JPH0377818A

JPH0377818A - う蝕及び歯周病の予防剤

Info

Publication number: JPH0377818A
Application number: JP1214702A
Authority: JP
Inventors: Keijiro Uchino; 内野　敬二郎; Toshiharu Matsuo; 松尾　俊治; Toshikatsu Shoji; 東海林　敏勝; Masaya Iwamoto; 昌也岩本
Original assignee: Nippon Flour Mills Co Ltd
Current assignee: NIPPN Corp
Priority date: 1989-08-21
Filing date: 1989-08-21
Publication date: 1991-04-03
Anticipated expiration: 2013-07-02
Also published as: JP2772552B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、虫歯菌に対する増殖阻止効果を有するう蝕及
び歯周病の予防剤に関する。

（従来技術）う蝕の原因菌である口腔内細菌ストレプトコッカス・ミ
ュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎ
ｓ　；以下Ｓ、　　ミニ−タンスという。）は、食物中
のショ糖から粘着性グルカンを生成する。これが引金と
なって歯垢が形成、さらには歯周病の発生を引き起こす
ことが知られている。

従って、このう蝕及び歯周病を予防するために、原因菌
であるＳ、ミュータンスに対する抗菌剤、粘着性グルカ
ン生成酵素（グルコシルトランスフェラーゼ）阻害剤等
が研究されているが、効果が高くて、副作用が少ないよ
うなう蝕子防剤は未だ見出されていない。

（発明が解決しようとする課題）そこで、効果が高くて、副作用がなく、しかも安価に製
造することができろう蝕子防剤が望まれている。

（課題を解決するための手段）このような状況下で、本発明者等は、天然品で、安全性
が高く、しかも安価に製造できるものを求め鋭意研究を
行なったところ、ビンロウジ（檀椰子）の抽出物に強い
虫歯菌への増殖阻止効果があることが認められ、う蝕及
び歯周病の予防をすることができる口腔用組成物が得ら
れることを発見し、本発明を完成するに至った。

なお、ビンロウジとは、東南アジア各地等に産するビン
ロウシュ〔アレ力・カテチュ・リンネ（Ａｒｅｃａ　ｃ
ａｔｅｃｈｕ　Ｌ、）　］　　（ヤシ科）の果皮を除い
た種子であり、収れん、唾液分泌促進案、条虫駆除薬な
どとして、また縮瞳薬臭化水素酸アレコリンの原料とし
て知られている。

既に、ビンロウジの抽出エキスについては、粘着性グル
カン生成酵素であるグルコシルトランスフェラーゼの阻
害作用を有するものであることが知られている（特開昭
５８−１２１２１８号）。

しかし、上記公報中には、ビンロウジ抽出エキスの有効
成分については何ら開示がなく、また本明細書の試験例
に示すように下記のような欠点があり、実用性には乏し
いと考えられる。

即ち、ビンロウシュ及びメタノール抽出物の欠点として
は、 ■　この抽出物は、深紅色を呈し、製品自体または添加
物として使用しずらく、 ■　この抽出物は、完全な水溶液とならず、不溶物があ
り、放置すると沈澱物が生成し、扱いずらく、 ■　この抽出物は、アレコリン（ａｒｅｃｏｌｉｎｅ）
　す？！”のアルカロイドを含んでおり、アレコリンは
、駆虫作用、副交感神経、及び中枢神経興奮作用を有し
、毒性が極めて高く、 ■　この抽出物は、グルコシルトランスフェラーゼ阻害
作用が知られているが、この効果も必ずしも実用的なほ
ど有効でなく、更に用量依存的に効果が上昇しない等の
諸点を挙げることができる。

ビンロウジ抽出エキスには以上のような欠点があるが、
本発明の有効物質ＮＦ−８６Ｉ、ＮＦ３６ＩＩ、ＮＰＦ
−８６ＩＡ、ＮＰＦ−８６ＩＢ。

ＮＰＦ−８６ＩＩＡ及びＮＰＦ−８６ＩＩＢは、これら
の欠点が改善または完全に消失している。

また本発明者等の有効物質はグルコシルトランスフェラ
ーゼ阻害作用よりは虫歯菌に対する抗菌作用が主な作用
機作である。− すなわち本発明は、下記の理化学的性質を有するＮＦ−
８６Ｉ、ＮＦ−８６Ｉ　Ｉ、ＮＰＦ−８６ＩＡＳＮＰＦ
−８６ＩＢ、ＮＰＦ−８６Ｉ　ＩＡ及びＮＰＦ−８６Ｉ
ＩＢより選ばれる物質を有効成分とするう蝕及び歯周病
予防剤を提供するものである。

