JPH0421496B2 - - Google Patents

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JPH0421496B2
JPH0421496B2 JP60299622A JP29962285A JPH0421496B2 JP H0421496 B2 JPH0421496 B2 JP H0421496B2 JP 60299622 A JP60299622 A JP 60299622A JP 29962285 A JP29962285 A JP 29962285A JP H0421496 B2 JPH0421496 B2 JP H0421496B2
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    • Y10S602/90—Method of making bandage structure

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、組織の修復に有用な物質および創傷
の治療に関連した物質の分野に関する。さらに詳
しくは、本発明は、新規方法により製造されたコ
ラーゲン膜状物質に関し、該膜は、生体適合性を
有し、非炎症性であり、かつ、人工移植物として
組織の修復に有用である。
発明の背景 皮膚、血管、靭帯または他の結合組織の代替物
として用いることのできる人工膜を得るために数
多くの試みがなされている。通常、コラーゲンは
結合組織の主成分であるので、これらの膜の多く
にはコラーゲンが用いられている。コラーゲンの
み（例えば、米国特許第4412947号；日本国特許
74／039174号；および米国特許第4242291号参照）
または他の物質と組み合わたコラーゲン（例え
ば、米国特許第4453939号参照）のいずれかから
なるこのような膜の製造法に関する文献が多数存
在する。他の膜は、グリコプロテインのような物
質とフイブリノーゲンおよびトロンビンの組み合
せ（ヨーロツパ特許出願公開第92200号）および
ケラチン由来ポリマーおよびグルコサミノグリカ
ンポリマーの組み合せ（ヨーロツパ特許出願公開
第89152号）を用いている。
得られた膜の、意図する特定の適用および生体
適合性安定性および周囲組織との同化のような物
理的特性に関する特性および品質は物質の性質、
例えば膜を形成するために用いたコラーゲンの性
質およびその形成に用いた方法によつて決定され
る。
従来の膜は、角膜代替物、人工皮膚および創傷
治療を含む意図する用途にある程度の成功をおさ
めた。しかし、多くのものが炎症の原因となり、
柔軟性、生物学的安定性および強度の点で最適特
性より劣つている。
本発明は、生成物の物理的特性中に柔軟性を付
与する一連の方法により膜状物質に形成される非
免疫原性コラーゲンを使用することにより、得ら
れた膜中に所望する特性を与え、これらの特性を
意図する用途に適合させる方法を提供する。該膜
状物質は、管状容器、３次元の移植物または１次
元の繊維に成形できる膜を含む２次元膜として用
いることができる。
発明の開示 本発明は、コラーゲン膜の物理的特性が、血管
修復、潰瘍修復、管腔表面の再構成、腱修復およ
び人工皮膚を含む種々の医学的適用に用いるため
に適するように調製されたコラーゲン膜を提供す
るものである。該膜は、また、in vitroにおい
て、所望の細胞培養の生産に基質として用いるこ
ともできる。該膜の特性は、一連の製造方法から
の適当な選択により決定され、選択した用途に適
した特性が獲得される。同様の柔軟性は、該膜製
造法の修正または追加によつて製造される１次元
および３次元の構造物の特性においても獲得でき
る。得られた繊維は、腱または靭帯の代替物質と
して有用であり、組織の修復または傷口の填塞に
使用するための縫合、移植物を与える３次元ブロ
ツクまたは固形物としても使用できる。
すなわち、一つの態様において、本発明は、所
