JP3040322B2 - 微生物農薬およびその製造方法 - Google Patents
微生物農薬およびその製造方法Info
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Description
ルビン酸を含有させて、保存性を向上させた軟腐病、黒
腐病およびイネ苗立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬
およびその製造方法に関するものであり、特に軟腐病の
病原性を欠失させた非病原性エルビニア・カロトボーラ
細菌を用いた軟腐病、黒腐病およびイネ苗立枯細菌病の
防除に有効な微生物農薬およびその製造方法に関するも
のである。
野で、微生物農薬は、生物的防除のための重要な手段と
して期待されている。
な課題は、製造してからのち、流通、輸送、保管の段階
を経て、使用する段階まで、農薬としての効果を示すに
必要なだけの微生物の生存率、そして、活性を保った状
態で保存し続ける必要があるというところにある。さら
には、従来の化学農薬により近い、粉剤、水和剤のよう
な形態で供給して、現場での散布方法、使用する器具、
道具などの点について、可能な限り、従来の化学農薬に
より近い方法で、用い得るならば、なお、好ましい。
しては、[A]諸々の無機あるいは高分子の担体に固定
化する方法(『農業及び園芸』第69巻第2号、42−
48、本間善久著「拮抗微生物による土壌病害の生物的
防除」)、[B]ピートモスや藁などの有機物を担体と
して保持する方法(日本植物病理学会バイオコントロー
ル研究会レポートNo.4、16−23「微生物農薬の
登録・バクテローズの販売に到る経過と問題点」)(特
開平3−77803号「土壌病害防止法」)、[C]生
菌液の状態で輸送し、圃場に有機物資材と共に供して、
増殖させて効果を発揮させる方法(日本植物防疫協会・
生物農薬の開発・利用に関するシンポジウム講演要旨1
28−133「ナス科作物青枯病の生物防除剤AM−3
01の開発・非病原性Pseudomonas gra
dioliの開発」)など、様々なものが試みられてい
る。
の点で充分ではない、[B’]大量生産に適さない、
[C’]現場で使用する際に調製に労力がかかる、など
の問題点があった。
る方法としては、凍結乾燥による方法が考えられる。す
なわち、適切な手順、添加剤を予め選んで凍結乾燥を行
なえば、微生物を長い期間、安定に保存することができ
るようになることが期待できる。
軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エルビニア・カロ
トボーラ細菌を用いた軟腐病、黒腐病およびイネ苗立枯
細菌病の防除に有効な微生物農薬の製造工程における凍
結乾燥工程で、良好な保存性を得ることを可能とするよ
うな凍結乾燥方法を見出し、本発明に到達した。
失させた非病原性エルビニア・カロトボーラ細菌をアス
コルビン酸とともに凍結乾燥させたことを特徴とする軟
腐病、黒腐病およびイネ苗立枯細菌病の防除に有効な微
生物農薬およびその製造方法である。さらには、軟腐病
の病原性を欠失させた非病原性エルビニア・カロトボー
ラ細菌がエルビニア・カロトボーラCGE234M40
3菌株、または、エルビニア・カロトボーラCGE10
M2菌株であることを特徴とする軟腐病、黒腐病および
イネ苗立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬およびその
製造方法である。
た非病原性エルビニア・カロトボーラ細菌を用いた軟腐
病、黒腐病およびイネ苗立枯細菌病の防除に有効な微生
物農薬について、その微生物農薬の製造工程において、
凍結乾燥を行ない、保存性を向上させるための手段をさ
らに詳細に述べる。
ア・カロトボーラ細菌により引き起こされる、難防除な
植物病害の一種である軟腐病を、非病原化したエルビニ
ア・カロトボーラ細菌を用いることにより、有効に防除
することができることを提案した(特公平6−9228
6号)。さらに、広範な菌株に対して、優れた抗菌活性
を示す非病原性エルビニア・カロトボーラCGE234
M403菌株を用いることについても提案している(特
公平6−38746号)。
った結果、この軟腐病の防除に有効な非病原性エルビニ
ア・カロトボーラ細菌を有効成分とする微生物農薬を施
用することにより、キサントモナス・キャンペストリス
により引き起こされる黒腐病や、シュードモナス・プラ
ンタリイにより引き起こされるイネ苗立枯細菌病をも有
効に防除することができることを見出し、それぞれ特許
出願した(特願平5−101192号、特願平4−24
1015号)。
ニア・カロトボーラ細菌を作成する方法について述べ
る。本発明者らは、軟腐病斑のある、または、健全な野
菜類から多数のエルビニア属細菌を採取した。非病原性
エルビニア・カロトボーラ細菌は、これらの軟腐病菌を
変異処理して、その病原性を欠失させることにより作成
した。変異法としては、一般的に用いられる変異試剤、
例えば、エチルメタンスルホニル、ニトロソグアニジン
などや紫外線を用いる方法(微生物学実験法、微生物研
