JPH04506512A - 特定のｔ細胞集団の病原性応答により生じる疾患に対するワクチン接種および方法 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 特定のＴ細胞集団の病原性応答により生じる疾患に対するワクチン接種および方 法 発明の背景 本発明は、免疫系に関する。より詳細には病的な免疫応答の改変方法に関する。

高等生物は、潜在的に有毒性の物質あるいは微生物の侵入に対して自分自身を防 御する免疫系によって特徴付られる。

抗原と呼ばれる物質が体に入り、そして外米物質であると認識されると、免疫系 は、抗体媒介性応答および細胞媒介性応答の両者を増大する。８９７８球あるい はＢ細胞と呼ばれる免疫系の細胞は、特異的に外来物質を認識して結合する抗体 を／４４する。１９７８球あるいはＴ細胞と呼ばれる他のリンパ球は、細胞媒介 性応答を行い、かつ調節して、ついには抗原を除去する。

種々のＴ細胞が細胞媒介性応答に含まれる。あるものは、特定のＢ細胞クローン を増殖させて抗原に特異的な抗体を生産させる。他のものは、その表面に外来の 抗原が存在することを認識して細胞を破壊する。Ｔ細胞のあるものは、他の細胞 を刺激するかあるいは弱めるかいずれかによって、その応答を調節する。

正常な免疫系が綿密に制御されているにも関わらず、免疫応答における異常は珍 しくはない。例えば、その免疫系が不適切に機能して、実際に外来物質であるか のように宿主の成分に反応する。このような応答は、宿主免疫系が宿主占身の組 織を攻撃する自己免疫疾患において生じる。免疫系の主要調節因子としてＴ細胞 は、直接にあるいは間接にこのような自己免疫異常に作用する。

多くの疾患は自己免疫機構に原因すると考えられている。

これらの疾患の主要なものは、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多 発性硬化症、糖尿病Ｉ型、重症筋無力症および尋常性天庖癒である。自己免疫疾 患の患者は世界中に数百万人いて、またこの病気に対する費用は、実際の治療お よびその支払い、さらに生産力の損失は、年に数十億ドルと算出されている。現 在、このような自己免疫異常に対する効果的な治療法は知られていない。通常、 症状のみが処置され得て、一方、病気は進行してしばしば重篤な衰弱あるいは死 に至る。

他の例としては、リンパ球は不適切にそして制御されずに複製される。このよう な複製の結果、リンパ腫として知られるガンの状態になる。この非調節リンパ球 がＴ細胞型である場合、その腫瘍はＴ細胞リンパ腫と呼ばれる。他の悪性の疾患 のように、Ｔ細胞リンパ腫を効果的に治療するのは困難である。

従って、Ｔ細胞媒介性の病変を治療あるいは改善する効果的な方法の必要性が長 く存在してきた。このような治療は、理想的には単に症状を減退させるのではな く、不適切なＴ細胞の応答を制御すべきである。本発明はこの必要性を満たし、 関連する利点をも提供する。

発明の要旨 本発明は、特定のＴ細胞媒介性の病変を予防あるいは制御するための、あるいは Ｔ細胞の調節されないクローンの′ＦＭ製を治療するためのワクチン、および哺 乳動物にワクチン接種する方法を提供する。このワクチンはＴ細胞レセプター（ ＴＣＲ）あるいはその断片を含有し、これらは、病変をおこすＴ細胞の表面に存 在するＴＣＲに対応する。ワクチン断片は、前記病変を媒介するＴ細胞に特徴的 な配列に対応するペプチドであり得る。

このようなワクチンの適切なアミノ酸配列を決定する方法もさらに提供されてい る。ワクチンは、病理を媒介するＴ細胞のＴＣＲに対して特異的な免疫応答を誘 導するような方法で哺乳動物に投与される。この免疫応答は、病原Ｔ細胞を減退 調節さすかあるいは取り除いて、病気の原因を除去する。

さらに、本発明は、Ｖβ１７七示されるＴ細胞レセプターの特異的なβ鎖可変領 域を提供する。これは慢性関節リウマチ（ＲＡ）の原因の中枢である。さらに、 ＲＡの検出、予防および治療の方法も提供されている。

本発明は、さらに多発性硬化症（ＭＳ）の治療に有用なＴ細胞レセプターの特異 的領域を提供する。さらに、ＭＳを検出、予防および治療するための方法も提供 する。

本発明の詳細な説明 本発明は、自己免疫疾患およびＴ細胞リンパ腫のようなＴ細胞媒介性の病変を予 防あるいは改善するためのワクチンおよびその使用に関する。ワクチン接種は、 他の可能な治療法に関わる問題を避ける特異的で持続性の治療を提供する。

ここに用いられている用語「Ｔ細胞媒介性の病変」とは、不適切なＴ細胞応答が 病気の原因である任意の症状のことである。この用語には、Ｔ細胞により直接媒 介される病気および重症筋無力症のような主に抗体結合による傷害に特徴づけら れる病気、さらに不適切なＴ細胞応答がこれらの抗体の生産をもたらす病気も含 まれることが意図される。この用語には、Ｔ細胞媒介性の自己免疫疾患および調 節されないＴ細胞クローンの複製の両者が含まれることを意図している。

ここに用いられている用語「実質的にその配列」とは、アミノ酸配列をさしてい る場合に、示されている配列、あるいは目的のＴ細胞レセプター配列に対して免 疫応答を引き出すような、配列の能力に実質的に作用しない任意の付加、欠損、 あるいは置換を伴う他の配列を意味する。従って、示されている免疫配列の部分 は、目的のＴ細胞レセプターに対しては効果的な免疫応答を示すが、目的として いないＴ細胞レセプターには示さないような、目的のＴ細胞レセプターに十分に 特徴的である限り使用し得る。配列のこのような変形は、例えば、代替配列の合 成によって、容易になされ得、そして、例えば、哺乳動物に免疫して試験され、 その効能か決定される。

ここに用いられている用語「断片」とは、例えば、ペプチドが他のアミノ酸配列 あるいはキャリアーに結合しているように、他の配列または部分に結合あるいは 組み込まれている断片を意味することを意図している。従って、用語「断片」お よび「ペプチド」は、ペプチドがＴ細胞レセプターの最も一般的な断片である場 合に相互変換的に用いられ得る。本発明の各々の断片は、用語「実質的にその配 列」に対して上記に述べたように、変換配列を有し得る。

本明細書の「Ｔ細胞レセプターの断片あるいはその一部」とは、この構成成分は 、完全なＴ細胞レセプター由来でなければならないことを意味しているのではな い。このような「断片あるいは部分」は、実験の手引、ペプチド自動合成機ある いはクローニング法などの当業者には公知の様々な方法によって生産され得る。

本発明のペプチド断片とＴＣＲの配列との関係を称するには、ここで用いられて いる「対応する」は、そのペプチド断片が、患者において効果的な調節応答を刺 激するために、そのＴＣＲ配列に十分に相同なアミノ酸配列を有することを意味 する。しかし、その配列は実施例■および■に示されているようにＴＣＲ配列に 一致する必要はない。

「免疫学的に効果的な」によって意味されるＴ細胞レセプターあるいはその断片 の量は、患者におけるＴＩ［ＥＩ胞媒介性の病変あるいは非調節のＴ細胞クロー ン複製を予防あるいは治療のための免疫応答を引き起こす効果がある。明らかに 、このような量は、種および個々の患者の間で、多くの因子に依存して変化する 。例えば、マウスに比較してヒトζこお０て１よ効果的な免疫応答のために高い 投与量が要求される。

ここで用いられている「Ｖβ１７」とは、Ｔ細胞レセツプター（ＴＣＲ）の特異 的なβ鎖可変領域を指して（Ｘる。■β１７は、アミノ酸配列ＭＳＮＱＶＬＣＣ ｖＶＬＣＦＬＧＡＮＴＶＤＧＧＩＴＱＳＰＫＹＬＦＲＫＥＧＱＮ　ＶＴＬＳ　Ｃ ＥＱＮＬＮ）ＩＤＡＭＹｌｒＹＲＱＤＰＧＱＧＬＲＬ　Ｉ　ＹＹＳ　Ｑ　Ｉ　Ｖ Ｎ　ＤＦＱＫＧＤ　Ｉ　Ａ　ＥＧ　ＹＳ　u　５ＲＥＫ　Ｋ ＥＳＦＰＬＴＶＴＳＡＱＫＮＰＴＡＦＹＬＣＡＳＳを有する。超可変額域および Ｉａ合領領域ワクチンに最も有用である。■β１７の超可変額域の特に有用なも のは、ＣＤＲ２領域であって、アミノ酸配列ＳＱＩ’／ＮＤＦＱＫを有する。目 的の免疫応答を刺激するための免疫原として作用するレセプターの能力には影響 しな（Ｘｌ　配列の改変もまたこの定義に含まれる。可変領域は、ＴＣＲのＤお よびＪセグメントに結合され得る。さらに、Ｖβ１７の免疫原性を示す断片もま たこのＶβ１７の定義に含まれる。

ここで用いられている「結合／ｆ−）ナー」と１よ、ＴＣＲと反応する化合物を 意味する。一般に、この化合物（よ、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）であって、Ｔ ＣＲが通常の経路で結合される限り任意の化合物であり得て、Ｔ細胞の活性イヒ あるし）は増殖が生じる。

ここで用いられている「リガンド」は、反応して他の分子と複合体を形成する任 意の分子を意味する。

ここで用いられている「選択的に結合する」と（よ、分子力（一つの型の分子に 結合し、実質的には他の型の分子（こ（１吉合しないことを意味する。Ｖβ１７ に関しての「選択的な結合」とは、Ｖβ１７を有するＴＣＲに結合することであ って、■β１７を欠く他のＴＣＲには結合しないことに相当する。

