JPH04295496A - インスリン活性を有する短ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はインスリン活性を有しか
つ真性糖尿病の治療に適当な新規ペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】インスリンは２種のポリペプチド鎖、す
なわち２１個のアミノ酸残基を含有するＡ鎖および３０
個のアミノ酸残基を有するＢ鎖からなる。Ａ鎖およびＢ
鎖は２つのジスルフィド橋で一緒に連結されている。す
なわちＡ７位およびＢ７位のシステイン残基並びにＡ２
０位およびＢ１９位のシステイン残基が一緒に結合して
いる。Ａ６とＡ１１との間には第３のジスルフィド橋が
存在している。動物およびヒトインスリンはプレプロイ
ンスリンの形態で膵臓において産生される。ヒトプレプ
ロインスリンは例えば８６個のアミノ酸残基を有するプ
ロインスリンの結合した２４個のアミノ酸残基含有プレ
ペプチドからなっていて、以下の配置：プレペプチド−
Ｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａ（ここで
Ｃは３１個の残基からなるアミノ酸鎖である）を有する
。ランゲルハンス島からの排出中にプレペプチドは分裂
してプロインスリンになる。最後にＣ鎖がタンパク質分
解により開裂して活性なヒトインスリンを産生する。

【０００３】インスリンはインスリン感受性組織に多く
の作用を及ぼす。１つの顕著な作用は、インスリンが使
用される場合の哺乳類におけるグルコースレベルの迅速
な減少である。これにより筋細胞および脂肪細胞は血液
からグルコースを迅速に吸収するようになる。さらにイ
ンスリンはグリコーゲンシンテターゼを活性化し、脂肪
加水分解を阻止する。インスリンはアミノ酸からのタン
パク質合成を促進し、グリコキナーゼおよびホスホフル
クトキナーゼの誘発を高めそしてある種のグルコース新
生酵素例えばピルベートカルボキシラーゼおよびフルク
トースジホスファターゼの生成を阻止する。

【０００４】ＩＩ型糖尿病である非インスリン依存性糖
尿病は、末梢組織例えば筋肉または脂肪組織のインスリ
ン抵抗性に関与している。グルコース利用で生ずるこの
減少は、グルコース輸送過程およびそれに続く代謝過程
のインスリン刺激欠除によって生起される。この多重抵
抗性はレセプターまたはポスト−レセプターレベルにお
ける、すなわち２次メッセンジャー産生前の欠損を示唆
している（Ｇａｒｖｅｙ，　Ｄｉａｂｅｔｅｓ／Ｍｅｔ
ａｂｏｌｉｓｍ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，　５，　（１９８９
），　７２７〜７４２参照）。

【０００５】

【発明の構成】本発明によれば意外なことに、短ペプチ
ドがインスリン活性を有することができ、真性糖尿病の
治療に適しているということが見出された。

【０００６】すなわち、本発明は下記式ＩＸ−Ｙ−Ｚ−
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｅ　　　　　　（Ｉ）〔式中
、Ａは、ａ）　　アミノ酸または共有結合であり、Ｂは
、ａ）　　アミノ酸または共有結合であり、

【０００７
】Ｃは、ａ）　　アミノ酸、ｂ）　　環上で１回以上下
記の置換基 １）　　Ｒ１｛ここでＲ１は １．１　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、１．２　　（
Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルキル、１．３　　（Ｃ６〜
Ｃ１４）−アリール、１．４　　１回以上下記置換基 １．４．１　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルにより置換さ
れた（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールまたは１．５　　１回
以上下記置換基 １．５．１　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールにより置換
された（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルである｝、２）　　Ｒ
２｛ここでＲ２は ２．１　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、２．２　　（
Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルキル、２．３　　（Ｃ１〜
Ｃ１８）−アルコキシ、２．４　　（Ｃ３〜Ｃ１４）−
シクロアルコキシ、２．５　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリ
ール、２．６　　１回以上下記置換基 ２．６．１　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、２．６．２
　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシにより置換された（Ｃ
６〜Ｃ１４）−アリール、２．７　　（Ｃ６〜Ｃ１４）
−アリールオキシ、２．８　　１回以上下記置換基 ２．８．１　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、２．８．２
　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシにより置換された（Ｃ
６〜Ｃ１４）−アリールオキシ、２．９　　１回以上下
記置換基 ２．９．１　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールにより置換
された（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、２．１０　　１回以
上下記置換基 ２．１０．１　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールにより置
換された（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシ、２．１１　　ハ
ロゲン例えばフッ素、塩素、臭素または沃素、 ２．１２　　ニトロまたは ２．１３　　トリフルオロメチルである｝により置換さ
れた芳香族アミノ酸、 ｃ）　　共有結合であり、

【０００８】Ｄは、ａ）　　アミノ酸、ｂ）　　Ｃ−末
端アミノ基−ＮＲ３２｛ここでＲ３は同一または相異な
ることができて、下記の基 １）　　（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、 ２）　　１回以上下記置換基 ２．１　　フッ素、 ２．２　　ヒドロキシル基 により置換された（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、３）　　
シクロプロピル、 ４）　　１回以上下記置換基 ４．１　　フッ素、 ４．２　　ヒドロキシル基 により置換されたシクロプロピルまたは５）　　水素原
子を示す｝、 ｃ）　　共有結合であり、

【０００９】Ｅは、ａ）　　アミノ酸、ｂ）　　共有結
合または ｃ）　　Ｃ−末端アミノ基−ＮＲ３２（ここでＲ３は同
一または相異なることができて、前述の定義を有する）
であり、Ｘは、ａ）　　水素、 ｂ）　　Ｒ１−ＣＯ（ここでＲ１は前述の定義を有する
）、ｃ）　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルコキシ−ＣＯ、ｄ
）　　（Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルコキシ−ＣＯまた
はｅ）　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８
）−アルコキシ−ＣＯであり、

【００１０】Ｙは、アミノ酸または共有結合であり、Ｚ
は、アミノ酸または共有結合である〕 で表されるペプチドまたは２量重合成分としてのシステ
インを有する、式Ｉのペプチドの２量体、適切な場合に
はその立体異性体または式Ｉのペプチドの生理学的に許
容し得る塩〔但し化合物Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨまたは
Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ
−ＯＨを除く〕に関する。