（ＮＦ二８６Ｉ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。

（ｊ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ）元素分析：炭素　５６．３０％水素　　４．
６１％窒素　　０．２％以下灰分　　０．３％以下（ｉｖ）分子量：　１．０００〜ｔｏ、０００　（透析
チコーブによる）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ’ｍａｎ　Ｃｍ−’　：　３４３０．２９４０．１６１
０．１５２０．１４４０．１３７ｏ：　１２８０．１１
１０．１０６０、８００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル水　　　　　　１％ λ、、ａＸｎｍ　（Ｅ　１ｃｍ）　　２７９　　（１３
５，７）塩酸　　　１％ λ、ａ、Ｉｎ＋ｙ＋　（Ｅ　１ｃｍ＞　２７９　（１３
４，５）水酸化ナトリウム　　１％ λ＋ａａＭ　　　　　　ｎｍ　（Ｅ　Ｉ　Ｃｍ）２９０
肩（２９１，２）、４２０肩（９６，４）、５００肩（６０゜６）、（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。

（ｖｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応　　　　　　　　陽性ニンヒドリン反応　　　　　　　陰性ｐ−丁ニシジンーフタル酸反応　陰性アニリン−ジフェニルアミン　反応　　　　　　　　　
　　　陰性ドラーゲンドルフ反応　　　　　陰性（溶解性：粉末状態では安定。

（ＮＦ−８６ＴＩ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。

（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析：炭素　５６．６４％水素　　４
．５９％窒素　　０．２％以下灰分　　０６３％以下（１ｖ）分子量：　１０．０００以上（透析チコーブに
よる）（ｖ）赤外線吸収スペクトルニジｍａ、１（Ｊ−’　：　３４００．２９４０．１６１
０．１５２０．１４５０．１３７０．１２９０．１１１
０．１０６０、８００、５００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水　　　　　１％ λ、、Ｘｎｍ（Ｅｌｃｍ）２８０　（１４５，３）塩酸
　　　１％ λ、、、　ｎｍ　（Ｅ　１ｃｍ）　２７９　（１４２，
１）水酸化ナトリウム　　１％ λＭａＭ　　　　　ｎｍ　（Ｅ　１　ａｍ）２９０肩（
３０６，１）、４１５肩（１００，０）、５０５Ｎ（６１，２）、（ｖｉｉ）溶解性工水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。

（ｖｊｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応　　　　　　　　陽性ニンヒドリン反応　　　　　　　陰性可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸反応　陰性アニリン−
ジフェニルアミン　反応　　　　　　　　　　　　陰性
ドラーゲンドルフ反応　　　　　陰性（溶解性：粉末状態では安定。

（ＮＰＦ−８６ＩＡ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。

（ｉｉ＞融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ、　）元素分析：炭素　５４．８２％水素　　
４．５２％酸素　３７．９３％窒素　　Ｏ７２％以下灰分　　０．２％以下（ｉｖ）分子１ｔ：５，６２０　　（ポリエチレングリ
コールを標準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル：１４４０．１３８０．１２８０．１２６０．１２１０．
１１６０．１１００．１０６０．８２０、８００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ、、Ｘｎｍ２７９（ｖｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。

ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。

（ｖｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応　　　　　　　　陽性ニンヒドリン反応　　　　　　　陰性可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸反応　陰性アニリンー
ジプエニルアミン　反応　　　　　　　　　　　　陰性
ドラーゲンドルフ反応　　　　　陰性（溶解性：粉末状態では安定。

（ＮＰＦ−８６ＩＢ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。

（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析：炭素　５７．０９％水素　　４
．４５％酸素　３５．０３％窒素　　０．２％以下灰分　　０．２％以下（ｉｖ）分子量：５．０００　　（ポリエチレングリコ
ールを標準とした、ゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル：１４４０．１３６０．１２８０．１２５０．１２００．
１１６０．１１００．１０６０、００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ、。ｎｍ２７９（ｖｉｉ）　溶解性：水、メタノール、エタノールに可
溶。ヘキサン、エーテノ吠酢酸エチル、クロロホルムに不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応　　　　　　　　陽性ニンヒドリン反応　　　　　　　陰性可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸反応　陰性アニリンー
ジプエニルアミン　反応　　　　　　　　　　　　陰性
ドラーゲンドルフ反応　　　　　陰性（溶解性：粉末状態では安定。