免疫系とは、潜在的に致命的な因子（非自己）に対しての宿主（自己）の主要な 生物学的な防衛のことである。このような致命的な因子は、細菌あるいはウィル スなどの病原体、ならびに宿主のウィルス感染細胞、腫瘍細胞あるいは異常細胞 を含む改変された自己細胞であり得る。要するに、免疫系のこれらの標的物を抗 原と呼ぶ。免疫系による抗原の認識は、速やかに免疫機構を作動して抗原を破壊 して宿主の環境の清浄を保護する。

抗原特異性の免疫応答の基本的な症状発現は、体液性免疫（抗体媒介性の）およ び細胞性免疫（細胞媒介性の）である。

これらの各々の免疫学的な機構はヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞の活性化を介して 開始される。これらのＣＤ４＋　Ｔ細胞は、次に、抗原の結合によって抗体を合 成するように準備されたＢ細胞を刺激して増殖および抗体の分泌を行わせる。こ の分泌された抗体は抗原に結合して他の免疫機構によってその破壊を促進する。

同様に、ＣＤ４＋　Ｔ細胞は、細胞標的物（例えば、宿主のウィルス感染細胞） を認識して破壊する細胞障害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞に刺激シグナルを提供する。

それ故に、ＣＤ４＋　Ｔ細胞の活性化は免疫応答の刺激における基本的な事柄で ある。従って、ＣＤ４＋　Ｔ細胞の抗原特異的活性化の基礎となる機構を組み立 てることは、免疫学上の機能を選択的に改変するあらゆる試みにおいて重要であ る。

Ｔ細胞は、その細胞表面上に発現されるＴ細胞レセプター（Ｔ　ＣＲ）に抗原特 異性を負う。このＴＣＲは、各々の分子量が約４５ｋＤの２個のポリペプチド鎖 からなるヘテロニ量体の糖タンパク質である。ＴＣＲのこの２個の形態は、１１ されている。１個はα鎖とβ鎖とからなり、もう一方はγ鎖とδ鎖とからなる。

これらの４個のＴＣＲポリペプチド鎖の各々は、多くの不連続の遺伝子セグメン トを有する別個の遺伝子座位によってフードされる。これらには、可変（Ｖ）領 域遺伝子セグメント、結合（Ｊ）領域遺伝子セグメントおよび定常（Ｃ）領域が 含まれている。βおよびδ鎖は多様性（Ｄ）遺伝子セグメントと呼ばれる他のエ レメントを含んでいる。（Ｄセグメントおよびエレメントは、ＴＣＲの遺伝子座 位およびポリペプチドの内のあるもののみに見いだされるので、以後、Ｄセグメ ントおよびエレメントを示す参照符号には、適切なＴＣＨ鎖にのみこれらの領域 が含まれることを示すために括弧が付される。それ故に、Ｖ　（Ｄ）Ｊは、Ｄ領 域を有する鎖のＶＤＪ配列、あるいはＤ領域を欠く鎖のＶＪ配列を指す。） リンパ球の成熟の間に、単一のＶ、（Ｄ）およびＪ遺伝子セグメントは細胞によ って発現されるＴＣＲのアミノ酸配列を決定する機能性の遺伝子を形成するため に再配列される。

再配列され得るＶ、　（Ｄ）およびＪ遺伝子のプールは多メンバー性であって、 これらの個々のメンバーは実質的にはあらゆる組合せで再配列され得るので、全 ＴＣＲの種類は非常に範囲が広く、生物に存在し得る美大な量の一連の結合パー トナ−を、特異的に認識して結合し得る。しかし、特定のＴ細胞は１個のみのＴ ＣＲ分子を有しているであろうし、そのＴＣＲ分子は、結合パートナ−に対する Ｔ細胞の特異性を単一でなければ広範囲に決定する。

動物モデルは、自己免疫疾患の免疫学的機構に対する我々の理解に有意に寄与し てきた。このような動物モデルの１つである実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡ Ｅ）は、ミニリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で免疫することによってマウスお よびラットに誘導し得る中枢神経系の自己免疫疾患である。

この疾患は、臨床的には麻痺および穏やかな体重の減少、そして組織学的には中 枢神経系実質の脈管周囲の単核球浸潤物によって特徴付られる。この疾患の発病 は、ＭＢＰに対する特異性を有するＴ細胞に媒介される。ＭＢＰ特異性のＴ細胞 の多くのクローンは、ＥＡＥ感染の動物から単離されて、連続培養によって増殖 された。ＭＢＰによるインビトロでの刺激の後、これらのＴ細胞クローンは、健 康な宿主に移入される場合には速やかにＥＡＥを誘導する。重要なことは、これ らのＥＡＥ誘導Ｔ細胞は、同じ抗原（ＭＢＰ）のみに特異的であるのではなく、 通常その抗原の１個のエピトープにも特異的である。これらの観察は、自己攻撃 性の個別のＴ細胞の集団のそれぞれがＥＡＥの病気の発生の原因となっている。

ＥＡＥ誘導Ｔ細胞のＴＣＲの分析は、この疾患の関連レセプターの構造のへテロ 性が制限されていることを明かにした。

３３個のＭＢＰ反応性Ｔ細胞のを分析した結果、２個のα鎖Ｖ領域遺伝子セグメ ントと１個のα鎖Ｊ領域遺伝子セグメントとのみが用いられた。同様に、β鎖Ｔ ＣＲ遺伝子の使用の制限がこのＴ細胞集団に認められた。２個のβ鎖Ｖ領域と２ 個のＪ領域遺伝子セグメントとのみが見いだされた。さらに重要なことに、Ｔ細 胞クローンの約８０％が、β鎖ＶＤＪ結合領域について同じアミノ酸配列を有し ていた。このような発見は、同様な抗原特異性を有するＴ細胞の内でＴＣＲ構造 が共通していることに対する注目を確立し、そして、そのＴＣＲがＥＡＥの発病 を防ぐための免疫療法上の戦略の効果的な標的であることを示している。

ＥＡＥに対する治療戦略を考案するなかで、自己攻撃性Ｔ細胞の抗原特異性を用 いることが試みられてきた。例えば、ＥＡＥ誘導Ｔ細胞上に存在するＴＣＨに対 して特異的なモノクローナル抗体の受動投与がなされてきた。ＥＡＥのマウスモ デルにおいては、Ｖβ８、すなわちＭＢＰ特異性Ｔ細胞により用いられる主要β 鎖Ｖ領域遺伝子に特異的なモノクローナル抗体の注入は、続＜　ＥＡＥ誘発に対 するマウスの感受性を減少させる（　Ａｃｈａ−Ｏｒｂｅａら、Ｃｅ１ｌ　５４ ：２６３−２７３　（１９８８）およびＵｒｂａｎら、Ｃｅ１ｌ　５４：５７７ −５９２　（１９８Ｂ））　ｏ　同様の予防が、ＭＢＰ特異的Ｔ細胞上のＴＣＲ の同定されていないイディオタイプ決定基に反応するモノクローナル抗体を用い て、ラットＥＡＥにおいて示された（　Ｂｕｒｎｓら、Ｊ、　Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、 　１５９：２７−３９（１９８９））。受動抗体治療法は、ＥＡＥに対する感受 性に何らかの回復効果を有する一方で、潜在的な問題が浮かび上がらた。もたら された予防は一時的であるので、抗体を繰り返し投与することが必要とされる。

抗体の多数回の注入は、宿主が投与された抗体に対して免疫応答を行う機会を増 す。特に抗体が異種移植動物において作られた場合に、その機会が増大する。さ らに、病因Ｔ細胞クローンに対する抗体の応答は、全免疫応答のうちの１個の要 素のみを示しており、自己反応性の解消において細胞性免疫の寄与する可能性を 無視している。

ＥＡＥ中の自己攻撃性Ｔ細胞の活性を減じる細胞性免疫の役割が調べられ、可能 な治療法が示唆された。受動免疫の研究と同じ方法で、調節性Ｔ細胞が、半ビボ で誘導されて免疫療法のために再投与された。例えば、Ｓｕｎら、Ｎａｔｕｒｅ 、　３３２：８４３−８４５　（１９８８）によると、最近、ＭＢＰ特異性ＣＤ ４＋　Ｔ細胞系の養子移入によりＥＡＥが誘導された、回復期のラットからＣＤ ８＋　Ｔ細胞クローンが単離された。このＣＤ８＋Ｔ細胞クローンは、病気を誘 発するのに用いられるＣＤ４＋Ｔ細胞に対してインビトロで細胞溶解活性を示し た。さらに、このＣＴＬクローンの養子移入は、続＜ＭＢＰのチャレンジに対し て移入うｙトの感受性を減じた。Ｌｆｄｅｒらの５ｃｉｅｒ＋ｃｅ、　２３９： ｌ８ｌ−１８３（１９８８）では、ＥＡＥ誘導Ｔ細胞に対して抑制活性を有する ＣＤ８＋　Ｔ細胞クローンが単離された。このＣＤｓ＋クローンは、毒性を弱め た、病気を誘導するＴ細胞クローンをワクチン接種したう、トから単離された。

これはインビトロで細胞溶解活性を示さないが、ＭＢＰを加えることによってお こるＥＡＥ誘導Ｔ細胞の増殖を抑制し得た。このような研究は、ＣＤ８＋　Ｔ細 胞はＥＡＥを減退調節することができることを示したが、回復うｙｈの有する長 期間の抵抗性に対する重要な役割を、この選択されたＣＤ８＋　ＣＴＬに甘んじ ることは困難である。なぜなら、Ｓｅｄｇｖｉｃｋら（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎ ｏｌ、、１８：４９５−５０２　（１９８８））は、ＣＤＳ＋細胞のモノクロー ナル抗体による減少は病気の進行および回復に影響を及ぼさないことを示したか らである。

