクに入った１００
リットルの下記主発酵培地に植菌した。主発酵培養は２
８℃で８日間通気攪拌培養により行った。種培地は実施
例１と同じ組成のものを用いた。主発酵培地は、マルト
ース４.０g/dl、グルコース０.５g/dl、大豆粕粉１.
５g/dl、大豆蛋白粉１.５g/dl、リン酸一カリウム０.
０５g/dl、硫酸マグネシウム・７水塩０.０５g/dl、炭
酸カルシウム０.２g/dl（ｐＨ７.０）の組成からなる
培地を用いた。

【００５５】得られた発酵終了液１００リットルにラジ
オライト＃６００を１０％の割合で添加した後、フィル
タープレスにより濾過を行い、菌体を得た。分別した菌
体に１００リットルの酢酸エチルを加え攪拌抽出後、濾
過により酢酸エチル抽出液を取得した。菌体残渣に再度
１００リットルの酢酸エチルを加えて同じ操作を繰り返
し、得られた酢酸エチル抽出液を合わせて減圧下で濃縮
し、濃縮液に水を添加して分配抽出を行い、酢酸エチル
層を得た。この酢酸エチル層を、酢酸エチルを用いて充
填した３リットルのシリカゲルカラム（ワコーゲルＣ−
２００）に通塔した。カラムを１５リットルのクロロホ
ルム、９リットルのクロロホルム：メタノール（８：
２）の混合溶媒で順次洗浄した後、活性物質を６リット
ルのクロロホルム：メタノール：濃アンモニア（９０：
１０：５）の混合溶媒で溶出した。溶出液を４００mlず
つ分取すると分画番号２４から２９番に主な活性物質が
溶出された。分画番号２４から２９番を集め、減圧下で
濃縮後、酢酸エチルを用いて充填した２.５リットルの
シリカゲルカラム（ワコーゲルＣ−２００）にのせた。
２.５リットルの酢酸エチルを用いてカラムを洗浄した
後、酢酸エチル：濃アンモニア（１０：１）を混合して
得られる上層液１４リットルを用いて活性物質をカラム
から溶出した。溶出液を４００mlずつ分取すると分画番
号１１から２２番に主な活性物質が溶出された。分画番
号１１から２２番を集めて減圧下で濃縮乾固後、少量の
クロロホルムに溶解し、得られるクロロホルム溶液を３
００mlのシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬
工業社製）を充填したカラムに通塔した。カラムを３０
０mlのクロロホルム、１０００mlのクロロホルム：メタ
ノール（１０：２）の混合溶媒で順次洗浄した。つい
で、活性物質をクロロホルム：メタノール：濃アンモニ
ア（７６：２０：３）の混合溶媒１４００mlで溶出し
た。溶出液を２０mlずつ分取すると分画番号４０から４
５番に主な活性物質が溶出された。分画番号４０から４
５番を集めて減圧下で濃縮乾固すると無色油状固体が２
５mg得られた。

【００５６】この固体２５mgを０.０７％酢酸を含む７
９％メタノール水溶液１mlに溶解した後、得られた溶液
を逆相シリカゲルカラム（STR ODS-H 4.6ｘ250mm、島津
製作所社製）を用いた液体クロマトグラフィーにより精
製を行った。１回のクロマトグラフィーに上記溶液を
０.１mlずつ用いて、１０回のクロマトグラフィーを繰
り返し行った。０.１％の酢酸を含む７０％メタノール
水溶液を用いて展開すると保持時間６.９分から７.２分
の間にＭＳ−２８２ｂが溶出されたので、この画分を分
取した。１０回のクロマトグラフィーから得られる溶液
を合わせて減圧下で濃縮乾固するとＭＳ−２８２ｂ（化
合物２）が２.２mg得られた。

【００５７】

【発明の効果】本発明によれば、ストレプトミセス属に
属する微生物により生産される化合物を有効成分として
含有する血管拡張剤および化合物ＭＳ−２８２を提供す
ることができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者貝原明東京都町田市木曽町1079−22 (72)発明者山田耕二静岡県裾野市佐野1309−３ (72)発明者川本勲神奈川県平塚市ふじみ野１−21−２ (72)発明者松田譲東京都小金井市貫井南町１−22−７

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）【化１】（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は同一または異なって、メ
チルまたはエチルを表し、Ｒ⁴は水素またはメチルを表
し、ｎは２〜４の整数を意味する）で表される化合物ま
たはその塩を有効成分として含有することを特徴とする
血管拡張剤。
【請求項２】式（II）【化２】（式中、Ｒ²がメチルのときｍは４を表し、Ｒ²がエチル
のときｍは３を表す）で表される化合物ＭＳ−２８２ま
たはその塩。