JP2003176237A - ペプチドを有効成分とする糖尿病の治療用医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 インスリン活性を有する真性糖尿病の治療剤
を提供する。 【解決手段】 Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
ｓ−Ａｓｎ、アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙ
ｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ、およびＴｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ、よりなる群
から選ばれた少なくとも一種のペプチドを有効成分とし
て含有する糖尿病の治療用医薬。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はインスリン活性を有する
ペプチドを有効成分とする真性糖尿病の治療剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】インスリンは２種のポリペプチド鎖、す
なわち２１個のアミノ酸残基を含有するＡ鎖および３０
個のアミノ酸残基を有するＢ鎖からなる。Ａ鎖およびＢ
鎖は２つのジスルフィド橋で一緒に連結されている。す
なわちＡ７位およびＢ７位のシステイン残基並びにＡ２
０位およびＢ１９位のシステイン残基が一緒に結合して
いる。Ａ６とＡ１１との間には第３のジスルフィド橋が
存在している。動物およびヒトインスリンはプレプロイ
ンスリンの形態で膵臓において産生される。ヒトプレプ
ロインスリンは例えば８６個のアミノ酸残基を有するプ
ロインスリンの結合した２４個のアミノ酸残基含有プレ
ペプチドからなっていて、以下の配置：プレペプチド−
Ｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａ（ここで
Ｃは３１個の残基からなるアミノ酸鎖である）を有す
る。ランゲルハンス島からの排出中にプレペプチドは分
裂してプロインスリンになる。最後にＣ鎖がタンパク質
分解により開裂して活性なヒトインスリンを産生する。

【０００３】インスリンはインスリン感受性組織に多く
の作用を及ぼす。１つの顕著な作用は、インスリンが使
用される場合の哺乳類におけるグルコースレベルの迅速
な減少である。これにより筋細胞および脂肪細胞は血液
からグルコースを迅速に吸収するようになる。さらにイ
ンスリンはグリコーゲンシンテターゼを活性化し、脂肪
加水分解を阻止する。インスリンはアミノ酸からのタン
パク質合成を促進し、グリコキナーゼおよびホスホフル
クトキナーゼの誘発を高めそしてある種のグルコース新
生酵素例えばピルベートカルボキシラーゼおよびフルク
トースジホスファターゼの生成を阻止する。

【０００４】II型糖尿病である非インスリン依存性糖尿
病は、末梢組織例えば筋肉または脂肪組織のインスリン
抵抗性に関与している。グルコース利用で生ずるこの減
少は、グルコース輸送過程およびそれに続く代謝過程の
インスリン刺激欠除によって生起される。この多重抵抗
性はレセプターまたはポスト−レセプターレベルにおけ
る、すなわち２次メッセンジャー産生前の欠損を示唆し
ている（Garvey, Diabetes／Metabolism Reviews, 5,
(1989), 727〜742参照）。

【０００５】

【発明の構成】本発明によれば意外なことに、短ペプチ
ドがインスリン活性を有することができ、真性糖尿病の
治療に適しているということが見出された。

【０００６】〔医薬組成物〕すなわち、本発明は、ペプ
チドＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓ
ｎ、アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
ｓ−Ａｓｎ、およびＴｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−
Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ、よりなる群から選択
される少なくとも１種のペプチドを含有する糖尿病治療
のための医薬組成物に関する。

【０００７】本明細書中において、アミノ酸は一般的な
慣用法で略記される（Schroeder, Luebke, The Peptide
s, Volume I, New York 1965, pages XXII−XXIII; Hou
ben-Weyl, Methoden der Org. Chemie (Methods of Or
g. Chemistry) Volume XV/1 and 2 Stuttgart 1974参
照）。

【０００８】本発明にかかるペプチドはペプチド化学の
一般的手法に従ってＣ−末端から段階的にまたは各セグ
メントの結合により製造される（Houben-Weyl, Methode
n der Organischen Chemie, Volume 15/1,2参照）。ペ
プチド結合は例えば活性エステル、アジドを経る混合無
水物法によりまたはカルボジイミド法によって、特に反
応速度を増加しかつラセミ化を防止する物質例えば１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド、３−ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒ
ドロ−１,２,３−ベンゾトリアジン、Ｎ−ヒドロキシ−
５−ノルボルネン−２,３−ジカルボキシイミドを用
い、さらにまた１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの活
性誘導体またはリン酸、ホスホン酸およびホスフィン酸
の無水物を用いて−１０℃と溶媒の沸点との間の温度好
ましくは−５℃〜４０℃で実施されうる。

