JP3324804B2 - インシュリン様作用を有するペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は糖尿病の治療のために好適なイン
シュリン様作用を有するペプチドに関する。

【０００２】インシュリンは２つのポリペプチド鎖、す
なわち２１個のアミノ酸残基を含むＡ鎖および３０個の
アミノ酸残基を含むＢ鎖からなる。Ａ鎖とＢ鎖は２つの
ジスルフィド結合を介して互いに結合されており、そし
てＡ鎖の７番目とＢ鎖の７番目間およびＡ鎖の２０番目
とＢ鎖の１９番目間でシステイン残基により結合されて
いる。第３のジスルフィド結合がＡ鎖の６番目と１１番
目間に存在する。動物およびヒトのインシュリンはプレ
プロインシュリンとしてすい臓中で生成される。ヒトプ
レプロインシュリンは８６個のアミノ酸残基を含むプロ
インシュリンに結合された２４個のアミノ酸残基を含む
プレペプチドからなり、次の配置：プレペプチド−Ｂ−
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａ（ここでＣは
３１個の残基を含むアミノ酸鎖である）を有する。ラン
ゲルハンス島からの排出の間、プレペプチドが切断さ
れ、プロインシュリンが生成される。最後にＣ鎖がタン
パク質の加水分解により切断され、有効なヒトインシュ
リンが生成される。

【０００３】インシュリンはインシュリン感受性組織に
関して多くの作用を有する。１つの顕著な効果はインシ
ュリンが投与された場合、哺乳動物の血中グルコース濃
度が急速に低下することである。これは筋細胞および脂
肪細胞による血中からのグルコースの急速な取込みのた
めである。インシュリンはまたグリコーゲンシンテター
ゼを活性化し、脂肪分解を抑制する。インシュリンはア
ミノ酸からのタンパク質合成を促進し、グリコキナーゼ
およびホスホフルクトキナーゼの誘導を増加し、そして
糖新生の特定酵素、例えばピルビン酸カルボキシラーゼ
およびフルクトースジホスファターゼの生成を抑制す
る。

【０００４】II型糖尿病、すなわちインシュリン非依存
型糖尿病は末梢組織例えば筋組織または脂肪組織のイン
シュリン耐性と関連づけられる。その結果としてのグル
コース利用の減少はグルコース輸送および続いての代謝
過程におけるインシュリン刺激がないためである。この
多重の耐性はレセプターまたは後レセプターレベル、す
なわち第２メッセンジャーの生成前における欠乏を示唆
している〔Garvey, Diabetes／Metabolism Reviews
５，７２７〜７４２（１９８９年）〕。

【０００５】インシュリン様作用を有するペプチドはす
でにドイツ特許出願Ｐ４０ ４０ ５７４.５およびＰ４
１ ２７ ４９５.４に開示されている。

【０００６】インシュリン様作用を有する、さらに有効
なペプチドを求めて今般、本発明のペプチドがインビト
ロでのインシュリン様作用、良好な血清安定性、さらに
またインシュリン耐性組織におけるインシュリン様作用
を有し、そしてそれにより糖尿病の治療に好適であるこ
とが見い出された。

【０００７】したがって、本発明はインシュリン様作用
を有する式Ｉ

【化３】 〔式中、 Ｃはａ) 水素原子、 ｂ) アミノ酸残基、 ｃ) １) 直鎖状もしくは分枝鎖状の−ＣＯ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)
−アルキル、または ２) アミノ酸保護基により一置換または多置換されたア
ミノ酸残基、あるいは ｄ) 糖残基であり、 Ｄはａ) アミノ酸残基、 ｂ) ホスホアミノ酸残基、 ｃ) 糖残基、 ｄ) 共有結合または ｅ) −ＯＨであり、 Ｅはａ) 水素原子、 ｂ) −ＯＨ、 ｃ) −ＮＨ−(ＣＨ₂)_n−ＮＲ⁵ ₂（ここでＲ⁵は同一の、
または異なって１）水素原子、２）１〜６個の糖残基、
または３）１〜６個の、それぞれ独立してメチル、糖残
基、二糖残基、−Ｐ(＝Ｏ)−ＯＨ、−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−
ＯＨ−、−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−Ｏ−〔ＣＨ₂〕_m−ＮＨ₂、
イノシトール、イノシトールホスフェート、またはホス
フェート保護基を有するホスフェート残基により一置換
または多置換された糖残基からなる群より選択される基
であり、ｎは０〜６の整数であり、そしてｍは０〜４の
整数である）、 ｄ) グリセロール残基、または ｅ) −ＮＨ−(ＣＨ₂)_m−Ｒ⁶−Ｒ⁷（ここでＲ⁶は１）−
Ｏ−、２）−ＣＯ−Ｏ−、３）−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−
Ｏ−、４）−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−、５）−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ
−、６）−Ｓ−、７）−ＳＯ、８）−ＳＯ₂、９）−Ｓ
Ｏ₃、または１０）−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−であり、Ｒ⁷は１）
水素原子、２）１〜６個の糖残基、または３）１〜６個
の、それぞれ独立してメチル、糖残基、二糖残基、−Ｐ
(＝Ｏ)−ＯＨ、−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−ＯＨ、−Ｐ(＝Ｏ)
(ＯＨ)−Ｏ−〔ＣＨ₂〕_m−ＮＨ₂、イノシトール、イノ
シトールホスフェート、ホスフェート保護基を有するホ
スフェート残基、または−〔ＣＨ₂〕_m−ＣＮで一置換ま
たは多置換された糖残基であり、そしてｍは０〜４の整
数である）であり、 Ｒ¹はａ）−(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキル、 ｂ）＝Ｏ、または ｃ）−Ｏ−(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルであり、 Ｒ²はａ）硫黄保護基、 ｂ) −ＳＯ₂、 ｃ) −ＳＯ₃、 ｄ) −(Ｃ₁〜Ｃ₃）−アルキル、 ｅ) Ｏ₂基、 ｆ) Ｏ₃基、 ｇ)