（ＮＰＦ−８６ＩＩＡ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。

（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析：炭素　５１．４４％水素　　４
．４４％窒素　　０．１％以下灰分　　０．２％以下（ｉｖ）分子量：２９．４００　（ポリエチレングリコ
ールを標準とした、ゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル：１４４０．１３７０．１２８０．１２５０．１２１０．
１１６０．１１００．１０６０．８２０、８００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ、□ｎｍ２７９（ｖｉ）溶解性：水、メタノーノペエタノールに可溶。

ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。

（ｖｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応　　　　　　　　陽性ニンヒドリン反応　　　　　　　陰性可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸反応　陰性アニリン−
ジフェニルアミン　反応　　　　　　　　　　　　陰性
ドラーゲンドルフ反応　　　　　陰性（溶解性：粉末状態では安定。

（ＮＰ　Ｆ−８６ｎ、Ｂ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。

（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ）元素分析：炭素　５２．４６％水素　　４．
４２％窒素　　０゜１％以下灰分　　０．２％以下（ｉｖ）分子量：８．６１０　　（ポリエチレングリコ
ールを標準とした、ゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スベクトノ１べ１’　ｍａｘ　Ｃｍ−’　；　３４００．２９３０．１
６１０．１５２０．。

１４４０．１３７０．１２８０．１２５０．１２００．
１１６０．１１１０．１０６０、００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ□、ｎｍ２７９（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。

（ＮＦ−８６Ｉ及びＮＦ−８６ｍの抽出）以下、本発明
のＮＦ−８６１及びＮＦ−８６１１の抽出法について詳
細に説明する。

（ｉ）原料原料としては前記のビンロウジを使用するが、加工・抽
出しやすいように、乾燥・粗砕、粉砕などの処理をした
ものを用いることが好ましい。また市販されている生薬
の形態のものを用いることが簡便である。

（ｉｉ）抽出本発明のＮＦ−＝−８６１及びＮＦ−８６ＩＩはフェノ
ール性物質であり、虫歯菌増殖阻止活性によって特徴づ
けられるので、水、メタノール、エタノール等の親水性
有機溶媒、遠心分離や濾過などによって、これらの明害
活性を指標として適当な精製手段を適用して単離・精製
することがで寺る。

これらの方法は必要に応じて単独あるいは任意の順序に
組合せ、または反覆して適用できる。以下にＮＦ−８６
Ｉ及びＮＦ−８６１１の抽出方法の１例を説明する。

（イ）ヘキサン、エーテルなどの脱脂溶媒を用いて、室
温で、又は加熱して原料を脱脂する。

（Ｏ）脱脂した原料を風乾又は真空乾燥して、脱脂溶媒
を抽出除去する。

（ハ）次いでメタノールを抽出原料に加えて常法に従い
抽出処理する。通常は沸騰下で抽出するが、４℃の低温
室にて抽出を行っても、活性成分が得られる。

（＝）得られたメタノール抽出液を濃縮乾固した後、水
で′抽出する。具体的には水を加えて懸濁液とし、不溶
物を濾別し、さらに、不溶物に水を加え、よく撹拌した
後濾過し、前の濾液とあわせる。

（本）この水溶液に等量の酢酸エチル又はクロロポルム
等の非親水性有機溶媒を加え、有機溶媒可溶部分を除去
する。

（へ）非親水性有機溶媒可溶部分を除去した水層を分画
分子ｉｌｌ、　０００の透析ヂコ、−ブ（スベク）・う
／ボア６；スペクトラムメディカルインダストリー社製
）に入れ、水にて透析し、内液と外液に分画する。

（ト）分画分子１１．０００の透析ヂコーブにて分画し
た透析内液をさらに、分画分子量１０．０００の透析デ
ユープ（スペクトう／ポア６；スペクトラムメディカル
インダストリー社製）に入れ、水にて透析し、内液と外
液に分画する。

（チ）このように分画１．た分子量１．０００〜１０．
０００及び１０．０００以上の画分は強い虫歯菌増殖活
性を示す。これらの画分はさらに凍結乾燥などの操作に
より、各々淡褐色の粉末として得ることができる。

本発明者は、分子量１．０００〜１０．０００及び１０
．０００以上に分画された有効物質を各々ＮＦ−８６１
及びＮＦ−８６１１と命名した。

（ＮＰＦ−８６１Ａ、ＮＰＦ−８６ＩＢ、ＮＰＦ−８６
ＩΔ及びＮＰＦ−８６ｎＢの分離）このように、透析チ
コ、−ブにて分離してきたＮＦ−８６１及びＮＦ−８６
ＩＩは、さらにそれぞれ２つの画分に分離できる。すな
わちＮＦ−８６１は、分子量５．６２０の画分（ＮＰＦ
−８６ＩΔ）と分子量５．０００の画分（ＮＰＦ−８６
１Ｂ）より、またＮＦ−８６ＩＩは分子量２９．４００
の画分（ＮＰＦ−８６ｎＡ）と分子量８．６１０の画分
（ＮＰＦ−８６１１Ｂ）より構成されている（第１１．
（ａ）ら）図参照）。

