JPH04278095A

JPH04278095A - 多糖ａ−１８４５、その製造方法及びこれを産生する微生物

Info

Publication number: JPH04278095A
Application number: JP3036384A
Authority: JP
Inventors: Akira Endo; 遠藤　章; Toshiki Inoue; 利樹井上
Original assignee: Japan Steel Works Ltd
Current assignee: Japan Steel Works Ltd
Priority date: 1991-03-01
Filing date: 1991-03-01
Publication date: 1992-10-02
Anticipated expiration: 2010-10-11
Also published as: JPH0793878B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】【０００１】【産業上の利用分野】本発明は、食品、医薬品、化粧品
等の分野で広く利用できる新規な多糖Ａ−１８４５、そ
の製造方法及びこれを産生する微生物に関する。【０００２】【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】多糖類
、特に酸性ヘテロ多糖類は、増粘剤、乳化安定剤、ゲル
化剤等として食品、洗浄剤、医薬品、化粧品等の分野で
広く利用されており、これらの内、微生物を培養して得
られるものが多種見出されている（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ
ａｔｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　４５，ｐ２７５〜　２８
２　（１９７５）　）しかしながら、酸性ヘテロ多糖類
は、その理化学的性質がその多糖類により異なるため、
これを使用する分野、使用目的が多岐にわたる現在にあ
っては、様々の性質を持つ多種の多糖類を見出すことが
望まれている。【０００３】【課題を解決するための手段】本発明者は、上記実状に
鑑み、新規酸性ヘテロ多糖類を見出すべく鋭意研究を行
った結果、東京都五日市市の土壌より分離した放線菌が
、アミラーゼの作用を受けない新規な酸性ヘテロ多糖類
を生産することを見出し、本発明を完成した。【０００４】すなわち本発明は、新規な多糖Ａ−１８４
５、その製造方法及びこれを産生する微生物を提供する
ものである。【０００５】本発明の多糖Ａ−１８４５は、例えばスト
レプトミセス属に属する多糖Ａ−１８４５生産菌を培養
し、その培養物から採取することにより製造される。多
糖Ａ−１８４５生産菌の代表例としてＡ−１８４５株が
挙げられる。本菌株の菌学的性質は以下の通りである。【０００６】（１）形態学的性質胞子形成菌糸は気菌糸上に生じ分枝している。胞子は２
０個以上がらせん状（２〜３巻）に連鎖している。胞子
の大きさは（０．７〜　０．９μｍ　×０．９　〜　１
．３μｍ）で表面は平滑である。胞子のう、べん毛胞子
は認められない。【０００７】（２）各種培地における生育状態（１）シ
ュクロース・硝酸塩寒天培地黄味灰の粉状の気菌糸を豊富に着生し、盛り上ったコロ
ニーを形成する。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色
素は生産しない。（２）グルコース・アスパラギン寒天培地気菌糸を着生
せず、盛り上ったコロニーを形成する。基生菌糸はうす
黄茶を呈し、可溶性色素は生産しない。（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地白の粉状の気
菌糸をかすかに着生し、盛り上ったコロニーを形成する
。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色素は生産しない
。（４）スターチ寒天培地明茶灰の粉状の気菌糸を豊富に着生し、盛り上ったコロ
ニーを形成する。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色
素は生産しない。（５）チロシン寒天培地明茶灰の粉状の気菌糸を豊富に着生し、盛り上ったコロ
ニーを形成する。基生菌糸は暗茶を呈し、可溶性色素を
生産しない。（６）栄養寒天培地白の粉状の気菌糸をかすかに着生し、平坦なコロニーを
形成する。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色素は生
産しない。（７）イースト・麦芽寒天培地明茶灰の粉状の気菌糸を厚く着生し、盛り上ったコロニ
ーを形成する。基生菌糸は暗茶を呈し、可溶性色素は生
産しない。（８）オートミール寒天培地明茶灰の粉状の気菌糸を豊富に着生し、平坦なコロニー
を形成する。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色素は
生産しない。（９）ベネット寒天培地明茶灰の粉状の気菌糸を豊富に着生し、盛り上ったコロ
ニーを形成する。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色
素は生産しない。（１０）リンゴ酸カルシウム寒天培地白の粉状の気菌糸を豊富に着生し、盛り上ったコロニー
を形成する。基生菌糸はうす黄茶を呈し、可溶性色素は
生産しない。【０００８】（３）生理的性質（１）メラニン様色素の生成　　　　　　　　：陰性（
