JPH0459587B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0459587B2 JPH0459587B2 JP62224192A JP22419287A JPH0459587B2 JP H0459587 B2 JPH0459587 B2 JP H0459587B2 JP 62224192 A JP62224192 A JP 62224192A JP 22419287 A JP22419287 A JP 22419287A JP H0459587 B2 JPH0459587 B2 JP H0459587B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- particles
- reagent
- hpl
- curve
- polyacrolein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 76
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 69
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 21
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 19
- 239000000381 Placental Lactogen Substances 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 102000004576 Placental Lactogen Human genes 0.000 description 12
- 108010003044 Placental Lactogen Proteins 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 9
- HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N Acrolein Chemical compound C=CC=O HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 4
- 208000034699 Vitreous floaters Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 4
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PHVGLTMQBUFIQQ-UHFFFAOYSA-N Nortryptiline Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2C(=CCCNC)C2=CC=CC=C21 PHVGLTMQBUFIQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 haptens Substances 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229960000808 netilmicin Drugs 0.000 description 2
- ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N netilmycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@]([C@H](NC)[C@@H](O)CO1)(C)O)NCC)[C@H]1OC(CN)=CC[C@H]1N ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N 0.000 description 2
- 229960001158 nortriptyline Drugs 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- DRKCFEIKVASKQV-HWJHIZAWSA-N (2s,3s,4s,5r,6s)-4-amino-2-[2-[2-[2-[2-[[(2s,3s,4s,5r,6s)-4-amino-6-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,5s,6r)-3-amino-6-(aminomethyl)-5-hydroxyoxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]methylsulfanyl]ethoxy]ethyldisulfanyl]ethoxy]e Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CSCCOCCSSCCOCCSC[C@@H]3[C@H]([C@H](N)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]4[C@H]([C@H](O[C@@H]5[C@@H](C[C@H](O)[C@@H](CN)O5)N)[C@@H](N)C[C@H]4N)O)O3)O)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N DRKCFEIKVASKQV-HWJHIZAWSA-N 0.000 description 1
- FWEOQOXTVHGIFQ-UHFFFAOYSA-N 8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C=12C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 FWEOQOXTVHGIFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- HCYAFALTSJYZDH-UHFFFAOYSA-N Desimpramine Chemical compound C1CC2=CC=CC=C2N(CCCNC)C2=CC=CC=C21 HCYAFALTSJYZDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000012662 bulk polymerization Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 238000005112 continuous flow technique Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 229960003914 desipramine Drugs 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960002601 protriptyline Drugs 0.000 description 1
- BWPIARFWQZKAIA-UHFFFAOYSA-N protriptyline Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C(CCCNC)C2=CC=CC=C21 BWPIARFWQZKAIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