上記のＳｕｎら、およびＬｉｄｅｒらの実験において、外部で誘導された調節性 Ｔ細胞の投与は、受動抗体治療の重大な障害を克服する。このことはインビボで の調節応答の期間を延長することを可能にする。しかし、このような調節性Ｔ細 胞のクローンを開発するためには、コスト的にも労力的にも苛酷な工程である、 毒性を弱めた病気誘導Ｔ細胞と共にインビトロ培養することが要求される。さら に、ヒトのような異系交配集団では、個体間でＭＭＣが同一でないので、これは 高度に個人的な治療戦略となる。調節クローンは、各々の患者個人のために誘導 される必要があり、次に移植片対宿主病の可能性を防ぐためにその患者にのみ再 投与される。

毒性を弱めた病気誘発Ｔ細胞クローンによる直接のワクチン接種もまた、ＥＡＥ の治療に用いられてきた。病気を移入する能力のあるＭＢＰ特異的Ｔ細胞は、γ 線照射あるいは化学的な増殖抑制によって毒性が弱められ、投薬を受けていない う、トに用いられた。ある場合においては、ワクチンを受けた動物はＥＡＥ誘発 の次の攻撃に抵抗性を示した（上記Ｌｉｄｅｒら、ＣｏｈｅｎおよびＷｅｉｎｅ ｒ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ　９：３３２−３３５　（１９８８）概説を 参照）。しかし、このようなワクチン接種の効果は一貫していなくて防御の程度 はさまざまである。Ｔ細胞は、全Ｔ細胞がワクチンとして投与された場合に免疫 応答を引き起こす、様々な異なる抗原を含有する。この現象は、０ｆｆｎｅｒら （Ｊ、ＮｅｕｒｏｉＩＩｌｍｕｎｏｌ、、２１：１３−２２　（１９８９））に よって示された。

彼らは、全Ｔ細胞による免疫は、ワクチン接種回数を増す方法によって、それら のＴ細胞に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）の応答が増加することを、耳の腫張を 測ることにより示した。

しかし、陽性のＤＴＨ応答は、予防された動物および非予防の動物の両者に認め られた。ラットは、脳炎誘発性のＴ細胞およびコントロールのＴ！［ＥＩ胞の両 者のワクチン接種に対して同様の反応をした。反対に、ＰＰＤ特異性Ｔ細胞系由 来のＰＰＤ特異性Ｔ細胞によるワクチン接種は、予防が認められなくても脳炎誘 発性のクローンおよびワクチン接種細胞にＤＴＨを誘発した。病気誘発細胞およ びコントロール細胞の両者によってワクチン接種されたラットが、遅延型過敏反 応による定！（細胞媒介性免疫の測定）に対して同様の応答を示すことは、これ らのＴ細胞の非常に多くの抗原が免疫応答を誘発していることを示している。そ れ故に、毒性が弱められた病気誘発性Ｔ細胞によるワクチン接種は、そのＴ細胞 表面の予防抗原に対する特異性を欠くと共に、その抗原に対する免疫の誘発が安 定しないという欠点を有する。ヒトの病気治療の候補として、毒性が弱められた Ｔ細胞によるワクチン接種は、上記と同様の苛酷な労力により、またＣＤＳ＋細 胞の注入についての上記のような個人的な治療の必要により、悩まされる。

本発明は、自己免疫疾患を含むＴ細胞媒介性の病気に対する免疫治療の効果的な 方法を提供する。この方法によって従来から指摘されている治療法の多くの問題 が回避される。異種抗体の受動投与よりむしろワクチン接種によって、宿主自身 の免疫系は、自己攻撃性のＴ細胞を抑制するように機動される。それ故に、その 抑制は永続的であって、その抑制を生じる任意の、および全ての免疫学的機構を 含み得る。この多面性の応答は、モノクローナル抗体または現存する調節性Ｔ細 胞クローンの受動投与により行われる一面性の抑制よりもさらに効果的である。

これらは自己免疫疾患に関わるので、本発明のワクチンは、自己免疫疾患を媒介 するＴ細胞のＴＣＲを含有する。このワクチンは、Ｔ細胞クローン、各々のＴ細 胞レセプター鎖（例えば、α、βなど）あるいはこれらの鎖の一部、いずれかの １つ、あるいは組合せから、実質的に精製された全ＴＣＲで有り得る。ワクチン は、ＴＣＲの異なる部分に対応する相同の単一のペプチド、あるいは一種以上の ペプチドを含有し得因となる別々のＴＣＨに由来し得る。

特定の実施態様において、患者が多発硬化症である場合、免疫するペプチドは、 アミノ酸配列５ＧＤＱＧＧＮＥを有し得る。このペプチドの免疫原性部分は効果 的であり得る。それ故に、アミノ酸置換は、このペプチドの免疫原性を壊さない ように行われ得る。あるいは、このペプチドは、さらにその免疫原性を増すよう にキャリアーに結合され得る。さらに特定の実施態様において、■β１７を含む Ｔ細胞レセプターまたはＴＣＨの断片は、慢性関節リウマチの患者の治療あるい は予防のための免疫に用い得る。上記患者に生じた免疫応答は、Ｖβ１７を有す るＴ細胞を中和あるいは傷害し得る。それにより、■β１７を有するＴ細胞の苛 酷な結果を予防あるいは治療し得る。さらに、一般的に自己免疫疾患を媒介する 病原性Ｔ細胞のＴ細胞レセプターに■β１７が共通して存在する限りにおいて、 このようなワクチンは、他の自己免疫疾患にも効果的であり得る。

用語「実質的に純粋な」は、ＴＣＲが、通常天然では結合しいる他の生化学的な 部分から実質的にフリーであることが示される。あるいは、そのワクチンには、 ＴＣＲあるいはその一部分の様々な長さのペプチドが含まれる。このペプチドは 、当行者にはよく知られている方法によって、合成あるいは組換えによって生産 され得る。好ましくは、そのペプチドワクチンは、他の非病原性のＴＣＲとは区 別されるＴＣＲの領域である。このような特異的な領域は、各々のＴＣＲポリペ プチド鑓の種々の領域、特にＶ　（Ｄ）Ｊ結合に広がる短い配列内に位置し得る 。このようにして、この単一の決定基を有するこれらのＴ細胞に対してのみその 免疫応答を限る。

そのワクチンは、自己免疫応答を示す、あるいは示す危険性のある宿主に投与さ れる。特定の自己免疫疾患の明確な臨床的診断によって、疾患に特異的なＴＣＲ ワクチンの適切な投与が保証される。明白な臨床上の疾患の開始に自己免疫機構 が先行する病気（例えば、■型糖尿病）において、予防的な適用が保証される。

従って、この疾患の家系的な経歴を有する患者および確実な予後の指標によりそ の危険性がある患者は、この病気の発病の前に、自己免疫機構を停止するために 予防的に治療され得るであろう。

ＴＣＲワクチンは、多くの可能な形態で、薬学的に受容可能な媒体中で投与され 得る。短いペプチドの場合には、その免疫原性を増すために、ＫＬＨのようなキ ャリアーに結合され得る。ワクチンは、当業者にはよく知られている種々のアジ ユバントと共に投与され得る。ワクチンによる最初の免疫の後、追加投与が与え られ得る。このワクチンは従来の方法によって、免疫応答を引き出すのに十分な 投与量で、投与される。このことは当業者によって容易に決定され得る。

免疫感作に用いられる適切なペプチドは、以下のように決定され得る。標的抗原 と反応する病気誘発Ｔ細胞クローンが、感染患者から単離されている。このよう なＴ細胞は好ましくは、尋常天庖瘉の場合はその病巣、多発性硬化症の場合は中 枢神経系（ＣＮＳ）、あるいは慢性関節リウマチの場合は滑液あるいは溝膜組織 のような自己攻撃活性の高い部位、あるいは感染患者の血液から得られる。次に 、これらの自己攻撃性Ｔ細胞由来のＴＣＲは配列決定される。次に、病気誘発Ｔ 細胞中に選択的に示されるＴＣＲあるいはその一部に対応するポリペプチドは、 上記のようにワクチンとして選択され、作られてそして使用され得る。

一方、ワクチンは、上記のペプチドの内部イメージである抗イデイオタイプ抗体 を含有し得る。このような抗イデイオタイプワクチンの製造、選択および投与の 方法は、当分野においてはよく知られている。例えば、ここに参考文献として取 り上げたＥｉｃｂ＋ａｎｎら、ＣＲＣＣｒ１ｔｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｌｏｇＹ　７：１９３−２２７　（１９Ｂ？＞を参照のこと。

６、性　、の　としてのＴ　理 ＴＣＲのワクチン接種の有用性を示すために、自己免疫疾患について議論されて きた。しかし、Ｔ細胞リンパ腫には、この治療の型に従い得るもう一つのＴ細胞 病理学がある。Ｔ細胞リンパ腫の治療におけるこの方法の応用は、実質的には同 じ様式で行われ得る。しかし、−面においては、病原性Ｔ細胞の単離がより容易 に達成されるので、この技術は、Ｔ細胞増殖性の疾患にさらに容易に適用される 。一旦クローンが単離されると、この技術は、ここに述べられている方法で適用 される。詳細には、Ｔ細胞リンパ腫のＴＣＲ遺伝子は配列分析され、それらのＴ ＣＲの適切な領域が同定され、ワクチンとして用いられる。このワクチンは１個 あるいは複数個のペプチドを含み得て、薬学的に受容可能な形態で、アジュバン トとともにあるいは伴わずに、従来の方法によって投与され得る。