【００１１】式Ｉの好ましいペプチドは式中ＡがＧｌｕ
、ｐＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ
またはＯｒｎであり、ＢがＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇ
ｌｙ、Ａｌａ、ＶａｌまたはＩｌｅであり、ＣがＴｙｒ
、Ｔｙｒ（Ｒ１）、Ｐｈｅ（Ｒ２）、Ｔｒｐ（Ｒ２）ま
たはＮａｌであり、ＤがＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｄ−Ａｓｐ、
Ｄ−Ａｓｎ、ｂＡｌａ、アザグリル−ＮＨ２またはＮＨ
−Ｒ３であり、ＥがＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎま
たはＮＨ２であり、Ｘが水素またはアシル基であり、Ｒ
１、Ｒ２およびＲ３が前述の定義を有し、Ｙがチロシン
または共有結合であり、そしてＺがグルタミン、ロイシ
ンまたは共有結合であるペプチドである。

【００１２】特に好ましいペプチドは、下記式ＩＩＸ−
Ｃ−Ｃｙｓ−Ｄ　　　　　　　　　　　（ＩＩ）〔式中
、ＣはＴｙｒ、Ｔｙｒ（Ｒ１）、Ｐｈｅ（Ｒ２）、Ｔｒ
ｐ（Ｒ２）またはＮａｌであり、ＤはＡｓｐ、Ａｓｎ、
Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、ｂＡｌａ、アザグリル−ＮＨ
２またはＮＨ−Ｒ３であり、そしてＸはａ）　　水素、
ｂ）　　Ｒ１−ＣＯ、 ｃ）　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルコキシ−ＣＯ、ｄ）　
　（Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルコキシ−ＣＯまたはｅ
）　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−
アルコキシ−ＣＯであり、 上記のＲ１、Ｒ２およびＲ３は前述の定義を有する〕で
表されるペプチドまたは２量重合成分としてのシステイ
ンを有する、式ＩＩのペプチドの２量体、適切な場合に
はその立体異性体または式ＩＩのペプチドの生理学的に
許容し得る塩である。

【００１３】さらに特に好ましいペプチドはＡｓｎ　Ｔ
ｙｒ　ＣｙｓＡｓｎまたはＴｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｓｎであ
る。

【００１４】アミノ酸の用語は例えば下記化合物：アラ
ニン、グリシン、プロリン、システイン、ヒスチジン、
グルタミン、アスパラギン酸、イソロイシン、アルギニ
ン、グルタミン酸、リジン、セリン、フェニルアラニン
、ロイシン、スレオニン、メチオニル、バリン、アスパ
ラギン、トリプトファン、チロシン、２−アミノアジピ
ン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノアジピン酸、３
−アミノイソ酪酸、β−アラニン、２−アミノピメリン
酸、２−アミノ酪酸、２，４−ジアミノ酪酸、４−アミ
ノ酪酸、デスモシン、ピペリジンカルボン酸、２，２−
ジアミノピメリン酸、６−アミノカプロン酸、２，３−
ジアミノプロピオン酸、２−アミノヘプタン酸、Ｎ−エ
チルグリシン、２−（２−チエニル）グリシン、３−（
２−チエニル）アラニン、ペニシルアミン、Ｎ−エチル
アスパラギン、サルコシン、ヒドロキシリジンＮ−メチ
ルイソロイシン、アロ−ヒドロキシリジン、６−Ｎ−メ
チルリジン３−ヒドロキシプロリン、Ｎ−メチルバリン
、４−ヒドロキシプロリン、ノルバリン、イソデスモシ
ン、ノルロイシン、アロ−イソロイシン、オルニチンま
たはＮ−メチルグリシンの立体異性形態すなわちＤまた
はＬ形態を意味する。

【００１５】上記アミノ酸は一般的な慣用法で略記され
る（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，　Ｌｕｅｂｋｅ，　Ｔｈｅ　
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，　Ｖｏｌｕｍｅ　Ｉ，　Ｎｅｗ　Ｙ
ｏｒｋ　１９６５，　ｐａｇｅｓ　ＸＸＩＩ−ＸＸＩＩ
Ｉ；　Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，　Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　
ｄｅｒ　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍｉｅ　（Ｍｅｔｈｏｄｓ　
ｏｆ　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　Ｖｏｌｕｍｅ
　ＸＶ／１　ａｎｄ　２　Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ　１９７
４参照）。

【００１６】前記アミノ酸ｐＧｕはピログルタミルであ
り、Ｎａｌは３−（２−ナフチル）アラニンであり、ア
ザグリル−ＮＨ２は式ＮＨ２−ＮＨ−ＣＯＮＨ２の化合
物でありそしてＤ−Ａｓｐはアスパラギン酸のＤ形態で
ある。ペプチドはその化学的性質によればアミドであり
、加水分解により分解してアミノ酸になる。

【００１７】またシクロアルキルはアルキル置換基例え
ば４−メチルシクロヘキシルまたは２，３−ジメチルシ
クロペンチルを意味する。

【００１８】Ｃ６〜Ｃ１４−アリールの例としてはフェ
ニル、ナフチル、ビフェニリルまたはフルオレニルがあ
るが、フェニルおよびナフチルが好ましい。このことは
それより誘導される基例えばアリールオキシ、アラルキ
ルおよびアラルコキシにも適用される。アラルキルは例
えばＣ１〜Ｃ８−アルキルに結合した非置換または置換
Ｃ６〜Ｃ１４−アルール基例えばベンジル、１−および
２−ナフチルメチル、ハロベンジルおよびアルコキシベ
ンジルを意味するが、しかしアラルキルを上記の基に限
定するものではない。

【００１９】アルキルの用語は直鎖または分枝鎖状炭化
水素鎖を意味する。このことはそれより誘導される基例
えばアルコキシ、アラルキルおよびアルカノイルにも適
用される。

【００２０】式Ｉの化合物の生理学的に許容しうる塩は
特に製薬的に使用可能な塩または無毒性塩を意味する。 この種の塩は例えば酸基例えばカルボキシルを含有する
式Ｉの化合物により、アルカリ金属またはアルカリ土類
金属例えばＮａ、Ｋ、ＭｇおよびＣａを用いて、並びに
生理学的に許容しうる有機アミン例えばトリエチルアミ
ンおよびトリス（２−ヒドロキシエチル）アミンを用い
て形成される。塩基性基例えばアミノ基またはグアニジ
ノ基を含有する式Ｉの化合物は無機酸例えば塩酸、硫酸
またはリン酸で、並びに有機のカルボン酸またはスルホ
ン酸例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フ
マル酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸で塩を形
成する。塩基性基および酸性基が同数で存在する化合物
は分子内塩を形成し、第３の塩成分に左右されることは
ない。