- G01N33/5434—Magnetic particles using magnetic particle immunoreagent carriers which constitute new materials per se
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
- G01N2446/20—Magnetic particle immunoreagent carriers the magnetic material being present in the particle core
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
- G01N2446/40—Magnetic particle immunoreagent carriers the magnetic material being dispersed in the monomer composition prior to polymerisation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
- G01N2446/80—Magnetic particle immunoreagent carriers characterised by the agent used to coat the magnetic particles, e.g. lipids
- G01N2446/86—Magnetic particle immunoreagent carriers characterised by the agent used to coat the magnetic particles, e.g. lipids the coating being pre-functionalised for attaching immunoreagents, e.g. aminodextran
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2446/00—Magnetic particle immunoreagent carriers
- G01N2446/80—Magnetic particle immunoreagent carriers characterised by the agent used to coat the magnetic particles, e.g. lipids
- G01N2446/90—Magnetic particle immunoreagent carriers characterised by the agent used to coat the magnetic particles, e.g. lipids characterised by small molecule linker used to couple immunoreagents to magnetic particles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polymerisation Methods In General (AREA)
- Graft Or Block Polymers (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は磁気的に引きつけることができる物質
特に粒状の磁気的に引きつけることができる分析
目的用の試薬を作るのに使うのに適した物質の製
法に関するものである。
特に粒状の磁気的に引きつけることができる分析
目的用の試薬を作るのに使うのに適した物質の製
法に関するものである。
例えば生物学的起原の液体中の抗原(および付
着体)、抗体(および他の結合たんぱく質)およ
び医薬のようなその他の物質を、標識を付けた試
薬を使つた競争的結合反応によつて検定すること
はよく知られている。この検定は錯体中に結合し
ているかまたは結合しないで溶液中に残つている
かいずれかの標識の量を測定することによつて行
われる。このような方法の1つの例はよく知られ
ている放射免疫検定技法であり、これでは放射性
の標識が使われる。酵素および発螢光団のような
他の標識を使う同様な技法が知られている。
着体)、抗体(および他の結合たんぱく質)およ
び医薬のようなその他の物質を、標識を付けた試
薬を使つた競争的結合反応によつて検定すること
はよく知られている。この検定は錯体中に結合し
ているかまたは結合しないで溶液中に残つている
かいずれかの標識の量を測定することによつて行
われる。このような方法の1つの例はよく知られ
ている放射免疫検定技法であり、これでは放射性
の標識が使われる。酵素および発螢光団のような
他の標識を使う同様な技法が知られている。
これらの方法では反応混合物の残りから生成す
る錯体を分離するか、または反応混合物の残りか
ら遊離の結合していない標識付きの反応体を分離
するかいずれかが、いずれかの部にある標識の量
を測定するために一般に必要である。この分離を
容易に実施できることはまれでありそしてこれが
このような検定における誤差源になる。
る錯体を分離するか、または反応混合物の残りか
ら遊離の結合していない標識付きの反応体を分離
するかいずれかが、いずれかの部にある標識の量
を測定するために一般に必要である。この分離を
容易に実施できることはまれでありそしてこれが
このような検定における誤差源になる。
この問題を避けるかあるいは少なくとも減らす
考えらか本発明者は、粒子の周辺表面にそれに共
有結合した試薬をもつ磁気的に引きつけることが
できる粒子を免疫検定に使うことを提案した。
(その詳細についてはベルギー特許第852327号を
参照されたい。)この粒子は(反応混合物の標識
付き成分と試薬との間の反応の生成物もいつしよ
に)反応混合物の残りからきれいにそして容易に
分離することができる。そして引続いてこの残り
の中または粒子上の標識が測定される。
考えらか本発明者は、粒子の周辺表面にそれに共
有結合した試薬をもつ磁気的に引きつけることが
できる粒子を免疫検定に使うことを提案した。
(その詳細についてはベルギー特許第852327号を
参照されたい。)この粒子は(反応混合物の標識
付き成分と試薬との間の反応の生成物もいつしよ
に)反応混合物の残りからきれいにそして容易に
分離することができる。そして引続いてこの残り
の中または粒子上の標識が測定される。
これまでに提議されているこの方法の限界また
は不利益な点は試薬をつけた磁気粒子の調製がし
ばしば時間と手数がかゝるという事実にある。こ
の粒子は通常セルロースである重合体基質中に埋
め込まれた磁気的に引きつけることができる物質
から成り、そして特殊な試薬をそれに結合するた
めには、セルロースは先ず活性化されそれから試
薬と反応されねばならないが、それには通常2官
能性の架橋基を使う。中間段階に活性化されたセ
ルロース粒子はどんな有用時間に対しても貯蔵す
ることはできない。その結果調製の2つの段階
(活性化とこれに続く反応)はその都度行わねば
ならないということである。
は不利益な点は試薬をつけた磁気粒子の調製がし
ばしば時間と手数がかゝるという事実にある。こ
の粒子は通常セルロースである重合体基質中に埋
め込まれた磁気的に引きつけることができる物質
