JPH0253796A

JPH0253796A - ペプチド

Info

Publication number: JPH0253796A
Application number: JP63201359A
Authority: JP
Inventors: Yoshikazu Isowa; 磯和　義員; Yoshiaki Sato; 芳昭佐藤; Yoshiharu Nakajima; 中島　義春; Mitsuo Mazaki; 光夫真崎; Masahisa Miyake; 雅久三宅; Masaki Uehara; 正樹上原; Kenji Hirate; 謙二平手
Original assignee: Fujirebio Inc; Nippon Chemiphar Co Ltd
Current assignee: Fujirebio Inc; Nippon Chemiphar Co Ltd
Priority date: 1988-08-12
Filing date: 1988-08-12
Publication date: 1990-02-22
Anticipated expiration: 2011-10-09
Also published as: JP2542241B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、向知能作用を有し、従って医薬として有用な
ペプチドに関する。

［従来の技術］パップレシンに向知能作用のあることは古くから知られ
ているが、最近パップレシンの断片とみなし得るペプチ
ド、例えば、などにもパップレシンと同様に向知能作用があることが
報告された［プレインリサーチ（Ｂｒａｉ口ｅ１１ｅｓ
ｅａｒｃｈ　３７１．１７（１９８６）　］。

［発明が解決しようとする問題点］本発明は、このようなパップレシン及びパップレシン断
片ペプチドよりも、さらに優れた向知能作用を有する新
規なペプチドを提供することを目的とするものである。

［問題を解決するための手段］本発明は、式（■）：Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−八ｒｇ　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　（Ｉ　　）で表わされるペプチド若
しくはその官能基における誘導体、又はそれらの薬理学
的に許容され得る塩に関する。

上記式（Ｉ）のペプチドの官能基における誘導体は、下
記のものを意味する。

ａ）１〜６個の炭素原子を有する脂肪族カルボン酸、好
ましくは酢酸から誘導されるＮ−アシル誘導体、ｂ）アミド又は１〜６個の炭素原子のアルキル基を有す
る千ノーアルキル又はジ−アルキル置換アミド、及び、ｃ）１〜１８個の炭素原子を有するアルコール、好まし
くは１〜６個の炭素原子を有する脂肪族アルコールから
誘導されるエステル。

上記ペプチド若しくはその官能基における誘導体の薬理
学的に許容され得る塩としては、酸付加塩及び塩基性塩
を挙げることができる。このような酸付加塩としては無
機酸（例、塩酸、硫酸、燐酸）又は有機酸（例、酢酸、
プロピオン酸、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸
、メタンスルホンＷｌ）等の塩が挙げられる。また、塩
基性塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、トリエチ
ルアミン塩等が挙げられる。

本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、溶媒
等は当該技術分野で慣用されている略号、或いは、ＩＵ
ＰＡＣ−ＴＵＢの命名委員会で採用された略号を使用し
ている。例えば下記の略号が使用される。また、アミノ
酸はＬ型を意味するものとする。

＾Ｓｎ：アスパラギンへｒｇ：アルギニンＣｙｓ　ニジスティンＰｒｏ　　ニブロリンＢｏｃ　：　ｔ−ブトキシカルボニルＺ：ペンジルオキシカルボニルＭｂＳ：Ｐ−メトキシベンゼンスルホニルＭＢｚｌ：ｐ
−メトキシベンジル０Ｂｚｔ　：ベンジルエステルＯ５ｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルＤｆｌ
：Ｃ：　Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミドＤ
ＣＵｒｅａ　：　Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルウレアＨ
ＯＢｔ：　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＮＭＭ：
Ｎ−メチルモルホリンＴＦＡ　　：　トリフルオロ酢酸ＭＳＡ　：メタンスルホン酸八ｃＯＥｔ　：酢酸エチルＤＭＦ：Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドＭｅＯＨ：メタ
ノールＴＨＦ　：テドラヒドロフラン本発明の化合物は、ペプチド化学において通常用いられ
る方法、例えば、５ｃｈｒ６ｄｅｒ　ａｎｄ　Ｌｉ１ｂ
ｋｅ著「ザ　ペプチド（Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）Ｊ
第−巻、Ａｃａｄｅ−ｔｘｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ、ｌＪ、ｓ、Ａ、（１９６５年）、泉屋信夫ら
著「ペプチド合成の基礎と実験」丸善■（１９８５年）
などに記載されている方法によって製造することができ
、液相法及び固相法のいずれによっても製造できる。ペ
プチド結合を形成するための縮合方法として、アジド法
、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、Ｎ、
Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド法、Ｎ、Ｎ’−
ジシクロヘキシルカルボジイミド−アディティブ法、活
性エステル法、カルボニルジイミダゾール法、酸化還元
法、ウッドワード試薬にを用いる方法等が挙げられる。

