JPH04349885A - Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸断片およびその検出方法 - Google Patents
Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸断片およびその検出方法Info
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は血清または肝臓組織中の
Ｃ型肝炎ウイルスの核酸及びその検出法、更にその核酸
にコードされるペプチド断片に関する。更に詳しくはＣ
型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸の断片、該核酸
中にある特定の長さの断片を標識したプローブにてＣ型
肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸を検出する方法あ
るいは該核酸断片をプライマーとして核酸の増幅を行い
Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸を検出する方
法、更にエンビロープ領域核酸断片にコードされるペプ
チド断片に関する。
Ｃ型肝炎ウイルスの核酸及びその検出法、更にその核酸
にコードされるペプチド断片に関する。更に詳しくはＣ
型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸の断片、該核酸
中にある特定の長さの断片を標識したプローブにてＣ型
肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸を検出する方法あ
るいは該核酸断片をプライマーとして核酸の増幅を行い
Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸を検出する方
法、更にエンビロープ領域核酸断片にコードされるペプ
チド断片に関する。
【０００２】
【従来の技術】ウイルス性肝炎はＡ型、Ｂ型、デルタ（
Ｄ）型のほか、非Ａ非Ｂ型があり、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイ
ルスには非経口伝播タイプと経口伝播タイプが存在する
と推定されている。これらの中でＢ型肝炎及び非経口伝
播タイプの非Ａ非Ｂ型肝炎に於いて慢性肝炎が知られて
おり、かかるタイプのウイルス肝炎の予防治療が現在重
要な課題となっている。Ｂ型肝炎に於いては既に原因ウ
イルスが特定され診断・予防方法がほぼ確立され今後新
たな発症もかなり少なくなるものと考えられる。
Ｄ）型のほか、非Ａ非Ｂ型があり、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイ
ルスには非経口伝播タイプと経口伝播タイプが存在する
と推定されている。これらの中でＢ型肝炎及び非経口伝
播タイプの非Ａ非Ｂ型肝炎に於いて慢性肝炎が知られて
おり、かかるタイプのウイルス肝炎の予防治療が現在重
要な課題となっている。Ｂ型肝炎に於いては既に原因ウ
イルスが特定され診断・予防方法がほぼ確立され今後新
たな発症もかなり少なくなるものと考えられる。
【０００３】一方、非経口伝播タイプの非Ａ非Ｂ型肝炎
については、主に輸血により感染し、現在受血者の１５
〜１７％の血清肝炎発症者〔日本に於いて年間１５〜３
０万人（推定）〕の９５％が、この非経口伝播タイプの
非Ａ非Ｂ型肝炎と考えられている。更にこれらの非Ａ非
Ｂ型肝炎発症者のうち約５０％は慢性肝炎へ移行し１０
〜２０年後には２０％の患者に於いて肝硬変・肝癌への
転帰を取るものと推定されている。更に該非Ａ非Ｂ型肝
炎は輸血のほかに、複数人に共通で針を使用した予防接
種或いは何等かの血液・体液などを介する行為により、
非Ａ非Ｂ型肝炎のウイルス保持者（日本に於いて推定４
００万人）および慢性肝炎患者（日本に於いて推定９０
万人）が蓄積増加してきている。
については、主に輸血により感染し、現在受血者の１５
〜１７％の血清肝炎発症者〔日本に於いて年間１５〜３
０万人（推定）〕の９５％が、この非経口伝播タイプの
非Ａ非Ｂ型肝炎と考えられている。更にこれらの非Ａ非
Ｂ型肝炎発症者のうち約５０％は慢性肝炎へ移行し１０
〜２０年後には２０％の患者に於いて肝硬変・肝癌への
転帰を取るものと推定されている。更に該非Ａ非Ｂ型肝
炎は輸血のほかに、複数人に共通で針を使用した予防接
種或いは何等かの血液・体液などを介する行為により、
非Ａ非Ｂ型肝炎のウイルス保持者（日本に於いて推定４
００万人）および慢性肝炎患者（日本に於いて推定９０
万人）が蓄積増加してきている。
【０００４】現在、特に輸血による非Ａ非Ｂ型肝炎の新
たなる患者の発生を防ぐ有効な方法が求められている。 その一つの方法として、輸血に使いうる血液の安全性の
一目安として従来トランスアミナーゼＧＰＴ値が３５以
下としていた基準値を２５以下とされた。しかしながら
ＧＰＴ値２５以下の血液のみ一応安全としても、尚輸血
患者の１５％は血清肝炎となる故に、より有効な安全血
の判定方法が求められている。
たなる患者の発生を防ぐ有効な方法が求められている。 その一つの方法として、輸血に使いうる血液の安全性の
一目安として従来トランスアミナーゼＧＰＴ値が３５以
下としていた基準値を２５以下とされた。しかしながら
ＧＰＴ値２５以下の血液のみ一応安全としても、尚輸血
患者の１５％は血清肝炎となる故に、より有効な安全血
の判定方法が求められている。
【０００５】非Ａ非Ｂ型肝炎の関連核酸の解明は近年積
極的に進められており、１９８７年米国のカイロン社に
よって輸血性非Ａ非Ｂ型肝炎の原因ウイルスの一種と考
えられるＣ型肝炎ウイルスが発表された（欧州特許公開
公報第０３１８２１６号、１９８９年５月３１日公開）
。同様の手法を用いて有馬ら（朝日モダーンメディソン
、’８８−８、９１〜９５頁、及び実験医学、第８巻３
月号、１９〜２３頁、１９９０年）はＣ型肝炎ウイルス
の変異株を得ている。更に該Ｃ型肝炎ウイルスのほぼ全
塩基配列がＰｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ，第８７巻，９５２４〜９５２８頁（
１９９０年）及びＰＣＴ国際公開ｗｏ９０／１４４３６
号公報（１９９０年１１月２９日公開）に開示された。
極的に進められており、１９８７年米国のカイロン社に
よって輸血性非Ａ非Ｂ型肝炎の原因ウイルスの一種と考
えられるＣ型肝炎ウイルスが発表された（欧州特許公開
公報第０３１８２１６号、１９８９年５月３１日公開）
。同様の手法を用いて有馬ら（朝日モダーンメディソン
、’８８−８、９１〜９５頁、及び実験医学、第８巻３
月号、１９〜２３頁、１９９０年）はＣ型肝炎ウイルス
の変異株を得ている。更に該Ｃ型肝炎ウイルスのほぼ全
塩基配列がＰｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ，第８７巻，９５２４〜９５２８頁（
１９９０年）及びＰＣＴ国際公開ｗｏ９０／１４４３６
号公報（１９９０年１１月２９日公開）に開示された。
【０００６】しかし、その後の研究に依ってこれらのＣ
型肝炎ウイルスの塩基配列はかなりの変異があり、特に
該ウイルスの予防薬としてのワクチン作成に重要と考え
られるエンビロープタンパク質をコードしているとされ
る領域に於て著しく変異しており、該領域の核酸を非Ａ
非Ｂ型肝炎患者検体から従来公知の方法で確実に検出す
るのは困難であるといわざるを得ない。更に該領域核酸
にコードされるペプチドは前記のＣ型肝炎ウイルスの夫
々においてもかなりの変異がみられ、いろいろなＣ型肝
炎患者検体からの結果を検討してみると、前記の欧州特
許公開公報第０３１８２１６号、ＰＣＴ国際公開ｗｏ９
０／１４４３６号公報及びＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，第８７巻，９５２４
〜９５２８頁（１９９０年）記載の情報に依って広く一
般のＣ型肝炎に対する予防ワクチンを作成することは不
可能と言わざるを得ない。
型肝炎ウイルスの塩基配列はかなりの変異があり、特に
該ウイルスの予防薬としてのワクチン作成に重要と考え
られるエンビロープタンパク質をコードしているとされ
る領域に於て著しく変異しており、該領域の核酸を非Ａ
非Ｂ型肝炎患者検体から従来公知の方法で確実に検出す
るのは困難であるといわざるを得ない。更に該領域核酸
にコードされるペプチドは前記のＣ型肝炎ウイルスの夫
々においてもかなりの変異がみられ、いろいろなＣ型肝
炎患者検体からの結果を検討してみると、前記の欧州特
許公開公報第０３１８２１６号、ＰＣＴ国際公開ｗｏ９
０／１４４３６号公報及びＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，第８７巻，９５２４
〜９５２８頁（１９９０年）記載の情報に依って広く一
般のＣ型肝炎に対する予防ワクチンを作成することは不
可能と言わざるを得ない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、Ｃ型肝炎ウ
イルスのエンビロープ領域核酸断片、その検出方法、検
出用の核酸オリゴマーおよび検出キットおよびコードさ
れるペプチドを提供することを目的とする。
イルスのエンビロープ領域核酸断片、その検出方法、検
出用の核酸オリゴマーおよび検出キットおよびコードさ
れるペプチドを提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、Ｃ型肝炎ウイ
ルスのエンビロープ領域の核酸、その検出法、検出に用
いる核酸オリゴマー及び検出キット、更にエンビロープ
領域のペプチドに関する。更に詳しくはＣ型肝炎に関連
した核酸および標識したプローブにてＣ型肝炎のエンビ
ロープ領域の核酸を検出する方法に関する。また該核酸
の一部をプライマーとして核酸の増幅を行うことにより
Ｃ型肝炎ウイルスの核酸を検出する方法に関する。
ルスのエンビロープ領域の核酸、その検出法、検出に用
いる核酸オリゴマー及び検出キット、更にエンビロープ
領域のペプチドに関する。更に詳しくはＣ型肝炎に関連
した核酸および標識したプローブにてＣ型肝炎のエンビ
ロープ領域の核酸を検出する方法に関する。また該核酸
の一部をプライマーとして核酸の増幅を行うことにより
Ｃ型肝炎ウイルスの核酸を検出する方法に関する。
【０００９】本発明において、慢性のＣ型肝炎の患者１
３人の各血清１００μｌからにグアニヂンチオシアネー
ト水溶液（例えば５Ｍグアニジンチオシアネート／２５
ｍＭクエン酸ナトリウム／０．５％サルコシル／０．２
Ｍβ−メルカプトエタノール）４００μｌを添加し室温
〜４２℃で数１０分間処理後、フェノ−ル／クロロフォ
ルム混合液で除タンパクし、次いでエタノール沈澱にて
核酸を得る。
３人の各血清１００μｌからにグアニヂンチオシアネー
ト水溶液（例えば５Ｍグアニジンチオシアネート／２５
ｍＭクエン酸ナトリウム／０．５％サルコシル／０．２
Ｍβ−メルカプトエタノール）４００μｌを添加し室温
〜４２℃で数１０分間処理後、フェノ−ル／クロロフォ
ルム混合液で除タンパクし、次いでエタノール沈澱にて
核酸を得る。
【００１０】この様にして得た核酸に対して、ｄＮＴＰ
ｓ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）、ランダムプライマー（例え
ばベーリンガー・マンハイム社製Ｎｏ．１０３４７３１
）存在下、ＡＭＶ逆転写酵素によってｃＤＮＡを合成す
る。
ｓ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）、ランダムプライマー（例え
ばベーリンガー・マンハイム社製Ｎｏ．１０３４７３１
）存在下、ＡＭＶ逆転写酵素によってｃＤＮＡを合成す
る。
【００１１】このようにして得られたｃＤＮＡ溶液（１
）に対してＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸の
増幅を行う。増幅は、例えばｃＤＮＡ溶液（１）に対し
て、ｄＮＴＰｓ、配列番号２で示されるオリゴＤＮＡ１
及び配列番号３で示されるオリゴＤＮＡ２、更に耐熱Ｄ
ＮＡポリメラーゼ（例えばＰｒｏｍｅｇａ社製Ｎｏ．１
０１４２３）を用いて、９５℃、１分間次いで４５℃、
２分間次いで７２℃、３分間更にこの３段階の温度時間
変化の操作を５回、更に９５℃、１分間、次いで５７℃
、２分間、次いで７２℃、３分間の３段階の温度時間変
化の操作を３０回繰り返し、最後に７２℃で７分間ポリ
メラーゼ反応を行なう。
）に対してＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸の
増幅を行う。増幅は、例えばｃＤＮＡ溶液（１）に対し
て、ｄＮＴＰｓ、配列番号２で示されるオリゴＤＮＡ１
及び配列番号３で示されるオリゴＤＮＡ２、更に耐熱Ｄ
ＮＡポリメラーゼ（例えばＰｒｏｍｅｇａ社製Ｎｏ．１
０１４２３）を用いて、９５℃、１分間次いで４５℃、
２分間次いで７２℃、３分間更にこの３段階の温度時間
変化の操作を５回、更に９５℃、１分間、次いで５７℃
、２分間、次いで７２℃、３分間の３段階の温度時間変
化の操作を３０回繰り返し、最後に７２℃で７分間ポリ
メラーゼ反応を行なう。
【００１２】次いでＥ．ｃｏｌｌ ＤＮＡポリメラー
ゼＩを用いてより完全な二本鎖ＤＮＡとなし、更にＴ４
ＤＮＡポリメラーゼ処理にて二本鎖ＤＮＡの両端を平滑
化する。制限酵素で分解しうるプライマーセットを用い
た場合にはその制限酵素で分解することができる。配列
番号２および３で示されるオリゴＤＮＡはＥｃｏＲＩで
分解することができる。次に該核酸をＭ１３ｍｐ１８Ｄ
ＮＡのＳｍａＩあるいはプライマー中に存在する制限酵
素切断部位等に結合後、大腸菌ＪＭ１０９へ導入する。
ゼＩを用いてより完全な二本鎖ＤＮＡとなし、更にＴ４
ＤＮＡポリメラーゼ処理にて二本鎖ＤＮＡの両端を平滑
化する。制限酵素で分解しうるプライマーセットを用い
た場合にはその制限酵素で分解することができる。配列
番号２および３で示されるオリゴＤＮＡはＥｃｏＲＩで
分解することができる。次に該核酸をＭ１３ｍｐ１８Ｄ
ＮＡのＳｍａＩあるいはプライマー中に存在する制限酵
素切断部位等に結合後、大腸菌ＪＭ１０９へ導入する。
【００１３】得られる形質転換株から一本鎖ＤＮＡを調
製しＭ１３シークエンシング（ダイデオキシ・ターミネ
イター）法等で一般に知られた方法、あるいは自動ＤＮ
Ａシークエンサー（アプライドバイオシステムズ社製、
モデル３７３Ａ）を用いてダイプライマー法及びダイタ
ーミネイター法にて塩基配列を決定する。
製しＭ１３シークエンシング（ダイデオキシ・ターミネ
イター）法等で一般に知られた方法、あるいは自動ＤＮ
Ａシークエンサー（アプライドバイオシステムズ社製、
モデル３７３Ａ）を用いてダイプライマー法及びダイタ
ーミネイター法にて塩基配列を決定する。
【００１４】上記方法で得られた核酸の断片は配列番号
６〜配列番号１８で表されるＤＮＡ断片、あるいはこれ
らに於てＴをＵに置き換えて表示されるＲＮＡ断片であ
る。
６〜配列番号１８で表されるＤＮＡ断片、あるいはこれ
らに於てＴをＵに置き換えて表示されるＲＮＡ断片であ
