JP3062592B2 - ２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ −グルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ −グルコースおよびその塩の製造法 - Google Patents
２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ −グルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ −グルコースおよびその塩の製造法Info
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- C07H15/20—Carbocyclic rings
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- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
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- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、２−アセチルアミ
ノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グ
ルコピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースおよ
びその塩の製造法に関する。本物質は天然物であるキチ
ンの部分加水分解物として得られることから、キチン関
連化合物分解酵素の活性測定用基質として用いられる
他、食品素材，糖鎖工学分野における合成原料として活
用することができる。
ノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グ
ルコピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースおよ
びその塩の製造法に関する。本物質は天然物であるキチ
ンの部分加水分解物として得られることから、キチン関
連化合物分解酵素の活性測定用基質として用いられる
他、食品素材，糖鎖工学分野における合成原料として活
用することができる。
【０００２】
【従来の技術】キトサンを加水分解したキトサンオリゴ
糖が、健康食品市場を中心に食品素材として活用されて
いるが、一般に原料となるキトサンは１部の糖残基にＮ
−アセチル基が残っており、オリゴ糖にも D−グルコサ
ミン残基の他に、Ｎ−アセチル−D −グルコサミン残基
が混入している。このような部分脱アセチル化キチンオ
リゴ糖は、植物に対するエリシター活性や抗う蝕活性等
を備えていることが報告されており、同じ重合度のキチ
ンオリゴ糖やキトサンオリゴ糖と比較して優れた活性を
示す例が見られている。しかしながら、部分脱アセチル
化キチンオリゴ糖と呼ばれるものは、一般に複数の化合
物の混合体として構成されているため、未だその構造が
定義されてはいない。そのため、キチンオリゴ糖，部分
脱アセチル化キチンオリゴ糖，あるいはキトサンオリゴ
糖のもつ様々な生理活性の発現機構を解明する上で、構
造の定義された部分脱アセチル化キチンオリゴ糖を提供
することは極めて意義深い。
糖が、健康食品市場を中心に食品素材として活用されて
いるが、一般に原料となるキトサンは１部の糖残基にＮ
−アセチル基が残っており、オリゴ糖にも D−グルコサ
ミン残基の他に、Ｎ−アセチル−D −グルコサミン残基
が混入している。このような部分脱アセチル化キチンオ
リゴ糖は、植物に対するエリシター活性や抗う蝕活性等
を備えていることが報告されており、同じ重合度のキチ
ンオリゴ糖やキトサンオリゴ糖と比較して優れた活性を
示す例が見られている。しかしながら、部分脱アセチル
化キチンオリゴ糖と呼ばれるものは、一般に複数の化合
物の混合体として構成されているため、未だその構造が
定義されてはいない。そのため、キチンオリゴ糖，部分
脱アセチル化キチンオリゴ糖，あるいはキトサンオリゴ
糖のもつ様々な生理活性の発現機構を解明する上で、構
造の定義された部分脱アセチル化キチンオリゴ糖を提供
することは極めて意義深い。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】また、構造の定義され
た部分脱アセチル化キチンオリゴ糖の最小単位である２
−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキ
シ−β−D −グルコピラノシル）−２−デオキシ−D −
グルコースは、部分脱アセチル化高分子キチンをキチナ
ーゼによって分解することにより製造することができる
という報告（Mitsutomi, M. et al, Agric. Biol. Che
m., 54(4), 871-877,(1990)) がなされているが、同時
に極めて構造の類似したヘテロオリゴ糖が副生するため
に、その分離・精製が極めて困難である。そのために、
本化合物を単離して糖質素材として様々な分野において
活用しようという試みは、現在までなされることがなか
った。本発明の目的は、キチンの分解物あるいは試薬と
して入手容易なジ−Ｎ−アセチル−D −キトビオースを
基質とし、これに微生物由来の脱アセチル化酵素を作用
させることによって、ほぼ定量的に２−アセチルアミノ
−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グル
コピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースを製造
する方法を提供することである。
た部分脱アセチル化キチンオリゴ糖の最小単位である２
−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキ
シ−β−D −グルコピラノシル）−２−デオキシ−D −
グルコースは、部分脱アセチル化高分子キチンをキチナ
ーゼによって分解することにより製造することができる
という報告（Mitsutomi, M. et al, Agric. Biol. Che
m., 54(4), 871-877,(1990)) がなされているが、同時
に極めて構造の類似したヘテロオリゴ糖が副生するため
に、その分離・精製が極めて困難である。そのために、
本化合物を単離して糖質素材として様々な分野において
活用しようという試みは、現在までなされることがなか
った。本発明の目的は、キチンの分解物あるいは試薬と
して入手容易なジ−Ｎ−アセチル−D −キトビオースを
基質とし、これに微生物由来の脱アセチル化酵素を作用
させることによって、ほぼ定量的に２−アセチルアミノ
−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グル
コピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースを製造
する方法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、ジ−
Ｎ−アセチルキトビオースにコレトトリカム・リンデム
チアナムＡＴＣＣ５６６７６株由来の脱アセチル化酵素
由来の脱アセチル化酵素（以下、微生物由来の脱アセチ
ル化酵素と略記することがある。）を作用させることを
特徴とする下記の式（１）で表される２−アセチルアミ
ノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グ
ルコピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースまた
はその酸付加塩の製造法である。
Ｎ−アセチルキトビオースにコレトトリカム・リンデム
チアナムＡＴＣＣ５６６７６株由来の脱アセチル化酵素
由来の脱アセチル化酵素（以下、微生物由来の脱アセチ
ル化酵素と略記することがある。）を作用させることを
特徴とする下記の式（１）で表される２−アセチルアミ
ノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グ
ルコピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースまた
はその酸付加塩の製造法である。
【０００５】
【化２】
【０００６】また、２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２
−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシル）
−２−デオキシ−D −グルコースの塩としては酸付加塩
があり、例えば塩酸塩，酢酸塩などがある。このものは
下記の式（２）で表される。
−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシル）
−２−デオキシ−D −グルコースの塩としては酸付加塩
があり、例えば塩酸塩，酢酸塩などがある。このものは
下記の式（２）で表される。
【０００７】
【化３】
【０００８】
【発明の実施の形態】以下に、本発明の２−アセチルア
ミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −
グルコピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースお
よびその塩の製造法について説明する。本発明の出発原
料としては、ジ−Ｎ−アセチルキトビオースを用いる。
このものは、キチンの分解物として容易に得られる他、
試薬として販売されている。また、微生物由来の脱アセ
チル化酵素としては、ジ−Ｎ−アセチルキトビオースの
非還元末端に位置するＮ−アセチル−D −グルコサミン
残基に存在するＮ−アセチル基を優先的に脱離する活性
をもつことが必要で、例えば不完全菌由来のキチン脱ア
セチル化酵素、具体的にはコレトトリカム・リンデムチ
アナム（Colletotrichum lindemuthianum）ＡＴＣＣ５
６６７６株由来のキチン脱アセチル化酵素(Biosci. Bio
tech. Biochem., 60(10), 1598-1603,1996) がある。こ
の酵素は、例えば次の方法によって得ることができる。
上記の不完全菌の胞子を液体培地で培養した後、培養物
から活性画分を回収する。これを粗酵素液として用いる
他、常法により精製して精製酵素とすることができる
（特開平８−２８９７８５号公報）。
ミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −
グルコピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースお
よびその塩の製造法について説明する。本発明の出発原
料としては、ジ−Ｎ−アセチルキトビオースを用いる。
このものは、キチンの分解物として容易に得られる他、
試薬として販売されている。また、微生物由来の脱アセ
チル化酵素としては、ジ−Ｎ−アセチルキトビオースの