これら４種の物質（ＮＰＦ−８６ＩＡＳＮＰＦ−８６Ｉ
ＢＳＮＰＦ−８６ＩＩＡ及びＮＰＦ−８６ｎＢ）の分離
精製は、種々の公知の方法によって行うことができるが
、以下の条件で高速液体クロマトグラフを用いて行うこ
とが好ましい。

（ｉ）分離カラムこの際分離カラムとしては、分配・吸着型樹脂、イオン
交換樹脂、ゲル濾過型の分離剤等を充填したものを用い
ることができる。また付属的に自動注入や自動分取を行
う装置を使用することも好ましい。

（１１）溶離剤溶離剤としては、水−メタノール系の他、水、アセトニ
トリル、ジメチルホルムアミド、酢酸、ブタノール、ヘ
キサンその他の各種緩衝溶液を単独で、又は任意の比率
で混合して、用いることができる。

（ｉｉｉ　）指標本発明の有効物質を検出するための指標としては、２８
０１ｍの波長の吸光度及び虫歯菌増殖阻止活性を用いる
ことができる。

（ｉｖ）処理方法処理方式としては、オープンカラム、中圧又は高圧方式
を用いることができる。

ＮＰＦ−８６ＩＡＳＮＰＦ−８６ＩＢＳＮＰＦ−８６Ｉ
［Ａ及びＮＰＦ−８６ＩＩＢは、前記高速液体クロマト
グラフでそれぞれ単一のピークを示し、虫歯菌増殖阻止
活性が一致する。

また、本物質の分子量を測定するために行なったゲル浸
透クロマトグラフにても単一ピークを示す。

各種ポリエチレングリコールの標準分子量にて検討した
ところＮＰＦ−８６ＩＡの分子量は５、６２０、ＮＰＦ
−８６ＩＢは５．０００、ＮＰＦ−８６Ｉ［Ａは２９，
４００そしてＮＰＦ−８６Ｉ［Ｂは８、６１０　と決定
された。

以上述べてきたようにＮＦ−８６Ｉは、ＮＰＦ−８６Ｉ
ＡとＮＰＦ−８６ＩＢの混合物で、一方ＮＦ−８６Ｉ［
はＮＰＦ−８６Ｉ［ＡとＮＰＦ−８６Ｉ［Ｂの混合物で
ある。高速液体クロマトグラムの解析により、ＮＦ−８
６Ｉは、ＮＰＦ−８６ＩＡとＮＰＦ−８６ＩＢの約１対
３の混合物であることが、一方ＮＦ−８６Ｉｔは、ＮＰ
Ｆ−８６Ｉ［ＡとＮＰＦ−８６ｎＢの約１対１の混合物
であるととが８忍められた。

後で述べるが、う蝕予防効果は、ＮＰＦ−８６ＩＡ、Ｎ
ＰＦ−８６ＩＢ、ＮＰＦ−８６Ｉ［Ａ及びＮＰＦ−８６
１Ｂ並びにＮＦ−８６Ｉ及びＮＦ−８６ＩＩはほぼ同程
度の効果が認められる。

以上の抽出操作は、原植物特有の呑、色を除去し、目的
とするう蝕予防物質を得る方法として最適である。尚、
有効物質は、メタノーノペエタノ−／ぺ水に可溶である
ため、前述の抽出方法は、原料のメタノール抽出物より
出発しているが、高価な有機溶媒を節約するためにはま
ず大量の水または熱湯にて抽出した後、同様の操作を行
ってもよい。

また前記の紫外線吸収スペクトルでもあきらかなように
、アルカリ性にすると、本発明の新規物質はいずれも黄
褐色から赤褐色に着色するので、抽出過程全体を鉱酸や
有機酸を用いて弱酸性下で行うことも有効な抽出手段で
ある。

前述の抽出方法は原植物特有の香、色を除去し、より増
殖阻止作用の強い物質を得る方法として最適である。さ
らに非親水性有機溶媒可溶部分を除く操作を行っている
ため、水溶液としても均一に透明に溶解させることがで
きるのでなお好ましい。

（う蝕及び歯周病予防剤）ビンロウジより得られた本発明の有効成分は、ポリフェ
ノール性の化合物である。また煎茶より得られる低分子
ポリフェノールには、虫歯菌増殖阻止効果があることが
最近報告されている（特開昭６４−９０１２４）が、本
発明のう蝕子防剤の有効成分は、高分子ポリフェノール
である。

