JPH0427387A - プロテアーゼ耐性セルラーゼ、これを産生する微生物及び当該セルラーゼの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、プロテアーゼに耐性をもつ新規なセルラーゼ
及びこれを生産する微生物並びにこの微生物を用いた該
セルラーゼの製造方法に関する。

〔従来の技術〕

繊維素分解酵素（セルラーゼ）の開発は、従来、バイオ
マス資源の有効利用を一大目標として進められており、
トリコデルマ属、アスペルギルス属、アクレモニウム属
、フミコーラ属等の糸状菌を中心に、シュウトモナス属
、セルロモナス属、ルミノコッカス属、バチルス属等の
細菌、更に、ストレプトコツカス属、アクチノマイセス
属等の放線菌を供給源とするセルラーゼが報告されてい
る。

しかしながら、現時点では、バイオマス用セルラーゼの
工業的規模での利用は多くはない。

一方、セルラーゼの産業的用途として、衣料用洗浄剤の
配合成分としての利用が大きくなっている（特公昭５９
−４９２７９号、特公昭６０−２３１５８号、特公昭６
０−３６２４０号）。衣料用洗浄剤組成物として使用し
得るセルラーゼを生産する方法としては好アルカリ性バ
チルス属細菌の培養によりセルラーゼＡを採取する方法
（特公昭５０−２８５１５号）、セルロモナス属に属す
る好アルカリ性細菌を培養してアルカリセルラーゼ３０
１−Ａを生産する方法（特開昭５８２２４６８６号）、
好アルカリ性バチルスＮｏ、１１３９を培養してカルボ
キシメチルセルラーゼ（ＣＭＣ）　ヲ生産する方法（１
（Ｈｉｋｏｓｉら、Ｊ、Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、。

１３１巻、　　３３３９頁、　　（１９８５年））、ス
トレプトマイセス属の一種を用いてアルカリセルラーゼ
を生産する方法（特開昭６１−１９４８３号）、好アル
カリ性細菌の一種バチルスーエスビー　ＫＳＭ−６３５
（ＢａｃｉｌｌｕｓＳρ、ＫＳＭ−６３５＞を培養して
アルカリセルラーゼＫを生産する方法（特開昭６３−１
０９７７６号）等の所謂アルカリセルラーゼを生産する
方法と、バチルス属細菌を培養してアルカリ耐性セルラ
ーゼ　Ｋ　−５２２及びに−５８８を生産する方法（特
開昭６ｔ−３７２８５号、特開昭６４−３７２８６号）
等の所謂アルカリ耐性セルラーゼを生産する方法が報告
されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、これらのセルラーゼはタンパク質分解酵
素であるプロテアーゼに対する耐性を有していない。そ
のた約に、例えば、プロテアーゼが配合された液体衣料
用洗浄剤に同時に配合することができなかった。

かかる間頴を解決する手段として、セルラーゼを固定化
する方法、或いは化学修飾することにより安定化する方
法等が考えられるが、コスト、収率等の問題より産業的
利用に適しているとはいえない。

従って、プロテアーゼ耐性を有し、衣料用洗浄剤にプロ
テアーゼとともに配合することのできる新規なセルラー
ゼ、その生産菌及び該セルラーゼの製造法が望まれてい
た。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者は、界面活性剤耐性及びプロテアーゼ耐性を有
するセルラーゼを生産する微生物を自然界に求め、鋭意
探索を続けた結果、今般、茨城県鹿島郡周辺の土壌より
採取したストレプトマイセス属に属する微生物が新規な
プロテアーゼ耐性セルラーゼを生産することを見高し、
本発明を完成した。

すなわち、本発明は新規なストレプトマイセス属に属す
る菌が産生ずるプロテアーゼ耐性セルラーゼ、これを産
生ずる微生物（ストレプトマイセス　ＫＳＭ−２３＞及
び該セルラーゼの製造法を提供するものである。

本発明のプロテアーゼ耐性セルラーゼを生産する上記微
生物は、次のような菌学的性状を示す。

なお、以下に記載の菌学的性質の試験及び分類方法は、
特許庁編産業別審査基準応用微生物工業、放線菌の同定
実験法（日本放線菌学会編）及び微生物の化学分類実験
法（駒形和夫編）に基づいて行った。

