JPH04126090A - オリゴ糖の製造方法 - Google Patents
オリゴ糖の製造方法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はマルトースまたはフッ化α−Ｄ−マルトシルを
出発原料として、これにプルランの加水分解酵素である
プルラナーゼを作用させるオリゴ糖の新規な製造方法に
関するものである。
出発原料として、これにプルランの加水分解酵素である
プルラナーゼを作用させるオリゴ糖の新規な製造方法に
関するものである。
（従来の技術）
一般にオリゴ糖とは構成単位である単糖が２〜１０個連
結したものであり、単糖類やオリゴ糖よりも構成単糖数
の多い多糖類には見られない特性があることから、新素
材としての利用が期待されている。しかし、オリゴ糖は
調製が容易でないため、これを高度利用するためには、
その製造法の確立が急務となっている。
結したものであり、単糖類やオリゴ糖よりも構成単糖数
の多い多糖類には見られない特性があることから、新素
材としての利用が期待されている。しかし、オリゴ糖は
調製が容易でないため、これを高度利用するためには、
その製造法の確立が急務となっている。
下記一般式ＩＩで表される化合物もオリゴ糖の一種で１
食品添加物、医薬品、臨床試験用酵素基質などへの応用
が期待されている。
食品添加物、医薬品、臨床試験用酵素基質などへの応用
が期待されている。
（式中のｎは２以上の整数を示す）
（発明が解決しようとする課題）
このオリゴ糖は現在のところ天然には見出されていない
もので唯−言付ら（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ
ｗ、。
もので唯−言付ら（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ
ｗ、。
５２（７）、 １６５５〜１６５９． （１９８ｇ））
により報告されているに過ぎない。しかも、この報告で
もオリゴ糖は６−０−α−マルトシルシクロデキストリ
ンを合成したときの副生成物として検出されたとあるだ
けで、現在まで有力な合成法は見出されていない。
により報告されているに過ぎない。しかも、この報告で
もオリゴ糖は６−０−α−マルトシルシクロデキストリ
ンを合成したときの副生成物として検出されたとあるだ
けで、現在まで有力な合成法は見出されていない。
本発明者らは、このオリゴ糖の合成法を確立すべく鋭意
検討した結果、本発明に到達したものである。
検討した結果、本発明に到達したものである。
（課題を解決するための手段）
本発明による上記一般式ＩＩで表されるオリゴ糖の製造
は、緩衝液または有機溶媒と緩衝液との混合溶液中で、
下記一般式Ｉで表されるマルトースまたはフン化α−Ｄ
−マルトシルに、プルラナーゼを作用させることを特徴
とするものである。
は、緩衝液または有機溶媒と緩衝液との混合溶液中で、
下記一般式Ｉで表されるマルトースまたはフン化α−Ｄ
−マルトシルに、プルラナーゼを作用させることを特徴
とするものである。
一般式夏：
（ここに、Ｘはフッソ原子またはヒドロキシル基を示す
） ここで上記一般式Ｉで表される出発原料の−っであるフ
ッ化α−Ｄ−マルトシルは、マルトース（１）を出発物
質として下記の経路により合成することができる。ここ
でマルトース（ｉ）から中間体（ｉｖ）までの合成ルー
トは、Ｅ、Ｊ、Ｈｅｈｒｅらの方法（Ｊ。
） ここで上記一般式Ｉで表される出発原料の−っであるフ
ッ化α−Ｄ−マルトシルは、マルトース（１）を出発物
質として下記の経路により合成することができる。ここ
でマルトース（ｉ）から中間体（ｉｖ）までの合成ルー
トは、Ｅ、Ｊ、Ｈｅｈｒｅらの方法（Ｊ。
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ、 ２５４． Ｎｏ、１３．５９
４２ （１９７９］）に基づくものであり、中間体（Ｉ
Ｖ）がらフッ化α−Ｄ−マルトシル（ｖｌ）までの合成
ルートは、Ｖ 、 Ｖ 、 Ｖｏｚｎｉｇらの方法（Ｃ
ａｒｂｉｈｙｄｒ、 Ｒｅｓ、 １３２．３３９ ［１
９８４））によるものである、ただし、本発明で使用さ
れるフン化α−Ｄ−マルトシルは上記の方法で得られた
ものに限定されるものではない。
４２ （１９７９］）に基づくものであり、中間体（Ｉ
Ｖ）がらフッ化α−Ｄ−マルトシル（ｖｌ）までの合成
ルートは、Ｖ 、 Ｖ 、 Ｖｏｚｎｉｇらの方法（Ｃ
ａｒｂｉｈｙｄｒ、 Ｒｅｓ、 １３２．３３９ ［１
９８４））によるものである、ただし、本発明で使用さ
れるフン化α−Ｄ−マルトシルは上記の方法で得られた
ものに限定されるものではない。
ＯＨ
ＯＨ
Ａｅ
Ａｃ
Ａｃ
○Ａｃ
○Ａｃ
○Ａｃ
ＯＨＯＨ
