JPH04217630A - 安定化されたゴナドトロピンを含有する調製品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は一般的には医薬用組成物
に係わり、特に、安定化されたゴナドトロピンを含有す
る調製品に係わる。

【０００２】

【従来の技術】比較的純度の高いゴナドトロピン調製品
は市販品として入手可能である。例えば、天然由来のヒ
ト閉経ゴナドトロピン（ＨＭＧ）及び天然由来のヒト絨
毛膜ゴナドトロピン（ＨＣＧ）が、オルガノンインター
ナショナル（Ｏｒｇａｎｏｎ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ，　ｂｖ　ｏｆ　Ｏｓｓ，　ＮＬ）から、それぞれ
、「ヒュメゴン　（Ｈｕｍｅｇｏｎ）」及び「プレグニ
ール　（Ｐｒｅｇｎｙｌ）」という商品名で、凍結乾燥
品として入手可能である。妊娠馬ゴナドトロピンも、同
社から凍結乾燥された形で入手可能である。

【０００３】増容剤（例えば、マニトール）が凍結乾燥
の前にこれらの調製品に添加されている。これらの調製
品は、適切な貯蔵期間を確実にするために安定化剤の添
加を必要とするわけではない。明らかに、精製過程の後
に残存する天然の不純物が凍結乾燥状態の調製品の安定
化に働いている。

【０００４】しかし、近年の、より効率的な製造及び精
製技術により得られる極めて純度の高いゴナドトロピン
の調製品は安定性が不十分である。それらは、比較的短
期間で分解し、活性を失う。この分解を防いだり遅らせ
たりするために調製品を凍結乾燥する試みがなされた。 しかし、凍結乾燥は部分的にしか成功していない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】使用前に、製造、輸送
及び保管される製品として十分に長期間安定である、ゴ
ナドトロピンを含有する医薬用調製品が必要である。特
に、１種を超えるゴナドトロピンを含有する安定な調製
品が必要である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、一般的には、
ジカルボン酸塩安定化剤を含む、ゴナドトロピン含有凍
結乾燥タンパク調製品に関する。ここでの「ジカルボン
酸」は、２個以上のカルボン酸基を有する有機酸（例え
ば、　ＨＯＯＣ−Ｒ−ＣＯＯＨ）を意味する。ゴナドト
ロピンは凍結乾燥系において特有の安定化剤と混合され
、少なくとも部分的にはその安定化剤で安定化される。 前記調製品は、所望の時間、所望の温度で、凍結乾燥状
態であるゴナドトロピンを安定化するのに十分な量のジ
カルボン酸塩を含有する。

【０００７】代表的なジカルボン酸塩は、クエン酸、酒
石酸、アスパラギン酸及びこれらの酸の混合物の塩であ
る。ゴナドトロピン及びゴナドトロピン誘導体（以下、
「ゴナドトロピン」と略す。）は、一般的には、卵胞刺
激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）
、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、又は、黄体形
成ホルモン（ＬＨ）のようなタンパク質である。前記調
製品にはショ糖やトレハロースのような非還元性糖をさ
らに含ませることができる。

【０００８】本発明は、また、前記ゴナドトロピンを、
溶液中で、前記タンパク質を凍結乾燥状態で安定化する
のに十分な量のジカルボン酸塩と混合し、その後、得ら
れた溶液を凍結乾燥し、前記ゴナドトロピンの安定化さ
れた凍結乾燥品を調製することから成る、本質的に純粋
な、凍結乾燥された状態のゴナドトロピンを安定化する
方法を含む。

【０００９】本発明は、さらに、凍結乾燥品から再構成
された注射可能調製品を含む。前記注射可能調製品は、
本質的に、注射用水、ゴナドトロピン、非還元性糖、非
吸着剤、及びジカルボン酸塩の水溶液からなる。

