JP2620030B2 - β１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法 - Google Patents
β１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、β１→６結合を有す
るオリゴ糖を効率よく安全に製造する方法に関する。
るオリゴ糖を効率よく安全に製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】生物
界に豊富に存在するキチンは、Ｎ−アセチル−Ｄ−グル
コサミンを構成糖とする多糖であって、Ｎ−アセチル−
Ｄ−グルコサミンがβ１→４結合により直鎖状に連なっ
た分子構造を有し、さらにそれぞれの分子鎖同士が水素
結合によって安定化した結晶構造を形成している。
界に豊富に存在するキチンは、Ｎ−アセチル−Ｄ−グル
コサミンを構成糖とする多糖であって、Ｎ−アセチル−
Ｄ−グルコサミンがβ１→４結合により直鎖状に連なっ
た分子構造を有し、さらにそれぞれの分子鎖同士が水素
結合によって安定化した結晶構造を形成している。
【０００３】キチンは、主として、動物界ではカニ、エ
ビ、オキアミ等の甲殻、昆虫等の外皮に、また菌界では
カビ、酵母、きのこ等の細胞壁に多量に存在することが
知られており、いずれの生物においても生体内部を外環
境から遮断し生体を保護する役割を担っている。キチン
がこのような役割を果すにあたっては、上述の結晶構造
に起因するキチンの剛直性、難溶解性、難化学反応性等
が寄与しているものと考えられる。
ビ、オキアミ等の甲殻、昆虫等の外皮に、また菌界では
カビ、酵母、きのこ等の細胞壁に多量に存在することが
知られており、いずれの生物においても生体内部を外環
境から遮断し生体を保護する役割を担っている。キチン
がこのような役割を果すにあたっては、上述の結晶構造
に起因するキチンの剛直性、難溶解性、難化学反応性等
が寄与しているものと考えられる。
【０００４】このように多くの生物に存在するキチン
は、地球上における生産量が年間109〜1011トンと見積
もられており、セルロースに次ぐ有力なバイオマス資源
として注目され多くの研究がなされている。しかしなが
ら、バイオマス資源としてのキチンは、前述のように反
応性・溶解性が低いこともあって、未だ有効に利用され
ているとはいえない状況にある。
は、地球上における生産量が年間109〜1011トンと見積
もられており、セルロースに次ぐ有力なバイオマス資源
として注目され多くの研究がなされている。しかしなが
ら、バイオマス資源としてのキチンは、前述のように反
応性・溶解性が低いこともあって、未だ有効に利用され
ているとはいえない状況にある。
【０００５】これに対して、近年、食品・医薬分野にお
いて、キチンの直鎖状分子をＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミン数分子の大きさにまで分解したキチンオリゴ糖が
関心を集めている。その代表的なものが、下記式で表わ
される、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンが２分子結合
したジ−Ｎ−アセチルキトビオースである。
いて、キチンの直鎖状分子をＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミン数分子の大きさにまで分解したキチンオリゴ糖が
関心を集めている。その代表的なものが、下記式で表わ
される、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンが２分子結合
したジ−Ｎ−アセチルキトビオースである。
【０００６】
【化１】 このようなキチンオリゴ糖の製造方法としては、酸分解
による方法、キチナーゼ、リゾチーム等の酵素分解によ
る方法などが知られている。
による方法、キチナーゼ、リゾチーム等の酵素分解によ
る方法などが知られている。
【０００７】しかしながら、これらの方法により得られ
るキチンオリゴ糖は、元来キチンが有しているβ１→４
結合をそのまま保持しており、したがって、反応性、溶
解性が低いというキチンの基本的性質をも残す結果とな
っている。このため、ジ−Ｎ−アセチルキトビオース
（２糖；（GlcNAc）2 と表記）、トリ−Ｎ−アセチルキ
