JPH04112789A

JPH04112789A - 軟腐病菌の固定化方法

Info

Publication number: JPH04112789A
Application number: JP2232990A
Authority: JP
Inventors: Yoshiyuki Takahara; 高原　吉幸; Tetsuya Iwabuchi; 哲哉岩渕; Masayuki Shioda; 正幸塩田
Original assignee: Central Glass Co Ltd
Current assignee: Central Glass Co Ltd
Priority date: 1990-09-03
Filing date: 1990-09-03
Publication date: 1992-04-14
Anticipated expiration: 2009-10-19
Also published as: JPH0681594B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、学名エルビニア・力ロトボーラ（Ｅｒｗｉｎ
ｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）に属する処理された細菌
を生きたまま植物に散布して、軟腐病を防除する方法に
関し、その固定化方法に関するものである。

本発明における病害防除の対象とされる植物は、ハクサ
イ、キャベツ、セロリ、レタス、ニンジン、ダイコン、
ワサビ、ジャガイモ、タバコ、トマトおよびシクラメン
など多数があり、エルビニア・カロトボーラ細菌により
引起こされるいわゆる軟腐病（Ｓｏｆｔ　ｒｏｔ　ｄｉ
ｓｅａｓｅ）が対象病害である。

（従来技術）エルビニア・カロトボーラ細菌により引起こされる、い
わゆる軟腐病に対する防除方法として、ストレプトマイ
シン等の抗生物質製剤や、ボルドー液のような銅剤の散
布が行われている。

（発明が解決しようとする問題点）しかしながら、これらの薬剤を用いた場合にはその防除
効果が満足すべきものではないうえに、病原菌以外の有
益な細菌までも死滅させてしまうことや、環境汚染上の
問題、更に薬害の問題がある。また、抗生物質について
は、それに対する抵抗性をもった細菌の出現があり、こ
れらが問題となっている。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは、エルビニア・力ロトボーラ細菌の突然変
異処理株のなかから、病原性を有する系統の同細菌と競
合してよく生育し、かつ、病原性をもたない系統を選び
出した。これらの病原性を欠失させたエルビニア・カロ
トポーラ細菌の生菌を前記対象植物の根部、または葉部
に接種する事により、軟腐病を有効に防除できる事を見
い出し本発明を完成した。

すなわち、本発明は病原性を欠失させた軟腐病菌をアル
ギン酸ナトリウムおよび高分子物質を用いて固定化する
ことを特徴とする対軟腐病の微生物農薬の提供にある。

エルビニア・カロトボーラ細菌は、多くの植物の貯蔵組
織に駄馬を引きおこし、植物組織の細胞間接合物質とし
て働いているペクチン物質を分解するペクチン分解酵素
生産能を持ったことに起因すると云われており、これら
の細菌は不偏的に土壌に存在している事が報告されてい
る。例えば５年以上この菌の宿主となる作物を作ってい
ない畑でも軟腐病の発生が観察される場合があり、この
菌の生態はく津山博之、植物防疫　第３４巻２９４頁−
２９８頁１９８０年によれば）次のように考えられてい
る。例えば、白菜の場合には播種後、４０日位から根部
の周囲でこの細菌が増殖し、根固土壌、葉部など殆どあ
らゆる箇所に存在が認められるようになる。また台風や
昆虫、あるいは日常の農作業などにより白菜に傷がつく
と、そこから細菌が侵入し、気候条件さえ整えば一晩の
うちに病原菌濃度が上昇し病斑が認められることになる
。そこでかかる現象を阻止するため病原性のある細菌に
替って病原性の無いエルビニア・力ロトボーラ細菌が、
根圏土壌や葉部で病原株と同等に増殖させることが可能
になれば、軟腐病を防除することが期待できるためかか
る観点から鋭意研究の結果、軟腐病の病原性を突然変異
あるいは変異処理法により欠失させ、かつ該病原株に対
して有効に拮抗作用を持ついくつかの有望な細菌株を得
、以下の菌が有効に軟腐病を防除することを見出し特許
出願を行った（特願平１−２３９６２２）。なお、これ
らの菌は以下の如く微工研に寄託されている。

Ｉルビエフ　・ｔＩｒ１トボーラ　サブスビ　カ■トネ
ーラＣＧＥ６Ｍ１４微工研寄菌第１０９９８号エルビニ
７　・ｔＩＯ）ネーラ　サブスビ　カ■トネーラＣＧＥ
６Ｍ１６微工研寄菌第１０９９９号エルビニ７　・　力
ＩＩ＋）＊−ラ　サプスビ　カ■トボーラＣＧＥ１０１
’１２微工研寄菌第１１０００号エルビ＝７　・　力■
トボーラ　サブスビ　カロトネーラＣＧＥ１１Ｍ５微工
研寄菌第１１００１号本発明は、これら病原性を欠失さ
せた軟腐病菌の固定化方法およびこれを用いる防除方法
に関するものである。エルビニア・力ロトボーラ細菌は
水中では死滅し、例えば１力月後には始めの濃度の１０
００分の１以下に減少してしまう。