五及良■止症 ＭＳとＥＡＥとの臨床的および組織学的に、ＭＢＰ反応性のＴ細胞の役割が報告 されてきたにも関わらず、多発性硬化症（ＭＳ）の原因となるＴ細胞は、以前に は同定されていなかった。ＥＡＥラットおよびマウスモデルにおいて、ＭＢＰ反 応性の脳炎誘発性Ｔ細胞は、ＭＨＣ拘束性およびＭＢＰペプチド抗原特異性につ いて知られた相違のほかは、β鎖ＶＤＪアミノ酸配列の顕著な保存を示す。本発 明は、ＭＳ患者由来のヒトミニリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）反応性Ｔ細胞系 が、ＭＳの動物モデルである実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡＥ）の発病を媒 介するＭＢＰ反応性Ｔ細胞系からのβ鎖のアミノ酸配列に相同なＶＤＪアミノ酸 配列配列するＴＣＲβ鎖を有するという紋察を前提にしている。この細胞系は、 ＭＢＰのもう一つのエピトープに対して特異的である。この発見は、ＭＳの発病 にＭＢＰ反応性Ｔ細胞が関わること、およびここに述べられているのと同様の、 ＥＡＥの予防のためのＴＣＲペプチドは、ＭＳの治療に適し得る。

１１が亘二二二二 慢性関節リウマチ（ＲＡ）はＴ細胞に媒介される自己免疫疾患である。本発明は 、慢性関節リウマチ患者の滑液中の活性化された■β１７Ｔ細胞のオリゴクロー ナル浸潤物を記載している。診察された患者の全員の病変組織中にこのＴ細胞が 存在すること、それらのオリゴクローナル性、およびこのようなＴ細胞の１種の 滑液付着細胞に対する細胞障害活性は、Ｖβ１７を有するＴ細胞のＲＡの発病に 対する中心的役割を実証している。

ＲＡ患者の滑液組織中で活性化されたＴ細胞集団は、ＩＬ−２レセプター陽性（ ＩＬ−２Ｒ＋）滑液Ｔ細胞から単離されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のｍＲＮ Ａを分析して確かめられた。実質的に任意のＶβ遺伝子エレメントを含有するヒ ）ＴＣＲβ鎖遺伝子が増幅されるように設計された、ポリメラーゼ複製連鎖反応 （ＰＣＲ）のプロトコールを用いてＴＣＲのｍＲＮＡが増幅された。この分析に おいて、オリゴクローナル■β１７の再配列は、ＩＬ２−Ｒ十群に豊富に存在す ることが見いだされ、このことは、Ｖβ１７Ｔ細胞がＲＡの発病に関連している ことを示す。ＣＤ４＋でＶβ１７を有するＴ細胞クローンは、滑液ｍ織の標本の 一つから単離され、そしてその滑液付着細胞に対するインビトロでの細胞障害性 は、■β１７Ｔ細胞がＲＡに直接間わることを支持する。

述べられているように、本発明は、Ｖβ１７で示されるＴＣＲのβ鎖の特異的可 変領域が、ヒト患者の慢性関節リウマチに密接に関わる非常に重要な発見を提供 している。この発見は、本発明の方法論を用いての慢性関節リウマチの検出、予 防および治療を見越している。ＥＡＥについて上記と同様の治療研究が、当業者 によって適用され得る。

特に、本発明は、患者からの試料中に■β１７で示されるβ鎖可変領域を有する Ｔ細胞を検出することを包含し、■β１７含有Ｔ細胞の異常なレベルでの存在が 慢性関節リウマチあるいは慢性関節リウマチに対する感受性を示すものである、 巴者の慢性関節リウマチに対する感受性を診断あるいは予測する方法を提供する 。このＶβ１７含有Ｔ細胞は、定性的に、あるいは定量的に正常人のそれと比較 され得る。このような診断は、慢性関節リウマチに関係するβ鎖可変領域Ｔ細胞 レセプターではない場合には生じない■β１７の一部分を検出することによって 行われる。このＶβ１７は、例えば、■β１７に特異的に結合し得る検出可能な リガンドと結合させることによって検出され得る。多（のこのようなリガンドが 当分野では、例えば、酵素結合体が知られている。あるいは、■β１７をコード する核酸配列と相補性のヌクレオチドプローブが、実施例■に教示されているよ うに、■β１７含有Ｔ細胞の検出に用いられ得る。

本発明はさらに、Ｖβ１７含有のＴ細胞レセプターがその結合パートナ−に結合 するのを避けることを含む、慢性関節リウマチの予防および治療の方法を提供す る。１つの実施態様において、その結合は、リガンドを■β１７に結合すること によって避けられる。あるいはもう一つの実施態様において、結合は、リガンド を■β１７の結合パートナ−に結合することによって避けられる。結合は、例え ば付着を物理的にブロックするために抗体を■β１７、あるいは結合部分に結合 する公知の方法で避けられ得る。

本発明は、患者のＶβ１７含有Ｔ細胞を細胞障害的にあるいは細胞増殖抑制的に 処理することを含む患者の慢性関節リウマチを予防あるいは治療する方法を提供 する。一つの実施態様において、■β１７含有Ｔ細胞は、■β１７に選択的に結 合する細胞障害因子あるいは細胞増殖抑制因子によって処理される。この因子は 、放射活性部分あるいは化学治療部分に結合される抗体であり得る。このような 結合あるいは効果的な因子は、当分野においてよく知られている。例えば、ここ に参考文献として掲げたＨａｒｌｏｖ、　Ｅ、およびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄ ｉｅｓ　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈ ａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８を参照。

本発明は、さらに特異的ＴＣＲ配列５ＧＤＱＧＧＮＥがヒト患者の多発性硬化症 に密接に関係する非常に重要な発見を提供する。この発見は、本発明の方法を用 いて多発性硬化症の検出、予防および治療を可能とする。ここに挙げたＥＡＥと 同様の治療の研究が、当業者によって多発性硬化症に応用され得る。

特に、本発明は、患者からの試料中に、実質的に配列５ＧＤＱＧＧＮＥを有する Ｔ細胞を検出する方法を包含し、この配列の存在が多発性硬化症または多発性硬 化症に対する感受性を示すものである、患者の多発性硬化症の診断あるいは予測 方法を提供する。この配列は、例えば検出可能なリガンドとの接触によって検出 され得る。このようなリガンドは、当分野に公知であり、例えば酵素が結合され た抗体である。あるいは、その配列をコードする核酸に相補的なヌクレオチドプ ローブが、実施例ＩＸに教示されているように、Ｔ細胞を検出するのに用いられ 得る。

本発明は、さらにその結合パートナ−に対して、実質的に配列５ＧＤＱＧＧＮＥ を有するＴ細胞レセプターの付着を阻害することを含む、多発性硬化症の予防あ るいは治療の方法を提供する。一つの実施態様において、付着はその配列にリガ ンドを結合することによって阻害される。もう一つの実施態様において、付着は 結合パートナ−にリガンドを結合することによって阻害される。付着は公知の方 法、すなわち物理的に付着を阻害するためにその配列に抗体を結合することによ り阻害され得る。

本発明は、さらに、患者において実質的に配列５ＧＤＱＧＧＮＥを有するＴ細胞 を、細胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に処理することを含む、多発性硬化症の 患者の予防あるいは治療の方法を提供する。一つの実施態様において、Ｔ細胞は 、この配列に選択的に結合する細胞障害性あるいは細胞増殖抑制性因子によって 処理される。この因子は、放射活性部分あるいは化学療法性の部分に結合される 抗体であり得る。

以下の実施例は、本発明を説明することを意図しており、制限するものではない 。

大１１糺−」− ＥＡＥのラットモデル ルイス（Ｌｅｖｉｓ）ラット　（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔ ｏｒｉｅｓ、Ｒａｌｅｉｇｈ−Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）の雌の各々に、フロイント の完全アジュバントに乳化させたモルモットのミニリン塩基性タンパク質を５０ １、ｔｇずつ、後肢の足駈に注射して免疫した。病気の最初の徴候は、免疫後９ 〜１１日目に認められた。病気の重篤さは、次の３点を尺度にして測定した：１ ＝尾の無力化、２＝後肢の衰弱、３＝後肢の麻痺。約４〜６日の経過後、はとん どのラットは自然に回復し、次のＥＡＥ誘導に対して免疫ができた。

大Ｕ ワクチンの遺　および−製 ワクチン接種は、ＢＩＯ，ＰＬ／ＬマウスのＥＡＥ誘導Ｔ細胞の内に最も多く見 られるＴ細胞レセプターβ遺伝子のＤＮＡ配列から推定された配列であるＴ細胞 レセプターペプチドによって実施された。このＤＮＡ配列は、上記のＵｒｂａｎ らによって報告されている。この文献はここに参考文献として採用される。

マウスのＴＣＲβ鎖のＶＤＪ結合配列を有する９個のアミノ酸のペプチドを、当 業者に公知の方法によって合成した。このペプチドの配列は５ＧＤＡＧＧＧＹＥ である。（アミノ酸は従来の一文字記号で示されている。）ラットにおいて同等 の配列が報告されている：　５ＳＤ−ＳＳＮＴＥ　（Ｂｕｒｎｓら、Ｊ、Ｅｘｐ 、Ｍｅｄ、　１６９：２７−３９　（１９８９））。このペプチドを、０，１Ｍ 酢酸を用いた５ｅｐｈｄｅｘ　Ｇ−２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈ ｅｍｉｃａｌｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）のカラムクロマトグラフィーに よって脱塩し、次に、その溶媒を凍結乾燥を２回繰り返して除去した。ペプチド の一部を、グルタールアルデヒド含有のキーホールリンペノトヘモシアニ７（Ｋ ＬＨ）に、ＫＬＨの１ｍｇあたり７．５ｍｇのペプチドの割合で結合させた。得 られた結合体をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に対して透析した。

Ｋ皿五一旦 ＥＡＥに・　るワクチン 本研究に用いられるワクチンは、フリーのＶＤＪペプチド、およびＫＬＨに結合 させたＶＤＪペプチドからなる。これらをＰＢＳに溶解して、同容量の（１）フ ロイントの不完全アジュバント（ＩＦＡ）、あるいは（２）ＩＦＡに加熱殺菌し て乾燥したＭ　ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　Ｈ３７ｒ ａ　（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂ。

ｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｌ）をｌｏｍｇ／ｍｌ懸濁させて得た フロイントの完全アジュバント（ＣＦＡ）に乳化させた。乳化物を８〜１２週令 の成体ルイスラットの雌に、動物あたり最終容量１００μｍ　（両後足の足踵に ５０μＬずつ）を接種した。ラットあたり、ＶＤＪの結合していないペプチドを ５μｇ投与した。ＫＬＨ−ＶＤＪ複合体は、ラットあたりＫＬＨ１０μｇに相当 する投与量で投与した。２９日後、各々のラットに、フロイントの完全アジュバ ント中の５０μｇモルモットのミニリン塩基性タンパク質を、前足の足踵に接種 した。

動物は第９日月から、ＥＡＥの臨床上の症状を毎日観察して、上記のように点数 化した。その結果を表Ｉに示す。明らかに、ワクチン接種された個体の病気の発 生率が減少させられるばかりではなく、病気にかかった個体においても発病は減 少した。病気の重篤さ、および／または発病は遅延した。予防の程度はワクチン の処方によって変化し、アジュバントとしてＣＦＡを含むワクチン調剤は最も高 い予防の程度を示した。

技工 フ　ＫＬ！４−ＶＤＪ（ＣＦＡ）　−−−１３２−−−８−−−−１１１１一 点数：−徴候無し １）尾の無力化 ２）後肢衰弱 ３）後肢マヒ 大１ｍ！Ｍ ルイスラットＶＤＪペプチドを　いた Ｅ　Ａ’Ｈに対するワクチン　挿 前記実施例で使用したＶＤＪペプチドは、ＢＩＯ，ＰＬマウスのＥＡＥ誘発Ｔ細 胞上に見い出されるＴＣＲβ鎖分子の配列に従い合成した。さらに、ルイスラッ トの脳炎誘発Ｔ細胞上に見い出される配列に相当するペプチドも、合成して試験 した。これらのＶＤＪ配列は、ＢＩＯ，ＰＬマウスのそれに相同であるが同一で はない。ラットのペプチドは、ＢｕｒｎｓらおよびＣｈｌｕｂａら、　Ｅｕｒ、 　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９：２７９−２８４（１９８９ンの報告によるＤＮ Ａ配列に従い合成した。これらＩＲＩ、２および３と名付けられた３つのペプチ ドの配列を、実施例工から■（ＶＤＪ）で使用したＢ１０．ＰＬマウスの配列と 並べて以下に示す。

ＴＷ　ｊｉ　ＯＤ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ｙ　！ＸＲＬ　Ｃ１８８Ｄ　−ｔ！Ｉ　ｊｉ　 Ｎ　’！”　冨Ｗ　Ｆ　Ｆ　Ｇ　ＫＸＲ２Ｃｋ　Ｂ　ｉ　Ｄ　−Ｂ　Ｇ　Ｎ　’ ！’　冨Ｖ　Ｆ　Ｆ　Ｇ　Ｋ１Ｒ３ＣＡ　８８　Ｄ　−Ｂ　Ｇ　Ｍ　−’Ｆ　Ｌ 　Ｙ　Ｆ　（ｍ　ｌｊ　ＯＢ　Ｒ工Ｒ９ｂ　ｋ　Ｂ　８　Ｄ　−１１８Ｍ　？　 ！これらのワクチンの調製、投与および評価は、５０μｇの各ＶＤＪペプチドを ＣＦＡを含むワクチン処方中に組み入れたことと、ＩＦＡを用いたワクチン接種 またはＫＬＨと複合させたペプチドを用いたワクチン接種はどちらも行わなかっ たことの他は、実施例■から■の記載のように行った。コントロール動物は、Ｍ ＢＰ抗原投与の前の処置を行わず、またはＰＢＳとＣＦＡとのエマルジョンでワ クチン接種してアジコー２３３３１−−− ６　−　２　コ　３　コ　−−ｍ− １９＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　一点数二一　徴候無し １）尾の無力化 ２）後肢衰弱 ３）後肢マヒ 表■に示すように、ワクチン接種しないコントロール動物の疾、萄は第１Ｏ日目 から既に観察された。疾患は重篤なマヒと衰弱を特徴とし、４から６日間続いて 自然に軽減した。ＰＢＳ−ＣＦＡでワクチン接種したラットは、ワクチン接種し ないコントロールと事実上区別できない疾患の経過を示した。

対照的に、ＩＲＩ、２または３でワクチン接種した動物のいくつかについては発 病の遅延が観察され、他については発病の遅延と共に重篤さの軽減および／また は疾患期間の減少が示された。しかし、全体としてはラットＶＤＪペプチド（Ｉ Ｒ１〜３）を用いたワクチン接種は、マウスＶＤＪペプチドを用いた（実施例■ ）よりも少し軽微な効果を示した。しかし、ｌＲ９１）を用いたワクチン接種は 、試験し、た４匹の動物全てを完全に予防した。重要なことは、疾患に特徴的な 組織病変は、ＩＲ９ｂでワクチン接種した４匹の動物の何れにも見られず、この ことは疾患の準臨床的な徴候も消失したことを示唆する。

Ｌ皿皿−ヱ ｙ６域の、・ペプチドを　いたワクチンＶβ８遺伝子ファミリーに特異的なペプ チドの、ＥＡＥに対するワクチンとしての試験を行った。■β８は、う、トおよ びマウスの両者で、脳炎誘発Ｔ細胞の使用する最も普遍的なβ鎖遺伝子ファミリ ーである。ペプチドを、Ｖβ８遺伝子に見られる特宵のＤＮＡ配列に基づいて合 成する。この配列は、Ｍｏｒｒｉｓら、１ｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ　２７： １７４−１７９　（１９８８）か配列を報告した他のうｙｌ”Ｖβ遺伝子の内に は見られない。ＸＲ７と名付けられた、■β８ペプチドの配列は、工Ｒ７ＤＭＧ ＨＧＬＲＬ）：ＨＹ８ＹＤＷＮｇ’！’Ｅ　Ｋである。

この■β８ペプチドの効能を、実施例■および■の記載に従い、ＥＡＥのルイス ラフｌ−モデル（実施例Ｉ）で試験した。

ＣＦＡ中の５０μｇのペプチドを試験した。ＩＦＡを用−入、またはペプチド− ＫＬＨ複合体を用いたワクチン接種は行わなかった。これらの研究結果を表■に 示す。

１　工Ｒ７（５０２ｇ）　−−１２３３３−一点数二一　徴候無し １）尾の無力化 ２）後肢衰弱 ３）後肢マヒ ラット■β８ペプチドを用いて行ったワクチン接種の結果は、マウスおよびラッ トのＩＲＩ、２および３ペプチド′を用いての観察に類似する。発病の遅延と共 （こ、１匹の動物で（よ疾患の重篤さの軽減および期間の減少が見られた。１匹 の動物は完全に保護された。

Ｋ皿史一旦 ｌ域ペプチドを　いたワクチン亭挿 う、トとマウスの両方の脳炎誘発Ｔ細胞レセプターに見い巳され、Ｊα遺伝子部 分であるＴＡ３９に相当するペプチドを合成した。このＸＲ５と名付けられたペ プチドの配列は、ＸＲ５ＲＦ　Ｇ　Ｊｋ　Ｇ　Ｔ　ＲＬ　Ｔ　Ｙ　Ｘに従いＥＡ Ｅのルイスラットモデル（実施例Ｉ）で試験した。

ＣＦＡ中の５０μｇのペプチドを試験した。ＩＦＡを謂い、またはペプチド−Ｋ ＬＨ？１合体を用いたワクチン接種は行わなかった。これらの研究の結果を表■ に示す。

ｌ　工Ｒ５Ｃ５０μｑ）　−−−−−２１１１１一点数二一　徴候無し １）尾の無力化 ２）後肢衰弱 ３）後肢マヒ ラフ）ＪαＴＡ３９を用いて行ったワクチン接種の結果は、マウスＶＤＪペプチ ドまたはＶβ８ペプチドを用いた観察結果よりも効果的である。３匹の内２匹が 完全に予防され、３匹目では疾患の発病が顕著に遅延した。この動物の重篤さも また軽減されたが、疾患は通常の経過の５日間持続した。重要なのは、完全に予 防された２匹の動物がＣＮＳのＴ細胞浸潤の組織学的証拠を示さなかったことで ある。この結果は、ＪａＴＡ３９を用いたワクチン接種が非常に効率よく、脳炎 誘発Ｔ細胞に対する調節反応を誘導することを示唆する。疾患の準臨床的な徴候 さえも消失した。

１皿匹一旦 ＴＣＲペプチドの混４　を　いたワクチンＴＣＲペプチドの混合物を用いてワク チン接種を行った。

この混合物は、ＩＲＩ、２．３および５（３つのラットＶＤＪペプチドおよびラ ットＪαＴＡ３９ペプチド）の各ペプチドを５０μｇ含有した。

このペプチド混合物の効力を、実施例■および■の記載に従いのルイスラットモ デル（実施例りで試験した。ＣＦＡ中のペプチドを試験した。ＩＦＡを用い、ま たはペプチド−ＫＬＨ複合体を用いたワクチン接種は行わなかった。これらの研 究の結果を表■に示す。

叔Ｖ ４　！Ｒ１，２，３，５−−−−−一−−−５（各５０μｑン　−−−−−−− −一点数二一　徴候無し １）尾の無力化 ２）後肢衰弱 ３）後肢マヒ ラットｊαＴＡ３９および３つのＶＤＪペプチドを用いて行ったワクチン接種の 結果は、表■でＩＲ９ｔ）について述べたのとほぼ同じくらい有効であった。３ 匹の動物がすべて予防された。ＥＡＥのあらゆる臨床徴候が無かったのに加え、 これら３匹のうち２匹は、ＣＮＳへのＴ細胞浸潤の組織学的証拠が完全に無く、 一方３匹目はを髄基部に、リンノ＜球浸潤の２つの小さな点のみを示した。