【化４】 ｈ) 水素原子であり、Ｒ³およびＲ⁴はそれぞれ独立して
ａ）水素原子、またはｂ）メチルであり、そしてｗは１
または２の整数である〕のペプチド、その立体異性体、
二量化成分としてシスチンを有する式Ｉのペプチドの二
量体または式Ｉのペプチドの生理学的に許容しうる塩
（但し、式Ｉのペプチドのすべてのアミノ酸が未置換の
場合を除く）に関する。

【０００８】好ましい式ＩのペプチドはＣがアセチル、
ペニシルアミン、チオフェンアミノ酸、Ｔｙｒ、Ａｓ
ｎ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ａｓｎ
またはグルコン酸により置換されたアミノ酸からなる群
より選択される残基であり、ＤがＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｄ−
Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、−ＯＨ、グ
ルコサミンまたは共有結合からなる群より選択される基
であり、Ｅがａ）水素原子、ｂ）−ＮＨ−(ＣＨ₂)_n−Ｎ
Ｒ⁵ ₂（こごてＲ⁵は同一の、または異なって１）水素原
子、２）グルコース、３）グルコン酸、４）ガラクトン
酸、５）マンノン酸、６）グルコサミン、７）マンノー
ス、８）フルクトース、９）ガラクトース、１０）ジマ
ンノースまたは１１）トリマンノースからなる群より選
択される基であり、そしてｎが０〜４の整数である）、
またはｃ）−ＮＨ−(ＣＨ₂)_m−Ｒ⁶−Ｒ⁷（ここでＲ⁶は
１）−Ｏ−、２）−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、３）−Ｏ−Ｐ(＝
Ｏ)(ＯＨ)−Ｏ−、または４）−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−であ
り、Ｒ⁷は１）水素原子、または２）ｂ）１）〜ｂ）１
１）で定義されるような基であり、そしてｍは１〜３の
整数である）であり、Ｒ¹がａ）＝Ｏまたはｂ）メチル
であり、Ｒ²がａ）水素原子、ｂ）メチルまたはｃ）−
ＳＯ₃であり、そしてｗが１または２の整数である式Ｉ
のペプチド、その立体異性体または生理学的に許容しう
る塩である。

【０００９】特に好ましい式ＩのペプチドはＣがＴｙ
ｒ、Ｄ−ＴｙｒまたはＡｓｎからなる群より選択される
残基であり、ＤがＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎまたは共有結合か
らなる群より選択される残基であり、Ｅがａ）エチレン
ジアミンまたはｂ）−ＮＨ−(ＣＨ₂)_m−Ｒ⁶−Ｒ⁷（ここ
でＲ⁶は１）−Ｏ−または２）−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−
Ｏ−であり、そしてＲ⁷は１）水素原子、２）マンノー
ス、または３）それぞれ独立してメチル、マンノース、
ジマンノース、ガラクトースもしくはジガラクトースに
より一置換から四置換までされたマンノースである）で
あり、Ｒ¹が＝Ｏであり、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴がすべて水
素原子であり、そしてｗが１である式Ｉのペプチド、そ
の立体異性体または生理学的に許容しうる塩である。

【００１０】とりわけ好ましい式ＩのペプチドはＣがＴ
ｙｒ、Ａｓｎ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ａｓｎ、２−（チエン
−２−イル）グリシン、３−（チエン−２−イル）アラ
ニンまたはＰｈｅからなる群より選択される残基であ
り、ＤがＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ｄ−ＡｓｎまたはＤ−Ｔｙｒ
からなる群より選択される残基であり、Ｅが水素原子、
エチレンジアミンまたはエタノールアミンであり、ｗが
１または２であり、Ｒ¹が＝Ｏであり、そしてＲ²が水素
原子またはメチルである式Ｉのペプチド、その立体異性
体または生理学的に許容しうる塩である。

【００１１】「アルキル」なる用語は直鎖状または分枝
鎖状の炭化水素鎖を意味する。「アミノ酸」および「ア
ミノ酸残基」なる用語は例えば下記化合物の立体異性
体、すなわちＤ−体またはＬ−体を意味する：アラニ
ン、グリシン、プロリン、システイン、ヒスチジン、グ
ルタミン、アスパラギン酸、イソロイシン、アルギニ
ン、グルタミン酸、リシン、セリン、フェニルアラニ
ン、ロイシン、スレオニン、トリプトファン、メチオニ
ン、バリン、チロシン、アスパラギン、２−アミノアジ
ピン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノアジピン酸、
３−アミノイソ酪酸、β−アラニン、２−アミノピメリ
ン酸、２−アミノ酪酸、２,４−ジアミノ酪酸、４−ア
ミノ酪酸、デスモシン、ピペリジン酸、２,２−ジアミ
ノピメリン酸、６−アミノカプロン酸、２,３−ジアミ
ノプロピオン酸、２−アミノヘプタン酸、Ｎ−エチルグ
リシン、２−（チエン−２−イル）グリシン、３−（チ
エン−２−イル）アラニン、ペニシラミン、サルコシ
ン、Ｎ−エチルアスパラギン、Ｎ−メチルイソロイシ
ン、ヒドロキシリジン、６−Ｎ−メチルリジン、アロ−
ヒドロキシリジン、Ｎ−メチルバリン、３−ヒドロキシ
プロリン、ノルバリン、４−ヒドロキシプロリン、ノル
ロイシン、イソデスモシン、オルニチン、アロ−イソロ
イシン、Ｎ−メチルグリシン。