究法懇談会編288頁−306頁 講談社 1982
年、または、微生物遺伝学実験法、石川辰夫編 3頁−
32頁 共立出版 1982年)が知られており、これ
らに準じて処理すればよい。
の病原性の発現の主たる要因は、この細菌により分泌さ
れるペクチナーゼ、特にペクチン酸リアーゼであるとさ
れている(後藤正夫著 新植物細菌病学 166頁 ソ
フトサイエンス社 1981年)。そこで、非病原性エ
ルビニア・カロトボーラ細菌のスクリーニングは、ペク
チナーゼ分泌能の低下した菌株を拾い出し、ハクサイ切
片を用いた病原性試験により行なった。病原性試験は、
ハクサイの葉切片に傷を付け、高濃度の検定菌液を塗布
し、水分存在下、28℃の恒温槽に24時間静置した後
にその病斑長を測定することにより行なった。
欠失させた非病原性エルビニア・カロトボーラ細菌を病
原株と混合して傷を付けたハクサイ切片に接種したとこ
ろ、軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エルビニア・
カロトボーラ細菌の中から病原株の増殖を抑制して病斑
を生じさせないか、または、病斑形成速度を大幅に低下
させる菌株が得られた。
下の如く、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託さ
れ、以下の寄託番号が付与されている。 エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ CGE6M14 FERM P−10998 エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ CGE6M16 FERM P−10999 エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ CGE10M2 FERM P−11000 エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ CGE11M5 FERM P−11001 エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ CGE234M403 FERM BP−4328 本発明は、これらの軟腐病の病原性を欠失させた非病原
性エルビニア・カロトボーラ細菌を用いるものである
が、好ましくはCGE234M403菌株(FERM
BP−4328)またはCGE10M2菌株(FERM
P−11000)、より好ましくはCGE234M4
03菌株(FERM BP−4328)である。
原性エルビニア・カロトボーラ細菌を用いた本発明の微
生物農薬による、病害防除の対象とされる植物は、白
菜、キャベツ、セロリ、レタス、ニンジン、ダイコン、
ワサビ、ジャガイモ、タバコ、トマト、シクラメンなど
多数があり、エルビニア・カロトボーラ細菌により引き
起こされる、いわゆる、軟腐病が対象病害である。さら
には、キサントモナス・キャンペストリスにより、キャ
ベツ、ダイコン、ブロッコリー、ハクサイなどのアブラ
ナ科作物に生じる黒腐病や、シュードモナス・プランタ
リイにより、イネの苗に生じるイネ苗立枯細菌病なども
本発明の微生物農薬の対象病害である。
細菌病の防除に有効な微生物農薬は、前述の軟腐病の病
原性を欠失させた非病原性エルビニア・カロトボーラ細
菌と、アスコルビン酸とを混合し、また、必要に応じ
て、適宜、その他の保護剤、希釈剤などを加えて凍結乾
燥することにより製造される。
苗立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬の製造方法を詳
述する。まず、軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エ
ルビニア・カロトボーラ細菌を無機塩培地などの適当な
培地で前培養した後、無機塩培地などの適当な培地でジ
ャーファーメンターにより、培養する。
菌体を回収する。次に、回収した菌体を、保護液に懸濁
する。この懸濁液を凍結した後、凍結乾燥機により乾燥
する。保護液の成分としては、アスコルビン酸を必須成
分とし、必要に応じて、適宜、その他の保護剤、希釈剤
などを添加する。その他の保護剤、希釈剤としては、例
えば、既に特許出願済(特開平4−311391号)の
明細書に記載されているような種々の糖類、例えば、サ
ッカロース、グルコース、フルクトース、ソルビトール
などの糖類やビーフエキスなどがある。保護液中のアス
コルビン酸濃度としては、下限0.01%、上限10
%、好ましくは下限0.1%、上限5%とするのが、保
存性向上にとってよい。保護液中のアスコルビン酸濃度
が下限より小さい場合には、充分な保存性を得ることが
できなくなる場合があるため、好ましくない。また、上
限より大きくても、保存性の向上にさほど変化はなく、
経済的に不利となるだけであり、好ましくない。
造される。
るが、本発明は、これらの実施例によって限定されるも
のではない。なお、実施例に用いた培地の組成を次に示
す。
水素二アンモニウム・リン酸二水素アンモニウム各6.