【００２１】

【製造方法】さらに本発明は式Ｉのペプチドの製造方法
に関する。その方法は ａ）　　Ｃ−末端遊離カルボキシル基含有セグメントま
たはその活性化誘導体をＮ−末端遊離アミノ基含有の対
応するセグメントと反応させるか、またはｂ）　　該ペ
プチドを段階的に合成し、次いで（ａ）または（ｂ）で
得た化合物において、その他の官能を保護するために一
時的に導入した所望に応じた１個以上の保護基を除去し
、このようにして得た式Ｉの化合物を適切な場合にはそ
れらの生理学的に許容し得る塩に変換することからなる
。

【００２２】本発明ペプチドはペプチド化学の一般的手
法に従ってＣ−末端から段階的にまたは各セグメントの
結合により製造される（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，　Ｍ
ｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃ
ｈｅｍｉｅ，　Ｖｏｌｕｍｅ　１５／１，２参照）。ペ
プチド結合は例えば活性エステル、アジドを経る混合無
水物法によりまたはカルボジイミド法によって、特に反
応速度を増加しかつラセミ化を防止する物質例えば１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド、３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒ
ドロ−１，２，３−ベンゾトリアジン、Ｎ−ヒドロキシ
−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミドを用
い、さらにまた１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの活
性誘導体またはリン酸、ホスホン酸およびホスフィン酸
の無水物を用いて−１０℃と溶媒の沸点との間の温度好
ましくは−５℃〜４０℃で実施されうる。

【００２３】上記反応のために適当な溶媒はジメチルホ
ルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリ
ドンまたはジメチルスルホキシドである。さらにまた、
各成分の溶解性から可能である場合には例えばメチレン
クロライド、クロロホルムまたはテトラヒドロフランの
ような溶媒を用いることも可能である。これらの各方法
は例えばＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ−Ｇｒｏｓｓ：　“Ｔｈ
ｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓ
ｓ，　Ｖｏｌ．　Ｉ　（１９７９）に記載されている。

【００２４】必要により、副反応を防止するためまたは
特定のペプチド合成のために、アミノ酸側鎖中の官能基
はさらに適当な保護基により保護される（例えばＴ．Ｗ
．Ｇｒｅｅｎｅ，　“　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏ
ｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”
　参照）が、主として用いられるのは下記のとおりであ
る。

【００２５】Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ａｒｇ（Ｍｔｓ）、Ａ
ｒｇ（Ｍｔｒ）、Ａｒｇ（ＰＭＣ）、Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）、Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｃｙｓ−（４−ＭｅＢｚｌ）
、Ｃｙｓ（Ａｃｍ）、Ｃｙｓ（ＳＢｕｔ）、Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚｌ）、Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）、Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）、Ｈ
ｉｓ（Ｆｍｏｃ）、Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ
）、Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｍｅｔ（
Ｏ）、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）、Ｔｈｒ（
Ｂｚｌ）、Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）、Ｔｒｐ（Ｍｔｓ）、Ｔｒ
ｐ（ＣＨＯ）、Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）、Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）
またはＴｙｒ（Ｂｕｔ）。

【００２６】アミノ保護基として使用するのが好ましい
のは、接触水添により除去されうるベンジルオキシカル
ボニル（Ｚ）基、弱酸により除去されうる２−（３，５
−ジメチルオキシフェニル）−２−プロピルオキシカル
ボニル（Ｄｄｚ）基またはトリチル（Ｔｒｔ）基並びに
第２アミンにより除去されうる９−フルオレニルメチル
オキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基である。システインの
ＳＨ基は多数の保護基により遮断されうる。これに好ま
しいのはトリチル（Ｔｒｔ）基およびＳ−ｔｅｒｔ−ブ
チル（ＳｔＢｕ）基である。該トリチル基を沃素酸化に
より除去するとシステイン化合物が生成され、または該
基を還元酸性分裂により除去するとシステイン化合物が
得られる（Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ．　Ｃｈｅｍ．　１
９７９，　２２７〜２４７）。

【００２７】他方、Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチル基はトリブチ
ルホスフィンによる還元分裂に付すのが最もよい（Ａｕ
ｓｔ．　Ｊ．　Ｃｈｅｍ．　１９　（１９６６）　２３
５５〜２３６０）。側鎖中のＯＨおよびＣＯＯＨ官能基
は、酸で除去されうるｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）基に
より保護するのが最もよい（これについてもまたＭｅｉ
ｅｎｈｏｆｅｒ−Ｇｒｏｓｓ：　“　Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ”　，Ｖｏｌ．　３参照）。

【００２８】式ＩまたはＩＩの化合物およびその生理学
的に許容しうる塩は主として、真性糖尿病または非イン
スリン依存性糖尿病を治療するための医薬組成物用の活
性物質として使用される。

【００２９】〔医薬組成物〕すなわち、本発明はまた化
合物Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａ
ｓｎ−ＯＨおよびＨ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ
−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨを除外せずに
式ＩまたはＩＩで表される少なくとも１種の化合物およ
び／または少なくとも１種のその生理学的に許容しうる
塩を溶解された、無定形のおよび／または結晶の、好ま
しくは無定形のおよび／または結晶の形態で含有する医
薬組成物にも関する。この医薬組成物に好ましいペプチ
ドはＡｓｎ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇ
ｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓ
ｎ−ＯＨまたはＴｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｓｎおよび／または
その生理学的に許容しうる塩である。

【００３０】医薬組成物は約３．０〜９．０好ましくは
約５．０〜８．５のｐＨを有する注射用の溶液または懸
濁液であるのが好ましく、該組成物は適当な等張化剤、
適当な保存剤および適切な場合には適当な緩衝剤および
適切な場合にはさらにまたデポー主剤（ｐｒｉｎｃｉｐ
ｌｅ）を含有するが、勿論全ては滅菌水性溶液または懸
濁液状態で存在する。活性物質を別とした組成物成分の
全体は該組成物ビヒクルを形成する。

