JPH03251179A

JPH03251179A - 軟腐病菌の固定化方法および防除方法

Info

Publication number: JPH03251179A
Application number: JP2048053A
Authority: JP
Inventors: Yoshiyuki Takahara; 高原　吉幸; Masayuki Shioda; 正幸塩田
Original assignee: Central Glass Co Ltd
Current assignee: Central Glass Co Ltd
Priority date: 1990-02-28
Filing date: 1990-02-28
Publication date: 1991-11-08
Anticipated expiration: 2009-10-19
Also published as: JPH0681595B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、学名エルビニア・力ロトボーラ（Ｅｒｗｉｎ
ｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）に属する細菌の固定化方
法および該固定化物を散布して、軟腐病を防除する方法
に関するものである。

本発明における病害防除の対象とされる植物は、ハクサ
イ、キャベツ、セロリ、レタス、ニンジン、ダイコン、
ワサビ、ジャガイモ、タバコ、トマト、シクラメンなど
多数があり、エルビニア・カロトボーラ細菌により引起
こされるいわゆる軟腐病（Ｓｏｆｔ　ｒｏｔ　ｄｉｓｅ
ａｓｅ）が対象病害である。

（従来技術）エルビニア・カロトボーラ細菌により引起こされる、い
わゆる軟腐病に対する防除方法としては一般に、ストレ
プトマイシン等の抗生物質製剤や、ボルドー液のような
銅剤の散布か行われている。

（発明が解決しようとする問題点）しかしながら、これらの薬剤を用いた場合にはその防除
効果が満足すべきものではないうえに、病原菌以外の有
益な細菌までも死滅させてしまうことや、環境汚染上の
問題、更に薬害の問題がある。また、抗生物質について
は、それに対する抵抗性をもった細菌の出現があり、こ
れらが問題となっている。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは、エルビニア・力ロトボーラ細菌の突然変
異処理株のなかから、病原性を有する系統の同細菌と競
合してよく生育し、かつ、病原性をもたない系統を選び
出した。これらの病原性を欠失させたエルビニア・カロ
トボーラ細菌の生菌を前記対象植物の根部、または葉部
に接種する事により、軟腐病を有効に防除できる事を見
い出し本発明を完成した。

すなわち、本発明は病原性を欠失させた軟腐病菌を鉱物
粉末および高分子物質を用いて固定化することを特徴と
する対軟腐病の微生物農薬の提供にある。

エルビニア・カロトボーラ細菌は、多くの植物の貯蔵組
織に軟腐を引きおこし、植物組織の細胞間接合物質とし
て働いているペクチン物質を分解するペクチン分解酵素
生産能を持ったことに起因すると云われており、これら
の細菌は不偏的に土壌に存在している事が報告されてい
る。例えば５年以上この菌の宿主となる作物を作ってい
ない畑でも軟腐病の発生が観察される場合があり、この
菌の生態は（津山博之、植物防疫　第３４巻２９４頁−
２９８頁１９８０年によれば）次のように考えられてい
る。例えば、白菜の場合には播種後、４０日位から根部
の周囲でこの細菌が増殖し、根圏土壌、葉部など殆どあ
らゆる箇所に存在が認められるようになる。また台風や
昆虫、あるいは日常の農作業などにより白菜に傷がつく
と、そこから細菌が侵入し、気候条件さえ整えば一晩の
うちに病原菌濃度が上昇し病斑が認められることになる
。そこでかかる現象を阻止するため病原性のある細菌に
替って病原性の無いエルビニア・カロトボーラ細菌が、
根圏土壌や葉部で病原株と同等に増殖させることが可能
になれば、軟腐病を防除することが期待できるためかか
る観点から鋭意研究の結果、軟腐病の病原性を突然変異
あるいは変異処理法により欠失させ、かつ該病原株に対
して有効に拮抗作用を持ついくつかの有望な細菌株を得
、以下の菌が有効に軟腐病を防除することを見出し特許
出願を行った（特願平１−２３９６２２）。なお、これ
らの菌は以下の如く微工研に寄託されている。