から成り、そして特殊な試薬をそれに結合するた
めには、セルロースは先ず活性化されそれから試
薬と反応されねばならないが、それには通常2官
能性の架橋基を使う。中間段階に活性化されたセ
ルロース粒子はどんな有用時間に対しても貯蔵す
ることはできない。その結果調製の2つの段階
(活性化とこれに続く反応)はその都度行わねば
ならないということである。
本発明者によりこの問題を回避する方法が今や
発見された。特に本質的に1工程で、ある試薬を
結合できる貯蔵安定な反応性の磁気性物質が考え
出された。
発見された。特に本質的に1工程で、ある試薬を
結合できる貯蔵安定な反応性の磁気性物質が考え
出された。
すなわち本発明は、磁気的に吸引可能な固体を
その中に埋め込んでもつポリアクロレインマトリ
クスから成る粒子の表面に遊離のアミノ基または
スルフヒドリル基をもつ試薬が結合した免疫検定
用磁気吸引性粒状試薬を提供する。本発明のこの
粒状試薬の粒子は、(イ)磁気的に吸引可能な固体の
存在下にアクロレインを重合させて前記固体が均
一に埋め込まれたポリアクロレインマトリクスを
形成し、(ロ)該ポリアクロレインマトリクスを粉砕
して粒子状と成すことにより、貯蔵安定な反応性
の磁気吸引性粒子として得られたものである。こ
の粒子を適当な反応条件下で遊離のアミノ基また
はスルフヒドリル基をもつ試薬と接触させること
により、本質的に1工程で、粒子の表面に試薬が
直接に結合した本発明粒状試薬が得られる。アク
ロレインの重合は通常触媒と開始剤を使い何らの
溶媒もなしに行うことができ、すなわち塊状重合
である。
その中に埋め込んでもつポリアクロレインマトリ
クスから成る粒子の表面に遊離のアミノ基または
スルフヒドリル基をもつ試薬が結合した免疫検定
用磁気吸引性粒状試薬を提供する。本発明のこの
粒状試薬の粒子は、(イ)磁気的に吸引可能な固体の
存在下にアクロレインを重合させて前記固体が均
一に埋め込まれたポリアクロレインマトリクスを
形成し、(ロ)該ポリアクロレインマトリクスを粉砕
して粒子状と成すことにより、貯蔵安定な反応性
の磁気吸引性粒子として得られたものである。こ
の粒子を適当な反応条件下で遊離のアミノ基また
はスルフヒドリル基をもつ試薬と接触させること
により、本質的に1工程で、粒子の表面に試薬が
直接に結合した本発明粒状試薬が得られる。アク
ロレインの重合は通常触媒と開始剤を使い何らの
溶媒もなしに行うことができ、すなわち塊状重合
である。
N,N,N′,N′−テトラメチレンジアミンの
存在下にアクロレインの遊離基によつて重合体基
質を作ることは本発明の非常に好ましい特徴であ
る。アクロレインがこのように例えばFe3O4の存
在下に重合する場合には、均質な塊状重合体/
Fe3O4組成物が容易に生成される。この組成物は
次いで容易に粒子サイズに粉砕することができ
る。
存在下にアクロレインの遊離基によつて重合体基
質を作ることは本発明の非常に好ましい特徴であ
る。アクロレインがこのように例えばFe3O4の存
在下に重合する場合には、均質な塊状重合体/
Fe3O4組成物が容易に生成される。この組成物は
次いで容易に粒子サイズに粉砕することができ
る。
試薬は遊離のアミノ基またはスルフヒドリル基
を含むものが使われる。遊離アミノ基を含む試薬
にはたんはく質たとえば抗体および酵素そしてあ
る種の抗原、ハプテン、医薬および抗生物質があ
る。このような物質の例は甲状腺ホルモンT4お
よびT3(チロキシンおよびトリヨードチロニン)、
3環性抗抑制剤医薬(ノルトリプチリン
nortriptyline、デシプラミンdesipramineおよび
プロトリプチリンprotriptyline)、アミノ−グリ
コシド−抗生物質(ゲンタマイシンgentamicin、
シソマイシンsysomicin、ネチルマイシン
netilmicin、アミカシンamikacin、ネオマイシン
neomicin、ストレプトマイシンstreptmicin、カ
ナマイシンkanamycinおよびトブラマイシン
tobramycin)、抗体または他の結合たんぱく質の
単離または分析のための種種の親和力吸収剤およ
び共役ハプテンの分析のために使われる固相たと
えば抗体の調製における中間体がそれである。
を含むものが使われる。遊離アミノ基を含む試薬
にはたんはく質たとえば抗体および酵素そしてあ
る種の抗原、ハプテン、医薬および抗生物質があ
る。このような物質の例は甲状腺ホルモンT4お
よびT3(チロキシンおよびトリヨードチロニン)、
3環性抗抑制剤医薬(ノルトリプチリン
nortriptyline、デシプラミンdesipramineおよび
プロトリプチリンprotriptyline)、アミノ−グリ
コシド−抗生物質(ゲンタマイシンgentamicin、
シソマイシンsysomicin、ネチルマイシン
netilmicin、アミカシンamikacin、ネオマイシン
neomicin、ストレプトマイシンstreptmicin、カ
ナマイシンkanamycinおよびトブラマイシン
tobramycin)、抗体または他の結合たんぱく質の
単離または分析のための種種の親和力吸収剤およ
び共役ハプテンの分析のために使われる固相たと
えば抗体の調製における中間体がそれである。
試薬は本質的に1工程で本発明の粒子に結合す
ることができということは本発明の非常に有利な
特徴である。すなわち例えば試薬は適当なPHの媒
質中で簡単に粒子に接触させることができるので
ある。遊離アルデヒド基を含むポリアクロレイン
は遊離アミノ基に対して“自動反応性”であり、
従つて試薬は基質と反応し直接結合する。こうし
て作られた本発明の試薬粒子はいつでも使える。
本発明によれば架橋基を使う必要(先行技術にお
ける)が避けられそして結局より簡単で、より迅
速でそしてより効果的な方法であるから、それは
非常に有利な特徴である。
ることができということは本発明の非常に有利な
特徴である。すなわち例えば試薬は適当なPHの媒
質中で簡単に粒子に接触させることができるので
ある。遊離アルデヒド基を含むポリアクロレイン
は遊離アミノ基に対して“自動反応性”であり、
従つて試薬は基質と反応し直接結合する。こうし
て作られた本発明の試薬粒子はいつでも使える。
本発明によれば架橋基を使う必要(先行技術にお
ける)が避けられそして結局より簡単で、より迅
速でそしてより効果的な方法であるから、それは
非常に有利な特徴である。
本発明試薬粒子はどんな粒子サイズでもよい
が、しかし一般的にそれは1〜20μであることが
便利である。ことに連続流れ式技法に使用する場
合には、粒子の比重は流れる液体反応混合物中で
の粒子の余計な浮上や沈降を避けるように約1.4
〜3.2であるべきことが好ましい。
が、しかし一般的にそれは1〜20μであることが
便利である。ことに連続流れ式技法に使用する場
合には、粒子の比重は流れる液体反応混合物中で
の粒子の余計な浮上や沈降を避けるように約1.4
〜3.2であるべきことが好ましい。
本発明の粒子は(すなわち試薬をそれに結合す
る前)使用前のある期間貯蔵することができる。
当業者にはよくわかつているように、貯蔵中粒子
はそれが反応するかも知れない物質と接触しない
ように保つべきである。その代りとして磁気性の
粒子を含む自動反応性の重合体基質の固体塊状物
を貯蔵することができ、次いで粒子が要求される
場合にはこの塊状物の部分を試薬との反応のため
の粒子サイズにまで粉砕することができる。この