【００１２】アミノ酸について使用した上記簡略範囲は
一般に慣用されている範囲と合致している〔Schroeder,
Luebke, The Peptides, Ｉ巻，XXII〜XXIII頁（１９６
５年）；Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chem
ie, XV／１および２巻（１９７４年）を参照〕。アミノ
酸のｐＧｌｕはピログルタミル、Ｎａｌは３−（ナフタ
−２−イル）アラニン、アザグリ−ＮＨ₂は式ＮＨ₂−Ｎ
Ｈ−ＣＯＮＨ₂の化合物、そしてＤ−Ａｓｐはアスパラ
ギン酸のＤ−体を示す。「ホスホアミノ酸」なる用語は
カルボキシル基がホスフェート基で置換されたアミノ酸
を意味する。その化学的性質により、ペプチドは酸アミ
ドであり、加水分解により分解されてアミノ酸となる。
Ｃ（それはアミノ酸である）と式II

【化５】 （式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴およびｗは式Ｉで定義した
とおりてある）の化合物との間の結合はペプチド結合で
ある。

【００１３】ａ）ＤおよびＥ間、ｂ）Ｄおよび式IIの化
合物間、またはｃ）Ｅおよび式IIの化合物間（ここでＤ
およびＥはアミノ酸またはアミノ酸残基である）の結合
はすべてペプチド結合である。これはまたＥがＥｃ）ま
たはＥｅ）に記載したようなアミン誘導体である場合に
も当てはまる。

【００１４】「糖」はＤ−またはＬ−系に属することの
できる３〜７個の炭素原子を有するアルドースおよびケ
トースを意味する；これらはまたアミノ糖またはウロン
酸を含む。例としてはグルコース、マンノース、フルク
トース、ガラクトース、リボース、エリスロース、グリ
セルアルデヒド、セドヘプツロース、グルコサミン、ガ
ラクトサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、グルコ
ン酸、ガラクトン酸またはマンノン酸を挙げることがで
きる。「二糖」は２つの糖単位からなるサッカリドを意
味する。

【００１５】ジ−、トリ−またはオリゴサッカリドは２
以上の糖のアセタール型結合により生成され、その結合
はα型またはβ型でありうる。糖間の結合は好ましくは
それぞれの糖の炭素原子１および炭素原子６、炭素原子
１および炭素原子２または炭素原子１および炭素原子４
を介して生成される。α型の糖間結合が好ましい。

【００１６】糖が置換される場合、その置換は好ましく
は糖のＯＨ基の水素原子上で起こる。本発明の化合物は
１個以上のホスフェート基を含むことができ、それはま
たホスフェート保護基で誘導化されうる。

【００１７】ホスフェート保護基の例はフェニル、ベン
ジルまたはヒドロキシプロピルニトリル（Houben-Weyl,
Methoden der Organischen Chemie, １２／１巻または
１２／２巻；Teiheimer, Synthetic Methods of Organi
c Chemistry, ４５巻）。

【００１８】「インシュリン耐性組織」なる用語は例え
ばインシュリンレセプターをもはや所有しないラット脂
肪細胞を意味する。

【００１９】式Ｉの化合物の生理学的に許容しうる塩は
特に薬学的に適用しうるまたは非毒性の塩を意味する。
このような塩は例えば、アルカリ金属またはアルカリ土
類金属例えばＮａ、Ｋ、ＭｇおよびＣａを用いて、そし
て生理学的に許容しうる有機アミン例えばトリエチルア
ミンおよびトリス（２−ヒドロキシエチル）アミンを用
いて、酸性基例えばカルボキシルを含む式Ｉの化合物に
より生成される。塩基性塩例えばアミノ基またはグアニ
ジノ基を含む式Ｉの化合物は無機酸例えば塩酸、硫酸ま
たはリン酸とともに、そして有機カルボン酸またはスル
ホン酸例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、
フマル酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸ととも
に塩を生成する。等数の塩基性および酸性基を含む化合
物は中性塩を生成し、第３の塩成分を必要としない。

【００２０】本発明はさらに、ａ）遊離炭素末端のカル
ボキシル基を含むセグメントまたはその活性化誘導体を
遊離窒素末端のアミノ基を含む適当なセグメントと反応
させること、またはｂ）ペプチドを段階的に合成するこ
とからなり、必要ならばａ）またはｂ）にり得られた化
合物において他の官能基の保護のために一時的に導入さ
れた１個以上の保護基を除去し、そして所望ならば得ら
れた式Ｉの化合物をその生理学的に許容しうる塩に変換
することからなる式Ｉのペプチドの製造法に関する。

【００２１】本発明のペプチドはペプチド化学の一般方
法、すなわち炭素末端部から段階的に、またはセグメン
トの結合により製造される（Houben-Weyl, Methoden de
r Organischen Chemie, １５／１，２巻）。ペプチドは
例えば混合無水物法により活性エステルまたはアジドを
介して、あるいはカルボジイミド法により特に反応を促
進しラセミ化を防止する物質例えば１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、３−
ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒドロ−１,２,３
−ベンゾトリアジンまたはＮ−ヒドロキシ−５−ノルボ
ルネン−２,３−ジカルボキシイミドを添加して、そし
てさらに−１０℃〜溶媒の沸点の反応温度好ましくは−
５℃〜４０℃において１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ルの活性誘導体またはリン酸、ホスホン酸およびホスフ
ィン酸の無水物を用いて結合させることができる。

【００２２】本目的のために好適な溶媒はジメチルホル
ムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリド
ンまたはジメチルスルホキシドである。各成分の溶解度
が許容範囲ならば塩化メチレン、クロロホルムまたはテ
トラヒドロフランのような溶媒もまた使用することがで
きる。上記方法は例えばMeinhofer-Gross, “The Pepti
des", Academic Press, １巻（１９７９年）に記載され
ている。

