JPH03504130A - 触媒抗体を使用する治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

触ｇＪ＆抗体七使用する重速方法 発明の分野 不発明は、Ｗｌ　ｉＣインヒポ庄体動子内における考定の結合の開裂速度または 形成速度全増加させることによつ１、生物学的＠能における変化を得る方法に関 する。とらに％（（、不発明にタンパク負内の特定のアミド雉合、ペプチド結せ またはエステル結合のｈ裂速度’Ｅ７ｔは形成速度を増加さぜることができる抗 体全１動物中に導入することによって、あるいは所望の速度増加性抗体を連発さ せる免疫原を動物に導入することによって、これらの開裂速！１７１：は形成速 度を増加させることに関する。 本出願は、１９８３年１１月２９日付で出願さｎた米重量９１　Ｓｅｒ、　４５ ５６．０１６の継続出願でめる、１９８４年１１月２７日付で出ｈ’ａれた米国 出願Ｓｅｒ。 ４６７４．２５３の継続出願でみる、１９８８年５月４日付で出願１几た米国出 願Ｓｅｒ、腐１９０．２７１の継続出願でめ９、こ扛らの出動の同各を１ことに 引用して、本明細書に組入れる。 本明細薔甲に、カッコ内のアラビアａ字によって、いくつかの刊り物か引用るｎ ている。こｆＬらの刊行物の完全名は不明細書の終りで１．請求の範囲の直前に 見い出さする。これらの刊行物には、不発明が属する技術の不運おまひ本発明そ れ自体の成る局面が、ざら（Ｃ光分に配紙ぢれている。 発明の背景 鴇々の化学反応を触媒することかできる多くの酵素）つ；同定爆几ている。同様 に、種々の化学反応を触媒させるために、抗体ｔｍ発ちせることかでさることが 発ｔ−ｇれている（米国ａｊｆＪ　Ｓｅｒ、　／１６６７４，２５３　）　、抗 体と酵素と力；他の分子に結合するタンパクａｒ′＃異化するという基不的類似 性を共有することは、よく知らｎている。し〃λしなから、抗体とｎ素との闇に は、１蚤な生理学卸差違が存在する。 抗体は呉型釣に、分子ｌ九に抗原に結合し、この抗体ｔＭ生しｆｃ再機体に対し 、抗原を異物としてマークする。抗体の抗原に対する結合は、有機体〃為らの抗 原り分ｎ　ｗ　ＢＪ能にする。＃累は、分子または基質を含む反応の活性エネル ギー状態下δせ、こ几によって、その反応の速度を増２１Ｏ嘔せるような方法で 、分子を結合ａぞる生物学的Ｉ！！！謀でめる。 リング　ホーリング（Ｌｉｎｕｓ　Ｐａｕｌｉｎｇ　）は、タンパク貰とこれら のタンパク實ｋＷｆ合する分子との闇の相互反応には２糧のタイプがあるという 仮説全車てた。 抗体は、七れらの基低状態で、東も強く分子に結合するのに対し、酵素ａ、より 筒いエネルギー状態で、敢も強く分子に結合する。 ポーリングに、このような結合にもとついて、酵素触媒のメカニズムを説明しよ うとし之。ｆヒ学反応の進行期間中では、反応体は、反応体ま之は生成物のどち らよりも、エネルギー的に好ましくない中間構造または遷移状態を経る、１種ま たは２ａ！以上の遷移を受ける。ペプチド架橋′！食はエステル結合の水性媒質 中における加水分解は正１面体炙素遷移状態を通過する。 この遷移状態では、正四面体欠素原子か、ペプチド架ａｔ−Ｚはエステル結合の 酸部分の炭素原子に；２個の酸素原子（このうちの１個はカルボニル基に相当し 、他の１１固（グＴｌ＆負中の水分子またはヒドロキシルイオンに相当する）に ；およびペプチド架橋のアミン部分の窒素原子１九はエステルのアルコール部分 の酸素原子のうちのとちらかに、結合−４ｎでいる。この遷移状態は、僅かに約 １０−１３秒しか存在しないので、隼離することも、りるいは検出することもで きない。 分子の分野で、この遷移状態は、結合の長さおよび結せの角度、ならびに結合の 形成および切断における変化に反映する。遷移状態を得るために景するエネルギ ーに、活性エネルギーと表わされ、このエネルギーに、遷移状態のエネルギーと 反応体のエネルギーとの間のエネルギーの差であると考えることができる。ボー りングの仮説によｎば、＃累は遷移状態の反応体と好んで結合し、＃素上その基 質２よひ生成物に対して安定にし、この反応の活性エネルギーを減少させ、この ようにして、反応速度を増加させる。 この理ｍ’ｆｌ：拡大することによって、ポーリングはまた、遷移状態の安定な 類似体は、酵素に堅く結合することを予言し比。＃素による速度増加のいくつか の可能な要因のうちの一つとしての基質のゆがみの検討において、「遷移状態類 似体」の用語を、この糧の阻害物質を説明する九めに使用できることが示唆さｎ 九。 ポーリングの予言は、現在充分に確立でれている、酵素阻害物質のデザイン方法 への基礎となつ文。酵素阻害物質をデザインするための作戦は、抗原を機能的原 即」にもとづいてデザインし、この抗原デザインに含蓄されている反応メカニズ ムを行なわせることによって、このような抗原に応答して生じる抗体が化学反応 七触楳するという、触媒性抗体の一製戦略を示唆した。 この戦略は、数多く試みられている。 −例として、エステル結合開裂に係る遷移状態を擬装する遷移状Ｂ類似体が触媒 性エステラーゼとして作用するモノクローナル抗体の誘発に使用さｎ　７ｔ　＋ ２れ詳細に３えは、この誘発されたモノクローナル抗体は、酢酸のアリールエス テルの加水分％ｔｉｓ、ｏｏｏの７アクターで加速した。 もう一つの例では分子内６員環塊化遷移状態ｔ−擬装する遷移状態類似体が、立 体特異的酵素様触媒として作用するモノクローナル抗体の誘発に使用妊れ穴（３ ）。 詳緬に百えば、このようにして誘発されたモノクローナル抗体は、相当するラセ ミ体形δ−ヒドロキシエステルからのδ−ラクトンの１個だけのエナンチオマー の形成を、約８００フアクターまで加速し九。 同様に、アリールアミド類の加水分解における遷移状態の類似体としてテずイン さｎた、七ノアリールホスホンアミデートエステルが、アリールアミド類の加水 分解を触媒することができる、特異的モノクローナル抗体の誘発のためのハプテ ンとして合成され、使用さｆＬｆｃ（４）。双る鴇の誘発抗体は、特定のアリー ルエステルの加水分解に対して、触媒性でかつｌｆｃ選択性であり、２５ＣＩ、 ０００の速度加速をも几うすことが見い出され、報告されている。 アミド’！７１ｃはエステルリガンドの加水分解の遷移状態の形態に実質的に相 当する形態を有し、抗体の産生に使用さｎている、ホスホンアミデート類または ホスホネート類似体リガンドは、Ｔｒａｍｏｎｚａｎｏ等に対する米国特許第４ ，６５９．５６７号（Ｔｒａｍｏｎｚａｎｏ　）に記載されている。その記載に よれは、このようにして産生名九九抗体は、このリガンドのエステル加水分解遷 移状態の正四面体次素原子に結合し、この原子を安定にし、このリガンドを予め 定められた部位で加水分解させるというバラトープ（ｐａｒａＺＯＩ）ｅ　）’ ｔ　＠有している。 エステルおよびアミドの加水分解の穴めの、抗体触媒の生成（て使用することが できる類似体−リガントはまた、Ｋｏｌｌｍｏｒｇｅｎ　Ｃｏｒｐのヨーロッパ 特許出願０．２５１，０９３　（Ｋｏｌｌｍｏｒｇｅｎ　）に記載さｎている。 タンパク質遷移状態類似体内の遷移状態の安定性をｉ＆高にし、かつｌ之原子関 係を最適にし、そｎによって酵素触はの２種の劇的効果、すなわち分子認識およ び速度加速を生じさせることができる抗体を誘発きせることができる卆似体すカ ンドが合理的なデヂイン手法に従ってデザ゛インされている。触媒性抗体を産生 ずる九めの、抗原、免疫原２よひ免疫学的方法は、共通して譲渡された、１９８ ８年５月４日出願の親出願Ｓｅｒ、　、４６１９０．２７１　（この出願の内容 上ここに引用して組入れる）および本ｌｆ１ｍと同一日付で出願された、ともに 我々自！による出願Ｓｅｒ、　Ａ６（この出願の内容をここに引用して組入九る ）に記載されている。 ペプチドに対して生じ定抗体は、このペプチドが完全タンパク賞内に位置してい る場合には、同一配列で結合重ぞることがでさることは知らｎている。たとえば 、Ｗ１瘍象死因子（ＴＮＦ　）のアミノ酸１〜１５よりなるペプチドに対して誘 発石几九抗体は生体腫瘍壊死因子に結合重せることかでさ、結合すると、細胞表 面レセプターとのその相互反応を阻止する（１１゜同様（ｃ１ＨＩＶカラ＋７） ｇｌ）　１２０コートタンパク質のアミノ酸よりなるペプチドに対する抗体は、 完全ウィルスと交さ反応し、ウィルスとその細胞レセプターとの相互反応を阻止 する（２）。もう一つの例でｔＸ鶏卵リゾチームのアミノ酸６７〜Ｂ３よりなる ペプチドに対して生成させたモノクローナル抗体は完全タンパク員と又さ反応す ることができ、かつまた、エピトープ内の配列が実質的に同一である他の家萬撞 のリゾチーＡ、　’（５認識することができる（３八 触媒性抗体の部製方法は開示さｎているが、そして’ｌ’ｊ、非触媒性抗体を１ 対象の抗原ｌたに基質に結合する方法は囲示芒九ているが、従来技術の中で、選 ば扛る標的生体分子に対する、速度増加性抗体を使用する冶僚方伝？提供するも のはない。さらにｌた、成る糧の望ｌしくないタンパク質、たとえば腫瘍壊死因 子の生物学的作用を減少避せるか、ｌたに別の様相で制御する方法は、従来技術 によって提供ちｎていないし、′を之アレルギー症状の軽減、王Ｖウィルスの感 染性の減少、高血圧の作用の減少、ならびに成る種の生体分子の開裂ｌたは形成 によって制御することができるその他の疾、＠２よび生理学的症状の減少をもた らす方法は従来技術によって提供堰几ていない。従来技術は１九、プロドラッグ （ｐｒｏｄｒｕｇ　）から、活性医薬形態を放出さゼる穴めに、触ｇ金便用する プロドラッグの活性化方法を提供していない。 ３３二と１姐 不発鴫の目的は、生体分子内の特定のアミド、ペプチド、エステル１九はグリコ ンド結台のインビボ開裂または形成の速度全増加させる方法全提供することにあ る。 本発明のもう一つの目的は、本発明による合議的デザインによって調製される速 度増力性抗体を、動物に導入することにより、特定の結合のインビボ開裂または 形成の速度を増加させる方ｉ’ｔ−提供することにりる。 本発明のさらにもう一つの目的は、動物の兄役系に作用することによって、生体 分子内の特定のアミド、ヘプテド、エステルまたはグリコシド結合のインビボ開 裂でｔは形成の速度を増加させる抗体を窮覚さぜる抗原の有効量ｔ１勲物に導入 することによって、こｎらの結合の開裂ｌたは形吸の運夏を増加妊せる方法全提 供することにめる。 不発明の石らにもう一つの目的に、所望の生物学的油性化？うろことができるよ うに、開に’Ｅ７’２１．は形成しようとする生体分子′を特定し、次いでＰｌ ′ｒ望の速度増加抗体を訪鞄ちゼることかできる過当な抗原ケ選択すること全包 含する合Ω両的テヂイン方法によって、特定の結合のインビボ開裂ｌたは形成の 速度を増加させることにより、動物内における生物学釣機能を活性化ｌたは不活 性化−ｒることにろる。 不発明の芒らにもう一つの、関連する目的に、所望の開９４７Ｃｆグ形成

【うる ことかできる生体内分子内の成るアミノ酸配列乞同定し、アルゴリズムで記録す ることにある。 本発明のさらにもう一つの目的に、ワクチンに類似しており、動物の免疫系に所 望の触慕注抗体七発現させる抗原を提供することＫろり、この抗体は生体分子に 作用して、その開会速度を増加させ、生物学的機能の活性化１ｔは不活性化を生 じさせるものである。 本発明のδらにもう一つの目的は、インビボで、成る種の生物学的機能を活性化 １九は不活性化６ゼること、ｍとえはアレルギー性症状の触減ウィルスの感染性 の減少、リボ多ｇＩ＠の無毒性化、Ｉ！ｇｈ壊死因子の作用のＭＷ化、およびヒ トレニンの倉の減少による高血圧の降下を生じさせることにめる。 ′２Ｉ−兄明のさら（Ｃ別の目的は、プロドラッグ會活性化吾ぞることにある。 発明の要旨 本発明のこれらの２よひその他の目ＦＦＪは、動物に速度増力性抗体の有効ｔ’ ｉ導入することによって、生体分子内の特定のアミド、ペプチド、エステル１７ ｔはグリコシド結合のインビボ開数−ｚｆｃ、ａｂ成の速度を増加こせる方法に おいて達底チれる。この抗体は、先ず形１２ｙ：１７ｔは開裂しようとする生体 分子を同足し、開裂１几は形成しようとするこの生体分子内のを定の配列を１以 下にδらに詳細に説明する理舖會使用することによりＩＷＪ定し、所望の反応の 速度上増加させる抗体上台論的にデザインすることによって、得らｎる。 不党明のもう一つ０帖様においては、インビボで形成ま之はｙｊ８裂てせようと する生体分子が同定され、形成Ｉたは開裂石せる延金を含有する、七の配夕；ｊ が種々の理鋪（′ｒ、よって則定さｎｌそして戴物に導入で九ると、動物の免疫 系に作用することによって、所望の機能を有−ｊ６抗体を誘発妊ゼる免疫原が合 虜的にデザインされる。 本発明（１また、双る種の生理学的状態および疾筈症状の処置、九とえ１グ佐天 性兎疫不全症候拝の処置に関し、この処置は、ウイルスコー・トタンバク買中の 成るペプチド結合の開会速度を増加つゼることができる抗体の有効量により、患 者を処置することによって、病因ウィルスケ阻害することによるものでろる。 本発明は１念、ヒト　レニン中のペプチド結合の開裂速度？増加させることによ って、ヒトレニンを阻害することシーよる、高血圧症の処置方法にちる。 不発Ｆ！Ａは１次、プロドラッグ円の成る糟の結合の選択的速度増加開裂δゼ、 これによジ、活性成分上放出さゼることによる、プロドラッグの活性化方法にろ る。 不発明は１九、リボ多糖類内の結合を開裂ちせることによって、リボ多ＩＪ権を 無毒化する方法、腫瘍壊死内子の住換学的作用全減少δせる方法、およびＩｇＥ ’ｉ分鋏さぜ、これによ５、ＩｇＥｔ”不活性化することにより、アレルギー症 状を＠減させる方法にろる。 区部Ｃ藺組ξ行門 不発明、ならひｖｃ−ｔ−の他の目的、特淑および利点は、以下の詳細な説明を 、添付１面を参照して読むことによって、さらに明白に、かつ１念充分に理解さ れる。 