エルビニ７　・　力日ト拳−ラ　サブスビ　カロトネー
ラＣＧＥ６Ｍ１４微工研寄菌第１０９９８号工）シヒニ
ア　・　方ロトネーラ　サプスビ　力［ＴＨ−ラＣＧＥ
６Ｍ１６　ｗＩ工研寄菌第１０９９９号エルビニ７　・
　力日ト本−ラ　サブスピ　カ日トネーラＣＧＥ１０Ｍ
２微工研寄菌第１１０００号エルピニア　・　ｆｌｏ）
ネーラ　サブスビ　カロトネーラＣＧＥ１１Ｍ５微工研
寄菌第１１００１号本発明は、これら病原性を欠失させ
た軟腐病菌の固定化方法およびこれを用いる防除方法に
関するものである。エルビニア・力０）ポーラ細菌は水
中では死滅し、例えば１力月後には始めの濃度の１００
０分の１以下に減少してしまう。

また、白菜などの栽培されていない土壌中では高濃度で
菌を散布したとしても１週間程度で菌の検出限界以下に
その菌濃度を下げてしまう。

このように通常の状態では、エルビニア・カロトボーラ
細菌は高い菌濃度を長期間保つことはできないため、該
菌体を微生物農薬として用いる場合、病原性欠失菌を培
養してかつ使用するまでの期間の保存性が問題となる。

また使用形態として粉剤、粒剤、液剤もしくは永和刑な
どのような形態で使用するとしてもなんらかの方法によ
り、一定の開園濃度を高く保つ必要がある。その試みの
一つとして菌の固定化があり、種々の菌について検討さ
れている。しかしながら、エルビニア・カロトボーラ細
菌についての固定化の試みはなされていない。

本発明はこれらエルビニア・カロトボーラ細菌の固定化
について種々検討した結果、鉱物粉末と高分子物質およ
び水存在下で病原性を欠失させた軟腐病菌とを混合、保
存することで、６ヵ月以上高い菌濃度を保ったまま固定
化することを可能としたものである。以下、本発明を詳
述する。まず、軟腐病菌の病原性欠失株を適当な液体培
地で培養した後、遠心分離して集菌を行い培地成分を取
り除く。使用する液体培地は菌が増殖するものであれば
、特に限定することはなく通常使用されている８０２培
地、ブイヨン培地等の培地で増殖させることができる。

次に、湿菌体に滅菌水と滅菌した高分子物質、例えばグ
アーガムをよく混合し、その混合物をやはり滅菌した鉱
物粉末に添加し、均一に混合するがこれらの操作は無菌
化で行なわねばならない。

使用する高分子物質としては植物及び細菌由来の多糖類
であるザンサンガム、グアーガム、トラガカントガムな
どやポリビニルアルコール、レシチン等が長期の菌濃度
保持の点から好ましいものである。一方担体として使用
する鉱物粉末としてはタルク、海砂、けいそう土、活性
白土、ゼオライト、石膏等が好ましく、特にタルクの使
用が望ましい。

また、使用する鉱物粉体、高分子物および水の組成比（
重量比）は鉱物粉体ｌに対して、高分子物質０．００１
〜１好ましくは０．１〜０．５、水０．０２〜ｌ好まし
くは０．２〜０．５の範囲が長期菌体の固定化保存に好
ましいものである。

次に実施例を示すが、本発明は以下の実施例に限定され
るものではない。実施例に用いた培地の組成を次に示す
。

８０２培地：ポリペプトン１０ｇ、酵母エキス２ｇ、Ｍ
ｇ５Ｏａ・７８．０１ｇ、水１ｊ２、ｐＨ７，０（プレ
ートの場合は、寒天１５ｇを含む）トリガルスキー改良培地：肉エキス４ｇ、乳１１１０ｇ
、ペフトンＬｏｇ　、ブロムチモールブルー０、０４ｇ
、寒天１６ｇ１水１ｆｆ、ｐＨ７，４実施例１８０２培地にエルビニア・力ロトボーラＣＧＥ１０Ｍ２
〔微工研菌寄託第１１０００号（ＦＥＲＭＰ−１１００
０）として寄託されている〕を接種し、３０℃で１５時
間培養した。培養液は遠心分離機を用いて集菌を行い菌
体ペレットを得た。菌体ペレット（菌数８．３×１０”
）に対して滅菌水１６４ｇとザンサンガム１６．−４ｇ
を混合したものを、タルク８２０ｇに添加し良く混合し
菌体固定化を行った。このものの菌濃度（計算値）は、
８．３　Ｘ　１０’／ｇである。得られた固定化物を室
温で保管し経時変化を調べた。その結果１日後、１週間
後、１力月後および３力月後の菌濃度は、それぞれ、１
．３　ｘ　１０８／　ｇ　、　１．４　Ｘ　１０’／ｇ
、４．８　Ｘ　１０７／ｇ、および９．５　Ｘ　１０’
／ｇであった。