【００１０】Ａ．ゴナドトロピン 好ましいゴナドトロピンは、他のタンパク成分を含んで
いるか又は含んでいない、ＦＳＨ、ＴＳＨ、ＨＣＧ、Ｌ
Ｈ、及び、それらの誘導体及び混合物である。卵胞刺激
ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、ヒト絨毛膜ホルモン及
び黄体形成ホルモンは、全て、α及びβサブユニットか
らなる、化学的に関連したタンパク質である。これらの
タンパク質のαサブユニットは同一であるか、又は、類
似している。

【００１１】卵胞刺激ホルモンは、正常な生殖機能に必
要な、下垂体前葉のホルモン糖タンパク質である。卵胞
刺激ホルモンは、体外授精のために濾胞細胞の発達を刺
激するのに用いられており、また、臨床的に、慢性無排
卵症又は黄体機能不全症の、無排卵の女性において卵胞
の成熟を刺激するためにも用いられている。卵胞刺激ホ
ルモンは、ヒト尿のような天然の材料から、少なくとも
部分的に単離できる。組み換え卵胞刺激ホルモン及び／
又はＬＨを、キーン（Ｋｅｅｎｅ）　ら著“Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　Ａｃｔ
ｉｖｅ　Ｈｕｍａｎ　Ｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎ　ｉｎ　
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈａｍｓｔｅｒ　Ｏｖａｒｙ　Ｃｅｌ
ｌｓ ，　”　Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２６４　巻，　４７
６９−４７７５　頁（１９８９年３月２５日）により説
明されるように調製してもよい。ここで用いるゴナドト
ロピン（例えば、卵胞刺激ゴナドトロピン（ＦＳＨ））
とは、その化合物のアナログ、及び、組み換えの、天然
の、脱糖された、糖鎖付加されていない、変化した糖鎖
を付加された、及び、他の形のゴナドトロピンを含む。

【００１２】最も好ましいゴナドトロピンは、単独の、
又は、ＬＨ又はＨＣＧを含む凍結乾燥品中の、組み換え
ＤＮＡ技術で作られたＦＳＨ（ｒＦＳＨ）である。天然
の材料から精製されたＦＳＨは、一般に部分精製しかさ
れない。不純物は、ある程度、安定化に働くようである
。しかし、ｒＦＳＨの場合には、不純物が含まれないの
で、ＦＳＨは速やかな分解及び凍結乾燥時の損失を受け
やすい。ＦＳＨの用量は、凍結乾燥品のアンプル当たり
６０〜１５００、特に、７５〜２２５ＩＵである。

【００１３】用いられるゴナドトロピンはどれでも、凍
結乾燥標品中に、特定量の水溶液（例えば、注射用蒸留
水又は滅菌した通常の生理食塩水）で、一般には非経口
（例えば、皮下注射又は静脈注射による）投与のために
希釈して用途にあった用量の調製品を得た後に、医薬的
に使用可能なタンパク質濃度になるのに十分な量で存在
することが好ましい。ここでの水溶液とは、主たる溶媒
として、それのみである必要はないが、水を含む溶液で
ある。例えば、ＦＳＨを含む容器は１〜１０００マイク
ログラム（μｇ）のＦＳＨ（例えば、７５国際単位が医
薬的な量とみなされる。）を含んでもよい。存在するタ
ンパク質の量が増すほど、一般に調製品の安定性がよく
なるので、可能な限り最も多い妥当な量のタンパク質を
容器中に存在させることが好ましい。ゴナドトロピンの
有効な用量は医療従事者に知られており、一服に含まれ
る量は、一般に、病状及び個々の治療される患者に依存
する。

【００１４】例えば、１０，０００国際単位ぐらいの多
量の、及び、１５国際単位ぐらいの少量のＨＣＧが投与
される。 ２０〜２２５　国際単位のＬＨの注射が用いられる。

【００１５】一つの好ましい実施態様としては、ＦＳＨ
及びＬＨ、又は、ＦＳＨ及びＨＣＧの組み合わせで、共
に凍結乾燥され、選択された両ゴナドトロピンの治療学
的な量を含む調製品が作られる。