トトリオース（３糖；（GlcNAc）3 と表記）、テトラ−
Ｎ−アセチルキトテトラオース（４糖；（GlcNAc）4 と
表記）、ペンタ−Ｎ−アセチルキトペンタオース（５
糖；（GlcNAc）5 と表記）、ヘキサ−Ｎ−アセチルキト
ヘキサオース（６糖；（GlcNAc）6 と表記）とオリゴ糖
の分子鎖長が長くなるにしたがって溶解度が低下してゆ
く。特に、（GlcNAc）3 以上の分子鎖長のものは 2％程
度の溶解度しか示さないため、水溶液としての利用は著
しく制限される。
るキチンオリゴ糖は、元来キチンが有しているβ１→４
結合をそのまま保持しており、したがって、反応性、溶
解性が低いというキチンの基本的性質をも残す結果とな
っている。このため、ジ−Ｎ−アセチルキトビオース
（２糖；（GlcNAc）2 と表記）、トリ−Ｎ−アセチルキ
トトリオース（３糖；（GlcNAc）3 と表記）、テトラ−
Ｎ−アセチルキトテトラオース（４糖；（GlcNAc）4 と
表記）、ペンタ−Ｎ−アセチルキトペンタオース（５
糖；（GlcNAc）5 と表記）、ヘキサ−Ｎ−アセチルキト
ヘキサオース（６糖；（GlcNAc）6 と表記）とオリゴ糖
の分子鎖長が長くなるにしたがって溶解度が低下してゆ
く。特に、（GlcNAc）3 以上の分子鎖長のものは 2％程
度の溶解度しか示さないため、水溶液としての利用は著
しく制限される。
【０００８】また、β１→４結合を有するキチンオリゴ
糖の用途については既に多くの考察がなされており、ほ
とんど検討され尽くした感がある。このため、新たな構
造を有するオリゴ糖に対する期待が高まっている。
糖の用途については既に多くの考察がなされており、ほ
とんど検討され尽くした感がある。このため、新たな構
造を有するオリゴ糖に対する期待が高まっている。
【０００９】キチンと同様にＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミンを構成糖とするオリゴ糖としては、Ｎ−アセチル
−Ｄ−グルコサミンがβ１→６結合で連結したβ１→６
Ｎ−アセチルグルコサミノオリゴ糖が知られている。２
分子のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンがβ１→６結合
で結合した２糖の構造式を以下に示す。
サミンを構成糖とするオリゴ糖としては、Ｎ−アセチル
−Ｄ−グルコサミンがβ１→６結合で連結したβ１→６
Ｎ−アセチルグルコサミノオリゴ糖が知られている。２
分子のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンがβ１→６結合
で結合した２糖の構造式を以下に示す。
【００１０】
【化２】 このようなβ１→６Ｎ−アセチルグルコサミノオリゴ糖
は、新規オリゴ糖として食品のほか免疫賦活剤等の医薬
品への利用が期待されている。また、このオリゴ糖は糖
質化学の研究にも大変有用である。このオリゴ糖の製造
方法は、例えば、Carbohydr.Res.,186 (1989) 177-188
、J.Chem.Soc.,(1958) 1890-1894、Carbohydr.Res.,21
(1972) 211-217、Tetrahedron Lett.,(1972) 5065-506
8に開示されている。
は、新規オリゴ糖として食品のほか免疫賦活剤等の医薬
品への利用が期待されている。また、このオリゴ糖は糖
質化学の研究にも大変有用である。このオリゴ糖の製造
方法は、例えば、Carbohydr.Res.,186 (1989) 177-188
、J.Chem.Soc.,(1958) 1890-1894、Carbohydr.Res.,21
(1972) 211-217、Tetrahedron Lett.,(1972) 5065-506
8に開示されている。
【００１１】しかしながら、これらの製造方法はいずれ
も化学薬品を使用する、いわゆる化学合成法である。し
たがって、副生物が生成するために収率が著しく低く、
反応終了後に複雑な精製工程を要する。また、フッ化水
素をはじめとする薬品類を大量に使用するため危険を伴
うこともあり、広く普及するに至っていない。
も化学薬品を使用する、いわゆる化学合成法である。し
たがって、副生物が生成するために収率が著しく低く、
反応終了後に複雑な精製工程を要する。また、フッ化水