【００３１】適当な等張化剤の例にはグリセロール、グ
ルコース、マンニトール、ＮａＣｌ、カルシウムまたは
マグネシウム化合物例えばＣａＣｌ２またはＭｇＣｌ２
がある。

【００３２】適当な保存剤の例にはフェノール、ｍ−グ
レゾール、ベンジルアルコールおよび／またはｐ−ヒド
ロキシ安息香酸エテスルがある。

【００３３】特に約５．０〜８．５のｐＨに調整するの
に使用できる緩衝物質の例には酢酸ナトリウム、クエン
酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等がある。あるいはま
た生理学的に許容しうる希酸（代表的にはＨＣｌ）また
はアルカリ（代表的にはＮａＯＨ）もｐＨの調整に適当
である。

【００３４】また本発明組成物の作用プロフィルを変更
させるために、修飾（ＥＰ−Ｂ　１３２　７６９および
ＥＰ−Ｂ　１３２　７７０参照）および／または未修飾
インスリン好ましくはウシ、ブタまたはヒトインスリン
特に好ましくはヒトインスリンを混合することも可能で
ある。

【００３５】医薬組成物は少なくとも１種の式Ｉまたは
ＩＩの化合物および／または少なくとも１種のその生理
学的に許容しうる塩を、適切な場合には修飾および／ま
たは未修飾インスリンまたはその誘導体とともに、生理
学的に許容しうるビヒクルとともに、並びに適切な場合
には適当な添加剤および補助剤とともに一緒に用いて適
当な剤形に変換することによって調製される。

【００３６】

【実施例】以下に本発明を実施例により詳細に説明する
。

【００３７】〔ペプチド製造実施例〕 実施例１ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨ １ａ．　　Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒ
ｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ ジメチルホルムアミド５０ｍｌ中に溶解したＦｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ３．４ｇ、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ
）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ（Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ．　Ｃ
ｈｅｍ．　１９７９，　２４２）３．９５ｇ（７．４ミ
リモル）およびＨＯＢＴ　１ｇの撹拌溶液にＤＣＣ１．
６３ｇを０℃で加え、混合物を０℃で１時間撹拌させ次
に室温で一夜放置した。翌日、沈殿を吸引濾去しついで
濾液を濃縮した。残留物を酢酸エチルで摩砕した。収量
２．８３ｇ。さらに３．６３ｇを母液から単離すること
ができた。 全収量：６．４６ｇ（８９％）。 Ｃ５８Ｈ６２Ｎ４Ｏ８Ｓ（９７５．２１８）融点　　１
１２〜１１４℃ 〔α〕２１Ｄ＝−１５．３°（ｃ＝１、メタノール中）

【００３８】１ｂ．　　Ｈ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ
（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓ
ｎ−ＯｔＢｕ　６ｇ（６．１５モル）をジメチルホルム
アミド１００ｍｌ中に溶解した。これにジエチルアミン
６．８ｇを加え、混合物を室温で１０分間放置した。そ
れを引続き高真空下で濃縮し、残留物をシリカゲル上で
メチレンクロライドを用いてクロマトグラフィー処理し
た。 脂肪親和性不純物はメチレンクロライドで溶離された。 その物質をメチレンクロライド／メタノール　９．５：
０．５で溶離した。収量：油状物４．４ｇ（９５％）。 Ｃ４３Ｈ５２Ｎ４Ｏ６Ｓ（７５２．９７６）

【００３９
】１ｃ．　　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨ トリフルオロ酢酸２５ｍｌおよびエチルメルカプタン２
５ｍｌの混合物中にＨ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔ
ｒｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ　２．２ｇ（２．９ミリモル
）を加えた。４時間後に混合物を水２５０ｍｌ中に入れ
た。その水溶液をエーテルで３回抽出しついで凍結乾燥
した。 収量：１．０５ｇ（９１％）。 Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ６Ｓ（３９８．４４）〔α〕２３Ｄ
＝−１．１°（ｃ＝１、水中で）

【００４０】実施例２ Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨ２ａ．　　
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ
）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ ジメチルホルムアミド３０ｍｌ中に溶解したＨ−Ｔｙｒ
（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ　２
．２ｇ（２．９ミリモル）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨ　
１．０４ｇおよびＨＯＢｔ　０．３９ｇの撹拌溶液にＤ
ＣＣ　０．６４ｇを０℃で加えた。混合物を０℃で１時
間撹拌させついで室温で一夜放置した。翌日沈殿を吸引
濾去し、濾液を濃縮した。残留物を酢酸エチル中に溶解
し、水、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、ＫＨＳＯ４溶液および
水で順次抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥しついで濃縮した
。残留物を石油エーテルで摩砕した。収量：１．９８ｇ
（６３％）。 Ｃ６２Ｈ６８Ｎ６Ｏ１０Ｓ（１０８９．３２３）〔α〕
２２Ｄ＝−１８．８°（ｃ＝１、メタノール中）

【００
４１】２ｂ．　　Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙ
ｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ
）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ１．９ｇ（１．７４ミリモル）を
ジメチルホルムアミド５０ｍｌ中に溶解した。これにジ
エチルアミン１．８ｍｌを加え、混合物を室温で１５分
間放置した。次にそれを高真空下で濃縮し、残留物を酢
酸エチルで摩砕しついで真空乾燥した。 収量：０．９８ｇ（６５％）。 Ｃ４７Ｈ５８Ｎ６Ｏ８Ｓ（８６７．０８１）〔α〕２１
Ｄ＝−７．２°（ｃ＝１、メタノール中）

【００４２】
２ｃ．　　Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨ 前記で得られた化合物０．９ｇ（１ミリモル）を、エチ
ルメルカプタン１０ｍｌおよびトリフルオロ酢酸１０ｍ
ｌの混合物中に溶解した。４時間後に混合物を水１００
ｍｌ中に注いだ。水溶液をエーテルで３回抽出しついで
凍結乾燥した。 収量：４５５ｍｇ（８９％）。 Ｃ２０Ｈ２８Ｎ６Ｏ８Ｓ（５１２．５４７）〔α〕２３
Ｄ＝−２６．０°（ｃ＝１、水中）