第１図は、感染Ｈ９細胞内（（おける、ＨＩＶ−Ｉ　１）　２４ｇａｇのククー ンＡＨＩＶ　１．３の産生による投与肯依存性阻害全示しており；そして 第２図は、ＨＩＶ　−１誘発細胞融合のクローンＡヨＩＶ１．６、ＡＨＩＶｌ、 ６およびＡＨＩＶ　２．０による、投与倉依存注阻害を本丁ものでおる。 その鯉も広い意味で、「抗原」の用語は、抗体の形成上誘発δぜる分子でめると 定義される。本ＦＦ３社書で使用するものとじて、「？Ｃ原」の用語は、本発明 に係る固有の兄没原性を有するノ・ブテンでめる分子、またハ適当なカップリン グ基によって、キャリア分子に結合右１している、不発明に峰るノ・ブテン上官 ひ免疫原を意味する。キャリヤ分子は、たとえはキイホールリンベントヘモシア ＝　：ｙ　（Ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｉｍｐｅｚ　ｈｅｍｏ−′ｃｙａｎｉｎ　−Ｋ ＬＨ）　、チログロビン、チキン　イムノグロフ′リン１、オバルフ′ミン、ウ シ皿清アルフ゛ミン（ＢＳＡ）、Ｔ−へレバーペプチドなど全包含する。不明組 番で使用６ｆ′しているものとして、１力ツプリング分子」の用語は、当技術で 光分に知られているノくイオテクノロジイ上の又さ結合江反応例（九とえは、Ｐ ｉｅｒｃｅ　、　　Ｒｏｃｋ−ｆｏｒｄ　、　　ｌ１ｌｉｎａｉｓから市販−６ ｎている）を意味し、九とえはＴｒ　Ｏｕ−、の試薬、ジスサクシニル基質など 會包含する。 「抗体」の用語は、全免役グロブリンおよびｖＬ原の九めの佑合部位を有するそ の断片全包含する。 本明細豊で使用するものとして、「遷移状態類似体」の用語（２、加水分群２！ 移状態で存在するアミド結せ１之はエステル結合とほとんど１司−の、もしくは こｎらの結合七Ｆ禦よ」する形状にデザイン３ｎて因る。原子の配列を意味する 。 本部ヌ誉で便用するものとして、「ジペプチド類似体」の用語は、遷移状態類似 体の構造、１文は変形された基底状態、類似体の構造、ｌたに擬装するジペプチ ドの装置と同様の位賞にろる、２個のアミノ酸の側鎖を鳴する上記２ａｉの類似 体の袂紫（ｅｌｅｍｅｎｚ　）の構造全意味する。換百丁れは、ジペプチド類似 体では、での２個のアミノｒＲ間の正常のアミド結＠（丁なゎち−ＣＯ−ＮＨ− ）が上記に定義ざｎている原子の配列によってｋき洪見られている。このジペプ チド類似体の周囲に、追加のアミノ酸残基ｔ４人し、ポリペプチドｒ形収するこ とかできる。丁な７りち、ンベプチド鶏似体（１、基質分子内のｈ裂標的のペプ チド結合ｋｍき侠える。 このジペプチド）似体の周囲の分子は、ペプチド結合架檎を含有し、この架情は 、天然産ｆｆ、　Ｃ−０基が１４Ｈ９○、　Ｓ　、　ＣＨ，、ＣＦ２　Ｖ　７’ ＣはＣ−Ｓ＋’こより置＠侠えられ、七して（ｉｆｃ＋ｑ）天然生成ＮＨ基がＯ 、ｂ　＋　””２１０Ｆ２．Ｃ−０−４たはＣ−８によジ置き換えらｎるように 、変えることができる。たとえは、この基は、そのアミド結合のＣ−０基および ＮＨ基が相互変換さ１ｔているレトロペプチドでるることができる。 「若干または全部」の用語は、開裂石ぜる、少なくとも１個のアミド結合、エス テル結合またにグリコシド結合を有する標的分子の一部分ｌたは標的分子の全体 を意味する。たとえは、不発明の聾様に２いて、多くのアミ／酸残基を有するポ リペプチドよりなるタンパク頁分子甲の特定のペプチド結合の開裂を触護する抗 体を誘発名ぜる目８シの九のに、ハプテンをテザ′インする擲合に、１ｉ的ペプ チド結合に相当するジペプチド類似体は約８個より多くないアミノｒＲ残基によ って取り囲１ｔシていることが必要なたけである。しかしながら、標的分子が比 較的短鎖のペプチドである場合には、このペプチド結合類似体は、標的分子中の 全アミノ酸残基で取９囲１　ｒｔていると有利である。当業者は、所望のを異性 、標的分子の一類およびその他の因子が、ジペプチド類似体の包囲に必＊ｌアミ ノ酸残基の理想的な数音指示していること２友顕している。 「実質的に相当する」の用語は、開裂させる結合の類似体を含有する抗原中の基 に対し、変化および（１友はフサイズの点で類似し１いる基を意味する。好１し くに、こｎらの基（グ、サイズおまひ変化の点で同一でめるが、不発明のハプテ ンにおいて、このような同一さは必須ではない。ハプテンは、１個ま九は２個以 上の不蒼中心を含有することができ、従って、エナンチオマー形態および（”ｔ 　ｆｃ　Ｕ　Ｊジアステレオマー形感で存在することができる。−穀（（、−・ ブテンは、ラセミ体形ｌたはジアステレオマーの混合物の形で得られる。所望に より、こｎらの混合物を立体的に同種の成分に分離ターる技術で周知の技法上便 用することかでさる。純粋な状態の光学異性体も、立体的に同種の出発物’ｊｉ ｉｋ便用することによって、調製することができる。 本明細豊で使用するものとして、「ハプテン」の用語に、エピトープとしてに作 することができる分子として定義さｎる。ハプテンは、開裂または形成しようと するアミド結合、ペプチド結合、エステル結合またはグリコシド結合金言有する 。 生理学的に許容さｒする塩は、鉱酸の塩、たとえば塩酸、硫酸、硝酸など、−塩 基性カルボン酸の塩、たとえは酢酸、プロピオン酸など、二塩基性カルボン酸の 塩、たとえはマレイン酸、フマール酸なと、２よび三項画性カルボン酸の塩、た とえはクエン酸など、を包含する。 本Ｆ！Ａｈ書で便用するものとして、「天然産生アミ７表」の用語は、タンパク 質中に見い出アことがでさるか、’ｉ７ｔは見い出丁ことができない、２０個の 必須フルファーアミノ酸２よひその他のアルファーアミノ撤七包含する。これら のアミノ＠は、アラニン、アルギニン、アスパラキン、アスパラキン酸、システ ィン、グルタミン、グルタミン酸、グリ７ン、ヒスチジン、インロイシン、ロイ シン、リジン、メチオニン、フェニル７５ニン、フロリン、セリン、スレオニン 、トリプトファン、チロシン、バリン、４−ヒドロキンプコリン、５−ヒト；キ シセリン、ニブ７０ンーＮ−メチルリジン、３−メチルとスチジン、ベーター− アラニン、ガンマ−アミノ酪散、ホそシスティン、ホモセリン、シトルリン、オ ルニチン、カナバニン、ジエンコル酸およびベーターシアノアラニンを包含する 。アミノ酸は、アミン基、カルボキシル基、７に素原子および「側鎖」と称さｎ る特殊な基が結合している次累原子よりｌる。不明細壷で使用するものとして、 「側鎖の類似体」の用語は、天然産生アミノ散の側鎖でら９、この天然産生側鎖 中の１１！Ｉまたは２個以上の基は、天然産生基に実質的に相当する異なる１個 １之は２１（支）以上の基によりｌｔき侠えらｎているｔｉｌｌ鎖であると定義 さｎる。ヒドロキシ基七含有する、このような側鎖は、グリコフル化てｎてい１ もよく、ホスホリル化されていてもよく、スルホニル化でｆ′していてもよく、 あるいくヒドロキシ保護基により保護さｎていてもよい。いＴｉｔの倶」鎖中の ヒドロキシ基も、い丁ｎかの数の、当技術で周知の過当なヒドロキシ保護基によ って保護さｎていることがＴ：きる。こ几らの保護基は、たとえばｔｅｒ’Ｌ− ブチル基を包含する。 「末端アミノ保護基」の用語は、ペプチド’Ｅ７ｔはアミノ酸の床端アミノ基を 保護することができるいずれかの基を意味する。従って、末１アミノ保護基は、 アセチル、スクシニル、ビフェニルカルボニル、ベンゾイル、ｔ−ブチルオキシ カルボニル、カルボペンジルオキン、トフル、ダンシル、インバレリル、フタリ ル、１−アダマンタンスルホニル、アセナミド、ベンズイミド、アミジノ、カル バミルおよび七の官能性陣！等基を包さする。 「天端カルボキシル保護基」の用語は、ペプチド配列はアミノ酸の床部カルボキ シル基を株脛することかできるいＴ１かの基を：を休する。末端フルボキシル保 護基は、（Ｃ１〜Ｃ９）アルキル、フェニル、置換メチルエステル、たとえはメ トキシメチル２よびフェナシルエステル、２−ｆｉ置換テルエステル、たとえば シフｏ　ヘキ’／　ル３．．ｔ：　ヒフ　’）ル、ｌｌ［！！ｊＩベンシルエス テル、九トエｉ’ｘパラーメトキシペ／ンルおよびバラ−・プロモベンンル、ア ばド、たとえはピペリジニルおよびヒドラノド、ｌらひに七〇官馳憔同等基【包 含する。 「生体分子Ｊ　（ｂ１ｏｍｃ４ｅｃｕｌｅ　）の用語ニ、インビボＩたはインビ トロで、生物学的系に１与するいずれかの分子であると定義δｎる。生体分子の 例は、タンパク質、グリコタンパク員、ペプチド、ステロイド、核酸２・よひオ リゴ多穂ｌ之はポリ多糖を包含する。ペプチド、ステロイド、核醒などの合成有 機り裏体もまた、包含さｒしる。テオフィリン、カポテン、シクロスポリンなど のような医薬釣に活性な物質もｌた、生体分子でめると考えらｎる。 「アクセツシブルＪ　（ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ　）の用語は、抗体の結合部位と 結合することかでさることを意味する。 触媒性抗体（ｃａｔ、ａｌｙｚｉｃ　ａｎｚｉｂｏａｙ）　ａ、他の全部の条件 （九とえに、温度、反応体／基質濃度など）が同一でろる下で、化学反応の速度 ′ｆ笈えることができ、該化学反応中に入らす、従って該反応で消耗されず、か つ１１モルの触ＩＥ＆注抗体が多ｉモルの反応体／基Ｘｔ変侯することができる 抗体である。メカニズムの観点から、この抗体は反応体／基質に結合し、この反 応体／基質の生成物への加速さｆ′Ｌ７ＩＣ変換に作用し、次いで生成物を放出 し、平衡口宵を変えることなく、その化学反応の速度を変える。前記の定義は理 想的触媒Ｑ待機でめる。しかしながら、実際には、最良の触媒でさえも、反応糸 同の、わるいは反応の運行中の化学的ｆ７’ｃは物理的分解の貼来としての、夾 雑によシ、毒性にδｎるか、ｌｆｃは不活性化さｎる。当技術で周知の理由によ って、ＰＢｇの真正な動作は、反応系の成分によって、るるいは反応環境の９に １ｔＦによって、不明であることもめる。 化学ｔ　＠　ｆ”７仇体は、化学反応の速度全化学ｉｉ″”Ａ的に増加する、す なわち反応速度は増加するが、触媒性抗体と（２異なり、反応中に化学に＠８９ に消耗δれる抗体である。 治療作用に係る標的としての、生体分子３よびその配ダリの同定 触媒性モノクローナル抗体の黴告ちむている例Ｉで（＝、当該抗藻の特異性が傅 ら九ている。こｎは触媒分子、基質が、免ｆｇ、原中にだけ存在する、２！！移 状態構造でｂること金除いて、免役〕駅と基本的に陣１−でろるからでめる。こ こに、この試み？、免疫原１念はハプテンのテヂインＫ　ｘで拡大し、その基質 がｅうに大すく、さらに複雑な生物学的分子の一部分でわる場合に、七の＆＊の 反応を！！ｉｉ媒することができる触媒性抗体を誘発芒ぞることかでさることが 見い出さたしたとえは、オリゴペプチドノ・ブテンのデデイン１Ｃおいて、遷移 状態類似体は、ペプチダーゼ活性を有する８′媒性モノクロ一ナル抗体の誘発全 溝く配列内のとこかに位置している。この抗体の特異性は、この遷移状態類似体 構造の側面（℃位＠ブ′るアミノ酸によって決定δ几る。このようにして誘発ざ γしる抗体は、ペプチド會特異的に７ＪＤ水分鮮し、類似し１いるが、同一の配 列１次は！８造全頁していないペプチド（２加水分解されない。このような触媒 性抗体はＬＬそのペプチドがタンパク質の一部分でるる吻合に、そのヘプテド奮 加水分触するη・、ただしｆａｔ　Ｉ’！−１題のペプチド配タリは、天然タン パク質中に存在する場合には、触媒性抗体との結合に関してアクセンシブルでわ り、すなわちそのエピトープが表面に位置して？ジ、かつ］たｔｂ１問題のペプ チド配列がアクセツンブルである場合には、七の自由な基５Ｉｉ活注形態におい て、先金なオリゴペプチドｉＣよって示さｒしるタンパク質中の構造？俊装する ことかでさるものでめる。 ここに、抗原テずインのプロセスを補助する定めには、生体分子内のペプチド、 エステル１′ｆｃはグリコシド■結合を「アクセノシブルＪ　（ａｃｃｅｓｓｉ ｂ′−ｅ　）として、ｘ九＋ｘＦノンアクセツシフ゛ルＪ　（ｎｏｎａｃｃｅｓ ｓｉｂｌｅ）として、わるいは「狭面」として、またμ「非表面」として、同定 するという４　ｔｇ　ｔ”使用することができること〃１見い出さｎ几。このよ うな情報は洩々の形で、かつ’Ｅ７１！々の正確度で入手することかでさる。第 一に、生体分子の三次元構造が脱却でｂる場合には、その構造の慣討によって、 表面に位置するものと決定さｎた領域はｂ」能な抗原として同定することかでき る。 全ての発衣ざｎているタンｌ（りｊｉｊ檎造の三次元構造（グ、Ｂｒ０Ｏｋｈａ Ｖｅｎテータベース（４）に保存嘔１．ておジ、容易に手に入ｎることができ、 またその他の生体分子の三次元Ｓ造（２、Ｃａｍｂｒｉｃｌｇｅのテータヘ−ス ニ保存＠　レテいる。 構造か判らない場合には、正確名は小もいが、類似の情報？生体分子のコンピュ ーターモデル１九に予想橋造全膠考にして得ることができる。これは、対象の生 体分子が同族生体分子の一族の一部である場合に特に有用であり、この場合には 、「知見にもとづく」予想（５）をすることができ、表面に位置する配列を断定 することかでさる。 正確度が小さくても、生体分子に係る親水性プロフィール會もたら丁アルゴリズ ム會使用することができる。生体分子内の、高い割合で親水性基ｔｆｃは帝電基 を有する領域にまた、表面位置になるものと見做さする。 タンパク實鎖の切断が目的でろる場合には、成る種のアミノ酸虻列が好ｌしい標 的である。たとえば、タンパクｆｉ’ｉ念はペプチド鎖中Ｖこ存在する橋台に、 次のアミノ酸の組合せ、ＡＳＮ　−ＧＬＹ　、　ＡＳＮ　−ＰＲＯ、ＡＳＰ　− ＧＬＹおよびＡＳＰ　−ＰＲＯを官有する配列は、接触切断の好ましい部位でら る。同様に、グルタミン酸およびグルタミン七含有する配列、すなわちＧＬＮ　 −ＸおよびＯＬＤ　−Ｘ　（Ｘはいずれかのアミノ酸でめる）は好ましい切ｗｒ 部位でめる。 