素をはじめとする薬品類を大量に使用するため危険を伴
うこともあり、広く普及するに至っていない。
【００１２】したがって、この発明は、Ｎ−アセチル−
Ｄ−グルコサミンがβ１→６結合したβ１→６Ｎ−アセ
チルグルコサミノオリゴ糖を収率よく、かつ安全に製造
することが可能な方法を提供することを目的とする。
Ｄ−グルコサミンがβ１→６結合したβ１→６Ｎ−アセ
チルグルコサミノオリゴ糖を収率よく、かつ安全に製造
することが可能な方法を提供することを目的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記事情
に鑑み、鋭意研究の結果、特定の菌株が菌体外に産生す
る物質（以下、菌体外産生物と称する）がキチンを分解
するとともに糖転移せしめ、β１→６結合を有するオリ
ゴ糖、特にβ１→６Ｎ−アセチルグルコサミノオリゴ糖
を生成することを見出し、この発明を完成するに至っ
た。すなわち、この発明によるβ１→６結合を有するオ
リゴ糖の製造方法は、アルテロモナス属菌の菌体外産生
物の存在下においてキチンを分解および糖転移させるこ
とを特徴とする。
に鑑み、鋭意研究の結果、特定の菌株が菌体外に産生す
る物質（以下、菌体外産生物と称する）がキチンを分解
するとともに糖転移せしめ、β１→６結合を有するオリ
ゴ糖、特にβ１→６Ｎ−アセチルグルコサミノオリゴ糖
を生成することを見出し、この発明を完成するに至っ
た。すなわち、この発明によるβ１→６結合を有するオ
リゴ糖の製造方法は、アルテロモナス属菌の菌体外産生
物の存在下においてキチンを分解および糖転移させるこ
とを特徴とする。
【００１４】以下、この発明をさらに詳細に説明する。
【００１５】この発明のβ１→６結合を有するオリゴ糖
の製造方法においては、アルテロモナス属に属する細菌
が菌体外に産生する物質、特に酵素成分を用いてキチン
の分解および糖転移を行なう。
の製造方法においては、アルテロモナス属に属する細菌
が菌体外に産生する物質、特に酵素成分を用いてキチン
の分解および糖転移を行なう。
【００１６】具体的には、アルテロモナス属菌の培養培
地から産生した酵素成分のみを回収し、この酵素成分を
キチンを含有する緩衝液中に添加して反応させ、β１→
６結合を有するオリゴ糖を生成させてもよいし、あるい
は、アルテロモナス属菌の培養に用いる培地中にキチン
を含有させ、そのまま一定期間菌を培養した後、生成し
たβ１→６結合を有するオリゴ糖を回収してもよい。
地から産生した酵素成分のみを回収し、この酵素成分を
キチンを含有する緩衝液中に添加して反応させ、β１→
６結合を有するオリゴ糖を生成させてもよいし、あるい
は、アルテロモナス属菌の培養に用いる培地中にキチン
を含有させ、そのまま一定期間菌を培養した後、生成し
たβ１→６結合を有するオリゴ糖を回収してもよい。
【００１７】前者の場合には、まず、通常の培地を用い
て前述の場合と同様の条件でアルテロモナス属菌を培養
した後、遠心分離によって菌体を除去し、得られた培養
上清から酵素画分を回収する。培養上清からの酵素画分
の回収は、硫安沈殿、アルコール沈殿、アセトン沈殿、
限外濾過等の常法により行なうことができる。次に、得
られた酵素画分（粗酵素）を、キチンを懸濁させた溶液
に添加して25〜60℃で2〜48時間反応させた後、反応液
からタンパク質を除去し、常法により生成したオリゴ糖
を回収する。
て前述の場合と同様の条件でアルテロモナス属菌を培養
した後、遠心分離によって菌体を除去し、得られた培養
上清から酵素画分を回収する。培養上清からの酵素画分
の回収は、硫安沈殿、アルコール沈殿、アセトン沈殿、
限外濾過等の常法により行なうことができる。次に、得
られた酵素画分（粗酵素）を、キチンを懸濁させた溶液
に添加して25〜60℃で2〜48時間反応させた後、反応液
からタンパク質を除去し、常法により生成したオリゴ糖
を回収する。
【００１８】後者の場合には、例えば、キチンを含有す
る培地でアルテロモナス属菌を20〜35℃で24〜72時間培
養した後、遠心分離によって菌体を除去し、得られた培
養上清から目的のβ１→６結合を有するオリゴ糖を回収
することができる。培養上清からのオリゴ糖の回収は、
塩析、液々抽出、膜分離、クロマトグラフィー等の通常
用いられる方法を適宜組み合わせて用いることができ、