【００２３】副反応を防止するために、または特定のペ
プチドの合成のために、必要ならばアミノ酸の側鎖の官
能基は適当な保護基（例えば、T.W. Greene, “Protect
iveGroups in Organic Synthesis"を参照）により追加
的に保護され、Ａｒｇ(Ｔｏｓ)、 Ａｒｇ(Ｍｔｓ)、 Ａｒ
ｇ(Ｍｔｒ)、 Ａｒｇ(ＰＭＶ)、 Ａｓｐ(ＯＢｚｌ)、Ａｓ
ｐ(ＯＢｕｔ)、 Ｃｙｓ(４−ＭｅＢｚｌ)、 Ｃｙｓ(Ａｃ
ｍ)、 Ｃｙｓ(ＳＢｕｔ)、 Ｇｌｕ(ＯＢｚｌ)、 Ｇｌｕ(Ｏ
Ｂｕｔ)、 Ｈｉｓ(Ｔｏｓ)、 Ｈｉｓ(Ｆｍｏｃ)、 Ｈｉｓ
(Ｄｎｐ)、 Ｈｉｓ(Ｔｒｔ)、 Ｌｙｓ(Ｃｌ−ｚ)、 Ｌｙｓ
(Ｂｏｃ)、 Ｍｅt(Ｏ)、 Ｓｅｒ(Ｂｚｌ)、 Ｓｅｒ(Ｂｕ
ｔ)、 Ｔｈｒ(Ｂｚｌ)、 Ｔｈｒ(Ｂｕｔ)、Ｔｒｐ(Ｍｔ
ｓ)、 Ｔｒｐ(ＣＨＯ)、 Ｔｙｒ(Ｂｒ−Ｚ)、 Ｔｙｒ(Ｂｚ
ｌ)またはＴｙｒ(Ｂｕｔ)が主として用いられる。

【００２４】好ましいアミノ保護基は接触水素添加によ
り除去することのできるベンジルオキシカルボニル
（Ｚ）基、弱酸で除去することのできる２−（３,５−
ジメトキシフェニル）プロパ−２−イルオキシカルボニ
ル（Ｄｄｚ）またはトリチル（Ｔｒｔ）基、および第２
アミンで除去することのできる９−フルオレニルメトキ
シカルボニル（Ｆｍｏｃ）基である。システインのＳＨ
基は数多くの保護基でブロックすることができ、トリチ
ル（Ｔｒｔ）基およびＳ−ｔ−ブチル（ＳｔＢｕ）基が
好ましい。トリチル基はヨウ素での酸化により除去され
てシスチン化合物を生成し、または還元的な酸開裂によ
り除去されてシステイン化合物を生成しうる（Liebigs
Ann. Chem. ２２７〜２４７，１９７９年）。

【００２５】一方、Ｓ−ｔ−ブチル基はトリブチルホス
フィンを用いて還元的に最良に除去される（Aust. J. C
hem. １９，２３５５〜２３６０，１９６６年）。側鎖
のＯＨおよびＣＯＯＨ官能基は酸で除去することのでき
るｔ−ブチル（ｔＢｕ）基により最良に保護される（Me
ienhofer-Gross,“The Peptides", ３巻もまた参照）。

【００２６】オリゴサッカリドは公知の方法により製造
される（H. Paulsen, Augew. Chem.Int. Ed. ２１，ｐ
１５５，１９８２年）。オリゴサッカリドの合成にはト
リクロロアセトイミデート法を使用するのが好ましい
〔R.R. Schmidt, Angew. Chem.Int. Ed. ２５，２１２
〜２３５（１９８６年)；T. Ogawa, Tetrahedron Lett.
３１，２４３９〜２４４２（１９９０年）〕。

【００２７】ホスフェートはホスファイトトリエステル
法（W. Bannwarth, Helv. Chim. Acta ７０，１７５〜
１８６，１９８７年）により合成され、好ましくは第１
反応段階は式Ｉのペプチドのペプチド部分を用いて、そ
して第２反応段階はオリゴサッカリド部分を用いて行な
われる。

【００２８】糖のヒドロキシル基には主として次の保護
基が可能である：ベンジル、アセチル、ベンゾイル、ピ
バロイル、トリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ベン
ジリデンまたはイソプロピリデン保護基。

【００２９】式Ｉの化合物およびその生理学的に許容し
うる塩は主に、糖尿病またはインシュリン非依存型糖尿
病の治療のための医薬製剤中における活性成分として使
用される。

【００３０】したがって、本発明はさらに少なくとも１
種の式Ｉの化合物および／または少なくとも１種のその
生理学的に許容しうる塩を溶解、アモルファスおよび／
または結晶形態で、好ましくはアモルファスおよび／ま
たは結晶形態で含有する医薬製剤に関する。

【００３１】好ましくは医薬製剤は適当な等張剤、適当
な保存剤、そして必要ならば適当な緩衝剤、さらにまた
貯蔵成分（すべて滅菌水溶液または懸濁液中）を含み、
約３.０〜９.０、好ましくは約５.０〜８.５のpHを有す
る注射液または懸濁液である。製剤のすべての構成成分
は活性成分を除けば製剤の賦形剤を構成する。

【００３２】好適な等張剤の例はグリセロール、グルコ
ース、マンニトール、ＮａＣｌおよびカルシウムまたは
マグネシウム化合物例えばＣａＣｌ₂またはＭｇＣｌ₂で
ある。好適な保存剤の例はフェノール、ｍ−クレゾー
ル、ベンジルアルコールおよび／またはｐ−ヒドロキシ
安息香酸エステルである。

【００３３】特にpHを約５.０〜８.５に調整するために
使用することのできる緩衝剤物質の例は酢酸ナトリウ
ム、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウムであ
る。pHを調整するのに好適な他の物質は生理学的に許容
しうる希酸（典型的にはＨＣｌ）またはアルカリ性溶液
（典型的にはＮａＯＨ）である。

【００３４】本発明の製剤の作用プロフィールを変化さ
せるために、修飾インシュリン（ヨーロッパ特許出願Ｂ
１３２ ７６９および同Ｂ １３２ ７７０を参照）およ
び／または非修飾インシュリン、好ましくはボビン、ポ
ルシンまたはヒトインシュリン、特にヒトインシュリン
を加えることもできる。