非還元末端に位置するＮ−アセチル−D −グルコサミン
残基に存在するＮ−アセチル基を優先的に脱離する活性
をもつことが必要で、例えば不完全菌由来のキチン脱ア
セチル化酵素、具体的にはコレトトリカム・リンデムチ
アナム（Colletotrichum lindemuthianum）ＡＴＣＣ５
６６７６株由来のキチン脱アセチル化酵素(Biosci. Bio
tech. Biochem., 60(10), 1598-1603,1996) がある。こ
の酵素は、例えば次の方法によって得ることができる。
上記の不完全菌の胞子を液体培地で培養した後、培養物
から活性画分を回収する。これを粗酵素液として用いる
他、常法により精製して精製酵素とすることができる
（特開平８−２８９７８５号公報）。
【０００９】本酵素を原料化合物であるジ−Ｎ−アセチ
ルキトビオースに作用させるこにより、ジ−Ｎ−アセチ
ルキトビオースの非還元末端のＮ−アセチルグルコサミ
ン残基のアセチル基のみを脱離し、グルコサミン残基に
変換して、本発明の目的物である２−アセチルアミノ−
４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコ
ピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースを製造す
ることができる。
ルキトビオースに作用させるこにより、ジ−Ｎ−アセチ
ルキトビオースの非還元末端のＮ−アセチルグルコサミ
ン残基のアセチル基のみを脱離し、グルコサミン残基に
変換して、本発明の目的物である２−アセチルアミノ−
４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコ
ピラノシル）−２−デオキシ−D −グルコースを製造す
ることができる。
【００１０】具体的には、ジ−Ｎ−アセチルキトビオー
スを四ほう酸ナトリウム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に
溶解し、基質濃度を０．１〜０．５％、好ましくは０．
２％程度の溶液とする。この溶液に微生物由来のキチン
脱アセチル化酵素を０．０１〜０．３ユニット、好まし
くは０．０５ユニット程度加えた後、３０〜６０℃、好
ましくは４５℃で、１〜６時間、好ましくは２〜４時間
反応させる。その後、反応生成物を陽イオン交換樹脂に
吸着させることによって未反応の原料物質を除去し、
０．１Ｎ 塩酸を通すことによって目的物を溶出させ
る。このとき用いる陽イオン交換樹脂としては、アンバ
ーライトＣＧ−１２０等が好ましい。
スを四ほう酸ナトリウム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に
溶解し、基質濃度を０．１〜０．５％、好ましくは０．
２％程度の溶液とする。この溶液に微生物由来のキチン
脱アセチル化酵素を０．０１〜０．３ユニット、好まし
くは０．０５ユニット程度加えた後、３０〜６０℃、好
ましくは４５℃で、１〜６時間、好ましくは２〜４時間
反応させる。その後、反応生成物を陽イオン交換樹脂に
吸着させることによって未反応の原料物質を除去し、
０．１Ｎ 塩酸を通すことによって目的物を溶出させ
る。このとき用いる陽イオン交換樹脂としては、アンバ
ーライトＣＧ−１２０等が好ましい。
【００１１】所望により、これに塩酸，酢酸等の適当な
酸を加えることにより、塩形成された化合物を調製する
ことができる。上記の方法により得られた本物質の主要
な利用法としては、酵素活性測定用基質，食品素材，糖
鎖工学分野における合成原料等が考えられる。このよう
にして得られた物質の構造解析を質量分析，核磁気共鳴
分析によって行った。図１はこの化合物の質量スペクト
ル、図２は1H-NMRスペクトルの結果である。
酸を加えることにより、塩形成された化合物を調製する
ことができる。上記の方法により得られた本物質の主要
な利用法としては、酵素活性測定用基質，食品素材，糖
鎖工学分野における合成原料等が考えられる。このよう
にして得られた物質の構造解析を質量分析，核磁気共鳴
分析によって行った。図１はこの化合物の質量スペクト
ル、図２は1H-NMRスペクトルの結果である。
【００１２】
【実施例】次に、本発明を実施例によって詳しく説明す
るが、本発明はこれらによって制限されるものではな
い。 実施例１ （１）脱アセチル化酵素の精製 コレトトリカム・リンデムチアナム ＡＴＣＣ５６６７
６株を、０．２８％グルコース，０．１２３％硫酸マグ
ネシウム（７水和物），０．２％プロテオース・ペプト
ン，０．２７２％りん酸二水素カリウムおよび２．０％
寒天を含む培地に接種し、２５℃で暗所に７日間静置培
養して黒色の菌体を誘導した。次に、菌体を１％麦芽抽
出物，０．４％酵母抽出物，０．４％ブドウ糖を含む２
００ｍｌの培地（ｐＨ５．８）が入った５００ｍｌ容三
角フラスコに接種し、２２℃にて暗所下で１分間に１０
０回転の条件で振とう培養を行った。８日目頃から酵素
活性を示すものが培養液中に分泌され、１８日目まで該
活性が増加した。１８日経過した時点で培養を終了し、
菌体培養液をナイロンフィルターでろ過したのち、ガラ
スファイバーを通過させて微粒子を除き、培養ろ液を回
収した。該培養ろ液に４℃下で８０％飽和になるように
硫安を加え、一晩静置したのち遠心分離により沈澱を回
収した。この沈澱を少量の５０ｍＭ 四ほう酸ナトリウ
ム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解し、同緩衝液中で
透析を行った。透析後の粗酵素液を疎水クロマトグラフ
ィーおよび陰イオンクロマトグラフィーを用いて分画、