望により、アテロペプチドコラーゲンの溶液と架
橋コラーゲンの懸濁液を混合して概溶液からゲル
を得、該ゲルを膜形態に変換する一般的方法によ
つて製造されるコラーゲン膜状物質に関する。他
の態様において、本発明は、該ゲルから製造され
た繊維または固体に関する。
さらに別の態様において、本発明は、一般的方
法それ自体および所望の特性の２次元膜、繊維お
よび固体を得るためのこの一般的方法に関連した
範囲内で用いられる特定の方法に関する。
ゲルは、３つの別の方法によつて、可溶化コラ
ーゲンまたは混合物から得ることができる。１つ
の方法において、コラーゲンの溶液は、PHを上昇
させることによつてコラーゲンを不溶化させる沈
澱化緩衝液で処理する。この方法において、コラ
ーゲンおよび緩衝液は、共にほヾ凍結するまで予
め冷却し、混合し、ついで、およそ室温まで昇温
させてゲルを形成される。第２の方法において、
コラーゲンおよび緩衝液の前記混合物を、重力圧
を用いずに昇温させる代りに、遠心分離し、遠心
分離からの上清を回収し、およそ室温まで昇温さ
せる。第３の方法において、コラーゲンの溶液
は、室温にて不溶化溶液で処理する。該不溶化溶
液は、得られた混合物が生理的PHおよびイオン強
度になるように調製されている。ついで、この混
合物を約37℃でインキユベートし、ゲルを形成さ
せる。第３の方法は修正して、混合後直ちに混合
物を脱気し、インキユベートする前に脱気した混
合物を成形することができる。前記３つの場合の
それぞれにおける方法は、また、溶解コラーゲン
のほかに架橋形態の懸濁液を含むゲルの形成に適
用できる。この追加の架橋基質の存在は、最終的
に本発明の方法から得られる膜物質の特性にさら
に変化を与える。
出発物質中に架橋コラーゲンを含有させるため
の前記ゲル形成方法は、可溶化コラーゲンのみか
らのゲルの形成、ついで該ゲルからの膜形成後の
該膜の部分的架橋または架橋は、より脆性化し、
不満足な製品を生じると考えられるという意味に
おいて臨界的であると考えられる。また、可溶化
コラーゲンからのゲル形成方法を、後記の架橋物
質を添加することにより修正する場合、前記の第
３の方法、すなわち、コラーゲンの溶液（混合物
中に所望の架橋物質を含有する）を室温で、混合
物が生理的PHおよびイオン強度となるように調製
した不溶化溶液で処理する方法が好ましい。該混
合物を約37℃でインキユベートしてゲルを形成さ
せる。特に好ましい具体例において、該混合物
は、不溶化溶液を加える前に脱気を行なう。
該ゲルの膜への変換は、ゲルを定圧下で圧縮
し、マツトを形成させ、ついで乾燥させる。この
方法を用いる場合、２次元膜が得られるほかに、
脱気を用いるゲル形成方法の修正から得られた成
形したゲルを圧縮することによつて固体移植物を
直接調製することができる。繊維生成物は、ゲル
から形成された円柱の周囲に圧力を加えると得ら
れる。
図面の説明 第１図および第２図は、調製した膜Ｇ−２およ
びＧ−３の30000倍の電子顕微鏡写真である。
発明の実施態様 Ａ CISの調製 本発明の方法は、溶液状コラーゲンのみまた
は架橋繊維性コラーゲンとの混合物のいずれか
とともに開始する。コラーゲンは哺乳類結合組
織から可溶化し、精製でき、ウシの皮膚、ブタ
の皮膚および哺乳類の骨ならびに多くの他の源
から調製される。精製方法は公知である。例え
ば、米国特許第3949073号、同第4066083号およ
び英国特許公開第1565340号参照。コラーゲン
は、公知の方法と同様にして、繊維を酸で分解
することによつて本発明に有用な濃度に容易に
可溶化でき、１〜４のPHで溶解する。実際に
は、溶液状コラーゲン（CIS）は、カリホルニ
ア州、パロ・アルト、コラーゲン・コーポレー
シヨン（Collagen Corporation，Palo Alto，
Colifornia）からチゲン（Zygen）の商標のも
とに都合よく市販されているものを入手でき
る。
天然コラーゲンは、ペプチド鎖の三重らせん