【００１６】Ｂ．安定化剤 ここで用いる「安定化する」は相対的な用語である。安
定化剤又は安定化化合物で安定化するということは、前
記安定化剤でタンパク質の活性の減少を防ぐか、又は、
遅らせることができることを意味する。例えば、安定化
化合物（安定化剤）の添加により、安定化剤を含まない
調製品と比較して、規定の温度で分解して、生体内又は
試験管内での活性の一部を失うのにより長い時間（例え
ば、１週間が２週間になる）がかかる場合、「安定化さ
れた」と考える。

【００１７】タンパク質の活性は、個々のタンパク質に
関する公知の方法で測定できる。時間内に生成する（不
活性）オリゴマーの量を測定することは活性の一測定で
ある。試料中に生成したオリゴマーはＨＰＳＥＣで測定
できる。

【００１８】ｒＦＳＨの残存活性を測定する他の方法に
は、例えば、シュアース（Ｓｃｈｕｕｒｓ）らの米国再
発行特許明細書第３２，６９６号に記載される酵素免疫
定量法（ＥＩＡ）（ＦＳＨ用のキットが、ｂｉｏＭｅｒ
ｉｅｕｘ　ｏｆ　Ｍａｒｃｙ　　ｌ′Ｅｔｏｉｌｅ　６
９２６０　Ｃｈａｒｂｏｎｎｉｅｒｅｓ−ｌｅｓ−Ｂａ
ｉｎｓ，　Ｆｒａｎｃｅから商品名“ＦＳＨＥＩＡ”と
して入手可能である。）、及び、マンナールト（Ｍａｎ
ｎａｅｒｔｓ）　ら著“Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏ
ｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｂｉｏａｓｓａｙｓ　ｆｏｒ　
Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎｓ，　”　Ｎｅｕｒｏｅｎｄ
ｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ，　　４９〜５８頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　ｂｖ，　Ａｍｓｔｅｒｄ
ａｍ，　ＮＬ　１９８７）に記載の、ＦＳＨとＬＨの両
者の試験管内バイオアッセイがある。

【００１９】調製品に使用するのに好ましい安定化剤は
、クエン酸、酒石酸、アスパラギン酸及びそれらの混合
物のようなジカルボン酸の塩である。好ましい塩は、こ
のようなジカルボン酸の、ナトリウム、カリウム、リチ
ウム及びアンモニウム塩であり、ナトリウム及びカリウ
ム塩が特に好ましい。他のジカルボン酸塩はグルタミン
酸ナトリウムである。ジカルボン酸塩安定化剤の存在は
、酵素混合物の安定化、特に比較的高温で長期間の安定
化に働く。

【００２０】アスパラギン酸塩とグルタミン酸塩を、安
定化剤として用いた場合、クエン酸、イソクエン酸又は
酒石酸の塩の場合よりも、良好な活性回収率が得られる
。

【００２１】クエン酸塩を安定化剤として選択した場合
、クエン酸のゴナドトロピンに対する比は２００〜４０
０（ｍｇ／ｍｇ）が好ましく、多少の糖の存在下で最も
良好な安定化と回収率が得られる。クエン酸ナトリウム
と共に用いるのに特に好ましいタンパク質は、その安定
化剤で安定化をされ得るので、ｒＦＳＨである。

【００２２】０．０５０　を超えるイオン強度を有する
溶液を作るのに十分な濃度のジカルボン酸塩安定化剤が
、　０．１〜１０００μｇのＦＳＨを含有するＦＳＨ組
成物では好ましい。例えば、６０℃に１ヶ月間保ったと
きに７５％の回収率が得られるように、ｒＦＳＨを一般
的に安定化する、イオン強度が　０．２５０〜０．３５
０　の溶液が特に好ましい。イオン強度の計算は当業者
によく知られている。例えば、チェイス（Ｃｈａｓｅ）
　ら著　Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，　２２３〜２２４，　
２２８，　及び　２３３頁（第１６版　１９８０，　Ｍ
ａｃｋ　Ｐｕｂｌ．　Ｃｏ．　ｏｆ　Ｅａｓｔｏｎ，　
ＰＡ，　Ｕ．Ｓ．Ａ．　）を参照。