「課題を解決するための手段」で述べたように、ビンロ
ウジの水及びメタノール抽出エキスについては、グルコ
シルトランスフェラーゼ隋書活性が知られている。しか
し、前に述べたように、水及びメタノール抽出エキスに
は欠点があり、このままでは実用性に乏しい。本発明の
う蝕及び歯周病の予防剤は、ビンロウジの水及びメタノ
ール抽出エキスの欠点を克服したものであり、精製物で
あるＮＦ−８６１、ＮＦ−８６ＩＩ、ＮＰＦ−８６１Ａ
ＳＮＰＦ−８６ＩＢＳＮＰＦ−８６ＩＩＡまたはＮＰＦ
−８６ＮＩＢを公知の口腔用組成物に添加して製造する
ことができる。

公知の口腔用組成物としては、練り歯磨き、粉歯磨き、
マウスウォッシュ、飴類、チューインガム、各種の甘味
菓子類、その他のあらゆる飲料、食品類及び口腔用の薬
剤等を挙げることができる。

（毒　性）ＮＰＦ−８６ＩＡ、ＮＰＦ−８６ＩＢ、、、ＮＰＦ３６
ｍＡ、ＮＰＦ−８６ｎＢＳＮＰＦ−８６Ｉ及びＮＦ−８
６ＩＩをマウスに３ｇ／ｋｇ経口投与したが、毒性を示
さなかった。

また腹腔内投与では３０　ｍｇ／　ｋｇ／ｄａｙで１０
日間連続投与したが毒性を示さなかった。

またマウスによる急性毒性（腹腔内投与）を測定したと
ころ、メタノール抽出物、水抽出物はＬＤｓ。−８００
ｍｇ／ｋｇで、低濃度にても唾液の分泌元通等ムスカリ
ン様作用を示（また。一方、精製物であるＮＦ−８６Ｉ
、ＮＦ−８６■、ＮＰＦ−８６１Ａ、、、ＮＰＦ−８６
１ＢＳＮＰＦ−８６ｍＡ。

及びＮＰＦ−８°６ＴＩＢは、ＬＤ、。は８００ｍｇ／
ｋｇ以上で、ムスカリン様作用を示ざなかった。

以下、試験例、実施例及び参考例により、本発明を更に
詳細に説明する。

試験例　Ｉ各抽出段階におけるグルコシ、１１月・ランスフェラー
ゼ阻害活性（方　法）ｌ）グルコシルトランスフェラーゼの調製Ｓ、ミコータ
ンスＭＴ８１４８　　（Ｃ）をブ１／インバートインフ
ュージョン（Ｂ　ＨＩ　）　培地で２４時間、３７℃で
静置培養］２、培養濾液を６０００　ｒｐｍで１５分間
遠心分離して培養」二澄を得た。氷中下、この上澄に硫
酸アンモニウムを５０％飽和になるまで添加して塩析し
、６０００ｒｐｍで１５分間遠心分離をして沈殿物を集
めた。

この沈殿物を５０ｍＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ６，５）に
溶解し、同一の緩衝液に対して４℃で一晩透析し、グル
コシルトランスフェラーゼ酵素標品液とした。これを酵
素活性の測定に用いた。

ｉｌ）グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性の測定５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）　、１％ショ糖及
び０．２％アジ化ナトリウムからなる反応液を調製し、
酵素及び試料を加えガラス試験管中で３７℃、１８時間
酵素反応させ、グルカンを生成させる。この際、酵素量
は上記反応系で５５０ｎｍの吸光度が０．５になるよう
に調製する。

生成した不溶性グルカンを超音波破砕し、５５０ｎｍの
吸光度を測定することにより阻害活性を求めた。

結果を表１に示す。

表　　　　１この表から明らかなように、１００μｇ　／　ｍｌ！の
濃度で用いても、阻害率は１２〜４４％程度であって、
グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性はあまり強くな
かった。また、用量依存的に効果が上昇する傾向もあま
り見られなかった。

従って、これらの物質は特開昭５８−１２ｉ２１８号に
開示されているようなグルコシルトランスフェラーゼに
対する特異的な阻害物質ではない可能性もある。

そこで上記公報には開示されていない虫歯菌自身による
不溶性グルカン生成に対する阻害作用について検討した
。

試験例　２虫歯菌（Ｓ、　　ミニ−タンスＭＴ　８１４８（Ｃ））
による不溶性グルカン生成阻害活性（方　法）（リ　ＡＳＦ培地１０４（味の素■）に牛胎児血清を１
％加えた培地にて、虫歯菌を一夜３０℃にて培養し、菌
液とする。

