JPH0367588A - 組換えタンパク質レセプター - Google Patents
組換えタンパク質レセプターInfo
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はインターロイキン２のレセプター、特に＝亥し
セプターのβ鎖、そのβ鎖をコードするｃＤＮ＾又はそ
の一部分、そのβ鎖をコードするｃＤＮＡ挿入物を含む
ベクター、そのベクターでトランスホームした宿主及び
その宿主の培養による該β鎖の生産に関する。
セプターのβ鎖、そのβ鎖をコードするｃＤＮ＾又はそ
の一部分、そのβ鎖をコードするｃＤＮＡ挿入物を含む
ベクター、そのベクターでトランスホームした宿主及び
その宿主の培養による該β鎖の生産に関する。
細胞−細胞コミュニケーションに関する一種の可溶性介
在物であるサイト力インが免疫系の調節に必須であると
いう証拠が多く蓄積されてきている。サイトカインは特
異的細胞表面レセプターとの相互作用を介して標的細胞
の増殖、分化及び活性化を誘導することが知られている
。以前はＴ細胞増殖因子（１）として定義されていたイ
ンターロイキン２ （ＩＬ−２）は最もよく特徴を明ら
かにされたサイト力インの１つであり、Ｔリンパ球（Ｔ
細胞）（２）の抗原特異的クローン増殖において重要な
役割を果していることが知られている。
在物であるサイト力インが免疫系の調節に必須であると
いう証拠が多く蓄積されてきている。サイトカインは特
異的細胞表面レセプターとの相互作用を介して標的細胞
の増殖、分化及び活性化を誘導することが知られている
。以前はＴ細胞増殖因子（１）として定義されていたイ
ンターロイキン２ （ＩＬ−２）は最もよく特徴を明ら
かにされたサイト力インの１つであり、Ｔリンパ球（Ｔ
細胞）（２）の抗原特異的クローン増殖において重要な
役割を果していることが知られている。
またＩＬ−２は未成熟胸腺リンパ球（３） 、Ｂリンパ
球（Ｂ細胞）（４）、マクロ−ファージ（５）、ナチュ
ラルキラー細胞（ＮＫ細胞）（６）、及びリンホカイン
活性化キラー細胞（ＬＡＫ細胞）（７）などの免疫系の
他の細胞にも作用するようである。これらのＩＬ−２の
多機能性は適応性免疫治療（８）などの免疫治療法の確
立の可能性を切り開いた。最近、ＩＬ−２はオリゴデシ
ドロサイト（９）などの神経細胞にも作用することが示
され、このことは中枢神経系におけるサイトカインの関
与の可能性も示唆している。基礎及び臨床免疫学におけ
るＩＬ−２系の勢力的研究にもかかわらすＩＬ−２が仲
介するシグナルトランスダクション（１０〉を支配する
分子的メカニズムに関する情報には制限がある。
球（Ｂ細胞）（４）、マクロ−ファージ（５）、ナチュ
ラルキラー細胞（ＮＫ細胞）（６）、及びリンホカイン
活性化キラー細胞（ＬＡＫ細胞）（７）などの免疫系の
他の細胞にも作用するようである。これらのＩＬ−２の
多機能性は適応性免疫治療（８）などの免疫治療法の確
立の可能性を切り開いた。最近、ＩＬ−２はオリゴデシ
ドロサイト（９）などの神経細胞にも作用することが示
され、このことは中枢神経系におけるサイトカインの関
与の可能性も示唆している。基礎及び臨床免疫学におけ
るＩＬ−２系の勢力的研究にもかかわらすＩＬ−２が仲
介するシグナルトランスダクション（１０〉を支配する
分子的メカニズムに関する情報には制限がある。
ＩＬ−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）はＩＬ−２に対する
結合能に関し、高、中、低アフィニティー型で各々解離
定数（Ｋｄ）が１０−”Ｍ、１０−’Ｍ及び１０−”Ｈ
の三つの型で存在するという意味で独特な存在であるこ
とが知られている（１１．１２）。
結合能に関し、高、中、低アフィニティー型で各々解離
定数（Ｋｄ）が１０−”Ｍ、１０−’Ｍ及び１０−”Ｈ
の三つの型で存在するという意味で独特な存在であるこ
とが知られている（１１．１２）。
［Ｌ−２Ｒα鎖（Ｔ、ｃ抗原、ｐ ５５） （１３）
の特性化により、α鎖は低アフィニチイ型のみを構威し
、リンパ球の他の特異的膜成分と会合しない限り、ＩＬ
−２取込み及びシグナルトランスダクションにはそのま
ま機能することはないことが明らかになった（１４．１
５）。つづいて、このリンパ球膜成分はβ鎖（又はｐ７
０−７５）と命名される新しいレセプター鎖であること
が同定された（１２，１６．１７）。事実、実験的にＩ
Ｌ−２Ｒβ鎖それ自体は、中アフィニティー型を構成す
ることが示された（１２）。さらに、ＩＬ−２Ｒα鎖と
の会合はそのレセプターの高アフィニティ型を与える（
１２，１６．１７）、野生型及び突然変異ＩＬ−２Ｒｃ
ｒｔｈ￥ｃＤＮＡを用いた発現実験は、ＩＬ−２Ｒα鎖
ではなくＩＬ＝２Ｒβ鎖が細胞内シグナルインダクショ
ン経路を推進するドメインを有していることを強く示し
ている（１８）。
の特性化により、α鎖は低アフィニチイ型のみを構威し
、リンパ球の他の特異的膜成分と会合しない限り、ＩＬ
−２取込み及びシグナルトランスダクションにはそのま
ま機能することはないことが明らかになった（１４．１
５）。つづいて、このリンパ球膜成分はβ鎖（又はｐ７
０−７５）と命名される新しいレセプター鎖であること
が同定された（１２，１６．１７）。事実、実験的にＩ
Ｌ−２Ｒβ鎖それ自体は、中アフィニティー型を構成す
ることが示された（１２）。さらに、ＩＬ−２Ｒα鎖と
の会合はそのレセプターの高アフィニティ型を与える（
１２，１６．１７）、野生型及び突然変異ＩＬ−２Ｒｃ
ｒｔｈ￥ｃＤＮＡを用いた発現実験は、ＩＬ−２Ｒα鎖
ではなくＩＬ＝２Ｒβ鎖が細胞内シグナルインダクショ
ン経路を推進するドメインを有していることを強く示し
ている（１８）。
それゆえ、その構造及び機能を解明するのに十分な量の
ＩＬ−２Ｒβ鎖を得る必要があり、このことは高アフィ
ニティＩＬ−２Ｒの分子的基礎同様、ＩＬ−２応答性細
胞において機能するシグナルトランスダクシッンのメカ
ニズムに関する洞察を得る基本的ステツプである。最後
に、Ｉ Ｌ−２Ｒβ鎖又はその一部分をコードするｃＤ
ＮＡを以下に示す。
ＩＬ−２Ｒβ鎖を得る必要があり、このことは高アフィ
ニティＩＬ−２Ｒの分子的基礎同様、ＩＬ−２応答性細
胞において機能するシグナルトランスダクシッンのメカ
ニズムに関する洞察を得る基本的ステツプである。最後
に、Ｉ Ｌ−２Ｒβ鎖又はその一部分をコードするｃＤ
ＮＡを以下に示す。
適当なベクターへの該ｃＤＮＡの挿入及び適当な宿主に
おけるその発現はそのＩＬ−２Ｒβ鎖又はその一部分に
よる組換え的及び大規模なタンパク質の生産を可能とす
る。
おけるその発現はそのＩＬ−２Ｒβ鎖又はその一部分に
よる組換え的及び大規模なタンパク質の生産を可能とす
る。
（発明の内容）
それゆえ、本発明の１つの特徴に従がい、ＩＬ−２Ｒβ
鎖又はその一部分をコードする組換えｃＤＮＡが提供さ
れる。
鎖又はその一部分をコードする組換えｃＤＮＡが提供さ
れる。
本発明のｃＤＮＡは以下の式で表わされ、これはヒ）Ｉ
Ｌ−２Ｒβ、又はその変異体又はその一部分をコードし
ている； ＡＴＣ ＧＣＧ ＧＣＣＣＣＴ ＧＣＴ ＣＴＧ ＴＣＣＴＧＧ
ＣＧＴ ＣＴＧ ＣＣＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＣＴＣＣ
ＴＣＣＴＧ ＣＣ（： ＣＴＧ ＧＣＴ ＡＣＣＴＣＴ
ＴＧＧ ＧＣＡ ＴＣＴ ＧＣＡ ＧＣＧＧＴＧ Ｍ
Ｔ ＧＧＣＡＣＴ ＴＣＣＣＡＧ ＴＴＣＡＧＡ ＴＧ
ＣＴＴＣＴＡＣＡＡＣＴＣＧＡＧＡ ＧＣＣＡＡＣＡＴ
ＣＴＣＣＴＧＴ ＣＴＣＴＧＧ ＡＧＣＣＡＡ ＧＡＴ
ＧＧＧ ＧＣＴＣＴＧ ＣＡＧ ＧＡＣＡＣＴ ＴＣ
ＣＴＧＣＣＭ ＧＴＣＣＡＴ ＧＣＣＴＧＧ ＣＣＧ
ＧＡＣＡＧＡ ＣＧＧ ＣＧＧ ＴＧＧ ＡＡＣＣＡＡ
ＡＣＣＴＧＴ ＧＡＧ ＣＴＧ ＣＴＣＣＣＣＧＴＧ
ＡＧＴ ＣＡＡ ＧＣＡ ＴＣ（： ＴＧＧ ＧＣＣＴ
ＧＣＡＡＣＣＴＧ ＡＴＣＣＴＣＧＧＡ ＧＣＣＣＣＡ
ＧＡＴ ＴＣＴ ＣＡＧ ＡＡＡ ＣＴＧ ＡＣＣＡ
ＣＡ ＧＴＴ ＧＡＣＡＴＣＧＴＣＡＣＣＣＴＧ ＡＧ
Ｇ ＧＴＧ ＣＴＧ ＴＧＣＣＧＴ ＧＡＧ ＧＧＧ
ＧＴＧ ＣＧＡ ＴＧＧ ＡＧＧ ＧＴＧＡＴＧ ＧＣ
ＣＡＴＣＣＡＧ ＧＡＣＴＴＣＡＡＧ ＣＣＣＴＴＴ
ＧＡＧ ＡＡＣＣＴＴ ＣＧＣＣＴＧ ＡＴＧ ＧＣＣ
ＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＴＣＣＡＡ ＧＴＴ ＧＴＣＣＡ
ＣＧＴＧ ＧＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡ ＴＧＧ ＭＣＡ
ＴＡ ＡＧＣＴＧＧ ＧＭ ＡＴＣＴＣＣＣＡＡ ＧＣ
ＣＴＣＣＣＡＣＴＡＣＴＴＴ ＧＡＡ ＡＧＡ ＣＡ
ＣＣＴＧ ＧＡＧ ＴＴＣＧＡＧ ＧＣＣＣＧＧＡ
ＣＧ ＣＴＧ ＴＣＣＣＣＡ ＧＧＣＣＡＣＡＣ
ＣＴＧＧ ＧＡＧ ＧＡＧ ＧＣＣＣＣＣＣＴＧ
ＣＴＧ ＡＣＴ ＣＴＣＡＡＧ ＣＡＧ ＡＡＧ ＣＡ
Ｇ ＧＭ ＴＧＧ ＡＴＣＴＧＣＣＴＧ ＧＡＧＡＣＧ
ＣＴＣＡＣＣＣＣＡ ＧＡＣＡＣＣＣＡＧ ＴＡＴ
ＧＡＧ ＴＴＴ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＧＧＧＴＣＡＡＧ
ＣＣＴ ＣＴＧ ＣＭ ＧＧＣＧＡＧ ＴＴＣＡＣＧ
ＡＣＣＴＧＧ ＡＧＣＣＣＣＴＧＧ ＡＧＣＣＡＧ
ＣＣＣＣＴＧ ＧＣＣＴＴＣＡＧＧ ＡＣＡ ＡＡＧ
ＣＣＴ ＧＣＡ ＧＣＣＣＴＴ ＧＧＧ ＡＡＧ ＧＡ
ＣＡＣＣＡＴＴ ＣＣＧ ＴＧＧ ＣＴＣＧＧＣＣＡＣ
ＣＴＣＣＴＣＧＴＧ ＧＧＣＣＴＣＡＧＣＧＧＧ ＧＣ
Ｔ ＴＴＴ ＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴｒＡ ＧＴＧ
ＴＡＣＴＴＧ ＣＴＧ ＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧ Ａ
ＡＣＡＣＣＧＧＧ ＣＣＡ ＴＧＧ ＣＴＧＡＡＧ Ａ
ＡＧ ＣＴＣＣＴＧ ＡＡＧ ＴＧＴ ＡＡＣＡＣＣＣ
ＣＡ ＧＡＣＣＣＣＴＣＧ ＡＡＧＴＴＣＴＴＴ ＴＣ
ＣＣＡＧ ＣＴＧ ＡＧＣＴＣＡ ＧＡＧ ＣＡＴ Ｇ
ＧＡ ＧＧＡ ＧＡＣＧＴＣＣＡＧ ＡＡＧ ＴＧＧ
ＣＴＣＴＣＴ ＴＣＧ ＣＣＣＴＴＣＣＣＣＴＧＡ Ｔ
ＣＧ ＴＣＣＴＴＣＡＧＣＣＣＴ ＧＧＣＧＧＣＣＴＧ
ＧＣＡ ＣＣＴ ＧＡＧ ＡＴＣＴＣＧ ＣＣＡ Ｃ
ＴＡ ＧＡＡＧＴＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＡＧＧ
ＧＡＣＡＡＧ ＧＴＧ ＡＣＧ ＣＡＧ ＣＴ
Ｇ ＣＴＣＣＴＧ ＣＡＧＣＡＧ ＧＡＣＡＡＧ
ＧＴＧ ＣＣＴ ＧＡＧ ＣＣＣＧＣＡ ＴＣＣＴｒＡ
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ＴＴＣＴｒＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＧ ＧＡＴ ＧＣ
ＣＴＴＧ ＧＡＧ ＡＴＡ ＧＡＧ ＧＣＣＴＧＣＣＡ
Ｇ ＧＴＧ ＴＡＣＴＴＴ ＡＣＴ ＴＡＣＧＡＣＣＣ
ＣＴＡＣＴＣＡ ＧＡＧ ＧＭ ＧＡＣＣＣＴ ＧＡＴ
ＧＡＧ ＧＧＴ ＧＴＧ ＧＣＣＧＧＧ ＧＣＡ Ｃ
ＣＣＡＣＡ ＧＧＧ ＴＣＴ ＴＣＣＣＣＣＣＭ ＣＣ
ＣＣＴＧ ＣＡＧ ＣＣＴ ＣＴＧ ＴＣＡ ＧＧＧ
ＧＡＧ ＧＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣ
ＣＣＣＴＣＣＡＧＧ ＧＡＴ ＧＡＣＣＴＧ ＣＴＧ
ＣＴＣＴＴＣＴＣＣＣＣＣＡＧＴ ＣＴＣＣＴＣＧＧＴ
ＧＧＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＣＡ ＡＧＣＡＣＴＧＣ
ＣＣＣＴ ＧＧＧ ＧＧＣＡＧＴ ＧＧＧ ＧＣＣＧＧ
Ｔ ＧＡＡ ＧＡＧ ＡＧＧ ＡＴＧ ＣＣＣＣＣＴ
ＴＣＴ ＴＴＧ ＣＡＡ ＧＭ ＡＧＡ ＧＴＣＣＣＣ
ＡＧＡ ＧＡＣＴＧＧ ＧＡＣＣＣＣＣＡＧ ＣＣＣＣ
ＴＧ ＧＧＧ ＣＣＴ、ＣＣＣＡＣＣＣＣＡ ＧＧＡ
ＧＴＣＣＣＡ ＧＡＣＣＴＧＧＴＧ ＧＡＴ ＴＴＴ
ＣＡＧ ＣＣＡ ＣＣＣＣＣＴ ＧＡＧ ＣＴＧ ＧＴ
Ｇ ＣＴＧ ＣＧＡ ＧＡＧＧＣＴ ＧＧＧ ＧＡＧ
ＧＡＧ ＧＴＣＣＣＴ ＧＡＣＧＣＴ ＧＧＣＣＣＣＡ
ＧＧ ＧＡＧ ＧＧＡＧＴＣＡＧＴ ＴＴＣＣＣＣＴＧ
Ｇ ＴＣＣＡＧＧ ＣＣＴ ＣＣＴ ＧＧＧ ＣＡＧ
ＧＧＧ ＧＡＧＴＴＣＡＧＧ ＧＣＣＣＴＴ ＡＡＴ
ＧＣＴ ＣＧＣＣＴＧ ＣＣＣＣＴＧ ＡＡＣＡＣＴ
ＧＡＴＧＣＣＴＡＣＴＴＧ ＴＣＣＣＴＣＣＭ ＧＡＡ
ＣＴＣＣＡＧ ＧＧＴ ＣＡＧ ＧＡＣＣＣＡＡＴＣ
ＣＡＣＴＴＧ ＧＴＧ ＴＡＧ 本発明の別のｃＤＮＡは、例えば以下の式で表わされ、
これは、マウスのＩＬ−２Ｒβ、又はその変異体又はそ
の一部分をコードしている；ｈ、 ＜ ｕ 訣 ８１ ８ ８ ８ ｃ ｕ ｔ−＋ （、００ 目 調、 ８ ６ ８ 号 で、 炬 馳 冒 ８８ 逼 ６ 炬 号 ＝ ８ 目 宅 ６°考、考 ５ ｘ 号 Ｈ５委、季 素 苔 膏 ９ 交 孝 素８ｉ 目 目
目 ら 目 目 目 Ｃ目 苔 ０６ ト ０ ８ む ＜ υ 旨 ８ ２ ０ ・２ ε Ｅ ５ Ｂ： ５ 号 己 埒 ８ 冒 １−＋ ９０ 一ベ ８ 旨 べυ 埒 ξ ０ｕＯ◆ ＬＩＬＩ（◆ 本発明において特に興味あるＤＮＡには、ＩＬ−２Ｒβ
の一部分、例えばその細胞外部分、又はその細胞内部分
などをコードするものが含まれる。
Ｌ−２Ｒβ、又はその変異体又はその一部分をコードし
ている； ＡＴＣ ＧＣＧ ＧＣＣＣＣＴ ＧＣＴ ＣＴＧ ＴＣＣＴＧＧ
ＣＧＴ ＣＴＧ ＣＣＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＣＴＣＣ
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ＣＡＣＴＴＧ ＧＴＧ ＴＡＧ 本発明の別のｃＤＮＡは、例えば以下の式で表わされ、
これは、マウスのＩＬ−２Ｒβ、又はその変異体又はそ
の一部分をコードしている；ｈ、 ＜ ｕ 訣 ８１ ８ ８ ８ ｃ ｕ ｔ−＋ （、００ 目 調、 ８ ６ ８ 号 で、 炬 馳 冒 ８８ 逼 ６ 炬 号 ＝ ８ 目 宅 ６°考、考 ５ ｘ 号 Ｈ５委、季 素 苔 膏 ９ 交 孝 素８ｉ 目 目
目 ら 目 目 目 Ｃ目 苔 ０６ ト ０ ８ む ＜ υ 旨 ８ ２ ０ ・２ ε Ｅ ５ Ｂ： ５ 号 己 埒 ８ 冒 １−＋ ９０ 一ベ ８ 旨 べυ 埒 ξ ０ｕＯ◆ ＬＩＬＩ（◆ 本発明において特に興味あるＤＮＡには、ＩＬ−２Ｒβ
の一部分、例えばその細胞外部分、又はその細胞内部分
などをコードするものが含まれる。
ＩＬ−２Ｒβの細胞外部分を含む可能性部分をコードす
るＤＮＡは特に興味深い。
るＤＮＡは特に興味深い。
また、本発明は先に述べたｃＤＮＡの一部分、例えば、
ｈｌＬ−２Ｒβ鎖の完全配列の一部分、例えば、可溶性
部分（ａ、ａ）（第１Ｂ図参照）１番又はその付近例え
ば１．２，３，４，５．６．７゜８．９．１０で始まり
、可溶性部分２１４番又はその付近、例えば２００．２
０１．２０２．２０３．２０４．２０５゜２０６、２０
７．２０８．２０９．２１０．２１１．２１２．２１３
．２１４゜２１５、２１６．２１７．２１８．２１９．
２２０で終わる細胞外部分、又は、本細胞外部分又はそ
の変異体の一部分、及び該レセプター鎖の細胞内部分に
対応する部分、例えば可溶性部分２３９番又はその付近
、例えば、可溶性部分２３０．２３１．２３２．２３３
．２３４．２３５．２３６゜２３７、２３８．２３９．
２４０．２４１．２４２で始まり、可溶性部分５２５番
又はその付近、例えば５１６．５１７゜５１８、５１９
．５２０．５２１．５２２．５２３．５２４及び５２５
で６ 五 孝 妻 仝 ｉ 碧 ３ ど Ｍ ’Ｅ終わ
る部分、又はその一部分又はその変異体、及び同様に、