Ｋ立五−亘 発　イ　のワクチン ヒトＭＢＰ反応　Ｔ細 ＭＢＰ反応性のＴ細胞系は、９人の慢性進行性ＭＳ患者および２人の健常人コン トロールの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から確立した。細胞は、精製ヒトＭＢＰ および放射線照射自己ＰＢＭＣによる規則的な刺激により３日間培養維持し、次 にＩＬ−２を含有する培地で４日間培養した。

ＭＢＰ反応　Ｔ細胞系に由来するＴＣＲ鎖　二　のＰＣＲ１曵 Ｔ細胞を対数増殖相の培養から収穫してＲＮＡを調整し、Ｖβ１６ｍｅ　ｒプラ イマーおよび組になるＣβプライマーを用いて実施例■に記載のように５５サイ クル増幅した。

ヒトＭＢＰ　応　Ｔ　のＴＣＲタ１ ヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系に由来するＴＣＲβ鎖遺伝子の増幅されたＶβ１６ｍ ｅ　ｒは、Ｃβｓｅｑプライマーを用いて配列決定した。増幅生成物をゲル精製 し、塩基変性させ、Ｃβｓｅｑプライマーから配列決定した。解読可能なりＮＡ 配列がこれらの細胞系の５つから得られ、長期間のインビトロ経過により優位な Ｔ細胞クローンが選択されたことが示された。これらの配列の一つはＲｅ細胞系 （表■）に由来し、ＥＡＥのＢＩＯ，ＰＬマウスモデルのＭＢＰ反応性の脳炎誘 発Ｔ細胞に保存されているβ鎖ＶＤＪアミノ酸配列と、最初の６つの残基のうち ５つ、および全残基９つのうち６つを共有するβ鎖ＶＤＪアミノ酸配列を有する 。この配列は、残りの４つのヒ）ＭＢＰ反応性Ｔ細胞系に見られる優位なＴＣＲ 再配列の内には存在しなかった。

他のＭＳ患者からのＭＢＰ反応性Ｔ細胞系のβ鎖目録の中に同様の配列が存在す るかどうかを決定するために、この配列の７個のアミノ酸に対応する、縮退させ た（ｎ＝１０２４）２１ヌクレオチドのプライマー（ＶβＲｅ）（表■）を用い てＰＣＲ増幅を行った。ＲＮＡを逆転写し、■β１６ｍｅｒおよびＣβｅｘｔプ ライマーを用いて２０サイクルの段階Ｉ反応で増幅した。この段階Ｉ反応のうち ｌμｌを、■βＲｅおよびＣβｉｎｔプライマーを用いて３５サイクル再増幅し た。これらの反応のうち１μｍを、３２ｐ標識化ヒトＣβプローブを用いたサザ ンブロットハイブリダイゼーションにより分析した。この分析は、Ｒｅ細胞系お よび他のＭＳ患者系の１つのａｏｏｂｐ増殖生成物を明らかにしたが、コントロ ール被験者由来のＭＢＰ反応性Ｔ細胞、またはＭＢＰ非反応性ヒトＴ細胞系とク ローンでは明らかにされなかった。９つのＭＳ患者系のうち２つにこの配列が存 在したことは興味深い。

この配列はＥＡＥの脳炎誘発Ｔ細胞のうちで保存されていることが知られている ため、ＭＳ患者からのＭＢＰ反応性Ｔ細胞の中に検出されたことは、この決定基 を有するＴ細胞がＭＳの発病に果たす役割を示している。

配列５ＧＤＱＧＧＮＥを有する免疫原性ペプチドは、実施例Ｈに示すように合成 し得、実施例■に示した方法によりヒト被験体の免疫に使用される。このような 免疫化の結果、効果的な免疫反応を生じ得る。

！１１０．ＰＬ　Ｓ　Ｇ　Ｄ　Ａ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｙ　！溝膜組織標本は、関節置 換療法をおこなった慢性関節１ノウマチ患者からラジオグラフィーにより探査し て得た。活性化Ｔ細胞は、磁化ビーズおよびヒトＩＬ２−Ｒ（αＩＬ２−Ｒ）に 反応する抗体を用い、以下のように選択した。溝膜組織（よ、４　ｍ　ｇ　／　 ｍ　ｌコラ−ゲナーゼ（ｌＦｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、 　Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、　ＮＪ）および０．１５ｍｇ／ｍｌ　ＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇ ｍａ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ，）を含むＲＰＭＩ＋ｌＯ％胎児ウシ血清 （ＦＢＳ）中で、３７℃で４時間消化した。消化物番よ８０メノシ二のスクリー ンを通し、フィコール密度勾配遠心分離により単一細胞を集めた。界面にある細 胞を洗浄し、２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ　（ＰＢＳ−ＦＢＳ）中の５μｇ／ｍｌコア トロールマウスＩ　ｇ　Ｇ　（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｉｍ＋ｏｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｈ ｉａｌｅａｈ、　ＰＬ）と共にＯ”Ｃテ３０　分間、１０’／ｍｌでインキュベ ートした。細胞を３回洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧを結合した磁化ビーズ（Ａｄ ｖａｎｃｅｄ　Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　ＭＡ）と共にｏ 　’ｃで３０分間インキュベートした。ビーズを磁力により分離し、ＰＢＳ−Ｆ ＢＳで３回洗浄した。このマウスＩｇＧ（ｍＩｇＧ）と磁化ビーズを用いた予備 選択は、Ｔ細胞の非特異的な吸着を制御するために用いた。元の＠濁液中に残っ た細胞は、ヒ）Ｔ細胞ＩＬ２−Ｒに反応するマウスモノクローナルＩ　ｇ　Ｇ　 （ＣｏｕＨｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｇｙ、　Ｈｉａｌｅａｈ、　ＦＬ）の５μｇ／ ｍｌと共に０℃で３０分間、さらにインキュベートした。細胞を洗浄し、上記の ように磁化ビーズで選択した。ＩｇＧ予備吸着およびＩＬ２−Ｒ抗体選択を行っ たビーズは、直ちに酸性化グアニジニウム−フェン−ルークｏｏホルムおよびＣ ｈｏｎｅｚｙｎｓｋｉ　ａｎｄ　５ａｃｃｈｉ。

Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１６２：１５６（１９８７）の記載に従％Ｘｇ 製したＲＮＡの中に再懸濁した。この文献はここに参考文献として援用される。

ＲＮＡは、細胞のインビトロでの培養無しに調製され、生じ得る偏りが伴わない ので手術的採取時の溝膜組織中のＴ細胞分布を正確に反映することが期待される 。患者１０１２からのｍｌｇＧおよびαＩＬ２−Ｒピース゛の半分のみ力ｆ、Ｒ ＮＡｊ：直ちにプロセスされた。残りは、ＲＰＭ１１６４０．５％ＦＢＳ、２０ ％ＨＬ　−１（Ｖｅｎｔｒｅｘ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、。

Ｐｏｒｔｌａｎｄ、　ＭＥ＞、２５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、グルタミン、抗生物質お よびＩＬ−２１としての２０％ＬＡＫ上清（Ａ　ｌｌｅｇｒｅｔ　ｔａら、　５ ｃｉｅｎｃｅ、　２４７：７１８（１９９０）、ここに参考文献として援用され る）中で５日間培養した。ＲＮＡは、αＩＬ２−Ｒビーズの培養物から抽出され たが（１０１２ＩＬ２，６５）、５日間の培養の最終日に生存細胞が存在しなか った１０１２１０ｌ２サンプルからは、抽出されなかった。

Ｔ細胞クローンは、患者１００８のフィコールペレットから派生させた。ペレッ ト中の細胞を、２週間、Ｉ　Ｌ−２を含まない培地で２Ｘ１０６／ｍｌに培養し た。この培養物から非吸着細胞を、自己溝膜細胞単層上に限界希釈することによ りクローン化した。ＣＤ４＋Ｔ細胞クローン１００８．８が得られ、これをＩＬ −２を含まない培地中で自己滑脱単層による規則的刺激により３日間培養し、次 にＬＡＫ上清を含む培地で４日間培養した。

１００８．８による　の 滑脱吸着細胞の１００８．８による溶解は、以下のように実証された。滑脱細胞 単層は、５ｔｅｄｌＩＩａｎ　ａｎｄ　ａｃａｍｐｂｅｌｌ、　Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　１１９：２９１（１９８９）の記載に従い、Ｃ ＴＬア、２セイのための標的として使用するために、３５３で標識した。上記は 参考文献としてここに援用される。細胞はトリブシノ化し、洗浄して、９６ウエ ル丸底マイクロタイタープレートのウェル当り２０００細胞となるように撒いた 。滑脱吸着細胞を用いたアッセイの前に、ＬＡＫ上清を含む培地で３日間培養し た１００８．８細胞は、示されたエフェクター二標的比で標的に添加した。培養 は３７°Ｃで一部インキユベートし、３００Ｘｇで２分間遠心分離し、上／ｊ１ ５０μｍの放射活性を測定した。特異的溶解率％は、標準処方で界面活性剤溶解 した標的に対して算出した。このクローンはＣＴＬアッセイで、滑脱吸着細胞標 的に対して細胞障害性である（表■）。

表■ エフェクタｍ：　−的比　特１的細胞溶解率（％）ＴＣＲ鎖伝のＰＣＲ幅 ＴＣＲβ鎖遺伝子は、表■に示すプライマーを幾つか組み合わせて用いて増幅し た。■β１６ｍｅ　ｒプライマーは、縮退させた■βプライマー（ｎ＝２５６） であり、全１６残基がヒ１−ＴＣＲβ鎖遺伝子に対して８５％結合し、１５残基 が９５％結合することが予想される。このプライマーは、２５個をこえる異なる ヒトＴ細胞クローン、細胞系または主要組ｍ調製物に由来するＴＣＲβ鎖の増幅 のために使用されてきた。ある種の■βファミリーに対するこのプライマーの有 意な偏よりに反論して、Ｖβ遺伝子のスペクトルがこれらの増幅ＤＮＡから配列 決定されてきた。従って、Ｖβ１６ｍｅｒプライマーを用いたＰＣＲ増幅は、Ｖ β遺伝子の用いられ方についての以前の知識が使用不可能なＴ細胞果団の分析を 容易にする。

Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子は、表■に示すプライマーの一組の対を用い、２段 階の増幅反応により増幅した。ＲＮＡは、）ｔａｒｔら、　Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅ ｔ、　ｐ、５９６（１９８８）の記載した条件の、１２μｌの反応液中の４０　 ｐｍｏ　ｌのＣβｅｘｔプライマーを用いて、４２°Ｃで１時間逆転写した。上 記文献は参考文献としてここに援用される。反応物を、４０　ｐｍｏ　ｌの■β １６ｍｅｒ、ヌクレオチド、および上記と同様であるがＭ　ｇ　Ｃ１２を含まず Ｍｇ”の最終濃度が３．６ｍＭとなる緩衝液を含有・するマスター混合液で希釈 した。サンプルは、９５°Ｃで１５分間変性させ、ｌユニットの耐熱性組換えＤ ＮＡポリメラーゼ（Ｃｅｔｕｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、　Ｅｍｅｒｙｖｉｌ ｌｅ、　ＣＡ、　Ａｍｐｌｉｔａｑ”）を添加し、２０サイクルのＰＣＲを行っ た。各サイクルは、９５°Ｃでの変性１分、アニーリングステップ２分、および ７２℃での伸長２分からなる。最初の２サイクルは、それぞれ３７℃及び４５℃ でアニールし、残りは５０℃でアニールした。これらの段階■の反応液の一部を 、１００１００ｐのＣβｉｎｔプライマーと、１００　ｐｍｏ　Ｉの■β８、■ β１７または５°　Ｃβプライマーあるいは７００ｐｍｏｌの■β１６ｍｃｒプ ライマーとを含む、１００μｌの段階■の増幅反応液に添加する（Ｃｅｒｕｓ、 　Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ　Ｋｉｔ”）。段階ｎの増幅は、３７℃と４５℃の経過温度 なしに５０°Ｃのアニール温度で、上記と同様に行った。

表ＶＴＬ ｃＪ３ａａｑ　Ｃ，ｐｉｎｔ　ｑ％ｘｔν１７　５’　ＴＣＡＣＡＧＡＴＡＧＴ ＡＡＡＴにＡＣττＴＣＡＧ３゜ＶＪ８　５’ＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡ ＴＣＣ３’５１°Ｃ戸　５’　ＣＡＡＧＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＣＧＡ３’Ｃｐ ｅｘｔ　５’　ＣＣＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＣＧＡＧＡＣ３’ＣＪ５１ｎｃ　５’ 　Ｇ　ＣＧ　Ｇ　ＣＴ　Ｇ　ＣτＣＡＧＧＣＡＧＴＡ３’Ｃｊｓａｑ　５’　Ｃ ＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＧＧＧＡＡＣＡ　３’１０１２ＩＬ２．ｄ５と１００８゜ ８の培養物由来のＲＮＡサンプルは、段階！反応では■β１６ｍｅ　ｒおよびＣ βｅｘｔを用い、３５サイクルの段階■反応ではＣβｉｎｔプライマーを用いて 増幅した。Ｇｅｎｅ　Ｃ１ｅａｎガラスピーズ（Ｂｉｏｌｏｌ。

Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、　ＣＡ）を用いて低融解アガロースゲル切片から精製した 反応精製物は、塩基変性させ、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ、　Ｕｎ ｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ、　ＯＨ）を 用いてＣβｓｅｑプライマーから配列決定した。単一の■β１７再配列表■に対 応する優位な■β配列が、１０１２１Ｌ２．６５サンプル中に明確に解読され得 た。他のより希少な再配列が、微かな、解読不能の背景バンドとして配列決定ゲ ル中に検出された。アクセサリ−細胞または抗原を加えないＩＬ２含有培地中で の、これらの１０１２．ＩＬ２ビーズの培養は、Ｔ細胞の新たな活性化を誘発す るとは期待されない。従って、このサンプル中に単一の■β１７再配列が優位で あることは、この患者のＶβ１７十Ｔ細胞のインビボにおけるクローン拡８から 増幅したＴＣＲβ鎖ＤＮＡのＤＮＡ配列決定によっても、Ｖβ１７再配列が明ら かになった（表■）。２人の異なるＲＡ患者に由来する２つの異なる型の層膜子 細胞サンプルの中にＶβ１７再配列が存在したことは、Ｖβ１７を宵するＴ細胞 をＲＡの病因に関連付ける。

（エメ下＃、台） 表１× 残りの溝膜ＲＮＡサンプル中のＶβ１７の存在は、■β１７特異的プライマー（ 表■）を用いたＰＣＲ増幅により評価した。ｖβ１７　ＴＣＲＤＮＡ（ｔ、７人 （７）ＲＡ患者のそれぞれに由来する磁化ビーズサンプルから増幅した。電気泳 動した反応精製物をエチジウムプロミド染色することにより、対応するｍ１ｇＧ コントロールよりも４つのαＩＬ２−Ｒサンプル中で、Ｖβ１７増幅がより強い ことが明らかになった。

この多さは、単離工程から生じたのではない。なぜなら、■β８ＴＣＲの増幅は 、ＭＩｇＧとＩＬ２−Ｒサンプルとの間の相違を示さなかったからである。

２つのαＩＬ２−ＲＲＮＡ調製物からのＶβ１７再配列は、■β１７およびＣβ ｉｎｔプライマーを用（Ａて増幅し、反応精製物はＣβｓｅｑプライマーを用い て配列決定した。

サンプル１０１４および１０１５は単一の配列を含有しく表■）、これらは１０ １２ＩＬ２．ｄ５サンプルと同様６臥　インビボでのＶβ１７Ｔ細胞のクローン 拡張を示す。対照的（こ、■β８特異的プライマーを用いて増幅された再配列の 、直接の配列決定は、β鎖生成物の有意なヘテロ性のために不可能であった。

■β１７は、アミノ酸配列ＭＳＮＱＶＬＣＣＶＶＬＣＦＬＧＡＮＴＶＤＧＧ　Ｉ ＴＱＳＰＫＹＬＦＲＫＥＧＱＮＶＴＬＳＣＥＱＮＬＮＨＤＡＭＹＷＹＲＱＤＰＧ ＱＧＬＲＬ　Ｉ　ＹＹＳＱ　Ｉ　ＶＮＤＦＱＫＧＤ　Ｉ　ＡＥＧＹＳ　ＶＳ　Ｒ ＥＫＫＥ　Ｓ　Ｆ　ＰＬＴＶＴＳＡＱＫＮＰＴＡＦＹＬＣＡＳＳを有する。

性矢節すウマチ主者のＨＬＡ−ＤＲ 慢性関節リウマチ患者のＨＬＡ−ＤＲ分析を以下のように行った。各患者からＤ ＮＡを、２００μｍ　ｄＨ２０中で１０５個の着膜細胞を沸騰させることにより 調製した。１０μｌを、１００１００ｐの各ＤＲβ　ＰＣＲプライマー（表Ｘ） を含む１００μｍの反応液（Ｃｅｔｕｓ、　Ｇｅｎｅ　Ａｍｐ　ＫｉｔＴ″）中 で３５サイクル増幅した。この反応液の１／１０μｌを、ＤＲβ２プライマーお よびｄＣＴＰの全起源として１７　ｐｍｏ　ｌのα３２Ｐ−ｄ　ＣＴＰのみを含 有する１０μｍ中で、１０サイクル再増幅した。反応を２００μＭ　ｄＣＴＰで 止め、２サイクルの間追跡した。得られた負のストランドプローブは、Ａｍｏｒ ら、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３８：１９４７（１９８７）に既に記載の条件 を用いて、１０　ｐｍｏ　ｌのＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子の特異的オリゴ（正のス トランド）を含むスロットプロットにハイブリダイズさせた。上記文献はここに 参考文献として援用される。スロ。

トを６５〜６８℃で２０分間２回、テトラメチルアンモニウムクロリド（Ｗｏｏ ｄら、　Ｐｒｃｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８２：１５ ８５（１９８５）、これはここに参考文献として援用される）でｔ！ＩＣ浄し、 Ｘ線フィルムに感光させた。

この研究において各患者は、ＲＡにかかりやすいことが知られているＨＬＡ−Ｄ Ｒ遺伝子ＤＲ４ｗ４、ＤＲＩ、ＤＲ４ｗ１４またはＤＲ４ｗ１５の少なくとも１ つを有していた（表Ｘ）。

（以下余白） ＤＲ／１　５’　ＧＡＧＴＱＣＴにＧＡＡＣＡにＣ３゜ＤＲ／２　５’　ＧＴＡ ＧＴＴＧ含ＴＴＣＴＧＣＡ３’、、　ＨＬＡ−ＤＲ丈づ忙逢イ仁ケ特策的ゴリゴ 又フＬ−矛干ド塵コ」ｌ混１ ＤＲＩ、　ＤＲＡｖ１４．　ＤＲ４ｗ１５５’　ＣＴＣＣＴＧ　ＧＡＧ　ＣＡＧ 　ＡＧＧ　ＣＧＧ　ＧＣＣＧＣＧ　３’ＤＲ２５’　？−−−−−−−−Ｇ−Ｃ −−−−−Ｃ−−−−−−３゜ＤＲ３５’　−−−−−−−−−−−−−Ａ−− −−−Ｇ−ＣＧ−３’ＤＲ＆ν＆　５’　＋＋＋　−−−＋＋＋　＋＋＋　＋Ａ −＋＋＋　−−二　−−−３１ＤＲ４讐１３　５’　−−−−−−−−−−−− −−−−−、−−−−−Ａ−３’ＤＲ５，ＤＲ６，ＤＲ４ｗｌＯ５’　Ａ−−− −−−−Ａ　Ｇ−ＣＧＡ−−−−−−−−−−３’ＤＲ７５°Ａ−−−−−−− −Ｇ−Ｃ−−−−−−−Ｇ−ＣＡ−３’ＤＲ８５’　Ｔ−−−−−−−Ａ　Ｇ− Ｃ−−−−−−−−−ＣＴ−３゜ＤＲ２−５’　Ａ−−−−−−−−−−−ＧＣ −−−−−−−−−−３゜ＤＲ３５’　−−−−−−−−−−−−−Ａ−−−− −Ｇ−ＣＡＧ　３’ＤＲ７，ＤＲ９５’　−−−−−−−−−−Ｇ−−−−−− −−−’−−＾−３゜１００８　１．４ｖ４ １０１５　４ｗ４，４ｖ４ １０１６　Ｎ、　Ｄ。