特に限定されるものではない。
る培地でアルテロモナス属菌を20〜35℃で24〜72時間培
養した後、遠心分離によって菌体を除去し、得られた培
養上清から目的のβ１→６結合を有するオリゴ糖を回収
することができる。培養上清からのオリゴ糖の回収は、
塩析、液々抽出、膜分離、クロマトグラフィー等の通常
用いられる方法を適宜組み合わせて用いることができ、
特に限定されるものではない。
【００１９】この発明の製造方法に用いられるアルテロ
モナス属菌としては、例えば、以下の菌学的性質を有す
る菌を好ましく用いることができる。
モナス属菌としては、例えば、以下の菌学的性質を有す
る菌を好ましく用いることができる。
【００２０】 運動性 ＋ グラム染色 − ぶどう糖発酵性 ０ オキシダーゼテスト ＋ ＤＮａｓｅテスト ＋ ゼラチン分解性 ＋ 好塩性 ＋ ぶどう糖→ガス産生 − 菌形 桿菌 鞭毛 ＋（極毛 単） 硝酸塩還元 ＋（ガス−） ＶＰ反応 − 色素産生 ＋（黄色） Ｇ＋Ｃ（モル％） 46.1〜46.4％ 上記性質を有する菌は、本発明者らが広く自然界を検索
した結果見出したものであり、この性質からBergey's M
anual of Determinative Bacteriology および多賀信
夫、門田元編、海洋微生物研究法（学会出版センター）
を参照することにより、アルテロモナス属と同定され、
アルテロモナス属菌株ＯＫ2607（Alteromonas sp. OK26
07）と命名された。この菌株は微工研菌寄第13194 号と
して通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所特許微
生物寄託センターに寄託されている。
した結果見出したものであり、この性質からBergey's M
anual of Determinative Bacteriology および多賀信
夫、門田元編、海洋微生物研究法（学会出版センター）
を参照することにより、アルテロモナス属と同定され、
アルテロモナス属菌株ＯＫ2607（Alteromonas sp. OK26
07）と命名された。この菌株は微工研菌寄第13194 号と
して通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所特許微
生物寄託センターに寄託されている。
【００２１】アルテロモナス属菌の培養に用いられる培
地は特に限定されるものではなく、アルテロモナス属菌
が増殖し、酵素成分等の菌体外産生物を産生することが
可能なものであればどのようなものでもよい。
地は特に限定されるものではなく、アルテロモナス属菌
が増殖し、酵素成分等の菌体外産生物を産生することが
可能なものであればどのようなものでもよい。
【００２２】
【実施例】以下、実施例によりこの発明の製造方法をさ
らに詳細に説明する。
らに詳細に説明する。
【００２３】実施例１ アルテロモナス属菌株ＯＫ2607
が産生する酵素（粗酵素）による２−アセトアミド−６
−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ−グルコースの製
造 アルテロモナス属菌株ＯＫ2607を、ジャーファーメンタ
ー内において、 0.1％キチンを含むＺｏＢｅｌｌ 2216
Ｅ改変液体培地（バクトペプトン 0.5％およびバクト酵
母エキス 0.1％を海水に溶解したもの、ｐＨ 7.6） 3リ
ットルで25℃で48時間培養した。次いで、得られた培養
上清2670ｍｌを、分画分子量10,000の限外濾過膜を有す
る限外濾過装置（東ソー社製；ＵＦ−ＬＭＳII）を用い
て分画・濃縮を行ない、粗酵素 200ｍｌを得た。
が産生する酵素（粗酵素）による２−アセトアミド−６
−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル）−２−デオキシ−Ｄ−グルコースの製
造 アルテロモナス属菌株ＯＫ2607を、ジャーファーメンタ
ー内において、 0.1％キチンを含むＺｏＢｅｌｌ 2216
Ｅ改変液体培地（バクトペプトン 0.5％およびバクト酵
母エキス 0.1％を海水に溶解したもの、ｐＨ 7.6） 3リ
ットルで25℃で48時間培養した。次いで、得られた培養
上清2670ｍｌを、分画分子量10,000の限外濾過膜を有す
る限外濾過装置（東ソー社製；ＵＦ−ＬＭＳII）を用い