25g、硫酸マグネシウム2.5g、硫酸カリウム2.
5g、塩化ナトリウム0.375g、硫酸第二鉄37.
5mg、硫酸亜鉛8.5mg、硫酸銅3.75mg、硫
酸マンガン1.9mg、塩化カルシウム7.5mg、ホ
ウ酸ナトリウム0.85mg、モリブデン酸アンモニウ
ム37.5μg、水1L、アンモニア水にてpH7.0
とする。
M403菌株(FERM BP−4328)を200m
lの無機塩培地に接種し、前培養した後、4Lの無機塩
培地でジャーファーメンターにより、30時間培養す
る。培養後、遠心分離機による遠心分離にて、菌体を回
収した。菌体を、40%(w/w)サッカロースおよび
1%(w/w)アスコルビン酸を含む、0.05Mリン
酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)の保護液に懸濁し
た。この懸濁液を凍結した後、凍結乾燥機により2日間
乾燥する。このようにして、微生物農薬を製造した。そ
の後、4℃にて保存し、微生物農薬中の菌の生存率を経
時的に測定した。その結果を表1に示す。
含まない保護液にて微生物農薬を製造した。その後、同
様にして菌の生存率を測定した。その結果を表1に示
す。
ア・カロトボーラCGE234M403菌株(FERM
BP−4328)に代えて、非病原性エルビニア・カ
ロトボーラCGE10M2菌株(FERM P−110
00)を用いて、微生物農薬を製造した。その後、同様
にして菌の生存率を測定した。その結果を表1に示す。
含まない保護液にて微生物農薬を製造した。その後、同
様にして菌の生存率を測定した。その結果を表1に示
す。
る場合があるが、これは測定上のばらつきによるもので
ある。
可能な微生物農薬を調製することができるようになるた
め、微生物農薬の扱いやすさが向上する。
Claims (6)
- 【請求項1】軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エル
ビニア・カロトボーラ細菌をアスコルビン酸とともに凍
結乾燥させたことを特徴とする軟腐病、黒腐病およびイ
ネ苗立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬。 - 【請求項2】軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エル
ビニア・カロトボーラ細菌がエルビニア・カロトボーラ
CGE234M403菌株(FERM BP−432
8)である請求項1記載の軟腐病、黒腐病およびイネ苗
立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬。 - 【請求項3】軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エル
ビニア・カロトボーラ細菌がエルビニア・カロトボーラ
CGE10M2菌株(FERM P−11000)であ
る請求項1記載の軟腐病、黒腐病およびイネ苗立枯細菌
病の防除に有効な微生物農薬。 - 【請求項4】軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エル
ビニア・カロトボーラ細菌をアスコルビン酸とともに凍
結乾燥させるようにしたことを特徴とする軟腐病、黒腐
病およびイネ苗立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬の
製造方法。 - 【請求項5】軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エル
ビニア・カロトボーラ細菌がエルビニア・カロトボーラ
CGE234M403菌株(FERM BP−432
8)である請求項4記載の軟腐病、黒腐病およびイネ苗
立枯細菌病の防除に有効な微生物農薬の製造方法。 - 【請求項6】軟腐病の病原性を欠失させた非病原性エル
ビニア・カロトボーラ細菌がエルビニア・カロトボーラ
CGE10M2菌株(FERM P−11000)であ
る請求項4記載の軟腐病、黒腐病およびイネ苗立枯細菌
病の防除に有効な微生物農薬の製造方法。
Priority Applications (1)
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---|---|---|---|
JP6326912A JP3040322B2 (ja) | 1994-12-28 | 1994-12-28 | 微生物農薬およびその製造方法 |
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JP6326912A JP3040322B2 (ja) | 1994-12-28 | 1994-12-28 | 微生物農薬およびその製造方法 |
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Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH08183706A JPH08183706A (ja) | 1996-07-16 |
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---|---|---|---|---|
CN106867929B (zh) * | 2016-12-21 | 2020-06-23 | 河北省科学院生物研究所 | 一种胡萝卜软腐欧文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及应用 |
-
1994
- 1994-12-28 JP JP6326912A patent/JP3040322B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Title |
---|
Am.Potato J.,(1984)(RECD.1985)61(12)p.723−733 |
Biotechniques,(1989)7(5)p.449−450,452 |
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---|---|
JPH08183706A (ja) | 1996-07-16 |
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