ようにして本発明の試薬粒子はその使用直前に簡
単に新鮮に調製することができる。
る前)使用前のある期間貯蔵することができる。
当業者にはよくわかつているように、貯蔵中粒子
はそれが反応するかも知れない物質と接触しない
ように保つべきである。その代りとして磁気性の
粒子を含む自動反応性の重合体基質の固体塊状物
を貯蔵することができ、次いで粒子が要求される
場合にはこの塊状物の部分を試薬との反応のため
の粒子サイズにまで粉砕することができる。この
ようにして本発明の試薬粒子はその使用直前に簡
単に新鮮に調製することができる。
本発明の試薬粒子は特に(もつぱらではない
が)液体の興味ある成分を分析するに有用であ
る。すなわちこれらの粒子は手動式または自動連
続流れ式の検定(その一般的な記載については米
国特許第2797149号を参照されたい)に使うこと
ができる。それらはまた例えば本発明者らのベル
ギー特許第852327号に記載されたように使うこと
もできる。
が)液体の興味ある成分を分析するに有用であ
る。すなわちこれらの粒子は手動式または自動連
続流れ式の検定(その一般的な記載については米
国特許第2797149号を参照されたい)に使うこと
ができる。それらはまた例えば本発明者らのベル
ギー特許第852327号に記載されたように使うこと
もできる。
このようにして本発明は生物学的液体試料中の
興味ある成分を分析する方法を含み、その方法は
試料を本発明の試薬粒子と接触させる工程とそし
て磁気的手段によつてこの粒子を分離する工程と
を含むものである。
興味ある成分を分析する方法を含み、その方法は
試料を本発明の試薬粒子と接触させる工程とそし
て磁気的手段によつてこの粒子を分離する工程と
を含むものである。
本発明は、さらにまた興味ある成分を含む液体
試料を含有する液相と本発明の試薬粒子を含む固
相とから成る反応混合物を導管に沿つて流すこ
と、この反応混合物中に反応が起り、反応混合物
の1つの成分が前記固相と反応しすなわち選択的
にそれに吸収され、導管中で粒子を流れに抗して
支えるように磁気的に取押え、したがつて流れる
液相から固相を分離しそして液相は下流へ流し、
分離された固相あるいは液相の分析によつて試料
中の興味ある成分を定量することから成る方法を
も含むものである。
試料を含有する液相と本発明の試薬粒子を含む固
相とから成る反応混合物を導管に沿つて流すこ
と、この反応混合物中に反応が起り、反応混合物
の1つの成分が前記固相と反応しすなわち選択的
にそれに吸収され、導管中で粒子を流れに抗して
支えるように磁気的に取押え、したがつて流れる
液相から固相を分離しそして液相は下流へ流し、
分離された固相あるいは液相の分析によつて試料
中の興味ある成分を定量することから成る方法を
も含むものである。
この方法を実施するための分析装置の1つの好
ましい形は本発明者らのベルギー特許第852327号
に記載さている。
ましい形は本発明者らのベルギー特許第852327号
に記載さている。
免疫検定のような生物学的検定において試薬粒
子が作用する精密な方法は、当業者には明白なよ
うに試薬の性質によつて変る。例えば標識を付け
た抗原および抗体または他の結合たんぱく質を使
つての抗原の免疫検定においては抗体は試薬粒子
上に試薬を構成することができる。標識付きおよ
び標識の付かない両方の抗原との試薬錯体はこの
ような情況下そして反応混合物から除去の際に標
識に対して検定することができる(あるいは残つ
ている反応混合物から標識に対して検定すること
ができる)。
子が作用する精密な方法は、当業者には明白なよ
うに試薬の性質によつて変る。例えば標識を付け
た抗原および抗体または他の結合たんぱく質を使
つての抗原の免疫検定においては抗体は試薬粒子
上に試薬を構成することができる。標識付きおよ
び標識の付かない両方の抗原との試薬錯体はこの
ような情況下そして反応混合物から除去の際に標
識に対して検定することができる(あるいは残つ
ている反応混合物から標識に対して検定すること
ができる)。
本発明の好ましい1つの方法では、反応混合物
は第2の試薬としてその成分と錯体を形成する興
味ある成分と反応する標識を付けた物質のあらか
じめ定めた量から成り、そしてこの場合本発明の
試薬粒子上の試薬は前記の第2の試薬の過剰と結
合し、そしてまた分離された合媒物は試薬の興味
ある成分を定量するように分析される。この方法
では適当なものとして錯体かまたは過剰の未反応
の第2の試薬のいずれかに対して分析が行われ
る。これらの実施例はただ説明によつてのみ示さ
れたものであつて、多くの様々の検定方法におけ
る本発明の試薬粒子の多能性は当業者に明らかに
なるであろう。
は第2の試薬としてその成分と錯体を形成する興
味ある成分と反応する標識を付けた物質のあらか
じめ定めた量から成り、そしてこの場合本発明の
試薬粒子上の試薬は前記の第2の試薬の過剰と結
合し、そしてまた分離された合媒物は試薬の興味
ある成分を定量するように分析される。この方法
では適当なものとして錯体かまたは過剰の未反応
の第2の試薬のいずれかに対して分析が行われ
る。これらの実施例はただ説明によつてのみ示さ
れたものであつて、多くの様々の検定方法におけ
る本発明の試薬粒子の多能性は当業者に明らかに
なるであろう。
本発明をより充分に理解できるように次の実施
例をただ説明によつて示す。
例をただ説明によつて示す。
例 1
ポリアクロレインから成る本発明の粒子の調製
アクロレイン(2g)と磁性化できる酸化鉄
Fe3O4(2g)とを室温で激しく混合した。N,
N,N′,N′−テトラメチレンジアミン(100μ)
を加えそして約6〜7分間かきまぜを続けた。こ
の時間の後で重合が起り均質な固体物質を生じ
た。生成物をBraun電気コーヒ粉砕器中で細い顆
粒に砕いた。さらにMcCroneマイクロナイザー
中で30分間粉砕して適当な粒子サイズの安定な自
動反応性の生成物が得られた。
アクロレイン(2g)と磁性化できる酸化鉄
Fe3O4(2g)とを室温で激しく混合した。N,
N,N′,N′−テトラメチレンジアミン(100μ)
を加えそして約6〜7分間かきまぜを続けた。こ
の時間の後で重合が起り均質な固体物質を生じ
た。生成物をBraun電気コーヒ粉砕器中で細い顆
粒に砕いた。さらにMcCroneマイクロナイザー
中で30分間粉砕して適当な粒子サイズの安定な自
動反応性の生成物が得られた。
例 2
抗−T4血清(γ−グロプリン留分)の本発明
の粒子への結合 例1に記載のポリアクロレイン/Fe3O4粒子
(1g)を水(20ml)で4回洗い、次に炭酸ナト
リウム/炭酸水素ナトリウム0.1Mの緩衝液(PH
9.0)で2回洗う。緩衝液中に粒子を加えた懸濁
液を14mlの体積とする。抗−T4血清(γ−グロ
プリン留分1ml)を粒子懸濁液を加え、そして4
℃で24時間おだやかに混合することによつて結合
を行つた。次に粒子は多極フエライト磁石上に沈
降しそして表面浮遊物は除かれた。このようにし
て生成された試薬粒子を炭酸水素塩/炭酸塩の緩
衝液で3回そして0.05Mりん三塩緩衝液(PH7.4)
で2回洗い、最後に懸濁液の体積をりん酸塩緩衝
液で20mlに仕上げた。
の粒子への結合 例1に記載のポリアクロレイン/Fe3O4粒子
(1g)を水(20ml)で4回洗い、次に炭酸ナト
リウム/炭酸水素ナトリウム0.1Mの緩衝液(PH
9.0)で2回洗う。緩衝液中に粒子を加えた懸濁
液を14mlの体積とする。抗−T4血清(γ−グロ