１０１７　１、　７ 免疫原性または免疫原性を生じ得るＶβ１７またはその断片を有するＴ細胞レセ プターは、実施例■に示した方法によりヒト被験体を免疫するのに使用され得る 。このような免疫の結果、効果的な免疫反応を生じ得る。

本発明は、現在好ましい実施態様を参照して記載してきたが、本発明の精神から 離れることなく、様々な改変がなされ得ることが理解されるべきである。従って 、本発明は以下の請求の範囲よってのみ限定される。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成３年９月１９日

Claims (49)

【特許請求の範囲】
1. １．病変を媒介するＴ細胞表面に存在するＴ細胞レセプターの免疫学的有効量、 および薬学的に許容され得る媒体を含有する、哺乳動物でのＴ細胞媒介性の病変 または調節されないＴ細胞クローンの複製を、予防または治療するためのワクチ ン。
2. ２．前記Ｔ細胞媒介性の病変が慢性関節リウマチであり、前記Ｔ細胞レセプター がＶβ１７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
3. ３．前記断片が、前記Ｔ細胞レセプターの可変領域の配列を含む、請求項１に記 載のワクチン。
4. ４．前記可変領域の配列が、β鎖可変領域である、請求項３に記載のワクチン。
5. ５．前記Ｔ細胞媒介性の病変が慢性関節リウマチであり、前記β鎖可変領域が、 Ｖβ１７と名付けられたアミノ酸配列を実質的に含む、請求項４に記載のワクチ ン。
6. ６．前記β鎖可変領域が、実質的に配列ＳＱＩＶＮＤＦＱＫを含む、請求項５に 記載のワクチン。
7. ７．前記断片がＶ（Ｄ）Ｊ結合配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
8. ８．前記断片が結合領域の配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
9. ９．さらにアジュバントを含む、請求項１に記載のワクチン。
10. １０．前記ワクチンが１つを越える型のＴ細胞レセプターまたはその断片を含有 する、請求項１に記載のワクチン。
11. １１．前記ワクチンが、同一のＴ細胞レセプターの異なる配列に対応する１つを 越える断片を含有する、請求項１に記載のワクチン。
12. １２．前記断片がキャリアーに結合された、請求項１に記載のワクチン。
13. １３．前記Ｔ細胞媒介性の病変が多発性硬化症であり、前記哺乳動物がヒトであ り、そして実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを有するＴ細胞レセプターに対して免 疫応答を起こすために前記断片が実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含む、請求項 １に記載のワクチン。
14. １４．前記Ｔ細胞レセプターが配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含む、請求項１に記載の ワクチン。
15. １５．請求項１のワクチンを患者に投与する工程を包含する、Ｔ細胞媒介性の病 変を示すかまたは示す危険のある該患者にワクチン接種する方法。
16. １６．前記ワクチンが１回を越えて投与される、請求項１５に記載の方法。
17. １７．前記ワクチンが、アジュバントを含む処方で投与される、請求項１５に記 載の方法。
18. １８．患者に請求項１のワクチンを投与する工程を包含する、該患者での調節さ れないＴ細胞クローンの複製を治療する方法。
19. １９．以下の工程を包含する、Ｔ細胞媒介性の病変の治療に使用するためのワク チンを選択する方法：ａ．該状態を媒介するＴ細胞クローンを獲得する工程；ｂ ．該状態に関連するＴ細胞クローンから、Ｔ細胞レセプターのアミノ酸配列を決 定する工程； ｃ．該関連するＴ細胞レセプターに特徴的であるが、関連しないＴ細胞レセプタ ーには特徴的でないＴ細胞レセプターの部分を選択する工程；および ｄ．該Ｔ細胞レセプターの免疫学的応答を起こす能力のある該選択された配列の アミノ酸配列を選択することにより、ワクチンを選択する工程。
20. ２０．患者からのサンプル中の、Ｖβ１７と名付けられたβ鎖可変領域またはそ の断片を有するＴ細胞を検出する工程を包含し、このようなＶβ１７含有Ｔ細胞 の異常な発現の存在が慢性関節リウマチまたは慢性関節リウマチに対する感受性 を示すものである、患者の慢性関節リウマチに対する感受性を診断または予想す る方法。
21. ２１．慢性関節リウマチに関連しないＴ細胞レセプターには実質的に生じない、 前記Ｖβ１７の部分を検出する工程を包含する、請求項２０に記載の方法。
22. ２２．前記サンプルが滑膜組織に由来する、請求項２０に記載の方法。
23. ２３．前記Ｖβ１７が、検出可能なリガンドに前記Ｖβ１７を接触させることに より検出される、請求項２０に記載の方法。
24. ２４．前記Ｖβ１７の存在が、Ｖβ１７をコードするヌクレオチド配列に相補的 なヌクレオチドプローブによって検出される、請求項２０に記載の方法。
25. ２５．Ｖβ１７含有Ｔ細胞レセプターの、その結合パートナーに対する結合を阻 害する工程を包含する、慢性関節リウマチを予防または治療する方法。
26. ２６．前記結合パートナーが、慢性関節リウマチにかかりやすくするＨＬＡ−Ｄ Ｒである、請求項２５に記載の方法。
27. ２７．前記結合が、リガンドをＶβ１７に結合することにより阻害される、請求 項２５に記載の方法。
28. ２８．前記結合が、リガンドを前記Ｖβ１７結合パートナーに結合することによ り阻害される、請求項２５に記載の方法。
29. ２９．患者中のＶβ１７含有Ｔ細胞を細胞障害または細胞増殖抑制処置すること を包含する、慢性関節リウマチを予防または治療する方法。
30. ３０．前記Ｖβ１７含有Ｔ細胞が、Ｖβ１７に選択的に結合する細胞障害性また は細胞増殖抑制性の薬剤で処置される、請求項２９に記載の方法。
31. ３１．前記薬剤が、放射活性部分、化学療法部分および化学毒性部分からなる群 から選択される部分に結合した抗体である、請求項３０に記載の方法。
32. ３２．病変を媒介するＴ細胞表面に存在する細胞レセプターに対応するＴ細胞レ セプターまたはその断片の、内部イメージである抗イデオタイプ抗体、および薬 学的に許容し得る媒体を含有する、哺乳動物のＴ細胞媒介性の病変または調節さ れないＴ細胞クローンの複製を予防しまたは治療するためのワクチン。
33. ３３．前記断片が、Ｔ細胞レセプターの可変領域の配列を含む、請求項３２に記 載のワクチン。
34. ３４．前記断片がＶ（Ｄ）Ｊ結合配列を含む、請求項３２に記載のワクチン。
35. ３５．アジュバントをさらに含有する、請求項３２に記載のワクチン。
36. ３６．前記ワクチンが、１つを越えるＴ細胞レセプターまたはその断片の、内部 イメージである抗イデオタイプ抗体を含有する、請求項３２に記載のワクチン。
37. ３７．請求項３２のワクチンを患者に投与する工程を包含する、Ｔ細胞媒介性の 病変または調節されないＴ細胞クローンの複製を示す、または示す危険のある患 者にワクチン接種する方法。
38. ３８．前記断片が結合領域の配列を含む、請求項３２のワクチン。
39. ３９．患者からのサンプル中の、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に有するＴ細胞 を検出する工程を包含し、このようなＴ細胞の存在が多発性硬化症または多発性 硬化症に対する感受性を示すものである、該患者の多発性硬化症に対する感受性 を診断または予想する方法。
40. ４０．前記配列が、検出可能なリガンドに該配列を接触させることにより検出さ れる、請求項３９に記載の方法。
41. ４１．前記配列の存在が、該配列をコードするヌクレオチド配列に相補的なヌク レオチドプローブによって検出される、請求項３９に記載の方法。
42. ４２．配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に含有するＴ細胞レセプターのその結合パ ートナーに対する結合を阻害する工程を包含する、多発性硬化症を予防また治療 する方法。
43. ４３．前記結合が、前記配列にリガンドを結合させることにより阻害される、請 求項４２に記載の方法。
44. ４４．前記結合が、前記Ｔ細胞レセプターに結合するパートナーにリガンドを結 合させることにより阻害される、請求項４２に記載の方法。
45. ４５．患者中の実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含有するＴ細胞を、細胞障害ま たは細胞増殖抑制処置する工程を包含する、患者の多発性硬化症を予防または治 療する方法。
46. ４６．前記配列に選択的に結合する細胞障害性または細胞増殖抑制性の薬剤を用 いて、前記配列を含有するＴ細胞が処置される、請求項４５に記載の方法。
47. ４７．前記薬剤が、放射活性部分および化学療法部分および走化性部分からなる 群から選択される部分に結合した抗体である、請求項４５に記載の方法。
48. ４８．病変を媒介するＴ細胞表面に存在するＴ細胞レセプターに対応するＴ細胞 レセプターまたはその断片、およびアジュバントを含有する物質の組成物。
49. ４９．配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含むペプチド。