【００４３】実施例
３ アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−
Ａｓｎ−ＯＨ ジメチルホルムアミド３０ｍｌ中に溶解したＨ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃ
ｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ・トリフルオロアセ
テート（Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ．　Ｃｈｅｍ．　１９
７９，　２４３）２．０ｇ（１．５６ミリモル）の溶液
にＮ−エチルモルホリン０．４ｍｌおよびアセチル−Ｎ
−ビトロキシスクシンイミド０．５３ｇを加えた。室温
で４時間反応させた後に混合物を高真空下で濃縮した。 残留物を酢酸エチル中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液
、ＫＨＳＯ４溶液および水で順次振とうすることにより
抽出した。これより沈殿が得られ、それを吸引濾去した
。収量：１．３ｇ。酢酸エチル相をＮａ２ＳＯ４で乾燥
しついで濃縮した。残留物をジエチルエーテルで摩砕し
、吸引濾過した。収量：０．８ｇ。全収量：２．１ｇ（
＞１００％）。

【００４４】前記で得たＡｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−
Ａｓｎ−ＯｔＢｕの純粋バッチ１．３ｇ（約１．０７ミ
リモル）を、トリフルオロ酢酸３０ｍｌおよびエチルメ
ルカプタン３０ｍｌの混合物中に溶解した。４時間の反
応時間の経過後に混合物を水３００ｍｌ中に入れ、その
水溶液をジエチルエーテルで３回抽出した。水性相は凍
結乾燥した。収量：７４０ｍｇ（８７％）。 Ｃ３３Ｈ４８Ｎ８Ｏ１３Ｓ（７９６．８６）〔α〕２３
Ｄ＝−２５．１°（ｃ＝１、水中）

【００４５】実施例
４ Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｕｔ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）
−Ａｓｎ−ＯＢｕｔ・ＨＢｒ（７・ＨＢｒ）の合成４ａ
．　　Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｌｎ−ＯＮｂ（１
６） Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ｍｌ中に溶解した
Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ　２５．２４ｇ（５５
ミリモル）、Ｈ−Ｇｌｎ−ＯＮｂ・ＨＣｌ　１５．８８
ｇ（５０ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール水和物６．７５ｇの溶液にＮ−エチルモルホリン
６．４ｍｌ（５０ミリモル）およびジシクロヘキシルカ
ルボジイミド１０．５ｇを−３℃で加えた。混合物を０
℃で１時間次に室温で６時間撹拌させついで室温で一夜
放置した。 沈殿を吸引濾去し、濾液を濃縮した。得られた油状物を
酢酸エチル中に溶解し、溶液をＮａＨＣＯ３溶液、クエ
ン酸塩緩衝液（ｐＨ３）および水で順次洗浄し、Ｎａ２
ＳＯ４で乾燥しついで濃縮した。油状生成物を石油エー
テルで摩砕して粉末を得、それを吸引濾去した。次にそ
れを煮沸し、それぞれ１００ｍｌずつで３回ジイソプロ
ピルエーテルでデカンテーションした。それを最後に冷
ジイソプロピルエーテルで摩砕し、吸引濾去しそして石
油エーテルで洗浄した。収量：３２．８ｇ（９１％）。 融点８０〜９０℃ 〔α〕２２Ｄ＝＋１５．１°（ｃ＝１、メタノール中）
Ｃ３７Ｈ４６Ｎ４Ｏ１１（７２２．８１）計算値：　　
Ｃ　　６１．４８　　　　Ｈ　　６．４１　　　　Ｎ　
　７．７５ 実測値：　　Ｃ　　６１．３　　　　　　Ｈ　　６．７
　　　　　　Ｎ　　７．９

【００４６】４ｂ．　　Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇ
ｌｎ−ＯＨ・ジシクロヘキシルアミン メタノール５００ｍｌ中に溶解した前記４ａで得た１６
の化合物３２．５ｇ（４５ミリモル）の溶液に水５ｍｌ
およびＰｄ／ＢａＳＯ４を加え、水素化を７時間実施し
た。 次に触媒を吸引濾去し、濾液を濃縮した。残留油状物を
酢酸エチル２５０ｍｌ中に溶解した。これにジシクロヘ
キシルアミン１１．３ｍｌ（５５ミリモル）を加え、混
合物を３℃で数時間放置しついで沈殿を吸引濾去した。 それを粉砕機中において酢酸エチルで摩砕し、吸引濾去
しついで真空乾燥した。収量：２７ｇ（７８％）。 融点１７０〜１７１℃ 〔α〕２３Ｄ＝＋１０．２°（ｃ＝１、メタノール中）
Ｃ４２Ｈ６４Ｎ４Ｏ９（７６９．０） 計算値：　　Ｃ　　６５．６　　　　Ｈ　　８．３９　
　　　Ｎ　　７．２８ 実測値：　　Ｃ　　６５．４　　　　Ｈ　　８．５　　
　　　　Ｎ　　７．３

【００４７】４ｃ．　　Ｄｄｚ−
Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｌｎ−ＯＨ（１７） Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｌｎ−ＯＨ・ジシクロヘ
キシルアミン２．９ｇ（３．７ミリモル）を酢酸エチル
とクエン酸塩緩衝液（ｐＨ＝３）との間に分配した。酢
酸エチル相を中性になるまで水洗し、Ｎａ２ＳＯ４で乾
燥しついで濃縮した。残留物は無定形の１７の化合物で
あった。収量：２ｇ（９０％）。 融点１１０〜１１５℃ 〔α〕２２Ｄ＝＋１９．８（ｃ＝１、メタノール中）Ｃ
３０Ｈ４１Ｎ３Ｏ９（５８７．６８）計算値：　　Ｃ　
　６１．３１　　　　Ｈ　　７．０３　　　　Ｎ　　７
．１５ 実測値：　　Ｃ　　６０．６　　　　　　Ｈ　　７．２
　　　　　　Ｎ　　７．０