【０００９】上記反応のために適当な溶媒はジメチルホ
ルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリ
ドンまたはジメチルスルホキシドである。さらにまた、
各成分の溶解性から可能である場合には例えばメチレン
クロライド、クロロホルムまたはテトラヒドロフランの
ような溶媒を用いることも可能である。これらの各方法
は例えばMeienhofer-Gross: “The Peptides" Academic
Press, Vol. I (1979)に記載されている。

【００１０】必要により、副反応を防止するためまたは
特定のペプチド合成のために、アミノ酸側鎖中の官能基
はさらに適当な保護基により保護される（例えばT.W.Gr
eene, “ Protective Groups in Organic Synthesis"
参照）が、主として用いられるのは下記のとおりであ
る。

【００１１】Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ａｒｇ（Ｍｔｓ）、Ａ
ｒｇ（Ｍｔｒ）、Ａｒｇ（ＰＭＣ）、Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）、Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｃｙｓ−（４−ＭｅＢｚ
ｌ）、Ｃｙｓ(Ａｃｍ)、Ｃｙｓ（ＳＢｕｔ）、Ｇｌｕ
（ＯＢｚｌ）、Ｇｌｕ(ＯＢｕｔ)、Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）、
Ｈｉｓ（Ｆｍｏｃ）、Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）、Ｈｉｓ(Ｔｒ
ｔ)、Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｍｅｔ
（Ｏ）、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）、Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）、Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）、Ｔｒｐ（Ｍｔｓ）、Ｔ
ｒｐ(ＣＨＯ)、Ｔｙｒ(Ｂｒ−Ｚ)、Ｔｙｒ(Ｂｚｌ)また
はＴｙｒ(Ｂｕｔ)。

【００１２】アミノ保護基として使用するのが好ましい
のは、接触水添により除去されうるベンジルオキシカル
ボニル（Ｚ）基、弱酸により除去されうる２−（３,５
−ジメチルオキシフェニル）−２−プロピルオキシカル
ボニル（Ｄｄｚ）基またはトリチル（Ｔｒｔ）基並びに
第２アミンにより除去されうる９−フルオレニルメチル
オキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基である。システインの
ＳＨ基は多数の保護基により遮断されうる。これに好ま
しいのはトリチル（Ｔｒｔ）基およびＳ−ｔｅｒｔ−ブ
チル（ＳｔＢｕ）基である。該トリチル基を沃素酸化に
より除去するとシステイン化合物が生成され、または該
基を還元酸性分裂により除去するとシステイン化合物が
得られる（Liebigs Ann. Chem. 1979, 227〜247）。

【００１３】他方、Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチル基はトリブチ
ルホスフィンによる還元分裂に付すのが最もよい（Aus
t. J. Chem. 19 (1966) 2355〜2360）。側鎖中のＯＨお
よびＣＯＯＨ官能基は、酸で除去されうるｔｅｒｔ−ブ
チル（ｔＢｕ）基により保護するのが最もよい（これに
ついてもまたMeienhofer-Gross: “ The Peptides" ,Vo
l. 3参照）。

【００１４】医薬組成物は約３.０〜９.０好ましくは約
５.０〜８.５のpHを有する注射用の溶液または懸濁液で
あるのが好ましく、該組成物は適当な等張化剤、適当な
保存剤および適切な場合には適当な緩衝剤および適切な
場合にはさらにまたデポー主剤（principle）を含有す
るが、勿論全ては滅菌水性溶液または懸濁液状態で存在
する。活性物質を別とした組成物成分の全体は該組成物
ビヒクルを形成する。

【００１５】適当な等張化剤の例にはグリセロール、グ
ルコース、マンニトール、ＮａＣｌ、カルシウムまたは
マグネシウム化合物例えばＣａＣｌ₂またはＭｇＣｌ₂が
ある。

【００１６】適当な保存剤の例にはフェノール、ｍ−グ
レゾール、ベンジルアルコールおよび／またはｐ−ヒド
ロキシ安息香酸エテスルがある。

【００１７】特に約５.０〜８.５のpHに調整するのに使
用できる緩衝物質の例には酢酸ナトリウム、クエン酸ナ
トリウム、リン酸ナトリウム等がある。あるいはまた生
理学的に許容しうる希酸（代表的にはＨＣｌ）またはア
ルカリ（代表的にはＮａＯＨ）もpHの調整に適当であ
る。