ての他の１轍が得ら九ない揚台には、タンパク實の切Ｉｆｒｋテデインするため の、さらに別の手段として、抗体は、抗体とタンパク負との闇の父で反応性の領 域が位置している所１で、七のタンパク實配列に沿って、種々のペプチドにレイ ズさぞる（　ｒａｉＳｅｄ）　、純粋に無作為の方法に従う手段がるる。 モノクローナル抗体技法ｒ治僚用途に使用するために（２、モノクローナル抗体 そその抗原に結合させねばならず、かつ筐たその抗原から解離してはならない。 この抗原は、＝Ｊｍ性タンパク質、ウィルスまｔはその他の毒性分子であること かでさ、あるいは細胞の表面でろることができる。結合の後に、抗体−仇原複合 物は、浴菌酵素カスケードの活性化を誘発さぐるか、あるいは食細胞によって排 除さｎる。 他方で、触篠憔抗体は、基不幻に異なるメカニズムで動作する。触Ｓ惟抗体、プ ロテアーゼは、たとえばその結合の部位でタンパク員？「切断」することができ るので、その位ｌｔＳよひエピトープのデザインは、タンパク質分解および引１ １、その目標、標的の生物学的機能力）らの解崩か不’ｏＪ逆ＩＪ′Ｅに失なわ ｎるようなものでなけれはならない。丁なわち、ＨＩＶからのｇｐ１２０のレセ プター結合領域りのエピトープに対してＩｏｌＶ″ｆられる非触媒注抗体は、こ のウィルスのそのＣＤ４ンセブターに対する結合ｒ阻害することができる（４） 。 この阻害１２、大言の抗体か、ウィルスとそのレセプターとの接触を防止するこ とによって生じる。 ウィルスの同一領域に対してｒｆｆＪけらｎる触篠性抗体プロテアーゼ！’；ｊ 　’！　７Ｃ、レセプター相互反応の消失を導くことができるが、別の一組の出 来事が後から生じる。 プロテアーゼは、ウィルスタンパク’Ｊ［銭を切断した後に結合したｌ讐で残ら ないので、切断そｎ自体の作用刀・、結合の消失を効果的１ζ導かねはならない 。このことは、必ず起ることではない。たとえは、特定のペプチドの切＠が、レ セプター結付活性を破壊するのに充分な、三次元簿造の開裂を導かないことがあ る。これに対して、レセプター結合領域から離ブｔてめるエピトープ同のペプチ ド結合のタンパク買方〜が、タンパク５Ｍ構造に対するその不安定化作用によっ て、感染性の消火を導くこともめる。従って、触ｇ注抗体プロテアーゼは、単純 な２体結合効果を牲て作用するものではないので、標的配タリに対する＠本釣に 異なるテザイン万ｆｆ：を確立しなければならない。この方法奢如例に実行でき るかを示す特別の例１に以下に記載する。 不発明の方法Ｆｉ’？−いくつかの生物学同機能の活性化ｒ導く、開裂を行なう ために使用することもできる。このような反応には、ペプチド結合の開裂が宮ま ｎ、るが、１７１：エステル結合＊＊はグリコジル結合あるいにその他のタイプ のね合が宮１ｆ″Ｌる。 生物学同機能の活性化を導く生体分子の開裂の例の一つに、インシュリン依存注 塘尿病の処置がある。、思考は自分自身がインシュリンを注射する人でりる。こ の技術では、儂環器中に放出さｎると、天然の膵臓インシュリンの放出の薬物動 態学的挙動を寮装するインンユリン！ｌｉ！刑？蛍求する。インシュリンは、膵 凍内に＠駆形標のプロインシュリンとして存在するが、この前駆形愈の活性はイ ンシュリンそｎ自体よりもかなり）太＠　Ｇ　ｆ　”Ｊｋい。ブロインンユ′、 １ンのインシュリンへＯ変俣會導く、ペプチド結合に特異的な抗体プロテアーゼ １１、その動態学的特性が、プロインシュリンおよび抗体プロテアーゼの注射後 に、インビボで、インシュリンの放ａ：ｉ七可能にするよっにデザインすること ができる。こｎ　（ｆｉ　％　　この場合の薬物が天然タンパク質ホルモンであ る、プロドラッグ活性化の輿１でろる。プロドラッグに、生物学的機能の活性化 そ導く、かな９の治療的に活性な分子七含再することができる。この前駆形標は 、薬物の自然の１し飾の利点會勺するか、またはぞのい丁れか適当な合成万修飾 の利点を有することができる。世活さく治ｆｆ１．的に有益または毒性）の適当 な薬物訝４俸が、適当な触謀注抗体で修飾されることによつ１、油性形態に変え られる。このプロセスの特定の例ｒ以下に示ア。 速度壇２７１．１ｆｆｌ：抗体の調装およυ・使用速度増加性抗体、丁なわち化 学蓋慮的寂よび触謀的速度増１体は、インヒドロおよびインビボの両方の技術で ５発させることができる。不明細簀で使用するものとして、［誘発されるＪ　（ ｅｌｉｃｉｚｅｄ　）の用語は、インヒドロおよびインヒポ技術によって、本発 明（（よる仇ｙＡ＃／ｃよる触謀注抗体の誘発を意味する。しかしながら、イン ビトロ誘発が包含δ１する場合には、不発明によるハプテン力１で几ら自体によ って、触謀性抗体の誘発に使用できることは当菓者に容易に装置’９　ｆＬるこ とでめる。誘発がインビボ技術によって運成さｎる場合には、過当なギヤリア分 子に複合ａｎ１いるハブテンよりなる免疫原が触謀性抗体の誘発に使用さ几るも のと理解−１１ｉｎる。抗原ＩＣ％抗体分子中に相当する超可変性結合領域全誘 発３せ、化学反応、特（て１水分解反応の遷移状態のための固有の結合エネルギ ーを示すようにデデインでれているハプテンｔ＠有する。この組合せ部泣に生じ るアミノ酸押」釧の配置は、対象エピトープのイし学的修飾を行なう九めに適応 する。触媒効率における迫Ｘの改良に１部位指向突然異変によって得ら几る。 広く百えは、本発明の方法は、抗体七産土すること艶で台るｈ＠を抗原にδらし 、こｎによって、抗体産土性軸胞を生成させ；この抗体厘生注細胞會ミエローマ ね胞とハイブリッド彫成石せ、こ几によって、それぞ几がモノクローナル抗体ｈ ａ生する、複数のハイブリドーマ細胞を生成ａせ；次いで複数のモノクローナル 抗体ｔスクリーニングし、対象の化学反応？触媒するモノクローナル抗体を固定 することよりなる。このよりにして同定石ｎたモノクローナル抗体に次いで再ひ インビボｌｆｃはインビトロのとちらかの技法によって、り製し、対象の化学反 応全触媒するのに、量的に元号の抗体を得ることかできる。 所望の触媒活性および特異注七有する気体の検出は、ハイフ：ノドーマが肪発ち れた時点でｃＩＬらの）・イブリドーマ會スクリーリングすることによって達成 ちれる。 たとえは、スクリーニングに、筒速欣体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）　または 分光測光云（ＥＬＩＳＡ）によって達成することかできる。触媒性モノクローナ ル抗体は、１９８０年４月１日付で発行さｆ′Ｌ九米国待肝第４．１９６，２６ ５方に、Ｋｏｐｒｏｙｓｋｉ等Ｐこよジ開示さｎた技術の汲法によつ１、インビ ボで誘発嘔ぜる。この豐肝の内容ｔここに組入ｎる。この方法の評価は当技術分 野で知ら几ている。特足の分子に対する、一連のモノクローナル抗体（・；、過 当な条件の下に鉤裂さｎる。 この方法＋Ｃ、先丁ＢＡ−ＬＢ　／　Ｃマウスに相当する抗原で免役付与するこ とを包含する。この抗原（グペプチド１ｆｃはその他のキャリア分子に結合させ た本発明によるハプテンを含有する。 抗体産生性リンパ球を仄いで、この免疫付番さｎたマウスの膵臓から取り出し、 ５Ｐ２１０軸、砲のようなミエローマ細胞とハイブリッド形成させ、ハイブリド ーマ細胞を生成させる。これらのハイプリドーマ細胞金次いで倣鎗？闇定板Ｑ凹 す中に入ｎる。このハイブリドーマ細胞によって産生さｎる一連のモノクローナ ル仇ＫＶ、相応する条件の下ＶＣ所望の反応を触媒するモノクローナル抗体？！ −ｈ足する次めに遍する条件の下にスクリーニングする。別法として、この培地 は、免疫〕京ｌて結合する気体に保り試験することかでき、次いでこれらの抗体 産生性ハイブリドーマに組城培養によって増燗芒せるか、またはインビボで増殖 させる。スクリーニングは、微１＃崗定板凹部から採取した培地の一定音で反応 体の像準化溶ｖｖｉ、會処理し、次いで慣用の装置を用いる方法：こよって、虜 留の生成物の存在全構出することにより、都合良く行なうことができる。この検 出ぐ１、たとえ１・１分光擲」光法により、％−は気体−液体めるいは筒圧液体 りロマトクラフイにより、容易（（行なうことかできる。′Ｆ９Ｔ望の生、仮初 １念（プ反応剤の標準化試料と比較することによって、反応速度全定量すること かｔｌる。この方法で、触譲憔モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細 胞を含有する凹部が同定石れる。選はｎたハイプリドーマ忙胞は次いで、培養し 、コロニイ全生成さ一ビる。 こｔしらのコロニイ：り、インビトロまたはインビボ系でδら（（増殖妊せるこ とができる。インビトロ系の場合ｆｃ　Ｉ’Ｘ、　、同系ＢＡＬＥ　／　Ｃｆｆ ウスのようなマウスに、この選は几た・・イブリドーマ細胞全腹腔内接種し、次 いで一般に２〜３週閤以内にｅｉ瘍を生じ６ぜる。これらの腫瘍は、所望のモノ クローナル抗体上含有する腹水の生成を伴なう。モノタローナル仇藻はスいで１ 限外ｇ＝、＠ａ毛・分喘、透析２よひイムノアフイニテイクロマトクラフイなど の慣用の方法によって、この腹水＞ら、別々に分離さｎる。 この別々に採取ｇｎｆｃモノクローナルケ坏會、このモノクローナル抗体と標的 分子と０間の複合物の形成を”ｊ　Ｔｒ：　してする過当な条件の下ンこ、イン ビボで動物中に導入する。一般に、使用δｆる触譲注気体の濃度は、標的分子の 濃度と等しい濃度より少なくし、ビフ七ル範囲であることか−（′キる。この気 体ζ２．インビボの正′Ｋｌ生理学Ｅｌ”１条件の下に機能しな（７１シになら ない。この複合物の形成に通する条件ζ、対象として考えられでい；ｂＰ＃定の 分子２よぴ抗体によって食えることができることは当業省にとって明白である。 上記した方法のい丁ｎによっても、左主それる気体は、不動化煽胞うイン七柱１ 、インヒドロで生成させることもでさる。過白な杉懇の気体（たとえは、「ヒト 化Ｊ　（ｈｕｍａｎｉｚｅａ）マウスモノクローナル気体）ｒ１次いで重速「薬 物」とじ１投与することができる。 化学反応の運行中に、反応剤は、反応剤または生成物りとちらよジもエネルギー 的に好ｌしくない構造を経て、１糧または２糧以上の潜移を受ける。分子の観点 で、こ几らの４桜状態（Ｉｔは甲間樽念）は結合の負ざおよび結合の角度、なら びに結合の形成２よひ開散に２？ける変化に反映する。遷移状態をうる几めに必 女なエネルギーに、油性化工不ル千−とｍ’ｇｆＬ％　これに’＝７ｃｓ遊移状 態のエネルギーと反応剤のエネルギーとの間のエネルギー差でめると考えること もできる。 触媒は、この反応のｆｉ！５狂化工不ルキーを低下させることによって、化学反 応速度を増加ちぜる。七の抗原か、中でも、予想される４移状態構造（すなわち 、遷移状９類似体、質形δＡｆｃ、基底状聾構造１九にその両方）Ｋ似１いるこ とから懲は１する、抗原またはハプテンに対して誘発ちれる気体（−反応を触媒 することができる。このようにして産生さ几る抗体（２、反応剤および生成物に 比較して、遷移状態の工坏ルキーを安定イこしなげｎμならない。この方法に、 いくつかのｌ媒性モノクローナル抗体の光境において、光分に証明されている。 せ′４的にテザイン嘔ＩしたハプテンＶこよジ誘発δｒした触謀注抗体は、こ几 らか生体分子中の特定の部位に存在する成る構造配座の結合の開裂奮触謀するだ けに熟慮と１したテサインｔりることから、「部位特異性」でろる。同様Ｖこ、 こｎらの触媒性抗体は、七ｎらの木端に成る構造配座に有する基の木１からの貼 合の形成をｐ＆譲するたけにテザインすることかできる。従って、不発明に従い せ理市にテナインδ１した）・ブテンは、生体ガ子内の特定の部分に存在する結 ＠？−４させ、２糧】九に６−以上の開表生仮初會生成させることかできる、部 位特異性の触媒性抗体の誘発に使用することができる。向−の抗体か２７Ｃ％正 しい構造配座全盲するＣ扛らの開裂生成物を接吠する、結合の形成をｆ５．はす ることができる。 従って、こｒＬらのハプテンに、撞々の化学反応に係る遷移状態ｒ俊装するべく テサ゛インａｆている。好１しくに、反応は、ペプチド、エステル、アミド２７ Ｈはクリコンドの結合の開表１九は形成でりる。−例として、下記のハフテンに 、ンペグテド知似体〔ＣＤ″Ｊは〃１ジでなく、ｌたサブサイトアミノ飄残基Ａ ％　　Ｂ　％　Ｅ　％Ｆを同時に有する。 これらのサブサイトアミノ酸残基は、塊状構造２よび線状檎這ψ一部でりること かできる。サブサイト残基り敢通ｉは、抗体が結合する部位のプイズにより決定 δｎる。同様に、ペプチドに対する抗体の有効な結合に係る唯一の必須蟹件は、 抗体の抗原結合部位と結合とゼ々ペプチドの分子表面との間の惰慣刀＾両方の形 状およびｍ、何に圓して維跨？ｎていることである。 ハプテンンａ１　こｎらのハプテンに対して生成ざ１しる仇俸か、アミド、ベグ ナト、エステルｌたはクリコンドの結合の一牧ｌ九は形成に２いて、高エネルギ ー中間状惨ｌたは遷移状態のうちの一つｌたはい丁れｔも、遇択ヨシＶｒ−安定 化することかで＠るよりな方法でテザインδ几る。とｎらの０１７７６次の三極 の御飯的クラスに入る二（］）アミド結合ｘ７ｔｉ’ｚエステル結合の甲の切＃ −ごぎる貼合のカルホ二ル戻素に相当する原子のノ＼イフリツド彫取がＳＰ２ハ イブリッド刑戚からＳＦ３ノ・イブリッド形成に変えらｎるもの；（２）アミド 、エステルｌたＱ−グリコシドの結合に相当する原子のいすｔＬかを、異なる原 子によりｒＩｔき供えるもの；２よひ（３）アミド、エステルｌたはグリコンド の貼合に鞘当す々原子か一理ケ系１ｆｃは二環仏系の一部でめるｔの。 不発明の一愈様ｔ・こ係る触媒注気体Ｖこよって、調力（分解でｆ／ｂここか求 のら扛る短目部位に７へプナド知似俸で含有するペプチドの配列（グ、この触媒 証抗体が天然タンパクａに２いて加水分解するでめろう配タリを定のる。