マウスＩＬ−２Ｒβ線の完全配列の一部分（第８図参照
）、例えば可溶性部分１番又はその付近、例えば、１．
２．３．４，５．６，７゜ａＪ ９．ｔｏ番で始まり、
アくノ酸２１０番又はその付近、例えば２００．２０１
．２０２．２０３．２０４゜２０５、 ２０６． ２０
７． ２０８． ２０９． ２１０． ２１１． ２１
２． ２１３゜２１４、２１５．２１６．２１７．２１
８．２１９．２２０で終わる細胞外部分又は該細胞外部
分、又はその変異体の一部分、及び該レセプター鎖の細
胞内部分に対応する部分、例えば可溶性部分２３５番又
はその付近、例えば２２５．２２６．２２７．２２８．
２２９．２３０．２３１゜２３２．２３３．２３４．２
３５．２３６．２３７．２３８．２３９．２４０゜２４
１．２４２で始まり、アごノ酸５１３番又はその付近、
例えば、５０５．５０６．５０７．５０８．５０９．５
１０゜５１１、５１２．５１３で終わる部分又はその一
部分又はその変異体をコードするｃＤＮＡを含む。
ｈｌＬ−２Ｒβ鎖の完全配列の一部分、例えば、可溶性
部分（ａ、ａ）（第１Ｂ図参照）１番又はその付近例え
ば１．２，３，４，５．６．７゜８．９．１０で始まり
、可溶性部分２１４番又はその付近、例えば２００．２
０１．２０２．２０３．２０４．２０５゜２０６、２０
７．２０８．２０９．２１０．２１１．２１２．２１３
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２２０で終わる細胞外部分、又は、本細胞外部分又はそ
の変異体の一部分、及び該レセプター鎖の細胞内部分に
対応する部分、例えば可溶性部分２３９番又はその付近
、例えば、可溶性部分２３０．２３１．２３２．２３３
．２３４．２３５．２３６゜２３７、２３８．２３９．
２４０．２４１．２４２で始まり、可溶性部分５２５番
又はその付近、例えば５１６．５１７゜５１８、５１９
．５２０．５２１．５２２．５２３．５２４及び５２５
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る部分、又はその一部分又はその変異体、及び同様に、
マウスＩＬ−２Ｒβ線の完全配列の一部分（第８図参照
）、例えば可溶性部分１番又はその付近、例えば、１．
２．３．４，５．６，７゜ａＪ ９．ｔｏ番で始まり、
アくノ酸２１０番又はその付近、例えば２００．２０１
．２０２．２０３．２０４゜２０５、 ２０６． ２０
７． ２０８． ２０９． ２１０． ２１１． ２１
２． ２１３゜２１４、２１５．２１６．２１７．２１
８．２１９．２２０で終わる細胞外部分又は該細胞外部
分、又はその変異体の一部分、及び該レセプター鎖の細
胞内部分に対応する部分、例えば可溶性部分２３５番又
はその付近、例えば２２５．２２６．２２７．２２８．
２２９．２３０．２３１゜２３２．２３３．２３４．２
３５．２３６．２３７．２３８．２３９．２４０゜２４
１．２４２で始まり、アごノ酸５１３番又はその付近、
例えば、５０５．５０６．５０７．５０８．５０９．５
１０゜５１１、５１２．５１３で終わる部分又はその一
部分又はその変異体をコードするｃＤＮＡを含む。
ここで述べている特定のＩ Ｌ−２Ｒβ鎖又はその一部
分に関し、個人個人で起こる自然対立遺伝子変異が存在
することは理解されよう、これらの変異は全配列におけ
る１個以上の可溶性部分の変化、又はその配列における
１個以上の可溶性部分の欠失、置換、挿入、転換又は付
加で示される。さらに、ここで述べるＩＬ−２Ｒ／ｊ鎖
又はその一部分は、これらの基本的特性を変化させるこ
となく１個以上の可溶性部分の置換、欠失又は付加を起
こすために遺伝子工学技術、例えば点突然変異などによ
り修正し得ることも理解されよう。従って本発明はここ
で述べたＤＮＡ配列とハイブリダイズし得、かつ実質的
にＩＬ−２Ｒ７？鎖又はその一部分、特に可溶性ＩＬ−
２Ｒβの特性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配
列も含む。
分に関し、個人個人で起こる自然対立遺伝子変異が存在
することは理解されよう、これらの変異は全配列におけ
る１個以上の可溶性部分の変化、又はその配列における
１個以上の可溶性部分の欠失、置換、挿入、転換又は付
加で示される。さらに、ここで述べるＩＬ−２Ｒ／ｊ鎖
又はその一部分は、これらの基本的特性を変化させるこ
となく１個以上の可溶性部分の置換、欠失又は付加を起
こすために遺伝子工学技術、例えば点突然変異などによ
り修正し得ることも理解されよう。従って本発明はここ
で述べたＤＮＡ配列とハイブリダイズし得、かつ実質的
にＩＬ−２Ｒ７？鎖又はその一部分、特に可溶性ＩＬ−
２Ｒβの特性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配
列も含む。
さらに本発明の別の特徴により、ヒトＩＬ−２Ｒβ（ｈ
ｌＬ−２Ｒβ）の水溶性部分、例えば全ｈｌＬ−２Ｒβ
の可溶性部分約１番から約２１０番までを含む可溶性部
分配列をコードする組換えＤＮＡ分子が提供される。こ
のようなりＮＡ分子は、例えば本来のＴＬ−２Ｒβ鎖の
可溶性部分１番から２１０番に対応する２１２個の可溶
性部分残基を有する可溶性ヒトインターロイキン２レセ
プターβ鎖誘導体をコードしている。
ｌＬ−２Ｒβ）の水溶性部分、例えば全ｈｌＬ−２Ｒβ
の可溶性部分約１番から約２１０番までを含む可溶性部
分配列をコードする組換えＤＮＡ分子が提供される。こ
のようなりＮＡ分子は、例えば本来のＴＬ−２Ｒβ鎖の
可溶性部分１番から２１０番に対応する２１２個の可溶
性部分残基を有する可溶性ヒトインターロイキン２レセ
プターβ鎖誘導体をコードしている。
例えば以下に述べる１つの態様において、可溶性ｈＩＬ
−２Ｒβ誘導体をコードするｃＤＮＡ分子の末端ヌクレ
オチド配列は以下のようである。
−２Ｒβ誘導体をコードするｃＤＮＡ分子の末端ヌクレ
オチド配列は以下のようである。
ＧＣＣＣＴＴ ＧＣＴ ＡＧＣＴＡＧ２０８
Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ ［
５ｔｏｐコ組換えＤＮＡ技術の標準的手法を用い、適当
な宿主細胞をトランスホームするベクターとして先に示
したＩＬ−２Ｒβ又はその望ましい部分又はその変異体
の構造遺伝子に対応するＣＤＮＡ配列を含むベクターを
構築し得る。
Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ ［
５ｔｏｐコ組換えＤＮＡ技術の標準的手法を用い、適当
な宿主細胞をトランスホームするベクターとして先に示
したＩＬ−２Ｒβ又はその望ましい部分又はその変異体
の構造遺伝子に対応するＣＤＮＡ配列を含むベクターを
構築し得る。
適当なベクターとしては例えばプラスミドベクターがあ
り、かつこれにはＩＬ−２Ｒβ鎖又はその一部分をコー
ドするｃＤＮＡ配列に機能的に結合する制御及び調節配
列が含まれている。
り、かつこれにはＩＬ−２Ｒβ鎖又はその一部分をコー
ドするｃＤＮＡ配列に機能的に結合する制御及び調節配
列が含まれている。
適当な手法はよく知られており、かつ広く実践されてい
る。他のタンパク質に関して、ヨーロッパ特許出願、出
願番号第０２５４２４９号及び第０１７０２０４号に例
が述べられている。
る。他のタンパク質に関して、ヨーロッパ特許出願、出
願番号第０２５４２４９号及び第０１７０２０４号に例
が述べられている。
培養物から純粋な形で目的タンパク質を得るために標準
的手法を使用し、これちのタンパク質はモノクローナル
抗体を調製するための適当な抗原を提供する。Ｉ Ｌ−
２Ｒβ鎮又はその望ましい部分に特異的アフィニティを
有するモノクローナル抗体を分泌し得るハイブリドーマ
は、非ヒト動物の組換えＩＬ−２Ｒβ又はその一部分に
よる免疫化、非免疫グロブリン分泌ミエローマ細抱を含
む牌細抱の収穫及プ該ハイブリドーマからの望ましい結
合特異性を有するモノクローナル抗体を生産する細瞼系
列の選択及プ望ましい場合の該ハイブリドーマのひきつ
づくサブクローニングにより調製する。
的手法を使用し、これちのタンパク質はモノクローナル
抗体を調製するための適当な抗原を提供する。Ｉ Ｌ−
２Ｒβ鎮又はその望ましい部分に特異的アフィニティを
有するモノクローナル抗体を分泌し得るハイブリドーマ
は、非ヒト動物の組換えＩＬ−２Ｒβ又はその一部分に
よる免疫化、非免疫グロブリン分泌ミエローマ細抱を含
む牌細抱の収穫及プ該ハイブリドーマからの望ましい結
合特異性を有するモノクローナル抗体を生産する細瞼系
列の選択及プ望ましい場合の該ハイブリドーマのひきつ
づくサブクローニングにより調製する。
ハイブリドーマの調製法及グそれから純粋を形でのモノ
クローナル抗体の入手技術はよく知られており、ヨーロ
ッパ特許出願、出願番号第０１６８７４５号に例が述べ
られている。
クローナル抗体の入手技術はよく知られており、ヨーロ
ッパ特許出願、出願番号第０１６８７４５号に例が述べ
られている。
本発明！二従がう抗体は例えば診断及び免疫抑制や活性
化による治療に有用である。先に述べたように、このよ
うな抗体は本発明の精製した組換えタンパク質を用いる
か、又は本発明のｃＤＮＡをトランスフエクシッンし、
多量のレセプターを発現する細胞を入手し、これらの細
胞を用いて抗体を得ることにより作ることができる。
化による治療に有用である。先に述べたように、このよ
うな抗体は本発明の精製した組換えタンパク質を用いる
か、又は本発明のｃＤＮＡをトランスフエクシッンし、
多量のレセプターを発現する細胞を入手し、これらの細
胞を用いて抗体を得ることにより作ることができる。
先に述べたように、本発明は、ＩＬ−２Ｒβ鎖及び可溶
性ＩＬ−２レセプターの可溶型に関している。可溶型に
は先に述べたＩＬ−２Ｒβの細胞外部分又はその一部分
をコードする部分的なｃＤＮＡ配列によりコードされる
ものを含んでいる。望ましい場合には、ＩＬ−２Ｒβ及
びα鎖の両方を同時に生産し得る。
性ＩＬ−２レセプターの可溶型に関している。可溶型に
は先に述べたＩＬ−２Ｒβの細胞外部分又はその一部分
をコードする部分的なｃＤＮＡ配列によりコードされる
ものを含んでいる。望ましい場合には、ＩＬ−２Ｒβ及
びα鎖の両方を同時に生産し得る。
ＩＬ−２β鎖の特異的部分に対するモノクローナル抗体
を使用するとレセプター鎖のエピトープを同定でき、従
って適当なモノクローナル抗体又は他のペプチド又はペ
プチド様又はタンパク質アナログ物質を用いたレセプタ
ーの活性の制御への道が開かれる。
を使用するとレセプター鎖のエピトープを同定でき、従
って適当なモノクローナル抗体又は他のペプチド又はペ
プチド様又はタンパク質アナログ物質を用いたレセプタ
ーの活性の制御への道が開かれる。
（ヒトＩＬ−２Ｒβ鎖をコードするｃＤＮＡクローンの
単離及び解析） ｃＤＮＡクローンの単離においては、両方ともヒト白血
病細胞系列ＹＴ（２０）上に存在するＩＬ−２Ｒβに対
して生産されたモノクローナル抗体Ｍｉｋ−β１及びＭ
ｉｋ−β２ （１９）を用いた発現クローニンイブ法
を適用した。
単離及び解析） ｃＤＮＡクローンの単離においては、両方ともヒト白血
病細胞系列ＹＴ（２０）上に存在するＩＬ−２Ｒβに対
して生産されたモノクローナル抗体Ｍｉｋ−β１及びＭ
ｉｋ−β２ （１９）を用いた発現クローニンイブ法
を適用した。
モノクローナル抗体Ｍｉｋ−βｌ及グ″、１ ｉ ｋ−
β２は両方とも日本の工業技術院と発酵研究Ｉ７ｒ（Ｆ
ｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｉｎ５ｔ
ｉｔｕｔｅ、Ａｇｅｎｃｙ ｏｆ Ｉｎｄｎｓｔｒｉａ
ｌＳｃｌｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
！二保管されているユＭｉｋ−βｌ及びＭｉｋ−β２の
登録番号：ま各々１０４．）３及び１０４５４ （１９
８ｇ）である。またそれちは日本特許出願番号第２９８
７４２号（１９８８） ！＝述べ与れて′ｌ）る。
β２は両方とも日本の工業技術院と発酵研究Ｉ７ｒ（Ｆ
ｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｉｎ５ｔ
ｉｔｕｔｅ、Ａｇｅｎｃｙ ｏｆ Ｉｎｄｎｓｔｒｉａ
ｌＳｃｌｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
！二保管されているユＭｉｋ−βｌ及びＭｉｋ−β２の
登録番号：ま各々１０４．）３及び１０４５４ （１９
８ｇ）である。またそれちは日本特許出願番号第２９８
７４２号（１９８８） ！＝述べ与れて′ｌ）る。
いくつかのＣＤＮＡライブラリーを標準操作：二よりＹ
Ｔ細胞由来のポ！Ｊ （Ａ）−ＲＮＡを用′ｌ）て調製
した。
Ｔ細胞由来のポ！Ｊ （Ａ）−ＲＮＡを用′ｌ）て調製
した。
ｃＤＮＡライブラリーは以下に述べ与れているランダム
プライマー（アマージャム製ン又はオリゴ（ｄＴ＞ブラ
イマーを用いた以外、報告されている操作により、ｃＯ
Ｍ８ベクターを用いて調製した。５．６×１０６個の独
立したコロニーを示すプラスミドＤＮＡが標準的手法で
調製された。１ミリグラムのＤＮＡを第１回目のＤＮＡ
）ランスフェクションに用いた。実際にはこのＤＮＡを
１００本のチューブに分け（従って各チューブは１０μ
ｇのＤＮＡを含む）、それらを各々組織培養皿（コーニ
ング製、６０ｍポリスチレン皿）中の３．５Ｘ１０’個
のモンキーＣＯ３細胞にトランスフェクションした。ト
ランスフェクションは標準的なりＥＡＲデキストラン法
を用いて行った。その後、トランスフェクトした細胞を
Ｍｉｋ−βｌ及びβ２抗体（各抗体について４００倍希
釈した腹水）の混合物で処理し、標準的パニング操作を
行った。パニングに用いたデイツシュは先に述べた抗マ
ウスＩｇＧでコートしたファルコン（ＦＡＬＣＯＮ）の
６０ｉ＋■デインシユである（参考文献２１）、この第
１回目のパニングにおいては１００個１ｇＧコートデイ
ツシュを用いた。パニング後、バー） ０Ｉｉｒｔ）抽
出物は標準法を用いて調製しく参考文献２１）、回収し
たプラスミドを参考文献２１で述べている方法を用いて
大腸菌中に導入した。この操作により３．７ＸｌＯ’個
のコロニーが得られた。これらの細菌コロニーを標準的
プロトプラスト融合操作を用い（参考文献２１） 、Ｃ
Ｏ５と融合させた。これらの融合実験では各々５Ｘ１０
’個のＣＯ３細胞を含む２６枚のコーニングデイツシュ
を用いた。
プライマー（アマージャム製ン又はオリゴ（ｄＴ＞ブラ
イマーを用いた以外、報告されている操作により、ｃＯ
Ｍ８ベクターを用いて調製した。５．６×１０６個の独
立したコロニーを示すプラスミドＤＮＡが標準的手法で
調製された。１ミリグラムのＤＮＡを第１回目のＤＮＡ
）ランスフェクションに用いた。実際にはこのＤＮＡを
１００本のチューブに分け（従って各チューブは１０μ
ｇのＤＮＡを含む）、それらを各々組織培養皿（コーニ
ング製、６０ｍポリスチレン皿）中の３．５Ｘ１０’個
のモンキーＣＯ３細胞にトランスフェクションした。ト
ランスフェクションは標準的なりＥＡＲデキストラン法
を用いて行った。その後、トランスフェクトした細胞を
Ｍｉｋ−βｌ及びβ２抗体（各抗体について４００倍希
釈した腹水）の混合物で処理し、標準的パニング操作を
行った。パニングに用いたデイツシュは先に述べた抗マ
ウスＩｇＧでコートしたファルコン（ＦＡＬＣＯＮ）の
６０ｉ＋■デインシユである（参考文献２１）、この第
１回目のパニングにおいては１００個１ｇＧコートデイ
ツシュを用いた。パニング後、バー） ０Ｉｉｒｔ）抽
出物は標準法を用いて調製しく参考文献２１）、回収し
たプラスミドを参考文献２１で述べている方法を用いて
大腸菌中に導入した。この操作により３．７ＸｌＯ’個