実施例２実施例１と同様な方法で、高分子物質としてザンサンガ
ムの替りにグアーガム、トラガカンスガム、ポリビニル
アルコール（平均分子量；１５００）およびレシチンを
用いた場合の菌の生存率を、更に鉱物粉末としてタルク
の替りに海砂を用いた場合経時変化における菌の生存率
を測定し、その結果を第１表に示す。また比較として高
分子物質として何も用いない場合の菌の生存率も併せて
第１表に示す。

第１表単位：菌数７ｇ実施例３２０００分の１ワグネルボノトに赤玉土と腐葉土とを２
対１の割合で配合した培土を詰めた。肥料としては、ポ
ット当り高度化成肥料（８：８：８）を２５ｇ混入した
。このポットに白菜（検品２号）を播種後、３５日目に
実施例１で作成した固定化菌体物（１，３Ｘ　１０’／
ｇ）　１０ｇを根及び葉上に散布した。播種６６日目に
葉１ｃａｌを採取し希釈液をトリガルスキー改良培地に
塗布し菌体濃度を求めた。

葉上の検定菌濃度は、２．２　Ｘ　１０’／ＣＩｌ＋で
あった。

実施例４実施例２の高分子物質としてグアーガムを用いて作成し
た固定化物を露地栽培した白菜３０株について１株当り
１０ｇ（菌量的１０９）散布した。１週間後、外薬を採
り葉の裏側１−をすり潰し希釈後トリガルスキー改良培
地プレートに塗布し黄色のコロニーを数えた結果、１０
枚の葉のうち５枚に散布したＣＧＥ１０Ｍ２株が検出さ
れ、菌濃度は１〜２　ＸＩＯ’／ｃｎｆを示した。なお
、これらは引続き栽培を続け２．５ケ月後に収穫するま
で全く軟腐病の発生は認められなかった。一方隣接する
露地栽培において固定化物を散布しないで栽培したも−
のは約３０％の軟腐病の発生が認められた。

実施例５８０２培地にエルビニア・カロトボーラＣＧＥ６Ｍ１６
〔微工研菌寄託第１０９９９号（ＦＥＲＭＰ−１０９９
９）として寄託されている〕を接種し、３０℃で１５時
間培養した。培養液を遠心分離機を用いて集菌し菌体ベ
レフトを得た。菌体ベレット（菌数７．２Ｘ１０”）に
対して滅菌水１６４ｇとポリビニルアルコール１６．４
ｇを混合したものを、タルク８２０ｇに添加し良く混合
した。この場合の菌濃度（計算値）は、７．２　Ｘ　１
０７／ｇである。得られた固定化物は室温で保管し経時
変化を調べた。その結果１週間後、１力月後および３力
月後の菌濃度は、それぞれ、１、ＯＸ　１０’／ｇ、５
．５　Ｘ　１０’／ｇ、および１．６　Ｘ　１０７／ｇ
であった。

（発明の効果）本発明により、軟腐病菌の病原性欠失株の安定した固定
化方法が解決し、従来防除が困難とされてきた植物細菌
病の主要な一つである軟腐病を生物防除手段により効果
的に防除することが可能となった。本発明では生きた細
菌を、固定化しいわゆる生物防除策として用いる方法で
あり、しかも薬害がなく安全な軟腐病防除方法を提供す
るものである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）病原性を欠失させた軟腐病菌を鉱物粉末および高
分子物質を用いて固定化することを特徴とする軟腐病菌
の固定化方法。
（２）病原性を欠失させた軟腐病菌を鉱物粉末および高
分子物質を用いて固定化し、土壌に施用することを特徴
とする軟腐病の防除方法。
（３）鉱物粉末がタルクまたは海砂であることを特徴と
する請求項１および２記載の軟腐病菌の固定化方法およ
び防除方法。
（４）高分子物質が植物および細菌由来の多糖類、ポリ
ビニルアルコールまたはレシチンであることを特徴とす
る請求項１および２記載の軟腐病菌の固定化方法および
防除方法。