２）スターチの加水分解　　　　　　　　　　：陽性（
３）硝酸塩の還元性　　　　　　　　　　　　　　：陰
性（４）ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　　　　
：陰性（５）リンゴ酸カルシウムの利用　　　　：陽性
（６）耐塩性　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　：４％で生育する。（７）生育ｐＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　：５．０　〜　９．０（８）生育温度　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　：１５〜３４℃（９
）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地上
２８℃培養）【表１】【０００９】以上の菌学的性質から、このＡ−１８４５
株はストレプトミセス属に属する菌であり、更に公知の
菌株と比較しても同じものが存しないため新規の菌株と
判断し、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄
第１２０４３　号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１２０４３）として
寄託した。本発明のＡ−１８４５株は、自然に又は紫外
線、Ｘ線、化学薬剤等により容易に変異を起こす。従っ
て、本発明の多糖類の製造には、これら変異株を用いる
こともできる。【００１０】本発明の菌株を用いて、本発明の多糖Ａ−
１８４５を得るには、培地に該菌株を接種し、常法に従
って培養し、この培養物より多糖Ａ−１８４５を採取す
ることにより行われる。この培地中には、資化し得る炭
素源、窒素源及びその他の栄養源を適当量含有せしめて
おくことが好ましい。これらは特に制限はないが、具体
的には、炭素源としてはグルコース、シュクロース、で
んぷん、グリセリン等が挙げられ、窒素源としては、酵
母エキス、肉エキス、ペプトン、大豆粉など有機窒素源
の他、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの無機窒
素源も挙げることができ、その他の添加物としては、必
要に応じてナトリウム、カリウム、マグネシウム、カル
シウム、亜鉛、鉄等の金属の硫酸塩、硝酸塩、塩化物、
炭酸塩、リン酸塩等；クエン酸ナトリウム等の有機酸塩
が挙げられる。【００１１】培養は好気的条件下に行うのがよく、静置
、振とう、通気攪拌培養のいずれも可能であるが、振と
うあるいは通気攪拌培養が有利である。培養温度は約１
５〜３４℃が有利であるが、殊に約２０〜３０℃が有利
である。また、培地のｐＨは約５．０　〜　９．０が好
ましく、特に約６．０〜　８．０が好適である。培養期
間は培地の組成、温度等の培養条件によって異なるが、
通常約２〜１４日程度、好ましくは４〜６日程度であり
、上記生産量が最大に達する時期を見計らって適当な時
期に培養を終了する。【００１２】このようにして培養された培養物中に蓄積
された多糖Ａ−１８４５を単離・精製するには、通常用
いられる単離・精製手段を適用すればよい。例えば、培
養液を遠心分離又は濾過して、菌体を除去した後、エタ
ノール、メタノール、プロパノール、アセトン等の有機
溶媒を加えると目的とする本発明多糖の粗生成物が析出
する。この粗生成物の精製は例えば次の如くして行うこ
とが好ましい。すなわち、まず培養濾液を限外濾過し、
脱塩濃縮する。次いでトリクロロ酢酸を１０％（ｖ／ｖ
）となるように加える。沈澱を除き、４倍量のエタノー
ルを加え、析出した多糖を集め、純水に溶解後、再びエ
タノールを加え、これを更に水に溶かし、ゲル濾過を数
回行い、得られた画分を透析後、凍結乾燥すると、綿状
の精製された多糖Ａ−１８４５が得られる。【００１３】斯くして得られた本発明の多糖Ａ−１８４
５は、以下に示す性質を有する。（１）色：白色（２）構成成分：ヘキソース　　　　　　４７．４％　
　アンスロン硫酸法（Ｍｏｒｒｉｓ法）によ　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　る。　　　　　　　　　　　　　　　　ウロン酸　　　　　
　　　　９．９％　　カルバゾール硫酸法（Ｂｉｔｔｅ
ｒ　＆　Ｍｕｉ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｒ　法
）による。　　　　　　　　　　　　　　　　ペントース　　　　
　　　４．６％　　システイン硫酸法（Ｄｉｓｃｈｅ法
）によ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　る。　　　　　　　　　　　　　　　　メチルペントース　
５．０％　　システイン硫酸法（Ｄｉｓｃｈｅ　＆　Ｓ
ｈｅｔｔ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｌｅｓ　法）
による。　　　　　　　　　　　　　　　　アミノ糖　　　　　
　　　　８．４％　　エルソン・モーガン法（Ｂｌｉｘ
法）に　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　よる。　　　　　　　　　　　　　　　　リン　　　　　　　
　　　　　　２．６％　　Ｂｕｒｔｏｎらの方法の改変
法による。（３）構成糖：マンノース、ガラクトース、ガラクツロ