る。
【００１５】本発明の塩基配列は、前記欧州特許公開公
報第０３１８２１６号（１９８９年５月３１日公開）及
び前記Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
． ＵＳＡ，第８７巻，９５２４〜９５２８頁（１９
９０年）及びＰＣＴ国際公開公報ｗｏ９０／１４４３６
号（１９９０年１１月２９日公開）記載のＣ型肝炎ウイ
ルスの塩基配列とは夫々かなり異なっており、変異部分
を夫々変異に従い、Ｂ，Ｄ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，
Ｖ，Ｗ，Ｙで表示して、配列番号１で示される次の一般
配列 ５’−ＡＧＧＧＹＣＹＴＧＧ ＹＲＣＡＹＧＧＹＧＴ
ＹＣＧＧＧＴＹＣＴＲＧＡＲＧＡＣＲＧＣＧ ＴＧＡＡ
ＣＴＡＹＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＹＹＴＤＣＣＹＧＧ
ＴＴ ＧＣＹＣＹＴＴＹＴＣ ＴＡＴＣＴＴＹＣＴＹＹ
ＴＲＧＣＹＹＴＢＣ ＴＶＴＣＹＴＧＹＹＴ ＧＡＣＹ
ＲＹＢＣＣＨＧＹＹＴＣＣＲＣＹＹ ＡＹＶＡＲＧＴＧ
ＣＲ ＣＡＡＣＧＳＳＷＣＭＧＧＧＮＹＲＴＡＹＣ Ａ
ＴＧＴＣＡＣＢＡＲ ＹＧＡＹＴＧＹＹＣＹＡＡＣＫＣ
ＲＡＧＹＡ ＴＷＧＴＧＹＡＹＲＡ ＲＧＹＲＲＭＧＧ
ＡＹＲＹＶＡＴＣＭＴＧＣ ＷＹＤＹＹＣＣＢＧＧ Ｇ
ＴＧＹＲＹＢＣＣＹＴＧＹＧＴＹＣＧＳＧ ＡＲＲＲＹ
ＲＲＹＮＮ ＹＴＣＢＭＧＮＴＧＹＴＧＧＧＹＲＧＣＧ
Ｃ ＴＢＡＣＹＣＣＣＡＣ ＧＳＴＹＧＣＶＲＣＹＡＧ
ＲＲＡＹＶＢＹＡ ＶＹＶＴＹＣＣＣＲＣ ＢＲＹＧＶ
ＭＲＭＴＷＣＧＢＣＧＢＣＡＹＲ ＴＣＧＡＹＹＴＧＣ
Ｔ ＹＧＴＨＧＧＧＲＳＶＧＣＹＲＣＹＹＴＣＴ ＧＹ
ＴＣＳＧＣＹＶＴ ＳＴＡＹＧＴＫＧＧＲＧＡＹＹＴＢ
ＴＧＣＧ ＧＲＴＣＹＧＴＹＴＴ ＹＣＴＹＲＴＹＴＣ
ＹＣＡＢＹＴＧＴＴＴＡ ＣＣＹＴＣＴＭＢＭＣ ＹＭ
ＧＳＭＤＧＹＡＹＧＤＧＡＣＲＤＹＲＣ ＡＲＧＲＹＴ
ＧＹＡＡ ＹＴＧＹＴＣＤＭＴＹＴＡＹＳＣＹＧＧＳＣ
ＡＹＲＴＲＷＣＲＧＧ ＫＣＡＹＣＧＹＡＴＧＧＣＨ
ＴＧＧＧＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣ
ＶＣＣＹＡＣＲＤＣＲＧＣＢＹ ＴＲＧＴＲＲＴＤＫＣ
ＫＣＡＧＢ−３’
報第０３１８２１６号（１９８９年５月３１日公開）及
び前記Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
． ＵＳＡ，第８７巻，９５２４〜９５２８頁（１９
９０年）及びＰＣＴ国際公開公報ｗｏ９０／１４４３６
号（１９９０年１１月２９日公開）記載のＣ型肝炎ウイ
ルスの塩基配列とは夫々かなり異なっており、変異部分
を夫々変異に従い、Ｂ，Ｄ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，
Ｖ，Ｗ，Ｙで表示して、配列番号１で示される次の一般
配列 ５’−ＡＧＧＧＹＣＹＴＧＧ ＹＲＣＡＹＧＧＹＧＴ
ＹＣＧＧＧＴＹＣＴＲＧＡＲＧＡＣＲＧＣＧ ＴＧＡＡ
ＣＴＡＹＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＹＹＴＤＣＣＹＧＧ
ＴＴ ＧＣＹＣＹＴＴＹＴＣ ＴＡＴＣＴＴＹＣＴＹＹ
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ＲＹＢＣＣＨＧＹＹＴＣＣＲＣＹＹ ＡＹＶＡＲＧＴＧ
ＣＲ ＣＡＡＣＧＳＳＷＣＭＧＧＧＮＹＲＴＡＹＣ Ａ
ＴＧＴＣＡＣＢＡＲ ＹＧＡＹＴＧＹＹＣＹＡＡＣＫＣ
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ＡＹＲＹＶＡＴＣＭＴＧＣ ＷＹＤＹＹＣＣＢＧＧ Ｇ
ＴＧＹＲＹＢＣＣＹＴＧＹＧＴＹＣＧＳＧ ＡＲＲＲＹ
ＲＲＹＮＮ ＹＴＣＢＭＧＮＴＧＹＴＧＧＧＹＲＧＣＧ
Ｃ ＴＢＡＣＹＣＣＣＡＣ ＧＳＴＹＧＣＶＲＣＹＡＧ
ＲＲＡＹＶＢＹＡ ＶＹＶＴＹＣＣＣＲＣ ＢＲＹＧＶ
ＭＲＭＴＷＣＧＢＣＧＢＣＡＹＲ ＴＣＧＡＹＹＴＧＣ
Ｔ ＹＧＴＨＧＧＧＲＳＶＧＣＹＲＣＹＹＴＣＴ ＧＹ
ＴＣＳＧＣＹＶＴ ＳＴＡＹＧＴＫＧＧＲＧＡＹＹＴＢ
ＴＧＣＧ ＧＲＴＣＹＧＴＹＴＴ ＹＣＴＹＲＴＹＴＣ
ＹＣＡＢＹＴＧＴＴＴＡ ＣＣＹＴＣＴＭＢＭＣ ＹＭ
ＧＳＭＤＧＹＡＹＧＤＧＡＣＲＤＹＲＣ ＡＲＧＲＹＴ
ＧＹＡＡ ＹＴＧＹＴＣＤＭＴＹＴＡＹＳＣＹＧＧＳＣ
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ＶＣＣＹＡＣＲＤＣＲＧＣＢＹ ＴＲＧＴＲＲＴＤＫＣ
ＫＣＡＧＢ−３’
【００１６】（ここでＲはＧまたは
Ａ，ＹはＴまたはＣ，ＤはＧまたはＡまたはＴ，ＶはＡ
またはＧまたはＣ，ＢはＣまたはＴまたはＧ，ＨはＡま
たはＣまたはＴ，ＫはＧまたはＴ，ＭはＡまたはＣ，Ｎ
はＡまたはＣまたはＧまたはＴ， ＳはＧまたはＣ，Ｗ
はＡまたはＴを夫々表す）およびこの配列に於てＴをＵ
に置き換えて表示される核酸である。本発明はまたこれ
らの相補鎖を包含する。
Ａ，ＹはＴまたはＣ，ＤはＧまたはＡまたはＴ，ＶはＡ
またはＧまたはＣ，ＢはＣまたはＴまたはＧ，ＨはＡま
たはＣまたはＴ，ＫはＧまたはＴ，ＭはＡまたはＣ，Ｎ
はＡまたはＣまたはＧまたはＴ， ＳはＧまたはＣ，Ｗ
はＡまたはＴを夫々表す）およびこの配列に於てＴをＵ
に置き換えて表示される核酸である。本発明はまたこれ
らの相補鎖を包含する。
【００１７】Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｔ（あるいはＵ）で表示され
る部分がすべてのＣ型肝炎ウイルスに共通している部分
であり、かなり変異があることが分かる。本発明の核酸
配列は多数のＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸
の一般化した塩基配列である。
る部分がすべてのＣ型肝炎ウイルスに共通している部分
であり、かなり変異があることが分かる。本発明の核酸
配列は多数のＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸
の一般化した塩基配列である。
【００１８】本発明は、配列番号６〜配列番号１８の塩
基配列を有する核酸断片中に存在する少なくとも８塩基
の長さの断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーを
包含する。該オリゴマーは標識化合物を結合させてＤＮ
ＡまたなＲＮＡプローブとして、または核酸増幅のプラ
イマーとして用いることが出来る。
基配列を有する核酸断片中に存在する少なくとも８塩基
の長さの断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーを
包含する。該オリゴマーは標識化合物を結合させてＤＮ
ＡまたなＲＮＡプローブとして、または核酸増幅のプラ
イマーとして用いることが出来る。
【００１９】本発明の方法により、配列番号１およびこ
の相補な塩基配列ならびにこれらにおいてＴをＵに置き
換えて表示される塩基配列を有する核酸断片中に存在す
るＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーを標識化合物で標識し
たＤＮＡまたはＲＮＡプローブを用いて、広くＣ型肝炎
ウイルスのエンビロープ領域核酸を検出することができ
る。
の相補な塩基配列ならびにこれらにおいてＴをＵに置き
換えて表示される塩基配列を有する核酸断片中に存在す
るＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーを標識化合物で標識し
たＤＮＡまたはＲＮＡプローブを用いて、広くＣ型肝炎
ウイルスのエンビロープ領域核酸を検出することができ
る。
【００２０】該ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーの長さは
少なくとも８塩基、好ましくは１２塩基以上の長さであ
る。本発明に於いて、非Ａ非Ｂ非Ｃ型肝炎の関連核酸を
検出しようとする場合、上記核酸断片の少なくとも８塩
基以上、好ましくは１２塩基以上、更に好ましくは２０
塩基以上の断片ＤＮＡまたはＲＮＡを当業界にて一般に
知られた核酸標識化合物で標識したプローブを用いてサ
ザーンハイブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイ
ゼーション、ドットハイブリダイゼーション、スロット
ハイブリダイゼーションなどで相同性を見ることにより
検出し得る。
少なくとも８塩基、好ましくは１２塩基以上の長さであ
る。本発明に於いて、非Ａ非Ｂ非Ｃ型肝炎の関連核酸を
検出しようとする場合、上記核酸断片の少なくとも８塩
基以上、好ましくは１２塩基以上、更に好ましくは２０
塩基以上の断片ＤＮＡまたはＲＮＡを当業界にて一般に
知られた核酸標識化合物で標識したプローブを用いてサ
ザーンハイブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイ
ゼーション、ドットハイブリダイゼーション、スロット
ハイブリダイゼーションなどで相同性を見ることにより
検出し得る。
【００２１】標識化合物としては、放射性化合物、アビ
ジンあるいはジゴキシゲニン及び蛍光発色物質等が挙げ
られる。検出しようとする検体、例えば血清や肝臓組織
から調製した核酸はそのままでも使えるが、核酸の分解
を起こさない適当な緩衝液中で処理した検体に対して、
蛋白分解処理し、次いでフェノールまたはフェノール／
クロロフォルム混合液さらに必要な場合イソアミルアル
コールをフェノールの１／１０〜１／２０程度添加した
混合液にて除蛋白し、水相を回収し３Ｍの酢酸ナトリウ
ム水溶液（ｐＨ５．４）の如き適当な塩溶液を１０分の
１容量添加後次いでエタノールを２〜３倍容量またはイ
ソプロパノールを等容量加えて、−８０℃で２０分間ま
たは−２０℃で２時間保持後、高速遠心（１５，０００
〜４０，０００ｒｐｍ、５〜３０分間）して沈澱として
得た核酸でもよい。あるいは上記の除蛋白操作後得られ
た水相に対して、クロロフォルムまたはヂエチルエーテ
ルの如き難水溶性の溶剤にて水相からフェノールを除去
して得た核酸の水溶液でもよい。
ジンあるいはジゴキシゲニン及び蛍光発色物質等が挙げ
られる。検出しようとする検体、例えば血清や肝臓組織
から調製した核酸はそのままでも使えるが、核酸の分解
を起こさない適当な緩衝液中で処理した検体に対して、
蛋白分解処理し、次いでフェノールまたはフェノール／
クロロフォルム混合液さらに必要な場合イソアミルアル
コールをフェノールの１／１０〜１／２０程度添加した
混合液にて除蛋白し、水相を回収し３Ｍの酢酸ナトリウ
ム水溶液（ｐＨ５．４）の如き適当な塩溶液を１０分の
１容量添加後次いでエタノールを２〜３倍容量またはイ
ソプロパノールを等容量加えて、−８０℃で２０分間ま
たは−２０℃で２時間保持後、高速遠心（１５，０００
〜４０，０００ｒｐｍ、５〜３０分間）して沈澱として
得た核酸でもよい。あるいは上記の除蛋白操作後得られ
た水相に対して、クロロフォルムまたはヂエチルエーテ
ルの如き難水溶性の溶剤にて水相からフェノールを除去
して得た核酸の水溶液でもよい。
【００２２】本発明に於いては、上記のハイブリダイゼ
ーション法によるＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域
核酸の検出方法の他に、更に高感度の診断方法として、
前記の塩基配列（配列番号１またはその相補配列）を有
するＤＮＡ断片またはこれらの配列と相同な配列を有す
るＲＮＡ断片中に存在する断片よりなるＤＮＡまたはＲ
ＮＡオリゴマーをプライマーとして、核酸の増幅を行う
ことによりＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸を
検出する方法が提供される。
ーション法によるＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域
核酸の検出方法の他に、更に高感度の診断方法として、
前記の塩基配列（配列番号１またはその相補配列）を有
するＤＮＡ断片またはこれらの配列と相同な配列を有す
るＲＮＡ断片中に存在する断片よりなるＤＮＡまたはＲ
ＮＡオリゴマーをプライマーとして、核酸の増幅を行う
ことによりＣ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸を
検出する方法が提供される。
【００２３】更に詳しくは、前記の塩基配列（配列番号
１）中に存在する断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡオリ
ゴマー、および該塩基配列とは相補な塩基配列中に存在
する断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーをプラ
イマーとして核酸の増幅を行うことにより、Ｃ型肝炎ウ
イルスのエンビロープ領域核酸を検出する方法が提供さ
れる。
１）中に存在する断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡオリ
ゴマー、および該塩基配列とは相補な塩基配列中に存在
する断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡオリゴマーをプラ
イマーとして核酸の増幅を行うことにより、Ｃ型肝炎ウ
イルスのエンビロープ領域核酸を検出する方法が提供さ
れる。
【００２４】プライマーとして用いるＤＮＡまたはＲＮ
Ａオリゴマーは、構成塩基の８０％以上がＡ、Ｃ、Ｇ、
Ｔ（またはＵ）またはＲであり塩基の長さは少なくとも
８塩基、好ましくは１２塩基以上であり、配列番号１ま
たはこれの相補配列の中に見出される配列断片である。 実用上１２〜３０塩基程度が好ましい。またＹとしては
Ｔが好ましい。配列番号１の塩基配列において、１〜９
２番目の配列および／または５０２〜５３６番目の相補
配列に含まれる断片をプライマーとして用いることが好
ましい。
Ａオリゴマーは、構成塩基の８０％以上がＡ、Ｃ、Ｇ、
Ｔ（またはＵ）またはＲであり塩基の長さは少なくとも
８塩基、好ましくは１２塩基以上であり、配列番号１ま
たはこれの相補配列の中に見出される配列断片である。 実用上１２〜３０塩基程度が好ましい。またＹとしては
Ｔが好ましい。配列番号１の塩基配列において、１〜９
２番目の配列および／または５０２〜５３６番目の相補
配列に含まれる断片をプライマーとして用いることが好
ましい。
【００２５】核酸の増幅法としては、標的配列に結合す
るオリゴヌクレオチドプライマーで囲まれた遺伝子部分
の多数のコピーを合成する方法がある。この反応は、Ｄ
ＮＡの変性→プライマーの標的配列との結合（アニーリ
ング）→ＤＮＡポリメラーゼによる鋳型ＤＮＡの相補Ｄ
ＮＡ鎖の伸長の３段階処理からなり、この３段階処理を
繰り返すことにより最初の標的核酸を指数関数的に増幅
するものである。
るオリゴヌクレオチドプライマーで囲まれた遺伝子部分
の多数のコピーを合成する方法がある。この反応は、Ｄ
ＮＡの変性→プライマーの標的配列との結合（アニーリ