縮合反応を行なう前に、それ自体公知の手段により、反
応に関与しないカルボキシル基、アミノ基等を保護した
り、また反応に関与するカルボキシル基、アミノ基を活
性化してもよい。

カルボキシル基の保護基としては、例えば、メチル、エ
チル、ベンジル、Ｐ−ニトロベンジル、ｔ−ブチル、シ
クロヘキシル等のエステルを挙げることができる。

アミノ基の保護基としては、例えば、ベンジルオキシカ
ルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、イソボルニル
オキシカルボニル基、９−フルオレニルメチルオキシカ
ルボニル基等を挙げることができる。

グアニジノ基の保護基としては、例えば、ニトロ基、ベ
ンジルオキシカルボニル基、トシル基、ｐ−メトキシベ
ンゼンスルホニル基、メシチレンスルホニル基等を挙げ
ることができる。

メルカプト基の保護基としては、例えば、トリチル基、
アセトアミドメチル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベン
ジル基、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル基等を
挙げることができる。

カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、
対応する酸無水物、アジド、活性エステル［アルコール
（例、ペンタクロロフェノール、２．４−ジニトロフェ
ノール、シアノメチルアルコール、ｐ−ニトロフェノー
ル、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカ
ルボキシイミド、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−
ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール）とのエステル］等が挙げられる。アミノ基の活
性化されたものとしては、例えば、対応する燐酸アミド
が挙げられる。

反応は、通常溶媒中で行なわれ、例えば、クロロホルム
、ジクロルメタン、酢酸エチル、Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ピ
リジン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、水、メタノ
ール等の溶媒、又は、これらの混合物中で行なうことが
できる。

反応温度は、一般に使用される約−３０℃〜約５０℃の
範囲で行なうことができる。

本発明のペプチドの保護基脱離反応は、使用する保護基
の種類によって異なるが、ペプチド結合に影響を与えず
、保護基が除かれることが必要である。

保護基の親離方法としては、例えば、塩化水素、臭化水
素、兼水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロ
メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、又は、これらの
混合物等による酸処理が挙げられるが、この他に、液体
アンモニア中ナトリウム、パラジウム炭素による還元等
も挙げられる。上記酸処理による脱保護基反応において
は、アニソール、フェノール、チオアニソールの如きカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。

このようにして製造された本発明のペプチドは、反応終
了後、それ自体公知のペプチドの分離手段、例えば、抽
出、分配、再沈殿、再結晶、カラムクロマトグラフィー
等によって収得することができる。

また、本発明のペプチドは、それ自体公知の方法により
、前記のような、その官能基における誘導体、又は、そ
れらの薬理学的に許容され得る塩にすることができる。

本発明のペプチドは、ラットにおける受動的回避試験に
おいて強い向知能作用を示す。

本発明のペプチドの有用な対象疾病名としては、例えば
、老年痴呆（アルツハイマー型痴呆）、脳血管性痴呆、
ならびに、アルツハイマー病、ピック病、ハンチントン
舞踏病、クロイッフェルト・ヤコブ病、パーキンソン病
、小脳を髄変性症、等に基く痴呆症などが挙げられ、こ
れらの疾病のｆ防又は治療に用いることができる。