この抗 体の結合エネルキーは、配り１」符弄憔認識２よひ河原の犬泗タンパク買ｌ九は ベグナトとの化学的反応０）両方七町耽に丁ゐよンに分布モゼる。 全部の連続エピトープの証明には、８個より長いアミン＠残泰を有するベグナト （オクタペプチドンヲ訓製する必号ｈ１ないことか轍舌妊１ている（５〕０抗体 か再攻庇徐相でベグナトに組合丁ゐことも証明３れている１６）。使用３ｎるア ミノ酸の光字異性〃１、ン′くプチドによる仇ｇ−相七の強さおよび特異性に対 して強力な影参力で有することも確立δｎでいることでりる。従つ−Ｃ１兎役可 与注仇原中シこ存在するＬおよびＤのアミノ酸残基の１貴江は、生じる仇淳細曾 部伍の刀イラ１ノテイに対する深遠な効果ｉｔこりる。不発明の一態様による、 天然タンパク負中の舟定の配タリ（連続）の、または構築ざ２したエピトープ、 タンパク負の測足′″′Ｃさるε負とその兄＆ｊＪｉ’ｌ性部但との、関係に圓 して予め定めらｎた特異狂ｒ勾する触媒１抗体に一般に、貞女である（７）。タ ンパク買上クリか容易に利用できる場合には、最も広く使用３ｎ１いるフルゴリ メムＷＸ　、親水性プロフィール中のＦＩＪ　ｌ’ｌｌｔ　Ｂ、Ｊ威りの部位に 、逐’ａ　（５ｅＱｕｅｎ−ｖｌａ：Ｌ　）エピトープか児いｗ　ａ　ｘする司 馳注が強いという知見にもとついている１８）。表面ブクセツ／ビリティ　プロ フィール（９１２よひタコ／バク員の条軟惟曲は１ｆｃ、天然タンノくり負の配 列中の抗原部位に関する１報を提供する。レセプターラｒ在相互反応ｌたはでの 他の沃恵を伴なうメカニスムシ・こ２ける、こｎらの部位Ｖ知見およびこれらの エピトープの１ｇ狂によって、こγ１．らの１景な「崖吻泡注」エピトープ内の ジペプチド類似体を宮有するペフ゛ナドノ・）゛テン？、不発明に従いテずイン することＺｌ上できる。ｃｔＬらのノ飄ブテンによって誘発さγしる触謀５仇俸 は仄いで、九とえはクイルスタンノくり質重たは腫瘍田米増哨内子に対するエピ トープあるいは生命を膏か″３−仏況に含１几心その他のペプチド（たとえは、 ｈ困糧など中の腫腸象死因子）を消化ａせるために、使用することかで＠る。 丁ｌわち、本発明に係るノ・ブテンに、酵素Ｆ！Ｉ！媒のメカニズム上のｍｍｖ ｃ保る細見から合理的にテザインさ几て２ム触ｆｆ１ａが付与δＩしている抗体 結合部位を生敢芒ゼるのに適する調型を提供する。従つ又、分子を認識すること かでさ、かつｌ念触譲として機能することかてさゐ抗体を提供するたのに８号な 舟駆の全部上組合せて有する。すなわち、式〔１〕で示さｎ；ｂ環状カルホハイ ドレートノ・ブチ／は、以下に説明するように、典型的な〇−結合グリーンド〔 ６〕中のグリコンド結合の工水分所のための、提案さ几た浬移迭轢〔２〕ｏυの 艮好な激ｋｃ体會提供する。 Ｈ Ｈ 触ａｔＦ：抗体は、たとλμウィルス感染の免役治療法に２い又、部位待！Ｓさ タンバタ賞分解馳力を自する。 ウィルス（声、（７’Ｌらの外１則コートタンパクー七机用弘軸施レセプター（ ｔＣ何膚し、何看彼に細胞を慢略する。 ｋとえに、シト児没不全ウィルス（ＨＩＶ　）は、七の聚面に存在するｇｐ　１ ２０タンパク′ＪＩｖ一部を使用し、。 リンパ球上のＣＤ４レセプターに付着する。この帽胞付１に係るヒダ’ｊｉｃ　 、ウィルスタンバタ漬上の領域に対し１マンピンクさＡ’ｔいる。この情報倉用 いると、本ＪＡ明ＶＣよって開示さｆ′Ｌ几方法にょっ１、抗体を発現させ、こ のペプチド配りリに結甘さゼ、仄いでこｒＬｋ　、部位置ｆｈｔｌＥ万εで一牧 さぞることができ勺。しがしながら、こりよ′）ｌＶＬ体は、称迭凸Ｃクリ（こ ｎは変性タンパク）ｉ、　ＣＰ　ＰＣ生じる）ＫＭ台するりでｉｚ　＜、タンパ ク質中の１−天然Ｊ　（ｎａｔｉｖｅ　）のヒダ１」（（結合する。従って、１ 〜天然」タンパク員ｑ）４Ｊ仇原決定基ｌたはエピトープは、多くの胸倉に、ラ ンダムな機状Ｉ！ｃ置でめるよりはひしろ、高次形Ｍ（すなわち、三次元ｈｇ＞ でろる。 ここで丹ひ、タンパク負上のエピトープの知見〃・、このよりｌエピトープの修 飾を生じざゼることができるバラトープを有する抗体のデザインに２いて］１景 になる。促って、ハプテンに、ランダムな彫状でろるよりにひしろ、エピトープ の同一構造′＃徴を有するようにデザインすること〃り」る。ｃｎらの構造上の Ｐ＃僅は、単純な腺次ペプチドによりて虐合ざぜることができ、この場せに、最 低二坏ルギーコンホーマーは問題解決の好通構−１ＩＫである。第二の構造書留 は、アミノ酸測鎖の又３箱８またａ−ターン捩装体（−ｚｕｒｎ　ｍ１ｚｅｔ、 １ｃｓ）の使用によって導入することができる。天然タンパクＪ１ｊ甲のエピト ープと両ユする構造を組入れ１、高次的にｍ築芒Ｉしたハフ″テンは、触媒任気 体造ｂ」汲注結合領域の三次元鶴逓内に正しいモチーフ金主じδせるために必須 でるること力・１：さる。高次に構築”９７’したハプテンの利点に、こｔ”ｔ らり・タンハク賞中で天然構造？沫袈し、開裂を受は易いタンパク″ｉｉ４り領 域？潰裂する頌回會有することｙＣろる。 宿主り胞（′Ｃ−侵人するたのに、神輿的細胞レセプターを便用するウィルスの 、レセプター細合憤域からり配列で、変化する長ざｔ有し、刀）つ１九その目ロ クリ中の必須領域に遷移状態類似体７ベブテド同日し体？■する万すゴペプチド に、獅合により、過当７千ヤリアタンパク貞に結合３ゼた後に、兜役雪与によっ て、ウィルスコートタンパクｊｋｔ開牧δぜ、ウィルスのｈａへの侵入？防ぐ、 触媒江ＦＥ、体奮肪晃する。ジノ１４ウイルスジよひホリｆ１ウィルスの粒子の 久元御造ｆｌ、Ｘｉ走盆によって凶（・こ示恥几ている。ＩＦｔ［ｌ施しセグタ ーに対する箱せ部＆でｂる領域は同定δｎている。’［”　−ｌ）ンバ琢上のＣ Ｄ４レセグターとの相互反応に必須の、ヒト免役不全ウィルスタイプ１　（Ｉ− ＩＩＶ　１　）　Ｆ’ｚの領域は、。 ｇｐ　１２０コートタンパク實中の配列に口重して２ジ、マツピンクθｎている 。丁なわら、本発明の態様の一つ（て２いては、宿主ｍＫへの何漕に必須の、ウ ィルスエンベロープタンパク貞からの部分配り１＋　ｋ含有し、かつ１九本党男 によるハフテン〃λら迦はｆＬる遷移状標ジペプナド同配９Ｉ−七言有するオリ ゴペグテドか使用される。生成するペグナト類似体上次用し、感染に必須のウィ ルスコートタンパク質のタンパク員分亨注七グメント（エピトープ）によって、 ウィルス七不活憔にするｉ！５！碌注仇俸を抗体てぞる。好４Ｌ、＜は、し１０ ウイルス、たとえｂ　Ｗ工Ｖ　ｌ　、ｈｒＶ　７１２？よひビコリナウイルス、 九とえニリン１４、ウィルスポリペプチド、炎症性タンパク員、アナフィラキシ 注タンパク員、’Ｊ　／　ホカイン、ブイタカイン、およびその也の宿主感染ｌ たな１ｍ任症候群のポリペブナトメディエータ−からの配りＩＪ　ｋ有する万す ゴペプチドか使用さｆる。 不発明の仇涼によって肪兄モｎる触譲江気体に自己免役疾患、帰おＪひトロンビ ン浴Ｐ＃さ疾患の処置に有柚でめることかできる。本兄Ｆ！Ａの触譲性気体はま 几、高＃ｊＥｌ）ボタンバク負ｒ消矢嘔ぜることによって、心啄皿管糸扶！の処 ｌに、およびｌた、細困恢エンドトキシンのＷ＃毒にｔ有゛用でめることができ る。 ワクチンとしての抗原の調製および使用成る糧の仇原釣刹直に応答して、インじ ポで抗体を産生する、身俸七ｎ自坏の北方を兜視さゼることによって、利益ｔう ることη為できることか１７′ｃ見い出され文、特定のｊｐ４原体に対する免役 応答が、不油性の彰態の病原体１ｆｃは病原体と父て反応するペプチド、対抗？ Ｌ藻のとちらかｒ投与することによって、感作すること〃為Ｔ″きゐ方法は周知 でりる。真の病原体に遭遇した賜金に、正しい抗坏書異注勿有する抗坏戚生注の Ｂ細胞は丁″ｒ：に与在してい心。このよフな感作例は、通常、ワクチンと称さ れている（−）。触媒性抗体全誘発させるため（７ｃ１　同様の方法１ｒ恕足す ることかできる。銹蛇δぜる特定の触媒性抗体が組轍的方法の一部である方法で に、ハプテンに、材足り処置における開裂のための４移状態類似体を含有するよ ）にテサ゛インする。 このハプテンンこよる兜４ｉ呵与に次いで、成るＢ帷胞奮活性化し、その一部（ １Ｍ４的活注【有する抗体【産生する。「普遍」の抗原（基質）に芒らさｎると 、動物内の、この感作δｎた煉胞（−次いで、応答して、インビボでちＪ性抗体 を生じさせる。従って、非袖口投与の必景性か明らかになる。これらの「触媒さ 」ワクチンａ、ウィルスｈ・よひでの他の病原体、有毒薬剤、誤用＃１．剤、天 然産生タンパク質、重速的に有用なプロドラッグに対して浩注勿有するｐＢ謀注 抗体の活性化に２いて、非常に一般的な調速を有−する。 不兜明？下記の代表例によＶδらに光分に説明する。 こｆによって、不発明はちりに光分に理解ざ扛るたろ２゜ 例　　１ ヒトレニンの「フラップ」領域を開裂するモノクローナル触媒性抗体の調製、ス クリーニングおよび単離の方法 レニンーアンザオテンンン　カスケード反応を開始させる働きをするレニン、ア スパラザン酸ブロティナーゼの阻害は近年の多の研究の目的であった。レニン阻 害による高血圧症の処置能力は、天然基質のアンギオテンシノーデンのペプチド 配列にもとづく、種々の強力なレニン明害剤の合成をも念らした。別の手段とし て、レニ７に対するタンパク質分解性抗体の使用がある。 ヒトレニンのフラップ（ｊｌａｐ　）領域が、Ｔｈｒ　８５およびＧｌｙ−８６ のアミノ酸基と相互反応するＴｙｒ　８３の−ｈｋｅニル基を導く、４個のアミ ノ酸残基のループ状領域を含む、−・アビン状であることは報告されている（１ ２）。環状デカペプチドである。 ７−コ ＣＬＲＹＳＴＧＴＶＣ，〔８０−８９１ヒトレニ／は、この同一ヘアピン構造を 取ることが見い出された。 この例では、本発明に従い、ジフルオロケｌン含有免疫原を用いて、モノクロー ナル抗体を誘発させる。 このモノクローナル抗体ｒは、ヒトレニン分子中のペプチド配列 １Ｃおける残基８５と８６との間の開裂を触媒するものと見做される。残基８５ および８６ば、この基質を触媒性部位に保持している「フラップ」領域を構成し ているので、この開裂は、この簿素の触媒としての機能の破壊を生じさせる。合 成ペプチド断片（配列８ｌ−９０）Ｋ対して誘発されたウサイ　ポリクローナル 仇血清が、合成ヒトテトラデカペプチド基質とのその反応によって測定して、ヒ トレニン活性を４０壬まで抑制することができることは、すでに証明されてｂる （１４）。 ヒトレニンのこのフラップ領域に対する触媒性抗体を生じさせるために、次式の 環状ペプチドハプテンを（式中、（ＴＳ）は、遷移状態類似体を表わす）。この 例では、この環状ペプチド　ハプテン ＣＬＲＹＳＴ（ＴＳ）　ＧＴＶＣ （式中、５Ｔ（ＴＳ）Ｃ）は、本発明に従う遷移状態類似体トリペプチドに相当 する） を固定相法（１５）に従って合成し、このハプテンをその無水物を経て、構築さ れたペプチド中に組入れる（１５）。完成されるペプチドは、三フッ化酢酸を使 用し、その固体支持体かへ、充分に脱保護化し、分離する。 このペプチドの環化け、このペプチドを低濃度で１時間、水溶液（ｐＨ８）中で 放電し、２個の末端システィン残基間のジヌルフィド架橋を生じさせることによ って達成される。このペプチドのＮ−末端アミノ基ｉｄ　％マウス免疫付与のた めに、キャリア　タンパク質に結このペプチド　ハプテンは、ポリアミドーキー ゼルが一複合樹脂を使用する固定相？ｉ！：にょって合成すｂ（３５）。側鎖保 護基には次のものがある：０−ｔｅｒｔ−デチル（チロシン、グルタミン酸、セ リン、スレオニン）　；　Ｉｉ　−４−メトキン−２，５，６−ドリメチルベン ゼンスルホニル（アルで二ン）；およびｓ−トリチル（システィン）。Ｎ−官能 性基の一時的保護は、の基は１０分内に、ピペリジン／Ｄ）ＡＦ：　２　［１／ 　８０により分離する。カップリング反応＋４　、　　ＦＭＯＣ−無水アミノ酸 を用いて行なう（６５）。保護されているペプチジル−樹＠は、三フッ化酢酸／ チオアニソール／　ｍ　−クレゾール／チオフェノール／エタンジチオール溶液 ：９　Ｄ　／　２　／　２　／　２　／　４　テ、３時間処理するＣとにょって 、充分に脱保護化させる。濾過後に、ｉ７ｉ液を小容積にまで、減圧で濃縮する 。エーテルを加え、ペプチドの沈殿を得る。エーテル性上澄液を除去し、ペプチ ドの沈殿をエーテルで２回洗浄し、ペプチド・・ブテンを（式中、カッコ内の部 分１ハ、ジフルオロケトン遷移状態類似体トリペプチド　イノステアである）。 ２、　ペプチド　ノ１ブテンの環化 このペプチド　ノ・ブテンを、その２個の末端システィン残基間にジスルフィド 結合を形成することによって「β−ヘアベン」形態に環化させる。このジスルフ ィド結合は、ペプチド０．３ｆｆｉ？／ｍｊの濃度の水溶液（ｐＨ８）を空気醇 化させることによって、１時間で完了する。酸化生成物を次いで、凍結乾燥によ り分離し、次いでＨＰＬＣにより精製する。 ６、　キャリア分子に対するノ・ブテンの結合この環状ペプチド　Ｉ・ブテン ＣＨ２０ＨＣ［（（○→ＣＨ３ Ｉ Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｇ−Ｔｙｒ−［ＮＨ−ｃ！＋−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＤ −ＣＦ２−ＣＨ２−Ｃｏ］−’Ｉｈｒ−Ｖａ１−Ｃｙｓを、グルタルアルデヒド を使用して、キイホール　リンベット　ヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合させる（ ３６）。 カップリング効率は、反応混合物に添加した、痕跡量の工１２５ペプチドの結合 により推定し、５０〜８０％完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント中のに’ＬＨ結合ペ プチド（５０μｓ）をＢＡＬＢ　／　Ｃマウスに注入する。融合相手として５Ｐ ２１０ミエローマを使用し、標準的方法によって、ハイプリドーマ融合を行なう 。