（ａ）　　形態 胞子形成菌糸の分岐法は、単純分岐、車軸分岐の何れも
見られる擬似輪生分岐であり、菌糸の形態はループ状及
び螺旋状である。胞子の数は１０胞子以上で、胞子表面
は平滑、大きさは、短径的０．５８、長径約１．２−１
．４６の楕円型である。鞭毛胞子、胞子襄はない。胞子
柄の着生位置は気菌糸上である。

（ｂ）　　培地に於ける生育状態 次表に示す（第１表） 以下余白 第１表、各培地における生育状態 ＊（）は、ＪＩＳ標準色票番号 （Ｃ）　　生理学的性質 ■　生育温度範囲：２Ｏ−４０ｔ ■　ゼラチンの液化（グルコース・ペブトンゼラセン培
地）：２Ｏ℃及び２８℃の何れの培地でも液化はみられ
なかった。

■　スターチの加水分解くスターチ寒天培地）；分解す
る。

■　脱脂牛乳の凝固、ペプトン化（脱脂牛乳培地）：３
０℃で培養したが、凝固後ペプトン化がみられた。

■　メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地及びペプ
トン・イースト鉄寒天培地）：生成する。

（ｄ）　　炭素源の同化性（プリドハム・ゴドリーブ寒
天培地）（＋＋：良好　十二普通） Ｌ−アラビノース　　＋モ Ｄ−キシロース　　　＋十 Ｄ−グルコース　　　＋十 Ｄ−フラクトース　　＋ シュクロース　　　　＋＋ イノシトール　　　　＋＋ Ｌ−ラムノース　　　＋＋ ラフィノース　　　　＋＋ Ｄ−マンニット　　　＋＋ ＫＳＭ−２３株は、形態学的に放線菌の特徴を有する。

又、細胞壁にＬＳＬ−ジアミノピメリン酸を含むこと、
基生菌糸を通常分断せずによく発達すること、菌核、分
生子殻、胞子裏を形成しないこと、気菌糸に長い分節胞
子を作り、胞子柄は擬似輪生分岐であることから、清野
・長谷用らの細胞壁を主とする検索式に従えばストレプ
トマイセス属であると同定できる。

更に、オートミール寒天培地での気菌糸の色が赤色系で
あり、胞子鎖は、ループ状及び螺旋状、胞子表面は平滑
であること、可溶性色素は生成しないが、メラニン様色
素は生成すること及び、炭素源の同化性試験の結果から
野々村、或いはクウェスタアーの検索式に従って検索す
ると、本菌株はストレプトマイセス属の新菌株と同定さ
れることから、ストレプトマイセス・エスピーＫＳＭ−
２３ト命名した。なお、本菌株は、微工研菌寄第１１２
５５号として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託さ
れている。

本発明のプロテアーゼ耐性セルラーゼを製造するには、
ストレプトマイセス属に属するプロテアーゼ耐性セルラ
ーゼ生産菌を培養し、その培養物からプロテアーゼ耐性
セルラーゼを採取すればよい。該生産菌は上記ストレプ
トマイセスＫＳＭ−２３株及びこの菌株を変異処理した
変異株のみならず、ストレプトマイセス属に属しプロテ
アーゼ耐性セルラーゼを生産する菌であれば全て用いる
ことができる。

上記の菌株を用いて本発明のプロテアーゼ耐性セルラー
ゼを得るには、適当な培地に該菌株を摂取し、常法に従
って培養すれば良い。培養培地としては、資化し得る窒
素源と炭素源を適宜組み合わせて含有甘し緬だものが使
用される。この炭素源及び窒素源については、特に制限
はない。例えば、窒素源としては、硝安、硫安、塩安、
リン酸アンモニウム、硝酸ソーダ、コーングルテンミー
ル、大豆粉、コーンスチープリカー、カザミノ酸、酵母
エキス、ファーマメディア、イワシミール、肉エキス、
ペプトン、バイブロ、アジパワ７、コーンソイビーンミ
ール、コーヒー粕、綿実油粕、カルチベーター、アジッ
クス、ゼスト、グルタミン酸ソーダなどが、また、炭素
源としては、籾殻、ふすま、麩、濾紙、一般紙類、おが
屑等の植物繊維質、廃糖蜜、転化糖、ＣＭＣ、アビセル
、セルロース綿、キシラン、ペクチン、リボース、アラ
ビノース、キシロース、グルコース、マンノース、フラ
クトース、ガラクトース、乳糖、麦芽糖、蔗糖、トレハ
ロース、マンニット、グリセリン、澱粉、酢酸、クエン
酸などが挙げられる。その他に、リ　ン酸、　Ｍ　ｇ　
２　＋、　Ｃａ　２　＋、　Ｍ　ｎ　２　＋、　Ｚｎ２
＋、　ＣＯ２＋、　Ｎａ十、Ｋ＋などの無機塩や、必要
であれば、無機、有機微量栄養源を添加することもでき
る。