構造からなる繊維形態で存在する。らせん構造
は、２つのアミノ酸、通常、アミノ酸配列中の
プロリンおよびヒドロキシプロリンと結合した
グリシンから構成された三重配列の繰り返しに
よつて生じる。この三重繰り返し単位の領域が
三重らせん構造中に集積している。さらに、全
コラーゲン鎖は、各末端に三重グリシン配列を
有さず、したがつて、らせん状でない領域を含
んでいる。これらの領域は、大部分のコラーゲ
ン調製物に関連する免疫原性の原因であると考
えられ、テロペプチドと称されている。コラー
ゲン調製物の免疫原性は、主に、これらのテロ
ペプチドの除去によつて緩和でき、「アテロペ
プチドコラーゲン」が生じる。テロペプチドの
除去は、トリプシンまたはペプシンなどのタン
パク分解酵素で消化することによつて行なわれ
る。非らせん状テロペプチド領域は、また、架
橋を形成する必要があり、この架橋が天然物質
中の繊維状構造の安定性の原因になつている。
この特性の付与を所望する場合は、アテロペプ
チドコラーゲンは人工的に架橋しなければなら
ない。
本発明の方法の出発物質である溶液状コラー
ゲンは、アテロペプチドコラーゲンであり、好
ましくは、チゲンCISのような希薄市販製品で
ある。１〜10mg／mlの範囲のコラーゲン濃度
が、本発明の使用に適している。当然、この範
囲は適切な濃度を示唆するが、絶対的な限定を
意味するものではなく、より上の制限およびよ
り下の制限も本発明の範囲内であれば任意であ
る。
Ｂ 架橋コラーゲンの調製 本明細書で用いる場合、「架橋コラーゲン」
は、化学的処理または放射線処理によつて、ま
たは、22℃および5000sec-1の剪断速度で測定
した場合、調製物の粘度が700〜3000センチポ
イズである十分な架橋を得るための他の適当な
手段によつて人工的に架橋し精製した再構成ア
テロペプチドコラーゲンを示す。なお、前記限
定は任意であり、有用な範囲の実例である。
架橋形態を調製するために、可溶化コラーゲ
ンを、まず、室温で中和して沈澱させるか、ま
たは、チデルム（Zyderm）コラーゲン移植物
のような沈澱または再構成したコラーゲンの調
製物を用い、ついでホルムアルデヒド、グルタ
ルアルデヒド、グリオキサールなどのような化
学的架橋試剤に対する反応性またはガンマー線
のようなイオン化放射線に対する反応性を含む
標準的方法を用いて架橋する。加熱およびUV
照射も使用できるが、あまり有効ではない。つ
いで、架橋物質を遠心分離して集め、例えば、
生理食塩水のような適当な水溶液で洗浄し、濃
縮して１〜10mg／mlの操作可能な懸濁液濃度に
調製する。
さらに詳しくは、架橋剤とは、該架橋剤と非
毒性、かつ、水溶性付加物を形成する薬剤でク
エンチする前に、共有結合的に架橋した粘性コ
ラーゲンを生産する濃度で用いられる多官能
性、および、さらに一般的には二官能性化合物
である。反応の間の懸濁液中のコラーゲンの濃
度、架橋剤の濃度および架橋反応の継続時間は
重要であるが、架橋剤の性質に依存する。コラ
ーゲン濃度は、典型的には0.1〜10mg／ml、さ
らに一般的には１〜５mg／mlの範囲である。ア
ルデヒド類は架橋剤として好ましくは、適当な
アルデヒド類には、ホルムアルデヒド、グルタ
ルアルデヒド、酸アルデヒド、グリオキサール
ピルビツクアルデヒドおよびアルデヒドスター
チが含まれるが、好ましくはグルタルアルデヒ
ドである。アミン類はクエンチ剤として好まし
く、特に、グリシンが好ましい。グルタルアル
デヒドを架橋剤として選択した場合、その濃度
は、典型的には重量／容量で約0.001％〜0.05
％であり、架橋反応は約0.5時間〜１週間にわ
たつて進行する。反応は、クエンチ剤を加える
前に少なくとも化学量論の比率で架橋剤ととも
に実施するが、過剰に用いて実施するのが好ま
しい。１つの典型的架橋実験方法としては、コ
ラーゲン濃度３mg／mlおよびグルタルアルデヒ
ド0.01重量％で、22℃で16時間が挙げられる。
架橋生成物を洗浄して未反応架橋剤、架橋剤に