ング）→ＤＮＡポリメラーゼによる鋳型ＤＮＡの相補Ｄ
ＮＡ鎖の伸長の３段階処理からなり、この３段階処理を
繰り返すことにより最初の標的核酸を指数関数的に増幅
するものである。
【００２６】また、前もって合成されたＤＮＡ鎖（プロ
ーブ）を連結するためにリガーゼを用いる方法がある。 これらのプローブが相補的な塩基配列に結合すると、リ
ガーゼがそれらをつなぎ合わせる。つぎに２つの鋳型が
ともにつぎのサイクルで特定の塩基配列を作り続け増幅
させることが出来る。
ーブ）を連結するためにリガーゼを用いる方法がある。 これらのプローブが相補的な塩基配列に結合すると、リ
ガーゼがそれらをつなぎ合わせる。つぎに２つの鋳型が
ともにつぎのサイクルで特定の塩基配列を作り続け増幅
させることが出来る。
【００２７】また、ＲＮＡを標的とした場合において、
次の方法がある。即ち、まずプライマー１を標的ＲＮＡ
に結合させる。このプライマーには、５’末端部分にＲ
ＮＡポリメラーゼのプロモーター配列を組み込んである
。プライマー１を標的ＲＮＡに結合して、逆転写酵素に
よりプライマー１から相補鎖ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）をつく
る。この際に最初の鋳型ＲＮＡはＲＮａｓｅＨによって
分解除去され一本鎖ｃＤＮＡとなる。次に一本鎖のｃＤ
ＮＡの３’末端側にプライマー２を結合し二本鎖ＤＮＡ
となす。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーター配列部分も
二本鎖化して、ＲＮＡポリメラーゼが働き、最初とは相
補のＲＮＡ（ｃＲＮＡ）のコピーが多数合成される。
次の方法がある。即ち、まずプライマー１を標的ＲＮＡ
に結合させる。このプライマーには、５’末端部分にＲ
ＮＡポリメラーゼのプロモーター配列を組み込んである
。プライマー１を標的ＲＮＡに結合して、逆転写酵素に
よりプライマー１から相補鎖ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）をつく
る。この際に最初の鋳型ＲＮＡはＲＮａｓｅＨによって
分解除去され一本鎖ｃＤＮＡとなる。次に一本鎖のｃＤ
ＮＡの３’末端側にプライマー２を結合し二本鎖ＤＮＡ
となす。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーター配列部分も
二本鎖化して、ＲＮＡポリメラーゼが働き、最初とは相
補のＲＮＡ（ｃＲＮＡ）のコピーが多数合成される。
【００２８】次に、これらのｃＲＮＡを鋳型として多数
のｃＤＮＡが合成され、これらの一連の循環的な反応で
最初の微量ＲＮＡを増幅することが出来る。ＲＮＡを増
幅させるには、ＲＮＡ型バクテリオファージＱβのＲＮ
Ａ依存性ｔＲＮＡであるＱβレプリカーゼを用いる方法
もある。
のｃＤＮＡが合成され、これらの一連の循環的な反応で
最初の微量ＲＮＡを増幅することが出来る。ＲＮＡを増
幅させるには、ＲＮＡ型バクテリオファージＱβのＲＮ
Ａ依存性ｔＲＮＡであるＱβレプリカーゼを用いる方法
もある。
【００２９】ＤＮＡポリメラーゼを用いる方法に於いて
は、検体の血清或いは肝臓組織から抽出した核酸を前述
の方法と同様に、逆転写酵素及びランダムなオリゴマー
ＤＮＡ混合物を使用してｃＤＮＡを合成する。ＤＮＡオ
リゴマーの混合物として、好ましくはＤＮＡのテトラマ
ー〜オクタマーの混合物、更に好ましくはＤＮＡのヘプ
タマー〜ペンタマーの混合物、特に好ましくはＤＮＡヘ
キサマーの混合物、例えばベーリンガー・マンハイム山
之内（株）の“ランダム”ｐ（ｄＮ）６ の如きものが
挙げられる。オリゴマーＤＮＡ及び逆転写酵素を使用し
て処理されたｃＤＮＡの増幅を行う。
は、検体の血清或いは肝臓組織から抽出した核酸を前述
の方法と同様に、逆転写酵素及びランダムなオリゴマー
ＤＮＡ混合物を使用してｃＤＮＡを合成する。ＤＮＡオ
リゴマーの混合物として、好ましくはＤＮＡのテトラマ
ー〜オクタマーの混合物、更に好ましくはＤＮＡのヘプ
タマー〜ペンタマーの混合物、特に好ましくはＤＮＡヘ
キサマーの混合物、例えばベーリンガー・マンハイム山
之内（株）の“ランダム”ｐ（ｄＮ）６ の如きものが
挙げられる。オリゴマーＤＮＡ及び逆転写酵素を使用し
て処理されたｃＤＮＡの増幅を行う。
【００３０】ｃＤＮＡの増幅にはＤＮＡ依存型のＤＮＡ
ポリメラーゼを使用する。かかるＤＮＡポリメラーゼと
しては、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ、Ｔ４ＤＮＡポリ
メラーゼ、あるいは耐熱ＤＮＡポリメラーゼで知られる
ＴｔｈＤＮＡポリメラーゼまたはＴａｑＤＮＡポリメラ
ーゼなどを挙げることが出来る。
ポリメラーゼを使用する。かかるＤＮＡポリメラーゼと
しては、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ、Ｔ４ＤＮＡポリ
メラーゼ、あるいは耐熱ＤＮＡポリメラーゼで知られる
ＴｔｈＤＮＡポリメラーゼまたはＴａｑＤＮＡポリメラ
ーゼなどを挙げることが出来る。
【００３１】これらのＤＮＡポリメラーゼは夫々供給者
の使用能書に従って使用し得る。これらのＤＮＡポリメ
ラーゼのうち、耐熱ＤＮＡポリメラーゼで知られるＴｔ
ｈＤＮＡポリメラーゼまたはＴａｑＤＮＡポリメラーゼ
が好ましい。使用するＴｔｈＤＮＡポリメラーゼは東洋
紡製（Ｎｏ．ＴＴＨ−１０３）、ＴａｑＤＮＡポリメラ
ーゼはＰｒｏｍｅｇａ社（例えばＮｏ．１０１４２３）
、ボクスイ・ブラウン社、ベセスダ・リサーチ・ラボラ
トリー社、宝酒造社などから夫々販売されているものを
使用できる。これらのＤＮＡポリメラーゼのうちＴｔｈ
ＤＮＡポリメラーゼ、Ｐｒｏｍｅｇａ社のＴａｑＤＮＡ
ポリメラーゼが酵素活性が高いので一層好ましい。
の使用能書に従って使用し得る。これらのＤＮＡポリメ
ラーゼのうち、耐熱ＤＮＡポリメラーゼで知られるＴｔ
ｈＤＮＡポリメラーゼまたはＴａｑＤＮＡポリメラーゼ
が好ましい。使用するＴｔｈＤＮＡポリメラーゼは東洋
紡製（Ｎｏ．ＴＴＨ−１０３）、ＴａｑＤＮＡポリメラ
ーゼはＰｒｏｍｅｇａ社（例えばＮｏ．１０１４２３）
、ボクスイ・ブラウン社、ベセスダ・リサーチ・ラボラ
トリー社、宝酒造社などから夫々販売されているものを
使用できる。これらのＤＮＡポリメラーゼのうちＴｔｈ
ＤＮＡポリメラーゼ、Ｐｒｏｍｅｇａ社のＴａｑＤＮＡ
ポリメラーゼが酵素活性が高いので一層好ましい。
【００３２】本発明に於て、ＤＮＡポリメラーゼを用い
てＤＮＡの増幅を行うに際して使用するプライマーとし
てオリゴＤＮＡセットを用いる。該オリゴＤＮＡセット
は前記塩基配列（配列番号１）を有する断片中に存在す
る少なくとも８塩基の長さの断片よりなるＤＮＡオリゴ
マー、および配列番号１の相補鎖断片中に存在する少な
くとも８塩基の長さの断片よりなるＤＮＡオリゴマーで
ある。
てＤＮＡの増幅を行うに際して使用するプライマーとし
てオリゴＤＮＡセットを用いる。該オリゴＤＮＡセット
は前記塩基配列（配列番号１）を有する断片中に存在す
る少なくとも８塩基の長さの断片よりなるＤＮＡオリゴ
マー、および配列番号１の相補鎖断片中に存在する少な
くとも８塩基の長さの断片よりなるＤＮＡオリゴマーで
ある。
【００３３】両ＤＮＡオリゴマーはお互いに相補鎖上に
ある配列であって、且つお互いに塩基配列の３’側の下
流に位置しているのが好ましい。使用するＤＮＡオリゴ
マーの長さは好ましくは１２塩基以上である。長さの上
限は特に制限はないが、一般に４０塩基以下で十分であ
る。本発明に於て、一般にはお互いに相補鎖ＤＮＡの上
にあるＤＮＡオリゴマーをセットとして使用し、前記ｃ
ＤＮＡの増幅反応を行うが、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスが
患者により変異している事が多い故に、複数のＤＮＡオ
リゴマーセット、即ち２セット以上の組合せで核酸増幅
反応を実施することは、一層核酸の検出をよくするので
好ましい。
ある配列であって、且つお互いに塩基配列の３’側の下
流に位置しているのが好ましい。使用するＤＮＡオリゴ
マーの長さは好ましくは１２塩基以上である。長さの上
限は特に制限はないが、一般に４０塩基以下で十分であ
る。本発明に於て、一般にはお互いに相補鎖ＤＮＡの上
にあるＤＮＡオリゴマーをセットとして使用し、前記ｃ
ＤＮＡの増幅反応を行うが、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスが
患者により変異している事が多い故に、複数のＤＮＡオ
リゴマーセット、即ち２セット以上の組合せで核酸増幅
反応を実施することは、一層核酸の検出をよくするので
好ましい。
【００３４】また使用するＤＮＡオリゴマーの塩基配列
は、３’端の塩基配列が検出しようとする核酸の配列に
一致しておればそのほかは２割程度のミスマッチを含む
ものでも使用し得る。
は、３’端の塩基配列が検出しようとする核酸の配列に
一致しておればそのほかは２割程度のミスマッチを含む
ものでも使用し得る。
【００３５】本発明に於て、核酸の増幅反応は前述の検
体より抽出精製したのち逆転写酵素処理したｃＤＮＡに
対して、適当なオリゴＤＮＡおよび耐熱ＤＮＡポリメラ
ーゼを用いた従来公知の方法で実施できるが、一般には
先述の得られたｃＤＮＡに対して、終濃度が塩化カリウ
ム０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは０．０２〜０．０７
Ｍ、トリス塩酸（ｐＨ７．５〜８．５、好ましくはｐＨ
７．８〜８．３）０．００１〜０．０５Ｍ、好ましくは
０．００５〜０．０３Ｍ、塩化マグネシウム０．３〜３
ｍＭ、好ましくは０．５〜２ｍＭ、ゼラチン０．００１
〜０．１、好ましくは０．００５〜０．０４％、トリト
ンＸ−１００（ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）あるいは
ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）等の中性ディタージェント０．
００１〜０．１％、好ましくは０．００５〜０．０５％
、ｄＮＴＰｓ［デオキシアデノシン酸三燐酸ナトリウム
塩（ｄＡＴＰ）、デオキシグアノシン酸三燐酸ナトリウ
ム塩（ｄＧＴＰ）、デオキシシトシン酸三燐酸ナトリウ
ム塩（ｄＣＴＰ）、およびチミヂン酸三燐酸ナトリウム
塩（ｄＴＴＰ）各々の］５０〜７００μＭ、好ましくは
１００〜４００μＭ，及びオリゴＤＮＡ夫々０．００１
−０．０５μｇ／μｌ、好ましくは０．００２−０．０
２μｇ／μｌ、更に耐熱ＤＮＡポリメラーゼ０．００５
〜０．１ユニット／μｌ、好ましくは０．０１〜０．０
５ユニット／μｌ程度となるように各成分を添加する。
体より抽出精製したのち逆転写酵素処理したｃＤＮＡに
対して、適当なオリゴＤＮＡおよび耐熱ＤＮＡポリメラ
ーゼを用いた従来公知の方法で実施できるが、一般には
先述の得られたｃＤＮＡに対して、終濃度が塩化カリウ
ム０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは０．０２〜０．０７
Ｍ、トリス塩酸（ｐＨ７．５〜８．５、好ましくはｐＨ
７．８〜８．３）０．００１〜０．０５Ｍ、好ましくは
０．００５〜０．０３Ｍ、塩化マグネシウム０．３〜３
ｍＭ、好ましくは０．５〜２ｍＭ、ゼラチン０．００１
〜０．１、好ましくは０．００５〜０．０４％、トリト
ンＸ−１００（ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）あるいは
ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）等の中性ディタージェント０．
００１〜０．１％、好ましくは０．００５〜０．０５％
、ｄＮＴＰｓ［デオキシアデノシン酸三燐酸ナトリウム
塩（ｄＡＴＰ）、デオキシグアノシン酸三燐酸ナトリウ
ム塩（ｄＧＴＰ）、デオキシシトシン酸三燐酸ナトリウ
ム塩（ｄＣＴＰ）、およびチミヂン酸三燐酸ナトリウム
塩（ｄＴＴＰ）各々の］５０〜７００μＭ、好ましくは
１００〜４００μＭ，及びオリゴＤＮＡ夫々０．００１
−０．０５μｇ／μｌ、好ましくは０．００２−０．０
２μｇ／μｌ、更に耐熱ＤＮＡポリメラーゼ０．００５
〜０．１ユニット／μｌ、好ましくは０．０１〜０．０
５ユニット／μｌ程度となるように各成分を添加する。
【００３６】本発明では総反応液量は、５〜２００μｌ
、好ましくは１０〜１００μｌである。本発明では核酸
増幅反応中に水分がチューブ上部壁に気化付着するのを
防ぐために反応液の上に流動パラフィンの如き非水溶性
で且つ反応液より比重の小さい液体を重層する。重層量
は上記反応液の上部表面を十分覆う程度である。普通５
０μｌ程度で十分である。
、好ましくは１０〜１００μｌである。本発明では核酸
増幅反応中に水分がチューブ上部壁に気化付着するのを
防ぐために反応液の上に流動パラフィンの如き非水溶性
で且つ反応液より比重の小さい液体を重層する。重層量
は上記反応液の上部表面を十分覆う程度である。普通５
０μｌ程度で十分である。
【００３７】上述の反応混合物に対して、温度及び時間
の一連の多段階変化にて酵素反応を実施し核酸の増幅を
行う核酸の増幅は、核酸の一本鎖化の処理（ディネーチ
ャ）→オリゴＤＮＡの付着（アニーリング）→ＤＮＡの
二本鎖化の従来公知の処理方法を実施することによりな
され得る。
の一連の多段階変化にて酵素反応を実施し核酸の増幅を
行う核酸の増幅は、核酸の一本鎖化の処理（ディネーチ
ャ）→オリゴＤＮＡの付着（アニーリング）→ＤＮＡの
二本鎖化の従来公知の処理方法を実施することによりな
され得る。
【００３８】核酸の一本鎖化の処理として８５〜９９℃
・１秒〜１０分間、好ましくは９０〜９８℃・３秒〜６
分間の処理で実施し得る。かかる核酸の一本鎖化の次ぎ
にオリゴＤＮＡの付着処理を行う。オリゴＤＮＡの付着
の為には４０〜６５℃・１０秒〜５分間、好ましくは４
５〜６０℃・２０秒〜２分間の保持を行う。オリゴＤＮ
Ａの付着の次ぎにＤＮＡの二本鎖化反応を行う。ＤＮＡ
の二本鎖化反応のためには６５〜７５℃・１０秒〜５分
間、好ましくは６８〜７３℃・２０秒〜３分間の保持を
行う。
・１秒〜１０分間、好ましくは９０〜９８℃・３秒〜６
分間の処理で実施し得る。かかる核酸の一本鎖化の次ぎ
にオリゴＤＮＡの付着処理を行う。オリゴＤＮＡの付着
の為には４０〜６５℃・１０秒〜５分間、好ましくは４
５〜６０℃・２０秒〜２分間の保持を行う。オリゴＤＮ
Ａの付着の次ぎにＤＮＡの二本鎖化反応を行う。ＤＮＡ
の二本鎖化反応のためには６５〜７５℃・１０秒〜５分
間、好ましくは６８〜７３℃・２０秒〜３分間の保持を
行う。
【００３９】本発明に於いて上記の一連の多段階酵素反
応処理を繰り返すことは、核酸の一層の増幅をもたらす
ので好ましい。一連の多段階酵素反応処理の繰り返し回
数は用いる耐熱酵素の活性が持続する限り実施すること
ができる。しかし一般に１５〜５０回程度、好ましくは
２０〜４０回、更に好ましくは２５〜３５回程度の繰り
返しである。
応処理を繰り返すことは、核酸の一層の増幅をもたらす
ので好ましい。一連の多段階酵素反応処理の繰り返し回
数は用いる耐熱酵素の活性が持続する限り実施すること