かくして得られた培養物から目的物であるプロテアーゼ
耐性セルラーゼの採取及び精製は、一般の酵素の採取及
び精製の手段に準じて行うことができる。更に、必要に
応じ、プロテアーゼ耐性であることを利用しプロテアー
ゼ処理により採取及び精製を行うこともできる。

即ち、例えば培養物を遠心分離、又は濾過等によって菌
体を分離し粗酵素液を得ることができる。

この粗酵素液はそのまま使用することもできるが、必要
に応じて、例えば、塩析法、溶媒沈澱法（メタノール、
エタノール、イソプロパツール等）によってタンパク質
を沈澱させたり、限外濾過（例えば、旭化成社製、分画
分子量１，３万）により濃縮後、凍結乾燥により、粗酵
素粉末とすることができる。具体的には塩析法の場合、
例えば、硫安（３０〜５０％飽和画分）で沈澱させた後
、濾過或いは遠心分離、脱塩することによってこれを凍
結乾燥粉末にすることができる。脱塩の方法としては透
析又はセファデックス（、−２５（ファルマシア社製）
等を用いるゲル濾過法等の一般的方法が用いられる。

かくして得られたプロテアーゼ耐性セルラーゼは、以下
に示す酵素学的性質を有する。

なお、酵素活性の測定は、以下の方法に従って行い、次
の緩衝液を用いた。

ｐＨ３〜６　クエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６〜８　リ
ン酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ８〜１１　　グリシン−水酸化す）　ＩＪウム緩衝
液酵素活性測定法： （１）　　ＣＭＣアーゼ活性 １０ｍｇ　ＣＭＣ（ＡＯＩＭＣ１山陽国策バルブ社製）
　、１００ｍＭ各緩衝液を含む基質溶液０．９−にＯ，
ｌｒｄの酵素溶液を加え、４０℃、２０分反応させた。

反応後、３゜５−ジニトロ−サリチル酸（３、５−ｄｉ
ｎｉｔｒ。

５ａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｃｌ（ＤＮＳ）　）法にて
還元糖の定量を行った。すなわち、反応後、１．０ｍｌ
にＤＮＳ試薬１．０−を加え、５分間、１００℃で加熱
発色させ、冷却後、４．０ｍｌの蒸留水を加えて希釈し
た。これを波長５３５ｎｍで比色定量した。酵素力価は
、上記の条件下で１分間に１μｍｏｂのグルコースに相
当する還元糖を生成する酵素量を１単位とした。

（２）ｐ−ニトロフェニルセロピオシド分解活性０．１
μｍｏｌ！ｐ−ニトロフェニルセロピオシド（シグマ社
製）及び１００ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５
）を含む反応液１．０−中に適当量の酵素液を４０℃で
作用させた後、ＩＮのＮａａＣＩ：］＋を０．３艷、蒸
留水を１．７−順次加え、遊離するｐ−ニトロフェノー
ルを４００ｎｍで比色定量した。酵素力価は、上記の条
件下で１分間に１μｍｏｌのｐ−二トロフェノールを遊
離させる酵素量を１単位とした。

（３）　　アビセル、セルロース粉末、リン酸膨潤セル
ロース及び濾紙分解活性 １５ｍｇアビセル（メルク社製）及び１００ｍＭクエン
酸す）　ＩＪウム緩衝液（ｐｆ１５）を含む反応液２０
ｍｆｆ中に適当量の酵素液を加え、４０℃で振とうしな
がら作用させた。反応液、冷却遠心分離（５℃、３００
０ｒｐｍ　、　２０分）を行い、その上澄１．０−を３
゜５−ジニトロサリチル酸法にて還元糖の定量を行った
。セルロース粉末分解活性はセルロース粉末（東洋濾紙
社製）を、リン酸膨潤セルロース分解活性はトミタらの
方法（Ｔｏｍｉｔａ、　Ｙ、　ｅｔ　ａｌ：　Ｊ。