【００１８】また本発明組成物の作用プロフィルを変更
させるために、修飾(ＥＰ−Ｂ １３２ ７６９およびＥ
Ｐ−Ｂ １３２ ７７０参照)および／または未修飾イン
スリン好ましくはウシ、ブタまたはヒトインスリン特に
好ましくはヒトインスリンを混合することも可能であ
る。

【００１９】医薬組成物はＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔ
ｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ、アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａ
ｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ、およびＴｙｒ−Ｇｌｎ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎよ
りなる群から選ばれた少なくとも一種のペプチドを、適
切な場合には修飾および／または未修飾インスリンまた
はその誘導体とともに、生理学的に許容しうるビヒクル
とともに、並びに適切な場合には適当な添加剤および補
助剤とともに一緒に用いて適当な剤形に変換することに
よって調製される。

【００２０】

【実施例】以下に本発明を実施例により詳細に説明す
る。

【００２１】〔ペプチド製造実施例〕 実施例１ アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−
Ａｓｎ−ＯＨ ジメチルホルムアミド３０ml中に溶解したＨ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙ
ｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯｔＢｕ・トリフルオロアセテ
ート（Liebigs Ann. Chem. 1979, 243）２.０ｇ（１.５
６ミリモル）の溶液にＮ−エチルモルホリン０.４mlお
よびアセチル−Ｎ−ビトロキシスクシンイミド０.５３
ｇを加えた。室温で４時間反応させた後に混合物を高真
空下で濃縮した。残留物を酢酸エチル中に溶解し、飽和
ＮａＨＣＯ₃溶液、ＫＨＳＯ₄溶液および水で順次振とう
することにより抽出した。これより沈殿が得られ、それ
を吸引濾去した。収量：１.３ｇ。酢酸エチル相をＮａ₂
ＳＯ₄で乾燥しついで濃縮した。残留物をジエチルエー
テルで摩砕し、吸引濾過した。収量：０.８ｇ。全収
量：２.１ｇ（＞１００％）。

【００２２】前記で得たＡｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−
Ａｓｎ−ＯｔＢｕの純粋バッチ１.３ｇ(約１.０７ミリ
モル)を、トリフルオロ酢酸３０mlおよびエチルメルカ
プタン３０mlの混合物中に溶解した。４時間の反応時間
の経過後に混合物を水３００ml中に入れ、その水溶液を
ジエチルエーテルで３回抽出した。水性相は凍結乾燥し
た。収量：７４０mg（８７％）。 Ｃ₃₃Ｈ₄₈Ｎ₈Ｏ₁₃Ｓ（７９６.８６） 〔α〕²³ _D＝−２５.１°（ｃ＝１、水中）

【００２３】実施例２ Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｕ^t）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−
Ａｓｎ−ＯＢｕ^t・ＨＢｒ（７・ＨＢｒ）の合成 ２ａ． Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌｎ−ＯＮｂ
（１６） Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ml中に溶解したＤ
ｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−ＯＨ ２５.２４ｇ（５５ミリ
モル）、Ｈ−Ｇｌｎ−ＯＮｂ・ＨＣｌ １５.８８ｇ（５
０ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
水和物６.７５ｇの溶液にＮ−エチルモルホリン６.４ml
（５０ミリモル）およびジシクロヘキシルカルボジイミ
ド１０.５ｇを−３℃で加えた。混合物を０℃で１時間
次に室温で６時間撹拌させついで室温で一夜放置した。
沈殿を吸引濾去し、濾液を濃縮した。得られた油状物を
酢酸エチル中に溶解し、溶液をＮａＨＣＯ₃溶液、クエ
ン酸塩緩衝液（pH３）および水で順次洗浄し、Ｎａ₂Ｓ
Ｏ₄で乾燥しついで濃縮した。油状生成物を石油エーテ
ルで摩砕して粉末を得、それを吸引濾去した。次にそれ
を煮沸し、それぞれ１００mlずつで３回ジイソプロピル
エーテルでデカンテーションした。それを最後に冷ジイ
ソプロピルエーテルで摩砕し、吸引濾去しそして石油エ
ーテルで洗浄した。収量：３２.８ｇ（９１％）。 融点８０〜９０℃ 〔α〕²² _D＝＋１５.１°（ｃ＝１、メタノール中） Ｃ₃₇Ｈ₄₆Ｎ₄Ｏ₁₁（７２２.８１） 計算値： Ｃ ６１.４８ Ｈ ６.４１ Ｎ ７.７５ 実測値： Ｃ ６１.３ Ｈ ６.７ Ｎ ７.９

【００２４】２ｂ． Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌ
ｎ−ＯＨ・ジシクロヘキシルアミン メタノール５００ml中に溶解した前記４ａで得た１６の
化合物３２.５ｇ（４５ミリモル）の溶液に水５mlおよ
びＰｄ／ＢａＳＯ₄を加え、水素化を７時間実施した。
次に触媒を吸引濾去し、濾液を濃縮した。残留油状物を
酢酸エチル２５０ml中に溶解した。これにジシクロヘキ
シルアミン１１.３ml（５５ミリモル）を加え、混合物
を３℃で数時間放置しついで沈殿を吸引濾去した。それ
を粉砕機中において酢酸エチルで摩砕し、吸引濾去しつ
いで真空乾燥した。収量：２７ｇ（７８％）。 融点１７０〜１７１℃ 〔α〕²³ _D＝＋１０.２°（ｃ＝１、メタノール中） Ｃ₄₂Ｈ₆₄Ｎ₄Ｏ₉（７６９.０） 計算値： Ｃ ６５.６ Ｈ ８.３９ Ｎ ７.２８ 実測値： Ｃ ６５.４ Ｈ ８.５ Ｎ ７.３

【００２５】２ｃ． Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌ
ｎ−ＯＨ（１７） Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌｎ−ＯＨ・ジシクロヘ
キシルアミン２.９ｇ（３.７ミリモル）を酢酸エチルと
クエン酸塩緩衝液（pH＝３）との間に分配した。酢酸エ
チル相を中性になるまで水洗し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥しつ
いで濃縮した。残留物は無定形の１７の化合物であっ
た。収量：２ｇ（９０％）。 融点１１０〜１１５℃ 〔α〕²² _D＝＋１９.８（ｃ＝１、メタノール中） Ｃ₃₀Ｈ₄₁Ｎ₃Ｏ₉（５８７.６８） 計算値： Ｃ ６１.３１ Ｈ ７.０３ Ｎ ７.１５ 実測値： Ｃ ６０.６ Ｈ ７.２ Ｎ ７.０

【００２６】２ｄ． Ｄｄｚ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌ
ｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｕ^t）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｕ^t）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯＢｕ^t（１８） 前記４ｃ．の１７の化合物９.７ｇ（１６.５ミリモ
ル）、実施例３の化合物１９.２ｇ（１５ミリモル）お
よびＨＯＢｔ ２.０２５ｇ（１５ミリモル）を室温で撹
拌してＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド３０ml中に溶解し
た。混合物を０℃に冷却し、Ｎ−エチルモルホリン１.
９５ml（１５ミリモル）並びにＮ,Ｎ−ジメチルホルム
アミド９ml中におけるジシクロヘキシルカルボジイミド
３.３ｇ（１６ミリモル）の溶液を加え、その混合物を
０℃で１時間次に室温で４時間撹拌させついで室温で一
夜放置し、ジシクロヘキシル尿素を吸引濾去した。次に
それをそれぞれ４.５mlずつで２回Ｎ,Ｎ−ジメチルホル
ムアミドで洗浄した。濾液を撹拌下で飽和ＮａＨＣＯ₃
溶液１５９ml中に流し入れ、粉末状沈殿が得られるまで
撹拌を続けた。これを吸引濾去し、クエン酸塩緩衝液
（pH３）で摩砕し、吸引濾去し、中性になるまで水洗し
ついで約０.１トルの下で乾燥した（収量２３.１ｇ）。
粗物質をほとんど蒸気浴上で沸騰するまで加熱し、希懸
濁液を３℃で一夜貯蔵し、沈殿を吸引濾去しついで酢酸
エチルおよびエーテルで洗浄した。収量２０ｇ（７６.
８％）。〔α〕²² _D＝−１０.２°（ｃ＝１、メタノール
中） この物質は２０５℃以上で分解し、約２５０℃で木炭化
した。アミノ酸分析：Ａｓｐ ２.００；Ｇｌｕ ２.０
１；Ｃｙｓ ０.７５；Ｌｅｕ ０.９９；Ｔｙｒ１.９
５。 Ｃ₉₂Ｈ₁₂₃Ｎ₁₁Ｏ₂₀Ｓ（１７３５.１５） 計算値： Ｃ ６３.６８ Ｈ ７.１５ Ｎ ８.８８ Ｓ １.８５ 実測値： Ｃ ６２.０ Ｈ ７.２ Ｎ ８.６ Ｓ ２.１