プリン留分1ml)を粒子懸濁液を加え、そして4
℃で24時間おだやかに混合することによつて結合
を行つた。次に粒子は多極フエライト磁石上に沈
降しそして表面浮遊物は除かれた。このようにし
て生成された試薬粒子を炭酸水素塩/炭酸塩の緩
衝液で3回そして0.05Mりん三塩緩衝液(PH7.4)
で2回洗い、最後に懸濁液の体積をりん酸塩緩衝
液で20mlに仕上げた。
例 3
抗−ジゴキシン(anti−Digoxin)血清(γ−
グロブリン留分)の本発明の粒子への結合 抗−T4血清の代りに抗−ジゴキシン血清(γ
−グロブリン留分)1mlを使う以外は例3におけ
るト同じ方法が続けられた。
グロブリン留分)の本発明の粒子への結合 抗−T4血清の代りに抗−ジゴキシン血清(γ
−グロブリン留分)1mlを使う以外は例3におけ
るト同じ方法が続けられた。
例 4
抗−人の胎盤ラクトゲン血清(γ−グロブリン
留分)の本発明の粒子への結合 抗−T4血清の代りに抗−人の胎盤ラクトゲン
血清(γ−グログリン留分)1mlを使う以外は例
2におけると同じ方法が続けられた。
留分)の本発明の粒子への結合 抗−T4血清の代りに抗−人の胎盤ラクトゲン
血清(γ−グログリン留分)1mlを使う以外は例
2におけると同じ方法が続けられた。
例 5
抗−T4ポリアクロイレン/Fe3O4試薬粒子を使
つてのT4の手動式放射免疫検定 抗対希釈曲線:すべての検定用の検定希釈剤は
0.05Mりん三塩緩衝液(PH7.4)であつた。試
薬粒子の懸濁液から1連の倍増式希釈物が作ら
れた。懸濁液100ml当り5、2.5、1.25、0.625、
0.312、0.156gの基質を含むもである。T4−
125Iトレーサー溶液を50μで500cpsを与える
ように作つた。8−アニリノ−1−ナフタリン
スルホン酸を血清試料ml当り8μgの割合でト
レーサ溶液に加えた。試薬を次の順序と量で混
合することによつて希釈曲線が作られた。
つてのT4の手動式放射免疫検定 抗対希釈曲線:すべての検定用の検定希釈剤は
0.05Mりん三塩緩衝液(PH7.4)であつた。試
薬粒子の懸濁液から1連の倍増式希釈物が作ら
れた。懸濁液100ml当り5、2.5、1.25、0.625、
0.312、0.156gの基質を含むもである。T4−
125Iトレーサー溶液を50μで500cpsを与える
ように作つた。8−アニリノ−1−ナフタリン
スルホン酸を血清試料ml当り8μgの割合でト
レーサ溶液に加えた。試薬を次の順序と量で混
合することによつて希釈曲線が作られた。
最高結合曲線:
() T4を含まない血清 50μ
() T4−125Iトレーサー溶液(検定希釈剤中)
50μ () 抗−T4試薬粒子懸濁液(例2)(上に概略
記した希釈で) 50μ 頂点標準結合曲線: () T4を含まない血清(400nmL-1)中の頂点
標準 50μ () T4−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−T4試薬粒子懸濁液(例3) 50μ 非特異結合曲線: () T4を含まない血清中の20倍頂点標準濃度
(8μmL-1) 50μ () T4−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−T4試薬粒子懸濁液(例2) 50μ 試験管を1夜室温に保温した。固相の粒子はフ
エライト磁石の上につ沈降しそして表面浮上物は
棄てた。粒子を検定希釈剤で3回洗いそして最後
にWilj上で計数した。その結果を第1図に示す。
50μ () 抗−T4試薬粒子懸濁液(例2)(上に概略
記した希釈で) 50μ 頂点標準結合曲線: () T4を含まない血清(400nmL-1)中の頂点
標準 50μ () T4−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−T4試薬粒子懸濁液(例3) 50μ 非特異結合曲線: () T4を含まない血清中の20倍頂点標準濃度
(8μmL-1) 50μ () T4−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−T4試薬粒子懸濁液(例2) 50μ 試験管を1夜室温に保温した。固相の粒子はフ
エライト磁石の上につ沈降しそして表面浮上物は
棄てた。粒子を検定希釈剤で3回洗いそして最後
にWilj上で計数した。その結果を第1図に示す。
第1図ないし第3図において、縦軸『%B』は
結合計数%すなわち結合された物質についての計
数と合計数との割合を%で表わしたものであり、
そして横軸『mgSP』は固体相重量(mg)を表わ
す。
結合計数%すなわち結合された物質についての計
数と合計数との割合を%で表わしたものであり、
そして横軸『mgSP』は固体相重量(mg)を表わ
す。
例 6
抗ジゴキシポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子
を使つてのジゴキシンの手動式放射免疫検定 抗体希釈曲線:1連の倍増式希釈物が試薬粒子の
懸濁液から作られた。懸濁液100ml当り5、
2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078gを粒
子を含むものである。ジゴキシン−125Iトレー
サー溶液は50μに500cpsを与えるように作ら
れた。次の順序の量で試薬を混合することによ
つて希釈曲線が作られた。
を使つてのジゴキシンの手動式放射免疫検定 抗体希釈曲線:1連の倍増式希釈物が試薬粒子の
懸濁液から作られた。懸濁液100ml当り5、
2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078gを粒
子を含むものである。ジゴキシン−125Iトレー
サー溶液は50μに500cpsを与えるように作ら
れた。次の順序の量で試薬を混合することによ
つて希釈曲線が作られた。
最高結合曲線:
() 血漿 200μ
() ジゴキシン−125Iトレーサー溶液 50μ
() 抗−ジゴキシン試薬粒子懸濁液(例3)
50μ 頂点標準結合曲線: () 血漿の頂点標準8nモルL-1 200μ () ジゴキシン−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−ジゴキシン試薬粒子懸濁液(例3)
50μ 非特異結合曲線: () 血漿中の20倍頂点標準濃度(160nmL-1)
200μ () ジゴキシン−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−ジゴキシン試薬粒子懸濁液(例3)
50μ 試験管を1夜室温に保温した。固相の粒子はフ
エライト磁石上に沈降しそして表面浮上物は排棄
した。粒子は検定希釈剤で3回洗いそして最後に
Wilj上で計数した。その結果を第2図に示す。
50μ 頂点標準結合曲線: () 血漿の頂点標準8nモルL-1 200μ () ジゴキシン−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−ジゴキシン試薬粒子懸濁液(例3)
50μ 非特異結合曲線: () 血漿中の20倍頂点標準濃度(160nmL-1)
200μ () ジゴキシン−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−ジゴキシン試薬粒子懸濁液(例3)
50μ 試験管を1夜室温に保温した。固相の粒子はフ
エライト磁石上に沈降しそして表面浮上物は排棄