【００２３】２．５〜１７．５ｍｇ／ｍｌの、溶液中の
クエン酸ナトリウムの濃度は、一般に、ここで記載した
量のｒＦＳＨを安定化するのに十分なものである。

【００２４】また、図２に示したように、例えば、クエ
ン酸ナトリウムは、よりよい安定性を得るためには、Ｈ
ＣＧとの組成物中に、重量で、ＨＣＧの１０，０００倍
量以下で存在させるべきである。

【００２５】Ｃ．非還元性糖 凍結乾燥される組成物は、ショ糖及びトレハロースのよ
うな非還元性糖を含んでいることが好ましい。このよう
な糖（例えば、ショ糖）の混入は、溶液の凍結乾燥が起
こる「陥没（ｃｏｌｌａｐｓｅ）（又は収縮（ｓｈｒｉ
ｎｋａｇｅ）　）温度」を高くするのに働く。この温度
上昇により、完全に凍結乾燥する過程が簡単になる。こ
の用途に特に好ましい非還元性糖は、無定形状態のショ
糖である。

【００２６】凍結乾燥する溶液中に存在する非還元性糖
の量は、一般的には、存在するジカルボン酸塩安定化剤
の量に依存する。例えば、非還元性糖のジカルボン酸塩
に対する重量比は、ショ糖とクエン酸ナトリウムの場合
、一般的には５０：１から１０：３であり、好ましくは
約３．３：１である。物理的な特性の点で最良の凍結乾
燥品を生じる、５０ｍｇ／ｍｌのショ糖と１４．７ｍｇ
／ｍｌのクエン酸ナトリウムを含む溶液が特に好ましい
。

【００２７】現在の最も好ましい実施態様では、ショ糖
の量は、示差走査型熱量測定法で測定される温度で、陥
没温度を−３８℃から約−２５℃に上昇させるのに十分
である。得られる凍結乾燥「ケーキ」は無定形であり、
比較的長期間安定である。

【００２８】Ｄ．非吸着剤 組成物が入れられる容器の壁にタンパク質が吸着するこ
とにより起こり得る濃度の減少を防ぐために、非吸着剤
を凍結乾燥組成物に添加することが好ましい。特定の非
吸着剤（例えば、ポリソルベート）もまた凍結乾燥過程
中にタンパク質を保護する「クリオプロテクタント（ｃ
ｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ）　」として働く。

【００２９】好ましい非吸着剤はポリソルベート２０，
ＮＦ（Ａｔｌａｓ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ
から入手可能なＴｗｅｅｎ　２０）、ポリソルベート８
０，ＮＦ（Ａｔｌａｓ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａ
ｎｙから入手可能なＴｗｅｅｎ　８０）、ブリジ３５（
ＩＣＩ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　ｏｆ　Ｇｒ
ｅａｔ　Ｂｒｉｔａｉｎから入手可能）及びプルロニッ
クＦ１２３　（ＢＡＳＦ　ｏｆ　Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆ
ｔｅｎ，　Ｗ．　Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能）のよう
な非イオン系界面活性剤である。 ポリソルベート２０，ＮＦが特に好ましい。

【００３０】ポリソルベートは、好ましくは、“Ｔｈｅ
　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ”（１７６３
及び１９６７頁，１９９０年１月１日より公認（第２２
版，Ｕ．Ｓ．　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ　Ｃｏｎｖ
ｅｎｔｉｏｎ，　Ｉｎｃ．１９８９））として発行され
ているＵＳＰ／ＮＦ　ＸＸＩＩ　の記載に適合するポリ
ソルベートを意味すると理解されたい。