精製し、ＳＤＳゲル電気泳動的に単一バンドを示すキチ
ン脱アセチル化酵素を得た（特開平８−２８９７８５号
公報）。
るが、本発明はこれらによって制限されるものではな
い。 実施例１ （１）脱アセチル化酵素の精製 コレトトリカム・リンデムチアナム ＡＴＣＣ５６６７
６株を、０．２８％グルコース，０．１２３％硫酸マグ
ネシウム（７水和物），０．２％プロテオース・ペプト
ン，０．２７２％りん酸二水素カリウムおよび２．０％
寒天を含む培地に接種し、２５℃で暗所に７日間静置培
養して黒色の菌体を誘導した。次に、菌体を１％麦芽抽
出物，０．４％酵母抽出物，０．４％ブドウ糖を含む２
００ｍｌの培地（ｐＨ５．８）が入った５００ｍｌ容三
角フラスコに接種し、２２℃にて暗所下で１分間に１０
０回転の条件で振とう培養を行った。８日目頃から酵素
活性を示すものが培養液中に分泌され、１８日目まで該
活性が増加した。１８日経過した時点で培養を終了し、
菌体培養液をナイロンフィルターでろ過したのち、ガラ
スファイバーを通過させて微粒子を除き、培養ろ液を回
収した。該培養ろ液に４℃下で８０％飽和になるように
硫安を加え、一晩静置したのち遠心分離により沈澱を回
収した。この沈澱を少量の５０ｍＭ 四ほう酸ナトリウ
ム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解し、同緩衝液中で
透析を行った。透析後の粗酵素液を疎水クロマトグラフ
ィーおよび陰イオンクロマトグラフィーを用いて分画、
精製し、ＳＤＳゲル電気泳動的に単一バンドを示すキチ
ン脱アセチル化酵素を得た（特開平８−２８９７８５号
公報）。
【００１３】（２）２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２
−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシル）
−２−デオキシ−D −グルコースの製造法 ジ−Ｎ−アセチルキトビオース（生化学工業株式会社
製）０．４ｍｇを０．２ｍｌの２０ｍＭ 四ほう酸ナト
リウム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解し、これに上
記（１）で得た不完全菌コレトトリカム・リンデムチア
ナム由来の精製キチン脱アセチル化酵素を０．０５ユニ
ット加えて、４５℃で３時間反応させた。
−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシル）
−２−デオキシ−D −グルコースの製造法 ジ−Ｎ−アセチルキトビオース（生化学工業株式会社
製）０．４ｍｇを０．２ｍｌの２０ｍＭ 四ほう酸ナト
リウム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解し、これに上
記（１）で得た不完全菌コレトトリカム・リンデムチア
ナム由来の精製キチン脱アセチル化酵素を０．０５ユニ
ット加えて、４５℃で３時間反応させた。
【００１４】これをCarbopak PA1カラム（DIONEX社製）
を用いたイオンクロマトグラフィーによって分析した結
果、図３，４に示すように、反応生成物は１種類であ
り、このピークは基質であるジ−Ｎ−アセチルキトビオ
ースの減少に伴い反応初期から増加し、他の化合物由来
のピークはほとんど存在しなかった。そして３時間後に
は、原料物質であるジ−Ｎ−アセチルキトビオース由来
のピークはディテクタにより定量されなくなった。この
ように、基質が迅速に減少し、単一のピークを与える化
合物に変換されているのがわかる。続いて、これを陽イ
オン交換樹脂アンバーライトＣＧ−１２０（オルガノ株
式会社製）を用いて精製し、電気透析法によって脱塩を
行った。これを質量分析計（ＪＥＯＬ社製）により分析
した結果、［ M+H+ ］＝３８３のシグナルが検出され、
本物質の分子量は３８２であると推定された。さらに、
これを1H-NMRによって分析した結果、本物質の構造は２
−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキ
シ−β−D −グルコピラノシル）−２−デオキシ−D −
グルコースであると決定された。
を用いたイオンクロマトグラフィーによって分析した結
果、図３，４に示すように、反応生成物は１種類であ
り、このピークは基質であるジ−Ｎ−アセチルキトビオ
ースの減少に伴い反応初期から増加し、他の化合物由来
のピークはほとんど存在しなかった。そして３時間後に
は、原料物質であるジ−Ｎ−アセチルキトビオース由来
のピークはディテクタにより定量されなくなった。この
ように、基質が迅速に減少し、単一のピークを与える化
合物に変換されているのがわかる。続いて、これを陽イ
オン交換樹脂アンバーライトＣＧ−１２０（オルガノ株
式会社製）を用いて精製し、電気透析法によって脱塩を
行った。これを質量分析計（ＪＥＯＬ社製）により分析
した結果、［ M+H+ ］＝３８３のシグナルが検出され、
本物質の分子量は３８２であると推定された。さらに、
これを1H-NMRによって分析した結果、本物質の構造は２
−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキ
シ−β−D −グルコピラノシル）−２−デオキシ−D −
グルコースであると決定された。
【００１５】実施例２ ジ−Ｎ−アセチルキトビオース２０ｍｇを１０ｍｌの２
０ｍＭ 四ほう酸ナトリウム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．