（ｏ）ＡＳＦ培地１０４に１％ショ糖を加えた培地にて
検体の各濃度の培地８−をつくり、これに（イ）の菌液
１ｍｊ！を加え、３０℃にて一夜培養し、生成する不溶
性グルカンを肉眼にて判定する。

結果を表２に示す。

表この表に示す結果から明らかなように、ＮＦ−８６ｒ及
びＮＦ−８６Ｉ［は虫歯菌による不溶性グルカン生成に
対して強い阻害活性を示した。

参考例　１；有効物質の抽出イ）　粗砕・乾燥したビンロウジ１００ｇをヘキサン３
００ｒｎＩ！中に浸漬し２４時間室温で放置した後、濾
過によりヘキサンを除去した。この操作を３回行い、脱
脂した。

口）　脱脂したビンロウジを３０分間風乾した。

ハ）　風乾したビンロウジをメタノール３００ｍｊ２中
に浸漬し、沸騰下３時間抽出した。この操作を３回行い
、抽出液を集めた。

二）　得られた抽出液をエバポレーターにて２５℃で濃
縮し、真空下で乾燥した（収量６．８６ｇ）。

これに水１５（ｌｉｔ！！を加え、撹拌機濾過した。不
溶物はさらに水１００−を加えて撹拌機濾過し、濾液を
集めた。

ホ）　この水溶液に２５０ｍｔ’の酢酸エチルを加えて
抽出した。この操作を３回行い、酢酸エチル可溶部分を
除去した。不溶物は１．８５ｇ残り、酢酸エチル抽出物
０．６１ｇ、水抽出物４．０１ｇを得た。

へ）　酢酸エチル可溶部分を除去した水抽出物を分画分
子量１．０００の透析チューブ（スペクトラ／ポア６；
スペクトラムメディカルインダストリー社製）に入れ、
水にて４℃で１週間撹拌しながら、その間に外液を２回
交換して透析し、内液と外液に分画した。

ト）　分画分子量１．０００の透析チューブにて分画し
た透析内液をさらに、分画分子量ｉｏ、　ｏｏｏの透析
チニーブ（スペクトラ／ポア６；スベクラムメディカル
インダストリー社製）に入れ、水にて４℃で１２時間撹
拌しながらその間に外液を毎日交換して透析し、内液と
外液に分画した。

チ）　このように分画したところ、分子量１．０００〜
１０、０００及び１０．０００以上の分画部分に目的と
する虫歯菌増殖阻止活性を認め、凍結乾燥により、有効
物質を２種とも淡褐色の粉末として得ることができた。

分子量１．０００　〜１０．０００の画分（ＮＦ−８６
Ｉ）は、０．５０　ｇを得ることができた。分子量１０
．０００以上の画分（ＮＦ−８６Ｉ［）は、０．７５　
ｇ得ることができた。分子量１．０００以下の画分は、
２．７６’ｇ得ることができたが虫歯菌増殖阻止活性は
ＮＦ−８６Ｉ及びＮＦ−８６Ｉ［に比べて弱かった。

参考例２：有効物質の抽出ＮＦ−８６Ｉ及びＮＦ−８６ｎを高速液体クロマトグラ
フィに付し、ＮＰＦ−８６ＩＡＳＮＰＦ−８６ＩＢ、、
ＮＰＦ−８６ＩＩＡおよびＮＰＦ−８６］ＩＢを各々分
離した。条件は次のとおりである。

分離カラム：吸着・分配型樹脂をつめたもの（Ｓｈｏｄ
ｅｘ　Ｒ３−ｐａｃｋＳＤＥ　−６１３：昭和電工社製
）溶　離　液：水：メタノール−１：９検　出　器：紫外分光検出器（日本分光工業■製）２８０ｎｍＮＦ−８６１，５００ｍｇからＮＰＦ−８６Ｉ　Ａ３６
．７ｍｇ及びＮＰＦ−８６１Ｂ２４４．２ｍｇを得た。