より生成したポリマーおよびクエンチした場合
は未反応クエンチ剤を除去する。使用できる緩
衝液は、PH約７のリン酸ナトリウム／塩化ナト
リウム緩衝液である。
洗浄生成物は、過または遠心分離によつ
て、典型的には約20〜50mg／ml、好ましくは約
25〜40mg／mlの適当なタンパク濃度範囲に濃縮
できる。洗浄生成物は、アルデヒド含量約
20ppm以下、かつ、定常流でなく動的粘度を測
定する振動盤粘度計（ナメーター・カンパニー
（Nametre Company）、モデル7.006PBD）で
測定して22℃において約700〜3000CPの範囲の
粘度でなければならない。
Ｃ ゲルの形成 コラーゲン膜または関連する膜状物質を形成
する本発明の方法は、基本的には、溶液状コラ
ーゲンからのゲルの形成および該ゲルの膜また
は他の所望する形態への変換の２つの工程から
なる。これらの各工程は、ある範囲の温度、重
力およびイオン強度条件で実施でき、中間体溶
液は脱気してもよく、しなくてもよく、したが
つて、得られた生成物は異なる特性を有する。
ゲル形成を実施する温度は約４℃〜約37℃であ
つてよく、イオン強度は約0.05〜およそ生理的
イオン強度の間で変更でき、重力場条件は１×
ｇ〜約13000×ｇの間で変更できる。以下に示
す典型的方法はこれらの変更の代表例を表わし
ており、中間の場合も、また、有用であり、所
望する膜の性質に依存している。ゲルの形成前
に脱気および形成をすることにより、さらに処
理して繊維、膜または固体に形成できるより強
靭な生成物が生じるものと考えられる。
前記で概略を示したように３つの一般的方法
を用いることができる。第一に、CISを冷却
し、生理的イオン強度より十分小さいイオン強
度、好ましくは、約0.05のイオン強度で、予め
冷却した緩衝液と混合し、該混合物を低温でイ
ンキユベートする。第二に、該CISを生理的イ
オン強度および温度条件で緩衝液と混合し、生
理的温度でインキユベートする。第三の方法に
おいて、該CISは、室温でインキユベートする
前に重力的圧力に付す以外第一の方法と同様に
緩衝液で処理する。
ゲルは、所望により、可溶化コラーゲンから
調製された前記架橋コラーゲン物質を任意量含
有してもよい。架橋および非架橋コラーゲン物
質の相対的な量ならびにゲルおよび膜形成段階
の条件は、得られる膜の特性を決定すると考え
られる。ゲルの形成および膜への変換には、架
橋物質がもとの組成物中に含有されていてもい
なくても、同様の任意の装置が使用される。
ゲルの形成において、架橋繊維性コラーゲン
を含有する最終膜状製品のための中間体物質の
場合、ゲル化方法は、溶液状コラーゲンのほか
に前記の懸濁液濃度で架橋形態を含有する懸濁
液の一部を可溶化コラーゲンと混合する以外前
記と同様に実施される。それぞれに含有される
コラーゲンの相対的重量に基づく２成分の比率
は、所望する最終生成物の性質に依存し相当広
範囲にわたる。より柔軟でよりしなやかな組成
物を得るためには、溶液状コラーゲンの比率の
より高いものが用いられ、より強靭な最終生成
物の膜を得るためには、架橋形態濃度のより高
いものが用いられる。例えば、膜最終生成物
が、人工の腱として縫合を保持するために用い
られるか、または、管を形成してそのような縫
合による結合を行なうために用いられる場合、
約40〜80％の架橋コラーゲン比率、好ましく
は、約50％が好ましい。
ゲル形成のためのもとの混合物が、架橋コラ
ーゲンの懸濁液と溶液状コラーゲンをともに含
有している場合、形成された全ての膜の組成
は、全コラーゲン含量に対する架橋コラーゲン
の重量％で表わす。したがつて、膜が架橋コラ
ーゲンを10％含有すると記載されている場合、
もとの成分は、架橋コラーゲン懸濁液をコラー
ゲンの全重量の10％含有し、90％は可溶性溶液
状コラーゲンとして含有するようにして供給す
る。本発明の組成物は、90％までの架橋コラー
ゲンを含有できる。