【００３１】１種又は複数種の非吸着剤は、容器の壁又
は加工中の容器の壁へのタンパク質の吸着を減少させる
ような量で存在させる。具体的には、使用される最終溶
液において、０．１〜０．２ｍｇ／ｍｌの濃度になるの
に十分な量のポリソルベート２０が好ましい。これより
高い濃度ではオリゴマーが形成され易くなり、活性が減
少する。

【００３２】Ｅ．医薬用組成物 本発明の安定な凍結乾燥品は、選択したタンパク質を、
水溶液中で、タンパク質を安定化するのに十分な量のジ
カルボン酸塩安定化剤及び陥没温度を−３８℃から−２
５℃に上昇させるのに十分な量の非還元性糖と混合する
ことで得ることができる。−３５℃より高い温度が好ま
しい。任意に、選択した非吸着剤も添加してよい。その
後、溶液を濾過し、容器（例えば、１ｍｌアンプル）に
入れ、そして、凍結乾燥し、安定化された凍結乾燥品を
作る。凍結乾燥技術は当業者によく知られている。さら
に参考のためには、ゴルドブリス（Ｇｏｌｄｂｌｉｔｈ
）ら著ＦｒｅｅｚＤｒｙｉｎｇ　ａｎｄ　Ａｄｖａｎｃ
ｅｄ　Ｆｏｏｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｉｎｃ．，　　Ｌｏｎｄｏｎ，
　ＧＢ １９７５）のような、数種の教科書を参照してもよい。 凍結乾燥ケーキ中の、好ましい残留水含量は１〜５％で
ある。全手順を通して、無菌技術が用いられるべきであ
る。凍結乾燥機はＬｅｙｂｏｌｄ　又はＥｄｗａｒｄｓ
　のような製造業者から入手可能である。このような方
法、又はその変法を用いて、数種の異なる組成物を調製
することができる。

【００３３】特に好ましい組成物は、クエン酸、酒石酸
、アスパラギン酸、及びこれらの酸の混合物からなる群
から選択されるジカルボン酸の塩である安定化剤と混合
したｒＦＳＨを含む。

【００３４】他の好ましい凍結乾燥調製品は、ジカルボ
ン酸塩安定化剤、調製品中に存在する量のジカルボン酸
塩安定化剤で安定化され得るゴナドトロピン、及びトレ
ハロースを、混合状態で含む。この調製品は、さらに、
リン酸二水素一ナトリウムを、安定化剤、タンパク質、
及び非還元性糖と混合状態で含む。このような調製品に
特に好ましい塩はアスパラギン酸ナトリウム、クエン酸
ナトリウム、及び酒石酸ナトリウムである。

【００３５】他の安定な凍結乾燥調製品は、酒石酸又は
アスパラギン酸の塩のような安定化剤、調製品中に存在
する量の安定化剤で安定化され得るゴナドトロピン、及
び非還元性糖を混合状態で含む。調製品は、さらに、リ
ン酸一水素二ナトリウムを、安定化剤、タンパク質、及
び非還元性糖と混合状態で含んでいてもよい。特に好ま
しい非還元性糖はトレハロース及びショ糖である。この
ような調製品で特に好ましい安定化剤はアスパラギン酸
ナトリウムである。

【００３６】他の極めて好ましい安定化された凍結乾燥
品は、本質的に、タンパク質、凍結乾燥状態でタンパク
質を安定化するのに十分な量のジカルボン酸塩安定化剤
、二糖の非還元性糖、前記タンパク質が凍結乾燥品を入
れる容器に吸着するのを防ぐための非吸着剤、及び５％
未満の残留水から成る。このような凍結乾燥品では、タ
ンパク質はＦＳＨであり、ジカルボン酸塩安定化剤はク
エン酸、酒石酸、及びアスパラギン酸の塩から成る群か
ら選択され、２糖の非還元性糖はショ糖とトレハロース
のどちらかであり、及び非吸着剤は、Ｔｗｅｅｎ　２０
、Ｔｗｅｅｎ　８０、ブリジ、又はプルロニック酸（ｐ
ｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）　から成る群から選択され
る。この凍結乾燥品は、とりわけ、マンニトール、マル
トース又はそれらの両方のような別の「安定化剤」の添
加が、実際には、活性の点で凍結乾燥品の非安定化に働
くということが発見されているので、特に好ましい。