した。粒子は検定希釈剤で3回洗いそして最後に
Wilj上で計数した。その結果を第2図に示す。
例 7
抗−人の胎盤ラクトゲン(Anti−HPL)ポリ
アクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つてのHPL
の手動式放射免疫検定 抵抗希釈曲線:試薬粒子の懸濁溶液から1連の倍
増式希釈物が作られた。懸濁液100ml当り5、
2.5、1.25、0.625、0.313g粒子を含むものであ
る。HPL−125Iトレーサー溶液は50μ中
500cpsなるように作られた。希釈曲線は次の量
の順序で試薬を混合することによつて作成され
た。
アクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つてのHPL
の手動式放射免疫検定 抵抗希釈曲線:試薬粒子の懸濁溶液から1連の倍
増式希釈物が作られた。懸濁液100ml当り5、
2.5、1.25、0.625、0.313g粒子を含むものであ
る。HPL−125Iトレーサー溶液は50μ中
500cpsなるように作られた。希釈曲線は次の量
の順序で試薬を混合することによつて作成され
た。
最高結合曲線:
() 男性人間の血清 50μ
() HPL−125Iトレーサー溶液 50μ
() (前記に概述した希釈で)抗−HPL試薬粒
子懸濁液 50μ 頂点標準結合曲線: () 頂点標準(12μg ml-1) 50μ () HPL−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−HPL試薬粒子懸濁液 50μ 非特異結合曲線: () 20倍頂点標準濃度(240μg ml-1) 50μ () HPL−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−HPL試薬粒子懸濁液 50μ 試験管は室温に1夜保温した。固相の粒子はフ
エライト磁石上に沈降しそして表面浮上物は排棄
した。粒子は検定希釈剤で3回洗浄しそして最後
にWilj上で計数された。その結果は第3図に示さ
れる。第1〜3図に示される抗体希釈曲線はT4、
HPLおよびジゴキシンに対する抗血清はそれが
ポリアクロレインに共有結合したときにその免疫
反応性を持続していることを示している。
子懸濁液 50μ 頂点標準結合曲線: () 頂点標準(12μg ml-1) 50μ () HPL−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−HPL試薬粒子懸濁液 50μ 非特異結合曲線: () 20倍頂点標準濃度(240μg ml-1) 50μ () HPL−125Iトレーサー溶液 50μ () 抗−HPL試薬粒子懸濁液 50μ 試験管は室温に1夜保温した。固相の粒子はフ
エライト磁石上に沈降しそして表面浮上物は排棄
した。粒子は検定希釈剤で3回洗浄しそして最後
にWilj上で計数された。その結果は第3図に示さ
れる。第1〜3図に示される抗体希釈曲線はT4、
HPLおよびジゴキシンに対する抗血清はそれが
ポリアクロレインに共有結合したときにその免疫
反応性を持続していることを示している。
例 8
抗−HPLポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を
使つたHPLの自動放射免疫検定 例7で特性づけられた試薬を(ベルギー特許第
852327号に記載の)自動連続流れ式装置中で使つ
た。この装置は流れくる個々の検定混合物を10分
間オンラインで保温することを利用し、それに引
続いて混合物から試薬粒子を磁気で分離すること
を行う。この分離された粒子は今や抗体に結合し
たHPLの留分をもつており、それが次にガンマ
カウンターを通つて流されてそして計数が記録さ
れる。これらのデータは標準曲線を引くのに使わ
れ、この曲線からテスト試料中のHPLの未知濃
度が内挿法で見出される。
使つたHPLの自動放射免疫検定 例7で特性づけられた試薬を(ベルギー特許第
852327号に記載の)自動連続流れ式装置中で使つ
た。この装置は流れくる個々の検定混合物を10分
間オンラインで保温することを利用し、それに引
続いて混合物から試薬粒子を磁気で分離すること
を行う。この分離された粒子は今や抗体に結合し
たHPLの留分をもつており、それが次にガンマ
カウンターを通つて流されてそして計数が記録さ
れる。これらのデータは標準曲線を引くのに使わ
れ、この曲線からテスト試料中のHPLの未知濃
度が内挿法で見出される。
希釈剤緩衝液
0.05Mりん酸塩緩衝液でPH7.4であり、0.25%
Tween20、0.1%アジ化ナトリウムおよび0.25%
牛の血清アルブミンを含有する。
Tween20、0.1%アジ化ナトリウムおよび0.25%
牛の血清アルブミンを含有する。
HPL標準(50μ)
正常な男性の血清を純HPLを混合して濃度0、
1、2、4、6、8、10、12μg/mlを与えるよ
うにした。
1、2、4、6、8、10、12μg/mlを与えるよ
うにした。
HPL125Iトレーサー(50μ)
調製された貯蔵トレーサーを緩衝剤中で希釈し
て50μ当り1700cpsの全計数を与えるようにし
た。
て50μ当り1700cpsの全計数を与えるようにし
た。
抗−HPLポリアクロレイン/Fe3O4
粒子懸濁液(50μ)
これは50μ当り0.625mg希釈剤緩衝液の濃度で
使われた。標準物の濃度の対数に対するCi/Co
%として計数をプロツトすることによつて得られ
る標準曲線が第4図に示されている。通常の方法
でこの標準曲線から未知濃度の試料が読み取れ
る。
使われた。標準物の濃度の対数に対するCi/Co
%として計数をプロツトすることによつて得られ
る標準曲線が第4図に示されている。通常の方法
でこの標準曲線から未知濃度の試料が読み取れ
る。
ここで『Co』は得られるべき計数の最高数
(すなわち結合が全く起らない場合の計数)であ
り、そしてCiは標準iを使つたときの計数値であ
る。
(すなわち結合が全く起らない場合の計数)であ
り、そしてCiは標準iを使つたときの計数値であ
る。
第1図は前記実施例中の例5に記載された抗−
T4ポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つた
T4の手動式放射免疫検定の結果を示す曲線図で
ある。曲線は最高結合曲線、は頂点標準結合
曲線そしては不特定結合曲線をそれぞれ表わ
す。第2図は同じく例6に記載された抗−ジゴキ
シンポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つた
ジゴキシンの手動式放射免疫検定の結果を示す曲
線図である。曲線は最高結合曲線、は頂点標
準結合曲線そしては不特定結合曲線をそれぞれ
表わす。第3図は同じく例7に記載された抗−
HPLポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つた
HPLの手動式放射免疫検定の結果を示す曲線図
である。曲線は最高結合曲線、は頂点標準結
合曲線そしては不特定結合曲線をそれぞれ表わ
す。第4図は例8に記載された抗−HPLポリア
クロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つて自動連続流
れ式装置における人間胎盤ラクトゲン(HPL)
の検定に対する標準曲線を示したものである。