また、白菜など軟腐病菌の発生しやすい植物が栽培され
ていない土壌中では高濃度で菌を散布したとしても１週
間程度で菌の検出限界以下にその菌濃度を下げてしまう
。

このように通常の状態では、エルビニア・力ロトボーラ
細菌は高い菌濃度を長期間保つことはできないため、該
菌体を微生物農薬として用いる場合、病原性欠失菌を培
養してかつ使用するまでの期間の保存性が問題となる。

また使用形態として粉剤、粒剤、液剤もしくは水和剤な
どのような形態で使用するとしてもなんらかの方法によ
り、一定の問直濃度を高く保つ必要がある。その試みの
一つとして菌の固定化があり、種々の菌について検討さ
れている。しかしながら、エルビニア・カロトボーラ細
菌についての固定化の試みはなされていない。

本発明はこれらエルビニア・カロトボーラ細菌の固定化
について種々検討した結果、アルギン酸ナトリウムと高
分子物質および必要により鉱物粉末の存在下で病原性を
欠失させた軟腐病菌とを混合−、グルコン酸カルシウム
水溶液等のようなカルシウムイオン、もしくはマグネシ
ウム等の２価あるいは３価の金属イオンを含む水溶液中
に滴下することにより固定化し、保存することで、数カ
月以上高い菌濃度を保ったまま固定化することを可能と
したものである。

以下、本発明を詳述する。まず、軟腐病菌の病原性欠失
株を適当な液体培地で培養した後、遠心して集菌を行い
培地成分を取り除く。使用する液体培地は菌が増殖する
ものであれば、特に限定することはなく通常使用されて
いる８０２培地、ブイヨン培地等の培地で増殖させるこ
とができる。次に、湿菌体に滅菌水と滅菌したアルギン
酸ナトリウムと高分子物質、例えばザンサンガムをよく
混合し、その混合物をやはり滅菌したグルコン酸カルシ
ウム、塩化カルシウム等のカルシウム含有溶液中に滴下
し、湿菌体の固定化を行うものであるがこれらの操作は
無菌化で行なわねばならない。

使用する高分子物質としては植物および細菌由来の多糖
類であるザンサンガム、グアーガム、トラガカントガム
、カラヤザム、ローカストガムなどやポリビニルアルコ
ール、ポリエチレングリコールおよびレシチン等が長期
の菌濃度保持の点から好ましいものである。固定化する
時のアルギン酸ナトリウムの濃度は１〜５Ｗ％でより好
ましくは１〜３ｗ％であり、添加する高分子物質は０．
１〜２０％が好ましく、より好適には１〜１０％である
。また、担体（ビーズ状）を形成するためのカルシウム
塩の濃度は２０ｍＭ〜ＩＭ、好ましくは５０　ｍ　Ｍ　
〜１００　ｍ　Ｍの濃度である。

さらに、このようにして得られる高濃度の菌体を含む担
体は乾燥することにより保存時の形状をより安定化させ
ることができる。即ち一ズ表面の水分を乾燥することに
より保存中の水分の漏出を防ぎ、安定した形状と高い菌
体の生存率を保つことができる。

かかる乾燥は、真空ポンプによる吸引、あるいは乾燥空
気の導入等の方法で行うことができ、一般に用いられる
乾燥のための装置を用いることができる。

次に実施例を示すが、本発明は以下の実施例に限定され
るものではない。実施例に用いた培地の組成を次に示す
。

８０２培地：ポリペプトン１０ｇ、酵母エキス２ｇ、Ｍ
ｇ５Ｏ，・７８ｚＯＩｇ、水１１　、ｐＨ７，０（プレ
ートの場合は、寒天１５ｇを含む）実施例１８０２培地にエルビニア・カロトボーラＣＧＥ１０Ｍ２
〔微工研菌寄託第１１０００号（ＦＥＲＭＰ−１１００
０）として寄託されている〕を接種し、３０℃で１５時
間培養した。培養液は遠心分離機を用いて集菌を行い菌
体懸濁液を得た。１Ｍ薗した蒸留水１０−アルギン酸ナ
トリウム０．３ｇとポリビニルアルコール０．３ｇに菌
体懸濁液を計算上、担体単位ダラム当り約ｌＸｌ０９個
の菌体が存在するように加え、よく混合して５０ｍＭグ
ルコン酸カルシウム溶液に滴下し固定化菌体を得た。つ
いで該担体を室温で保存し菌体の経時変化を調べた。ま
た高分子物質を添加しないで固定化した場合の結果を第
１表に示す。