この融合から生成する、ポリクローナル抗血清に応答するハイプリドーマ分泌 細胞をＦ、Ｌ工ＳＡにより、その結合活性に関してスクリーニングする。 プラスティック製微量滴定板（Ｆａｌｃｏｎ　３９１５Ｐｒｏｂｉｎｄ、　Ｂｅ ｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　Ｌａｂｗａｒｅ　ＣＡ　、米国）の凹部にＴｒ ｉｓ　−ＨＣＬ緩衝液（［１１，１Ｍ　、　Ｐ）（９，６）中の（プチド（５μ ９７ｍ１）５０μｔを付着させる。 この滴定板を、先ず３７℃で３０分間、次いで室温で一夜にわたり、インキュベ ートする。Ｔｗｅｅｎ含有リン酸塩緩衝塩類溶液（ＰＢＳ　−Ｔｗｅｅｎ　０． １％、　ｐＨ７，４）で３回洗浄した後に、この抗血清のＰＢＳ　−ＢＳＡ　ｉ 　１（−７，４）中の連続稀釈物５０μｔを、このペプチド付着させた一対の凹 部に加え、３７℃で２時間インキュベートする。この滴定板を再び、ＰＢＳ　− ’ｈｖｅｅｎ　０．１壬で３回洗浄し、次いでこれらの凹部を１：５００に稀釈 した、アルカリ性ホスファターゼ・標識キイ抗マウスＩｇＧ　（Ｓｉｇｍａ、　 ＭＯ、米国）で処理する。５７℃で１時間のインキュベーションを行なう。 ＰＢ３−　Ｔｗｅｅｒ　Ｏ，１係（でよる洗浄をさらに長く行なった後（で、Ｍ ｇＣ４２およびＺｎＣｌ２．１ｍ１ｖｌを含有する、０．１Ｍグリシン−ＮａＯ Ｈ緩衝゛液（ｐ）１１０．４）中；で溶解したアルカリ性ホスファターゼ基質（ Ｓｉｇｍａ　１０４−１０５の２５／　１０ｍ１）　１５０　μｉととモニ、イ ンキュベートする。この零素反応（仕、３７℃で２時間進行させ、１Ｊａ２ＣＯ ３（１，５１−４）　５０μＭの添加により止める。 Ｔｘ　ｔｅｒ　ｔｅｃｋ　　Ｍｕｌ　ｔＬｓＡａｎ　　ＥＬＩＳＡ　　リ　−　 ダ　−　（Ｆｌｏｗ　　Ｌａｂｚ−ｒａｔｏｒｉｅｓ　）で、４０５　Ｘ１ｍに おいて、吸光領を読み取る。その力価は、陰性対照（１：１００に稀釈されてい る。採集正常マウス血清よりなる）の６倍の高さの吸光で置を与える最高稀釈と この光学濃度とを掛は算することによって、測定して決定する。 このスクリーニング検定（でおいて、陽性の反応を示ナハイプリドーマを、後続 の研究用に選択する。ＩｇＯは、Ｂａｋｅｒｂｏｎａ　ＡＢｘ　ＨＰＬＣカラム を用いるＨＰＬＣによって、腹水から精製する。 Ｃ，ヒトレニンの「フラップ」領域に対し特異性の触デカペプチド基質（２，７ μＭ） Ｈ２Ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｔｙ　ｒ−Ｓ　ｅ　ｒ−Ｔｈ　ｒ　−Ｇｌｙ−Ｔ ｈｒ　−Ｖａｌ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｑ）２Ｈを、上記に概述した方法によって産 生された触媒性抗体とともにインキュベートし、この反応を、混合物の逆相ＨＰ ＬＣ分析によって追跡する。この反応（ｄ１触媒性抗体による高Ｋｃａｔに最適 の声で行なう〔最適ＰＨは、発色団ｐ−ニトロアニリド基質： または螢光団クマリン基質： を使用し、その−で電荷を有する開裂部位のＣ末端部位上の残基に対する、触媒 性抗体の結合エネルイーを考１して、決定される〕。 このデカペプチド基質の開裂に関して、最良のＫｃａ　を値を示す抗体を、それ らのヒトレニン阻害能力について試験する。 Ｄ、ヒトレニンに対する、抗−遷移状態類似体抗体の結合および「フラップ」領 域の残基８５−８６の開裂によるその酵素活性の抑制 血漿レニン活性の阻害、すなわち触媒性抗体のレニン活性阻害能力、を高レニン 活性（アンザオテンシン１４０ｎｇ／時閘／　ｍｌ　）を有する一団のヒト血漿 で試験する。血漿（２５μｔ）は、１％ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ　（ｐＨ７， ５）　１００μｔとともに種々の時間の間、予備インキュベートする（最終容積 ０．２　ｍｌ　）。次いで、ゼロ−オーダー挙動を確保するため（τ、過剰量の 血漿レニン基質（２０″）　ｐｍｏｌ　）を加え、この混合物をＰＢＳ（ｐＨ５ ，７）中で３７°Ｃにおいて、３０分賀インキュベートする。この触媒性抗体の 最終稀釈度は１：５および１：５０である。生成されるアンイオテンシンエは、 ラジオイムノアッセイ（１７）によって測定する。ブランクは、相当するアデザ イム（ａｂｚｙｍｅｓ　）の同一稀釈物の使用を包含する。生じるアンイオテン シンエの量は、完全レニ／で見い出される量よりも少なく、このことは、フラッ プ領域中の残基８５−８６の開裂および阻害を示している。 例　　２ ＨＩＶ　ｇｐ　１２０コートタンパク質からの免疫原性遷移状態類似体含有ペプ チドのインビピ調表ＨＩＶ　ｇｐ　１２　ＣＪコートタンパク質からのオクタペ プチド配列−Ａｌａ　−５ｅｒ−Ｔｈｒ　−Ｔｈｒ　−Ｔｈｒ　−Ａｓｎ　−Ｔ ｙｒ　−Ｔｙｒ−は、Ｔ４ヘルパー／インデューサー細胞のＯＫＴ’　４　Ｋ原 とのウィルス相互反応に関して重要である。このオクタペプチドと、配列上で同 一であるか、または非常に類憶している合成ペプチドは、Ｈｌ−、’の抗原レセ プターに対する付着を強力に阻害する（１８）。コンピューター推定調査によっ て、Ｅｐｓ　ｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルスのエンベロープ領域に見い出されるペ プチドと相同であることが証明された。さらに、強力な相■関係が、ＨＩＶオク タペプチドとヒトリンホアデノパンイウィルス（ＬＡＶ　）およびヒトＴ細胞白 血病ウィルス（ＨＴＬ、’、７−　ｆｆｌ　ｂ　）の単離物中に生じるペプチド との間に存在する。もう一つの相同関係か、ＨＩ−Ｖペプチドとウシ弄ぶりざヌ クレアーゼＡ　（ＲＮａｓｅ　Ａ　）の残基１９−２６よりなる配列との間に存 在する。この配列）ま、残基２０と２１および２１と２２との間のＲＮａ、ｓ　 ｅ　Ａの露出されたサブチリソン開裂部位を含有する。 本発明によるペプチドハブテンには、 ！ｉ］　　−Ａｌａ−［：５ｅｒ−Ａ−Ｔｂ、ｒ〕−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ− Ｔｙｒ−Ｃｖｓｆ２１　−Ａｌａ、−３ｅｒ−［Ｔｈｒ−Ａ−Ｔｈｒｌ−Ｔｈｒ −Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（３１−ＡＬａ−３ｅｒ−Ｔｈｒ−［Ｔ］ｘｒ−Ａ− Ｔｈｒ）−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ１４１　−Ａｌａ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ −［Ｔｈｒ−Ａ−Ａｓｎ］−Ｔｙｒ−Ｃｙｓがある。Ａが開裂させるアミド結合 の類似体である遷移状態ジペプチド　イソステア（ｌｓｏｓｔｅｒｅ　）　（カ ッコ内に示されている部分）を、例１に記載されているように、ペプチド中に組 入れる。各４プチド　ハブテンを、交さ結合剤ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ− ヒドロキシスクシンイミドＢを使用し、末端システィン残基を介して、キイホー ル　リンベット　ヘモシアニン（ＫＬＨ）キャリア　タンパク質とカップリング させＢＡＬＢ　／　Ｃマウスを、完全Ｆｒｅａｎｄアジユバ／ト中に乳化しｆｃ 　ＫＬＨ−ペプチド類似体結合物で免疫付与する。 各マウスから血液試料を採取し、遠心分離により血清を分離し、４°Ｃで保存す る。この方法で得られた血清を、標準的ＥＬ　工ＳＡ法によって、元の遷移状態 類似体免疫原に対する結合活性に関してスクリーニングする。 上記のようにして免疫付与されており、遷移状態類似体ペプチド免疫原との反応 性が検出された抗体を産生ずるマウスを犠牲にし、それらの膵臓を分離し、例１ Ｂに上記したように、ＳＰ２／′Ｏミエローマ細胞を使用し、ハイプリドーマ細 胞を調製する。 Ｃ９触媒性モノクローナル仇体璽生性のノ・イブリドーマ細胞のスクリーニング 各遷移状態類仰体含有ペプチドに対する抗体の結合に関するスクリーニングは、 基本的に、上記例１に記載のとおりに行なう。モノクローナル抗体を分泌し、陽 性の結合反応を示すハイプリドーマを、Ｂａｋｅｒ、ｂｏｎｄＡＢ　Ｘ　ＨＰＴ 、ＣによるＨＰＬＣによって、復水から精製する。 例　　３ ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩＶ　）を選択的に阻害する、ウィルス　エピト− プに対する触媒性モノクロジにプチド遷移状態同配体： （式中、人は、開裂させるアミド結合の類似体である）を、例１に記載されてい るように、ペプチド中に組入れ、ハブテン： を得る。生成する・・ブテンは、ＨＩＶ　ｇｐ　１２０コートタンパク質の一部 を擬装するようにデザインされている。この合成ペプチドを、刊行物記載（２１ ）の方法の夏法を用ハるインビトロ免疫付与方法で使用する。膵臓細胞を、５０ 係新鮮イ一グルＭＥＭお↓び２０％ウシ胎児血清、５　Ｘ　１　（Ｔ！′Ｍ　　 β−メルカブタノール、２ｍ１ｌグルタミンおよびＢＬＡＢ　／　Ｃマウス胸腺 リンパ球からの５０％条件調整培地よりなる培地中で、１０６細胞／　ｍｉで培 養すε。条件調整培地を供給するためには、胸腺り７２球を、上記と（ロ）−の Ｅａｌｅｓ　ＭＥＭ培地中で、３〜５　ｘ　１０’細細胞層ｔで培養する。４８ 〜７２時間後に、この培地を分離し、濾過により殺菌し、次いでインビトロ活性 化用に、直ち（で使用する。この膵臓細胞培養培地に、抗原ン、約１μｇペプチ ド／　ｍｌに等しい濃度で児える。膵臓細胞を、培地を変えることなく、抗、園 の存在の下に４日間培養し、次いで）・イブリッド形成させる。 ハイブリッド形成は、Ｃｅ１ｌ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　Ｃｅｎｚｅｒｏｆ 　ｔｈｅ　Ｓａ、ｌｋ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅから得られるマウス　プラズマサイ ト−？　（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｍａ　）セルライン４５６ＴＧＬ、　７　（２ ２）を用いて行なう。膵臓細胞（新しく単離したものであるか、あるいはインビ トロ活性化培地からのものかのどちらか）およびプラズマサイトーマ細胞（１、 血清を含有していないＥａｇｌｅｓ　ＭＥＭ中で２回洗浄し、次いで刊行物（４ ３）に従来開示されているように、ＰＥＧＩＤＯを用いて融合させる。ハイブリ ッドは、この培養物をＨＡＴで処理することによって選択する（４４）。このペ プチド遷移状態類似体と反応性の（二足検定によって判定する）、抗体を産生ず るハイブリッド細胞をクローン化し、次いで条件調製培地中で親のプラズマサイ トーマ細胞から制限稀釈により、再−クローン化する。 各遷移状態類似体含有ペプチドに対する結合に関する抗体のスクリーニングは、 基本的に、上記例乙に記載のとお！１ｌＶｃ行なう。陽性の結合反応を示す、モ ノクローナル抗体分泌性ハイブリドーマを後続の研究用＋Ｃ選別する。工ｇＧは 、Ｂａ、ｋｅｒｂＯｎｄ　ＡＢＸ　ＨＰＬＣにょるＨＰＬＣによって、復水から 精製する。これらの抗体を、遷移状態類似体を含有していないペプチドに対して 試験できることは、当業者の認識できることである。 基本的に刊行物（２５）の記載に従うが、培養物を２００μを含有マイクロチュ ーブ凹部で増殖させて、ウィルス複製検定を行なう。インビトロ免疫付与法から 、あるいは緩衝液だけから得られた、精製抗体、各２５μを中の勾配濃度を、２ ５　μを中ノ５０　ＴＣＩＤ　５０　ＨＴＬＶ　−１１１Ｂととも番で、５　％ 　ＣＯ２中で、３７°Ｑにおいて１時間、予備インキュベートする。予備インキ ュベーションに引続いて、これらの凹部Ｋ、Ｈ９細胞（２０％熱−不活性化した Ｆｅ２を補給されているＲＰＭ　１−０４０１５０　ｔｔｔ中の細胞１　Ｘ　１ ０５）を加え、０．１　ａ９　／　ｍｌ−１０μＱ／ｍｌの範囲の最終凹部濃度 を生成する。微量滴定板を、５壬ＣＯ２中で５７℃（（おいて１４日間インキュ ベートする。３日目、７日月および１０日日目、細胞を含有してｂない上澄液１ ［）０μｔを新しい培地と交替することによって、これらの細胞を飼育する。抗 体はこの期間中はさらに加えない。細胞を含有していない上澄液（１００μｔ） を、ｐ、ＺＡ　ＣＤｕｐｏｎｔ　％ＮＥＫ　−ＯＡ　Ｏ）によりｐ２４抗原に関 して分析する。 Ｃ８１６６融合検定法は、刊行物（４６）に記載されている。６種のモノクロー ナル抗体（クローンＡＨ工Ｖ１．６　；　ＡＨＩＶ　１．３および届ＩＶ　２． ０　）を２時間検定で試験する。ＨＴＬＶ　−［１１Ｂでクローン形成感染させ たＨ９ｉｉＢａｌ（ＩＸＩＤ４）ｔ、９６個の凹−ｉを有ｆる板において、１５ ０Ａｔ培地中の種々の濃度の抗体とともに予備インキュベートする。抗体の最終 凹部濃度は、４１μ（ｊ　／　ｒｕｌおよび５μ９　／　ｍである。対照として は、０ＫＴ４　Ａ、　（○ｒｔｈｑ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　）を２５μｇ／ ｍｌで用いる予備インキュベーションを使用する。この板を、５％ＣＯ２中で、 ３７℃において２時間インキュベートした後に、融合細胞（細胞質ｉｄ、３個の リンパ細胞の径よりも大きく＃張する）の数を測定する。計数期間中の偏りを防 ぐため（（、試料には、コード番号を付ける。 りｏ　−ンＡＪ（ＩＶ　１−３、ＡＨＩＶ１．６およびＡＥ：Ｖ　２．Ｑの抗ウ ィルス活性をｈＸＶ−■複製および細胞融合検定によって評価する。