T4ポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つた
T4の手動式放射免疫検定の結果を示す曲線図で
ある。曲線は最高結合曲線、は頂点標準結合
曲線そしては不特定結合曲線をそれぞれ表わ
す。第2図は同じく例6に記載された抗−ジゴキ
シンポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つた
ジゴキシンの手動式放射免疫検定の結果を示す曲
線図である。曲線は最高結合曲線、は頂点標
準結合曲線そしては不特定結合曲線をそれぞれ
表わす。第3図は同じく例7に記載された抗−
HPLポリアクロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つた
HPLの手動式放射免疫検定の結果を示す曲線図
である。曲線は最高結合曲線、は頂点標準結
合曲線そしては不特定結合曲線をそれぞれ表わ
す。第4図は例8に記載された抗−HPLポリア
クロレイン/Fe3O4試薬粒子を使つて自動連続流
れ式装置における人間胎盤ラクトゲン(HPL)
の検定に対する標準曲線を示したものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 磁気的に吸引可能な固体をその中に埋め込ん
でもつポリアクロレインマトリクスから成る粒子
の表面に遊離のアミノ基またはスルフヒドリル基
をもつ試薬が結合した免疫検定用磁気吸引性粒状
試薬。 2 1〜20ミクロンのサイズと1.4〜3.2の比重を
もつ前項1に記載の粒状試薬。 3 粒子の表面に試薬としてたんぱく質、抗原、
ハプテンまたは酵素が結合した前項1に記載の粒
状試薬。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB5671/78 | 1978-02-13 | ||
GB567178 | 1978-02-13 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63183909A JPS63183909A (ja) | 1988-07-29 |
JPH0459587B2 true JPH0459587B2 (ja) | 1992-09-22 |
Family
ID=9800467
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1439579A Granted JPS54145211A (en) | 1978-02-13 | 1979-02-13 | Granular reagent used in immunoassay |
JP62224192A Granted JPS63183909A (ja) | 1978-02-13 | 1987-09-09 | 分析試薬製造用磁気吸引性物質の製法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1439579A Granted JPS54145211A (en) | 1978-02-13 | 1979-02-13 | Granular reagent used in immunoassay |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JPS54145211A (ja) |
AU (1) | AU527144B2 (ja) |
BE (1) | BE874091A (ja) |
CA (1) | CA1136400A (ja) |
CH (1) | CH658728A5 (ja) |
DE (1) | DE2905154A1 (ja) |
FR (1) | FR2417106A1 (ja) |
IT (1) | IT1119273B (ja) |
NL (1) | NL7901025A (ja) |
SE (1) | SE7901166L (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3582649D1 (de) * | 1984-11-01 | 1991-05-29 | Technicon Instr | Magnetisch empfindlicher reagenstraeger und verfahren zur herstellung. |
JPH073425B2 (ja) * | 1985-01-19 | 1995-01-18 | 東ソー株式会社 | 免疫反応用担体の製造方法 |
JPH07113640B2 (ja) * | 1986-07-07 | 1995-12-06 | 東ソー株式会社 | 蛋白質固定化用担体およびその製法 |
JP2672151B2 (ja) * | 1989-07-14 | 1997-11-05 | 三井東圧化学株式会社 | 磁性体を利用した酵素免疫測定法 |
JPH03109648U (ja) * | 1990-02-27 | 1991-11-11 | ||
DE10235302A1 (de) * | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Henkel Kgaa | Verfahren zur Herstellung perl- bzw. kugelförmiger magnetischer Partikel auf Acrylsäuresbasis zur Aufreinigung biologischer Substanzen |
JP4812105B2 (ja) * | 2006-11-10 | 2011-11-09 | ピジョン株式会社 | 食事用エプロン |
AU2008278272A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-22 | Chemeq Ltd | Biocidal polyacrolein composition |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS4978733A (ja) * | 1972-12-04 | 1974-07-30 | ||
JPS5282723A (en) * | 1975-12-02 | 1977-07-11 | Pasteur Institut | Production of magnetic gell for preparing immune enzyme |
JPS52141697A (en) * | 1976-03-12 | 1977-11-26 | Technicon Instr | Method of and apparatus for analyzing fluid and granular reagent |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3296234A (en) * | 1964-06-23 | 1967-01-03 | Grace W R & Co | Aqueous process for polymerizing acrylonitrile in the presence of silver nitrate and a hydrocarbon liquid |
FR2313394A1 (fr) * | 1975-06-06 | 1976-12-31 | Nestle Sa | Procede de preparation d'un produit doue d'activite enzymatique |