【００３７】非経口用調製品及び静脈注射用混合剤の作
成方法は　Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ　　Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，　１４６３〜１４
９７頁に開示されている。しかし、安定化された組成物
は注射液と混和性であるが、注射液は好ましくは還元性
糖を含むべきではないので、注意しなくてはならない。 得られる使用溶液の好ましいｐＨは６〜８、特に、７で
あるべきである。

【００３８】本発明を、以下に示す実施例によってさら
に説明する。

【００３９】

【実施例】実施例１ Ａ．様々な二糖を用いたｒＦＳＨの安定化１５０ユニッ
トのｒＦＳＨを含む水溶液を調製した。その溶液を三つ
に分け、それぞれを（１）５０ｍｇ／ｍｌマルトース及
び１４．７ｍｇ／ｍｌクエン酸ナトリウム、（２）５０
ｍｇ／ｍｌトレハロース及び１４．７ｍｇ／ｍｌクエン
酸ナトリウム、及び（３）５０ｍｇ／ｍｌショ糖及び１
４．７ｍｇ／ｍｌクエン酸ナトリウムと混合した。三つ
の溶液すべてに０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０
，ＮＦを含有させた。３群の溶液を凍結乾燥し、えられ
た凍結乾燥品を６０℃に４週間置いた。 その後、凍結乾燥品を、ＥＩＡ法により測定される活性
について試験し、以下の結果を得た。

【００４０】 化合物　　　　　　　　　　（１）　　（２）　　（３
）活性百分率　　　　　　４０％　　８９％　　８７％
この実施例は、非還元性二糖が還元性二糖よりも安定性
の助けになることを示している。

【００４１】 Ｂ．クエン酸ナトリウムによるｒＦＳＨの安定化２種の
凍結乾燥品を作成した。第１試料は７５ユニットのｒＦ
ＳＨ、２５ｍｇの非定形ショ糖、７．３５ｍｇのクエン
酸ナトリウム、及び０．１ｍｇのポリソルベート（Ｔｗ
ｅｅｎ）　２０を含んでいる。第２試料は７５ユニット
のｒＦＳＨ、２５ｍｇの非定形ショ糖、及び０．２ｍｇ
のポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）　２０を含んでいる。 両者の試料のｐＨは７に調整した。第１試料は５０℃に
３カ月間置いた後、純水に溶解し、ＨＰＳＥＣで分析し
た。得られたプロフィールはオリゴマー形成がほとんど
ないことを示した。クエン酸ナトリウムを含まない第２
試料は５０℃に６カ月間置いた後、純水に溶解し、ＨＰ
ＳＥＣで分析した。得られたプロフィールはより多くの
オリゴマー形成を示した。

【００４２】第１試料のプロフィールは分解産物の存在
を示さなかったが、一方、第２試料のプロフィールはほ
とんどオリゴマー分解物のみであることを示した。

【００４３】実施例２〜５ 他のジカルボン酸塩安定化剤 図１に示したように、ｒＦＳＨと様々な安定化剤を含む
試料を作成し、凍結乾燥し、６０℃に１カ月間置いた後
の活性を試験した。図１は特定の安定化剤のイオン強度
（×１０００）と回収百分率（ＥＩＡで測定した。）と
の関係を示している。

【００４４】試験した安定化剤は、クエン酸ナトリウム
（単独のものが（ＩＩ）、１アンプルあたり３．０〜９
．１ｍｇのＮａ２　ＨＰＯ４　との混合物（ＩＩＩ　）
）、酒石酸ナトリウム（ＩＶ）、及びアスパラギン酸ナ
トリウム（Ｖ　）である。濃度は、イオン強度によって
、図１に示すように決定された。