ができる。しかし一般に１５〜５０回程度、好ましくは
２０〜４０回、更に好ましくは２５〜３５回程度の繰り
返しである。
【００４０】上記の一連の多段階酵素反応処理の繰り返
しの開始直前に、９８〜９２℃・３０秒〜７分間、好ま
しくは９３〜９６℃・２〜５分間程度の核酸の完全一本
鎖化の為の処理を実施しておくのは好ましいことである
。更に一連の多段階酵素反応処理の繰り返しを行うに際
し、最初の８回迄、好ましくは５回迄はオリゴＤＮＡの
付着処理条件の温度を、それ以降の条件よりも一般に低
くするのが好ましい。
しの開始直前に、９８〜９２℃・３０秒〜７分間、好ま
しくは９３〜９６℃・２〜５分間程度の核酸の完全一本
鎖化の為の処理を実施しておくのは好ましいことである
。更に一連の多段階酵素反応処理の繰り返しを行うに際
し、最初の８回迄、好ましくは５回迄はオリゴＤＮＡの
付着処理条件の温度を、それ以降の条件よりも一般に低
くするのが好ましい。
【００４１】一連の温度変化を何度も繰り返すに従い耐
熱ＤＮＡポリメラーゼの酵素活性が低下するため、繰り
返しの回数は一般には３０回程度より多くしても更に核
酸の増幅は余り期待できないが、熱変性条件が９２℃以
下或いは９５℃でも２０秒間以下の処理の場合３０回以
上でも更に十分な増幅が起こるので、回数を４５回程度
まで増すのは好ましいことである。
熱ＤＮＡポリメラーゼの酵素活性が低下するため、繰り
返しの回数は一般には３０回程度より多くしても更に核
酸の増幅は余り期待できないが、熱変性条件が９２℃以
下或いは９５℃でも２０秒間以下の処理の場合３０回以
上でも更に十分な増幅が起こるので、回数を４５回程度
まで増すのは好ましいことである。
【００４２】また本増幅反応に於いて反応液中に、Ｔｒ
ｉｔｏｎ Ｘ−１００（ポリエチレン・グリコール・
モノ−ｐ−イソ−オクチルフェニル・エーテル）、Ｂｒ
ｉｊｉ−５８（ポリオキシエチレン・セチル・アルコー
ル・エーテル）、Ｂｒｉｊｉ−３５（ポリオキシエチレ
ン・ラウリル・アルコール・エーテル）、またはＴｗｅ
ｅｎ（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、
ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキ
シエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエ
チレンソルビタンモノステアレート等）の如き中性の界
面活性剤を０．００１〜０．０５％程度添加することに
より核酸増幅が更によくなるのでこれらの界面活性剤添
加しておくのは好ましいことである。
ｉｔｏｎ Ｘ−１００（ポリエチレン・グリコール・
モノ−ｐ−イソ−オクチルフェニル・エーテル）、Ｂｒ
ｉｊｉ−５８（ポリオキシエチレン・セチル・アルコー
ル・エーテル）、Ｂｒｉｊｉ−３５（ポリオキシエチレ
ン・ラウリル・アルコール・エーテル）、またはＴｗｅ
ｅｎ（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、
ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキ
シエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエ
チレンソルビタンモノステアレート等）の如き中性の界
面活性剤を０．００１〜０．０５％程度添加することに
より核酸増幅が更によくなるのでこれらの界面活性剤添
加しておくのは好ましいことである。
【００４３】上記の増幅反応を実施した後、必要ならば
反応水溶液の１〜５μｌに対して、再び上記と同様の第
二回目の核酸増幅操作を再度施すのが好ましい。
反応水溶液の１〜５μｌに対して、再び上記と同様の第
二回目の核酸増幅操作を再度施すのが好ましい。
【００４４】核酸の増幅操作を実施後、一般には２〜４
％のアガロースゲル上で反応水溶液の３〜１０μｌを電
気泳動して、一般にはエチジウウム・ブロマイド染色後
、ＵＶ照射して発光せしめ、増幅核酸を検出する。また
は電気泳動の終了したアガロースゲルを乾燥せしめ、核
酸増幅に使用したＤＮＡオリゴマーセット間に含まれる
核酸をプローブとして、当業界公知のハイブリダイゼー
ションの方法にて増幅核酸の検出を行える。
％のアガロースゲル上で反応水溶液の３〜１０μｌを電
気泳動して、一般にはエチジウウム・ブロマイド染色後
、ＵＶ照射して発光せしめ、増幅核酸を検出する。また
は電気泳動の終了したアガロースゲルを乾燥せしめ、核
酸増幅に使用したＤＮＡオリゴマーセット間に含まれる
核酸をプローブとして、当業界公知のハイブリダイゼー
ションの方法にて増幅核酸の検出を行える。
【００４５】或いは電気泳動の終了したアガロースゲル
を当業界でサザーンハイブリダイゼーションで知られた
方法により、ニトロセルロースメンブレンまたはナイロ
ンメンブレンにサザーントランスファーまたはバキュウ
ムトランスファーした変性ＤＮＡを、核酸増幅に使用し
たＤＮＡオリゴマーセット間に含まれる核酸をプローブ
として検出する。
を当業界でサザーンハイブリダイゼーションで知られた
方法により、ニトロセルロースメンブレンまたはナイロ
ンメンブレンにサザーントランスファーまたはバキュウ
ムトランスファーした変性ＤＮＡを、核酸増幅に使用し
たＤＮＡオリゴマーセット間に含まれる核酸をプローブ
として検出する。
【００４６】プローブの標識には［α−３２Ｐ］ｄＮＴ
Ｐ（Ｎ＝Ａ，Ｇ，Ｃ，Ｔ）または［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ
、［α−３５Ｓ］ｄＮＴＰ（Ｎ＝Ａ，Ｇ，Ｃ，Ｔ）また
は［γ−３５Ｓ］ＡＴＰなどの放射性化合物を用いてジ
ェイ・シャムブルックら“モリキュラー・クローニング
・ア・ラボラトリー・マニュアル 第２改訂版”（コ
ールド・スプリング・ハーバーラボラトリー・プレス、
１９８９年）、１０．６〜１０．１２頁記載のいわゆる
“ニックトランスレイション”或いは１０．１３〜１０
．１５頁記載のいわゆる“ランダムプライマー法”によ
るラベリングの方法或いは１０．５１〜１０．６５頁記
載の“５’、または３’末端ラベリング”にてＤＮＡプ
ローブを調製できる。
Ｐ（Ｎ＝Ａ，Ｇ，Ｃ，Ｔ）または［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ
、［α−３５Ｓ］ｄＮＴＰ（Ｎ＝Ａ，Ｇ，Ｃ，Ｔ）また
は［γ−３５Ｓ］ＡＴＰなどの放射性化合物を用いてジ
ェイ・シャムブルックら“モリキュラー・クローニング
・ア・ラボラトリー・マニュアル 第２改訂版”（コ
ールド・スプリング・ハーバーラボラトリー・プレス、
１９８９年）、１０．６〜１０．１２頁記載のいわゆる
“ニックトランスレイション”或いは１０．１３〜１０
．１５頁記載のいわゆる“ランダムプライマー法”によ
るラベリングの方法或いは１０．５１〜１０．６５頁記
載の“５’、または３’末端ラベリング”にてＤＮＡプ
ローブを調製できる。
【００４７】プローブにジゴキシゲニン或いはビオチン
を標識として入れた核酸を使用することもできる。ジゴ
キシゲニンでの標識には、ベーリンガー・マンハイム社
製のＤＮＡラベリング・デテクション・キット（製品Ｎ
ｏ．１０９３６５７）を使用でき、あるいはビオチンを
標識として入れるにはベセスダ・リサーチ・ラボラトリ
ー社製のビオチンラベリング・キット（製品Ｎｏ．８１
６０ＳＢ）を用いて、供給者の使用能書に従って行うこ
とが出来る。
を標識として入れた核酸を使用することもできる。ジゴ
キシゲニンでの標識には、ベーリンガー・マンハイム社
製のＤＮＡラベリング・デテクション・キット（製品Ｎ
ｏ．１０９３６５７）を使用でき、あるいはビオチンを
標識として入れるにはベセスダ・リサーチ・ラボラトリ
ー社製のビオチンラベリング・キット（製品Ｎｏ．８１
６０ＳＢ）を用いて、供給者の使用能書に従って行うこ
とが出来る。
【００４８】また、これらの標識核酸を用いたハイブリ
ダイゼーションは、夫々の検出システム、即ちジゴキシ
ゲニン標識の場合は上記デテクション・キット（Ｎｏ．
１０９３６５７）にて、ビオチン標識の場合はベセスダ
・リサーチ・ラボラトリー社製のＤＮＡ検出システム（
Ｎｏ．８２７９ＳＡ）を用いて、各供給者の使用能書に
従って実施し得る。
ダイゼーションは、夫々の検出システム、即ちジゴキシ
ゲニン標識の場合は上記デテクション・キット（Ｎｏ．
１０９３６５７）にて、ビオチン標識の場合はベセスダ
・リサーチ・ラボラトリー社製のＤＮＡ検出システム（
Ｎｏ．８２７９ＳＡ）を用いて、各供給者の使用能書に
従って実施し得る。
【００４９】
【実施例】以下実施例を挙げて本発明を更に具体的に述
べるが、本発明はこれらの実施例に限るものではない。 実施例１ 非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者（＃６〜＃１９）の各々の血清
１００μｌにグアニヂンチオシアネート水溶液（５Ｍグ
アニジンチオシアネート／２５ｍＭクエン酸ナトリウム
／０．５％サルコシル／０．２Ｍβ−メルカプトエタノ
ール）４００μｌを添加し、３７℃・３０分間・１００
ｒｐｍで振盪後、フェノ−ル／クロロフォルム（４／１
）混合液５００μｌで３回抽出した。この水相に１０分
の１容の３Ｍ酢酸ナトリウム液（ｐＨ５．４）、１μｇ
のグリコーゲン、２．５倍容のエタノールを添加し、−
８０℃・３０分間保持後、１２，０００ｒｐｍで１０分
間遠心して得られたペレットを７０％エタノール、次い
で１００％エタノールで洗浄後、核酸を得、これらを２
０μｌＴＥに溶解した。
べるが、本発明はこれらの実施例に限るものではない。 実施例１ 非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者（＃６〜＃１９）の各々の血清
１００μｌにグアニヂンチオシアネート水溶液（５Ｍグ
アニジンチオシアネート／２５ｍＭクエン酸ナトリウム
／０．５％サルコシル／０．２Ｍβ−メルカプトエタノ
ール）４００μｌを添加し、３７℃・３０分間・１００
ｒｐｍで振盪後、フェノ−ル／クロロフォルム（４／１
）混合液５００μｌで３回抽出した。この水相に１０分
の１容の３Ｍ酢酸ナトリウム液（ｐＨ５．４）、１μｇ
のグリコーゲン、２．５倍容のエタノールを添加し、−
８０℃・３０分間保持後、１２，０００ｒｐｍで１０分
間遠心して得られたペレットを７０％エタノール、次い
で１００％エタノールで洗浄後、核酸を得、これらを２
０μｌＴＥに溶解した。
【００５０】これらの溶液各１０μｌに対して、最終濃
度が５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．３）／７５
ｍＭ ＫＣｌ／１０ｍＭヂチオスレイトール／５ｍＭ
ＭｇＣｌ２ ／４ｍＭ燐酸ナトリウム／１ｍＭ
ｄＮＴＰｓ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）／１．６μｇランダ
ムプライマー（ベーリンガー・マンハイム社製Ｎｏ．１
０３４７３１）、０．２ｕ／μｌＡＭＶ逆転写酵素（総
量２０μｌ）となるように各成分を加え、４２℃で一時
間ｃＤＮＡの合成反応を行ない、さらにフェノール抽出
、エタノール沈澱を行い得られたｃＤＮＡをＴＥ１０μ
ｌに溶解した。
度が５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．３）／７５
ｍＭ ＫＣｌ／１０ｍＭヂチオスレイトール／５ｍＭ
ＭｇＣｌ２ ／４ｍＭ燐酸ナトリウム／１ｍＭ
ｄＮＴＰｓ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）／１．６μｇランダ
ムプライマー（ベーリンガー・マンハイム社製Ｎｏ．１
０３４７３１）、０．２ｕ／μｌＡＭＶ逆転写酵素（総
量２０μｌ）となるように各成分を加え、４２℃で一時
間ｃＤＮＡの合成反応を行ない、さらにフェノール抽出
、エタノール沈澱を行い得られたｃＤＮＡをＴＥ１０μ
ｌに溶解した。
【００５１】このようにして得られた各ｃＤＮＡ溶液の
２μｌに対して、１０×ＴａｑＤＮＡ−Ｐ反応液（０．
５Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ ＴｒｉｓＨＣｌ／１５ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ２ ／０．１％ゼラチン／０．１％
Ｔｔｉｔｏｎ Ｘ−１００の水溶液）２μｌ、滅菌水
１２μｌ，ｄＮＴＰｓミクスチャー（ｄＡＴＰ、ｄＣＴ
Ｐ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ各々の１．２５ｍＭ溶液）の３
．２μｌ，及び配列番号２で示されるオリゴＤＮＡ１及
び配列番号３で示されるオリゴＤＮＡ２（濃度０．１μ
ｇ／μｌ）の各々１μｌ、更にＴａｑ ＤＮＡポリメ
ラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製Ｎｏ．１０１４２３）０．
１μｌ、更に流動パラフィン５０μｌを加え、９４℃・
３分間処理後、速やかに９４℃・１分間→５０℃・２分
間→７２℃・２分間の３段階の温度・時間変化の操作を
５回繰り返し、更に９４℃・１分間→５７℃・２分間→
７２℃・２分間の３段階の温度時間変化の操作を３０回
繰り返し、最後に７２℃・７分間処理した。この様にし
て得られた各増幅ＤＮＡに制限酵素ＥｃｏＲＩを添加し
加水分解した。
２μｌに対して、１０×ＴａｑＤＮＡ−Ｐ反応液（０．
５Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ ＴｒｉｓＨＣｌ／１５ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ２ ／０．１％ゼラチン／０．１％
Ｔｔｉｔｏｎ Ｘ−１００の水溶液）２μｌ、滅菌水
１２μｌ，ｄＮＴＰｓミクスチャー（ｄＡＴＰ、ｄＣＴ
Ｐ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ各々の１．２５ｍＭ溶液）の３
．２μｌ，及び配列番号２で示されるオリゴＤＮＡ１及
び配列番号３で示されるオリゴＤＮＡ２（濃度０．１μ
ｇ／μｌ）の各々１μｌ、更にＴａｑ ＤＮＡポリメ
ラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製Ｎｏ．１０１４２３）０．
１μｌ、更に流動パラフィン５０μｌを加え、９４℃・
３分間処理後、速やかに９４℃・１分間→５０℃・２分
間→７２℃・２分間の３段階の温度・時間変化の操作を
５回繰り返し、更に９４℃・１分間→５７℃・２分間→
７２℃・２分間の３段階の温度時間変化の操作を３０回
繰り返し、最後に７２℃・７分間処理した。この様にし
て得られた各増幅ＤＮＡに制限酵素ＥｃｏＲＩを添加し
加水分解した。
【００５１】ＤＮＡを常法に従い抽出精製し、該精製Ｄ
ＮＡを、Ｍ１３ｍｐ１８のファージ複製型ＤＮＡのＥｃ
ｏＲＩ分解物をアルカラインフォスファターゼ（ＢＡＰ
）処理したものに、ＤＮＡリガーゼにて結合し、大腸菌
ＪＭ１０９のコンピテントセル（宝酒造、Ｎｏ．９０５
２）の形質転換を行い、白色プラーク８〜１０個から組