本発明のペプチドの毒性は、極めて低く、薬効有効量を
溝かに上回る投与量でも死亡例はない。

本発明のペプチドは、遊離体、又はその官能基における
誘導体、又はそれらの塩として投与できる。その投与量
は、それらの何れであっても、遊離体の量として、一般
に体重１ｋｇ当りｌｎｇ〜１　ｍｇ／日の範囲の量が適
当である。特に、非経口投与、経鼻投与では、１０ｎｇ
〜１００μｇ／ｋｇ・日が好ましく、経口投与、直腸投
与では、非経口投与の１０〜１００倍投与することが好
ましい。本発明のペプチドは、主として、非経口的に投
与（例、静脈内又は皮下注射、脳室内又はをｍ腔内投与
、経鼻投与、直腸投与）されるが、場合によっては、経
口投与されてもよい。

剤型としては、例えば、注射剤、坐剤、散剤、点鼻剤、
丸剤、錠剤等が挙げられる。本発明のペプチドは、生理
食塩水の溶液として保存することができるが、マンニト
ール、ソルビトールを添加して凍結乾燥アンプルとし、
使用時に溶解することもできる。

以下に実施例を示す。

実施例において、薄層クロマトグラフィーの展開溶媒は
下記の通りであり、メルク社製ＴＬＣプレートシリカゲ
゛ル６０　Ｆ　２５４を用いた。

Ｒ１′：クロロホルム−メタノール−酢酸−水（８０：
２０：２．５：５　）下層Ｒ，２：クロロホルムーメタノールー水（７０：３０：
５　）Ｒ，３：ｎ−ブタノール−酢酸−水（２：１：１　）ま
た、高速液体クロマトグラフィーによる精製は、カラム：　μＢｏｎｄａｐａｋ　　Ｃ，８１，９Ｘｌ５
ｃｍ移動相：　Ａ）０．０５％；　ＴＦＡ、Ｂ）アセト
ニトリルを使用して行なった。

［実施例１］Ｈ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Δｒｇ−ｅｌｌ酢酸塩（
１）Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｍｂｓ）−０ＢｚｌＨ−
Ａｒｇ（Ｍｂｓ）−０Ｂｚｌ塩酸塩１４．２　ｇのＴＨ
Ｆ２００ｍｌ溶液にＮ　Ｍ　Ｍ　３．３ｍ　ｌ　、　Ｂ
ｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏ５ｕ　９．４　ｇを加え、室温で１８
時間攪拌した。

ＴＨＦを留去し、残留物を＾ｃＯＥｔに溶解後、希塩酸
水、飽和炭酸水素ナトリウム水、水にて洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。

溶媒を留去し標記の化合物を油状物で得た。

収量：１８ｇＲｒ’：　０．６９　　　Ｒｒ２：　０．８’６［α］
ｏ　ニー２９．６°（ｃ＝０．５．　ＤＭＦ　）（２）
　　Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（ＭＢｚｌ）−Ｐｒｏ−八ｒｇ（Ｍ
ｂｓ）−０ＢｚｌＢｏｃ−Ｐｒｏ−八ｒｇ（Ｍｂｓ）−
０Ｂｚｌ　　３．７　　ｇ　　を　４ＮＩＩＣＩＡｃＯ
Ｅｔ　１５　ｍ　ｌ中に室温で３０分間放置後、溶媒を
除去した。残留物を減圧乾燥した後ＤＭＦ５０＋ｎＩＬ
に溶解し、水冷下にＮＭＭ　１．４　ｍ　１１、Ｂｏｃ
−（：ｙｓ（ＭＢｚｌ）−０Ｈ２，２ｇ、　ＨＯＢｔ　
Ｏ，９５ｇ及びＤ（：Ｃ１，３ｇを加えた。室温で１８
時間攪拌した後りにＵｒｅａを濾別し、ＤＭＦを留去し
た。