第１図は、 感染Ｈ９細胞におけるＨＩＶ　−１ｐ、　２４　ｇａｇ産生のクローンＡＨ工Ｖ ｉ、３による、投与量依存性阻害を示すものである。第２図には、ＨＸＶ−誘発 細胞融合ノクｏ　−ンＡＨＩＶ　１．３、Ａ）ＥＩＶｌ、６およびＡＨＩＶ　２ ．ＯＫよる投与量依存性阻害が示されている。 ＨＩＶ　ｇｐ　１２０の露出ペプチド配列中に組込−Ｅｆｌでいる、インビトロ 免疫付与により誘発された触媒性モノクローナル抗体は、リンパ球のＣＤ４レセ プターへの結合を含む、ウィルス　コブロチインの重要な領域を汲裂させること によって、ＨＩＶウィルスによる感染を防止することができる。この触媒性モノ クローナル抗体ｉｄ　％　タンパク質分解酵素の作用と類似の様相で、選ばれｔ 配列（すなわち、例２に示されているオクタペプチドの左側から、初めの２個の スレオニン残基の間）のへブチド結合を切断する。このオクタペプチドの抗体触 媒加水分解のメカニズムは、金属イオンを含むものではなく、抗体の活性部位に おける求核性あるいは抗体結合部位のアミノ酸残基により活性化され元本の求核 的付加のどちらかも含むものと見做れる。 例　　４ １瘍壊死因子を橡的とするアブデイムプロテアーゼ陣瘍壊死因子（ＴＮＦ　）　 ｌ−’！活性化さね、たマクロファージにより分泌されるサイト力インである。 ＴＩＪＦは、エントドキノン−誘発発作、プレアジボサイ）（ｐｒｅａ−ｄｉｐ ｏｃｙｚｅ　）におけるリポタンバフ質すノぐ−ゼ（ＬＰＬ）活性の抑圧、滑液 細胞；でよるプロメタプランシフ５２厘生およびコラゲ８ナーゼ活性の刺激、イ ンターロイキン１産生の刺激およびヌードマウスにおけるカヘキシーの誘発を包 含する、種々の生物学的作用を媒介するものであることが証明されている。ＴＮ Ｆ特異性の細胞表面レセプターは、数種のタイプの細胞に存在する。 これらのレセプターに対するＴＮＦの結合が、ＴＮＦの生物学的作用の誘発↓、 で必要であると考えられている。 ｈＴＮＦのアミノ酸１−１５に対する抗体が細胞表面レセプターに対するその結 合を防止することは証明されている（　５ｏｃｈｅｒ等（でよるＰｒｏｃ、　Ｎ ａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、米国、１９８７年、８４．８Ｂ２９〜８Ｂ３３ 頁）。 ｈＴＮＦのＮ−末端の８個のアミノ酸が、レセプター堅識に対して必要ないこと も知られている。従って、レセプター結合のための必須の領域は残基９−１５を 包含することができる。下記の式は、ＴＮＦのＮ末端の２５個のアミノ酸、必須 残基９−１５　（”）および準安定部位ＮＰ　、　ＡＳＩＩ］　−Ｐｒｏを示す ものである：Ｖ　ＲＳ　Ｓ　Ｓ　’ＲＴ　Ｐ　Ｓ　Ｄ　Ｋ　Ｐ　Ｖ　Ａ　ＨＶ　 Ｖ　Ａ　Ｎ　Ｐ　Ｑ　Ａ　Ｅ　ＧＱこの！！ｉ移状態ジペプチド　インステアを 含有するべプチド類似体の合成を、基本的に、例１にすでに記載されている方法 に従って行なう。免疫原調製、免疫付与および触媒性抗体のスクリーニングは基 本的に、前記されている通ジに行なうが、バイオアッセイを使用し、ＴＩＶＦア プディムタンパク質分解および不活性化を計画する。 １瘍壊死因子細胞溶解試験 ネズミＬ−９２９繊維芽細胞（り０，０００／凹部）を、９６個の凹部を有する 組織培養板で、１μ９７　ｍｌアクチノマイシンＤの存在の下に、培養する。触 媒性抗体で処理する前と処理した後とのＴＮＦの連′４８釈物を、これらの凹部 に加え、１８時間インキュベートする。培養培地を次いで取り除き、細胞を２５ 壬メタノール中の０．５４クリスタル　バイオレット溶液で染色する。５４０ｎ ｍにおける吸光値を、Ｂｉｏｔｅｋ　ＥＬＩＳＡミクロプレート　リーダーで測 定する。培地だけの場合の細胞ば０％溶解と考え、３Ｍグアニシン−ＨＣｔで処 理した細胞は完全溶解であると見做した。ＴＮＦ　１単位は５０％の細胞溶解を 得るのに必要な量であると定義ＨＩＶポリペプチドを標的とするアデザイム　プ ロセスの調製 細胞のＨ工Ｖによる感染における最初の出来事（ハ、ウィルス　二ノペローブ　 グリコタンパクｉ、ｇｐ１２０とその細胞レセプター、ＣＤ４との間の相互反応 である。このｇｐ１２０とＣＤ４との闇の相互反応を阻止するモノクローナル抗 体が生成されている。このｇｐ１２０エピトープは、アミノ酸３９７〜４３９内 （（含１れていることが示されている。この領域から１２個のアミノ酸を、イン ビトロ突然変異（でより削除すると、結合は完全な消失され、この領域の１個の アミノ酸の置換は結合の有意の減少をもたらす。このエピトープロ３９７−４３ ９は、次の配列を有する：この配列はまた、Ｍａｂ−結合性エピトープの輪郭を また示している残基４０６−１１４の典型的ペプチド（チ）を示している。４１ ０−４２１削除突然変異部分はま之、（ｌｒ−＠）で、ジスルフィド結合を形成 するものと考えられている削除領域（Ｃ）を吊り下げている２個のシスティン残 基および点変異によってアスパライン酸に変えられると、ＣＤ　４結合能力が減 じられるア二りン４１７とともに示されている。’Ｌａ５ｋ等により提示され九 このデータは（Ｃｅ１ｌ、１９８７年、５０．９７５〜９８５頁）、このポリペ プチド領域がレセプター結合に関して必須の部位であることを含んでおり、従っ て、これを完全ＨＩＶ　ｇｐｌ　２０エンベロープ中のこの領域のタンパク質分 解を誘発する触媒性抗体を誘発させる免疫原の調製、ｃＸ　強力な候補ペプチド として選択する。 このジペブチドロ兄体の選択さｆ′した配列への組込み、キャリア　タンパク質 −＼の結合、免疫付与、および触媒性抗体のスクリーニングは、基本的１・で、 上記の例１〜乙に記載の通りに行なう。触媒性抗体プロテアーゼの、標的細胞の インビトロ感染を干渉する能力（Ｃ係る検定は、例３に記載の方法（でより行な う。 例　　６ エンドトキシン発作グラＬ陰性細菌感染期間中にお侃生力質の出現（てもかかわ らず、約２００．ＯＤ　０人の患者に、約８０，０００人の死亡をもたらす院内 菌血症が発１している（　Ｍ、ａｋｉ、　　１９８１足）。ダラム陰性菌敗血症 は３０％の死亡憲を有し、発作を含めると、７０壬になる（　Ｋｒｅｇｅｒ等、 １９８０４）。多くの症状および効果、ならびに抗生物ｉ治療に対する耐性は、 エンドトキシン′！念はリボ多糖（ＬＰＳ　）のいくつかが、細菌誘発性発作の 病固体であるという前提と一致している。ＬＰＧの生物クダ的作用のうちのｂ〈 つ妙畳では、血圧上昇、発熱、血管内凝血および死が含まれる。ＬＰＳは種々の タイプの細胞を刺激し、メディエータ−、ホルモンまたにその他の因子（特シて １瘍壊死因子）を放出し、放出されたこれらは、次いで他の臓器または標的全刺 激し、作用企及ぼす。治療）では、通常、抗生物質の使用が含１れるが、これら の処置は、ＬＰＳの病因的作用を止めるためには多ぐの場合に成功をもならさな い。細菌およびＬＰＳが池の臓器（で作用を及ぼす前に、これらを中和する、新 しい治療法が開発されつつある。 細菌生成物 ダラム陰性細菌に、リポタンパク質、リボ多糖、ムコ複合体および細胞質頂層よ りなる特徴的摸を有する。 若干の外側表面構造およびタンパク質は、この有機体を血清群もしくは血清型（ で分類するｔめの手段である。 たとえば、莢＠ｄメニンゴコツン（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉ　）をグループＡ 　、　Ｂ　、　Ｃ々どの血清群ｔで分けるｔめに用すられる。抗原性であり、血 清型分類（〇−抗原）に使用される、もう一つの構造要素はＬＰＳである。多糖 分子は外側コアを構１吸しており、見い出される抗原変異に応答することができ る。ＬＰＳｉ甘た、１−グリセロ−Ｄ−マンノヘプトースおよびに、ＤＯ（２− ケｌ−−３−デオキシマンノーオクツロノン酸）単位の内側コアを有し、これら の単位はダラム陰性細菌に共通している（数種の突然変異種を除く）。細菌喚内 で、このリビドＡコア（１）は、保護されており、そしてグルコサミンニ塘類、 脂肪酸鎖およびホスフェート単位よりなる。 このリピドＡコアは、前記の判定症状の発現において、筐た構造上で重要である 。 リピドノー（Ｉｌ）に対する単糖プリカーサ−であるリビドＸば、マウスにおい て３〜９より多い投与量で、また羊において１■／　ｋｇの投与量で毒性ではな く、致死量のエンドトキ／ンからマウスを防護する（　Ｍｕｎｆｆｏｒｄおよび Ｈａｌ、１９８６年）。この例は、このアシルオキシア／ル加水分解が触媒性抗 体によって触媒される方法を低連するものである。 抗原の合成 図式１は、抗原（Ｉ［ｌ）の合成に必要な、可能な合成反応の概略を示すもので あり、この方法は部分的に、Ｋｕｓｕｒｒ、ａ−、ｏ等（４−より使用された方 法（１９８１ｆ：）Ｋ従う方法である。 ハイプリドーマ調製およびスクリーニングリぎドＸ類似体（ＩＩＩ）を異なるサ イズおよびリピド組成のりボゾーム中に組入れるか、あるいはＢｒａｄｅ等（で よジ記載された方法（１９８７苑）に従い、ＢＡＬＢ　／Ｃマウス中への注入以 前に量適抗原が提供されるようにするために、羊赤血球上に付着させる。 アシルオキンアンル　ヒドロラーゼ遷移状態類似体Ｃｍ）　Ｋ対する抗体を産生 ずるハイプリドーマは標準的方法によって調製する。このハイプリドーマ上澄液 を、ＥＬＩＳＡおよび（筐たけ）受身溶血阻止によって、リビドＸ類似体に結合 する抗体に関して試験する。その触媒活性は、後記する方法により評価する。 エステラーゼ活性の評価 生合成的（（ラベルされたＬＰＳは、Ｓ、　ｔｙｐｈｌｍｕｒｉｕｍＰ　Ｒ１２ ２（ｇａｌ　Ｅｍ　ｎａｇ−）を［３Ｈ〕−ｙセ−ｙ−−）　オよびＮ−アセチ ル−１−［１４Ｃ）−グルコサミン（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　 Ｃｏｒｐ、、　Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍ、ａｓｓ、　）とともに培養することによっ て調製する。低分子量ＬＰＳ　（粗いＬＰＳ　Ｉ：Ｒ−ＬＰＳ］　）を生成させ るため１ｃｌｄ、Ｓ、　ｔｙｐｈｉｍｕ−ｒｉｎｉＤ−がラクトースの不存在の 下で培養する。これらの細胞を一定量づつ分け、そのうちの一つは、５０％グリ セロール中の！濁液として、−７０℃で保存シ、フェノール／クロロホルム／石 油エーテル２：５二８（容積／容積）を用いて抽出する。高分子量ＬＰＳ　（な めらかなＬＰＳ　［３−ＬＰＳ：ｌ　）を生成させるためには）Ｓ−ｔｙｐｈｉ ｍｕｒｉｕｍをＤ−がラクトースの添加の下に、上記の通りに培養する。これら の細胞は２等分する。このうちの一つは５０壬グリセロール中で完全細胞として 一７０℃で保存する。もう一つの方から、４５壬（重量／容積）フェノールを用 いて、５−ＬＰＳを抽出し、次いで水に対して透析する。これら２種のＬＰＳ　 ％製物ヲ、ジエチルエーテルによる抽出によって、さらにｗＩ製し、次いで水お よびトリエチルアミン中に懸濁しくＩμ！／ｍｌ）、一定量毎に分け、次いで一 ７０℃で保存する。 インビボ試＠：発熱物質の試験 処理されたＬＰＳおよび対照ＬＰＳを、ウサイにおいて、その発熱性に関して試 験する。少なくとも３匹のウサｅ＜　１．７〜２．３ｋｇ）に、ＬＰＳｐＨＱ物 を注射し、それらの体温の変化を記碌する。最初に、対照ＬＰ３５μＳを試験し ６７次いで処理ＬＰＳ　５　Ｑμｇ、１００μ９および２００μ、ｑを試験する 。 致死率の１ｉｌｌ定 Ｃ５７Ｂ　Ｌ　、、、／　６マウスに、Ｄ−がラクト−スアミン１６ｍ９を庄射 しく工、Ｐ、）、ＬＰＳ　Ｋ　対ｆ　ルｉ’Ｅ　受性ヲ生じさせる。処理された ＬＰＳおよび未処理ＬＰＳを注射しＣ１，Ｖ、）、ＬＤ５ｏをｔｉ’ｉ定する。 ２　ｎ、９〜２０　！４の濃度を試験する。 インビトロ評価：マクロファージ拡散 マクロファージを、処理されたＬＰＳおよび対照ＬＰＳの存在下、および不存在 下に、培養する。マクロファージ拡散率〔これは、拡散数／総付着細胞の数）× １００に等しい〕を計算する。それらの膜エプロンが、非拡散細胞の嗅エプロン の二倍の！積をおおっている場合に、そのマクロファージは拡散したものと定義 さマウス牌細胞の刺激を、チミジン吸収によって追跡する。ＢＡＬＢ　／　Ｃｎ ｕ　／　ｎｕ、　Ｃ５Ｈ／　ＨｅＮおよびＣ３Ｈ／　ＨａＪのマウスの牌細胞を 〔３Ｈ〕−チミジンと処理されたＬＰＳおよび対ｑ　ＬＰＳとともに、数種の濃 度でインキュベートする。ＬＰＳを含有していない対照培養物を筐た、調製する 。この刺激作用は、・対照培養物に対する試験培養物ｃｐｍＯ比として表わされ る。 ■（リピドＸ）　　　　　　　　　　　ＩＩＩ図式１ ズ式１（つづき） 化合物Ａ 試薬： ｆａｔベンジル　クロコホーメート／　ＮａＯＨ：　（ｂｌアリル　アルコール ／　ＨＣｌ　：　（ｃｌアセトン／　ＴａＯＨ／　ＣａＳＯ４；　（ａｌ　Ｎａ Ｈ／　５ｎＢｒ　：　（ｅｌ　［１−（ＣＯＤ）（ＰＭａＰｈ２）２］ＰＦＢ　 ；　（ｆｌ　Ｉ２　／　Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ　；　ｆｇ）　ｎＢｕＬｉ　、　−７０ °；　（ｈ）　（Ｐｈｉ）　２Ｐ　（ｈｌ　（Ｐｈｉ）　２Ｐ（０）Ｃ１；　（ ｉｌ　Ｈ２ｙ’　Ｐｄ　／　Ｃ；　（ｊ）　ＤＣＣＩ　／　ＤＭＡＰ　／化合物 Ａ；（ｋ）　Ｐｈ５Ｈ／　Ｅｔ３Ｎ　；　（１１Ｈ２／　Ｐｄ　／　Ｃ／　Ｐｔ Ｏ２／　ＡｃＯＨ；　ｆｍｌＨＣｌ　／　ＴＨＦ　；　ｆｎｌ　Ｐ（ＯＭｅ）３ 　；　（ｏｌ　ＮａＯＨ；　（ｐｌ　５ＯＣ１２；　ｊｑｌ　（Ｐ、）−３−ヒ ドロキシテトラデカン酸：　（ｒｌ　Ｈ２，／　ｐａ　／　ｃ　。 ヒ）　ＩｇＥを開裂させるモノクローナル抗体の１１スクリーニングおよび単離 の方法およびアレルｆ　−反応の防止 背景 ６０主以上ｔτわ几る広大な研究の主題である。これらの研究は、アレルイー反 応に関する経路の詳細な理解を導い友。アレルプー反応の抑制において畢初に生 じる出来事は、アレルデン（抗原）の工ｇＥへの結合である。