５）に溶解し、これに１．５ｍｌの膨張Ｑ−セファロー
スＦＦ樹脂（ファルマシア社製）を懸濁させた後、実施
例１の（１）で精製したキチン脱アセチル化酵素を１．
５ユニット加えて、４５℃で１６時間反応させた。反応
後、Ｑ−セファロース樹脂を自然沈降させた後、透明な
上澄を回収し、その１部をCarbopak PA1カラム（DIONEX
社製）を用いたイオンクロマトグラフィーによって分析
した。その結果、２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−
アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシル）−
２−デオキシ−D −グルコースのピークのみが検出さ
れ、原料物質であるジ−Ｎ−アセチルキトビオース由来
のピークは存在しなかった。
０ｍＭ 四ほう酸ナトリウム・塩酸緩衝液（ｐＨ８．
５）に溶解し、これに１．５ｍｌの膨張Ｑ−セファロー
スＦＦ樹脂（ファルマシア社製）を懸濁させた後、実施
例１の（１）で精製したキチン脱アセチル化酵素を１．
５ユニット加えて、４５℃で１６時間反応させた。反応
後、Ｑ−セファロース樹脂を自然沈降させた後、透明な
上澄を回収し、その１部をCarbopak PA1カラム（DIONEX
社製）を用いたイオンクロマトグラフィーによって分析
した。その結果、２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−
アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシル）−
２−デオキシ−D −グルコースのピークのみが検出さ
れ、原料物質であるジ−Ｎ−アセチルキトビオース由来
のピークは存在しなかった。
【００１６】実施例３ 実施例１において調製された２−アセチルアミノ−４−
Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラ
ノシル）−２−デオキシ−D −グルコースを酵素活性測
定用基質として用い、エキソ型のキチン分解酵素活性を
備えたβ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ (Penicill
ium oxalicum由来，生化学工業株式会社製）０．００７
ユニットを５０ｍＭ クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
４．５）中で３７℃で１時間作用させたが、基質の分解
は起こらなかった。一方、ジ−Ｎ−アセチルキトビオー
スを基質として用いたときは、Ｎ−アセチルグルコサミ
ンが生成したことから、本酵素は基質の非還元末端のグ
ルコサミン残基のＮ−アセチル基を認識することが明ら
かとなった。
Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラ
ノシル）−２−デオキシ−D −グルコースを酵素活性測
定用基質として用い、エキソ型のキチン分解酵素活性を
備えたβ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ (Penicill
ium oxalicum由来，生化学工業株式会社製）０．００７
ユニットを５０ｍＭ クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
４．５）中で３７℃で１時間作用させたが、基質の分解
は起こらなかった。一方、ジ−Ｎ−アセチルキトビオー
スを基質として用いたときは、Ｎ−アセチルグルコサミ
ンが生成したことから、本酵素は基質の非還元末端のグ
ルコサミン残基のＮ−アセチル基を認識することが明ら
かとなった。
【００１７】
【発明の効果】本発明によれば、大量に、かつ容易に入
手可能なジ−Ｎ−アセチルキトビオースを出発原料とし
て、２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−
デオキシ−β−D −グルコピラノシル）−２−デオキシ
−D −グルコースおよびその塩を効率よく合成すること
ができる。また、本物質は安定的に供給することが可能
で、酵素活性測定用基質をはじめとして、食品素材ある
いは糖鎖工学分野における合成原料など様々な分野に活
用することができる。
手可能なジ−Ｎ−アセチルキトビオースを出発原料とし
て、２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−
デオキシ−β−D −グルコピラノシル）−２−デオキシ
−D −グルコースおよびその塩を効率よく合成すること
ができる。また、本物質は安定的に供給することが可能
で、酵素活性測定用基質をはじめとして、食品素材ある
いは糖鎖工学分野における合成原料など様々な分野に活
用することができる。
【図１】 本発明の化合物の質量スペクトルを示す。
【図２】 本発明の化合物の1H-NMRスペクトルを示す。
【図３】 ジ−Ｎ−アセチルキトビオースを基質とし
て、本発明の化合物を調製する工程を高速液体クロマト
グラフィーで分析したクロマトグラムを示し、（１）は
反応開始０分の、（２）は反応開始１５分後の、（３）
は反応開始３０分後の、（４）は反応開始６０分後の試
料を分析したものである。
て、本発明の化合物を調製する工程を高速液体クロマト
グラフィーで分析したクロマトグラムを示し、（１）は
反応開始０分の、（２）は反応開始１５分後の、（３）
は反応開始３０分後の、（４）は反応開始６０分後の試
料を分析したものである。
【図４】 ジ−Ｎ−アセチルキトビオースを基質とし