のコロニーが得られた。これらの細菌コロニーを標準的
プロトプラスト融合操作を用い（参考文献２１） 、Ｃ
Ｏ５と融合させた。これらの融合実験では各々５Ｘ１０
’個のＣＯ３細胞を含む２６枚のコーニングデイツシュ
を用いた。
融合後、このＣＯ８細胞について先に述べたパニングを
行ない、ついでハート抽出物を調製した。
行ない、ついでハート抽出物を調製した。
そのハート抽出物から３２．０００個の細菌コロニが得
られた。この融合・パニング操作を再度繰り返し、この
ハート抽出物から３２０００個の細菌コロニーを得た。
られた。この融合・パニング操作を再度繰り返し、この
ハート抽出物から３２０００個の細菌コロニーを得た。
同様の操作を再度繰り返し、２８０００個の細菌コロニ
ーを得たくその間、目的クローンの劇的増加があるはず
である〉。同様の操作を再度繰り返し、６０００個のコ
ロニーを得た。これらのコロニーから３０個のコロニー
をランダムにピックアンプし、そのｃＤＮＡ挿入物を分
析した。これらの中のわずか７個のコロニーが制限酵素
ＸｈｏｌでｃＤＮＡ挿入物を切り出すことができるプラ
スミドを含んでいた。ベクター由来のＸｈｏ１部位はｃ
ＤＮＡの両側に位置し、かつその他の全てのプラスミド
はＤＮＡ再配列によりそれらの切断部位を失っていた。
ーを得たくその間、目的クローンの劇的増加があるはず
である〉。同様の操作を再度繰り返し、６０００個のコ
ロニーを得た。これらのコロニーから３０個のコロニー
をランダムにピックアンプし、そのｃＤＮＡ挿入物を分
析した。これらの中のわずか７個のコロニーが制限酵素
ＸｈｏｌでｃＤＮＡ挿入物を切り出すことができるプラ
スミドを含んでいた。ベクター由来のＸｈｏ１部位はｃ
ＤＮＡの両側に位置し、かつその他の全てのプラスミド
はＤＮＡ再配列によりそれらの切断部位を失っていた。
事実それらの全ては本来の一ベクターに比ベサイズがた
いへん小さくなっていた。従って、それらは非特異的産
物であると考えた。一方それら７個のコロニー全ては従
来の制限酵素切断分析及びＤＮＡプロット法による同じ
ｍＲＮＡに由来することが確認された。それらのうちの
ｐｌＬ−２Ｒβ３０と命名された１個のプラスミドは、
互いに同一であることが分った他の６個のプラスミド（
ｐｌＬ−２Ｒβ９と命名されている〉よりも長いｃＤＮ
Ａを含んでいた。
いへん小さくなっていた。従って、それらは非特異的産
物であると考えた。一方それら７個のコロニー全ては従
来の制限酵素切断分析及びＤＮＡプロット法による同じ
ｍＲＮＡに由来することが確認された。それらのうちの
ｐｌＬ−２Ｒβ３０と命名された１個のプラスミドは、
互いに同一であることが分った他の６個のプラスミド（
ｐｌＬ−２Ｒβ９と命名されている〉よりも長いｃＤＮ
Ａを含んでいた。
それゆえ、この操作において我々は２個の独立するｃＤ
ＮＡクローン、ｐｌＬ−２Ｒβ９及びｐｔｔ。
ＮＡクローン、ｐｌＬ−２Ｒβ９及びｐｔｔ。
−２Ｒβ３０を単離した。すなわち、各々の発現産物は
その抗体と特異的に反応する。その２個のクローンは各
々１．３ｋｂ及び２．３ｋｂのｃＤＮＡ挿入物を含んで
おり、かつ互いにクロスハイブリダイズする。ひきつつ
（ｃＤＮＡの配列分析では、それらが同じ ｍＲＮＡを
示していることが明らかになった。事実、ＲＮＡブロッ
ティング分析は、そのｍＲＮＡの大きさがおよそ４ｋｂ
であることを示した（以下参照）つづいて、我々はプロ
ーブとしてクローン化ｃＤＮＡを用いて別のＹＴｃＤＮ
＾ライブラリーをスクリーニングし、ＩＬ−２Ｒβ鎖の
全ｍＲＮＡを共にカバーするいくつかの独立したｃＤＮ
Ａクローンを単離した。
その抗体と特異的に反応する。その２個のクローンは各
々１．３ｋｂ及び２．３ｋｂのｃＤＮＡ挿入物を含んで
おり、かつ互いにクロスハイブリダイズする。ひきつつ
（ｃＤＮＡの配列分析では、それらが同じ ｍＲＮＡを
示していることが明らかになった。事実、ＲＮＡブロッ
ティング分析は、そのｍＲＮＡの大きさがおよそ４ｋｂ
であることを示した（以下参照）つづいて、我々はプロ
ーブとしてクローン化ｃＤＮＡを用いて別のＹＴｃＤＮ
＾ライブラリーをスクリーニングし、ＩＬ−２Ｒβ鎖の
全ｍＲＮＡを共にカバーするいくつかの独立したｃＤＮ
Ａクローンを単離した。
このようにして、そのプローブ中のｐｌＬ−２Ｒβ９
ｃＤＮ＾挿入物を用いてこのｃＤＮＡライブラリーをス
クリーニングすることによりｐｌＬ−２Ｒβ６及びｐｌ
Ｌ−２Ｒβ１９を得た。
ｃＤＮ＾挿入物を用いてこのｃＤＮＡライブラリーをス
クリーニングすることによりｐｌＬ−２Ｒβ６及びｐｌ
Ｌ−２Ｒβ１９を得た。
ヒトＩＬ−２Ｒβ配列をコードするｃＤＮＡを含む上述
のプラスミドは、以下の受理番号で１９８９年３月２日
、発酵研究所（Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）にブダペスト協定に従がい
大腸菌ＭＣ１０６１／Ｐ３株中という形で保管された。
のプラスミドは、以下の受理番号で１９８９年３月２日
、発酵研究所（Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）にブダペスト協定に従がい
大腸菌ＭＣ１０６１／Ｐ３株中という形で保管された。
プラスミド 受入番号
ｐｌＬ−２Ｒβ６ ＦＥＲ月ＢＰ−２３１２ｐ
ｌＬ−２Ｒβ９ ＦＥＲ？ｌ ＢＰ−２３１３
ｐｌＬ−２Ｒβ１９ ＦＥＲＭ ＢＰ−２３１
４ｐｌＬ−２Ｒβ３０ ＦＥＲＭ ＢＰ−２３
１５クローン化した４個のｃＤＮへの完全なヌクレオチ
ド配列は決定された（第１図）。
ｌＬ−２Ｒβ９ ＦＥＲ？ｌ ＢＰ−２３１３
ｐｌＬ−２Ｒβ１９ ＦＥＲＭ ＢＰ−２３１
４ｐｌＬ−２Ｒβ３０ ＦＥＲＭ ＢＰ−２３
１５クローン化した４個のｃＤＮへの完全なヌクレオチ
ド配列は決定された（第１図）。
第１図はヒトＩＬ−２Ｒβ鎖ｃＤＮＡの構造を示してい
る。第１ａ図はクローン化したｃＤＮＡに由来するｍＲ
ＮＡを図で示したものである。点付、斜線、白及び黒の
長方形は各々鋼ＲＮＡのシグナル配列、細胞外、膜内及
び細胞質内の領域を表わしている。第１ｂ図はヒトＩＬ
−２Ｒβ鎖ｃＤＮＡのヌクレオチド及び可溶性部分の配
列を示している。この配列は上述のｃＤＮＡクローンの
完全なりＮＡ配列分析から誘導したものである。ヌクレ
オチドは右余白に番号付けし、可溶性部分は左余白に番
号付けした。
る。第１ａ図はクローン化したｃＤＮＡに由来するｍＲ
ＮＡを図で示したものである。点付、斜線、白及び黒の
長方形は各々鋼ＲＮＡのシグナル配列、細胞外、膜内及
び細胞質内の領域を表わしている。第１ｂ図はヒトＩＬ
−２Ｒβ鎖ｃＤＮＡのヌクレオチド及び可溶性部分の配
列を示している。この配列は上述のｃＤＮＡクローンの
完全なりＮＡ配列分析から誘導したものである。ヌクレ
オチドは右余白に番号付けし、可溶性部分は左余白に番
号付けした。
クローンｐＩＬ−２Ｒβ１９及びｐｌＬ−２Ｒβ６は各
々ヌクレオチド残基４２５及び１５３１番にＧ−Ａ突然
変異を含んでいた。従って、ｐｌＬ−２Ｒβ６ｃＤＮ＾
は細胞質領域にＴＡＧ）リプレットを有している。その
他の全てのクローン、ｐｌＬ−２Ｒβ３０、ｐｌＬ−２
Ｒβ１９及びｐｌＬ−２Ｒβ１６はその部位にＴＧＧ
）リプレットを有していることから、これは逆転写時の
誤まりに由来するものと考える。最初の下線部の２６個
の可溶性部分残基はコンセンサス配列から推定されるシ
グナル配列を表わしている（２２）。２５個の膜内可溶
性部分残基を太い下線で印されている。システィン残基
は箱で囲んである。？ｔＪ在的なＮ−グリコジル化部位
は二重下線で示した。推定されるポリアデニル化部位は
白ぬきの長方形で示した。まとめると、ＲＮＡはＮＹ様
ヒトリンパ球細胞系列ＹＴから調製し、またｃＤＮＡは
、ランダムプライマー（アマージャム製）（ｐｌＬ−２
Ｒβ６，９及び３０）又はオリゴ（ｄＴ）プライマー（
ｐｌＬ−２Ｒβ１９）を用いること以外報告されている
操作（２１）に従がいｃＤＭ８ベクターを用いて調製し
た。抗ＩＬ−２Ｒβモノクローナル抗体Ｍｉｋ−βｌ及
びＭｉｋ−β２の混合物によるｃＤＮＡライブラリーの
スクリーニングは先に示された方法（２１）に従って行
った。ヌクレオチド配列はグイデオキシチェーンターミ
ネーション法及び化学的分解法を組合せて決定した。
々ヌクレオチド残基４２５及び１５３１番にＧ−Ａ突然
変異を含んでいた。従って、ｐｌＬ−２Ｒβ６ｃＤＮ＾
は細胞質領域にＴＡＧ）リプレットを有している。その
他の全てのクローン、ｐｌＬ−２Ｒβ３０、ｐｌＬ−２
Ｒβ１９及びｐｌＬ−２Ｒβ１６はその部位にＴＧＧ
）リプレットを有していることから、これは逆転写時の
誤まりに由来するものと考える。最初の下線部の２６個
の可溶性部分残基はコンセンサス配列から推定されるシ
グナル配列を表わしている（２２）。２５個の膜内可溶
性部分残基を太い下線で印されている。システィン残基
は箱で囲んである。？ｔＪ在的なＮ−グリコジル化部位
は二重下線で示した。推定されるポリアデニル化部位は
白ぬきの長方形で示した。まとめると、ＲＮＡはＮＹ様
ヒトリンパ球細胞系列ＹＴから調製し、またｃＤＮＡは
、ランダムプライマー（アマージャム製）（ｐｌＬ−２
Ｒβ６，９及び３０）又はオリゴ（ｄＴ）プライマー（
ｐｌＬ−２Ｒβ１９）を用いること以外報告されている
操作（２１）に従がいｃＤＭ８ベクターを用いて調製し
た。抗ＩＬ−２Ｒβモノクローナル抗体Ｍｉｋ−βｌ及
びＭｉｋ−β２の混合物によるｃＤＮＡライブラリーの
スクリーニングは先に示された方法（２１）に従って行
った。ヌクレオチド配列はグイデオキシチェーンターミ
ネーション法及び化学的分解法を組合せて決定した。
第１図に示されているように、ｃＤＮＡは５５１個の可
溶性部分を含むタンパク質をコードする大きいオープン
リーディングフレームを含んでいる。
溶性部分を含むタンパク質をコードする大きいオープン
リーディングフレームを含んでいる。
タンパク質配列データベース（ナショナルバイオメディ
カルリサーチファンデーション、ワシントン。
カルリサーチファンデーション、ワシントン。
Ｄ、 Ｃ，）又は最近報告された配列中の他の既知りン
パク質との間に有意なホモロジーは見られなかった。他
の多くのサイトカインレセプターと異なり、ＩＬ−２Ｒ
α及びｆＬ−２Ｒ７？鎖は免疫グロブリンスーパーファ
ミリーに属していないようだ。
パク質との間に有意なホモロジーは見られなかった。他
の多くのサイトカインレセプターと異なり、ＩＬ−２Ｒ
α及びｆＬ−２Ｒ７？鎖は免疫グロブリンスーパーファ
ミリーに属していないようだ。
このタンパク質から誘導される構造から、Ｎ末端の２６
個のア壽ノ酸はシグナル配列を示していると考える。従
ってＩ Ｌ−２ＲＩ３鎖の成熟型は犯Ｈ８５８，３５８
と計算される５２５個の可溶性部分を含んでいる。第１
図に示されるように、このレセプター分子は２１４個の
可溶性部分を含む細胞外領域を有している。この領域は
８個のシスティン残基を含み、その中の５残基はＮ末端
側半分の中に存在し、かつそれらは９〜１２個の可溶性
部分により周期的に分断されている。システィン残基間
のジスルフィド結合はリガンド結合に適した安定な構造
を与えているようである。事実、システィン残基が豊富
に存在することは多くのレセプターのリガンド結合ドメ
インの共通した特徴の１つであるように思える（２３）
、ＩＬ−２Ｒβ鎖の細胞外領域内に存在する可溶性部分
（ａ、ａ）の推定数（２１４ａ、 ａ、 ）はＩＬ−
２Ｒｃｒ鎖中の数（２１９ａ、ａ、−）とほぼ等しいこ
とは注目に値する。このようなサイズの類似性は本レセ
プターに独特なヘテロニ量体レセプター複合体の構造を
考える上で重要である。というのはα及びβ鎖は独立に
同じＩＬ−２分子の異なる部位と相互作用を起こすから
である。
個のア壽ノ酸はシグナル配列を示していると考える。従
ってＩ Ｌ−２ＲＩ３鎖の成熟型は犯Ｈ８５８，３５８
と計算される５２５個の可溶性部分を含んでいる。第１
図に示されるように、このレセプター分子は２１４個の
可溶性部分を含む細胞外領域を有している。この領域は
８個のシスティン残基を含み、その中の５残基はＮ末端
側半分の中に存在し、かつそれらは９〜１２個の可溶性
部分により周期的に分断されている。システィン残基間
のジスルフィド結合はリガンド結合に適した安定な構造
を与えているようである。事実、システィン残基が豊富
に存在することは多くのレセプターのリガンド結合ドメ
インの共通した特徴の１つであるように思える（２３）
、ＩＬ−２Ｒβ鎖の細胞外領域内に存在する可溶性部分
（ａ、ａ）の推定数（２１４ａ、 ａ、 ）はＩＬ−
２Ｒｃｒ鎖中の数（２１９ａ、ａ、−）とほぼ等しいこ
とは注目に値する。このようなサイズの類似性は本レセ
プターに独特なヘテロニ量体レセプター複合体の構造を
考える上で重要である。というのはα及びβ鎖は独立に
同じＩＬ−２分子の異なる部位と相互作用を起こすから
である。
２１５から２３９番までの範囲の２５個の可溶性部分か
らなる疎水領域は本レセプターの膜内領域を構成してい
るようである（第１図及び第２図）。
らなる疎水領域は本レセプターの膜内領域を構成してい
るようである（第１図及び第２図）。
第２図は推定されるヒ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ
鎖前駆体構造のバイトロバシープロット分析である。こ
の分析はカイト（Ｋｙ ｔｅ）及びトウーリトル（［１
０ｃ）ｌｉｔｔｌｅ）の方法（３８）に従って行った。
鎖前駆体構造のバイトロバシープロット分析である。こ
の分析はカイト（Ｋｙ ｔｅ）及びトウーリトル（［１
０ｃ）ｌｉｔｔｌｅ）の方法（３８）に従って行った。
ＳＧ及びＴＭは各々シグナル配列及び膜内配列を表わし
ている。
ている。
β鎖の細胞質領域は２８６個の可溶性部分からなり、わ
ずか１３ａ、ａ長のα鎖よりもはるかに大きい。チロシ
ンキナーゼのコンセンサス配列（Ｇｌｙ−Ｘ−にＩｙ−
Ｘ−Ｘ−Ｇｌｙ） （２５）はこのβ鎖には存在しな
い、しかしトリプレットＡｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕの存在
（２９３〜２９５）は注目される。すなわちこれはいく
つかのタンパク賞キナーゼの触媒ドメインのコンセンサ
スモチーフであると考えられてきた（２５）。このβ鎖
の細胞質領域がタンパク質キナーゼ活性を持つという可
能性は朱にテトスされていない。この領域の一次構造は
別の興味ある特徴も明らかにした。つまり特定の可溶性
部分に関する強い選択性である。この領域にはプロリン
（４２／２８６）及びセリン（３０／２８６）が豊富で
ある。おもしろいことにこの“プロリンリッチ”構造は
Ｔ細胞の活性化経路に関するＴ細胞膜抗原ＣＤ２の細胞
質領域中にも存在することが示されている（２６）。こ
のプロリンリッチ構造はレセプター分子と他のシグナル
インジューサーとが結合するのに重要であるこの領域に
非球状構造を与える。多数のセリン残基はリン酸化の主
要な標的であり、このことがレセプター機能を調節して
いる（２７）、さらにこの細胞質領域は主として負電荷
可溶性部分に冨んでいる。事実、この領域はそのような
可溶性部分（すなわちグルタミン酸及びアスパラギン酸
）を４０個含んでおり、一方、正電荷残基（すなわちリ
ジン及びアルギニン）はわずか１８個しか含んでいない
。このような選択性は細胞質の中間領域（ａ、ａ、３４
５−３９０＞に特に顕著である。従って、β鎖の細胞質
ＮＭは極めて酸性である。全部でないにしろこれら独特
の特性のいくつかを合せると下流のシグナルインダラシ
３ン経路をさらに進める役割を担い得るのかもしれない
。レセプタータンパク質は潜在的Ｎ−グリコジル化部位
を５個含んでいる（第１Ｂ図）。
ずか１３ａ、ａ長のα鎖よりもはるかに大きい。チロシ
ンキナーゼのコンセンサス配列（Ｇｌｙ−Ｘ−にＩｙ−