【００２７】２ｅ． Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−Ｇｌｎ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｕ^t）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ(Ｂｕ^t)−
Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ−ＯＢｕ^t・ＨＢｒ(７・ＨＢ
ｒ)前記で得た１８の化合物３.５ｇ（２ミリモル）を、
トリフルオロ酢酸１.７５ml（２０ミリモル）、水０.３
５mlおよびメチレンジクロライド３３ml（１％の水を有
する５％トリフルオロ酢酸溶液約３５ml）並びにアニソ
ール３.５mlの撹拌混合物中に溶解した。この混合物を
室温で３時間撹拌させ、ピリジン２ml（２４.８ミリモ
ル）を加え、その混合物を約０.１トルの下で濃縮し
た。残留物をエーテルで摩砕し、吸引濾去し、エーテル
で洗浄し、乾燥し、水で摩砕し、吸引濾去し、水洗しつ
いでＰ₂Ｏ₅で乾燥した（収量３.３５ｇ）。さらに精製
するために、物質を暫時煮沸し、熱いうちにそれぞれ２
０mlずつの酢酸エチルで２回吸引濾過した。次にそれを
エーテルで洗浄した。収量 ３.０ｇ（９２％）。融点
２２５〜２６５℃（分解） 〔α〕²² _D＝−２０.２°（ｃ＝１、メタノール中） アミノ酸分析：Ａｓｐ １.９７；Ｇｌｕ ２.００；Ｃｙ
ｓ ０.６１；Ｌｅｕ １.００；Ｔｙｒ ２.０１ Ｃ₈₀Ｈ₁₁₀ＢｒＮ₁₁Ｏ₁₆Ｓ（１５９３.８） 計算値：Ｃ ６０.２３ Ｈ ６.９６ Ｎ ９.６７ Ｓ ２.０１ 実測値：Ｃ ６０.６ Ｈ ７.０ Ｎ ９.５ Ｓ ２.２

【００２８】〔薬理実施例〕 実施例３ 本発明ペプチドの生物活性はラットから解剖によって得
られた脂肪細胞および横隔膜の断片を用いて測定する。
「ヘキサペプチド」はアセチル−Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ａｓｎ−ＯＨを意味する。「ベースラ
イン」（baseline）の用語は刺激のない場合の活性を意
味し、インスリンはヒトインスリンを意味しそしてｄｐ
ｍは１分間当たりの放射性壊変を意味する。「ペプチ
ド」の用語は本発明によりインスリン活性を有するペプ
チドを意味する。ラットの脂肪細胞は以下のようにして
調製した。

【００２９】副睾丸の脂肪組織（Wistarラット、１６０
〜１８０ｇ、給餌制限なし）をコラゲナーゼで消化し、
得られた個々の脂肪細胞を浮遊により数回洗浄する。

【００３０】ラットからの横隔膜断片の調製：組織の小
断片（直径５mm）を、数回洗浄した半横隔膜（Wistarラ
ット、６０〜７０ｇ、給餌制限なし）から打ち抜く。

【００３１】下記の２種の試験によって、グルコースが
酸化（解糖、ペントースホスフェート経路）により代謝
されようがまたは酸化により代謝されないかに関係な
く、インスリンで刺激されることができかつ機能性イン
スリンシグナル透過カスケードおよびグルコース輸送を
必要とするグルコース吸収を測定する。ラクテートの産
生ではなくて脂質、グリコーゲンまたは膜不透過性中間
体（グルコース ６−ホスフェート）への変換が次に行
われる。