【００３５】医薬製剤は少なくとも１種の式Ｉの化合物
および／または少なくとも１種のその生理学的に許容し
うる塩を、必要ならば修飾および／または非修飾インシ
ュリン（インシュリン誘導体）、生理学的に許容しうる
賦形剤、適当な添加剤および補助剤とともに、適当な投
与形態に変換することにより製造される。以下の実施例
を用いて本発明をさらに詳しく説明する。

【００３６】

【実施例】

〔実施例１〕 Ｈ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｌ−Ａｓ
ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ＯＨ １ａ） Ｚ−Ａｓｎ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＡｃ
（２） ８.０ｇ（２０.６ミリモル）のＺ−ＡｓｎＯＮｐ１を２
００mlのピリジンに溶解し、５ｇ（８１.８ミリモル）
のエタノールアミンおよび５mlのＮ−エチルモルホリン
を加えた。室温で１６時間放置した後、５０mlの無水酢
酸を５℃で撹拌しながら滴下して加えた。反応混合物を
さらに２時間室温で撹拌し、次いで高真空下で濃縮し
た。残留物を１５０mlの温メタノールに溶解し、溶液を
濃縮した。１００mlの塩化メチレン／メタノール（１
５：１）および２００mlのｎ−ヘプタン／酢酸エチル
（２：１）を加えた後、生成物が結晶化した。６.１ｇ
（収率８４％）の白色結晶が得られた（融点１７５
℃）。ＴＬＣ〔塩化メチレン／メタノール（９：１）〕
Ｒ_f＝０.７、Ｃ₁₆Ｈ₂₁Ｎ₃Ｏ₆（３５１.３６）。

【００３７】１ｂ） Ｈ−Ａｓｎ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂
−ＯＡｃ（３） ２.０ｇのパラジウム／木炭（１０％Ｐｄ）を２００ml
のメタノール／酢酸（１：１）における１２.０ｇ（３
４.０ミリモル）の２の溶液に加え、混合物を２時間室
温で水素添加した。溶液をシリカゲルで濾過し、濃縮
し、そして残留物をフラッシュクロマトグラフィー〔塩
化メチレン／メタノール／濃アンモニア（３０／５／
１）〕により精製した。７.３ｇ（収率９８％）の黄色
の油状物が得られた。ＴＬＣ〔塩化メチレン／メタノー
ル／濃アンモニア（３０／５／１）〕Ｒ _f＝０.５、Ｃ₈
Ｈ₁₅Ｎ₃Ｏ₄（２１７.２３）。

【００３８】１ｃ） Ｔｒｔ−Ｃｙｓ−（Ｔｒｔ）−Ａ
ｓｎ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＡｃ（４） １.５ｇ（４.５ミリモル）のＴＯＴＵ １〔Ｏ−（シア
ノ（エトキシカルボニル）メチリデン）アミノ−１,１,
３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレー
ト〕、０.６４ｇ（４.５ミリモル）のオキシム〔エチル
（ヒドロキシイミノ）シアノアセテート〕および１.７m
l（１３.５ミリモル）のＮ−エチルモルホリンをＤＭＦ
における０.８ｇ（３.７ミリモル）の３および２.８ｇ
（４.５ミリモル）のＴｒｔ−Ｃｙｓ−（Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈの溶液に０℃で撹拌しながら加え、混合物を２時間０
℃で撹拌した。２００mlの酢酸エチルを加えた後、混合
物を飽和ＮａＨＣＯ₃溶液で３回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾
燥し、そして濃縮した。残留物をｎ−ヘプタン／酢酸エ
チル（６：１）で摩砕した。２.２ｇ（収率７４％）の
白色結晶が得られた。融点１８５℃、ＴＬＣ〔塩化メチ
レン／メタノール（１５：１）〕Ｒ_f＝０.４、Ｃ₄₉Ｈ₄₈
Ｎ₄Ｏ₅Ｓ（８０５.０）。

【００３９】１ｄ） Ｈ−Ｃｙｓ−（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ
−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ＯＨ（５） ４.０ｇ（５.０ミリモル）の４を２００mlのＣＨ₂Ｃｌ₂
に溶解した。４mlの水および３mlのトリフルオロ酢酸を
加えた。１５分後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ₃溶液で３
回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そして濃縮した。残留
物を５０mlの無水メタノールに溶解し、０.５mlの１Ｍ
ナトリウムメタノラート溶液を滴下して加えた。１５分
後、５０mlの塩化メチレンを加え、混合物をシリカゲル
で濾過した。溶媒を濃縮した後、残留物をフラッシュク
ロマトグラフィー〔塩化メチレン／メタノール（９：
１）〕により精製した。２.２ｇ（収率８５％）の白色
のアモルファス固体が得られた。ＴＬＣ〔塩化メチレン
／メタノール（５：１）〕Ｒ _f＝０.７、Ｃ₂₈Ｈ₃₂Ｎ₄Ｏ₄
Ｓ（５２０.６）。

【００４０】１ｅ） Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−（Ｂｏｃ）−Ｃ
ｙｓ−（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ＯＨ
（６）４ の製造と同様にして、２.２ｇ（４.２ミリモル）の
５、２.１ｇ（５.５ミリモル）のＢｏｃ−Ｔｙｒ−（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、１.８ｇ（５.５ミリモル）のＴＯＴＵ、
０.８ｇ（５.５ミリモル）のオキシムおよび１.４ml
（１１ミリモル）のＮ−エチルモルホリンを反応させ
た。２.６ｇ（収率７０％）の白色結晶を得た。融点１
６９〜１７０℃、ＴＬＣ〔塩化メチレン／メタノール
（１５：１）〕Ｒ _f＝０.３、Ｃ₄₇Ｈ₅₇Ｎ₅Ｏ₁₀Ｓ（８８
４.０７）。