Ｘ−Ｘ−Ｇｌｙ） （２５）はこのβ鎖には存在しな
い、しかしトリプレットＡｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕの存在
（２９３〜２９５）は注目される。すなわちこれはいく
つかのタンパク賞キナーゼの触媒ドメインのコンセンサ
スモチーフであると考えられてきた（２５）。このβ鎖
の細胞質領域がタンパク質キナーゼ活性を持つという可
能性は朱にテトスされていない。この領域の一次構造は
別の興味ある特徴も明らかにした。つまり特定の可溶性
部分に関する強い選択性である。この領域にはプロリン
（４２／２８６）及びセリン（３０／２８６）が豊富で
ある。おもしろいことにこの“プロリンリッチ”構造は
Ｔ細胞の活性化経路に関するＴ細胞膜抗原ＣＤ２の細胞
質領域中にも存在することが示されている（２６）。こ
のプロリンリッチ構造はレセプター分子と他のシグナル
インジューサーとが結合するのに重要であるこの領域に
非球状構造を与える。多数のセリン残基はリン酸化の主
要な標的であり、このことがレセプター機能を調節して
いる（２７）、さらにこの細胞質領域は主として負電荷
可溶性部分に冨んでいる。事実、この領域はそのような
可溶性部分（すなわちグルタミン酸及びアスパラギン酸
）を４０個含んでおり、一方、正電荷残基（すなわちリ
ジン及びアルギニン）はわずか１８個しか含んでいない
。このような選択性は細胞質の中間領域（ａ、ａ、３４
５−３９０＞に特に顕著である。従って、β鎖の細胞質
ＮＭは極めて酸性である。全部でないにしろこれら独特
の特性のいくつかを合せると下流のシグナルインダラシ
３ン経路をさらに進める役割を担い得るのかもしれない
。レセプタータンパク質は潜在的Ｎ−グリコジル化部位
を５個含んでいる（第１Ｂ図）。
そのうちの４個は細胞外領域に存在する。このような翻
訳後の修飾が実験上の成熟タンパク質分子（７０−７５
ＫＤ）と計算上のタンパク質分子（５８ＫＤ）の分子量
の差を説明している。α及びβ鎖のバイトロバシープロ
ット分析は両鎖中の細胞膜に隣接する疎水領域の存在を
明確にした（第２図）。これらの領域は両鎖間の非共有
結合的分子内会合に１役を担っている。
訳後の修飾が実験上の成熟タンパク質分子（７０−７５
ＫＤ）と計算上のタンパク質分子（５８ＫＤ）の分子量
の差を説明している。α及びβ鎖のバイトロバシープロ
ット分析は両鎖中の細胞膜に隣接する疎水領域の存在を
明確にした（第２図）。これらの領域は両鎖間の非共有
結合的分子内会合に１役を担っている。
（ヒトＩＬ−２Ｒβ鎖ｍＲＮＡの発現〉プローブとして
ｐｌＬ−２Ｒβ３０に由来するｃＤＮ＾ＤＮＡを用いて
ＩＬ−２Ｒβｎ＋ＲＮＡの発現を試験した。
ｐｌＬ−２Ｒβ３０に由来するｃＤＮ＾ＤＮＡを用いて
ＩＬ−２Ｒβｎ＋ＲＮＡの発現を試験した。
第３ａ図は種々の細胞におけるヒトＩＬ−２Ｒβ鎖ｍＲ
ＮＡの発現を説明している。以下の細胞源由来のポリ（
Ａ）”ＲＮＡ （レーン当り２μｇ）を調製し、標準
操作に従かいプローブとしてｐｌＬ−２Ｒβ３０由来ｃ
７） ヒ） Ｉ Ｌ −２ＲＩ ！１（ｃＤＮＡ（７）
Ｘｈｏｌ消化断片を用いてＲＮＡブロッティング分析を
行った（１４，１８．２７）。レーンｌ、ＹＴ；レーン
２、 Ｈｕｔ １０２ （ＨＴＬＶ−１でトランスホ
ームしたヒトＴ細胞系列） ； レーン３． ＭＴ−
２（ＨＴＬＶ−１ｔ’トランスホームしたヒトＴ細胞系
列）；レーン４゜ＡＲＨ−７７（多重ミエローマ系列）
；レーン５゜５ＫＷ６．４ （ＥＢＶでトランスホーム
したヒト３３１Ｊンバ芽球細胞系列〉 ；レーン６、Ｌ
１９３７（組織球白血病細胞系列）；レーン？、ＭＴ−
１（ＩＩＴＬＶ−１でトランスホームしたヒトＴ細胞系
列）；レーン８．ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ） （
ヒトＴ白血病細胞系列）；レーン９． ＨｅＬａ （ヒ
ト子宮がん細胞系列）。
ＮＡの発現を説明している。以下の細胞源由来のポリ（
Ａ）”ＲＮＡ （レーン当り２μｇ）を調製し、標準
操作に従かいプローブとしてｐｌＬ−２Ｒβ３０由来ｃ
７） ヒ） Ｉ Ｌ −２ＲＩ ！１（ｃＤＮＡ（７）
Ｘｈｏｌ消化断片を用いてＲＮＡブロッティング分析を
行った（１４，１８．２７）。レーンｌ、ＹＴ；レーン
２、 Ｈｕｔ １０２ （ＨＴＬＶ−１でトランスホ
ームしたヒトＴ細胞系列） ； レーン３． ＭＴ−
２（ＨＴＬＶ−１ｔ’トランスホームしたヒトＴ細胞系
列）；レーン４゜ＡＲＨ−７７（多重ミエローマ系列）
；レーン５゜５ＫＷ６．４ （ＥＢＶでトランスホーム
したヒト３３１Ｊンバ芽球細胞系列〉 ；レーン６、Ｌ
１９３７（組織球白血病細胞系列）；レーン？、ＭＴ−
１（ＩＩＴＬＶ−１でトランスホームしたヒトＴ細胞系
列）；レーン８．ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ） （
ヒトＴ白血病細胞系列）；レーン９． ＨｅＬａ （ヒ
ト子宮がん細胞系列）。
第３ａ図で示されているように、ＲＮＡプロット分析は
４ ｋｂｍＲＮＡの存在を明らかにし、かつその発現は
先にＩＬ−２Ｒβ鎖を有することが同定されているリン
パ球（すなわちＹＴ、 ＭＴ ２．）ｔｕｔ１０２、
Ｓ Ｋ Ｗ ６ 、 ４ ）に限られていた（１２，
１６゜１７）。一方、このｍＲＮ＾の発現はＪｕｒｋａ
Ｌ、 Ｍ Ｔ −１、Ｕ９３７．ＡＲＨ−７７及びＨｅ
Ｌａ Ｃａ１ｌなどの細胞では検出されなかった。基本
的にｍＲＮＡ発現レベルはＴＬ−２Ｒβ鎖発現レベルと
相関関係がある。
４ ｋｂｍＲＮＡの存在を明らかにし、かつその発現は
先にＩＬ−２Ｒβ鎖を有することが同定されているリン
パ球（すなわちＹＴ、 ＭＴ ２．）ｔｕｔ１０２、
Ｓ Ｋ Ｗ ６ 、 ４ ）に限られていた（１２，
１６゜１７）。一方、このｍＲＮ＾の発現はＪｕｒｋａ
Ｌ、 Ｍ Ｔ −１、Ｕ９３７．ＡＲＨ−７７及びＨｅ
Ｌａ Ｃａ１ｌなどの細胞では検出されなかった。基本
的にｍＲＮＡ発現レベルはＴＬ−２Ｒβ鎖発現レベルと
相関関係がある。
第３ｂ図はヒ１−ＰＢＬにおけるＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ
−２ＲαｍＲＮＡの発現を示している。全ＲＮＡ（レー
ン当り１５μｇ〉を各レーンにロードした。レーンｌ及
び４は非感作ヒト末端血液リンパ球（ＰＢＬ）を示して
いる；レーン２及び５，５μｇ／ｄフィトヘマグルチニ
ン（ＰＨＡ）で２４時間感作したＰＢＬ、レーン３及び
６，５μｇ／ｄＰＨＡで７２時間感作したＰＢＬ、ＲＮ
ＡプロットフィルターをＩＬ−２Ｒβプローブでハイブ
リダイズした（レーン１−３）、ＩＬ−２Ｒβプローブ
のデハイブリダイゼーション後同フィルターをＩＬ−２
Ｒαプローブ（ｐｓＶＩＬ２Ｒ−３由゛来のＸｂａｌ−
ＢＣｊ！ Ｉ断片）でハイブリダイズした（１４）（レ
ーン４−６）。
−２ＲαｍＲＮＡの発現を示している。全ＲＮＡ（レー
ン当り１５μｇ〉を各レーンにロードした。レーンｌ及
び４は非感作ヒト末端血液リンパ球（ＰＢＬ）を示して
いる；レーン２及び５，５μｇ／ｄフィトヘマグルチニ
ン（ＰＨＡ）で２４時間感作したＰＢＬ、レーン３及び
６，５μｇ／ｄＰＨＡで７２時間感作したＰＢＬ、ＲＮ
ＡプロットフィルターをＩＬ−２Ｒβプローブでハイブ
リダイズした（レーン１−３）、ＩＬ−２Ｒβプローブ
のデハイブリダイゼーション後同フィルターをＩＬ−２
Ｒαプローブ（ｐｓＶＩＬ２Ｒ−３由゛来のＸｂａｌ−
ＢＣｊ！ Ｉ断片）でハイブリダイズした（１４）（レ
ーン４−６）。
興味あることに、ＩＬ−２Ｒ７？ｍＲＮＡは非感作ＰＢ
Ｌで検出され、その発現レベルはマイトゲン感作後わず
か２．５倍まで徐々に増加した。フローサイトメトリー
分析のデータ（１９）に基づき、ｍＲＮＡ誘導パターン
はリンパ球集団の種類により異なるようだ。この発現パ
ターンはその発現が細胞のマイトゲン感作を厳格に要求
するＩＬ−２Ｒα鎖の発現とは全く異なり（第３ｂ図）
、このことは両遺伝子間の遺伝子発現の相違なるメカニ
ズムの存在を指差している。
Ｌで検出され、その発現レベルはマイトゲン感作後わず
か２．５倍まで徐々に増加した。フローサイトメトリー
分析のデータ（１９）に基づき、ｍＲＮＡ誘導パターン
はリンパ球集団の種類により異なるようだ。この発現パ
ターンはその発現が細胞のマイトゲン感作を厳格に要求
するＩＬ−２Ｒα鎖の発現とは全く異なり（第３ｂ図）
、このことは両遺伝子間の遺伝子発現の相違なるメカニ
ズムの存在を指差している。
ＰＢＬ及びＨＴＬＶ−１でトランスホームしたヒトＴ細
胞系列を含む種々の細胞系列に由来するゲノムＤＮＡの
サウザンプロット分析はこの遺伝子が単一コピーとして
存在し、かつこれらの細胞中で転位していないことを示
している。
胞系列を含む種々の細胞系列に由来するゲノムＤＮＡの
サウザンプロット分析はこの遺伝子が単一コピーとして
存在し、かつこれらの細胞中で転位していないことを示
している。
（ｃＤＮＡにコードされているＩＬ−２Ｒβ鎖のＩＬ−
２結合性） 次に我々はｃＤＮＡ産物がＩＬ−２と結合し、かつ実際
に先の研究で証明され、及び、又は指差されているＩＬ
−２Ｒβ鎖の性質を有しているかどうかを試すため一連
のｃＤＮＤＮＡ実験を行った。全コード領域を含むｃＤ
ＮＡの発現がマウスｌｃｋ遺伝子（２９）プロモーター
（ｐＬＣＫＲβ）又はモロニ白血病’フィルスＬＴＲ（
３０）（ｐＭＬＶＲβ〉により進行する２個の発現プラ
スミドを構築した。
２結合性） 次に我々はｃＤＮＡ産物がＩＬ−２と結合し、かつ実際
に先の研究で証明され、及び、又は指差されているＩＬ
−２Ｒβ鎖の性質を有しているかどうかを試すため一連
のｃＤＮＤＮＡ実験を行った。全コード領域を含むｃＤ
ＮＡの発現がマウスｌｃｋ遺伝子（２９）プロモーター
（ｐＬＣＫＲβ）又はモロニ白血病’フィルスＬＴＲ（
３０）（ｐＭＬＶＲβ〉により進行する２個の発現プラ
スミドを構築した。
発現ベクターは次に示す手順に従って構築した。
ｐｌＬ−２Ｒβ３０をＨｉｎｄ ｎ［で消化しくその切
断部位はｃＤＭ８のポリリンカー領域内に存在する）、
両端を充填した後Ｒａｍ）ｌ Ｉリンカ−を結合し再び
ライゲーションした。このプラスミドをさらにＢａｍＨ
Ｉで消化しβ鎖の全コード配列を含む１．８ｋｂのＤＮ
Ａ断片をマウスＩｃｋプロモーターを含むｐ１０１３ベ
クターのＢａｍ１ｌ Ｉ消化物に導入してｐＬＣＫＲβ
を構築した。またＢａｎ＋ＨＩで消化したｃＤＮＡ断片
をレトロウィルスベクターｐＺｉｐｓＶ（λ） （３
０）に導入しｐ：札ＶＲβを構築した。ヒ）ＩＬ−２Ｒ
α発現ベクターｐｓＶＩＬ２ＲｎｅｏはＥｃｏ−ｇｙｐ
ｔ遺伝子をｎｅｏ耐性遺伝子ト置換えルコと！、：ヨリ
Ｉ）ＳＶＩＬ２１１１−３ （１４”）か与構築した
ユ ヒ）ＩＬ−２を結合する表面分子を欠くことが知与れて
′、）るマウスＴ’Ｊンバ＠細抱ＥＬ−２艮’、”ヒト
Ｔ細胞白血病ジャーカット系列：＝プラスミドｐＬｃＫ
Ｒβを導入した。
断部位はｃＤＭ８のポリリンカー領域内に存在する）、
両端を充填した後Ｒａｍ）ｌ Ｉリンカ−を結合し再び
ライゲーションした。このプラスミドをさらにＢａｍＨ
Ｉで消化しβ鎖の全コード配列を含む１．８ｋｂのＤＮ
Ａ断片をマウスＩｃｋプロモーターを含むｐ１０１３ベ
クターのＢａｍ１ｌ Ｉ消化物に導入してｐＬＣＫＲβ
を構築した。またＢａｎ＋ＨＩで消化したｃＤＮＡ断片
をレトロウィルスベクターｐＺｉｐｓＶ（λ） （３
０）に導入しｐ：札ＶＲβを構築した。ヒ）ＩＬ−２Ｒ
α発現ベクターｐｓＶＩＬ２ＲｎｅｏはＥｃｏ−ｇｙｐ
ｔ遺伝子をｎｅｏ耐性遺伝子ト置換えルコと！、：ヨリ
Ｉ）ＳＶＩＬ２１１１−３ （１４”）か与構築した
ユ ヒ）ＩＬ−２を結合する表面分子を欠くことが知与れて
′、）るマウスＴ’Ｊンバ＠細抱ＥＬ−２艮’、”ヒト
Ｔ細胞白血病ジャーカット系列：＝プラスミドｐＬｃＫ
Ｒβを導入した。
ジャーカット及＝ＥＬ−４細胞への発現プラスミドのト
ランスフェクション：ま先：二報告されているエレクト
ロボレーシ２ンｊこより行った（３９）。
ランスフェクション：ま先：二報告されているエレクト
ロボレーシ２ンｊこより行った（３９）。
トランスフェクトした細胞はｌＯ％ウシ胎児血清（ＦＣ
５）及びＧ４１８ （ＥＬ−４に対して：ま１ｍｇ ／
ｒａｉｌ 、ジャーカットに対しては１．５ ｍｇ／
ｍｉｉ’）を含むＲＰ！４１１６４０培地中で選択した
ユヒ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ鎖のＣＤＮＡを同
時に発現する細胞を得るためｐＳＶＩＬ２Ｒｎｅｏでト
ランスフェクトしたジャーカット由来クローンＪα−５
をｐＬＣＫＲβ及びヒグロマイシン耐性遺伝子ｐｌ’１
ｇｙを含むプラスミドでコトランスフェクトした。二の
トランスフェクトした細胞は２００μｇ／ｄヒグロマイ
シンで選択した。これら２つの細胞へのｐＭＬＶＲβの
トランスフェクションは先に報告されているリン酸カル
シウム法（１４）で行ない、その細胞の選択は７００μ
ｇ／ｍ１Ｇ４１Ｂで行った。フローサイトメトリー分析
のため５Ｘ１０’個の細胞を４℃、３０分間抗体（腹水
１：５００希釈物）で処理した。洗浄後この細胞をフル
オレセイン結合ヤギ抗マウスＩｇＧで染色した。
５）及びＧ４１８ （ＥＬ−４に対して：ま１ｍｇ ／
ｒａｉｌ 、ジャーカットに対しては１．５ ｍｇ／
ｍｉｉ’）を含むＲＰ！４１１６４０培地中で選択した
ユヒ）ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ鎖のＣＤＮＡを同
時に発現する細胞を得るためｐＳＶＩＬ２Ｒｎｅｏでト
ランスフェクトしたジャーカット由来クローンＪα−５
をｐＬＣＫＲβ及びヒグロマイシン耐性遺伝子ｐｌ’１
ｇｙを含むプラスミドでコトランスフェクトした。二の
トランスフェクトした細胞は２００μｇ／ｄヒグロマイ
シンで選択した。これら２つの細胞へのｐＭＬＶＲβの
トランスフェクションは先に報告されているリン酸カル
シウム法（１４）で行ない、その細胞の選択は７００μ
ｇ／ｍ１Ｇ４１Ｂで行った。フローサイトメトリー分析
のため５Ｘ１０’個の細胞を４℃、３０分間抗体（腹水
１：５００希釈物）で処理した。洗浄後この細胞をフル
オレセイン結合ヤギ抗マウスＩｇＧで染色した。
染色細胞はＦＡＣＳ ４４０フローサイトメーター（ベ
ックマンデイツキ７ンソン製）で分析した。
ックマンデイツキ７ンソン製）で分析した。
”’Ｉ−ＩＬ−２結合検定及びスキャッチャードプロフ
ト分析は先に報告されている方法で行った（１２）。
ト分析は先に報告されている方法で行った（１２）。
第４ａ図はヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒβｃ
ＤＮＡ ）ランスフエクタントの細胞表面染色パターン
によりヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒ１９鎖ｃ
ＤＮＡの発現を示している。親細胞及び種々のトランス
ホーマント細胞を別々にモノクローナル抗ヒトＩＬ−２
Ｒα抗体、抗Ｔ、、 （−−−）、又はモノクローナル
抗ヒトｆＬ−２Ｒβ抗体、Ｍｉｋ−β１ （□）で染色
した。点ｖＡ（・・・・・・）はフルオレセイン結合ヤ
キ抗マウスＩｇＧのみで染色した細胞の蛍光プロフィー
ルである。使用した細胞は（１）ＥＪβ−１３（及びｐ
ＬＣＫＲβでトランスフェクトしたＥＬ−４由来クロー
ン）、（２）Ｊβ−８（ρＬＣＫＩ？βでトランスフェ
クトしたジャーカット由来クローン）、（３〉 Ｊα−
５（ｐｓＶＩＬ２Ｒｎｅｏでトランスフェクトしたジャ
ーカット由来クローン）、（４）Ｊα−２（ｐＬＣＫＲ
βでトランスフェクトしたＪα−５由来クローン）、（
５）Ｊαβ−１０（ｐＬＣＫＲβでトランスフェクトし
たＪα−５由来クローン）、及び（６）Ｆβ−３（ｐＭ
ＬＶＲβでトランスフェクトしたＮＩＨ３７３由来細胞
系列）である。
ＤＮＡ ）ランスフエクタントの細胞表面染色パターン
によりヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒ１９鎖ｃ
ＤＮＡの発現を示している。親細胞及び種々のトランス
ホーマント細胞を別々にモノクローナル抗ヒトＩＬ−２
Ｒα抗体、抗Ｔ、、 （−−−）、又はモノクローナル
抗ヒトｆＬ−２Ｒβ抗体、Ｍｉｋ−β１ （□）で染色
した。点ｖＡ（・・・・・・）はフルオレセイン結合ヤ
キ抗マウスＩｇＧのみで染色した細胞の蛍光プロフィー
ルである。使用した細胞は（１）ＥＪβ−１３（及びｐ
ＬＣＫＲβでトランスフェクトしたＥＬ−４由来クロー
ン）、（２）Ｊβ−８（ρＬＣＫＩ？βでトランスフェ
クトしたジャーカット由来クローン）、（３〉 Ｊα−
５（ｐｓＶＩＬ２Ｒｎｅｏでトランスフェクトしたジャ
ーカット由来クローン）、（４）Ｊα−２（ｐＬＣＫＲ
βでトランスフェクトしたＪα−５由来クローン）、（
５）Ｊαβ−１０（ｐＬＣＫＲβでトランスフェクトし
たＪα−５由来クローン）、及び（６）Ｆβ−３（ｐＭ
ＬＶＲβでトランスフェクトしたＮＩＨ３７３由来細胞
系列）である。
ｃＤＮＡ産物を発現する安定なトランスホーマントクロ
ーンはＦＡＣ５分析により判断されるようにＥＬ−４（
ＥＬβ−１３）及びジャーカット（Ｊβ−８）に関して
得られた（第４ａ図）。さらに我々はトランスフェクト
したヒトＩＬ−２Ｒα鎖ｃＤＮＡを発現するジャーカソ
トトランスホーマントクローンＪα−５に同遺伝子を導
入した。生成した２つのトランスホーマントＪａ−β−
２及びＪαβ−１０はα及びβ鎖を両方発現することが
分った（第４ａ図（４）、 （５））。期待されるよ
うに、これらトランスホーマントで発現されるｍＲＮＡ
のＲＮＡブロッティング分析はα及びβ鎖特異的ｍＲＮ
Ａは内在性遺伝子由来ではなくトランスフェクトしたｃ
ＤＮＡに由来することが明らかになった（２６）。
ーンはＦＡＣ５分析により判断されるようにＥＬ−４（
ＥＬβ−１３）及びジャーカット（Ｊβ−８）に関して
得られた（第４ａ図）。さらに我々はトランスフェクト
したヒトＩＬ−２Ｒα鎖ｃＤＮＡを発現するジャーカソ
トトランスホーマントクローンＪα−５に同遺伝子を導
入した。生成した２つのトランスホーマントＪａ−β−
２及びＪαβ−１０はα及びβ鎖を両方発現することが
分った（第４ａ図（４）、 （５））。期待されるよ
うに、これらトランスホーマントで発現されるｍＲＮＡ
のＲＮＡブロッティング分析はα及びβ鎖特異的ｍＲＮ
Ａは内在性遺伝子由来ではなくトランスフェクトしたｃ
ＤＮＡに由来することが明らかになった（２６）。
さらに非リンパ球におけるｃＤＮＡ産物の正当性を試す
ためプラスミドｐＭＬＶＲβをＮＩＨ３Ｔ３細胞由来細
胞系列２（３０）に導入し、ｃＤＮＡを発現するトラン
スホーマントドβ−３が得られた（第４ａ図（５））。
ためプラスミドｐＭＬＶＲβをＮＩＨ３Ｔ３細胞由来細
胞系列２（３０）に導入し、ｃＤＮＡを発現するトラン
スホーマントドβ−３が得られた（第４ａ図（５））。
ＩＬ−２結合実験は１１１５Ｉ ラベル化組換えヒトＩ
Ｌ−２を用いて行った。
Ｌ−２を用いて行った。
１４ｂ図はクローン化したｃＤＮＡを発現するトランス
フェクシントへの”’Ｉ−ＩＬ−２結合のスキャッチャ
ードプロフト分析によるα及びβ鎖の発現を示している
。Ｍｉｋ−βｌの１：１００希釈腹水の非存在下（−ｏ
−ｏ−）又は存在下（−・−・−）のｒＬ−２結合デー
タのスキャンチャードプロット。ＥＬβ−１３又はＪβ
−８へ（７） ”’１− Ｉ Ｌ−２の結合はＭｉｋ−
βｌにより完全に阻害された。
フェクシントへの”’Ｉ−ＩＬ−２結合のスキャッチャ
ードプロフト分析によるα及びβ鎖の発現を示している
。Ｍｉｋ−βｌの１：１００希釈腹水の非存在下（−ｏ
−ｏ−）又は存在下（−・−・−）のｒＬ−２結合デー
タのスキャンチャードプロット。ＥＬβ−１３又はＪβ
−８へ（７） ”’１− Ｉ Ｌ−２の結合はＭｉｋ−
βｌにより完全に阻害された。
親細胞ジャーカット又はＥＬ−４を試験した時、特異的
ＩＬ−２結合は観測されなかった。細胞当りのＩＬ−２
結合部位数及びレセプターアフィニティーはＩＬ−２結
合データのコンピュータ分析により決定した。（１）Ｅ
Ｌβ−１３、（２）Ｊβ−８、（３）Ｊα−５、（４）
Ｊαβ−２、（５）Ｊαβ−１０゜ ＥＬ−４由来クローン（ＥＬβ−１３）及びジャーカッ
ト由来クローン（Ｊβ−８）に見られるように、β鎖ｃ
ＤＮＡを発現する両クローンは各々Ｋｂの見積値４．０
ｎＭ及び２．７ｎＭというＩＬ−２に対する中程度の
アフィニティーを示した。これらの細胞に対するＩＬ−
２結合はＭｉｋ−β１抗体により完全に阻害された（第
４ｂ図（１）、 （２））。
ＩＬ−２結合は観測されなかった。細胞当りのＩＬ−２
結合部位数及びレセプターアフィニティーはＩＬ−２結
合データのコンピュータ分析により決定した。（１）Ｅ
Ｌβ−１３、（２）Ｊβ−８、（３）Ｊα−５、（４）
Ｊαβ−２、（５）Ｊαβ−１０゜ ＥＬ−４由来クローン（ＥＬβ−１３）及びジャーカッ
ト由来クローン（Ｊβ−８）に見られるように、β鎖ｃ
ＤＮＡを発現する両クローンは各々Ｋｂの見積値４．０
ｎＭ及び２．７ｎＭというＩＬ−２に対する中程度の
アフィニティーを示した。これらの細胞に対するＩＬ−
２結合はＭｉｋ−β１抗体により完全に阻害された（第
４ｂ図（１）、 （２））。
ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２ＲＩｃＤＮＡ両方を発現する
ジャーカット由来Ｊαβ−２及びＪαβ−１０クローン
は各々のＫｂ見積値Ｊαβ−２については２２＋）Ｍ及
び１５ｎＭ及びＪｃｘβ−１Ｏについて１９ｐＭ及び３
３ｎＭの高アフィニティτ−及び低アフィニティー両レ
セプターを示した。一方、α鎖ｃＤＮＡのみを発現する
ジャーカソト由来Ｊα−５親細胞はＩＬ−２に対する低
アフィニティーのみ（Ｋｄ ：１９．５ｎＭ）を示した
（第４ｂ図（３））、高アフィニティーｆＬ−２Ｒ発現
Ｊαβ−２細胞及びＪαβ−１Ｏ細胞の数は発現したＩ
Ｌ−２Ｒβ分子数と同程度であった。さらにこれらの細
胞のＭｉｋ−β１抗体による処理は細胞表面の高アフィ
ニティＩＬ−２結合部位を完全に妨害する一方低アフィ
ニティＩＬ−２Ｈの発現を残存させた（第４ｂ図（４）
、（’５））。これらの観察はｃＤＮＡにコードされる
ＩＬ−２Ｒβ分子がＩＬ−２Ｒα鎖と会合する高７フイ
ニテイレセプター複合体の形成に直接関与することを明
白に示している。先に述べたＴ細胞トランスホーマント
とは対照的に、Ｆβ−３細胞は同結合条件下細胞表面に
おけるＩＬ−２結合を示さなかった。興味深いことに同
しような結果がβ鎖は発現するがＩＬ−２は結合しない
モンキーＣＯ８細胞でも観察された（２８）、従ってこ
の結果は機能的ＩＬ−２Ｒβ鎖発現に対する細胞型特異
的プロセシングメカニズム又は別の細胞成分又はその両
方の関与を示唆している。
ジャーカット由来Ｊαβ−２及びＪαβ−１０クローン
は各々のＫｂ見積値Ｊαβ−２については２２＋）Ｍ及
び１５ｎＭ及びＪｃｘβ−１Ｏについて１９ｐＭ及び３
３ｎＭの高アフィニティτ−及び低アフィニティー両レ
セプターを示した。一方、α鎖ｃＤＮＡのみを発現する
ジャーカソト由来Ｊα−５親細胞はＩＬ−２に対する低
アフィニティーのみ（Ｋｄ ：１９．５ｎＭ）を示した
（第４ｂ図（３））、高アフィニティーｆＬ−２Ｒ発現
Ｊαβ−２細胞及びＪαβ−１Ｏ細胞の数は発現したＩ
Ｌ−２Ｒβ分子数と同程度であった。さらにこれらの細
胞のＭｉｋ−β１抗体による処理は細胞表面の高アフィ
ニティＩＬ−２結合部位を完全に妨害する一方低アフィ
ニティＩＬ−２Ｈの発現を残存させた（第４ｂ図（４）
、（’５））。これらの観察はｃＤＮＡにコードされる
ＩＬ−２Ｒβ分子がＩＬ−２Ｒα鎖と会合する高７フイ
ニテイレセプター複合体の形成に直接関与することを明
白に示している。先に述べたＴ細胞トランスホーマント
とは対照的に、Ｆβ−３細胞は同結合条件下細胞表面に
おけるＩＬ−２結合を示さなかった。興味深いことに同
しような結果がβ鎖は発現するがＩＬ−２は結合しない
モンキーＣＯ８細胞でも観察された（２８）、従ってこ
の結果は機能的ＩＬ−２Ｒβ鎖発現に対する細胞型特異
的プロセシングメカニズム又は別の細胞成分又はその両
方の関与を示唆している。
さらに再構成したＩＬ−２Ｒの分子構造の特性化を行う
ため我々は”’Ｉ−ＩＬ−２及び非切断化学的架橋剤、
ジスクシニ逅ジルスベレート（ＤＳＳ）を用いた化学的
架橋実験を行った。
ため我々は”’Ｉ−ＩＬ−２及び非切断化学的架橋剤、
ジスクシニ逅ジルスベレート（ＤＳＳ）を用いた化学的
架橋実験を行った。
第５図はＩＬ−２Ｒポジテイブトランスホーマントのア
フィニティー架橋実験の結果を示している。２５０倍モ
ル過剰量の未うベルＩＬ−２（レーン５−７） 、５０
０倍モル過剰量のアフィニティカラム精製Ｍｉｋ−βｌ
（レーン８−１０）又は５００倍モル過剰量のアフィ
ニティーカラム抗Ｔ、ｃ（レーン１ｌ−１３）の存在下
又は非存在下（レーン１〜４．１４〜１６） 、５ｎＭ
（レーン１〜１３）又は１０１００ｐレーン１４−１
６）の”Ｊ−ＩＬ−２と細胞とインキエベートした。
フィニティー架橋実験の結果を示している。２５０倍モ
ル過剰量の未うベルＩＬ−２（レーン５−７） 、５０
０倍モル過剰量のアフィニティカラム精製Ｍｉｋ−βｌ
（レーン８−１０）又は５００倍モル過剰量のアフィ
ニティーカラム抗Ｔ、ｃ（レーン１ｌ−１３）の存在下
又は非存在下（レーン１〜４．１４〜１６） 、５ｎＭ
（レーン１〜１３）又は１０１００ｐレーン１４−１
６）の”Ｊ−ＩＬ−２と細胞とインキエベートした。
その後先に報告されているように（１６）ジスクシニミ
ジルスベレー） （ＤＳＳ）を用いて細胞を化学的に架
橋した。その細胞を可溶化し、その上清を７．５％５Ｏ
Ｓ−ＰＡＧＥで分析した。細胞は：ジャーカット（レー
ン１）；Ｊα−５（レーン２．５゜８．１１．１４）；
Ｊβ−８（レーン３，６．９゜１２．１５）；Ｊαβ−
１０（レーン４．７゜１０．１３．１６）を用いた。マ
ーカー（Ｍ）としては”Ｉ−ＩＬ−２と架橋したＹＴ細
胞を用いた。
ジルスベレー） （ＤＳＳ）を用いて細胞を化学的に架
橋した。その細胞を可溶化し、その上清を７．５％５Ｏ
Ｓ−ＰＡＧＥで分析した。細胞は：ジャーカット（レー
ン１）；Ｊα−５（レーン２．５゜８．１１．１４）；
Ｊβ−８（レーン３，６．９゜１２．１５）；Ｊαβ−
１０（レーン４．７゜１０．１３．１６）を用いた。マ
ーカー（Ｍ）としては”Ｉ−ＩＬ−２と架橋したＹＴ細
胞を用いた。
ＩＺＪ−ラベル化Ｉ Ｌ−２と架橋し、５ＯＳ−ＰＡＧ
Ｅ分析を行ったＩＬ−２Ｒβのみを発現する細胞に見ら
れるように、９０ＫＤメジャーバンド及び８５ＫＤマイ
ナーバンドから成るダブレフトバンドが検出され、その
移動度プロフィールはＹＴ細胞とのものとは区別し得る
ものであった（第５図矢印及び参考文献１６．１７参照
）。このダブレットの出現は過剰の未うベルｒＬ−２又
はＭｉｋ−β１により阻害された。このダブレットの形
成はレセプター−ＩＬ−２複合体の分解に由来するもの
かもしれない。またこの両タンパク質産物は個々の翻訳
後修飾に由来する可能性もある。もしくはこのダブレッ
トの１つはレセプター複合体の第３の成分を示している
のかもしれない。また１５０ＫＤ領域に泳動するブロー
ドバンドがトランスフェクタントＪαβ−１０及びＹＴ
細胞に検出された。このバンドの出現も未うベル化ＩＬ
２又は旧に一β１により阻害される。それは！Ｌ−２、
ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ分子の三者複合体を表わ
している。第４図に示されている一連の化学的架橋実験
においてＪαβ−２の表面に発現されるレセプター複合
体の物理化学的性質は培養したＴ細胞又はＰＢＬ上に発
現される高アフィニティレセプターの性質と区別し得る
ものであることが示された（１２，１６．１７）。
Ｅ分析を行ったＩＬ−２Ｒβのみを発現する細胞に見ら
れるように、９０ＫＤメジャーバンド及び８５ＫＤマイ
ナーバンドから成るダブレフトバンドが検出され、その
移動度プロフィールはＹＴ細胞とのものとは区別し得る
ものであった（第５図矢印及び参考文献１６．１７参照
）。このダブレットの出現は過剰の未うベルｒＬ−２又
はＭｉｋ−β１により阻害された。このダブレットの形
成はレセプター−ＩＬ−２複合体の分解に由来するもの
かもしれない。またこの両タンパク質産物は個々の翻訳
後修飾に由来する可能性もある。もしくはこのダブレッ
トの１つはレセプター複合体の第３の成分を示している
のかもしれない。また１５０ＫＤ領域に泳動するブロー
ドバンドがトランスフェクタントＪαβ−１０及びＹＴ
細胞に検出された。このバンドの出現も未うベル化ＩＬ
２又は旧に一β１により阻害される。それは！Ｌ−２、
ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ−２Ｒβ分子の三者複合体を表わ
している。第４図に示されている一連の化学的架橋実験
においてＪαβ−２の表面に発現されるレセプター複合
体の物理化学的性質は培養したＴ細胞又はＰＢＬ上に発
現される高アフィニティレセプターの性質と区別し得る
ものであることが示された（１２，１６．１７）。
非リンパ球におけるα及びβ鎖の発現が高アフィニティ
ーレセプターを生成させるかどうかを決定するための予
備実験の結果は、α及びβ鎖ｃＤＮ＾がＣＯＳ細胞細胞
−時的に共に発現される時同様に発現されたα鎖のみで
は架橋し得ない濃度（４００ｎＭ）の１ｔ５１−ＩＬ−
２と両鏡が架橋し得ることを示している（２８〉。この
結果は本非リンパ細胞系列におけるαβヘテロニ量体レ
セプターの形成を示唆している。
ーレセプターを生成させるかどうかを決定するための予
備実験の結果は、α及びβ鎖ｃＤＮ＾がＣＯＳ細胞細胞
−時的に共に発現される時同様に発現されたα鎖のみで
は架橋し得ない濃度（４００ｎＭ）の１ｔ５１−ＩＬ−
２と両鏡が架橋し得ることを示している（２８〉。この
結果は本非リンパ細胞系列におけるαβヘテロニ量体レ
セプターの形成を示唆している。
（再構成レセプターによるＩＬ−２の取込み）中及び高
アフィニティＩＬ−２レセプターはいずれもＩＬ−２を
取込むことが報告されている（３３−３５）。リガンド
の取込みは通常ＩＬ−２シグナルトランスダクションを
伴なう。このことはこの過程が不可欠であることを示し
ている。
アフィニティＩＬ−２レセプターはいずれもＩＬ−２を
取込むことが報告されている（３３−３５）。リガンド
の取込みは通常ＩＬ−２シグナルトランスダクションを
伴なう。このことはこの過程が不可欠であることを示し
ている。
第６図は再構成レセプターを介するＩＬ−２取込みを示
している。ＩＬ−２取込みは先に報告されている方法（
３３）に従って試験した。簡単に言うと細胞（５Ｘ１０
’）を０℃で３０分間、最終濃度２００ｐＭ（Ｊαβ−
１０）又は５ｎＭ（Ｊα−５、Ｊβ−８及びＥＬβ−１
３）のＩ！Ｊ ＩＬ−２で処理した。洗浄後、細胞を
予熱した培養培地（３７℃）に懸濁し、ついでＩＬ−２
の取込みの速度論を先に報告されている方法（３３）で
試験した。（ａ）ＥＬβ−１３、（ｂ）Ｊβ−８、（ｃ
）Ｊαβ−１Ｏ１（ｄ）Ｊα−５゜（−・−・−・−〉
、取込まれたＩＬ−２；（・−・０・・・Ｏ・・〜）、
細胞表面に結合したＩＬ−２；（−ドパ一−１−）、遊
離ＩＬ−２゜ 第６図に示されているように、我々は再構成したレセプ
ターがＩＬ−２を取込み得るかどうか試験した。事実、
ＩＬ−２Ｒβ鎖のみ、又はα及びβ両鎖を発現する細胞
は天然のレセプターについて報告されているものと同じ
速度論に従がいＩＬ−２を取込み得る。一方、ＩＬ−２
Ｒαのみを発現するジャーカット細胞は先に報告されて
いる観察と同じく （３３，３４）［Ｌ−２を取込まな
かった。予備実験では中又は高アフィニティレセプター
を発現する細胞の増殖はＩＬ−２により選択的に阻害さ
れることが示された（１４．３６〉。
している。ＩＬ−２取込みは先に報告されている方法（
３３）に従って試験した。簡単に言うと細胞（５Ｘ１０
’）を０℃で３０分間、最終濃度２００ｐＭ（Ｊαβ−
１０）又は５ｎＭ（Ｊα−５、Ｊβ−８及びＥＬβ−１
３）のＩ！Ｊ ＩＬ−２で処理した。洗浄後、細胞を
予熱した培養培地（３７℃）に懸濁し、ついでＩＬ−２
の取込みの速度論を先に報告されている方法（３３）で
試験した。（ａ）ＥＬβ−１３、（ｂ）Ｊβ−８、（ｃ
）Ｊαβ−１Ｏ１（ｄ）Ｊα−５゜（−・−・−・−〉
、取込まれたＩＬ−２；（・−・０・・・Ｏ・・〜）、
細胞表面に結合したＩＬ−２；（−ドパ一−１−）、遊
離ＩＬ−２゜ 第６図に示されているように、我々は再構成したレセプ
ターがＩＬ−２を取込み得るかどうか試験した。事実、
ＩＬ−２Ｒβ鎖のみ、又はα及びβ両鎖を発現する細胞
は天然のレセプターについて報告されているものと同じ
速度論に従がいＩＬ−２を取込み得る。一方、ＩＬ−２
Ｒαのみを発現するジャーカット細胞は先に報告されて
いる観察と同じく （３３，３４）［Ｌ−２を取込まな
かった。予備実験では中又は高アフィニティレセプター
を発現する細胞の増殖はＩＬ−２により選択的に阻害さ
れることが示された（１４．３６〉。
また我々は他の宿主細胞系列で発現されるβ鎖はＩＬ−
２に応答してその細胞増殖を促進するという予備的実験
結果を得た（２８）。
２に応答してその細胞増殖を促進するという予備的実験
結果を得た（２８）。
（マウスＩＬ−２Ｒレセプターβ鎖のクローニング）
マウスＩＬ−２レセプターβ鎖に対する特異的抗体の存
在は知られていない。したがってヒト■Ｌ−２Ｒβ鎖の
ｃＤＮＡ単離に用いるスクリーニング法は使用されなか
った。
在は知られていない。したがってヒト■Ｌ−２Ｒβ鎖の
ｃＤＮＡ単離に用いるスクリーニング法は使用されなか
った。
ｃＤＮＡライブラリーはコンカナバリンＡ感作マウス牌
細胞由来のポリ （Ａ”）ＲＮＡを用いて調製した。こ
のｃＤＮＡをλｇｔｌＯにクローン化し大腸菌で増殖し
た。
細胞由来のポリ （Ａ”）ＲＮＡを用いて調製した。こ
のｃＤＮＡをλｇｔｌＯにクローン化し大腸菌で増殖し
た。
このライブラリーのスクリーニングはノンストリンジェ
ント条件下、プローブとして先に述べたヒトＩＬ−２Ｒ
β鎖ｃＤＮ＾を用いて行った。陽性クローンからλＭＩ
Ｌ−２Ｒβ−２６と命名したクローンを選択した。この
クローン中のｃＤＮＡ挿入物は全マウスＩＬ−２Ｒβ鎖
配列のうちのわずか５４０ｂｐの配列しか含んでいなか
った。それゆえこの配列はＰｖｕ ２を用いたλＭＩＬ
−２Ｒβ−２６の消化により単離し、標準的手法により
マウス胸腺腫瘍細胞系列ＥＬ−４由来のポリ （Ａ）゛
を用いて調製した別のｃＤＮパライブラリ−をスクリー
ニングするのに使用し、かつｃＭＤベクターのＢｓｔＸ
１部位にクローン化した後大腸菌にトランスフェクトさ
れた。
ント条件下、プローブとして先に述べたヒトＩＬ−２Ｒ
β鎖ｃＤＮ＾を用いて行った。陽性クローンからλＭＩ
Ｌ−２Ｒβ−２６と命名したクローンを選択した。この
クローン中のｃＤＮＡ挿入物は全マウスＩＬ−２Ｒβ鎖
配列のうちのわずか５４０ｂｐの配列しか含んでいなか
った。それゆえこの配列はＰｖｕ ２を用いたλＭＩＬ
−２Ｒβ−２６の消化により単離し、標準的手法により
マウス胸腺腫瘍細胞系列ＥＬ−４由来のポリ （Ａ）゛
を用いて調製した別のｃＤＮパライブラリ−をスクリー
ニングするのに使用し、かつｃＭＤベクターのＢｓｔＸ
１部位にクローン化した後大腸菌にトランスフェクトさ
れた。
このＣＤ Ｎ Ａライブラリーのスクリーニングはヨー
ロッパ特許出願第８８１１９６０２．９号及びカシワ（
Ｋａｓｈｉｍａ）等（ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ）
、３１３．４０２−４０４ （１９８５））の方法ｉ二
階がいハイストリンジェント条件下で行ったよ 陽性クローンの中か３マウスＩＬ−２Ｒβの構造遺伝子
を含む（第８図参照）クローンｐＭＩＬ−２Ｒθ−３６
を選択した。このｃＤＮＡクローンの制限地図を第７１
！ｌに示す。
ロッパ特許出願第８８１１９６０２．９号及びカシワ（
Ｋａｓｈｉｍａ）等（ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ）
、３１３．４０２−４０４ （１９８５））の方法ｉ二
階がいハイストリンジェント条件下で行ったよ 陽性クローンの中か３マウスＩＬ−２Ｒβの構造遺伝子
を含む（第８図参照）クローンｐＭＩＬ−２Ｒθ−３６
を選択した。このｃＤＮＡクローンの制限地図を第７１
！ｌに示す。
プラスミドｐ’ｖ１１Ｌ−２Ｒβ−３６はブダペスト協
定に基づき１９８９年５月２３日受理番号ＦＥＲ？、ｌ
０Ｐ−２４３５としてファーメンテーションリサーチ
インスチチ二−トに大腸菌！ＪＣ１０６１／Ｐ３株中に
含まれる形で保管登録した。
定に基づき１９８９年５月２３日受理番号ＦＥＲ？、ｌ
０Ｐ−２４３５としてファーメンテーションリサーチ
インスチチ二−トに大腸菌！ＪＣ１０６１／Ｐ３株中に
含まれる形で保管登録した。
（可溶性ヒトインターロイキン２レセプターβ鎮の調製
） 分泌型のｈＩＬ−２Ｒβ（以後可溶性β〉はＮＩＨ３Ｔ
３繊維芽細胞を本来のβ鎖の細胞質内ドメイン及び膜内
ドメインの両方をコードする全ＤＮＡ配列を欠く修正β
＃ＪＩｃＤＮＡ （“アンカーマイナス“ｃＤＮＡ ）
でトランスフェクトすることにまり生成した。
） 分泌型のｈＩＬ−２Ｒβ（以後可溶性β〉はＮＩＨ３Ｔ
３繊維芽細胞を本来のβ鎖の細胞質内ドメイン及び膜内
ドメインの両方をコードする全ＤＮＡ配列を欠く修正β
＃ＪＩｃＤＮＡ （“アンカーマイナス“ｃＤＮＡ ）
でトランスフェクトすることにまり生成した。
（可溶性β）をコードするアンカーマイナスＣＤＮＡを
宿す発現ベクター（ＢＣ！、ＩＧＸｅｏ−５ｏ１．β）
の構築）β鎖ＣＯ＼Ａ（第１ｂ図）を可溶性β生産用ｊ
＝アンカーマイナス型ｊ：修正したつアンカーマイナス
ＣＤＮＡを含こ゛発現ベクターを生成する方策を第９図
ｊ二示す。まずＣＤＭ８ベクター中２．３Ｋｌ）β１ｉ
１ｃ Ｄ ＮＡを含むプラスミドｐｌＬ−２Ｒβ３０を
Ｂｓ５ＨＩ［及” Ｓｍａ Ｉ （全ての制限酵素：
まニューイングランドバイオラブ社製、ビバＩＪ−１Ｍ
ＡＳＵ Ｓ Ａ）で消化し、β鎖の全コード配列〈塩基
１２１〜１７７３）を含ｊ′１．９にｂ Ｃ［）ＮＡ断
片（塩基５８−１９６７）を得た。
宿す発現ベクター（ＢＣ！、ＩＧＸｅｏ−５ｏ１．β）
の構築）β鎖ＣＯ＼Ａ（第１ｂ図）を可溶性β生産用ｊ
＝アンカーマイナス型ｊ：修正したつアンカーマイナス
ＣＤＮＡを含こ゛発現ベクターを生成する方策を第９図
ｊ二示す。まずＣＤＭ８ベクター中２．３Ｋｌ）β１ｉ
１ｃ Ｄ ＮＡを含むプラスミドｐｌＬ−２Ｒβ３０を
Ｂｓ５ＨＩ［及” Ｓｍａ Ｉ （全ての制限酵素：
まニューイングランドバイオラブ社製、ビバＩＪ−１Ｍ
ＡＳＵ Ｓ Ａ）で消化し、β鎖の全コード配列〈塩基
１２１〜１７７３）を含ｊ′１．９にｂ Ｃ［）ＮＡ断
片（塩基５８−１９６７）を得た。
Ｂｓ５ＨＩｆ末端を充填後、１．９ Ｋｂ ｃＤＮＡを
ｐブルースクリプト （ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ） Ｓ
Ｋベクター（ストラタジーン社、サンディエゴ、 Ｃ
Ａ、 ＵＳＡ）のＳｍａ Ｉ制限部位に挿入した。それ
から二のｐブルースフリブ）ＳＫ−β１．９プラスミド
を５ｔｙＩ（制限部位、塩基８２５．９３４及’ｊ １
２３５）及” Ｓｍａ ｌで消化して、ｉヨとんどの細
胞外領域のほとんどを表す塩基１２１−８４０をそのま
ま残し全ての細抱質内及グ膜内領域を除いた。次！二多
重終止コドン（ＴＡＧ）及びＮｈｅ Ｉ認識配列を含む
１２塩基長の台底リンカーにコーイングランドバイオラ
ブ社製、＝１１）６０）をリン酸化し、Ｔ４ＤＮＡリガ
ーゼを用−）で５ｔｙＩ、、’Ｓｏ＋ａｌ消化したプラ
スミドＤ Ｎ Ａ！ニライゲーシミンした。Ｎｈｅ ■
で消化して過剰のリンカ−を除′、）た後、このＤＮＡ
をＳＫベクター！ニライゲーションしてｐブルースクリ
プトＳに一５ｏｌ、βを構築しこのｐブルースクリプト
Ｓに一５ｏ１．βをＳａｔ Ｉ及びＮｏｔ ［て消化し
くこの制限部位はｐブルースクリプトＳＫベクターのポ
リリンカー領域内ｆこ存在する）、生成した可溶性βを
含む０．８ＫｂのｃＤＮＡ断片を単離した。二〇〇ＤＮ
Ａ断片をサイトメガロウィルス（ＣＭＶ〉プロモーター
及ヒネオマイシン耐性遺伝子を含ｔ′ＢＣＭＧＮｅｏベ
クター（カラスヤマ（Ｋａｒａｓｕｙａｍａ）等、ジャ
ーナル・オブ・エクスベリメンタル・メディシン（Ｊ、
εＸ＋）０Ｍｅｄ、）、 １６９ 。
ｐブルースクリプト （ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ） Ｓ
Ｋベクター（ストラタジーン社、サンディエゴ、 Ｃ
Ａ、 ＵＳＡ）のＳｍａ Ｉ制限部位に挿入した。それ
から二のｐブルースフリブ）ＳＫ−β１．９プラスミド
を５ｔｙＩ（制限部位、塩基８２５．９３４及’ｊ １
２３５）及” Ｓｍａ ｌで消化して、ｉヨとんどの細
胞外領域のほとんどを表す塩基１２１−８４０をそのま
ま残し全ての細抱質内及グ膜内領域を除いた。次！二多
重終止コドン（ＴＡＧ）及びＮｈｅ Ｉ認識配列を含む
１２塩基長の台底リンカーにコーイングランドバイオラ
ブ社製、＝１１）６０）をリン酸化し、Ｔ４ＤＮＡリガ
ーゼを用−）で５ｔｙＩ、、’Ｓｏ＋ａｌ消化したプラ
スミドＤ Ｎ Ａ！ニライゲーシミンした。Ｎｈｅ ■
で消化して過剰のリンカ−を除′、）た後、このＤＮＡ
をＳＫベクター！ニライゲーションしてｐブルースクリ
プトＳに一５ｏｌ、βを構築しこのｐブルースクリプト
Ｓに一５ｏ１．βをＳａｔ Ｉ及びＮｏｔ ［て消化し
くこの制限部位はｐブルースクリプトＳＫベクターのポ
リリンカー領域内ｆこ存在する）、生成した可溶性βを
含む０．８ＫｂのｃＤＮＡ断片を単離した。二〇〇ＤＮ
Ａ断片をサイトメガロウィルス（ＣＭＶ〉プロモーター
及ヒネオマイシン耐性遺伝子を含ｔ′ＢＣＭＧＮｅｏベ
クター（カラスヤマ（Ｋａｒａｓｕｙａｍａ）等、ジャ
ーナル・オブ・エクスベリメンタル・メディシン（Ｊ、
εＸ＋）０Ｍｅｄ、）、 １６９ 。
１３−２５ （１９８９）参照〉のＸｈｏｌ／Ｎｏｔ
Ｉ消化物に導入し最終的発現プラスミドＢＣＭＧＮｅ
ｏ −５０１，βを生成した。Ｂ ＣＭ Ｇ Ｎ ｅ
ｏは哺乳類細胞中での染色体外複製を保証する仔ウシパ
ピローマウィルス（ＢＰＶ）配列の６９％を含むシャト
ルベクターである。本来のβ鎖及；で可溶性βのヌクレ
オチド配列及こ＜相当する可溶性部分配列を示す第１０
図：二見られるよう：こ、可溶性βＣＤＮＡは２６個の
可溶性部分か：０）するシグナルペプチドを伴う２１２
ｆｌ！ｌの可溶性部分か５戊る成熟タンパク質をコード
し、方本来のβ１Ｎ Ｃ０１ｉ Ａはシグナルペプチド
（２６ａ。
Ｉ消化物に導入し最終的発現プラスミドＢＣＭＧＮｅ
ｏ −５０１，βを生成した。Ｂ ＣＭ Ｇ Ｎ ｅ
ｏは哺乳類細胞中での染色体外複製を保証する仔ウシパ
ピローマウィルス（ＢＰＶ）配列の６９％を含むシャト
ルベクターである。本来のβ鎖及；で可溶性βのヌクレ
オチド配列及こ＜相当する可溶性部分配列を示す第１０
図：二見られるよう：こ、可溶性βＣＤＮＡは２６個の
可溶性部分か：０）するシグナルペプチドを伴う２１２
ｆｌ！ｌの可溶性部分か５戊る成熟タンパク質をコード
し、方本来のβ１Ｎ Ｃ０１ｉ Ａはシグナルペプチド
（２６ａ。
ａ、）、細胞外（２１４ａ、ａ、）、膜内（２５ａ、
ａ、 ）及σ細砲質内（２８６ａ、ａ、） ドメイ
ンから成る膜タンパク質をコードしている。本来のβ鎖
及び可溶性βのヌクレオチド配列及び相当する可溶性部
分配列を第１０図に示す。
ａ、 ）及σ細砲質内（２８６ａ、ａ、） ドメイ
ンから成る膜タンパク質をコードしている。本来のβ鎖
及び可溶性βのヌクレオチド配列及び相当する可溶性部
分配列を第１０図に示す。
（ＢＣＭＧＮｅｏ−３ｏｌ、βによる１ＮＩＨ３Ｔ３
！Ｉｉ維芽細胞のトランスフェクション及グ可溶性βを
分泌する安定なトランスホーマントの確立〉 ｃＤＮＡのトランスフェクションはカラスヤマ（Ｋａｒ
ａｓｕｙａｍａ）等（上述）により報告されたブロドプ
ラスト融合技術により行った。簡単に言うと、ＢＣＭＧ
Ｎｅｏ−Ｓｏｌ、βを含む細菌をプロトプラストに変換
してマウス繊維芽細胞系列ＮＩＨ３Ｔ３とポリエチレン
グリコール２０００ （ワコーケミカル社製、大阪、日
本）を用いて融合した。それから１０万個のプロトプラ
スト融合ＮＩＨ３Ｔ３細胞を４枚の２４ウエルプレート
に接種した。１０％ウシ胎児血清（Ｆ ＣＳ）及び７５
０μｇ ／ｍｌ Ｇ４１８ （ジ工不チシン、シグマ
社、セントルイス、ＭＯ州、ＵＳ八）を含むＲＰＭＩ
１６４０培地中での２５日間培養の後、１０４ウエル
のうちの６０ウエルでトランスホーマント細胞の増殖が
観察された。以下に述べるサンドインチ酵素結合免疫吸
着検定法（ＥＬＩＳＡ）による測定で、６０ウエルのう
ちの１８ウェルの培養上清が可溶性βに関して陽性であ
ることが分った。ＥＬＩＳＡ法で最も高い吸収を与えた
ウェルからの限定希釈物から５個のクローンを確認し、
それらが全て高レベルで可溶性βを分泌することが分っ
た（第１表）。一方、全長のβ鎖ｃＤＮＡでトランスフ
ェクトしたＮ１１１３７３細胞（３Ｔ３−β１１と命名
）はβ−鎖分子を全く分泌しなかった。つづく実験では
我々は高い量の可溶性βを分泌するクローン３Ｔ３−Ｂ
−１４を使用した。
！Ｉｉ維芽細胞のトランスフェクション及グ可溶性βを
分泌する安定なトランスホーマントの確立〉 ｃＤＮＡのトランスフェクションはカラスヤマ（Ｋａｒ
ａｓｕｙａｍａ）等（上述）により報告されたブロドプ
ラスト融合技術により行った。簡単に言うと、ＢＣＭＧ
Ｎｅｏ−Ｓｏｌ、βを含む細菌をプロトプラストに変換
してマウス繊維芽細胞系列ＮＩＨ３Ｔ３とポリエチレン
グリコール２０００ （ワコーケミカル社製、大阪、日
本）を用いて融合した。それから１０万個のプロトプラ
スト融合ＮＩＨ３Ｔ３細胞を４枚の２４ウエルプレート
に接種した。１０％ウシ胎児血清（Ｆ ＣＳ）及び７５
０μｇ ／ｍｌ Ｇ４１８ （ジ工不チシン、シグマ
社、セントルイス、ＭＯ州、ＵＳ八）を含むＲＰＭＩ
１６４０培地中での２５日間培養の後、１０４ウエル
のうちの６０ウエルでトランスホーマント細胞の増殖が
観察された。以下に述べるサンドインチ酵素結合免疫吸
着検定法（ＥＬＩＳＡ）による測定で、６０ウエルのう
ちの１８ウェルの培養上清が可溶性βに関して陽性であ
ることが分った。ＥＬＩＳＡ法で最も高い吸収を与えた
ウェルからの限定希釈物から５個のクローンを確認し、
それらが全て高レベルで可溶性βを分泌することが分っ
た（第１表）。一方、全長のβ鎖ｃＤＮＡでトランスフ
ェクトしたＮ１１１３７３細胞（３Ｔ３−β１１と命名
）はβ−鎖分子を全く分泌しなかった。つづく実験では
我々は高い量の可溶性βを分泌するクローン３Ｔ３−Ｂ
−１４を使用した。
第１表
ＢＣＭＧＮｅｏ−Ｓｏｌ、 βでトランスフェクトし
たＮＩＨ３Ｔ３繊維芽細胞の培養上滑における可溶性β
レベル上 ３Ｔ３−８４−１ ＥＬＩＳＡにお番る４０５ ｎｍでの １ 、４９．２ ３Ｔ３−８４−４ １．３０１ ３Ｔ３−８４−７ １ 、２５９ ３Ｔ３−８４−１４ １ 、５７９ ３Ｔ３−８４−１９ １ 、５３３ ３Ｔ３−β１１ ０．０５２ 培地のみ ０．０７２ （ＥＬＩＳＡ法による可溶性βの検出）トランスフェク