て、本発明の化合物を調製する工程を高速液体クロマト
グラフィーで分析したクロマトグラムを示し、（１）は
反応開始９０分後の、（２）は反応開始１２０分後の、
（３）は反応開始１５０分後の、（４）は反応開始１８
０分後の試料を分析したものである。
て、本発明の化合物を調製する工程を高速液体クロマト
グラフィーで分析したクロマトグラムを示し、（１）は
反応開始９０分後の、（２）は反応開始１２０分後の、
（３）は反応開始１５０分後の、（４）は反応開始１８
０分後の試料を分析したものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 森 隆 茨城県つくば市松代５丁目９番地５ 626−２ (72)発明者 濱松 潮香 茨城県つくば市竹園１丁目13番２ 803 棟202号 (72)発明者 林 清 茨城県土浦市乙戸南１丁目５−３ (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 19/26 C07H 13/06
Claims (1)
- 【請求項１】 ジ−Ｎ−アセチルキトビオースにコレト
トリカム・リンデムチアナムＡＴＣＣ５６６７６株由来
の脱アセチル化酵素を作用させることを特徴とする下記
の式（１）で表される２−アセチルアミノ−４−Ｏ−
（２−アミノ−２−デオキシ−β−D −グルコピラノシ
ル）−２−デオキシ−D −グルコースまたはその酸付加
塩の製造法。 【化１】
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9156092A JP3062592B2 (ja) | 1997-05-30 | 1997-05-30 | ２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ −グルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ −グルコースおよびその塩の製造法 |
| US08/900,820 US5955320A (en) | 1997-05-30 | 1997-07-25 | Method for producing 2-acetylamino-4-O-(2-amino-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl)-2-deoxy-D-glucose and its salts |
| KR1019970038081A KR100269709B1 (ko) | 1997-05-30 | 1997-08-09 | 2-아세틸아미노-4-O-(2-아미노-2-데옥시-β-D-글루코피라노실)-2-데옥시-D- 글루코스 및 그 염의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9156092A JP3062592B2 (ja) | 1997-05-30 | 1997-05-30 | ２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ −グルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ −グルコースおよびその塩の製造法 |
Publications (2)
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| JP3062592B2 true JP3062592B2 (ja) | 2000-07-10 |
Family
ID=15620144
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9156092A Expired - Lifetime JP3062592B2 (ja) | 1997-05-30 | 1997-05-30 | ２−アセチルアミノ−４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ −グルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ −グルコースおよびその塩の製造法 |
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| Country | Link |
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| JP (1) | JP3062592B2 (ja) |
| KR (1) | KR100269709B1 (ja) |
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-
1997
- 1997-05-30 JP JP9156092A patent/JP3062592B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 US US08/900,820 patent/US5955320A/en not_active Expired - Fee Related
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| US5955320A (en) | 1999-09-21 |
| KR100269709B1 (ko) | 2000-10-16 |
| JPH10327893A (ja) | 1998-12-15 |
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