Ｄ 膜への変換 ゲルから膜への変換は、該ゲルを圧縮して液
体を絞り出し、より密着した「マツト」を形成
し、ついで、およそ大気圧、例えば、空気中で
乾燥させることにより達成できる。
得られる膜の特性は、柔軟、透明かつ滑かで
あり、相対的に高引張り強度のフイルム状物質
を形成する。
該膜は直径約70〜300nｍ、長さ約0.5〜5μの
繊維からなるランダムな繊維性網状組織として
特徴付けることができる。
架橋コーラゲンの含有は生成物を強靭にする
以外これらの特性を変化させない。架橋物質は
前記の繊維性網状組織に取り込まれている。
圧縮方法では、例えば、豆腐を得るために現
在用いられている装置などの通常のピストン型
装置で圧搾される。圧縮は、コラーゲンゲルが
調製される媒体中でコラーゲンゲルを用いるこ
とによつておよそ室温で行なわれる。圧縮は、
1.1〜３気圧を用いて行なわれ、体積がもとの
ゲルの約５％以下になるまで継続する。つい
で、得られた平らなコラーゲン繊維マツトは、
低温（約37℃以下）で空気中または他の適当な
雰囲気中で乾燥させて所望する膜を得る。さら
に、膜から残存する塩を洗い流すのが望まし
い。洗浄は、水洗によつて達成でき、再度、大
気圧下において低温で乾燥させる。
得られる膜状物質中のコラーゲンの架橋は任
意であるが、該膜状物質をグルタルアルデヒド
で処理することにより架橋を行ない、所望の架
橋物を得ることができる。しかし、前記のよう
に、この方法はより脆性化した生成物を生産す
る原因となる。この架橋方法は公知である。要
約すると、典型的な方法において、該物質は、
0.05〜１％のグルタルアルデヒドを含有する溶
液で１〜16時間処理し、ついでグリシン濃度が
約0.1〜0.4Mになるまでグリシン溶液を加えて
クエンチする。ついで洗浄して該架橋溶液を除
去する。
Ｅ 用途 得られた物質は、例えば、火傷皮膚代替、腱
再構成または傷修復のような、通常、人工膜を
用いる軟組織修復構成に用いることができる。
それらは、また、種々の形に成形でき、硬組織
代替とともに用いることができる。成形膜また
は圧縮膜は、円柱にしまたは型に積み重ね、切
断することによつて骨の代替部位の移植用３次
元物に再成形することができる。該膜は、ま
た、２次元形状で用いて欠損部位、例えば、頭
蓋または歯周の窩洞に膜を連続的に埋入するこ
ともできる。一般的には、アンレー型修復は、
窩洞にこれらの膜を積み重ねることによつて行
なうことができる。
３次元移植物は、また、適当な鋳型中で圧縮
することによつてゲルから直接得ることができ
る。この構成方法においては、CISおよび沈澱
化緩衝液を含有する混合物は、圧縮前に脱気
し、鋳型に入れるのが好ましい。（脱気は、ま
た、膜および繊維にする関連する方法において
も用いることができる。）脱気し、鋳型に入れ
たコラーゲンゲルの圧縮によつて形成された密
なコラーゲン繊維網状組織を乾燥し、洗浄によ
り脱塩し、再乾燥前に再度鋳型に入れ、要すれ
ば、高温で熟成し、残りの架橋を促進する。さ
らに、繊維は、好ましくは、圧縮または砕断前
にゲルから直接形成できる。ゲルを多孔性吸着
剤に包み、所望の直径の繊維に絞り出すか圧延
する。砕断したゲルも使用できるが、この場
合、繊維は、鋳型に入れ、延伸することによつ
て形成しなければならないので、該工程は厄介
であり、所望の生成物にするのが困難である。
実施例 次に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。最初の３つの実施例は、膜形成のための圧縮
方法を併用した異なるゲル形成方法を示してい
る。以上は全てCISのみを出発物としている。実
施例４は、圧縮によつて形成するかまたは砕断お
よび沈澱回収によつて形成するかのいずれかで得
られる膜における架橋の形成を示している。実施
例５は、脱気し成形した混合物をゲル形成に用い
ることを示しており、該ゲルは３次元植物の形成
に直接用いられる。実施例６は、部分的に架橋コ
ラーゲンを含有するゲルの形成を示し、実施例７