トした細胞の培養上清をサントイ・ノチ酵素結合免疫吸
着検定法（ＥＬＩＳＡ ）を用い、可溶性βの存在につ
いてスクリーニングした。この検定には２つのモノクロ
ーナル抗体旧に一β１及び−β３ （上述及びラド（Ｔ
ｓｕｄｏ）等、プロシーディング、イン・ナショナル・
アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、 Ｎｏｔｌ
、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、 ８６．１９８
２−１９８６．１９８９））を用いた。これらはβ鎖上
の別個のエピトープを認識する。すなわち、Ｍｉｋ−β
ｌはＩＬ−２結合部位を認識し、一方Ｍｉｋ−β３はＩ
Ｌ−２結合に関与しないエピトープを認識する。サンド
イッチＥＬ［ＳＡを旧約に示した第１１図に見られるよ
うに、イムロン（Ｉｍｍｕｌｏｎ） １マイクロプレ
ート（ダイナチク社、シャンチリ−（Ｃｈａｍｔｉｌｌ
ｙ、 Ｖ Ａ州、ＵＳＡ）をトリス緩衝液（１０ｍＭ）
リス・塩酸、ｐＨ７，４゜０．１５ＭＮａ１Ｊ）中ｌＯ
ｔｔｇ／ｍｌの旧に一β３溶液５０μｌを用いて一晩コ
ーティングした。過剰の抗体を除去後未結合部位は１時
間１％ウシ血清アルブミンを含むＴＢＳでインキエベー
トすることによりブロックした。０．０５％トーウイー
ン２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）を含むＴＢＳ （Ｔ−ＴＢ
Ｓ）で洗浄後、トランスホーマントの培養上清５０μｌ
をウェルに入れ１時間インキュベートした。洗浄後１ｐ
ｇ／ｐｄのビオチン化Ｍｉｋ−β１５０μｌを第２抗体
として加え、プレート上の第１抗体Ｍｉｋ−β３に結合
する可溶性βを検出する。４５分のインキュベーション
及び洗浄の後、５０μβのアルカリホスファターゼ結合
アビヂン（タボ社、バーリンガム、ＣＡ州、ＵＳＡ）を
加えた。４５分間のインキュベーション後、プレートを
洗浄し、１００μｌのｐ−ニトロフェニルホスフェート
型加工４５分後に各ウェルの４０５ｎｍにおける吸光度
を測定した。
たＮＩＨ３Ｔ３繊維芽細胞の培養上滑における可溶性β
レベル上 ３Ｔ３−８４−１ ＥＬＩＳＡにお番る４０５ ｎｍでの １ 、４９．２ ３Ｔ３−８４−４ １．３０１ ３Ｔ３−８４−７ １ 、２５９ ３Ｔ３−８４−１４ １ 、５７９ ３Ｔ３−８４−１９ １ 、５３３ ３Ｔ３−β１１ ０．０５２ 培地のみ ０．０７２ （ＥＬＩＳＡ法による可溶性βの検出）トランスフェク
トした細胞の培養上清をサントイ・ノチ酵素結合免疫吸
着検定法（ＥＬＩＳＡ ）を用い、可溶性βの存在につ
いてスクリーニングした。この検定には２つのモノクロ
ーナル抗体旧に一β１及び−β３ （上述及びラド（Ｔ
ｓｕｄｏ）等、プロシーディング、イン・ナショナル・
アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、 Ｎｏｔｌ
、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、 ８６．１９８
２−１９８６．１９８９））を用いた。これらはβ鎖上
の別個のエピトープを認識する。すなわち、Ｍｉｋ−β
ｌはＩＬ−２結合部位を認識し、一方Ｍｉｋ−β３はＩ
Ｌ−２結合に関与しないエピトープを認識する。サンド
イッチＥＬ［ＳＡを旧約に示した第１１図に見られるよ
うに、イムロン（Ｉｍｍｕｌｏｎ） １マイクロプレ
ート（ダイナチク社、シャンチリ−（Ｃｈａｍｔｉｌｌ
ｙ、 Ｖ Ａ州、ＵＳＡ）をトリス緩衝液（１０ｍＭ）
リス・塩酸、ｐＨ７，４゜０．１５ＭＮａ１Ｊ）中ｌＯ
ｔｔｇ／ｍｌの旧に一β３溶液５０μｌを用いて一晩コ
ーティングした。過剰の抗体を除去後未結合部位は１時
間１％ウシ血清アルブミンを含むＴＢＳでインキエベー
トすることによりブロックした。０．０５％トーウイー
ン２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）を含むＴＢＳ （Ｔ−ＴＢ
Ｓ）で洗浄後、トランスホーマントの培養上清５０μｌ
をウェルに入れ１時間インキュベートした。洗浄後１ｐ
ｇ／ｐｄのビオチン化Ｍｉｋ−β１５０μｌを第２抗体
として加え、プレート上の第１抗体Ｍｉｋ−β３に結合
する可溶性βを検出する。４５分のインキュベーション
及び洗浄の後、５０μβのアルカリホスファターゼ結合
アビヂン（タボ社、バーリンガム、ＣＡ州、ＵＳＡ）を
加えた。４５分間のインキュベーション後、プレートを
洗浄し、１００μｌのｐ−ニトロフェニルホスフェート
型加工４５分後に各ウェルの４０５ｎｍにおける吸光度
を測定した。
（分泌された可溶性βの見かけ上の分子量）可溶性βの
分子サイズを決めるため、３Ｔ３−８４−１４細胞を３
５３−メチオニンを用いて生合成的にラベルし、ついで
可溶性βを培養上清に由来するＭｉｋ−β１ ｍＡｂに
より免疫沈殿化した。Ｍｉｋ−βｌ及び沈欧化のコント
ロールとしてのＵＰＣ１０ｍＡｂを用いた種々の量の沈
殿をＳＤＳポリアクリルアミドゲルにロードし電気泳動
した。第１２図に示されでいるようにＳＤＳポリアクリ
ルアミドミド電気泳動法（ＰＡＧＥ）で分析したとき、
３Ｔ３−８４−１４細胞の培養上清中Ｍｉｋ−βｌによ
り見かけ上の分子量３７０００の単一のタンパク質が同
定された。一方コントロールＵＰＣ１０ｍＡｂではこれ
は観察されなかった。この分子サイズは全ての膜内（２
５ａ、ａ、）及び細胞質内（２８６ａ、ａ、）領域を欠
く端を切断されたβ鎖について予想されるものとよく一
致していた。
分子サイズを決めるため、３Ｔ３−８４−１４細胞を３
５３−メチオニンを用いて生合成的にラベルし、ついで
可溶性βを培養上清に由来するＭｉｋ−β１ ｍＡｂに
より免疫沈殿化した。Ｍｉｋ−βｌ及び沈欧化のコント
ロールとしてのＵＰＣ１０ｍＡｂを用いた種々の量の沈
殿をＳＤＳポリアクリルアミドゲルにロードし電気泳動
した。第１２図に示されでいるようにＳＤＳポリアクリ
ルアミドミド電気泳動法（ＰＡＧＥ）で分析したとき、
３Ｔ３−８４−１４細胞の培養上清中Ｍｉｋ−βｌによ
り見かけ上の分子量３７０００の単一のタンパク質が同
定された。一方コントロールＵＰＣ１０ｍＡｂではこれ
は観察されなかった。この分子サイズは全ての膜内（２
５ａ、ａ、）及び細胞質内（２８６ａ、ａ、）領域を欠
く端を切断されたβ鎖について予想されるものとよく一
致していた。
（可溶性βのＩＬ−２結合能）
その後β鎖がＩＬ−２を結合し得るかどうか研究したゆ
最終的に“競合“サンドインチＥＬｒＳＡ法を用いた。
最終的に“競合“サンドインチＥＬｒＳＡ法を用いた。
この検定法においては培養上清中の可溶性βをＩＬ−２
結合に関して非阻害的ｍＡｂであるＭｉｋ−β３ ｍＡ
ｂにより固相に固定した。その結果β鎖上の推定される
ＩＬ−２結合部位は占有されないまま残されることにな
る。つぎにビオチン化Ｍｉｋ−βｌに対する競合者とし
て一連のＩＬ−２又は非ラベルＭｉｋ−β１の希釈物を
加えた。第１３図は競合的サンドインチＥＬＩＳＡ法の
結果を示している。この中で曲線−・−・−は非ラベル
Ｍｉｋ−β１の希釈物、−〇−〇−はＩＬ−２の希釈物
を示している。第１３図に示されているように、非ラベ
ルＭｉｋ−β１は投与量に応じ吸光度が減少した。この
ことはこのシステムの特異生を示している。同様に【Ｌ
−２は可溶性βへの結合に関しビオチン化量に一β１と
投与量に応じ効果的に競合する。このことは可溶性βが
ＩＬ−２と結合し得ることを示している。
結合に関して非阻害的ｍＡｂであるＭｉｋ−β３ ｍＡ
ｂにより固相に固定した。その結果β鎖上の推定される
ＩＬ−２結合部位は占有されないまま残されることにな
る。つぎにビオチン化Ｍｉｋ−βｌに対する競合者とし
て一連のＩＬ−２又は非ラベルＭｉｋ−β１の希釈物を
加えた。第１３図は競合的サンドインチＥＬＩＳＡ法の
結果を示している。この中で曲線−・−・−は非ラベル
Ｍｉｋ−β１の希釈物、−〇−〇−はＩＬ−２の希釈物
を示している。第１３図に示されているように、非ラベ
ルＭｉｋ−β１は投与量に応じ吸光度が減少した。この
ことはこのシステムの特異生を示している。同様に【Ｌ
−２は可溶性βへの結合に関しビオチン化量に一β１と
投与量に応じ効果的に競合する。このことは可溶性βが
ＩＬ−２と結合し得ることを示している。
この競合曲線はβ鎖のみを発現するＹＳ細胞に由来する
本来のβ鎖を界面活性剤で可溶化したものに関する曲線
と同様であり、このことはＩＬ−２に対する可溶性βの
７フイニテイーが可溶化した本来のβ鎖と同程度である
ことを示している。
本来のβ鎖を界面活性剤で可溶化したものに関する曲線
と同様であり、このことはＩＬ−２に対する可溶性βの
７フイニテイーが可溶化した本来のβ鎖と同程度である
ことを示している。
ＩＬ−２Ｒβ鎖をコードする遺伝子を用いればＩＬ−２
システムの機能的な実験に対する新しい手法を探る事を
可能にする。ＩＬ−２システムで機能するレセプター構
造は２つの構造的に区別される膜分子ＩＬ−２Ｒα及び
ＩＬ−２Ｒβ鎖の両方が独立にＩＬ−２と結合する点で
ユニークである。
システムの機能的な実験に対する新しい手法を探る事を
可能にする。ＩＬ−２システムで機能するレセプター構
造は２つの構造的に区別される膜分子ＩＬ−２Ｒα及び
ＩＬ−２Ｒβ鎖の両方が独立にＩＬ−２と結合する点で
ユニークである。
ここで述べられている一連のｃＤＮＡ発現例はα及びβ
鎖がこの分子の非有結合的会合を介して高アフィニティ
ーＩＬ−２Ｒ複合体を構成するという以前の記述を裏付
けている（１８．３７）。従って、このシステムの特殊
性は１つのりガント及び２つの別個のレセプター間の三
種の分子による相互作用の関与にある。そこで、本発明
によりこのユニークなサイト力インレセプターシステム
の機能ドメインを説明することが可能となる。クローン
化したβｔｊＭｃＤＮＡの突然変異分析はリガンド結合
及びα鎖との会合に関するドメインの同定への糸口を提
供する。今日まで相同レセプターと相互作用するサイト
カインにより引き起こされる生化学的事象の流れについ
てはほとんど知られていない。本研究により我々はほぼ
間違いなくＩＬ−２シグナル経路に関係するｒＬ−２Ｒ
β中の大きい細胞質領域の存在を示してきた。この細胞
質領域中に存在する特定な酸性核はその他の細胞質シグ
ナルトランスデユーサとの結合を示唆している。それと
は別に、核内のＩＬ−２の存在に関する報告（３３）の
見地から、ＩＬ−２Ｒβ細胞質成分の酸性でしかもプロ
リンリソチな領域は遺伝的プログラミングの活性化に一
役を担っているかもしれないという興味ある可能性があ
る。ｃＤＮＡにコードされたβ鎖が増殖シグナルを配給
し得る発現系を使用すれば、本しセプクーの機能ドメイ
ンの理解をさらに深くすることができよう。今、免疫シ
ステムの発生及び調節におけるＩＬ−２の基本的役割を
研究することは可能である。細胞表面レセプターβ鎖に
相当する可溶性部分を使用すれば、可溶性分子は不溶性
分子よりも容易に結晶化し得ることからβ鎖の構造解析
が可能となるはずである。またこの可溶性分子はレセプ
ターの生物学的機能の研究又は治療の目的で実際の細胞
表面レセプターの中和にも使用し得る。
鎖がこの分子の非有結合的会合を介して高アフィニティ
ーＩＬ−２Ｒ複合体を構成するという以前の記述を裏付
けている（１８．３７）。従って、このシステムの特殊
性は１つのりガント及び２つの別個のレセプター間の三
種の分子による相互作用の関与にある。そこで、本発明
によりこのユニークなサイト力インレセプターシステム
の機能ドメインを説明することが可能となる。クローン
化したβｔｊＭｃＤＮＡの突然変異分析はリガンド結合
及びα鎖との会合に関するドメインの同定への糸口を提
供する。今日まで相同レセプターと相互作用するサイト
カインにより引き起こされる生化学的事象の流れについ
てはほとんど知られていない。本研究により我々はほぼ
間違いなくＩＬ−２シグナル経路に関係するｒＬ−２Ｒ
β中の大きい細胞質領域の存在を示してきた。この細胞
質領域中に存在する特定な酸性核はその他の細胞質シグ
ナルトランスデユーサとの結合を示唆している。それと
は別に、核内のＩＬ−２の存在に関する報告（３３）の
見地から、ＩＬ−２Ｒβ細胞質成分の酸性でしかもプロ
リンリソチな領域は遺伝的プログラミングの活性化に一
役を担っているかもしれないという興味ある可能性があ
る。ｃＤＮＡにコードされたβ鎖が増殖シグナルを配給
し得る発現系を使用すれば、本しセプクーの機能ドメイ
ンの理解をさらに深くすることができよう。今、免疫シ
ステムの発生及び調節におけるＩＬ−２の基本的役割を
研究することは可能である。細胞表面レセプターβ鎖に
相当する可溶性部分を使用すれば、可溶性分子は不溶性
分子よりも容易に結晶化し得ることからβ鎖の構造解析
が可能となるはずである。またこの可溶性分子はレセプ
ターの生物学的機能の研究又は治療の目的で実際の細胞
表面レセプターの中和にも使用し得る。
参考文献
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ε、 Ｋｅｒｎ、 Ｓ、 Ｇ１１ｌｉｓ）、 １
ｂｉｄ、 ２９１．３３５ （１９８１）７、ロッズら
（Ｍ、ε、 Ｌｏｔｚｅ、 ε、Ａ、Ｇｒｉｍｍ、
３．＾。
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５ｔｒａｕｓｓｅｒ、 Ｓ、Ａ、Ｒｏｓｅｎ−ｂｅｒ
ｇ）、 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５−４１、４４２０ （
１９８１） ； グリムら（ε、Ａ、 Ｇｒｉｍｍ
。
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、 Ｊ、 Ｍｅｄ、 ３１６． ８８９ （１
９８７）９、 ペンベニストら（Ｅ、Ｎ、 Ｂｅｎｖｅ
ｎｉｓｔｅ、 Ｊ、Ｅ。
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ｅｅｎｅ、 Ｃ，Ｍ。
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Ｒｕ５ｋ） 、 Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、
１６０． １１２６ （１９８４）１２、ラドら（
Ｍ、 Ｔｓｕｄｏ、 Ｒ，Ｗ、にｏｚａｋ、 Ｃ，Ｋ。
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Ｍ、 Ｔｓｕｄｏ、 Ｒ，Ｗ、にｏｚａｋ、 Ｃ，Ｋ。
Ｇｏｌｄｍａｎ、 Ｔ、Ａ、 Ｗａｌｄｍａｎｎ）
、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
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Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ８３．９６９４ （１９８６
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ｒａ、 Ｉｔ、 −Ｍ、 Ｗａｎｇ、 Ｋ、 Ｋａｔｏ
。
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ｄ、 Ｓｃｉ、 Ｌｌ、Ｓ、４． ８３＋３９９２
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Ｋｌａｕｓｎｅｒ。