【００４１】１ｆ） Ｈ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｎ
Ｈ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ＯＨ（７） ２.０ｇ（２.３ミリモル）の６を１０mlのトリフルオロ
酢酸および１０mlのエチルメルカプタンの混合物に溶解
した。４時間後、反応混合物を１００mlの水に注ぎ込ん
だ。水相をエーテルで３回抽出し、そして水相を濃縮し
た。残留物をフラッシュクロマトグラフィー〔塩化メチ
レン／メタノール／濃アンモニア（３０／１５／５）〕
により精製した。収量０.８５ｇ（８５％）。ＴＬＣ
〔塩化メチレン／メタノール／濃アンモニア（３０／１
５／５）〕Ｒ_f＝０.３、Ｃ₁₈Ｈ₂₇Ｎ ₅Ｏ₆Ｓ（４４１.５
１）、ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）＝４４２.５。

【００４２】〔実施例１４〕 Ｈ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａ
ｓｎＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−６Ｍ
ａｎα１−ＯＭｅ １４ａ） Ｔｒｔ−Ｃｙｓ−（Ｔｒｔ）−ＡｓｎＮＨ−
ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＰＯ（Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＮ）−
Ｏ−６Ｍａｎ（２,３,４−トリベンジル)α１−ＯＭｅ
（８）（Ｍｅはメチル基であり、Ｍａｎはマンノース残
基である）１.１ｇ（２.３７ミリモル）のメチル−２,
３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシ
ド〔A. Vasella, Helv. Chim. Acta ６２，２４００〜
２４１０（１９７９年）〕を１５mlの乾燥アセトニトリ
ルに溶解した。１.３６ｇ（４.５０ミリモル）のビス
（ジイソプロピルアミノ）（２−シアノエトキシ）ホス
フィン（Aldrich社製）および１７０mg（２.４０ミリモ
ル）のテトラゾール（酢酸エチルから２回再結晶した）
を加えた。２０分後、混合物をｎ−ヘプタン／酢酸エチ
ル（２：１）を用いて少量のシリカゲルで濾過し、濾液
を濃縮した。

【００４３】油状の残留物（２.０ｇ）を１０mlの乾燥
アセトニトリルおよび８mlの乾燥塩化メチレンに溶解
し、５mlの乾燥テトラヒドロフランにおける１.５ｇ
（１.９７ミリモル）のＴｒｔ−Ｃｙｓ−（Ｔｒｔ）−
ＡｓｎＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨの溶液を加えた。１７
５mg（２.５ミリモル）のテトラゾールを加えた後、溶
液を２時間室温で放置した。次に、塩化メチレン／メタ
ノール（１５：１）を用いて少量のシリカゲルでそれを
濾過し、濾液を濃縮した（３ｇの粗生成物）。

【００４４】粗生成物を５０mlの塩化メチレンに溶解
し、０℃まで冷却した。５００mgのメタクロロ過安息香
酸を加えた後、混合物を２０分間２０℃で撹拌し、２０
０mlの塩化メチレンで希釈し、そして飽和ＮａＨＣＯ₃
溶液で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾
過し、濃縮し、そしてその残留物をフラッシュクロマト
グラフィー〔塩化メチレン／メタノール（１５：１）〕
により精製した。収量１.２ｇ（３段階にわたって４５
％）。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）〔塩化メチレ
ン／メタノール（１５：１）〕Ｒ_f＝０.３、Ｃ₇₈Ｈ₈₀Ｎ
₅Ｏ₁₂ＰＳ（１３４２.６１）、ＭＳ（Ｍ＋Ｌｉ⁺）＝１
３４８.４。

【００４５】１４ｂ） Ｈ−Ｃｙｓ−（Ｔｒｔ）−Ａｓ
ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＰＯ（Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂
−ＣＮ）−Ｏ−６Ｍａｎ（２,３,４−トリベンジル)α
１−ＯＭｅ（９） １.２ｇ（０.８９ミリモル）の８を７０mlの塩化メチレ
ンに溶解した。１mlの水および１mlのトリフルオロ酢酸
を加えた。１５分後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ ₃溶液で
３回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮した。残留物を
フラッシュクロマトグラフィー〔塩化メチレン／メタノ
ール（１５：１）〕により精製した。収量０.７９ｇ
（８０％）、ＴＬＣ〔塩化メチレン／メタノール（９：
１）〕Ｒ_f＝０.６０、Ｃ₅₉Ｈ₆₆Ｎ₅Ｏ₁₂ＰＳ（１１００.
２８）、ＭＳ（Ｍ＋Ｌｉ⁺）＝１１０６.４。

【００４６】１４ｃ） Ｚ−Ｔｙｒ−（Ｂｎ）−Ｃｙｓ
−（Ｔｒｔ）−ＡｓｎＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＰＯ
（Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＮ）−Ｏ−６Ｍａｎ（２,３,４
−トリベンジル）−α１−ＯＭｅ（１０）４ の製造（実施例１ｃ）と同様にして３００mg（０.２
７ミリモル）の９、３２５mg（０.８０ミリモル）のＺ
−Ｔｙｒ−（Ｂｎ）−ＯＨ（Bachem）、２６０mg（０.
８０ミリモル）のＴＯＴＵ、１１５mg（０.８０ミリモ
ル）のオキシムおよび０.３ml（２.５ミリモル）のＮ−
エチルモルホリンを反応させた。３２０mg（収率７９
％）の白色固体を得た。ＴＬＣ〔塩化メチレン／メタノ
ール（９：１）〕Ｒ_f＝０.６５。