【００４８】４ｄ．　　Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇ
ｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（
Ｂｕｔ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯＢｕｔ（１８
）前記４ｃ．の１７の化合物９．７ｇ（１６．５ミリモ
ル）、実施例３の化合物１９．２ｇ（１５ミリモル）お
よびＨＯＢｔ　２．０２５ｇ（１５ミリモル）を室温で
撹拌してＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０ｍｌ中に溶
解した。混合物を０℃に冷却し、Ｎ−エチルモルホリン
１．９５ｍｌ（１５ミリモル）並びにＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド９ｍｌ中におけるジシクロヘキシルカルボ
ジイミド３．３ｇ（１６ミリモル）の溶液を加え、その
混合物を０℃で１時間次に室温で４時間撹拌させついで
室温で一夜放置し、ジシクロヘキシル尿素を吸引濾去し
た。次にそれをそれぞれ４．５ｍｌずつで２回Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミドで洗浄した。濾液を撹拌下で飽和
ＮａＨＣＯ３溶液１５９ｍｌ中に流し入れ、粉末状沈殿
が得られるまで撹拌を続けた。これを吸引濾去し、クエ
ン酸塩緩衝液（ｐＨ３）で摩砕し、吸引濾去し、中性に
なるまで水洗しついで約０．１トルの下で乾燥した（収
量２３．１ｇ）。 粗物質をほとんど蒸気浴上で沸騰するまで加熱し、希懸
濁液を３℃で一夜貯蔵し、沈殿を吸引濾去しついで酢酸
エチルおよびエーテルで洗浄した。収量２０ｇ（７６．
８％）。〔α〕２２Ｄ＝−１０．２°（ｃ＝１、メタノ
ール中）この物質は２０５℃以上で分解し、約２５０℃
で木炭化した。アミノ酸分析：Ａｓｐ　２．００；Ｇｌ
ｕ　２．０１；Ｃｙｓ　０．７５；Ｌｅｕ　０．９９；
Ｔｙｒ１．９５。 Ｃ９２Ｈ１２３Ｎ１１Ｏ２０Ｓ（１７３５．１５）計算
値：　　Ｃ　　６３．６８　　　　Ｈ　　７．１５　　
　　Ｎ　　８．８８　　Ｓ１．８５ 実測値：　　Ｃ　　６２．０　　　　　　Ｈ　　７．２
　　　　　　Ｎ　　８．６　　　　Ｓ２．１

【００４９】４ｅ．　　Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｌｎ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（Ｂｕ
ｔ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯＢｕｔ・ＨＢｒ（
７・ＨＢｒ）前記で得た１８の化合物３．５ｇ（２ミリ
モル）を、トリフルオロ酢酸１．７５ｍｌ（２０ミリモ
ル）、水０．３５ｍｌおよびメチレンジクロライド３３
ｍｌ（１％の水を有する５％トリフルオロ酢酸溶液約３
５ｍｌ）並びにアニソール３．５ｍｌの撹拌混合物中に
溶解した。この混合物を室温で３時間撹拌させ、ピリジ
ン２ｍｌ（２４．８ミリモル）を加え、その混合物を約
０．１トルの下で濃縮した。残留物をエーテルで摩砕し
、吸引濾去し、エーテルで洗浄し、乾燥し、水で摩砕し
、吸引濾去し、水洗しついでＰ２Ｏ５で乾燥した（収量
３．３５ｇ）。さらに精製するために、物質を暫時煮沸
し、熱いうちにそれぞれ２０ｍｌずつの酢酸エチルで２
回吸引濾過した。次にそれをエーテルで洗浄した。収量
　　３．０ｇ（９２％）。 融点　　２２５〜２６５℃（分解） 〔α〕２２Ｄ＝−２０．２°（ｃ＝１、メタノール中）
アミノ酸分析：Ａｓｐ　１．９７；Ｇｌｕ　２．００；
Ｃｙｓ　０．６１；Ｌｅｕ　１．００；Ｔｙｒ　２．０
１Ｃ８０Ｈ１１０ＢｒＮ１１Ｏ１６Ｓ（１５９３．８）
計算値：Ｃ　　６０．２３　　　　Ｈ　　６．９６　　
　　Ｎ　　９．６７　　　　Ｓ２．０１ 実測値：Ｃ　　６０．６　　　　　　Ｈ　　７．０　　
　　　　Ｎ　　９．５　　　　　　Ｓ２．２

【００５０】〔薬理実施例〕 実施例５ 式ＩおよびＩＩの本発明ペプチドの生物活性はラットか
ら解剖によって得られた脂肪細胞および横隔膜の断片を
用いて測定する。「トリペプチド」の用語はＴｙｒ　Ｃ
ｙｓ　Ａｓｎ−ＯＨを意味し、「ヘキサペプチド」はア
セチル−Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａ
ｓｎ−ＯＨを意味する。「ベースライン」（ｂａｓｅｌ
ｉｎｅ）の用語は刺激のない場合の活性を意味し、イン
スリンはヒトインスリンを意味しそしてｄｐｍは１分間
当たりの放射性壊変を意味する。「ペプチド」の用語は
本発明によりインスリン活性を有するペプチドを意味す
る。ラットの脂肪細胞は以下のようにして調製した。

【００５１】副睾丸の脂肪組織（Ｗｉｓｔａｒラット、
１６０〜１８０ｇ、給餌制限なし）をコラゲナーゼで消
化し、得られた個々の脂肪細胞を浮遊により数回洗浄す
る。

【００５２】ラットからの横隔膜断片の調製：組織の小
断片（直径５ｍｍ）を、数回洗浄した半横隔膜（Ｗｉｓ
ｔａｒラット、６０〜７０ｇ、給餌制限なし）から打ち
抜く。

【００５３】下記の２種の試験によって、グルコースが
酸化（解糖、ペントースホスフェート経路）により代謝
されようがまたは酸化により代謝されないかに関係なく
、インスリンで刺激されることができかつ機能性インス
リンシグナル透過カスケードおよびグルコース輸送を必
要とするグルコース吸収を測定する。ラクテートの産生
ではなくて脂質、グリコーゲンまたは膜不透過性中間体
（グルコース　６−ホスフェート）への変換が次に行わ
れる。

【００５４】ａ）　　ラット脂肪細胞をインスリンまた
はペプチドの存在または不在下でＤ−〔Ｕ−１４Ｃ〕−
グルコース（Ｄ−グルコースの最終濃度２２μＭ）とと
もにインキュベートする。細胞をシリコーン油層を介し
ての遠心分離により培地から分離しついで再び単離し、
細胞性放射能を測定する。

【００５５】ｂ）　　横隔膜の断片をインスリンまたは
ペプチドの存在または不在下でＤ−〔Ｕ−１４Ｃ〕−グ
ルコース（Ｄグルコースの最終濃度７５μＭ）とともに
インキュベートする。培地を完全に吸引する。各組織片
を数回洗浄し次いで放射能測定のためにアルカリ処理を
行なって可溶化する。結果は表１に示すとおりである。