Ｆｅｒｍｅｎｔ、　Ｔｅｃｎｏｌ、：　５２．２３５．
１９７４）により処理したセルロースを、濾紙分解活性
は濾紙（セルラーゼ活性度検定用濾紙、東洋Ｎｎ５１−
特）を用いアビセル分解活性のときと同様に行った。酵
素力価は上記の条件下で１分間に１μｍｏＡのグルコー
スに相当する還元糖を生成する酵素量を１単位とした。

（４）　　セロビオーゼ活性 １０ｍｇセロビオース（東洋化学社製）及び１００ｍＭ
クエン酸す）　ＩＪウム緩衝液を含む反応液１．０ｍＪ
２中に適当量の酵素液を４０℃で作用させた後、１００
℃、１０分間処理して酵素を失活させた後、生成グルコ
ースをムタロターゼ・ＧＯＤ法（Ｇｌｕｃｏｓｅ　Ｃ−
Ｔｅ５ｔ。

和光紬薬工業社製）で測定した。酵素力価は上記の条件
下で１分間に２μｍｏβのグルコースを生成する酵素量
を１単位とした。

（酵素学的性質） （１）　　作用 カルボキシメチルセルロース（’ＣＭ　Ｃ）によく作用
し、これらを溶解せしめ、還元糖を生成する。

（２）基質特異性 ＣＭＣの他、リン酸膨潤セルロース、キシラン及びｐ−
ニトロフェニルセロピオシドに対しても若干の活性を有
する。アビセル、セルロース粉末、濾紙等の結晶質繊維
及びセロビオースに対する分解活性は有していない。

（３）　　作用ｐＨ及び至適ｐＨ 作用ｐ）Ｉ範囲は４〜１０と広範囲であった。至適ｐＨ
は７．０であり、５〜９の範囲に於いても至適ｐＨに於
ける活性の５０％以上の相対活性を有していたく第１図
）。

（４）　　ｐＨ安定性 種々のｐＨで３０℃、１時間保持した場合、ｐＨ３〜１
１と補給で広範囲で安定であった（第２図）。

（５）　　作用温度及び至適温度 １００ｍＭ、　ｐＨ９のグリシン−水酸化ナトリウム緩
衝液中で作用温度を測定した結果、作用温度は２０〜７
０℃であり、その至適温度は５５℃であった。また、４
０〜６０℃に於いても、至適温度での活性の５０％以上
の相対活性を有していた（第３図）。

（６）温度安定性 １００ｍＭ、　ｐＨ９のグリシン−水酸化ナトリウム緩
衝液中で、１０分間各温度で処理した後、残存活性を測
定した結果、４５℃では安定しており、５０℃でも９０
％以上の残存活性を有していた（第４図）。

（７）キレート剤の影響 キレート剤であるＥＤＴＡＸＢＧＴ八、ＮＴ八及び５Ｔ
ＰＰを活性測定時に共存させ、その影響を検討したがほ
とんど活性を阻害しなかった。

（８）金属イオンの影響 各種金属イオン（ＡＩ”、Ｆｅ　３　＋、３　ａ　２　
＋、Ｃａ２＋Ｃｏ２＋、　Ｃｕ２＋、　Ｆｅ　２　＋、
　ｌ　ｇ　２　＋、　１７　ｇ　２　＋、　Ｍｎ　２　
＋、　Ｎｉ２＋Ｓ　ｎ　２　＋、ｚｎ２＋、Ｋ”、Ｎａ
”）を活性測定時に共存させ、その影響を検討した（に
“、Ｎａ＋についてはそれらの塩濃度を５０ｍＭとし、
他のイオンについては、１ｍＭとした）。その結果、Ｃ
ｕ２＋、Ｓｎ２＋Ｈｇ２＋及びＺｎ”＋により阻害され
た。