【００４７】１４ｄ） Ｈ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−ＡｓｎＮ
Ｈ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−６Ｍａｎα
１−ＯＭｅ（１１） ４０mlのアンモニアを−７８℃で液化し、１００mgのナ
トリウムを加えた。１５分間撹拌した後、２０mlの乾燥
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を加えた。次に１０mlの
乾燥ＴＨＦにおける１２０mg（０.０８０ミリモル）の
１０の溶液を滴下して加えた。溶液を−７８℃で３０分
間撹拌した。青色が消えるまで塩化アンモニウムを加え
て処理した。次に２０mlのメタノールおよび１０mlの水
を注意深く加えた。溶液を濃縮し、残留物をフラッシュ
クロマトグラフィー〔塩化メチレン／メタノール／濃ア
ンモニア（３：３：１）〕により精製した。４０mg（収
率７１％）の白色固体が得られた。ＴＬＣ〔塩化メチレ
ン／メタノール／濃アンモニア（３：３：１）〕Ｒ_f＝
０.２〜０.３、Ｃ₂₅Ｈ₄₀Ｎ₅Ｏ₁₄ＰＳ（６９７.６８）、
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）＝６９８.３。

【００４８】実施例１または１４の反応工程に従って下
記の化合物を製造した。

【００４９】

【表１】

【００５０】

【表２】

【００５１】本発明の式Ｉのペプチドの生物活性は予め
単離したラットの脂肪細胞および横隔膜断片を用いて測
定した。

【００５２】ラットの脂肪細胞は次のようにして調製し
た：精巣上体の脂肪組織（ウィスターラット、１６０〜
１８０ｇ、食事制限なし）をコラゲナーゼで消化し、得
られた単離脂肪細胞を浮遊により数回洗浄した。 ラットの横隔膜断片の調製：数回洗浄した半横隔膜（ウ
ィスターラット、６０〜７０ｇ、食事制限なし）から小
組織片（直径５mm）をパンチで切除した。

【００５３】ａ） グリコーゲン形成 本試験は形質膜を介してのグルコース輸送およびグルコ
ースのグリコーゲンへの変換からなり、機能性インシュ
リンシグナル伝送カスケードを含む、筋細胞におけるイ
ンシュリン刺激性グリコーゲン合成を測定する。

【００５４】横隔膜断片をクレブス−リンガー−ヘンゼ
ライト緩衝剤（ＫＲＨ緩衝剤）により、インシュリンま
たは本発明のペプチドの存在下または非存在下、５０μ
ＭＤ−〔Ｕ−¹⁴Ｃ〕グルコースとともに３７℃で１５分
間インキュベートした。培地を吸引濾過し、組織片を激
しく洗浄し、−７０℃で凍結し、次いでポリトロン微粉
砕機により２℃で均質化した。ホモジネートを遠心分離
し（２０００ｇ）、上澄み液をピペットで濾紙上に移し
た。生成したグリコーゲンを測定するために、濾紙をト
リクロロ酢酸（ＴＣＡ）（５％）中に移し、エタノール
およびアセトンで洗浄し、乾燥し、そしてその放射能を
シンチレーション測定（〔¹⁴Ｃ〕グリコーゲン〔ｄｐｍ
×１０^-3〕）により測定した。

【００５５】Ｂ） 脂肪合成 本試験はグルコース輸送およびトリグリセリド（グリセ
ロール−３−Ｐ合成、エステル化）／リン脂質／脂肪酸
合成を必要とし、インシュリンシグナル伝送カスケード
を含む、グルコースのトルエン溶解性生成物（トリグリ
セリド、リン脂質、脂肪酸）へのインシュリン刺激性変
換を測定する。

【００５６】ＫＲＨ緩衝剤におけるラットの脂肪細胞を
インシュリンまたは本発明のペプチドの存在下または不
存在下、Ｄ−〔３−³Ｈ〕グルコース（最終濃度０.２ミ
リＭまたは１ミリＭ）とともに３７℃で９０分間インキ
ュベートした。トルエン溶解性シンチレーションカクテ
ル（scintillation cocktail）の添加により、細胞を消
化し、そして脂質を水溶性生成物およびインキュベーシ
ョン培地から分離した。相分離後、脂質中に取り込まれ
た放射能を、水相を除去することなく直接のシンチレー
ション測定（〔³Ｈ〕脂質〔ｄｐｍ×１０^-3〕）により
測定した。

【００５７】ｃ） グルコース輸送活性 単離形質膜小胞はラットの脂肪細胞から、その脂肪細胞
を均質化用緩衝剤（２０ミリＭトリヒドロキシアミノメ
タン（トリス）／ＨＣｌ、pH７.４、１ミリＭ、４℃、
ＥＤＴＡ、０.２５Ｍスクロース）で２回洗浄し、次い
でこれらを２０mlの同緩衝剤で均質化（テフロン乳棒を
用いたガラスホモジナイザー）することにより得られ
た。

【００５８】ホモジネートを遠心分離（１６,０００×
ｇ、１５分）し、沈降物を同緩衝剤で懸濁し、そして再
び遠心分離した。沈降物を５mlの均質化用緩衝剤で懸濁
し、スクロースクッション（１.１２Ｍスクロース、２
０ミリＭトリス／ＨＣｌ、pH７.４、１ミリＭ ＥＤＴ
Ａ）上に層をなした；遠心分離（１００,０００×ｇ、
７０分）後、形質膜小胞を含む中間層をシリンジで取り
出し、４５mlの緩衝剤で希釈し、再び遠心分離（４８,
０００×ｇ、４５分）した。沈降物を１０mlの緩衝剤で
懸濁し、再び遠心分離し、そして３mlの緩衝剤中で再び
懸濁した。

【００５９】単離した形質膜小胞をインシュリンまたは
本発明のペプチドの存在下または不存在下、２５℃で３
０分間インキュベートした。次に、小胞を５０μＭ Ｄ
−〔３−³Ｈ〕グルコースおよび同じ比放射能のＬ−
〔１−¹⁴Ｃ〕グルコースとともに２５℃で１０秒間イン
キュベートした。混合物をニトロセルロースフィルター
で迅速吸収濾過した。フィルターをたっぷりと洗浄し、
乾燥した。その放射能は液体シンチレーション測定によ
り測定した。輸送比（Ｄ−〔³Ｈ〕グルコース／Ｌ−〔
¹⁴Ｃ〕グルコース〔ｄｐｍ×１０^-3〕）は〔³Ｈ〕およ
び〔¹⁴Ｃ〕の放射能の差として計算した。