残留物を２−ブタノール−０Ｈ２（：ｈ　（５：　１　
ｖ／ｖ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水、食塩飽
和希塩酸水、及び飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。

溶媒を留去した後、ＣＩ−＋１；＋３−Ｍｅ叶にてシリ
カゲルカラム積装して、標記の化合物を油状物で得た。

収量＝４ｇＲｒ”：　　０　、　８２　　　　Ｒｒ２：　　０　、
　８８［α］。　ニー２５．０°　（ｃ＝０．５．　　
ＤＭＦ　　）（３）　Ｚ−八５ｎ−ｆｌｙｓ　（ＭＢｚ
ｌ）−Ｐｒｏ−八ｒｇ　（Ｍｂｓ）−０ＢｚＩＢｏｃ−
Ｃｙｓ　（ＭＢｚｌ）−Ｐｒｏ−八ｒｇ（Ｍｂｓ）−０
Ｂｚｌ　　１．７　　ｇ　　を４Ｎｌ（ＣＩ−へｃａｌ
ミしＳｍｆｉ中で室温で３０分間放置後、溶媒を除去し
た。残留物に２−ブタノールｅ１１２ＣＩ□（５：１ｖ
／ｖ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水を加え、有機層を
分取し、飽和食塩水にて洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。

溶媒を留去し、残留物をＤＭＦ３０ｒｎＪＺに溶解し、
水冷下にＺ−Ａｓｎ−ＯＨＯ，５８ｇ、　ＨＯＢｔ：　
０．３４　ｇ及びＤＣＧ　Ｏ，４５ｇを加えた。室温で
１８時間攪拌した後ＤＧＵｒｅａを濾別し、ＤＭＦを留
去した。

残留物を２−ブタノール−Ｃ１２（：ｈ　（５：　１　
ｖ／ｖ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水、食塩飽
和希塩酸水、及び飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。

溶媒を留去した後、エーテルを加えて、結晶化させ波乗
し、標記の化合物を得た。

収量：１．８ｇ融点：９８〜１００℃ Ｒ，’：０．７ＯＲ，’：０．８２［α］ｏ　ニー２９．２°　（ｃ−０，５、ＤＭＦ　）
（４）　１ｌ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−ＯＨ
酢酸塩Ｚ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　（ＭＢｚｌ）−Ｐｒｏ−八
ｒｇ（Ｍｂｓ）−０Ｂｚｌ　　１　０　０ｍｇをＭＳＡ
４ｍｆｆｉ及びアニソール０．４ｍ　ｌ中で、室温で１
．５時間攪拌した後、エーテルを加え、上澄みを除去し
た。沈殿物を水に溶解し、ＤｏｗｅｘｌＸ２　（アセテ
ート型）処理の後、水を留去した。

残留物を０．０５％ＴＦ＾に溶解し、１２ｍ１Ｌ１分（
流量）、０から１０％Ｂ）２０分直線グラジェント（移
動相）にて、高速液体クロマトグラフィー蹟製し、Ｄｏ
ｗｅｘｌＸ２（アセテート型）処理の後、凍結乾燥して
標記の化合物を得た。

収量：４７ｍｇＲｆ３（含１％エタンジチオール）：０．１８［ｃｔ］
Ｄニー５４．６°　（ｃ＝０．５　、水）次に、本発明
のペプチドの有効性を示す薬理学的試験例を示す。

［薬理学的試験例］記憶固定に対する作用はＷｉｓｔ、ａｒ系雌雄性ラット
用いて、プルバッハ（ｌｌｕｒｂａｃｈ）ら［サイエン
ス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、　２２１．１３１０−１３１２
（１９８３年）］の方法に準じたー試行受動的回避実験
により検討した。実験装置は、明室と暗室とから成り、
床はステンレス製グリッドでできている。明室に入れら
れたラットは自由に暗室へ移動でき、ラットが暗室に入
った時に一回の電気ショックを経験させる。電気ショッ
クに対する受動的回避行動の保持は、一定時間後に再び
明室に置かれたラットが暗室に入るまでの時間（反応潜
時）によって判定した。