【００５６】

【表１】

【００５７】実施例６ グルコース輸送 脂肪細胞および横隔膜の断片は実施例５のようにして調
製する。下記試験によって、グルコース輸送担体例えば
インスリンシグナル透過カスケードにより血漿膜を通過
してインスリンで刺激され得る特異的グルコース輸送（
促進拡散）を独占的に試験する。グルコース輸送におけ
るグルコース代謝のいずれもの作用は、非代謝性グルコ
ース類似体を用いることによって除外される。

【００５８】ａ）　　ラット脂肪細胞をインスリンまた
はペプチドの存在または不在下で２−デオキシ−Ｄ−〔
１−３Ｈ〕−グルコース（Ｄ−グルコースの最終濃度０
．２ｍＭ）およびＬ−〔１−１４Ｃ〕−グルコース（輸
送不可能）とともにインキュベートする。放射能（〔３
Ｈ〕および〔１４Ｃ〕）を測定するために細胞を油層を
介しての遠心分離により培地から分離する。特異的な立
体選択性グルコース輸送は、総細胞結合放射能（〔３Ｈ
〕−グルコース）並びに拡散および非特異的作用によっ
て会合された放射能（〔１４Ｃ〕−グルコース）との間
の差として計算される。

【００５９】ｂ）　　横隔膜の各断片をインスリンまた
はペプチドの存在または不在下で２−デオキシ−Ｄ−〔
１−３Ｈ〕−グルコース（Ｄ−グルコースの最終濃度０
．１ｍＭ）およびＬ−〔１−１４Ｃ〕−グルコースとと
もにインキュベートする。各組織片をガラスファイバー
フィルターでの迅速濾過により培地から分離しついで完
全に洗浄する。放射能をアルカリ性抽出物中で測定する
。結果は表２に示すとおりである。

【００６０】

【表２】

【００６１】実施例７ インビトロでのエステル化 この試験では脂質産出物（トリグリセリド、リン脂質）
においてインスリンが刺激し得るグリセロール　３−ホ
スフェートのエステル化を測定する。脂質合成（例えば
アセチル−ＣｏＡ：Ｌ−グリセロール　３−ホスフェー
ト　アシルトランスフェラーゼ）酵素は機能性インスリ
ンシグナル透過カスケードを含めてこの中に包含される
。サイトカラシンＢによるエステル化の阻害のないこと
によって証明されるように、ここではグルコース輸送は
何の役割も有しない。

【００６２】実施例５のようにして調製したラット脂肪
細胞をインスリンまたはペプチドの存在または不在下で
Ｄ−グルコース（最終濃度３３μＭ）とともにインキュ
ベートしついで低濃度のサポニンで処理して血漿膜を浸
透性にする（内膜には損傷を与えない）。Ｌ−〔Ｕ−１
４Ｃ〕−グリセロール　３−ホスフェートの添加後にイ
ンキュベーションを続ける。トルエン可溶性のシンチレ
ーションカクテルを加え、脂質を遠心分離によって水性
相から分離する。脂質含有のトルエン相を取出し、その
放射能を測定する。結果は表３に示すとおりである。

【００６３】

【表３】

【００６４】実施例８ 脂肪生成 実施例５から得られたラット脂肪細胞を低濃度のトリプ
シンで処理して、インスリンレセプターをタンパク質加
水分解によって不活化する。プロテアーゼ阻害剤の添加
後に細胞を浮遊により２回洗浄し、インキュベーション
を３７℃で１５分間続ける。次にこれらの細胞を、ペプ
チドによる脂肪生成刺激の試験に用いる。インスリンを
用いた対照インキュベーションでは、トリプシン処置済
み細胞はインスリンで刺激され得る脂肪生成を極めて少
ししか示さず、従ってむしろ限定された数だけの機能性
インスリンレセプター（インスリン結合に関して）のみ
を示すことが分かる。これは該試験がインスリンのレセ
プター結合後における、インスリンシグナル透過カスケ
ード中での介入による脂肪生成刺激を測定しているとい
うことを意味する。結果は表４に示すとおりである。

【００６５】

【表４】

【００６６】実施例９ マウスの血中グルコースプロフィル 体重１７〜２１ｇ（約３０日令）のＣｈａｒｌｅｓ　Ｒ
ｉｖｅｒ　Ｗｉｇａ　Ｂａｌｂ−Ｃ種の雌マウスに標準
食を摂食させる。実験開始前の１６時間は食物を全く与
えない。各実験グループ中の５匹の動物に実施例４の化
合物（オクタペプチド）の水溶液（ｐＨ６）を静脈内投
与する。動物１匹当たり０．３ｍｌの容量を投与する。

【００６７】表５には、対照グループ（５匹の動物、緩
衝溶液ｐＨ６．０；動物１匹あたり投与される容量０．
３ｍｌ）および本発明のオクタペプチド投与の動物との
間の差の百分率としての血中グルコースレベルが示され
ている。