本発明の方法で用いられる緩衝液としてはリン酸緩衝液
が最も好ましく、また有機溶媒としてはメタノールまた
はテトラヒドロフランが好適に使用される６有機溶媒と
緩衝液との混合溶液における両成分の体積比は、０７１
〜２／１が好ましい。
が最も好ましく、また有機溶媒としてはメタノールまた
はテトラヒドロフランが好適に使用される６有機溶媒と
緩衝液との混合溶液における両成分の体積比は、０７１
〜２／１が好ましい。
反応の際の出発原料の濃度は、ｌＸｌ０”〜１×１０”
ｇ／耐程度が好ましい０反応温度はプルラナーゼが活性
を示す範囲であればよく、一般には２０〜５０℃が好ま
しい。
ｇ／耐程度が好ましい０反応温度はプルラナーゼが活性
を示す範囲であればよく、一般には２０〜５０℃が好ま
しい。
なお、プルラナーゼはプルランの加水分解酵素で、 Ａ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ由来のもの等
を使用することができる。
ｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ由来のもの等
を使用することができる。
本発明のオリゴ糖の製造に際しての具体的操作は１例え
ば、出発物質を緩衝液または有機溶媒と緩衝液との混合
系中に添加した後、プルラナーゼを緩衝液に溶解したも
のを加え、所望の温度と時間撹拌後、反応液を加熱して
プルラナーゼを失活させ、反応を停止させる０反応液は
る別して酵素を除いた後、ろ液を濃縮して生成物を得る
ことができる。
ば、出発物質を緩衝液または有機溶媒と緩衝液との混合
系中に添加した後、プルラナーゼを緩衝液に溶解したも
のを加え、所望の温度と時間撹拌後、反応液を加熱して
プルラナーゼを失活させ、反応を停止させる０反応液は
る別して酵素を除いた後、ろ液を濃縮して生成物を得る
ことができる。
（実施例）
以下、本発明の具体的態様を実施例により説明するが１
本発明はこの実施例に限定されるものではない。
本発明はこの実施例に限定されるものではない。
実施例１
試験管に１００■のフッ化α−Ｄ−マルトシルを入れ、
これに０．０５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）５．６■
ｌを加えた後、０．４ｄのリン酸緩衝液に５■のプルラ
ナーゼ（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ由
来、生化学社製、ｃｒｕｄｅ）を溶解したものを添加し
て反応を開始した。
これに０．０５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）５．６■
ｌを加えた後、０．４ｄのリン酸緩衝液に５■のプルラ
ナーゼ（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ由
来、生化学社製、ｃｒｕｄｅ）を溶解したものを添加し
て反応を開始した。
反応は４５℃に設定した振どう器中で４８時間聞損うさ
せることにより行わせ１反応終了後、反応液を１０分間
加熱還流処理をしてプルラナーゼを失活させた後、反応
液中に沈殿しているプルラナーゼをろ別し、ろ液を濃縮
することにより反応生成物を得た。
せることにより行わせ１反応終了後、反応液を１０分間
加熱還流処理をしてプルラナーゼを失活させた後、反応
液中に沈殿しているプルラナーゼをろ別し、ろ液を濃縮
することにより反応生成物を得た。
つぎに反応生成物をＤ２０に溶解し、”Ｃ−ＮＭＲ測定
を行ったところ、第１図に示すスペクトルが得られた。
を行ったところ、第１図に示すスペクトルが得られた。
これから明らかなように、各ピークはα（１→４）結合
様式のピラノース環を形成する炭素（Ｃ，、Ｃ，、Ｃ，
）、およびα（１→６）結合様式のピラノース環を形成
する炭素（ｃ、’、ｃ、’、ｃ、’）に帰属することが
でき、このことから一般式ＩＩで表されるオリゴ糖の生
成が確認された。
様式のピラノース環を形成する炭素（Ｃ，、Ｃ，、Ｃ，
）、およびα（１→６）結合様式のピラノース環を形成
する炭素（ｃ、’、ｃ、’、ｃ、’）に帰属することが
でき、このことから一般式ＩＩで表されるオリゴ糖の生
成が確認された。
実施例２
試験管に１００■のフッ化α−Ｄ−マルトシルを入れ、
これに０．０５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）１．６脂
１とメタノール４■ｌを加えた後、０．４■ｌのリン酸
緩衝液に５■のプルラナーゼ（ＡｅｒＯｂａｃｔｅｒａ
ｅｒｏｇｅｎｅｓ由来、生化学社製、Ｃｒｕｄｅ ）を
溶解したものを添加して反応を開始した。
これに０．０５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）１．６脂