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Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
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Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｉｌ、Ｓ、Ａ、、 ８４． ２
００２ （１９８７） ；ラドら（Ｍ、 Ｔｓｕｄｏ
、 Ｒ，Ｗ、 Ｋｏｚａｋ、 Ｃ，に、 Ｇｏｌｄｍａ
ｎ、 Ｔ、Ａ。
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ｅｔ ａｌ、）、 ＪＥＸＩＴ、 Ｖ、Ｉｅｄ、 １６
６、３６２ （１９３７） ； ：Ｉ：／ドーら＜
Ｓ、 Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ、）、Ｎａｔｕｒｅ
３２７，６４ （１９８？）１９ツド：） （！、１．
Ｔｓｕｄｏ、 Ｆ、 Ｋｉｔａｍｕｒａ、 Ｍ；ｌ＋
ｙａｓａｋａ＞、 Ｐｒｏ−：、 ＼ａｔｌ、
、Ａｑａｄ、 ＳＣＩ、 Ｕ、Ｓ、ＡＩｎ
ｐｒｅＳＳ ２０、 ヨドイ；１１（Ｊ、 Ｙｏｄｏ＋ ｅｔ
ａｌ、：＋、 Ｊ Ｉｍｍｕｎｏ１１３４、 １６
２３ （１９８５） ２１、シード９（Ｂ、 ５ｅｅｄ、 、Ａ、 Ａｒｕｆ
ｆｏ＞、 Ｐｒｏｓ、ＮａｔｌＡｃａｔＪ、 Ｓ＋＝ｉ
、 υ、Ｓ、Ａ、 ８４．３３６５ ＜１９３７） ；
シード＜Ｂ、５ｅｅｄ）、 Ｎａｔｕｒｅ ３２
３． ８４０ （１９３７）２２、バールマンら（０
，Ｐｅｒｌｍａｎ、 Ｈ，Ｌｌ、 Ｈａｌｖｏｒｓｏｎ
）。
５ （１９８７） ；ヅコビソチら（Ｍ、口ｕｋｏｖｉ
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（に、Ｓ、 Ｈａｎｋｓ、 Ａ、Ｍ、 Ｑｕｉｎｎ、
Ｔ。
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）１ｕｎｔｅｒ）、５ｃｉｅｎｃｅ ２４１＋ ４２
（１９８８）２６、フルコーバーら（Ａ、＾Ｉｃｏ
ｖｅｒ ｅｔ ａｌ、）＋Ｉｍｍｕｎｏ１． Ｒｅｖ
、 ９５． ５ （１９８７）２７、ハタケヤマら
（Ｍ、 Ｈａｔａｋｅｙａｍａ、 Ｓ、 Ｍｉｎａｍｏ
ｔｏ。
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ａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ。
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ｉ、 Ｔ。
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にｏｎｏ、 Ｓ、 Ｍｉｎａｍｏｔｏ、 Ｔ、 Ｔａｎ
ｉｇｕｃｈｉ）、未発表文献 ２９、マースら（Ｊ、Ｄ、 Ｍａｒｔｈ、 Ｒ，Ｐｅｅ
ｔ、 Ｅ、Ｇ、 Ｋｒｅｂｓ＋Ｒ，Ｍ、 Ｐｅｒｌｍ
ｕｔｔｅｒ）、 Ｃｅ１ｌ ４３． ３９３ （１
９８５）３０、マンら（Ｒ，Ｍａｎｎ、 Ｒ，Ｃ，Ｍｕ
ｌｌｉｇａｎ、 Ｄ、 Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）、 １
ｂｉｄ、 ３３． １５３ （１９８３）３１、フ
ジイら（Ｍ、Ｆｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ、）、 Ｊ、 Ｅ
ｘｐ、 Ｍｅｄ。
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ｔ ａｔ、）、 Ｐｒｏｃ。
ｔ ａｔ、）、 Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｌｌ、Ｓ、
Ａ、 ８３． １４６３ （１９８６）３３、ロブ
ら（Ｒ，Ｊ、 Ｒｏｂｂ、 Ｗ、Ｃ，Ｇｒｅｅｎｅ）、
Ｊ、 Ｅｘｐ。
Ａ、 ８３． １４６３ （１９８６）３３、ロブ
ら（Ｒ，Ｊ、 Ｒｏｂｂ、 Ｗ、Ｃ，Ｇｒｅｅｎｅ）、
Ｊ、 Ｅｘｐ。
Ｍｅｄ、 １６５． １２０’ｌ （１９８７）３
４、スガムラら（Ｋ、Ｓｕｇａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ、
）、 １ｂｉｄ。
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）、 １ｂｉｄ。
１６１．１２４３ （１９８５）
３５、サラゴビら（Ｉｔ、 Ｓａｒａｇｏｖｉ、 Ｔ、
Ｒ，Ｍａｌｅｋ） 、 Ｊ。
Ｒ，Ｍａｌｅｋ） 、 Ｊ。
［ｍｍｕｎｏ＋、１４１，４７６、（１９８Ｂ）３６、
カイトら（Ｊ、 Ｋｙｔｅ、 Ｒ，Ｆ、 Ｄｏｏｌｉｔ
ｔｌｅ）、 Ｊ。
カイトら（Ｊ、 Ｋｙｔｅ、 Ｒ，Ｆ、 Ｄｏｏｌｉｔ
ｔｌｅ）、 Ｊ。
Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、 １５７． １０５ （１
９８２）３７、ロソターら（ｔｌ、 Ｐｏｔｔｅｒ、
Ｌ、 Ｗｅｉｒ、 Ｐ、 Ｌｅｄｅｒ）。
９８２）３７、ロソターら（ｔｌ、 Ｐｏｔｔｅｒ、
Ｌ、 Ｗｅｉｒ、 Ｐ、 Ｌｅｄｅｒ）。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、
Ｕ、Ｓ、Ａ、 ８１＋ ７１６１（１９８４）
Ｕ、Ｓ、Ａ、 ８１＋ ７１６１（１９８４）
第１ａ図、第１ｂ図はヒトＩＬ−２Ｒβ鎖のｃＤＮＡの
構造を示している。 第２図は推定されるヒＩ−ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ２Ｒβ
鎮前駆体構造のバイトロバシープロット分析を示してい
る。 第３ａ図は種々の細胞におけるヒトＩＬ−２Ｒβ鎖ｍＲ
ＮＡの発現を示している。 第３ｂ図はヒトＰＢＬにおけるＩＬ−２，Ｒβ及びＩＬ
−２ＲαｍＲＮＡの発現を示している。 第４ａ図はヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒβｃ
ＤＮＡ トランスファクタントの細胞表面染色パターン
によるヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒβ鎖ｃＤ
ＮＡの発現を示している。 第４ｂ図はクローン化したｃＤＮＡを発現するトランス
フェクタントに対する”’Ｉ−ＩＬ−２の結合のスキャ
ッチャードプロー／ ト分析によるα及びβ鎖の発現を
示している。 第５図はＩＬ−２Ｒ陽性トランスホーマントのアフィニ
ティー架橋実験の結果を示している。 第６図は再構成レセプターを介するＩＬ−２の取り込み
を示している。 第７図はｃＤＮＡクローンの制限地図を示している。 第８図はマウスＩＬ−２ＲβのｃＤＮＡの構造を示しで
いる。 第９図はアンカーマイナスｃＤＮＡを含む発現ベクター
を作る方策を示している。 第１０図は天然のβ鎖及び可溶性βのヌクレオチド配列
及び対応する可溶性部分配列を示している。 第１１図はサンドインチＥＬＩＳＡ法を図式で示したも
のである。 第１２図は３Ｔ３−８４４４細胞培養物上清とモノクロ
ーナル抗体（Ｍｉｋ−βｌ〉との反応物の電気泳動示し
てか４喝かり、茎１３閃（β）にＪｅＯ，模式図でのる
。 ０し くコ ロ：ｌ Ｌ）Ｌ （ＪＬ Ｌ）Ｉａ
（：１ １−Ｌ Ｌ）α０Φ トΦ ＋ａ＋ リΦ
くジυＰ−ぐｉ υΦ （ψトＩ／Ｉ ０−０− （
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）コ リ（トあ ０コ リコ ロジ υａＵω υＬ
１−ＱＩ Ｌ）ａｌ ＣＤＰ−（Ｐ−＜ｇ−ｃｊ
ｒ−ｄｖｒトｔ／１０Ｑ−０−（Ｉ／１ ｔＤφ φΦ
のロ ロロ φ（（Ｓ−φＬＣ！ｌ：ｌ ベコ ロ
仁 （Φ （（くｋ ロコＬ）ａｌ Ｌ）ａｌ １
−ａｌ １−（Ｌｌ （Ｆ−１−＋ Ｌ）ａｌ
Ｌ）Ｊ： （Ｐ−トＩ／）Ｉ−切 υ−トドｃＪＬ
ｌ （Ｍ １−ψ くト ロΦ（ＪＯＬＪＯＪ
Ｌ）（ＬＪＬ Ｌ）（Ｌ）） Ｌ）Ｌ Ｌ）ＯＬ
ｌ＞０＆−Ｉ−Ｐ く１０ω （’ｌ／ｌ ＜ｙ−＜
＞ υＬ （ｊｆｆｕｃＬ （１−１（Ｊ（ｊ
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３：） Ｃ！ｌＩＬ （ｎ３ Ｌ）Ｌ ロコ
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ロロ ０ユｔ′山、３α １ ２３４５ ７８９ 結合 ＩＬ−２／Ｉ１１離 ＩＬ−２ 相対細胞数 ＦＩＧ、６ インキエペー７嘗ン時間（ｓｉｎ） （・４） （Ｂ） ＦＩＧ、１０ サンプル ＬＩＬＩ １１μｍ 「−ドパ一−１「−ドパ一一１ ３５５− 、チＪ’ ＝ ７５７＜ ）（、化Ｍｒｘｌ
Ｏ−’ ９ ６− ム 手 続 補 正 書 （方式〉 平底 ２．７．２６ 年 月 日 １．１１件の表示 平成２年特許願第５４８３１号 ２、発明の名称 組換えタンバタ質レセプター ３、補正をする者 事件との関係
構造を示している。 第２図は推定されるヒＩ−ＩＬ−２Ｒα及びＩＬ２Ｒβ
鎮前駆体構造のバイトロバシープロット分析を示してい
る。 第３ａ図は種々の細胞におけるヒトＩＬ−２Ｒβ鎖ｍＲ
ＮＡの発現を示している。 第３ｂ図はヒトＰＢＬにおけるＩＬ−２，Ｒβ及びＩＬ
−２ＲαｍＲＮＡの発現を示している。 第４ａ図はヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒβｃ
ＤＮＡ トランスファクタントの細胞表面染色パターン
によるヒトＩＬ−２Ｒα及び、又はＩＬ−２Ｒβ鎖ｃＤ
ＮＡの発現を示している。 第４ｂ図はクローン化したｃＤＮＡを発現するトランス
フェクタントに対する”’Ｉ−ＩＬ−２の結合のスキャ
ッチャードプロー／ ト分析によるα及びβ鎖の発現を
示している。 第５図はＩＬ−２Ｒ陽性トランスホーマントのアフィニ
ティー架橋実験の結果を示している。 第６図は再構成レセプターを介するＩＬ−２の取り込み
を示している。 第７図はｃＤＮＡクローンの制限地図を示している。 第８図はマウスＩＬ−２ＲβのｃＤＮＡの構造を示しで
いる。 第９図はアンカーマイナスｃＤＮＡを含む発現ベクター
を作る方策を示している。 第１０図は天然のβ鎖及び可溶性βのヌクレオチド配列
及び対応する可溶性部分配列を示している。 第１１図はサンドインチＥＬＩＳＡ法を図式で示したも
のである。 第１２図は３Ｔ３−８４４４細胞培養物上清とモノクロ
ーナル抗体（Ｍｉｋ−βｌ〉との反応物の電気泳動示し
てか４喝かり、茎１３閃（β）にＪｅＯ，模式図でのる
。 ０し くコ ロ：ｌ Ｌ）Ｌ （ＪＬ Ｌ）Ｉａ
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ロロ ０ユｔ′山、３α １ ２３４５ ７８９ 結合 ＩＬ−２／Ｉ１１離 ＩＬ−２ 相対細胞数 ＦＩＧ、６ インキエペー７嘗ン時間（ｓｉｎ） （・４） （Ｂ） ＦＩＧ、１０ サンプル ＬＩＬＩ １１μｍ 「−ドパ一−１「−ドパ一一１ ３５５− 、チＪ’ ＝ ７５７＜ ）（、化Ｍｒｘｌ
Ｏ−’ ９ ６− ム 手 続 補 正 書 （方式〉 平底 ２．７．２６ 年 月 日 １．１１件の表示 平成２年特許願第５４８３１号 ２、発明の名称 組換えタンバタ質レセプター ３、補正をする者 事件との関係
Claims (24)
- （１）ＩＬ−２レセプターのβ鎖をコードする組換えＤ
ＮＡ分子又はその一部分。 - （２）ヒト又はマウスのＩＬ−２レセプターのβ鎖をコ
ードする請求項（１）記載の組換えＤＮＡ分子又はその
一部分。 - （３）組換えＤＮＡ分子で、式 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】 で表わされる構造遺伝子を特徴とする組換えＤＮＡ分子
又はその一部分又はその変異体。 - （４）請求項（１）記載の組換えＤＮＡ分子であって、
下式で表わされる構造遺伝子であることを特徴とする組
換えＤＮＡ分子、その一部分又はその変異体。 【遺伝子配列があります。】 式中＊＊＊はＧＧＣ又はＴＧＣである。 - （５）ＩＬ２−２Ｒβ又はその一部分をコードする以下
のプラスミド ｐＩＬ−２Ｒβ６、 ｐＩＬ−２Ｒβ９、 ｐＩＬ−２Ｒβ１９、 ｐＩＬ−２Ｒβ３０、 ｐＭＩＬ−２Ｒβ３６、 の１つのＤＮＡ挿入物を含む組換えＤＮＡ分子。 - （６）請求項（１）乃至（５）記載のＩＬ−２Ｒβ全鎖
又はその変異体の可溶性部分をコードすることを特徴と
する組換えＤＮＡ分子。 - （７）ヒトＩＬ−２Ｒβ鎖の約１番から約２１０番まで
のアミノ酸をコードすることを特徴とする請求項（７）
記載の組換えＤＮＡ分子。 - （８）末端ヌクレオチド配列が以下の式、 ＧＣＣ ＣＴＴ ＧＣＴ ＡＧＣ ＴＡＧ で表わされ、かつ水溶性ヒトＩＬ−２Ｒβ鎖の誘導体を
コードする請求項（７）記載の組換えＤＮＡ分子。 - （９）請求項（１）〜（８）に記載され、かつ請求項（
６）記載のＩＬ−２Ｒβ鎖又はその可溶性部分の活性を
有するタンパク質をコードする組換えＤＮＡにハイブリ
ダイズし得る組換えＤＮＡ分子。 - （１０）請求項（１）乃至（９）記載の組換えＤＮＡ分
子で、さらにＩＬ−２β鎖又はその一部分をコードする
構造遺伝子と機能的に結合する調節配列を含む組換えＤ
ＮＡ分子。 - （１１）請求項（１０）記載の組換えＤＮＡ分子で、そ
れがプラスミドである組換えＤＮＡ分子。 - （１２）プラスミドｐＩＬ−２Ｒβ６、ｐＩＬ−２Ｒβ
９、ｐＩＬ−２Ｒβ１９、ｐＩＬ−２Ｒβ３０又はｐＭ
ＩＬ−２Ｒβ３６。 - （１３）請求項（１０）乃至（１２）記載の組換えＤＮ
Ａ分子でトランスホーメーションした宿主細胞。 - （１４）請求項（１３）記載の宿主細胞で、細菌細胞又
はイースト細胞又は哺乳類細胞である宿主細胞。 - （１５）請求項（１）乃至（９）記載のＤＮＡにより定
義される構造を有するタンパク質。 - （１６）請求項（１５）記載のタンパク質に対する特異
的アフィニティを有するモノクローナル抗体を分泌し得
るハイブリドーマ、サブクローン又はその変異体。 - （１７）請求項（１５）記載のタンパク質に対する特異
的アフィニティーを有するモノクローナル抗体。 - （１８）請求項（１６）記載のハイブリドーマの製造法
で、請求項（１５）記載のタンパク質による非ヒト動物
の免疫化、免疫化動物の脾細胞の収穫及び非免疫グロブ
リン分泌ミエローマ細胞と該脾細胞との融合、及び生成
したハイブリドーマからの望ましい結合特異性を有する
モノクローナル抗体を生産する細胞系列の選択及びさら
に望ましい場合には該ハイブリドーマのサブクローニン
グを含む方法。 - （１９）請求項（１）乃至（１０）記載のＤＮＡ調製法
で、適当なベクターの１つ以上の制限エンドヌクレアー
ゼによる消化及び目的ＤＮＡの単離を含む方法。 - （２０）請求項（１５）記載のタンパク質の調製法で、
発現に適した部位に望ましいポリペプチドをコードする
請求項（１）乃至（９）記載のコード配列による適当な
宿主生物のトランスホーメーション及び生成したトラン
スホーマントからの目的タンパク質の単離を含む方法。 - （２１）請求項（１０）乃至（１２）記載の発現ベクタ
ーを用いる請求項（２０）記載の方法。 - （２２）請求項（１７）記載のモノクローナル抗体の鋼
製法で、請求項（１６）記載の細胞の培養及び生産され
たモノクローナル抗体の単離を含む方法。 - （２３）請求項（１３）又は（１４）記載の宿主生物の
調製法で請求項（１０）乃至（１２）記載のベクターで
適当な宿主をトランスホームする方法。 - （２４）請求項（１０）乃至（１２）記載のベクターの
調製法で請求項（１）乃至（９）記載のＤＮＡ配列を適
当なベクターに挿入する方法。
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