１）記憶促進効果の検討電気ショック（０，２５ｍＡ）を経験させた直後に、前
記実施例１で得られた本発明のペプチドまたは生理食塩
水を皮下投与し、２４時間後に電気ショックの記憶保持
試験を行フた。生理食塩水のみを投与した対照群のラッ
トは、一般に５０秒１ａｉｒ　？＆の反応潜時を示した
。各群の試験に使用したラットの数は６〜８匹である。

最大測定時間は６００秒とした。

実施例１で得られたペプチドについては、投与ａ　１　
ｎｇ／ｋｇで対照群に対する反応潜時の延長は３１６％
であった。

２）サイクロへキシミド（ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ
）による実験的逆向性健忘の敗訴効果の検討本発明のペプチドまたは生理食塩水を皮下役牛し１時間
後Ｃ電気ショック（０，５ｍＡ）を経験させ、その直後
にサイクロヘキシミド２．７〜３、Ｏｎ＋ｇ／ｋｇまた
は生理食塩水を皮下投与し、４８時間後に記憶保持試験
を行った。生理食塩水のみを投与したラットは一般に３
００秒前後の反応潜時を示し、サイクロヘキシミドのみ
を投与した対照群のラットは５０秒前後の反応潜時を示
し逆向性健忘を発現した。

本発明のペプチド投与群の反応潜時の平均値と対照群の
それとを比較した。各群の試験に使用したラットの数は
６〜８匹である。最大測定時間は６００秒とした。

実施例１で得られたペプチドについては、投与遣１　ｎ
ｇ／ｋｇで対照群に対する反応潜時の延長は３２０％で
あった。

上記の試験結果から、本発明のペプチドは、優れた記憶
促進効果及び逆向性健忘に対する改善効果を示すことが
明らかである。

［製剤例１コ　（注射剤）注射用蒸留水１００＋ｎｊＺ中に、実施例１で得られた
ペプチド０．１ｍｇ、及び塩化ナトリウム０．９ｇを含
有させ、ｐＨを水酸化ナトリウムで６．０〜８．０に調
節した水溶液を調製した。これを、細菌濾過後１ｍＪ２
．アンプルに充填、溶閉し加熱滅菌して、注射剤を製造
した。

［製剤例２］　（凍乾製剤）注射用蒸留水１００ｍＭ中に、実施例１で得られたペプ
チド５ｍｇ、及びＤ−マンニット５ｇを含有させ、ｐＨ
をリン酸緩衝液で６．０〜８．０に調節した水溶液を調
製した。これを、細菌濾過し、バイアル瓶に１ｍｆ１分
注した後、凍結乾燥を行ない、凍結乾燥注射剤を製造し
た。

［製剤例３コ　（点鼻剤）生理食塩水１００ｒｎｊＺ中に、実施例１で得られたペ
プチド１０ｍｇを含有させ、ｐＨをクエン酸緩衝液で３
．０〜６．０に調節し、１回投与量０．５ｍＪＺ中に５
０μｇ含有する点鼻剤を製造した。

［製剤例４］　（平削）ハードファツト（飽和詣肪酸のトリグリセライド）９８
．５ｇに卵黄レシチン０．５ｇを加え、４０〜４５℃に
て溶融させた後、実施例１で得られたペプチド５ｍｇを
ＰＥＧ４００の１ｇに溶解させた液をこれに添加し攪拌
分散させた後、その１ｇを平削型に注入し、同化後型か
ら分離して平削を製造した。

［発明の効果］本発明のペプチドは、新規な化合物であり、優れた向知
能性作用をイｆしており、医薬として有用である。

特許出願人　富士レビオ株式会社特許出願人　　口本ケミファ株式会社

Claims

【特許請求の範囲】１、式（ I ）：【遺伝子配列があります】（ I ）で表わされるペプチド若しくはその官能基における誘導
体、又はそれらの薬理学的に許容され得る塩。