（９）分子量 本酵素をＴＳに−Ｇ２０００ＳＷ　　（東ソー社製）に
よるゲル濾過法により分子量測定したところ、約２，５
万であった。

σ■　界面活性剤耐性 各界面活性剤（例えば、アルキルスルホン酸ナトリウム
（５ＡＳ）、アルキル硫酸エステルナトリウム塩（ＡＳ
）、ポリオキシエチレンアルキル硫酸エステルナ）ＩＪ
ウム塩（ＢＳ）に対する安定性を検討するために、本酵
素を界面活性剤１０％水溶液と共に４０℃で保存し、２
週間後の残存活性を測定した。その結果、何れの界面活
性剤と共存した場合も５０％以上の残存活性を有してい
た（第２表）。

第２表 本：１００ｍＭグリシン緩衝液（ｐ）１９＞■　プロテ
アーゼ耐性 各プロテアーゼ（例えば、サビナーゼ（ノボ社製）、ペ
プシン（シグマ社製）、パパイン（シグマ社製））に対
する、本酵素の安定性を検討するために各プロテアーゼ
Ｉ　Ａｔｌ／−と共に、１００ｍＭ　リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７）中４０℃で２週間保存し、その残存活性を測定し
た。その結果５０％以上の残存活性を有し、プロテアー
ゼに対し極とて強い耐性を有していた（第３表）。

第３表 〔発肋の効果〕 本発明のプロテアーゼ耐性セルラーゼは、界面活性剤、
プロテアーゼ等の洗浄剤配合成分に対し極めて強い耐性
を有しており、キレート剤によってほとんど阻害を受け
ない。

また、ｐＨ１７に至適ｐａｌを有しているが、ｐ）１７
．　Ｏ〜９．０のアルカリ側でも、活性の発現が見られ
る。

更に、広範囲で極めて安定である。従って、本酵素は、
例えば、液体洗浄剤組成物の配合成分として有利に使用
することができるものである。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説肋する。

実施例１ 茨城県鹿島郡周辺の採取土壌約１ｇを１％ＮａＣ１含有
滅菌水５ｍｌに懸濁し、攪拌・静置後、その上清をスク
リーニング用ＣＭＣ含有寒天培地（培地１）に塗布し、
３０℃で２−７日培養後、ハローを形成したコロニーを
選出し、ＣＭＣアーゼ生産菌を取得した。取得菌は、肉
眼的及び、顕微鏡的に単一になるまで単集落分離を繰り
返すと、純粋な分離菌を得ることが８来た。更に得られ
た菌を液体培地（培地２）に接種し、３０℃、３日間振
とう培養した。培養後、遠心分離した上清液に、１％Ｉ
Ｅｓ、サビナーゼ（ノボ社製）をＩＡＩＩ／ｍｆｆとな
るように添加し、４０℃にて保存し、ｐＨ９におけるＣ
ＭＣアーゼ活性の残存活性を測定し、プロテアーゼ耐性
セルラーゼ生産菌を選択した。

上記の方法により、本発明のストレプトマイセス　エス
ピーＫＳＭ−２３（ＦＢＲＭ　Ｐ−１１２５５）を取得
することが出来た。

培地Ｉ　　ＣＭＣ含有寒天培地（ＨＡ−Ａｇａｒ）ＣＭ
ｏ　　　　　　　　　　　３％ 腐植酸　　　　　　０．１％ に８２ＰＯ，０，２％ Ｍｇ５Ｌ・７Ｈ，［］　　　　　００．０５％ＮａＣ１
０，１％ Ａｇａｒ　　　　　　　　１％ 培地２　ＣＭｏ　　　　　　　　　１％ポリペプトン　
　　０．５％ 酵母エキス　　　　０．０５％ ＫＨ，ＰＯ４０，１％ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０２％ 実施例２ 実施例で得たストレプトマイセスエスピーＫＳＭ２３株
を、ＣＭＣを３％フスマに代え、ポリペプトンを０．５
％硝酸に代えた実施例の液体培地２に接種し、３０℃、
３日間、通気量０．５ｖｖｍ、攪拌数２００ｒｐｍで３
０１発酵槽により培養した。培養後、フィルターブレス
により、菌体及び不溶物を除き、粗酵素液を得た。この
粗酵素液１５！ｌを限外濾過（旭化成社製、分画分子量
６．０００）により濃縮、脱塩を行い１１の粗酵素液を
得た。更に、凍結乾燥を行い、乾燥粉体としてプロテア
ーゼ耐性セルラーゼ（比活性２３０単位／ｇ）１１．７
ｇを得た。なお酵素活性はｐＨ９における測定値である
。

実施例３ 実施例２で得られた粗酵素液を１０％ＢＳ、サビナーゼ
ＩＡ［Ｉ／ｍｊ！と共存させ、４０℃、２週間後の残存
活性を測定した。その結果、４８％の活性を有していた
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、プロテアーゼ耐性セルラーゼの酵素反応１１
１）１と相対活性の関係を示す図面である。 第２図は、同酵素の処理ｐＨと相対活性の関係を示す図
面である。 第３図は、同酵素の反応温度と相対活性の関係を示す図
面である。 第４図は、同酵素の処理温度と相対活性の関係を示す図
面である。 以上 第 図 反応ｐＨ △　；　クエン酸ナトリウム緩衝液 Ｏ；　リン酸ナトリウム緩衝液 口　；　グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液第 図 処理ｐＨ △　；　クエン酸ナトリウム緩衝液 Ｏ；　リン酸ナトリウム緩衝液

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ストレプトマイセス属に属する菌が産生する、プロ
   テアーゼに対して強い耐性を有するセルラーゼ。 ２、プロテアーゼ１ＡＵ／ｍｌとともに４０℃で保存し
   た場合、２週間後でも５０％以上の残存活性を有する請
   求項１記載のプロテアーゼ耐性セルラーゼ。 ３、次の物理化学的性質を有する請求項１又は２記載の
   プロテアーゼ耐性セルラーゼ。 （１）作用 カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）によく作用し、
   これらを溶解せしめ、還元糖を 生成する。 （２）基質特異性 ＣＭＣの他、リン酸膨潤セルロース、キシ ラン及びｐ−ニトロフェニルセロピオシド に対しても若干の活性を有する。アビセル、セルロース
   粉末、濾紙等の結晶質繊維及び セロビオースに対する分解活性は有してい ない。 （３）作用ｐＨ及び至適ｐＨ 作用ｐＨ範囲は４〜１０と広範囲であり、至適ｐＨは７
   ．０であり、５〜９の範囲に於いても至適ｐＨに於ける
   活性の５０％以上の相対活性を有する。 （４）ｐＨ安定性 ３０℃、１時間保持した場合ｐＨ３〜１１の範囲で極め
   て安定である。 （５）作用温度及び至適温度 作用温度は２０〜７０℃であり、その至適温度は５５℃
   である。また、４０〜６０℃に於いても、至適温度での
   活性の５０％以上の相対活性を有する。 （６）温度安定性 ４５℃、１０分では安定しており、５０℃１０分でも９
   ０％以上の残存活性を有する。 ４、次の物理化学的性質を有する請求項３記載のプロテ
   アーゼ耐性セルラーゼ。 （１）キレート剤の影響 キレート剤であるＥＤＴＡ、ＢＧＴＡ、ＮＴＡ及びＳＴ
   ＰＰを活性測定時に共存させても、ほとんど活性は阻害
   されない。 （２）金属イオンの影響 Ｃｕ＾２＾＋、Ｓｎ＾２＾＋、Ｈｇ＾２＾＋及びＺｎ＾
   ２＾＋により阻害される。 （３）分子量 約２．５万（ゲル濾過法）。 （４）界面活性剤の影響 アルキルスルホン酸ナトリウム（ＳＡＳ）、アルキル硫
   酸エステルナトリウム塩（ＡＳ）又はポリオキシエチレ
   ンアルキル硫酸ナト リウム塩（ＥＳ）の１０％水溶液とともに４０℃で保存
   した場合２週間後でも５０％以上の残存活性を有する。 ５、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ）属
   に属するプロテアーゼ耐性セルラーゼ生産菌。 ６、ストレプトマイセス・エスピー （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）ＫＳＭ−２３と
   命名され、微工研菌寄第１１２５５号として寄託された
   請求項５記載のプロテアーゼ耐性セルラーゼ生産菌。 ７、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ）属
   に属するプロテアーゼ耐性セルラーゼ生産菌を培養し、
   その培養物よりプロテアーゼ耐性セルラーゼを採取する
   ことを特徴とするプロテアーゼ耐性セルラーゼの製造法
   。