は、このゲルの膜への変換を示している。
実施例 １ チゲン（２mg／mlウシ・アテロペプチドコラー
ゲン、塩酸中、PH１〜４）CIS90mlを４℃に冷却
し、予め冷却した02MNa2HPO4／0.09MNaOH
含有緩衝液10mlと混合する。溶液を４℃で混合
し、室温で約16〜20時間、便宜上一夜インキユベ
ートする。ついで得られたコラーゲンゲルをプレ
ス内に置き、約1.5気圧の低圧を用いて圧縮し、
平らなコラーゲン繊維網状組織にする。得られた
網状組織を室温で風乾し、水洗し、再度風乾す
る。得られたコラーゲン膜をＧ−１と称する。
実施例 ２ 室温でチゲンCIS90mlを室温の
0.2MNa2HPO4／1.3MNaCl／0.09MNaOH含有
緩衝液10mlと混合し、混合物を37℃で一夜インキ
ユベートする。得られたマトリツクスを実施例１
に示したようにして膜を変換する。得られた膜Ｇ
−２は、滑らかで柔軟な透明物質である。その繊
維構造の電子顕微鏡写真を第１図に示す。
実施例 ３ チゲンCIS90mlを４℃に冷却し、
0.2MNa2HPO4／0.09MNaOH含有冷（４℃）緩
衝液10mlと迅速に混合し、直ちに遠沈瓶に移す。
混合物を約20℃で２時間8000×ｇで遠心分離し、
上清を瓶から回収する。上清を一夜20℃でインキ
ユベートしてゲルを得る。ゲルを実施例１に示し
た方法と全く同様にして膜に変換し、Ｇ−３と称
す。その繊維構造の電子顕微鏡写真を第２図に示
す。
実施例 ４ チゲンCIS90mlを室温で0.2MNa2HPO4／
1.3MNaOH含有緩衝液10mlと混合し、混合物を
37℃で一夜インキユベートする。得られたゲルを
実施例１に示したようにして圧縮し、乾燥し、洗
浄して脱塩する。ついで洗浄した膜を20℃で水に
溶解した0.1％グルタルアルデヒドで処理して架
橋し、架橋した膜を洗浄し、低温で乾燥し、膜
XG−２を得る。
実施例 ５ 前記実施例２と同様のゲル形成方法を、脱気お
よび前ゲル混合物の成形により修正する。インキ
ユベートする前に、混合物を減圧で脱気し、鋳型
に入れる。37℃で16〜20時間インキユベートした
後、成形したゼラチンを約1.5atmで圧縮し、密
な繊維網状組織を得、37℃またはそれ以下で風乾
する。乾燥した固体を洗浄して脱塩し、再度成形
し、乾燥し、約40℃〜100℃の高温で熟成し、残
留架橋を増加させ、「予備形成Ｇ−２」と称する
生成物を得る。
実施例 ６ Ａ 架橋コラーゲンの調製 18〜20℃で溶液に0.02Mリン酸水素ニナトリ
ウムを加えてPH7.4にし、繊維を１〜２時間形
成させることによつて溶液状コラーゲン（希塩
酸水溶液中のウシアテロペプチドコラーゲンの
３mg／ml溶液、PH１〜４）から繊維性コラーゲ
ンを再構成する。得られた繊維性コラーゲン懸
濁液の160mlに、PH３で１％グルタルアルデヒ
ド水溶液1.62mlを加える。撹拌しつつ、徐々に
グルタルアルデヒド溶液を加え、グルタルアル
デヒドの最終濃度を0.01％にし、0.2Mまで3M
グリシンを加えてクエンチする前に、混合物を
室温で16時間反応させる。１時間クエンチした
後、架橋したコラーゲンを0.02Mリン酸水素二
ナトリウム、0.13MNaCl（PH7.4）含有緩衝液約
100mlで３回洗浄し、各洗浄の間に、17000×ｇ
で５〜７時間遠心分離する。コラーゲンの動的
粘度は、振動盤装置（ナメーター・カンパニー
（Nametre Company）、モデル7.006PBD）に
より約5000sec-1の剪断速度で測定し、22℃で
約700CPであることが判明した。最終の洗浄お
よび遠心分離後、コラーゲンを前記緩衝液中で
再懸濁し、タンパク濃度を約30mg／mlにする。
Ｂ ゲルの調製 前記Ａの懸濁液10mlをチゲンCIS80mlと混合
し、十分混合した成分を真空下で脱気する。脱
気した混合物へ、室温の0.2MNa2HPO4／
1.3MNaCl／0.09MNaOH含有緩衝液10mlを加