て分画・濃縮を行ない、粗酵素 200ｍｌを得た。
【００２４】キチン粉末 1ｇに上で得られた粗酵素液 5
ｍｌおよび0.02Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ 7.0）20ｍｌ
を加え、よく撹拌しながら37℃で 3時間反応させた。こ
の反応液を沸騰水浴中で10分間加熱して酵素を失活させ
た後、エタノール25ｍｌを添加し、析出した不溶性画分
および未反応物を遠心分離により除去した。
ｍｌおよび0.02Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ 7.0）20ｍｌ
を加え、よく撹拌しながら37℃で 3時間反応させた。こ
の反応液を沸騰水浴中で10分間加熱して酵素を失活させ
た後、エタノール25ｍｌを添加し、析出した不溶性画分
および未反応物を遠心分離により除去した。
【００２５】得られた溶液を、高速液体クロマトグラフ
ィー（カラム：Asahipak ＮＨ 2Ｐ-50 ）に供し、アセ
トニトリル−水（75：25）混合液を 2.0ｍｌ／分の流速
で流して流出させた。各画分におけるオリゴ糖の検出に
は示差屈折計を用い、溶出開始後約30分で現われるピー
クの画分を回収した。このときの液体クロマトグラフィ
ーのチャートを図１に示す。回収した画分をエバポレー
タで減圧濃縮することにより白色粉末 450ｍｇを得た。
ィー（カラム：Asahipak ＮＨ 2Ｐ-50 ）に供し、アセ
トニトリル−水（75：25）混合液を 2.0ｍｌ／分の流速
で流して流出させた。各画分におけるオリゴ糖の検出に
は示差屈折計を用い、溶出開始後約30分で現われるピー
クの画分を回収した。このときの液体クロマトグラフィ
ーのチャートを図１に示す。回収した画分をエバポレー
タで減圧濃縮することにより白色粉末 450ｍｇを得た。
【００２６】得られた白色粉末を常法により酸分解して
構成糖を調べたところ、Ｎ−アセチルグルコサミンのみ
が検出された。また、 1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲ
による構造解析を行なったところそれぞれ図２および図
３に示すスペクトルが得られた。この結果から、得られ
た白色粉末はＮ−アセチルグルコサミンがβ１→６結合
で２分子結合した２−アセトアミド−６−Ｏ−（２−ア
セトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（以下、β１→６
（GlcNAc）2 と記載する）であることが確認された。さ
らに、この白色粉末についてＦＡＢ−ＭＳをとったとこ
ろ、図４に示すスペクトルが得られた。これよりこの白
色粉末の分子量は 424となり、上記の結果と合致した。
構成糖を調べたところ、Ｎ−アセチルグルコサミンのみ
が検出された。また、 1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲ
による構造解析を行なったところそれぞれ図２および図
３に示すスペクトルが得られた。この結果から、得られ
た白色粉末はＮ−アセチルグルコサミンがβ１→６結合
で２分子結合した２−アセトアミド−６−Ｏ−（２−ア
セトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（以下、β１→６
（GlcNAc）2 と記載する）であることが確認された。さ
らに、この白色粉末についてＦＡＢ−ＭＳをとったとこ
ろ、図４に示すスペクトルが得られた。これよりこの白
色粉末の分子量は 424となり、上記の結果と合致した。
【００２７】実施例２ コロイダルキチンを用いたβ１
→６（GlcNAc）2 の製造 常法によってキチン粉末から調製したコロイダルキチン
1ｇ（乾燥重量 0.2ｇ）を0.02Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ 7.0） 7ｍｌと混合し、さらに実施例１と同様の方法
で得られた粗酵素液 2ｍｌを加えてよく撹拌しながら37
℃で一晩反応させた。この反応液を沸騰水浴中で10分間
加熱して酵素を失活させ、次いでエタノール20ｍｌを加
えて析出した不溶性画分および未反応物を遠心分離によ
り除去した。
→６（GlcNAc）2 の製造 常法によってキチン粉末から調製したコロイダルキチン