【００６８】

【表５】

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式Ｉ Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｅ　　　　（Ｉ
   ）〔式中、Ａは、ａ）　　アミノ酸または共有結合であ
   り、Ｂは、ａ）　　アミノ酸または共有結合であり、Ｃ
   は、ａ）　　アミノ酸、 ｂ）　　環上で１回以上下記の置換基 １）　　Ｒ１｛ここでＲ１は １．１　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、１．２　　（
   Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルキル、１．３　　（Ｃ６〜
   Ｃ１４）−アリール、１．４　　１回以上下記置換基 １．４．１　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルにより置換さ
   れた（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールまたは１．５　　１回
   以上下記置換基 １．５．１　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールにより置換
   された（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルである｝、２）　　Ｒ
   ２｛ここでＲ２は ２．１　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、２．２　　（
   Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルキル、２．３　　（Ｃ１〜
   Ｃ１８）−アルコキシ、２．４　　（Ｃ３〜Ｃ１４）−
   シクロアルコキシ、２．５　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリ
   ール、２．６　　１回以上下記置換基 ２．６．１　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、２．６．２
   　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシにより置換された（Ｃ
   ６〜Ｃ１４）−アリール、２．７　　（Ｃ６〜Ｃ１４）
   −アリールオキシ、２．８　　１回以上下記置換基 ２．８．１　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、２．８．２
   　　（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシにより置換された（Ｃ
   ６〜Ｃ１４）−アリールオキシ、２．９　　１回以上下
   記置換基 ２．９．１　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールにより置換
   された（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、２．１０　　１回以
   上下記置換基 ２．１０．１　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリールにより置
   換された（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシ、２．１１　　ハ
   ロゲン例えばフッ素、塩素、臭素または沃素、 ２．１２　　ニトロまたは ２．１３　　トリフルオロメチルである｝により置換さ
   れた芳香族アミノ酸、 ｃ）　　共有結合であり、 Ｄは、ａ）　　アミノ酸、 ｂ）　　Ｃ−末端アミノ基−ＮＲ３２｛ここでＲ３は同
   一または相異なることができて、下記の基 １）　　（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、 ２）　　１回以上下記置換基、 ２．１　　フッ素、 ２．２　　ヒドロキシル基 により置換された（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、３）　　
   シクロプロピル、 ４）　　１回以上下記置換基 ４．１　　フッ素、 ４．２　　ヒドロキシル基 により置換されたシクロプロピルまたは５）　　水素原
   子を示す｝、 ｃ）　　共有結合であり、 Ｅは、ａ）　　アミノ酸、 ｂ）　　共有結合または ｃ）　　Ｃ−末端アミノ基−ＮＲ３２（ここでＲ３は同
   一または相異なることができて、前述の定義を有する）
   であり、 Ｘは、ａ）　　水素、 ｂ）　　Ｒ１−ＣＯ（ここでＲ１は前述の定義を有する
   ）、ｃ）　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルコキシ−ＣＯ、ｄ
   ）　　（Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルコキシ−ＣＯまた
   はｅ）　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８
   ）−アルコキシ−ＣＯであり、 Ｙは、アミノ酸または共有結合であり、Ｚは、アミノ酸
   または共有結合である〕で表されるペプチドまたは２量
   重合成分としてのシステインを有する、式Ｉのペプチド
   の２量体、適切な場合にはその立体異性体または式Ｉの
   ペプチドの生理学的に許容し得る塩〔但し化合物Ｈ−Ｔ
   ｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
   ｓ−Ａｓｎ−ＯＨまたはＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−
   Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨを除く〕。
2. 【請求項２】　　式Ｉにおいて、ＡがＧｌｕ、ｐＧｌｕ
   、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、ＬｙｓまたはＯｒ
   ｎであり、ＢがＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌ
   ａ、ＶａｌまたはＩｌｅであり、ＣがＴｙｒ、Ｔｙｒ（
   Ｒ１）、Ｐｈｅ（Ｒ２）、Ｔｒｐ（Ｒ２）またはＮａｌ
   であり、ＤがＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ
   、ｂＡｌａ、アザグリル−ＮＨ２またはＮＨ−Ｒ３であ
   り、ＥがＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、ＧｌｎまたはＮＨ２
   であり、Ｘが水素またはアシル基であり、Ｒ１、Ｒ２お
   よびＲ３が請求項１記載の定義を有し、Ｙがチロシンま
   たは共有結合であり、そしてＺがグルタミン、ロイシン
   または共有結合である請求項１記載の式Ｉのペプチド。
3. 【請求項３】　　式ＩＩ Ｘ−Ｃ−Ｃｙｓ−Ｄ　　　　　　　　　　（ＩＩ）〔式
   中、ＣはＴｙｒ、Ｔｙｒ（Ｒ１）、Ｐｈｅ（Ｒ２）、Ｔ
   ｒｐ（Ｒ２）またはＮａｌであり、ＤはＡｓｐ、Ａｓｎ
   、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、ｂＡｌａ、アザグリル−Ｎ
   Ｈ２またはＮＨ−Ｒ３であり、そしてＸはａ）　　水素
   、ｂ）　　Ｒ１−ＣＯ、 ｃ）　　（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルコキシ−ＣＯ、ｄ）　
   　（Ｃ３〜Ｃ１８）−シクロアルコキシ−ＣＯまたはｅ
   ）　　（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−
   アルコキシ−ＣＯであり、 上記のＲ１、Ｒ２およびＲ３は請求項１記載の定義を有
   する〕 で表されるペプチドまたは２量重合成分としてのシステ
   インを有する、式ＩＩのペプチドの２量体、適切な場合
   にはその立体異性体または式ＩＩのペプチドの生理学的
   に許容し得る塩。
4. 【請求項４】　　配列Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ
   またはＴｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｓｎを有する請求項１記載の
   式Ｉのペプチド。
5. 【請求項５】　　請求項１〜４のいずれか１項に記載の
   式Ｉまたは式ＩＩで表される少なくとも１種のペプチド
   の有効量を溶解された、無定形のまたは結晶の形態で含
   有する医薬組成物。
6. 【請求項６】　　少なくとも１種の修飾または未修飾イ
   ンスリンまたはその誘導体を含有する請求項５記載の医
   薬組成物。
7. 【請求項７】　　式Ｉまたは式ＩＩのうちの少なくとも
   １種の化合物を生理学的に許容し得るビヒクルおよび適
   切な場合には適当な添加剤および／または補助剤を用い
   て適当な剤形に変換することからなる請求項５または６
   記載の医薬組成物の調製方法。
8. 【請求項８】　　少なくとも１種の修飾または未修飾イ
   ンスリンまたはその誘導体が用いられる請求項７記載の
   方法。
9. 【請求項９】　　請求項１〜４のいずれか１項に記載の
   式Ｉのペプチドの製造方法において、 ａ）　　Ｃ−末端遊離カルボキシル基含有セグメントま
   たはその活性化誘導体をＮ−末端遊離アミノ基含有の対
   応するセグメントと反応させるか、またはｂ）　　該ペ
   プチドを段階的に合成し、次いで（ａ）または（ｂ）で
   得た化合物において、その他の官能を保護するために一
   時的に導入した、所望に応じた１個以上の保護基を除去
   し、このようにして得た式Ｉの化合物を適切な場合には
   それらの生理学的に許容し得る塩に変換することからな
   る前記の方法。
10. 【請求項１０】　　真性糖尿病または非インスリン依存
    性糖尿病を治療するための、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅ
    ｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−ＯＨま
    たはＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａ
    ｓｎ−ＯＨを除外せずに請求項１〜４のいずれか１項に
    記載の式Ｉまたは式ＩＩで表される少なくとも１種のペ
    プチドの使用。