ン酸、キシロース、ラム　　　　　　　　　　　　　　
ノース、グルコース、フコース、リボースが７．６：４
．０：３．４：３．１：１．　　　　　　　　　　　　
　　９：１．７：１．１：１．０　の比で構成されてい
る。（４）元素分析：Ｃ　３６．５％　，　Ｈ　５．５％　
，　Ｎ　４．０％（５）融点：明確な融点は示さない。（６）赤外線吸収スペクトル：図１（７）紫外線吸収スペクトル：図２（８）溶解性：一般の有機溶剤に不溶、水に可溶（９）
呈色反応：アンスロン反応　　　　陽性　　　　　　　
　　　　　　　　　ニンヒドリン反応　　陰性（１０）
塩基性、酸性、中性の区別：陰イオン交換体であるＤＥ
ＡＥトヨパール６５０Ｗ（　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｃｌ−　型）
に吸着することから酸性と思われる　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。（１１）アミラーゼの作用：受けない。（１２）比旋光度：［　α　］２４Ｄ　＋５７．０°（
ｃ，０．１，　ｉｎ　ｗａｔｅｒ）　【００１４】【発明の効果】本発明の多糖Ａ−１８４５は、食品、医
薬品、化粧品等多くの分野に応用できるが、特にアミラ
ーゼの作用を受けないことから、低カロリーの食物繊維
として食品に用いることができる。【００１５】【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００１６】実施例１グルコース１．０　％、コーンスターチ３．０　％、ペ
プトン０．５％、大豆粉１．０　％、酵母エキス０．５
　％及び炭酸カルシウム０．２　％を含む培地８０ｍｌ
を５００ｍｌ容坂口フラスコに分注し、常法により滅菌
した後、スターチ・カゼイン培地上に生育させたＡ−１
８４５株の菌体をかきとって接種し、レシプロシェーカ
ーで２８℃３日間振とう培養を行った。この培養液６０
ｍｌを、滅菌した同じ培地３０００ｍｌに添加し、５ｌ
容ジャーファメンタで毎分３００回転、通気量毎分２ｌ
、２８℃で６日間培養した。得られた培養液約３０００
ｍｌから遠心分離と東洋濾紙Ｎｏ．２による濾過により
、菌体を除き、更に濾液２２００ｍｌを限外濾過（濾過
分子量限度１００００　）し、脱塩濃縮した。この濃縮
液６２５ｍｌに８０％トリクロロ酢酸９０ｍｌを加え、
生じた沈澱を遠心分離によって除いた。上清６５０ｍｌ
にエタノール２６００ｍｌを加え、生じた沈澱を逆浸透
水２００ｍｌに溶解後、再度エタノール８００ｍｌを加
え、同様に沈殿を得た。この操作を再度行い、得られた
沈殿を流水と逆浸透水中で透析した。この内液にエタノ
ール８００ｍｌを加え、生じた沈殿を減圧乾燥し、イオ
ン交換水５０ｍｌに溶解後、凍結乾燥し、多糖の粗生成
物（１．５７ｇ）を得た。【００１７】次に、粗生成物３００ｍｇを０．０２％の
アジ化ナトリウムを含む２０ｍＭ　リン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．０　）６０ｍｌに溶解し、同様の緩衝液
を用い、トヨパールＨＷ−７５Ｆカラム（２．６×９７
ｃｍ）　によるゲル濾過を行った。ゲル濾過は、流速２
００ｍｌ／ｈｒ、分取量５ｍｌ／ｔｕｂｅで、検出は２
８０ｎｍにおける吸光度によって行った。サンプル量は
１回１０ｍｌ（５０ｍｇ）とし、合計６回行った。得ら
れたフラクション（３３０ｍｌ）を減圧濃縮後、イオン
交換水で６０ｍｌとし、再度、同じ条件のゲル濾過に供
した。更に得られたフラクション（２１０ｍｌ）は上記
と同様に濃縮後、トヨパールＨＷ−６５Ｓカラム（２．
６×９７ｃｍ）　によるゲル濾過に２回通した（条件は
トヨパールＨＷ−７５Ｆカラムを用いた場合と同様）。得られたフラクション（５０ｍｌ）はイオン交換水中で
透析し、５ｍｌに減圧濃縮後、凍結乾燥し、多糖Ａ−１
８４５（７６．５ｍｇ）を得た。本実施例により得られ
た多糖の赤外線吸収スペクトルと紫外線吸収スペクトル
を図１及び図２に示す。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の多糖の赤外線吸収スペクトルを示す図
である。

【図２】本発明の多糖の紫外線吸収スペクトルを示す図
である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　次の理化学的性質を有する多糖Ａ−１
８４５。（１）色白色（２）構成成分ヘキソース、ウロン酸、ペントース、メチルペントース
、アミノ糖及びリン（３）構成糖マンノース、ガラクトース、ガラクツロン酸、キシロー
ス、ラムノース、グルコース、フコース及びリボース（
４）融点明確な融点を示さない（５）赤外線吸収スペクトル図１（６）紫外線吸収スペクトル図２（７）溶解性水に可溶、メタノール、エタノール、プロパノール、ア
セトンに不溶（８）呈色反応アンスロン反応　　　　陽性ニンヒドリン反応　　陰性（９）塩基性、酸性、中性の区別酸性（１０）アミラーゼの作用受けない（１１）比旋光度［　α　］２４Ｄ　＋５７．０°（ｃ，０．１，　Ｈ２
Ｏ）
【請求項２】　　ストレプトミセス属に属する多糖
Ａ−１８４５生産菌を培養し、その培養物から多糖Ａ−
１８４５を採取することを特徴とする請求項１記載の多
糖Ａ−１８４５の製造方法。
【請求項３】　　ストレプトミセス属に属し、請求項１
記載の多糖Ａ−１８４５を生産する微生物。
【請求項４】　　ストレプトミセス　　エスピー　　Ａ
−１８４５と命名されたものである請求項３記載の微生
物。