実施例２実施例−と同様な方法で、病原性を欠失した菌体にアル
ギン酸ナトリウム０．３ｇとザンサンガム、レシチンの
植物、細菌由来の多糖類０．３ｇと滅菌水１０−に菌体
懸濁液を計算上、担体単位り゛ラム当り約ｌＸｌ０’個
の菌体が存在するように加えてよく混合し、５０ｍＭの
グルコン酸カルシラム溶液に滴下し、固定化菌体を得た
。

ついで該担体を室温で保存し菌体の経時変化を調べた。

その結果を第２表に示す。

実施例３実施例１と同様な方法で、病原性を欠失した菌体をアル
ギン酸ナトリウム０．３ｇとザンサンガム、カラヤガム
、グアーガム、トラガヵントガムおよびローカストガム
などの多糖類０．３ｇと滅菌水１０ｍ１に菌体懸濁液を
計算上、担体単位ダラム当り約ｌＸｌ０９個の菌体が存
在するように加えてよく混合したものを５０ｍＭグルコ
ン酸カルシウム溶液に滴下し、菌体を固定化した。つい
で滅菌水で担体を洗浄後、ポンプで４時間吸引すること
により乾燥させた。

しかるのち、該菌体を室温で保存し菌体の経することに
より乾燥させた。しかるのち該担体を室温で保存して菌
濃度の経時変化を調べその結果を第４表に示す。

このとき、乾燥処理を行なわながったものは、３力月後
には菌体数が０．０４　Ｘ　１０’／ｇであった。

実施例５病原性を欠失させたエルビニア・カロトボーラＣＧＥ６
Ｍ１６（微工研菌寄託第１０９９９号（ＦＥＲＭＰ−１
０９９９）として寄託されている〕を用いた以外は実施
例１と同様な方法で、アルギン酸ナトリウム０．３ｇと
ザンサンガム、グアーガム、ポリビニルアルコールをそ
れぞれ０．３ｇと滅菌水１０ｍ１に菌体懸濁液を計算上
、担体単位ダラム当り約１×１０９個の菌体が存在する
ように加えてよく混合したものを５０ｍＭグルコン酸カ
ルシウム溶液時変化を調べた。その結果を第３表に示す
。

実施例４実施例１と同様な方法で、病原性を欠失した菌体にアル
ギン酸ナトリウム０．３ｇとポリビニルアルコール（平
均分子量１　、５００）、ポリエチレングリコールなど
の高分子物質０．３ｇと滅菌水１０戚に菌体懸濁液を計
算上、担体単位ダラム当り約１×１０９個の菌体が存在
するように加えてよく混合し、さらに鉱物粉体であるタ
ルク０．５ｇを加えて５０ｍＭグルコン酸カルシウム溶
液に滴下し菌体を固定化した。

ついで滅菌水で担体を洗浄後、ポンプで吸引に滴下し、
菌体を固定化した。ついで滅菌水で担体を洗浄後ポンプ
吸引により乾燥させた。これを室温で保存して菌体濃度
の経時変化を調べその結果を第５表に示す。

（発明の効果）本発明により、軟腐病菌の病原性欠失様の安定した固定
化方法が解決し、従来防除が困難とされてきた植物細菌
病の主要な一つである軟腐病を生物防除手段により効果
的に防除することが可能となった。本発明では生きた細
菌を、固定化しいわゆる生物防除策として用いる方法で
あり、しかも薬害がなく安全な軟腐病防除方法を提供す
るものである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）病原性を突然変異または、変異処理により欠失さ
せた軟腐病菌を、アルギン酸ナトリウムおよび高分子物
質を用いて固定化することを特徴とする軟腐病菌の固定
化方法。
（２）病原性を突然変異または、変異処理により欠失さ
せた軟腐病菌を、アルギン酸ナトリウムおよび高分子物
質を用いて固定化し、ついで乾燥することを特徴とする
軟腐病菌の固定化方法。
（３）高分子物質が植物および細菌由来の多糖類または
ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、レシ
チンであることを特徴とする請求項１および２記載の軟
腐病菌の固定化方法。
（４）鉱物粉末と請求項３の高分子物質を共に混合する
ことを特徴とする請求項１および２記載の軟腐病菌の固
定化方法。