これによって、肥 Ｉｔｌ細胞および好塩基性細胞の表ｆ上のＩｇＥの交さ結合が生じ、この場合ｔ で、ＩｇＥはそのＦｃ領砿を介して、標的細胞上に存在するＦｃ　ｌ／セプター に結合する。この交さ結合の結果として、ヒスタミン、５Ｒ３−Ａおよびそ○他 のバソアクティブ　アミン類の放出が誘発され、これらの放出物質は最終的に、 身体内の別の組織に対するそれらの作用を介して、臀害なアレルイー反応の作用 を導く。 ＩｇＥ分子は、機能的に、それらの結合活性により定められる、２つの部分に分 けられＳｏこれは、この分子をパノぐイン　タンパク質分解させると、２つの断 片が生じることによって証明される。このタンパク質分解の結果として、ＩｇＥ は、アレＡ−イー反応を誘発させるその能力に？ｊＡｔ、、て、不活性化される 。事実として、ＩｇＥばＦ’ｃ断片によるＦｃレセプターの遮断による阻害剤に なる。 抗アレルギー性モノクローナル汎体を生じさせるために、その他の有害な作用を 伴なうことなく、工ｇＥを特異的に開裂させ、ＩｇＥを不活性にすることができ る触媒性抗体を調製した。この目的を達成するために、対象の配列の中に含まれ ている環状ジペプチド類似体（第１図）により、モノクローナル抗体を誘発させ る。 このようにして誘発された触媒性モノクローナル抗体：ハ、天然ＩｇＥペプチド 配列を下記に示されている位置で開裂させる： この配列は、工ｇＥのＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの間に位置しており、 その開裂はＩｇＥ分子の活性を破壊し、１そしてアｌ／ルイ一応答の発現を抑止 する。 この領域に対する触媒性抗体を生じさせる念めに、ペプチド　ハプテンＡＤＳ　 （Ｘ）　ＲＧＶ　Ｃ（Ｘ）は下記で示す環状ジー？ブチド類似体を表わす〕を、 標準的固体相または溶液相法によって合成する。完成されるペプチドは、充分に 脱保護化し、次いで固体相が便用された場合には、三フッ化酢酸を使用して、固 体支持体から分離する。このペプチドのＮ−末端アミノ基は、マウスの免疫付与 用のキャリア　タンパク質に付着することペプチド　ハプテンを、ポリアミドー キーゼルが−複合樹脂を使用する固体相技術によって合成する。その側鎖保饅基 は次のとおりである：　Ｏ−ｔａｒｔ−ブチル（チロシン、アスパライン酸、グ ルタミン酸、セリン、スレオニン）；Ｎ−４−メトキシ−２，３，６−）　ＩＪ 　メｆルベンゼンスルホニル（アルギニノ）。Ｎ−官能性基の一時的保護は、フ ルオレニルメトキンカルボニルによって行ない、この保護基は、ピペリジン／ｐ ）ａＦ：２０／８０によって、１０分内に取り除かれる。 このカップリング反応は、ＦＭＯＣ−ＩＥ水アミノ酸を使用して行なう。保護さ れているペプチジル−樹脂は、三フッ化酢酸／チオアニソール／ｍ−クレゾール ／チオフェノール／エタンジチオール溶液：　９０／２／２／２／４で、３時間 処理することによって、充分に脱保護化させる。濾過後に、濾液を、小容積にま で、減圧で濃縮する。エーテルを加え、ペプチドの沈殿を得る。エーテル性上澄 液を分離し、ペプチド沈殿をエーテルで２回洗浄し、ペプチド　ノ・ブテンを得 る。 Ａｌａ−Ａｓｐ−８ｅｒ−（Ｘ）−Ａｒｇ−Ｃ１ｙ−Ｖａｌ（式中、カッコ内の 部分は、下記で示す環状ジペプチド類似体である）。 ２、　キャリア分子へのノ・ブテンの結合上記のペプチド　ハプテンを、グルタ ルアルデヒドを使用し、キイホール　リンペット　ヘモシアニン（ＫＴ、Ｈ）に 結合させる。反応混合物に添加された、痕跡量のヨー素−１２５ラベル付きペプ チドの結合により推定して、この結合効率は５０〜８０％である。 完全Ｆｒａｕｎｄアジュバント中のＫＬＨ結合ペプチド（５０μ９）を、ＢＡＬ Ｂ　／　ｃマウスに注射する。・・イブリドーマ融合は、融合相手としてｓｐ２ ／’ｏミエローマを使用し、標準的方法により行なう。この融合から生成する、 ポリクローナル抗血清応答およびハイプリドーマスクリーニング細胞ｉ　、ＥＬ ＩＳＡによって、結合活性に関してスクリーニングする。 プラスティック微量滴定板（Ｆａｌｃｏｎ　３９１５　Ｐｒｏ−ｋ）ｌｎｄ、Ｂ ｅＣｔＯｎ　ＤＩＣｋｌｎＳＯｎ　Ｌａｂ＋ｗａｒｅ　ＣＡＳ　ｓ米国）の凹部 に、Ｔｒｉｓ　−ＨＣＬ緩衝液（０，１Ｍ、　ＰＨ９，６）中のペプチド（５μ Ｆｉ／ｒｎｔ）５０μｔを付着させる。 この板を、先ず３７℃で３０分間、次いで室温で一夜にわたりインキュベートす る。丁’ｗｅｅｎ含有リン酸塩緩衝塩類溶液（ＰＢＳ　−Ｔｗｅｅｎ　０．１％ 、ｐＨ７，４）で３回洗浄した後に、ＰＢＡ　−ＢＳＡ　ｉ％ＰＨ７，４中の抗 血清の連続稀釈物５０μｔを、このペプチド付着している１対の凹部に加え、次 いで６７℃で２時間インキュベートする。この板を再び、ＰＢＳ　−Ｔｗｅｅｎ 　Ｏ，１係で３回洗浄し、次いでこれらの凹部を１：５００に稀釈された、アル カリ性ホスファターぞ−ラベル付きヤザ抗マウスＩｇＧ　５０　ＡＬＬ　（Ｓｉ ｇｍａ、　ＭＯ１米国）で処理する。インキュベーションは、３７℃で１時間行 なう。 ＰＢＳ　−Ｔｗｅｅｎ　Ｏ，１４でさらに長く洗浄した後に、０．１Ｍグリシン −ＮａＯＨ緩衝液（Ｊｌｏ、４）中に溶解した、ＭｇＣ６２およびＺｎＣ／＝２ 、ｉｍＭを含有するアルカリ性ホスファターゼ基質（Ｓｉｇｍａ　Ｉ　Ｄ　４− １０５の２錠／ｍ１）１５Ｄ！ｉｔとともにインキュベートする。この酵素反応 は、３７℃で２時間進行させ、次いでＮａ２ＣＯ３（１，５１ｖｉ　）　５０　 μｌの添加ＩＣより止める。 Ｔｉｔｅｒｔｅｃｈ　　Ｍｕｌｔｉｓｋ、ａｎ　　ＥＬＩＳＡ　　Ｒｅａｄｅｒ 　　（Ｆｌｏｖ　　Ｌａｂｏ−ｒａｔｏ、ｒｊ、ｅｓ　）で、４０５ｎｍｌＣお ける吸光値を読み取る。 力価（１、その光学濃度を、陰性対照（１：１０口で稀釈され念、採集正常マウ ス血清よりなる）の３倍の高さの吸光値を与える最高稀釈度と掛は算することに よって決定して表わす。 このスクリーニング分析で陽性反応を示す／・イブリドーマを、後続の研究用に 選択する。ＩｇＧは社ｅｒ’ＬｃｔｎｄＡＢｘＨＰＬＣカラムを用いるＨＰＬＣ によって、腹水から精製する。 Ｃ，ヒ）　ＩｇＥのＣＨ２ＣＨ３領域に対して特異性の触媒性々プｆド基質ＡＤ ｓＮｐＲｃｖ　（２，７ｔｔＭ　）を、前記で低連し之方法によって生成され之 触媒性抗体とともにインキュベートし、この反応を、混合物の逆相ＨＰＬＣ分析 によって追跡する。このペプチド基質に対して触媒的にブチダーゼ活性を示す抗 体を、ＩｇＥ開裂に係るそれらの能力に関して処理する。 ＩｇＥ不活性化の評個 精製ＩｇＥ抗−ＮＰを、ＩｇＥ１μｓと触媒性抗体１μｇとを使用し、精製触媒 性抗体により消化させる。インキュベーションは、ＰＢＳ　（ｐ）（８，５）中 で、３７℃において、期間を変えて（数時間〜数日）行なう。この反応における 非特異性対照として、非触媒性モノクローナル抗体を平行反応で包含させる。 開裂を評面するためには、好塩基性結合の喪失を試験する。上記消化からのＩｇ Ｅ抗−ＮＰの試料（１〜５ｎ、！ｉ’　）　ｔ、ＲＰＭＩ　２　Ｄ　Ｄμｔ１　 ウシ胎児血清１０係およびＥＤＴＡ　１０　ｍＭ中で成る師団（６Ｘ　１０５− １　［］７細胞／　ｍｌ　）の好塩基性細胞とともに３７′”Ｃで１５の間イン キュベートする。これらの細胞を次いで、同一緩衝液で３回洗浄し、次いで３５ ８−　ＢＳＡ　−ＮＩＰ　（０，ｉμＣｉ　）を添加し、３７℃で１５′間、さ らにインキュベートする。これらの細胞を洗浄し、次いで放射能を測定する。 ＩｇＥ対照インキュベーションに対する、これらの細胞の３５Ｓ−結合の減少も しくは喪失は、工ｇＥの開裂が生じたことを表わす。 環状ペプチド類似体 ＣＨ２Ａ　　　　　Ｃ０２Ｈ ＮＨ２−Ｔ　−Ｚ　− Ａ　＝　ＣＨ２またはＳ Ｔ　＝　ＩＪ　’！たは１１ 例　　８ ｆ　ＩＪクコシーゼとして触媒性携体全使用するプロドラッグの活性化 背景 ｒ′ｌｌ：ｆＢ拮挑物質は、生合成、利用または正常細Ｆ１代中物つ代謝機能の いずｈかを干渉する化合物である。喋瘍の化学速決における選択を成功する几め Ｋは、代謝情抗物買が、正常な組織を重大な危険にさらすことなく、１瘍におい て、１種または２種以上の生体代謝反応に対して有害に作用しなければならない 。 大部分の成功してｂる抗癌医薬のうちのいくつかは、プリン′！念はピリミジン 同族体に由来するものであり、その活性はＤＮＡ　’またはＰ、ＮＡ合成を阻害 するそれらの能力に依存して込る。このような医薬の一つに、アラビノシル　７ トシン（Ｉ）〔サイクリビン（ｃｙｔａｒｉｂｉｎｅ）、Ａｒａ　Ｃ−またはＣ Ａ　］があり１．そのＤＮＡ合成阻害剤としての活性は、りざビスの代りにアラ ビノースか存在していることから誘導される。この差違は、２′ヒドロキシ基の 立体化学にある。Ａｒａ　Ｃは遊離の５′−ヒドロキシル形態で投与され、細胞 中に入った後に、５’−トリホス２エート形態にホスホリル化されることによっ て、活性になるだけである。従って、この医薬はすでに、プロドラッグであるが 、全身的に投与されると、その活性化は、この医薬が入つ九細胞の全部で、すな わち哩ａａｉ胞ま九は正常細胞で生じることができる。 ここに、Ａｒａ　Ｃを、自発的細胞内活性化が減じられているプロドラッグの形 態（で変えることができることが見い出された。第一に、抗喋瘍モノクローナル 抗体の１的を１瘍に定め、それに触媒性携体を担持させ、これら２つを化学的に 、またけ遺伝学的に結合させる。 第二に、プロ形態のＡｒａ　Ｃを投与し、その活性化はアブヂイム活性を有する 組織に制限する。このようにして、＠瘍組織と正常組織との、さらに好ましい識 別が得られる。ＡｒａＣは非常に短い血漿中半減期を有するので、活性化された 医薬の喋瘍部位からの拡散は、有意の全身的に有毒になる前に、迅速に不活性化 される。 ５１−がラクトシルＡｒａ　Ｃおよびその遷移状態類似体の合成 ＋□−−−−−−−吻−−−―−噛−輌−−一−１１１，，＋＋Ａｒａ　Ｃのア ミジン　がラクトシル同族体の合成（１５）は、下記の合成経路２および乙に概 述されている。合成経路１からのトリベンゾイル化誘導体（６）を、ピリジン中 のメタンスルホニル　クロライドで処理することｆ４：よって（９）に置換し、 次いでＮ　、　ＮＭ−ジメチルホルムアミド中のリチウムアジドにより、７５℃ で置換する。（９）をエタノール中で、５０ｐｓｉの水素圧において、１０’ｌ 木炭上パラジウムの存在の下に水素添加し、４′アミノ誘導体を得る。 β−がラフトノラクタム（１３）は、先ず２，３，４゜６−チトラーＤ−ベンジ ル−２−ｄ−がラクトピラノース（１１）を、ジメチル　スルホキシドおよび無 水酢酸で処理し、２，５．ｄ、６〜テトラ−０へベンジル−Ｄ−がラクトノー１ ，５−ラクトン（１２）を生成させ、この生成物を次すで、ジオキサン中で痕跡 量のＡｍｂｅｒｌｉｔｅ　１Ｒ１２０Ｈ＋の存在の下に、アンモニア水溶液（２ ５壬重ｔ／’重量）と６時間給合させ、（ｉ３）を得ることによって、製造する 。この生成物（１３）を、トリメチルオキ、ノニウＪ・　テトラフルオロバレー トで処理することによって、そのイミド　エステルに変換し、次いで５′アミジ ン導体（１０）と反応させ、充分に保護されて−るアミジン　ガラクトシ刀・同 族体（１４）を得る。１０（木炭上パラジウムの存在の下に、５０ｐｓ＝の水素 圧におりて水素添加することにより脱保護化させ、次し）で浸水性アンモニアで 処理し、（１５）を得る。 シトシンーベー・ター−１）−アラビノフラノシド（５）の５７−ベーター−〇 −がラクトース同族体の合成は、合成経路１に概述されている。 Ａ、ｒａ　Ｃ（１）　’にピリジン中でビス（ｐ−ノドキシフェニル）フェニル 　メチル　クロライドで処理シ、次いでベンゾイル　クロライドを用いてトリベ ンゾイル化し、次Ｋ　（２）をジクロロメタン中で三塩化酢酸によジ脱トリチル 化すると、部分的に保護されている誘導体（３）が得られる。ベーター−Ｄ−が ラクトース　ペンタアセテート（６）を稀水性酸で処理し、次いで水素化ナトリ ウムお工び過剰のトリク０ロアセトニトリルで処理すると、トリクロロ゛アセト イミデート（８）か得ら、ｈる。（８）と（３）とを５．ルイス酸三フッ化ホウ 素エーテレートの存在の下にジクロロメタン中でカップリングさせ、（４）′！ ！−得る。この（４）を浸水性アンモニアを用いて脱保護化させた後に、Ａｒａ Ｃの５７−　、？−ヌーー〇−がラクトース同族体（５）が得られる。 抗体の産生および遷移状態類似体に対する結合に関するスクリーニング 合成経路４における（１５）に対するモノクローナル抗体は、適当なキャリアに 結合させた後に、基本的に、例Ｉ　ＩＣ記載の通りにして調製される。抗体産生 性クローンを先ず、例１に記載の方法と同様の方法によって、Ａｒａ　Ｃ同族体 （１５）に結合するそ力、らの能力に関して、（ｉ５１１で対する結合活性を示 す抗体クローンを、ＡｒａＣ基質（５）がらのがラクトシル部分を開裂させるそ れらの能力に関してスクリーニングする。このスクリーニングは、基本的に、Ｋ ｏｅｒｎｅｒおよびＮｉｅｍａｎによって記載された方法であるが（Ｊ、　Ｃｈ ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ　Ａ　９．２１６〜２２８頁、（１９８８）、グ ルコース　オキシダーゼの代ジに、がラクトース　オキシダーゼを用いる検定法 によって行なう。この検定法の原理は、触媒性抗体によってプロドラッグｔ）ら 放出されるがラクトースを、ゴラクトース　オキシダーゼ／ルミノール化学ルミ ネセンス法を用いて検出することにある。 インビざ試験 標的細胞の存在における触媒性抗体による、がラクトシルＡｒａ　ＣからＡｒａ 　Ｃへの変換は、ＤＮＡ合成および細胞殺滅を抑止する結果をもたらす。ＤＮＡ 合成の簡単な検定は、基本的に、（）ｉｓｈ等により記載された通りに行なう（ Ｊ、　Ｍｅａ、　Ｃｈｅｍ、　１４．