１とメタノール４■ｌを加えた後、０．４■ｌのリン酸
緩衝液に５■のプルラナーゼ（ＡｅｒＯｂａｃｔｅｒａ
ｅｒｏｇｅｎｅｓ由来、生化学社製、Ｃｒｕｄｅ ）を
溶解したものを添加して反応を開始した。
４゜
以下、実施例１と同様に処理したところ、同様のオリゴ
糖の生成が確認された。
糖の生成が確認された。
実施例３
フッ化α−Ｄ−マルトシルの代わりにマルトースを使用
したほかは実施例２と同様に処理したところ、実施例１
と同様のオリゴ糖の生成が確認された。
したほかは実施例２と同様に処理したところ、実施例１
と同様のオリゴ糖の生成が確認された。
（発明の効果）
本発明のオリゴ糖の製造方法は、安価に入手できるプル
ラナーゼの触媒作用を利用する経済的な方法であるほか
１反応を極めてマイルドな条件で実施することができる
等、産業上極めて有用なものである。
ラナーゼの触媒作用を利用する経済的な方法であるほか
１反応を極めてマイルドな条件で実施することができる
等、産業上極めて有用なものである。
第１図は実施例１で得られたオリゴ糖の１２０−ＮＭＲ
スペクトル図を示す。
スペクトル図を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、緩衝液または有機溶媒と緩衝液との混合溶液中で、
一般式 I で表されるマルトースまたはフッ化α−Ｄ−
マルトシルに、プルラナーゼを作用させることを特徴と
する一般式IIで表されるオリゴ糖の製造方法。 一般式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここに、Ｘはフッソ原子またはヒドロキシル基を示す
） 一般式II： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中のｎは２以上の整数を示す） ２、有機溶媒が、メタノールまたはテトラヒドロフラン
であることを特徴とする請求項１記載のオリゴ糖の製造
方法。 ３、緩衝液が、リン酸緩衝液であることを特徴とする請
求項１記載のオリゴ糖の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24594590A JP2826372B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | オリゴ糖の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24594590A JP2826372B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | オリゴ糖の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04126090A true JPH04126090A (ja) | 1992-04-27 |
| JP2826372B2 JP2826372B2 (ja) | 1998-11-18 |
Family
ID=17141195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24594590A Expired - Fee Related JP2826372B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | オリゴ糖の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2826372B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5472859A (en) * | 1993-08-02 | 1995-12-05 | Brown, Jr.; R. Malcolm | Enzymatic method for synthesis of cellulose 1 |
-
1990
- 1990-09-14 JP JP24594590A patent/JP2826372B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5472859A (en) * | 1993-08-02 | 1995-12-05 | Brown, Jr.; R. Malcolm | Enzymatic method for synthesis of cellulose 1 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2826372B2 (ja) | 1998-11-18 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |