JPH04169597A

JPH04169597A - タウリン抱合型胆汁酸の精製方法

Info

Publication number: JPH04169597A
Application number: JP2291942A
Authority: JP
Inventors: Noriyuki Kimura; 憲行木村; Kazutoshi Mikami; 三上　一利; Tomio Sekine; 関根　富男
Original assignee: Tokyo Tanabe Co Ltd
Current assignee: Tokyo Tanabe Co Ltd
Priority date: 1990-10-31
Filing date: 1990-10-31
Publication date: 1992-06-17
Anticipated expiration: 2010-05-31
Also published as: JPH0749438B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】の本発明は、血中脂質低下作用やカルシウム吸収促進作用
などの薬理作用を示すタウロウルソデオキシコール酸ナ
トリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロβ−ムリ
コール酸などを含むタウリン抱合型胆汁酸の精製方法に
関する。

詳しくは、抱合反応後のタウリン抱合型胆汁酸中の未反
応のフリー胆汁酸を除去した水溶液を、逆相系合成樹脂
またはオクタデシルシリル基を有するシリカゲル（以下
ｒＯＤｓシリカゲル」という。）を充填したカラムに通
液し、次いで有機溶媒単独又は有機溶媒と水との混合液
で溶離させることにより、高純度のタウリン抱合型胆汁
酸を得る方法である。

交末夏薮盃一般にアミノ酸と胆汁酸の抱合反応には、クロル炭酸エ
チルとトリエチルアミンを使用する方法（以下「混合酸
無水物法」という。）、Ｎ−エトキンカルボニル−２−
エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンを使用する方法（
以下ｒＥＥＤＱ法」という。）等が用いられるが、いず
れも未反応のアミノ酸や反応副産物である大量の無機塩
が反応終了液に含まれるため、これらの分離精製工程が
必要である。中でもタウリン抱合型胆汁酸は、グリシン
等地のアミノ酸を抱合した胆汁酸に比較して、極めて水
に溶解し易く有機溶媒に溶解しにくいため、これらの分
離精製を完全に行うことは容易ではなかった。

これまで、タウリン抱合型胆汁酸の精製方法としては、
日本化学雑誌、７９．６０５（１９５８）、特開昭６３
−１４６８９５号が知られているが、いずれも無水アル
コールを加え析出した結晶を濾別し、この工程を塩が析
出しなくなるまで繰り返す方法である。

Ｉが　゛　　。

従来の方法では、脱塩操作を繰り返すため操作が煩雑で
あり、から未反応タウリン及び無機塩を完全に除去する
ことは不可能であった。また、僅かに含まれるタウリン
抱合型胆汁酸の類縁不純物は目的物と物性が近似するた
め分離除去することが困難であった。

。　　　゛　　　−めの本発明者らは、これらの問題点を解決するため鋭意研究
した結果、混合酸無水物法またはＥＥＤＱ法により合成
したタウリン抱合型胆汁酸の反応終了液から有機溶媒及
び未反応の胆汁酸を除去した後の水溶液を、逆相系合成
樹脂またはＯＤＳシリカゲルを充填したカラムに通液し
、次いで有機溶媒単独又は有機溶媒と水との混合液で溶
離させることにより、未反応タウリンや無機塩ばかりで
なく類縁不純物も完全に除去でき、極めて高純度のタウ
リン抱合型胆汁酸が得られることを見いだした。

以下、本発明について詳述する。

まず、混合酸無水物法またはＥＥＤＱ法を用いて胆汁酸
とタウリンを反応させた後の未反応胆汁酸を水に不溶の
有機溶媒、例えば酢酸エチル、ｎ−へキサン、クロロホ
ルム等で除去し、その後、溶媒を留去する。ついで蒸留
水を加えて結晶に対して１０〜１００倍、好ましくは３
０〜４０倍の水溶液とする。これを結晶の２〜２０　（
Ｖ／Ｗ）倍量の逆相系合成樹脂またはＯＤＳシリカゲル
を充填したカラムに５Ｖ＝０．２〜４、好ましくは５Ｖ
＝０．４〜０．６で通液スル。ココテ、ＳＶは、樹脂ま
たはＯＤＳシリカゲル容量に対する１時間の流出量の比
率を表す。その後、樹脂またはＯＤＳシリカゲル容量の
１〜２倍の蒸留水で洗浄する。この時点で未反応タウリ
ン及び無機塩は完全に除去される。

次に有機溶媒単独又は有機溶媒と水との混合液で目的物
を溶離させる。ここでの有機溶媒は水溶性のもの、例え
ばメタノール、エタノール、アセトン等が用いられる。

例えばメタノールを用いる場合、混合液濃度は１０〜１
００％メタノールが良く、タウロウルソデオキシコール
酸ナトリウムの場合は４０〜５０％メタノールで、タウ
ロコール酸ナトリウムの場合は３０〜４０％メタノール
で溶離する方法が適している。

一方、一般に反応終了後のタウリン抱合型胆汁酸を薄層
クロマトグラフで分析すると未反応胆汁酸の他に２種類
の不純物が０．１〜０．２％検出される。これら不純物
を除去精製する場合にも、本発明の精製方法は極めて有
効である。

例えば、シリカゲル薄層板を用いた薄層クロマトグラフ
において、組成比がクロロホルム：エタノール：酢酸エ
チル：酢酸：水＝８：６：５：４：１（Ｖ：Ｖ）の展開
溶媒を用いた場合、タウリン抱合型胆汁酸のスポットの
上下部にその類縁不純物が検出される。このうち、下部
に展開される不純物は蒸留水洗浄の際に溶出し、また、
上部に展開される不純物は水−メタノール混合液による
溶出でも合成樹脂またはＯＤＳシリカゲルに吸着され溶
離しない。これにより、これらの類縁不純物が除去され
、目的物が高純度で得られることとなる。

本発明で用いられる逆相系合成樹脂またはＯＤＳシリカ
ゲルとしては、例えば商品名ＨＰ−２１、ＨＰ−２０，
５Ｐ−２０６，５Ｐ−８００（三菱化成（Ｉｆ）　、Ｘ
ＡＤ−２、ＸＡＤ　−２０００＜オルガノ■）、５ｉｌ
ｉｃａ　　Ｇｅｌ　　０ＤＳ−Ｇ　−５，５ｉｌｉｃａ
　　Ｇｅｌ　　０ＤＳ−Ｑ−３（富士ゲル販売■）が挙
げられる。

以下、本発明を実施例により説明する。

ｌｌｌ上上ルソデオキシコール酸２５ｇをジオキサン２５０−に
溶解し、トリエチルアミン１０．２１ｎ！（１，１５等
量）を加え攪拌する。混合液を１０℃まで冷却し、クロ
ル炭酸エチルを７．０ｉ（１゜１５等量）滴下する。次
いで、タウリン９．１７ｇ（１，１５等量）を１規定水
酸化ナトリウム６６−に溶解した水溶液を滴下する。１
時間攪拌後減圧蒸留して溶媒留去し、希塩酸でｐＨ６に
調整した後、酢酸エチルで未反応ウルソデオキシコール
酸を抽出する。得られた水溶液に水酸化ナトリウムを４
ｇ加え、減圧蒸留してトリエチルアミンを除去する。蒸
留後の水溶液を７５０−に希釈し、希塩酸でｐＨを中性
に戻し、逆相系合成樹脂ＨＰ−２１を２５０−充填した
ｈ　ラムニＳ　Ｖ　＝　０　、　５で３１液する。次い
で蒸留水２５０ｍ／で洗浄後、５０％メタノールエ００
０−で溶離する。得られた水溶液をスプレードライして
タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム２７．２ｇを
得た（収率：８１．９％）。

塩　　　　、０．１％以下タウリン　；０．１％以下薄層クロマトグラフィーによる純度；９９．９に以上（展開溶媒組成はクロロホルム：エタノール：酢酸エチ
ル：酢酸：水＝８：６：５：４：１）−実］Ｌガ」− コール酸３ｋｇを酢酸エチル３Ｉｌに溶解し、トリエチ
ルアミン１．１７１　（１，１５等量）を加え攪拌する
。混合液を１０’Ｃまで冷却し、クロル炭酸エチルを０
．８１ｆ　（１，１５等量）滴下する。

次いで、タウリ：／１．０５ｋｇ（１，１５等量）ヲ１
規定水酸化ナトリウム０．８１に溶解した水溶液を滴下
する。１時間攪拌後減圧蒸留して溶媒留去し、希塩酸で
ｐＨ６に調整した後、酢酸エチルで未反応コール酸を抽
出する。得られた水溶液に水酸化ナトリウムを４８０ｇ
加え、減圧蒸留してトリエチルアミンを除去する。蒸留
後の水溶液を９０１に希釈し、希塩酸でｐＨを中性に戻
し、逆相系合成樹脂ＨＰ−２０を３０１充填したカラム
に５Ｖ＝０．５で通液する。次いで蒸留水３ｏｌで洗浄
後、５ｏ％メタノール１２Ｏｆで溶離する。

得られた水溶液をスプレートライしてタウロコール酸ナ
トリウム３．２４ｋｇを得た（収率：８４１％）。

塩　　　　；０．１％以下タウリン　：０．１％以下薄層クロマトグラフィーによる純度；９９．９％以上（展開溶媒組成は実施例１と同様）１１亘１ケノデオキシコール酸２５ｇをジオキサン２５０１１１
／に溶解し、ＥＥＤＱ１６．５ｍ／（１，０５等量）を
加え攪拌する。次いで、タウリン９１７ｇ（１，１５等
量）を１規定水酸化ナトリウム６６１Ｒ１に溶解した水
溶液を滴下する。６０℃で３時間攪拌後減圧蒸留して溶
媒留去し、希塩酸でｐＨ８に調整した後、酢酸エチルで
反応副産物のキノリンを除去し、ｐＨ６で未反応ケノデ
オキシコール酸を抽出する。得られた水溶液を減圧蒸留
して溶媒を除去する。蒸留後の水溶液を７５０１ｎｌに
希釈し、希塩酸でｐＨを中性に戻し、逆相系合成樹脂Ｈ
Ｐ−２１を２５０ｍ１充填したカラムにＳＶ−〇、５で
通液する。次いで蒸留水２５０−で洗浄後、７０％メタ
ノール１０１００Ｏで溶離する。得られた水溶液をスプ
レートライしてタウロケノデオキシコール酸ナトリウム
２９．９ｇを得た（収率、９０．０％）。

塩　　　　；０．１％以下タウリン　：０．１％以下薄層クロマトグラフィーによる純度、９９．９％以上（展開溶媒組成は実施例１と同様）ＩＬ拠」工 β−ムリコール酸２５ｇをジオキサン２５〇−に溶解し
、トリエチルアミン９．８５１ｎ！（１，１５等量）を
加え攪拌する。混合液を１０℃まで冷却し、クロル炭酸
エチルを６．８１ｎｌ（１，１５等量）滴下する。次い
で、タウリン８．８５ｇ　（１゜１５等量）を１規定水
酸化ナトリウム６４ｉに溶解した水溶液を滴下する。１
時間攪拌後減圧蒸留して溶媒留去し、希塩酸でｐＨ６に
調整した後、酢酸エチルで未反応β−ムリコール酸を抽
出する。

得られた水溶液に水酸化ナトリウムを４ｇ加え、減圧蒸
留してトリエチルアミンを除去する。蒸留後の水溶液を
７５０−に希釈し、希塩酸でｐＨを中性に戻し、逆相系
合成樹脂ＨＰ−２１を２５〇−充填したカラムに５Ｖ＝
０．５で通液する。次いで蒸留水２５０−で洗浄後、４
０％メタノール１０００−で溶離する。得られた水溶液
をスプレートライしてタウロβ−ムリコール酸ナトリウ
ム２７．０ｇを得た（収率、８１．６％）。

塩　　　　：０．１％以下タウリン　：０．１％以下薄層クロマトグラフィーによる純度：９９．９％以上（展開溶媒組成は実施例１と同様）ＩＬ艶ｌヒオコール酸２５ｇをテトラヒドロフラン２５０−に溶
解し、トリエチルアミン９．８５ｍ／（１゜１５等量）
を加え攪拌する。混合液を１０°Ｃまで冷却し、クロル
炭酸エチルを６．８ｍ／（１，１５等量）滴下する。次
いで、タウリン８．８５ｇ（１，１５等量〕を１規定水
酸化ナトリウム６４−に溶解した水溶液を滴下する。１
時間攪拌後減圧蒸留して溶媒留去し、希塩酸でｐＨ６に
調整した後、酢酸エチルで未反応ヒオコール酸を抽出す
る。得られた水溶液に水酸化ナトリウムを４ｇ加え、減
圧蒸留してトリエチルアミンを除去する。

蒸留後の水溶液を７５０４に希釈し、希塩酸でｐＨを中
性に戻し、逆相系合成樹脂ＨＰ−２１を２５〇−充填し
たカラムに５Ｖ＝（１，５で通液する。

次いで蒸留水２５０ｍ／で洗浄後、５０％メタノール１
０００−で溶離する。得られた水溶液をスプレードライ
してタウロヒオコール酸ナトリウム２７．５ｇを得た（
収率：８３２π）。・塩　　　　、０．１％以下タウリン　、０１％以下薄層クロマトグラフィーによる純度、９９．９％以上（展開溶媒組成は実施例１と同様）主二二互束本発明の精製方法によれば、未反応原料や無機塩ばかり
でなく類縁不純物も完全に除去することができ、極めて
高純度のタウリン抱合型胆汁酸を得ることができる。

特許出願人　　東京田辺製薬株式会社代　理　人　　弁理士　松　山　直　行手続補正書（自
発）平成４年１月９日

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３及びＲ＾４は水素、保護
基を有してもよいα−若しくはβ−ヒドロキシ基又はケ
トン基を表す。）で表される胆汁酸を原料とし、これに
タウリンを抱合させて、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３及びＲ＾４は水素、保護
基を有してもよいα−若しくはβ−ヒドロキシ基又はケ
トン基を表し、Ｘは水素又はアルカリ金属を表す。）で
表されるタウリン抱合型胆汁酸を生成させる反応の後処
理工程において、反応終了液から有機溶媒及び未反応原
料を除去して生成する水溶液を逆相系合成樹脂またはＯ
ＤＳシリカゲルを充填したカラムに通液し、次いで有機
溶媒単独又は有機溶媒と水との混合液で溶離することを
特徴とするタウリン抱合型胆汁酸の精製方法。
（２）溶離に用いる有機溶媒が水溶性溶媒である特許請
求の範囲（１）記載のタウリン抱合型胆汁酸の精製方法
。
（３）逆相系合成樹脂またはＯＤＳシリカゲルがタウリ
ン抱合型胆汁酸に対して２〜２０倍（Ｖ／Ｗ）である特
許請求の範囲（１）記載のタウリン抱合型胆汁酸の精製
方法。