またＮＦ−８・６］Ｉ２５０ｍｇから、ＮＰＦ−８６Ｉ
ＩＡ６８゜８ｍｇ及びＮ　Ｐ　Ｆ　−８６ＩＩ　Ｂ　６
８．　Ｏｍｇを得た。

実施例１：虫歯菌に対する増殖阻止効果（１）（方法Ｉ
）イ）　継代し、増殖させた虫歯菌（Ｓ、　＠ｕｔａｎｓ
。

ＭＴ８１４８　（ｃ）、Ｓ、　ｍｕｔａｎｓ　　６７１
５　（ｇ）のスラントに、滅菌した生理食塩水８−を加
え、菌の懸濁液を得る。

口）１．５％寒天を添加したＲＰＭ　Ｉ　　１６４０　
　（ｐＨ７，０）〔日永製薬ｇ幼〕の培地にて、ＮＦ−
６Ｉ及びＮＦ−８６＝ｎ並びに対照として分画分子ｔｉ
、ｏｏｏ以上と１．０００以下の日本茶の水抽出物の各
濃度の培地１０ｍ１をつくり、８．５０ｍシャーレに入
れ、寒天平板を作製した。

ハ）　この寒天平板にイ）で作製した懸濁液１００μｌ
を均一に塗布し、３０℃にて一夜培養することにより、
最少増殖阻止濃度（ＭＩＣと略称）を求めた。

尚、生育状態が判定しすらいものは一夜培養後、寒天無
添加の培地５ｄを加え、培養し、ＭＩＣを求めた。

以上の結果を表３に示す。

表　　　　・３（ハ）Δ及びＢ培地にて検体の各濃度の培地８−をつく
り、これに（ロ）の菌液１００μβを加え、３０℃にて
一夜培養し、ＭＩＣを求めた。結果を表４に示す。

判定は肉眼または６６０ｎｍの吸光度による。

結果を表４に示す。

表　　　　４実施例２：虫歯菌に対する増殖防止効果（２）（方法■
）（イ）虫歯菌の培養液としては次の２種類を用いた。

Ａ培地：ＡＳＦ培地１０４（味の素（株））に牛胎児血
清を１％加えたもの。

Ｂ培地：ＡＳＦ培地１０４に、グルコース１％加えたも
の。

（０）虫歯菌をＡ培地にて一夜３０℃にて培養し、菌液
とする。

食品業界では抗菌効果ありとされるレベル（発明の効果
）以上詳しく説明したように、本発明によれば精製された
ビンロウジ抽出物を含有するう蝕及び歯周病の予防剤が
得られる。このう蝕及び歯周病の予防剤は、虫歯菌に対
する強い増殖阻止効果を示した。その結果、虫歯菌自身
による不溶性グルカン生成に対する阻害活性が強いので
、予防効果が高く、またその効果も用量依存的に上昇す
るという利点がある。一方、毒性が低いので副作用の心
配もなく、種々の口腔用組成物中に混入して使用するこ
とができる。