【００３２】ａ) ラット脂肪細胞をインスリンまたは
ペプチドの存在または不在下でＤ−〔Ｕ−¹⁴Ｃ〕−グル
コース（Ｄ−グルコースの最終濃度２２μＭ）とともに
インキュベートする。細胞をシリコーン油層を介しての
遠心分離により培地から分離しついで再び単離し、細胞
性放射能を測定する。

【００３３】ｂ) 横隔膜の断片をインスリンまたはペ
プチドの存在または不在下でＤ−〔Ｕ−¹⁴Ｃ〕−グルコ
ース（Ｄグルコースの最終濃度７５μＭ）とともにイン
キュベートする。培地を完全に吸引する。各組織片を数
回洗浄し次いで放射能測定のためにアルカリ処理を行な
って可溶化する。結果は表１に示すとおりである。

【００３４】

【表１】

【００３５】実施例４ グルコース輸送 脂肪細胞および横隔膜の断片は実施例３のようにして調
製する。下記試験によって、グルコース輸送担体例えば
インスリンシグナル透過カスケードにより血漿膜を通過
してインスリンで刺激され得る特異的グルコース輸送
（促進拡散）を独占的に試験する。グルコース輸送にお
けるグルコース代謝のいずれもの作用は、非代謝性グル
コース類似体を用いることによって除外される。

【００３６】ａ） ラット脂肪細胞をインスリンまたは
ペプチドの存在または不在下で２−デオキシ−Ｄ−〔１
−³Ｈ〕−グルコース（Ｄ−グルコースの最終濃度０.２
mM）およびＬ−〔１−¹⁴Ｃ〕−グルコース（輸送不可
能）とともにインキュベートする。放射能（〔³Ｈ〕お
よび〔¹⁴Ｃ〕）を測定するために細胞を油層を介しての
遠心分離により培地から分離する。特異的な立体選択性
グルコース輸送は、総細胞結合放射能（〔³Ｈ〕−グル
コース）並びに拡散および非特異的作用によって会合さ
れた放射能（〔¹⁴Ｃ〕−グルコース）との間の差として
計算される。

【００３７】ｂ） 横隔膜の各断片をインスリンまたは
ペプチドの存在または不在下で２−デオキシ−Ｄ−〔１
−³Ｈ〕−グルコース（Ｄ−グルコースの最終濃度０.１
mM）およびＬ−〔１−¹⁴Ｃ〕−グルコースとともにイン
キュベートする。各組織片をガラスファイバーフィルタ
ーでの迅速濾過により培地から分離しついで完全に洗浄
する。放射能をアルカリ性抽出物中で測定する。結果は
表２に示すとおりである。

【００３８】

【表２】

【００３９】実施例５ マウスの血中グルコースプロフィル 体重１７〜２１ｇ（約３０日令）のCharles River Wiga
Balb-C種の雌マウスに標準食を摂食させる。実験開始
前の１６時間は食物を全く与えない。各実験グループ中
の５匹の動物に実施例２の化合物（オクタペプチド）の
水溶液（pH６）を静脈内投与する。動物１匹当たり０.
３mlの容量を投与する。

【００４０】表３には、対照グループ（５匹の動物、緩
衝溶液pH６.０；動物１匹あたり投与される容量０.３m
l）および本発明のオクタペプチド投与の動物との間の
差の百分率としての血中グルコースレベルが示されてい
る。

【００４１】

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヴオルフガング・ケーニヒ ドイツ連邦共和国デー−6238ホフハイム・ アム・タウヌス．エプシユタイナーシユト ラーセ25 (72)発明者 ギユンター・ミユラー ドイツ連邦共和国デー−6230フランクフル ト・アム・マイン．ノイツアイルスハイム 38 Ｆターム(参考） 4C084 AA01 AA02 BA01 BA17 BA23 CA59 DB34 MA02 MA17 MA23 MA66 NA05 NA14 ZC352 ZC752 4H045 AA30 BA14 BA15 DA37 EA20 EA27 EA30 FA30 FA32 FA44 FA58 FA59 FA60 FA61 GA05 HA02 HA03

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
   ｓ−Ａｓｎ、 アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−
   Ａｓｎ、およびＴｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓ
   ｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ、よりなる群から選ばれた
   少なくとも一種のペプチドを有効成分として含有する糖
   尿病の治療用医薬。
2. 【請求項２】 少なくとも１種の修飾または未修飾イン
   スリンまたはその誘導体を含有する請求項１記載の糖尿
   病の治療用医薬。