【００６０】その結果を表２に最大インシュリン作用の
パーセントで示す。ヒトインシュリン（ＨＩ）の作用の
値を１００％とする。使用した本発明まペプチドの濃度
データは最大ＨＩ作用が２５％または２０％に到達した
時の濃度。

【００６１】

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 シユテフアン・ミユルナー ドイツ連邦共和国デー−6203ホーホハイ ム・アム・マイン．フリードリヒ−エー ベルト−シユトラーセ43 (72)発明者 ゲールハルト・ブライポール ドイツ連邦共和国デー−6000フランクフ ルト・アム・マイン．ガイゼンハイマー シユトラーセ95 (56)参考文献 特開 平４−295496（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 5/06 C07K 5/08 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 インシュリン様作用を有する式Ｉ 【化１】 [式中、 Ｃはａ）水素原子、または ｂ）Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ
   −Ａｓｎおよび３−(チエン−２−イル)アラニン（これ
   らは直鎖状または分枝鎖状の−ＣＯ−(Ｃ₁−Ｃ₈)−アル
   キルで置換されていてもよい）から選ばれるアミノ酸、 Ｄは、ａ）Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、
   ＴｙｒおよびＤ−Ｔｙｒから選ばれるアミノ酸、または
   ｂ）共有結合、 Ｅはａ）−ＯＨ、 ｂ）−ＮＨ−(ＣＨ₂)_n−ＮＲ⁵ ₂ （ここでＲ⁵は同一
   の、または異なって、１）水素原子、または２）１〜６
   個の糖残基であり、ｎは０〜６の整数である）、または ｃ）−ＮＨ−(ＣＨ₂)_m−Ｒ⁶−Ｒ⁷（ここでＲ⁶は１）−
   Ｏ−または２）−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−Ｏ−であり、Ｒ
   ⁷は１）水素原子、２）メチル基で置換されていてもよ
   い１〜６個の糖残基または３）−(ＣＨ₂)_m−ＣＮであ
   り、そしてｍは０〜４の整数である）であり、 Ｒ¹は＝Ｏであり、 Ｒ²はａ）硫黄保護基または ｂ）水素原子であり、 Ｒ³およびＲ⁴は水素原子であり、そしてｗは１または２
   の整数である] のペプチド、その立体異性体、またはその生理学的に許
   容しうる塩［但し、式Ｉのペプチドのすべてのアミノ酸
   が未置換の場合、および式Ｘ−Ｃ−Ｃｙｓ−Ｄ（式中Ｃ
   はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＮａｌであり、ＤはＡｓｐ、Ａ
   ｓｎ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、β−ＡｌａまたはＡｚ
   ａｇｌｙ−ＮＨ₂であり、そしてＸは水素または(Ｃ₁−
   Ｃ₁₈)−アルキル−ＣＯである）で表される場合を除
   く］。
2. 【請求項２】 ＣがＴｙｒ、Ａｓｎ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−
   Ａｓｎ、３−（チエン−２−イル）アラニンまたはＰｈ
   ｅからなる群より選択される残基であり、ＤがＡｓｎ、
   Ｔｙｒ、Ｄ−ＡｓｎまたはＤ−Ｔｙｒからなる群より選
   択される残基であり、Ｅがエチレンジアミンまたはエタ
   ノールアミンからなる群より選択される基であり、ｗが
   １または２であり、Ｒ¹が＝Ｏであり、そしてＲ²が水素
   原子またはメチルである請求項１記載のペプチド、その
   立体異性体または生理学的に許容しうる塩。
3. 【請求項３】 ＣがＴｙｒ、Ｄ−ＴｙｒまたはＡｓｎか
   らなる群より選択される残基であり、ＤがＡｓｎ、Ｄ−
   Ａｓｎまたは共有結合からなる群より選択される残基で
   あり、Ｅがａ）エチレンジアミンまたはｂ）−ＮＨ−
   (ＣＨ₂)_m−Ｒ⁶−Ｒ⁷（ここでＲ⁶は１）−Ｏ−または
   ２）−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)−Ｏ−であり、そしてＲ⁷は
   １）水素原子、２）マンノース、または３）それぞれ独
   立してメチル、マンノース、ジマンノース、ガラクトー
   スもしくはジガラクトースにより一置換から四置換まで
   されたマンノースである）であり、Ｒ¹が＝Ｏであり、
   Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴がすべて水素原子であり、そしてｗ
   が１である請求項１または２記載のペプチド、その立体
   異性体または生理学的に許容しうる塩。
4. 【請求項４】 ａ）遊離炭素末端のカルボキシル基を含
   むセグメントまたはその活性化誘導体を遊離窒素末端の
   アミノ基を含む適当なセグメントと反応させること、ま
   たはｂ）ペプチドを段階的に合成することからなり、必
   要ならばａ）またはｂ）により得られた化合物において
   １個以上の保護基を除去し、そして所望ならば得られた
   式Ｉの化合物をその生理学的に許容しうる塩に変換する
   ことからなる、請求項１〜３の何れかの項に記載の式Ｉ
   のペプチドの製造法。
5. 【請求項５】 有効量の少なくとも１種の請求項１〜３
   の何れかの項に記載の式Ｉのペプチドを溶解、アモルフ
   ァスまたは結晶形態で含有する糖尿病治療用医薬製剤。
6. 【請求項６】 少なくとも１種の修飾もしくは非修飾イ
   ンシュリンまたはインシュリン誘導体を含有する請求項
   ５記載の糖尿病治療用医薬製剤。