【図面の簡単な説明】第１図はＮＰＦ−８６ＩＡの赤外線吸収スペクトルを示
す。第２図はＮＰＦ−８６ＩＢの赤外線吸収スペクトルを示
す。第３図はＮＰＦ−８６ｎＡの赤外線吸収スペクトルを示
す。第４図はＮＰＦ−８６Ｉ［Ｂの赤外線吸収スペクトルを
示す。第５図はＮＦ−８６Ｉの赤外線吸収スペクトルを示す。第６図はＮＦ−８６ｍの赤外線吸収スペクトルを示す。第７図はＮＦ−８６Ｉの０．１規定塩酸及び水溶媒を用
いた紫外線吸収スペクトルを示す。第８図はＮＦ−８６ｍの０．１規定塩酸及び水溶媒を用
いた紫外線吸収スペクトルを示す。第９図はＮＦ−８６Ｉの０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶媒
を用いた紫外線吸収スペクトルを示す。第１０図はＮＦ−８６Ｉｔの０．ＩＮ水酸化ナトリウム
溶媒を用いた紫外線吸収スペクトルを示す。第１１図はＮＦ−８６Ｉ及びＮＦ−８６Ｉ［の高速液体
クロマトグラムを示す。ＭＪ、（ｒｉｍ）寡ｆ驚（ｎｒｎＪ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学的性質を有する、ＮＦ−８６ I 、
ＮＦ−８６II、ＮＰＦ−８６ I Ａ、ＮＰＦ−８６ I Ｂ
、ＮＰＦ−８６IIＡおよびＮＰＦ−８６IIＢからなる群
より選ばれる物質を有効成分とするう蝕及び歯周病の予
防剤。（ＮＦ−８６ I ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：炭素５６．３０％水素４．６１％窒素０．２％以下灰分０．３％以下（ｉｖ）分子量：１，０００〜１０，０００（透析チュ
ーブによる）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４３０、
２９４０、１６１０、１５２０、１４４０、１３７０、
１２８０、１１１０、１０６０、８００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水１％ λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ１ｃｍ）２７９（１３５．７）
塩酸１％ λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ１ｃｍ）２７９（１３４．５）
水酸化ナトリウム１％ λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ１ｃｍ）２９０肩（２９１．２）、４２０肩（９６．４）、５００肩（６０．６）、（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応陽性ニンヒドリン反応陰性ｐ−アニシジン−フタル酸反応陰性アニリン−ジフェニルアミン反応陰性ドラ−ゲンドルフ反応陰性（ｉｘ）安定性：粉末状態では安定。（ＮＦ−８６II）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：炭素５６．６４％水素４．５９％窒素０．２％以下灰分０．３％以下（ｉｖ）分子量：１０，０００以上（透析チューブによ
る）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４００、
２９４０、１６１０、１５２０、１４５０、１３７０、
１２９０、１１１０、１０６０、８００、５００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水１％ λ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ１ｃｍ）２８０（１４５．３）塩酸
１％ λ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ１ｃｍ）２７９（１４２．１）水酸
化ナトリウム１％ λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ１ｃｍ）２９０肩（３０６．１）、４１５肩（１００．０）、５０５肩（６１．２）、（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応陽性ニンヒドリン反応陰性ｐ−アニシジン−フタル酸反応陰性アニリン−ジフェニルアミン反応陰性ドラ−ゲンドルフ反応陰性（ｉｘ）安定性：粉末状態では安定。（ＮＰＦ−８６ I Ａ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：炭素　５４．８２％水素４．５２％酸素３７．９３％窒素０．２％以下灰分０．２％以下（ｉｖ）分子量：５，６２０（ポリエチレングリコール
を標準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘ；３４００、２９４０、１
６１０、１５２０、１４４０、１３８０、１２８０、１
２６０、１２１０、１１６０、１１００、１０６０、８
２０、８００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ２７９（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応陽性ニンヒドリン反応陰性ｐ−アニシジン−フタル酸反応陰性アニリン−ジフェニルアミン反応陰性ドラ−ゲンドルフ反応陰性（ｉｘ）安定性：粉末状態では安定。（ＮＰＦ−８６ I Ｂ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：炭素５７．０９％水素４．４５％酸素３５．０３％窒素０．２％以下灰分０．２％以下（ｉｖ）分子量：５，０００（ポリエチレングリコール
を標準とした、ゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘ；３４００、２９３０、１
６１０、１５２０、１４４０、１３６０、１２８０、１
２５０、１２００、１１６０、１１００、１０６０、（
ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ２７９（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。（ｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応陽性ニンヒドリン反応陰性ｐ−アニシジン−フタル酸反応陰性アニリン−ジフェニルアミン反応陰性ドラ−ゲンドルフ反応陰性（ｉｘ）安定性：粉末状態では安定。（ＮＰＦ−８６IIＡ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：炭素５１．４４％水素４．４４％窒素０．１％以下灰分０．２％以下（ｉｖ）分子量：２９，４００（ポリエチレングリコー
ルを標準とした、ゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘ；３４００、２９５０、１
６１０、１５２０、１４４０、１３７０、１２８０、１
２５０、１２１０、１１６０、１１００、１０６０、８
２０、８００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ２７９（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応陽性ニンヒドリン反応陰性ｐ−アニシジン−フタル酸反応陰性アニリン−ジフェニルアミン反応陰性ドラ−ゲンドルフ反応陰性（ｉｘ）安定性：粉末状態では安定。（ＮＰＦ−８６IIＢ）（ｉ）形状：淡黄褐色粉末。（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：炭素５２．４６％水素４．４２％窒素０．１％以下灰分０．２％以下（ｉｖ）分子量：８，６１０（ポリエチレングリコール
を標準とした、ゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘ；３４００、２９３０、１
６１０、１５２０、１４４０、１３７０、１２８０、１
２５０、１２００、１１６０、１１１０、１０６０、８
００（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ２７９（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶
。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルムに不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄反応陽性ニンヒドリン反応陰性ｐ−アニシジン−フタル酸反応陰性アニリン−ジフェニルアミン反応陰性ドラ−ゲンドルフ反応陰性（ｉｘ）安定性：粉末状態では安定。
（２）脱脂したビンロウジのメタノール抽出物を、透析
チューブにより分画して得られる分子量１，０００〜１
０，０００の画分からなるビンロウジの親水性溶媒抽出
物を有効成分とするう蝕及び歯周病予防剤。
（３）脱脂したビンロウジのメタノール抽出物を、透析
チューブにより分画して得られる分子量１０，０００以
上の画分からなるビンロウジの親水性溶媒抽出物を有効
成分とするう蝕及び歯周病予防剤。