-
1979
- 1979-02-09 AU AU44115/79A patent/AU527144B2/en not_active Ceased
- 1979-02-09 NL NL7901025A patent/NL7901025A/xx not_active Application Discontinuation
- 1979-02-10 DE DE19792905154 patent/DE2905154A1/de active Granted
- 1979-02-12 CA CA000321254A patent/CA1136400A/en not_active Expired
- 1979-02-12 BE BE0/193397A patent/BE874091A/xx not_active IP Right Cessation
- 1979-02-12 IT IT67300/79A patent/IT1119273B/it active
- 1979-02-12 FR FR7903485A patent/FR2417106A1/fr active Granted
- 1979-02-13 CH CH1367/79A patent/CH658728A5/de not_active IP Right Cessation
- 1979-02-13 JP JP1439579A patent/JPS54145211A/ja active Granted
- 1979-05-07 SE SE7901166A patent/SE7901166L/ not_active Application Discontinuation
-
1987
- 1987-09-09 JP JP62224192A patent/JPS63183909A/ja active Granted
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS4978733A (ja) * | 1972-12-04 | 1974-07-30 | ||
JPS5282723A (en) * | 1975-12-02 | 1977-07-11 | Pasteur Institut | Production of magnetic gell for preparing immune enzyme |
JPS52141697A (en) * | 1976-03-12 | 1977-11-26 | Technicon Instr | Method of and apparatus for analyzing fluid and granular reagent |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS6342229B2 (ja) | 1988-08-22 |
IT7967300A0 (it) | 1979-02-12 |
DE2905154C2 (ja) | 1989-09-14 |
JPS63183909A (ja) | 1988-07-29 |
NL7901025A (nl) | 1979-08-15 |
AU527144B2 (en) | 1983-02-17 |
CA1136400A (en) | 1982-11-30 |
BE874091A (fr) | 1979-08-13 |
DE2905154A1 (de) | 1979-08-30 |
CH658728A5 (en) | 1986-11-28 |
JPS54145211A (en) | 1979-11-13 |
AU4411579A (en) | 1979-10-25 |
FR2417106B1 (ja) | 1984-08-10 |
IT1119273B (it) | 1986-03-10 |
SE7901166L (sv) | 1979-08-14 |
FR2417106A1 (fr) | 1979-09-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1226215A (en) | Immunoassay of antigens | |
Quash et al. | The preparation of latex particles with covalently bound polyamines, IgG and measles agglutinins and their use in visual agglutination tests | |
US4397960A (en) | Immunoassays using F(AB')2 fragments | |
CA1039184A (en) | Solid phase radioimmunoassay of digoxin | |
EP0105714B1 (en) | Immunoassay of antigens | |
US4062935A (en) | Immunoassay involving the binding of RF to the antigen-antibody complex | |
AU596562B2 (en) | Polyclonal antibodies, preparation and use | |
JPH01503808A (ja) | 固定化された凝集剤を用いるアフイニテイ分離 | |
GB1571992A (en) | Process for binding organic compounds containing carbohydrate moieties to solid supports | |
JPH0445785B2 (ja) | ||
IE53059B1 (en) | A method and a kit for the assay of antibodies to soluble antigens | |
JPH09500446A (ja) | 液状放射性廃棄物からの放射性標識された生物学的分子の除去方法 | |
JPH0459587B2 (ja) | ||
JP3192149B2 (ja) | ゼラチンを有する磁性粒子及びそれを用いた免疫測定法 | |
JPS6217188B2 (ja) | ||
JPH01118770A (ja) | タンパクの測定方法 | |
JP4228095B2 (ja) | 免疫測定方法および免疫測定試薬 | |
US4034073A (en) | Composite for biased solid phase radioimmunoassay of triiodothyronine and thyroxine | |
JPH02107968A (ja) | 磁性粒子を用いた免疫学的測定方法 | |
JP3647587B2 (ja) | 免疫測定法 | |
JPS6020149A (ja) | 免疫化学的測定方法及びその試薬 | |
CH629894A5 (en) | Process for separating the free fractions from the bound fractions in an immunoassay procedure | |
JPH08327629A (ja) | 検体前処理方法 | |
JPH09502263A (ja) | ヒドラジン誘導体化細胞 | |
JP2836009B2 (ja) | 生化学用微粒子およびその製法ならびにそれを使用する免疫学的測定法 |