1ｇ（乾燥重量 0.2ｇ）を0.02Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ 7.0） 7ｍｌと混合し、さらに実施例１と同様の方法
で得られた粗酵素液 2ｍｌを加えてよく撹拌しながら37
℃で一晩反応させた。この反応液を沸騰水浴中で10分間
加熱して酵素を失活させ、次いでエタノール20ｍｌを加
えて析出した不溶性画分および未反応物を遠心分離によ
り除去した。
【００２８】このようにして得られた溶液を、実施例１
と同様の条件で高速液体クロマトグラフィーにより分画
し、集めたピーク画分をエバポレーターで減圧濃縮する
ことにより白色のβ１→６（GlcNAc）2 粉末93ｍｇを得
た。
と同様の条件で高速液体クロマトグラフィーにより分画
し、集めたピーク画分をエバポレーターで減圧濃縮する
ことにより白色のβ１→６（GlcNAc）2 粉末93ｍｇを得
た。
【００２９】実施例３ アルテロモナス属菌株ＯＫ2607
の培養液からのβ１→６（GlcNAc）2の回収 上述のアルテロモナス属菌株ＯＫ2607を、 0.5％キチン
粉末を含むＺｏＢｅｌｌ 2216Ｅ改変液体培地 100ｍｌ
において25℃で60時間培養した後、 19000Ｇで20分間遠
心することにより菌体を沈殿させて上清を回収した。
の培養液からのβ１→６（GlcNAc）2の回収 上述のアルテロモナス属菌株ＯＫ2607を、 0.5％キチン
粉末を含むＺｏＢｅｌｌ 2216Ｅ改変液体培地 100ｍｌ
において25℃で60時間培養した後、 19000Ｇで20分間遠
心することにより菌体を沈殿させて上清を回収した。
【００３０】回収した上清85ｍｌに等量のエタノールを
添加し、タンパク質等の高分子画分を析出させて濾別し
た後、エバポレーターを用いる減圧濃縮により濾液から
溶媒を除去した。得られた残渣にアセトニトリル−水
（75：25）混合溶液を添加して試料を溶解し、0.45μｍ
のフィルターに通して不純物を除去した。
添加し、タンパク質等の高分子画分を析出させて濾別し
た後、エバポレーターを用いる減圧濃縮により濾液から
溶媒を除去した。得られた残渣にアセトニトリル−水
（75：25）混合溶液を添加して試料を溶解し、0.45μｍ
のフィルターに通して不純物を除去した。
【００３１】この溶液を実施例１と同様の条件において
高速液体クロマトグラフィーで分画し、回収した画分を
エバポレーターにより減圧濃縮することにより白色のβ
１→６（GlcNAc）2 粉末 190ｍｇを得た。
高速液体クロマトグラフィーで分画し、回収した画分を
エバポレーターにより減圧濃縮することにより白色のβ
１→６（GlcNAc）2 粉末 190ｍｇを得た。
【００３２】
【発明の効果】以上のように、この発明によると、食品
および医薬品分野で有効利用が期待され、また糖質化学
の研究用としても極めて有用性が高いβ１→６結合を有
するオリゴ糖、特に２−アセトアミド−６−Ｏ−（２−
アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−２−デオキシ−Ｄ−グルコースを、危険な化学試
薬を用いることなく穏やかな条件下で生化学的に調製す
ることができる。
および医薬品分野で有効利用が期待され、また糖質化学
の研究用としても極めて有用性が高いβ１→６結合を有
するオリゴ糖、特に２−アセトアミド−６−Ｏ−（２−
アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−２−デオキシ−Ｄ−グルコースを、危険な化学試
薬を用いることなく穏やかな条件下で生化学的に調製す
ることができる。
【００３３】また、この発明の製造方法は、複雑な工程
を必要とせず、高い収率をあげることができる。
を必要とせず、高い収率をあげることができる。
【図１】アルテロモナス属菌株ＯＫ2607の菌体外産生物
をキチンに反応させ、不溶性成分を除去した後の溶液の
高速液体クロマトグラフィーの結果を示すチャート図。
をキチンに反応させ、不溶性成分を除去した後の溶液の
高速液体クロマトグラフィーの結果を示すチャート図。
【図２】図１に示す高速液体クロマトグラフィーにおい
て、流出開始後約30分で現われるピーク画分から得られ
た白色粉末の 1Ｈ− 1Ｈ ＣＯＳＹ ＮＭＲスペクトル