【００４５】実施例６ クエン酸塩とゴナドトロピン（ＨＣＧ）の重量比の活性
に対する効果を試験した。結果を図２に示す。

【００４６】実施例７ ７５ＩＵのｒＦＳＨ、１４．７ｍｇのクエン酸ナトリウ
ム、５０ｍｇのショ糖、及び０．２ｍｇのポリソルベー
ト２０を含む組み換えヒトＦＳＨの凍結乾燥組成物を調
製した。１ｍｌの注射用水で溶解して調製品を得た。

【００４７】実施例８ ７５ＩＵのｒＦＳＨ、７５ＩＵのＬＨ、１５ｍｇのクエ
ン酸ナトリウム、５０ｍｇのショ糖、及び０．２ｍｇの
ポリソルベート２０を含む組み換えヒトＦＳＨの凍結乾
燥組成物を調製した。組成物は安定であった。１ｍｌの
注射用水で溶解して調製品を得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】種々の安定化剤を用いたときの、イオン強度（
×１０００）と６０℃に１ヶ月間置いた後の、組み換え
ＦＳＨの活性の回収率との関係を示したグラフである。

【図２】クエン酸とタンパク質の比（重量／重量）の、
ＨＣＧの回収率に対する効果を示したグラフである。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　安定化されたゴナドトロピンを含有す
   る凍結乾燥品であって、ジカルボン酸塩安定化剤を、前
   記凍結乾燥品中に存在する量の安定化剤により安定化さ
   れ得るゴナドトロピンと混合した状態で含有する前記凍
   結乾燥品。
2. 【請求項２】　　重量で前記ジカルボン酸塩安定化剤の
   ３〜５０倍量の非還元性糖をさらに含有する、請求項１
   に記載の安定化されたゴナドトロピンを含有する凍結乾
   燥品。
3. 【請求項３】　　非イオン系界面活性剤をさらに含有す
   る、請求項１に記載の安定化されたゴナドトロピン含有
   する凍結乾燥品。
4. 【請求項４】　　前記ゴナドトロピンが、黄体形成ホル
   モン、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、
   及び、それらの混合物からなる群より選択される、請求
   項３に記載の安定な凍結乾燥品。
5. 【請求項５】　　前記ジカルボン酸塩安定化剤が、クエ
   ン酸塩、酒石酸塩、又は、アスパラギン酸塩である、請
   求項４に記載の安定なゴナドトロピンを含有する凍結乾
   燥品。
6. 【請求項６】　　前記非還元性糖を、重量で前記ジカル
   ボン酸塩安定化剤の３倍量含有する、請求項２に記載の
   安定なゴナドトロピンを含有する凍結乾燥品。
7. 【請求項７】　　前記ジカルボン酸塩安定化剤で安定化
   され得る第２のゴナドトロピンを含有する、請求項６に
   記載の安定なゴナドトロピンを含有する凍結乾燥品。
8. 【請求項８】　　１重量部のゴナドトロピン及び前記ゴ
   ナドトロピンに会合した２００　〜１０，０００重量部
   のジカルボン酸塩安定化剤を含有する、安定化されたゴ
   ナドトロピンを含有する凍結乾燥品。
9. 【請求項９】　　水溶液中で、少なくとも１種のゴナド
   トロピンを、前記水溶液のイオン強度が　０．０５０〜
   ０．３５０　となるような量のジカルボン酸塩と混合し
   、前記混合液中に、重量で前記ジカルボン酸塩の約３〜
   ５０倍の量の非還元性糖を溶解し、その混合液を−３５
   ℃を超える温度で凍結乾燥して、安定化されたゴナドト
   ロピン凍結乾燥品を調製することから成る、安定化され
   たゴナドトロピン凍結乾燥品を調製する方法。