換えＭ１３ｍｐ１８の一本鎖ＤＮＡを調製した。該組換
えＭ１３ｍｐ１８一本鎖ＤＮＡを用いて、アプライドバ
イオシステムズのダイデオキシターミナター（ＤｙｅＤ
ｅｏｘｙＴＭ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ） Ｔａｑ Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔにて操作マニュアルどうりに
行い自動塩基配列決定装置（アプライドバイオシステム
ズ モデル３７３Ａ）にて塩基配列を決定した。一回
で全長断片の塩基配列を解読できない場合は、必要に応
じて決定した塩基配列の３’端部分のプライマーを合成
し更に３’側の塩基配列を決定した。あるいは相補鎖Ｄ
ＮＡの塩基配列を上記同様に行い、これらの塩基配列を
総合的に解析して本発明の配列番号６〜１８を得た。
ＮＡを、Ｍ１３ｍｐ１８のファージ複製型ＤＮＡのＥｃ
ｏＲＩ分解物をアルカラインフォスファターゼ（ＢＡＰ
）処理したものに、ＤＮＡリガーゼにて結合し、大腸菌
ＪＭ１０９のコンピテントセル（宝酒造、Ｎｏ．９０５
２）の形質転換を行い、白色プラーク８〜１０個から組
換えＭ１３ｍｐ１８の一本鎖ＤＮＡを調製した。該組換
えＭ１３ｍｐ１８一本鎖ＤＮＡを用いて、アプライドバ
イオシステムズのダイデオキシターミナター（ＤｙｅＤ
ｅｏｘｙＴＭ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ） Ｔａｑ Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔにて操作マニュアルどうりに
行い自動塩基配列決定装置（アプライドバイオシステム
ズ モデル３７３Ａ）にて塩基配列を決定した。一回
で全長断片の塩基配列を解読できない場合は、必要に応
じて決定した塩基配列の３’端部分のプライマーを合成
し更に３’側の塩基配列を決定した。あるいは相補鎖Ｄ
ＮＡの塩基配列を上記同様に行い、これらの塩基配列を
総合的に解析して本発明の配列番号６〜１８を得た。
【００５２】実施例２
配列番号６〜１８で示される塩基配列に基づき、配列番
号１で示される一般化した塩基配列が得られた。この塩
基配列に基づき配列番号４及び配列番号５で示される各
オリゴＤＮＡ５及び６を合成し、両オリゴＤＮＡの水溶
液（濃度０．１μｇ／μｌ）を調製した。非Ａ非Ｂ型慢
性肝炎と診断された３人の患者（＃１，＃２，＃３）の
各々の血清１００μｌにグアニヂンチオシアネート水溶
液（５Ｍグアニジンチオシアネート／２５ｍＭクエン酸
ナトリウム／０．５％サルコシル／０．２Ｍβ−メルカ
プトエタノール）４００μｌを添加し３７℃・３０分間
・１００ｒｐｍで振盪後、フェノ−ル／クロロフォルム
（４／１）混合液５００μｌで３回抽出した。この水相
に１０分の１容の３Ｍ酢酸ナトリウム液（ｐＨ５．４）
、１μｇのグリコーゲン、２．５倍容のエタノールを添
加し、−８０℃・３０分間保持後、１２，０００ｒｐｍ
で１０分間遠心して得られたペレットを７０％エタノー
ル次いで１００％エタノールで洗浄後、核酸を得、これ
らを２０μｌＴＥに溶解した。
号１で示される一般化した塩基配列が得られた。この塩
基配列に基づき配列番号４及び配列番号５で示される各
オリゴＤＮＡ５及び６を合成し、両オリゴＤＮＡの水溶
液（濃度０．１μｇ／μｌ）を調製した。非Ａ非Ｂ型慢
性肝炎と診断された３人の患者（＃１，＃２，＃３）の
各々の血清１００μｌにグアニヂンチオシアネート水溶
液（５Ｍグアニジンチオシアネート／２５ｍＭクエン酸
ナトリウム／０．５％サルコシル／０．２Ｍβ−メルカ
プトエタノール）４００μｌを添加し３７℃・３０分間
・１００ｒｐｍで振盪後、フェノ−ル／クロロフォルム
（４／１）混合液５００μｌで３回抽出した。この水相
に１０分の１容の３Ｍ酢酸ナトリウム液（ｐＨ５．４）
、１μｇのグリコーゲン、２．５倍容のエタノールを添
加し、−８０℃・３０分間保持後、１２，０００ｒｐｍ
で１０分間遠心して得られたペレットを７０％エタノー
ル次いで１００％エタノールで洗浄後、核酸を得、これ
らを２０μｌＴＥに溶解した。
【００５３】これらの溶液各１０μｌに対して、最終濃
度が５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．３）／７５
ｍＭ ＫＣｌ／１０ｍＭヂチオスレイトール／５ｍＭ
ＭｇＣｌ２ ／４ｍＭ燐酸ナトリウム／１ｍＭ
ｄＮＴＰｓ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）／１．６μｇランダ
ムプライマー（ベーリンガー・マンハイム社製Ｎｏ．１
０３４７３１）、０．２ｕ／μｌＡＭＶ逆転写酵素（総
量２０μｌ）となるように各成分を加え、４２℃で一時
間ｃＤＮＡの合成反応を行ない、さらにフェノール抽出
、エタノール沈澱を行い、得られたｃＤＮＡをＴＥ１０
μｌに溶解した。
度が５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．３）／７５
ｍＭ ＫＣｌ／１０ｍＭヂチオスレイトール／５ｍＭ
ＭｇＣｌ２ ／４ｍＭ燐酸ナトリウム／１ｍＭ
ｄＮＴＰｓ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）／１．６μｇランダ
ムプライマー（ベーリンガー・マンハイム社製Ｎｏ．１
０３４７３１）、０．２ｕ／μｌＡＭＶ逆転写酵素（総
量２０μｌ）となるように各成分を加え、４２℃で一時
間ｃＤＮＡの合成反応を行ない、さらにフェノール抽出
、エタノール沈澱を行い、得られたｃＤＮＡをＴＥ１０
μｌに溶解した。
【００５４】このようにして得られた各ｃＤＮＡ溶液の
２μｌに対して、１０×ＴａｑＤＮＡ−Ｐ反応液２μｌ
、滅菌水１２μｌ，ｄＮＴＰｓミクスチャー（ｄＡＴＰ
、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ各々の１．２５ｍＭ溶
液）の３．２μｌ，配列番号４で示されるオリゴＤＮＡ
５（濃度０．１μｇ／μｌ）及び配列番号５で示される
オリゴＤＮＡ６（濃度０．１μｇ／μｌ）の各々１μｌ
、更にＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ
社製、Ｎｏ．１０１４２３）０．１μｌ、更に流動パラ
フィン５０μｌを加え、９４℃・３分間処理後、速やか
に９４℃・１分間→５０℃・２分間→７２℃・２分間の
３段階の温度・時間変化の操作を５回繰り返し、更に９
４℃・１分間→５７℃・２分間→７２℃・２分間の３段
階の温度時間変化の操作を３０回繰り返し、最後に７２
℃・７分間処理した。
２μｌに対して、１０×ＴａｑＤＮＡ−Ｐ反応液２μｌ
、滅菌水１２μｌ，ｄＮＴＰｓミクスチャー（ｄＡＴＰ
、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ各々の１．２５ｍＭ溶
液）の３．２μｌ，配列番号４で示されるオリゴＤＮＡ
５（濃度０．１μｇ／μｌ）及び配列番号５で示される
オリゴＤＮＡ６（濃度０．１μｇ／μｌ）の各々１μｌ
、更にＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ
社製、Ｎｏ．１０１４２３）０．１μｌ、更に流動パラ
フィン５０μｌを加え、９４℃・３分間処理後、速やか
に９４℃・１分間→５０℃・２分間→７２℃・２分間の
３段階の温度・時間変化の操作を５回繰り返し、更に９
４℃・１分間→５７℃・２分間→７２℃・２分間の３段
階の温度時間変化の操作を３０回繰り返し、最後に７２
℃・７分間処理した。
【００５５】この様にして得られた各反応水溶液の８μ
ｌを２％アガロースゲル上で電気泳動し、エチヂウムブ
ロマイドで染色後、ＵＶ照射しＤＮＡバンドを観察した
。その結果を表１に示す。患者＃１，２，３の各血清か
ら出発したものに約５４０ｂｐのＤＮＡバンドを認めた
。
ｌを２％アガロースゲル上で電気泳動し、エチヂウムブ
ロマイドで染色後、ＵＶ照射しＤＮＡバンドを観察した
。その結果を表１に示す。患者＃１，２，３の各血清か
ら出発したものに約５４０ｂｐのＤＮＡバンドを認めた
。
【００５６】
【表１】
【００５７】比較例１
ＰＣＴ国際公開ｗｏ９０／１４４３６号公報記載のＣ型
肝炎ウイルスのエンビロープ領域の塩基配列に基づき合
成した配列番号１９及び２０で示されるオリゴＤＮＡ７
及び８を、本実施例のオリゴＤＮＡ４及び５の代わりに
使用する外は全く本実施例と同じ核酸増幅反応を実施し
ＤＮＡの増幅を観察した。結果を表２に示す。
肝炎ウイルスのエンビロープ領域の塩基配列に基づき合
成した配列番号１９及び２０で示されるオリゴＤＮＡ７
及び８を、本実施例のオリゴＤＮＡ４及び５の代わりに
使用する外は全く本実施例と同じ核酸増幅反応を実施し
ＤＮＡの増幅を観察した。結果を表２に示す。
【００５８】
【表２】
【００５９】本実施例２及び比較例１より、本発明の塩
基配列の核酸に基づくオリゴＤＮＡ断片が普遍的にＣ型
肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸の検出に有効なこ
とがわかる。更に本発明の塩基配列を基にエンビロープ
タンパク質に於てＣ型肝炎ウイルスの多くに共通したエ
ピトープあるいは抗原決定基部分のペプチドは、様々な
変異Ｃ型肝炎ウイルスに対するワクチンの開発に非常に
有用である。
基配列の核酸に基づくオリゴＤＮＡ断片が普遍的にＣ型
肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸の検出に有効なこ
とがわかる。更に本発明の塩基配列を基にエンビロープ
タンパク質に於てＣ型肝炎ウイルスの多くに共通したエ
ピトープあるいは抗原決定基部分のペプチドは、様々な
変異Ｃ型肝炎ウイルスに対するワクチンの開発に非常に
有用である。
【００６０】
【発明の効果】本発明の核酸断片は、Ｃ型肝炎ウイルス
のエンベロープタンパク質部分をコードする核酸であり
、該核酸の一部をプローブあるいは該核酸の塩基配列の
一部をプライマーとして用いて核酸の増幅を行い、Ｃ型
肝炎ウイルスの特定領域であるエンベロープタンパク質
コード核酸断片を検出するのに優れた方法である。エン
ビロープ部分の核酸は、他の非構造タンパクコード領域
にくらべ、ウイルス増殖時において、核酸が多く存在し
、容易に検出できる部分で、この部分を検出標的とする
ことは好ましい。また多数の変異Ｃ型肝炎ウイルスのエ
ンベロープタンパク質のいずれにも共通性のあるペプチ
ドの部分から如何なるＣ型肝炎の予防にも有効なワクチ
ン作成に応用できるものである。
のエンベロープタンパク質部分をコードする核酸であり
、該核酸の一部をプローブあるいは該核酸の塩基配列の
一部をプライマーとして用いて核酸の増幅を行い、Ｃ型
肝炎ウイルスの特定領域であるエンベロープタンパク質
コード核酸断片を検出するのに優れた方法である。エン
ビロープ部分の核酸は、他の非構造タンパクコード領域
にくらべ、ウイルス増殖時において、核酸が多く存在し
、容易に検出できる部分で、この部分を検出標的とする
ことは好ましい。また多数の変異Ｃ型肝炎ウイルスのエ
ンベロープタンパク質のいずれにも共通性のあるペプチ
ドの部分から如何なるＣ型肝炎の予防にも有効なワクチ
ン作成に応用できるものである。
【００６１】
【配列表】配列番号：１
配列の長さ：５６５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＹＣＹＴＧＧ ＹＲＣＡＹＧＧＹＧＴ ＹＣＧ
ＧＧＴＹＣＴＲ ＧＡＲＧＡＣＲＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＹＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＹ ６０ＹＴＤＣＣ
ＹＧＧＴＴ ＧＣＹＣＹＴＴＹＴＣ ＴＡＴＣＴＴＹＣ
ＴＹ ＹＴＲＧＣＹＹＴＢＣ ＴＶＴＣＹＴＧＹＹＴ
ＧＡＣＹＲＹＢＣＣＨ １２０ＧＹＹＴＣＣＲＣＹＹ
ＡＹＶＡＲＧＴＧＣＲ ＣＡＡＣＧＳＳＷＣＭ ＧＧ
ＧＮＹＲＴＡＹＣ ＡＴＧＴＣＡＣＢＡＲ ＹＧＡＹＴ
ＧＹＹＣＹ １８０ＡＡＣＫＣＲＡＧＹＡ ＴＷＧＴ
ＧＹＡＹＲＡ ＲＧＹＲＲＭＧＧＡＹ ＲＹＶＡＴＣＭ
ＴＧＣ ＷＹＤＹＹＣＣＢＧＧ ＧＴＧＹＲＹＢＣＣＹ
２４０ＴＧＹＧＴＹＣＧＳＧ ＡＲＲＲＹＲＲＹＮ
Ｎ ＹＴＣＢＭＧＮＴＧＹ ＴＧＧＧＹＲＧＣＧＣ Ｔ
ＢＡＣＹＣＣＣＡＣ ＧＳＴＹＧＣＶＲＣＹ ３００
ＡＧＲＲＡＹＶＢＹＡ ＶＹＶＴＹＣＣＣＲＣ ＢＲＹ
ＧＶＭＲＭＴＷ ＣＧＢＣＧＢＣＡＹＲ ＴＣＧＡＹＹ
ＴＧＣＴ ＹＧＴＨＧＧＧＲＳＶ ３６０ＧＣＹＲＣ
ＹＹＴＣＴ ＧＹＴＣＳＧＣＹＶＴ ＳＴＡＹＧＴＫＧ
ＧＲ ＧＡＹＹＴＢＴＧＣＧ ＧＲＴＣＹＧＴＹＴＴ
ＹＣＴＹＲＴＹＴＣＹ ４２０ＣＡＢＹＴＧＴＴＴＡ
ＣＣＹＴＣＴＭＢＭＣ ＹＭＧＳＭＤＧＹＡＹ ＧＤ
ＧＡＣＲＤＹＲＣ ＡＲＧＲＹＴＧＹＡＡ ＹＴＧＹＴ
ＣＤＭＴＹ ４８０ＴＡＹＳＣＹＧＧＳＣ ＡＹＲＴ
ＲＷＣＲＧＧ ＫＣＡＹＣＧＹＡＴＧ ＧＣＨＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＶＣＣＹ
５４０ＡＣＲＤＣＲＧＣＢＹ ＴＲＧＴＲＲＴＤＫ
Ｃ ＫＣＡＧＢ
５６５
ＧＧＴＹＣＴＲ ＧＡＲＧＡＣＲＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＹＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＹ ６０ＹＴＤＣＣ
ＹＧＧＴＴ ＧＣＹＣＹＴＴＹＴＣ ＴＡＴＣＴＴＹＣ
ＴＹ ＹＴＲＧＣＹＹＴＢＣ ＴＶＴＣＹＴＧＹＹＴ
ＧＡＣＹＲＹＢＣＣＨ １２０ＧＹＹＴＣＣＲＣＹＹ
ＡＹＶＡＲＧＴＧＣＲ ＣＡＡＣＧＳＳＷＣＭ ＧＧ
ＧＮＹＲＴＡＹＣ ＡＴＧＴＣＡＣＢＡＲ ＹＧＡＹＴ
ＧＹＹＣＹ １８０ＡＡＣＫＣＲＡＧＹＡ ＴＷＧＴ
ＧＹＡＹＲＡ ＲＧＹＲＲＭＧＧＡＹ ＲＹＶＡＴＣＭ
ＴＧＣ ＷＹＤＹＹＣＣＢＧＧ ＧＴＧＹＲＹＢＣＣＹ
２４０ＴＧＹＧＴＹＣＧＳＧ ＡＲＲＲＹＲＲＹＮ
Ｎ ＹＴＣＢＭＧＮＴＧＹ ＴＧＧＧＹＲＧＣＧＣ Ｔ
ＢＡＣＹＣＣＣＡＣ ＧＳＴＹＧＣＶＲＣＹ ３００
ＡＧＲＲＡＹＶＢＹＡ ＶＹＶＴＹＣＣＣＲＣ ＢＲＹ
ＧＶＭＲＭＴＷ ＣＧＢＣＧＢＣＡＹＲ ＴＣＧＡＹＹ
ＴＧＣＴ ＹＧＴＨＧＧＧＲＳＶ ３６０ＧＣＹＲＣ
ＹＹＴＣＴ ＧＹＴＣＳＧＣＹＶＴ ＳＴＡＹＧＴＫＧ
ＧＲ ＧＡＹＹＴＢＴＧＣＧ ＧＲＴＣＹＧＴＹＴＴ
ＹＣＴＹＲＴＹＴＣＹ ４２０ＣＡＢＹＴＧＴＴＴＡ
ＣＣＹＴＣＴＭＢＭＣ ＹＭＧＳＭＤＧＹＡＹ ＧＤ
ＧＡＣＲＤＹＲＣ ＡＲＧＲＹＴＧＹＡＡ ＹＴＧＹＴ
ＣＤＭＴＹ ４８０ＴＡＹＳＣＹＧＧＳＣ ＡＹＲＴ
ＲＷＣＲＧＧ ＫＣＡＹＣＧＹＡＴＧ ＧＣＨＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＶＣＣＹ
５４０ＡＣＲＤＣＲＧＣＢＹ ＴＲＧＴＲＲＴＤＫ
Ｃ ＫＣＡＧＢ
５６５
【００６２】配列番号：２
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：合成ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＴＧＴ
２０
２０
【００６３
】配列番号：３ 配列の長さ：２６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＴＣＧＡＡＴＴＣＧ ＧＧＴＡＣＡＴＡＣＣ ＧＣＧ
ＣＧＴ
２６
】配列番号：３ 配列の長さ：２６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＴＣＧＡＡＴＴＣＧ ＧＧＴＡＣＡＴＡＣＣ ＧＣＧ
ＣＧＴ
２６
【００６４
】配列番号：４ 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＴＣＧＡＡＴＴＣＴ ＧＧＧＡＴＣＣＧＧＡ ＧＣＡ
ＧＣＴＧ
２７
】配列番号：４ 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＴＣＧＡＡＴＴＣＴ ＧＧＧＡＴＣＣＧＧＡ ＧＣＡ
ＧＣＴＧ
２７
【００６５
】配列番号：５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＣＡＧＴＴＣＡＴＣ ＡＴＣＡＴＡＴＣＣＣ
２０
】配列番号：５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＣＡＧＴＴＣＡＴＣ ＡＴＣＡＴＡＴＣＣＣ
２０
【００６６
】配列番号：６ 配列の長さ：５７７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 配列 ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＣＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＣＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＴＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＴＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣ ＧＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＡＧＧＴＧＧＣＡ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＣＣＣＣＡＣ ＧＣＴＴＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＧＣＣＡ ＧＣＧＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＧＣＧＴＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＣＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＴＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＴ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＧＣＣ ＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＧＣＣＧＧＧＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣ ＴＧＧＴＧＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＧＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
】配列番号：６ 配列の長さ：５７７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 配列 ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＣＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＣＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＴＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＴＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣ ＧＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＡＧＧＴＧＧＣＡ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＣＣＣＣＡＣ ＧＣＴＴＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＧＣＣＡ ＧＣＧＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＧＣＧＴＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＣＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＴＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＴ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＧＣＣ ＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＧＣＣＧＧＧＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣ ＴＧＧＴＧＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＧＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００６７】配列番号：７
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＴＣＧ
ＧＧＴＣＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＴＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＴＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＣＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＣＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＧＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＧＧＣＡＡＣＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＧＣＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＧＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＧＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＣＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＴＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＡ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＴ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＧＣＣ ＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＴＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＧＣＣＧＧＧＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣ ＴＧＧＴＡＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＧＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
ＧＧＴＣＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＴＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＴＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＣＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＣＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＧＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＧＧＣＡＡＣＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＧＣＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＧＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＧＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＣＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＴＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＡ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＴ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＧＣＣ ＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＴＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＧＣＣＧＧＧＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣ ＴＧＧＴＡＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＧＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００６８】配列番号：８
配列の長さ：４０５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＣＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＣＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＡＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＴＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＧＧＣＡＡＣＴ
Ｔ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＴＧＣＣＡ ＧＣＧＴＣＣＣＣＡＣ ＴＧＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＧＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＡ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＣ
４０５
ＧＧＴＣＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＣＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＡＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＴＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＧＧＣＡＡＣＴ
Ｔ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＴＧＣＣＡ ＧＣＧＴＣＣＣＣＡＣ ＴＧＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＧＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＡ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＣ
４０５
【００６９】配列番号
：９ 配列の長さ：５７７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 配列 ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＣ ６０ＣＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＴＣ
ＴＣ ＴＴＡＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＴ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＧ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＴＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＣＧＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＣＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＴ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＣＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＣＣＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＣＴＴＴＧＣＧ ＧＧＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＡＣＣ ＴＣＧＣＣＧＧＴＡＣ ＧＡ