を示す図。
て、流出開始後約30分で現われるピーク画分から得られ
た白色粉末の 1Ｈ− 1Ｈ ＣＯＳＹ ＮＭＲスペクトル
を示す図。
【図３】図１に示す高速液体クロマトグラフィーにおい
て、流出開始後約30分で現われるピーク画分から得られ
た白色粉末の13Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図。
て、流出開始後約30分で現われるピーク画分から得られ
た白色粉末の13Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図。
【図４】図１に示す高速液体クロマトグラフィーにおい
て、流出開始後約30分で現われるピーク画分から得られ
た白色粉末のＦＡＢ−ＭＳスペクトルを示す図。
て、流出開始後約30分で現われるピーク画分から得られ
た白色粉末のＦＡＢ−ＭＳスペクトルを示す図。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (6)
- 【請求項１】 アルテロモナス属菌の菌体外産生物の存
在下においてキチンを分解することを特徴とするβ１→
６結合を有するオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項２】 アルテロモナス属菌を所定の時間培養し
た後の培地から前記菌体外産生物を抽出し、キチンを含
有する液中に添加する請求項１記載のβ１→６結合を有
するオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項３】 アルテロモナス属菌の培養に用いる培地
に予めキチンを含有せしめ、該培地でアルテロモナス属
菌を所定の時間培養する請求項１記載のβ１→６結合を
有するオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項４】 アルテロモナス属菌の菌体外産生物の酵
素成分の存在下で行なう請求項１ないし３のいずれか１
項に記載のβ１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項５】 前記アルテロモナス属菌がアルテロモナ
ス属菌株ＯＫ2607である請求項１ないし４のいずれか１
項に記載のβ１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項６】 キチンからβ１→６結合を有するオリゴ
糖を生成することが可能な酵素を産生するアルテロモナ
ス属菌株ＯＫ2607。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8188793A JP2620030B2 (ja) | 1993-04-08 | 1993-04-08 | β１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8188793A JP2620030B2 (ja) | 1993-04-08 | 1993-04-08 | β１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06292590A JPH06292590A (ja) | 1994-10-21 |
| JP2620030B2 true JP2620030B2 (ja) | 1997-06-11 |
Family
ID=13758963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8188793A Expired - Lifetime JP2620030B2 (ja) | 1993-04-08 | 1993-04-08 | β１→６結合を有するオリゴ糖の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2620030B2 (ja) |
-
1993
- 1993-04-08 JP JP8188793A patent/JP2620030B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06292590A (ja) | 1994-10-21 |
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