え、混合物を37℃で一夜インキユベートする。
得られたゲルは、架橋コラーゲンを55.5重量％
含有する。
実施例 ７ 実施例６のゲルをプレス内に置き、約1.5atm
の圧力を継続的に加えて圧縮し、平らなコラーゲ
ン繊維網状組織を得る。得られた網状組織を室温
で乾燥し、水洗し、再度風乾する。得られたコラ
ーゲン膜をGX−２と称する。
生成物中の架橋コラーゲンの比率の変化は、ま
た、CISに対する実施例6Aの懸濁液の比率を変化
させることによつても得られる。
【図面の簡単な説明】
第１図および第２図は本発明により得られた膜
の組織を示す図面代用電子顕微鏡写真である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ コラーゲンゲルマトリツクスを定圧で圧縮し
    て繊維網状組織を形成し、該網状組織を乾燥させ
    ることを特徴とするコラーゲン膜状物質の製造
    法。 ２ 溶液状コラーゲンからゲルマトリツクスを形
    成する前記第１項の方法。 ３ 架橋コラーゲンの懸濁液と混合した溶液状コ
    ラーゲンからゲルマトリツクスを形成し、架橋コ
    ラーゲンの比率を90重量％までにする前記第１項
    の方法。 ４ 溶液状コラーゲンを約４℃に冷却し、 該冷却溶液を予め約４℃に冷却した緩衝液で処
    理して、PH約７およびイオン強度約0.05を有する
    混合物を得、 該混合物を約20℃で約16〜20時間インキユベー
    トすることによりゲルマトリツクスを形成する前
    記第２項の方法。 ５ 溶液状コラーゲンを十分な塩／緩衝液と室温
    で混合してPH約７およびほぼ生理的イオン強度を
    有する混合物を得、 該混合物を約37℃で16〜20時間インキユベート
    することによりゲルマトリツクスを形成する前記
    第２項の方法。 ６ 溶液状コラーゲンを予め約４℃に冷却し、 該冷却した溶液状コラーゲンを予め約４℃に冷
    却した緩衝液と混合して、PH約７およびイオン強
    度約0.05を有する混合物を得、 混合後、直ちに、該混合物を約20℃で１〜２時
    間、約8000×ｇ〜13000×ｇで遠心分離して上清
    を得、 該上清を回収し、 該上清を約20℃で16〜20時間インキユベートす
    ることによりゲルマトリツクスを形成する前記第
    ２項の方法。 ７ 架橋コラーゲンの懸濁液と混合して、架橋コ
    ラーゲンの比率を90重量％までにした溶液状コラ
    ーゲンを約４℃に冷却し、 該冷却溶液を予め約４℃に冷却した緩衝液で処
    理して、PH約７およびイオン強度約0.05を有する
    混合物を得、 該混合物を約20℃で約16〜20時間インキユベー
    トすることによりゲルマトリツクスを形成する前
    記第３項の方法。 ８ 架橋コラーゲンの懸濁液と混合して、架橋コ
    ラーゲンの比率を90重量％までにした溶液状コラ
    ーゲンを十分な塩／緩衝液と室温で混合してPH約
    ７およびほぼ生理的イオン強度を有する混合物を
    得、 該混合物を約37℃で16〜20時間インキユベート
    することによりゲルマトリツクスを形成する前記
    第３項の方法。 ９ 架橋コラーゲンの懸濁液と混合して、架橋コ
    ラーゲンの比率を90重量％までにした溶液状コラ
    ーゲンを予め４℃に冷却し、 該冷却溶液を予め約４℃に冷却した緩衝液と混
    合して、PH約７およびイオン強度約0.05を有する
    混合物を得、 混合後、直ちに、該混合物を約20℃で１〜２時
    間、約8000×ｇ〜13000×ｇで遠心分離して上清
    を得、 該上清を回収し、 該上清を約20℃で16〜20時間インキユベートす
    ることによりゲルマトリツクスを形成する前記第
    ３項の方法。
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