ＧＡＣＧＧＴＡＣ ＡＡＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＣＣＣＣＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＡＣＡＧＣＴＣ ＴＡＧＴＧＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
：９ 配列の長さ：５７７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 配列 ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＣ ６０ＣＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＴＣ
ＴＣ ＴＴＡＧＣＴＣＴＧＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＴ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＧ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＴＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＣＧＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＣＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＴ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＣＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＣＣＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＣＴＴＴＧＣＧ ＧＧＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＡＣＣ ＴＣＧＣＣＧＧＴＡＣ ＧＡ
ＧＡＣＧＧＴＡＣ ＡＡＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＣＣＣＣＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＡＣＡＧＣＴＣ ＴＡＧＴＧＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００７０】配列番号：１０
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＡＣＡＴＧＧＴＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＣＣＴＧＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＣＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＴＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＡＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＡＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＡＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＴＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＴＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＡＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＣＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＴＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＡ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＴＧＴＴＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＡＣＣ ＴＣＧＣＣＧＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＴＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＴ
５４０ＡＣＡＧＣＡＧＣＣＣ ＴＧＧＴＧＧＴＴＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＣＣＴＧＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＣＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＴＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＡＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＡＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＴＡＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＴＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＴＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＡＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＣＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＴＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＡ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＴＧＴＴＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＡＣＣ ＴＣＧＣＣＧＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＴＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＴ
５４０ＡＣＡＧＣＡＧＣＣＣ ＴＧＧＴＧＧＴＴＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００７１】配列番号：１１
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＴＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＣＣＴＡ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＣ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＣＴＧＧＣＴＴＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＣＴＴ
ＧＡＣＴＧＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＣＧＡＧＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
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５７７
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５７７
【００７２】配列番号：１２
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
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５７７
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５７７
【００７３】配列番号：１３
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
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５７７
【００７４】配列番号：１４
配列の長さ：５７７
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トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
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５７７
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５７７
【００７５】配列番号：１５
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
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５７７
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５７７
【００７６】配列番号：１６
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
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トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
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Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＣＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＣＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＣＴＴＴＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＴＴＧＣ ＴＧＴＣＣＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＴＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＴＡ ＴＴＧＴ
ＧＴＡＣＧＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＡＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＣＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＣＣＧＧＧ ＡＧＧＧＣＡＡＴＴ
Ｃ ＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＧＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＡ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＴＴＣＣＧＣＴＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＴＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＴＧＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＴＡ
ＣＣＴＴＣＴＡＡＣＣ ＴＣＧＣＣＡＧＴＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＧＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＣＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＣＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＴＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＴ
５４０ＡＣＡＡＣＧＧＣＣＣ ＴＡＧＴＧＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００７７】配列番号：１７
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＧＣＡＴＧＧＣＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＣＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＣＴＴＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＣＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＡＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＡＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＧＣＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＣＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＴＣ
Ａ ＣＴＣＣＣＧＡＴＧＴ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＴ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＣＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＡＣＣ ＴＣＧＣＣＧＧＴＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＧＧＴＡＣ ＡＡＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＴＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＧＣＡＧＣＣＣ ＴＡＧＴＡＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＣＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＣＴＴＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＣＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＧＴＧＴＡＣＣ ＡＴＧＴＣＡＣＧＡＡ ＣＧＡＣＴ
ＧＣＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＡＧＴ
ＧＴＡＴＧＡ ＡＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＡＴＧＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＧＣＡＣＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＧＴＧＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＣＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＴＣ
Ａ ＣＴＣＣＣＧＡＴＧＴ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＣＧＣＧＧＣＴ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡ ＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＴＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＣＡＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＣＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＴＴＴ
ＣＣＴＣＧＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＴＣＡＣＣ ＴＣＧＣＣＧＧＴＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＧＧＴＡＣ ＡＡＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＴＣＧＣＡＴＧ ＧＣＴＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣ
５４０ＡＣＡＧＣＡＧＣＣＣ ＴＡＧＴＡＧＴＡＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００７８】配列番号：１８
配列の長さ：５７７
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ＤＮＡ
配列
ＡＧＧＧＣＣＣＴＧＧ ＣＡＣＡＴＧＧＴＧＴ ＣＣＧ
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＡＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＴＡＣＣＣＣＡ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＡＴＡＴＡＴＣ ＡＴＧＴＣＡＣＴＡＡ ＴＧＡＣＴ
ＧＴＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＣＴＡＴＡＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＣＴＣＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＴＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＡＣＴＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＡ
Ｔ ＣＴＣＣＣＧＴＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＴＧＣＡＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＴＣＡ ＣＣＧＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＣＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＡＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＡＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＴＧＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＧＴＴ
ＣＣＴＴＡＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＴＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＣＣＡＣＣ ＴＣＧＣＴＧＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＣＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＧＣＣＴ
５４０ＡＣＡＧＣＡＧＣＣＣ ＴＡＧＴＧＧＴＧＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
ＧＧＴＴＣＴＧ ＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧ ＴＧＡＡＣＴ
ＡＴＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＴ ６０ＴＴＧＣＣ
ＣＧＧＴＴ ＧＣＴＣＴＴＴＣＴＣ ＴＡＴＣＴＴＣＣ
ＴＣ ＴＴＧＧＣＴＣＴＡＣ ＴＧＴＣＴＴＧＴＴＴ
ＧＡＣＴＡＣＣＣＣＡ １２０ＧＣＴＴＣＣＧＣＴＴ
ＡＴＧＡＡＧＴＧＣＧ ＣＡＡＣＧＴＧＴＣＣ ＧＧ
ＧＡＴＡＴＡＴＣ ＡＴＧＴＣＡＣＴＡＡ ＴＧＡＣＴ
ＧＴＴＣＣ １８０ＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡ ＴＴＧＴ
ＣＴＡＴＡＡ ＧＧＣＡＧＣＧＧＡＣ ＣＴＣＡＴＣＡ
ＴＧＣ ＡＴＡＴＣＣＣＣＧＧ ＧＴＧＣＡＣＴＣＣＣ
２４０ＴＧＣＧＴＴＣＧＧＧ ＡＧＡＡＣＡＡＣＡ
Ｔ ＣＴＣＣＣＧＴＴＧＣ ＴＧＧＧＴＡＧＣＧＣ Ｔ
ＣＡＣＴＣＣＣＡＣ ＧＣＴＴＧＣＡＧＣＣ ３００
ＡＧＧＡＡＣＡＴＣＡ ＣＣＧＴＣＣＣＣＡＣ ＴＡＣ
ＧＡＣＡＡＴＡ ＣＧＡＣＧＣＣＡＣＧ ＴＣＧＡＣＴ
ＴＧＣＴ ＣＧＴＡＧＧＧＧＣＧ ３６０ＧＣＴＡＣ
ＴＴＴＣＴ ＧＣＴＣＣＧＣＴＧＴ ＧＴＡＣＧＴＧＧ
ＧＧ ＧＡＴＣＴＣＴＧＣＧ ＧＡＴＣＴＧＴＧＴＴ
ＣＣＴＴＡＴＣＴＣＣ ４２０ＣＡＧＴＴＧＴＴＣＡ
ＣＣＴＴＣＣＣＡＣＣ ＴＣＧＣＴＧＧＣＡＴ ＧＡ
ＧＡＣＡＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＴＧＣＡＡ ＴＴＧＣＴ
ＣＡＡＴＣ ４８０ＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣ ＡＣＧＴ
ＡＴＣＡＧＧ ＴＣＡＣＣＧＣＡＴＧ ＧＣＣＴＧＧＧ
ＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣＧＣＣＴ
５４０ＡＣＡＧＣＡＧＣＣＣ ＴＡＧＴＧＧＴＧＴ
Ｃ ＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣ ＣＧＧＡＴＣＣ
５７７
【００７９】配列番号：１９
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：合成ＤＮＡ
配列
ＴＧＴＧＣＣＣＧＣＴ ＴＣＧＧＣＣＴＡＣＣ
２０
２０
【００８０
】配列番号：２０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列
】配列番号：２０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列
Claims (7)
- 【請求項１】 次の塩基配列： ５’−ＡＧＧＧＹＣＹＴＧＧ ＹＲＣＡＹＧＧＹＧＴ
ＹＣＧＧＧＴＹＣＴＲＧＡＲＧＡＣＲＧＣＧ ＴＧＡＡ
ＣＴＡＹＧＣ ＡＡＣＡＧＧＧＡＡＹＹＴＤＣＣＹＧＧ
ＴＴ ＧＣＹＣＹＴＴＹＴＣ ＴＡＴＣＴＴＹＣＴＹＹ
ＴＲＧＣＹＹＴＢＣ ＴＶＴＣＹＴＧＹＹＴ ＧＡＣＹ
ＲＹＢＣＣＨＧＹＹＴＣＣＲＣＹＹ ＡＹＶＡＲＧＴＧ
ＣＲ ＣＡＡＣＧＳＳＷＣＭＧＧＧＮＹＲＴＡＹＣ Ａ
ＴＧＴＣＡＣＢＡＲ ＹＧＡＹＴＧＹＹＣＹＡＡＣＫＣ
ＲＡＧＹＡ ＴＷＧＴＧＹＡＹＲＡ ＲＧＹＲＲＭＧＧ
ＡＹＲＹＶＡＴＣＭＴＧＣ ＷＹＤＹＹＣＣＢＧＧ Ｇ
ＴＧＹＲＹＢＣＣＹＴＧＹＧＴＹＣＧＳＧ ＡＲＲＲＹ
ＲＲＹＮＮ ＹＴＣＢＭＧＮＴＧＹＴＧＧＧＹＲＧＣＧ
Ｃ ＴＢＡＣＹＣＣＣＡＣ ＧＳＴＹＧＣＶＲＣＹＡＧ
ＲＲＡＹＶＢＹＡ ＶＹＶＴＹＣＣＣＲＣ ＢＲＹＧＶ
ＭＲＭＴＷＣＧＢＣＧＢＣＡＹＲ ＴＣＧＡＹＹＴＧＣ
Ｔ ＹＧＴＨＧＧＧＲＳＶＧＣＹＲＣＹＹＴＣＴ ＧＹ
ＴＣＳＧＣＹＶＴ ＳＴＡＹＧＴＫＧＧＲＧＡＹＹＴＢ
ＴＧＣＧ ＧＲＴＣＹＧＴＹＴＴ ＹＣＴＹＲＴＹＴＣ
ＹＣＡＢＹＴＧＴＴＴＡ ＣＣＹＴＣＴＭＢＭＣ ＹＭ
ＧＳＭＤＧＹＡＹＧＤＧＡＣＲＤＹＲＣ ＡＲＧＲＹＴ
ＧＹＡＡ ＹＴＧＹＴＣＤＭＴＹＴＡＹＳＣＹＧＧＳＣ
ＡＹＲＴＲＷＣＲＧＧ ＫＣＡＹＣＧＹＡＴＧＧＣＨ
ＴＧＧＧＡＴＡ ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡ ＣＴＧＧＴＣ
ＶＣＣＹＡＣＲＤＣＲＧＣＢＹ ＴＲＧＴＲＲＴＤＫＣ
ＫＣＡＧＢ−３’（ここでＲはＧまたはＡ，ＹはＴま
たはＣ，ＤはＧまたはＡまたはＴ，ＶはＡまたはＧまた
はＣ，ＢはＣまたはＴまたはＧ，ＨはＡまたはＣまたは
Ｔ，ＫはＧまたはＴ，ＭはＡまたはＣ，ＮはＡまたはＣ
またはＧまたはＴ， ＳはＧまたはＣ，ＷはＡまたはＴ
を夫々表す）、またはこれの相補的な塩基配列を有する
ＤＮＡ断片、あるいはこれらにおいてＴをＵに置き換え
て表示されるＲＮＡ断片。 - 【請求項２】 請求項１記載の断片中に存在する少な
くとも８塩基の長さの断片よりなるＤＮＡまたはＲＮＡ
オリゴマー。 - 【請求項３】 請求項２記載のＤＮＡまたはＲＮＡオ
リゴマーを標識化合物で標識したＤＮＡまたはＲＮＡプ
ローブを用いてＣ型肝炎ウイルス核酸を検出する方法。 - 【請求項４】 請求項２記載のＤＮＡまたはＲＮＡオ
リゴマーをプライマーとして核酸の増幅を行うことによ
りＣ型肝炎ウイルス核酸を検出する方法。 - 【請求項５】 請求項２記載のＤＮＡまたはＲＮＡオ
リゴマーを含有して成る、Ｃ型肝炎ウイルス核酸を検出
するためのキット。 - 【請求項６】 請求項３記載のＤＮＡまたはＲＮＡプ
ローブを含有して成る、Ｃ型肝炎ウイルス核酸を検出す
るためのキット。 - 【請求項７】 請求項１記載のＤＮＡまたはＲＮＡに
コードされるペプチド断片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3152169A JPH04349885A (ja) | 1991-05-29 | 1991-05-29 | Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸断片およびその検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3152169A JPH04349885A (ja) | 1991-05-29 | 1991-05-29 | Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸断片およびその検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04349885A true JPH04349885A (ja) | 1992-12-04 |
Family
ID=15534547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3152169A Withdrawn JPH04349885A (ja) | 1991-05-29 | 1991-05-29 | Ｃ型肝炎ウイルスのエンビロープ領域核酸断片およびその検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04349885A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995003056A1 (fr) * | 1993-07-19 | 1995-02-02 | Tokyo Tanabe Company Limited | Inhibiteur de proliferation du virus de l'hepatite c |
| JP2016510601A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-04-11 | インテグレイテツド・デイー・エヌ・エイ・テクノロジーズ・インコーポレイテツド | 修飾ＲＮＡモノマーを用いたＲＮａｓｅＨ系アッセイ |
-
1991
- 1991-05-29 JP JP3152169A patent/JPH04349885A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995003056A1 (fr) * | 1993-07-19 | 1995-02-02 | Tokyo Tanabe Company Limited | Inhibiteur de proliferation du virus de l'hepatite c |
| US5846964A (en) * | 1993-07-19 | 1998-12-08 | Tokyo Tanabe Company Limited | Hepatitis C virus proliferation inhibitor |
| JP2016510601A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-04-11 | インテグレイテツド・デイー・エヌ・エイ・テクノロジーズ・インコーポレイテツド | 修飾ＲＮＡモノマーを用いたＲＮａｓｅＨ系アッセイ |
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