１１５９〜１１６２頁、１９７１年）。こ の方法においてハ、トリチル化チミジン取り込み検定法を使用し、フィトヘマグ ルチン（ＰＴ（Ａ　）刺激ヒ）　１７７２球におけるＤＮＡ合成を阻害する、Ａ ｒａＣの能力が測定される。 ＨＢｚ ＨＢｚ 参考文献 １．　　Ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ａｃｔｌｏｎ、　 Ｃｈａｐｔｅｒ　１゜Ｍ、１．　Ｐａｇｅ、　Ｅｄｉｔｏｒ　（Ｅｌｓｅｖｉｅ ｒ、　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ　１９８４）。 ２、　　Ａ＋Ｄ、　Ｎａｐｐｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　”Ａ　５ｔｅｒｅｏｓｐｅ ｃｉｆｉｃＣｙＣ１ｌＺ＆ｔｌＯｎ　Ｃａｔａｌｙｚｅａ　ｂｙ　ａｎ　ＡＪｌ ｔｉｂＯｄｙ、”５ｃｉｅｎｃｅ。 ２３７、１０４１−１０４３　（１９８７）。 ３、　　Ａ、　Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ　ａｔ　ａｌ、、　”Ｃｈｅｍｉｃａｉ　 Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙａｔ　　ａｎ　　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　　Ｂｉｎｄｊ、ｎｇ 　５ｉｔｅ　　Ｅユ１ｃｉｔｅｄ　　ＢｙＭｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ　Ｄｅｓｉｇ ｎ　ｏｆ　ａ　５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ａｎｔｉｇｅｎ。 ４、、　　Ｈ，Ｗｈｉｔｅ　ａｎ＋ｊ　Ｗ、Ｐ、　Ｊｅｎｃｋｓ、　Ｊ、　Ｂｉ ｏｌ、　Ｃｈｅｍ、。 ５、　　Ｈ＋Ｍ、　Ｇｅｙｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　ｌｚｍｕｎｏｌｏｑ ｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ。 １０２、２５９−２７Ａ　（１９８７）。 ６、　　　Ｈ，Ｍ、　　Ｇｅｙｓｅｎ　　ｅｔ　　ａｌ、、　　Ｐｒｏｃ、　　 Ｎａｔ’ｌ　　Ａｃａｄ、、　　Ｓｃｉ。 ８、　　Ｔ、Ｐ、　Ｈｏｐｐ　ａｎｄ　Ｋ、Ｒ，Ｗｏｏｄｓ、　Ｐｒｏｃ、　’ Ｎａｔ’１．　Ａｃａｄ。 Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　７８．３８２４−３８２８　（１９８１）−９、Ｊ、　Ｎ ｏｖｏｔｎｙ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ’ｌ　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ 、。 ２２６　（１９８６）。 ｉｏ、　　Ｈ，Ｍ、　Ｇｅｙｓｅｎ　ｅｔ　ａｉ、、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２３ ５＋　１１８４　（１８７８）。 １１、　　Ａ、　Ｆｅｒｓｈｔ、　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｓｔ、ｒｕｃｔｕｒｅ　ａｒ ＸｄＭｅｃｈａｎｉｓｍ。 ２ａ　ｅｄ、、　　４３３−４３６（Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｎｃａｎ　ａｎａ　Ｃｏ 、、　ＮｅｗＹｏｒｋ、１９８５）。 １２、　　Ｊ、　　Ｂｌｕｎｄｅｌｌ　ｅｔａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ、　　３０ ４＋　　２７３−２７５（１９８３）。 １３、　　Ｐ、　　Ｃｏｒｖｏｌ　ａｔ　ａｌ、、　Ｊ、　　Ｂｉｏｌ、　　Ｃ ｈｅｍ、、　　２６２（６）。 ２９１３−２９１８　　（１９８７）。 １４、　　Ｅ、　Ａ、ｔｈｅｒｔｏｎ　ａｎｄ　Ｒ，Ｊ−５ｈｅｐｐａｒａ、　 　Ｊ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ−ＣｃｒｒＩｍｕｎ、、１１５１−１１５２　 　（１９８１）。 ｉ５．　　Ｍ＋Ｗｉｌｃｈｅｋ　ａｎｄ　Ｓ、　　Ｂａｎｎｉｇｅｒ、　Ｍｅｔ ｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、。 ７０．１５１−１５９　（１９８０）−１６、ＪｌＭｅｎａｒｄ　ａｎｄ　Ｋ− Ｊ　−Ｃａｔｔ、　　ＥｎｄＯＣｒｌｎＯ１０ｇ７＊　　９ＣＬ４２２−４３０ 　　（１９７２）。 １７、　　Ｃ，Ｂ、　　Ｐａｒｔ　ａｔ　ａｌ、、　　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ’１ ．　Ａｃａｄ、　　８ｃｉ。 ＵＳＡ、８３．９２５４−９２５８　　（１９８６）。 １３、　　Ｍ、Ｒ＋　Ｐｉｎｃｔｘｓ　　ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉ ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ。 Ｃｏｓｍｕｈ、、１１３（ａ）、２４８−２５１　　（１９８７）。 ｉ９．　　Ｄ、Ｍ、Ｋａｔｚ　ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１８ ＋　　６９０−６９７（１９７９）。 ２０、　　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、ＣＲＵ、１０２７　　（１９７７ ）。 ２１、　　　Ｍ、Ｄ、　　８ｃｈａｆｆ　　ｅｔ　　ａｌ、、　　Ｃｅ１ｌ、　 　ｓ、　　４ｏｓ　　（１９７（Ｓン。 η、　　ｃ、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ　ｅｔ　ａ、ｌ＋ｙ　　Ｎａｔｕｒｅ、２６６． ５５０　（１９７７）。 ２３、　　Ｊ−、Ｗ、Ｌｉｔｔｌｅｆｉｅｌｄ、ＥＸｐｔ’１．Ｃｅ１ｌ　Ｒｅ ｓ、、　　４ｉ、１９０（１９６６）。 ２４、　　Ｄ、Ｈｏ、Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、、６’＋、２０２４　　（１９８７）。 ’：；５．　　Ｂ、Ｄ、Ｗａ、１ｋｅｒ　　ｅｔ　ａｌ、、Ｐｒｏｃ−Ｎａｔ’ ｌ　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。 ＵＳＡ−ＲＡ、　　Ｆ１１２１１　　（１９８）〕。 Ｆｉｇｕｒａ　１ Ｐ工ｇｕｒｅ２ 手続補正書（自発） 平成２年　１２月２ｇ日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ま．インビボて、生体分子内の特定のアミド結合、ペプチド結合、エステル結合 またはグリコシド結合の開裂または形成の速度を増加させる方法てあって、有効 量の速度増加性抗体を動物中に導入することよりなる方法。 ２．インビボで、生体分子内の特定のアミド結合、ペプチド結合、エステル結合 またはグリコシド結合の開裂または形成の速度を増加させる方法てあって、有効 量の速度増加性抗体を動物中に導入することよりなり、この抗体が、 （ａ）開裂または形成させる、特定のアミド結合、ペプチド結合、エステル結合 またはグリコシド結合を選択し： （ｂ）ま上記生体分子の類似体よりなり、そして開裂または形成させる上記結合 の類似体を含有する抗原を選択し； （Ｃ）この抗原に、抗体産生することがてきる細胞をさらし、これによつて、抗 体産生性細胞を生成させ；（ｄ）この抗体産生性細胞をミエローマ細胞とハイブ リッド形成させ、これによつて、それぞれがモノクローナル抗体を産生する複数 のハイプリドーマ細胞を生成させ；次いで （ｅ）これらの複数のモノクローナル抗体をスクリーニングし、上記アミド結合 、ペプチド結合、エステル結合またはグリコシド結合の開裂または形成を増加さ せるモノクローナル抗体を同定する：方法によって産生されたものである、方法 。 ３．インビボで、生体分子内の特定のアミド結合、ペプチド結合、エステル結合 またはグリコシド結合の開裂または形成の速度を増加させる方法であって、動物 内で、上記生体分子内の上記結合の開裂または形成の速度を増加させる抗体を誘 発させることができる抗原の有効量を、この動物中に導入することよりなる方法 。 ４．上記抗原が、開裂または形成させようとする上記結合の類似体を含有する、 上記生体分子の類似体よりなる、請求項３に記載の方法。 ５．インビボで、生体分子内の特定のアミド結合、ペプチド結合、エステル結合 またはグリコシド結合の開裂または形成の速度を増加させることによつて、動物 における生物学的機能を活性化または不活性化させる方法であって、動物中に有 効量の速度増加性抗体を導入することよりなり、この抗体が （ａ）その形成または開裂が所望の生物学的機能の活性化または不活性化を導く 生体分子てあって、開裂または形成を受ける結合を含有する生体分子を同定し； （ｂ）この開裂または形成させる結合の類似体を含有する、上記生体分子の類似 体を含有する抗原を選択し； （ｃ）抗体を産生することができる細胞をこの抗原にさらし、これによつて、抗 体産生性細胞を生じさせ；（ｄ）この抗体産生細胞をミエローマ細胞とハイブリ ッド形成させ、これによつて、それそれがモノクローナル抗体を産生する、被数 のハイプリドーマ細胞を生じさせ；次いで （ｅ）この複数のモノクローナル抗体をメクリーニンクし、上記アミド結合、ペ プチド結合、エステル結合またはグリコシド結合の開裂または形成を増加させる モノクローナル抗体を同定する： 方法によつて産生されるものである、方法。 ６．開裂または形成させる結合が、アクセッシプルであるか、あるいは表面に位 置しているかを、上記生体分子の５次元構造を参考にすることによつて決定する 、請求項５に記載の方法。 ７．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルてあるか、あるいは表面に位 置しているかを、コンピユーターモデリングによって、あるいは推定構造によつ て決定する、請求項５に記載の方法。 ８．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルてあるか、あるいは表面に位 置しているかを、同種化合物に対する類似性によつて決定する、請求項５に記載 の方法。 ９．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルであるか、あるいは表面に位 置しているかを、高割合の親水性または帯電アミノ酸の存在場所によつて決定す る、請求項５に記載の方法。 １０．インビボで、生体分子内の特定のアミド結合、ペプチド結合、エステル結 合またはグリコシド結合の開裂または形成の速度を増加させることによつて、動 物における生物学的機能を活性化または不活性化する方法であって、 （ａ）その形成または開裂が所望の生物学的機能の活性化または不活性化を導く 生体分子アクセツシプルであるか、または表面の位にに、開裂または形成させる 結合を有する生体分子を同定し； （ｂ）この開裂または形成させる結合の類似体を含有する、上記生体分子の類似 体よりなる抗原を選択し；次いで （ｃ）この抗原の有効量を動物中に導入し、これによつて、この動物において、 上記生体分子内の上記結合の開裂または形成の速度を増加させる抗体を誘発させ る； ことよりなる方法。 １１．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルてあるかあるいは表面に位 置しているかを、この配列の３次元構造を参考にすることによつて、決定する、 請求項１０に記載の方法。 １２．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルてあるか、あるいは表面に 位置しているかを、コンピユーターモデリングまたは推定構造によつて、決定す る、請求項１０に記載の方法。 １３．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルであるか、あるいは表面に 位置しているかを、同種タンパク質に対する類似性によつて決定する、請求項１ ０に記載の方法。 １４．開裂または形成させる結合が、アクセツシプルてあるか、あるいは表面に 位置しているかを、高割合の親水性または帯電アミノ酸の存在場所によつて決定 する、請求項１０に記載の方法。 １５．開裂または形成させるペプチドまたはタンパク質が、ＡＳＮ−ＧＬＹ、Ａ ＳＮ−ＰＲＯ、ＡＳＰ−ＧＬＹ、ＡＳＰ−ＰＲＯ、ＧＬＮ−ＸおよびＧＬＵ−Ｘ （ただし、Ｘはいずれかのアミノ酸である）よりなる群から選ばれるアミノ酸配 列を包含する、請求項１０に記載の方法。 １６．ヒトレニン中のペプチド結合の開裂速度を増加させることができる抗体の 有効量により、患者を処置することよりなる、高血圧症の処置方法。 １７．ヒトレニン中のペプチド結合の開裂速度を増加させる抗体を、患者に誘発 させることがてきる抗原の有効量により、患者を処置することよりなる、高血圧 症の処置方法。 １８．ＨＩＶｇｐ１２０コートタンパク質中のペプチド結合の開裂速度を増加さ せることができる抗体の有効量により、患者を処置することよりなる、後天性免 疫不全症候群の処置方法。 １９．ＨＩＶｇｐ１２０コートタンパク質中のペプチド結合の開裂速度を増加さ せる抗体を、患者に誘発させることがてきる抗原の有効量により、患者を処置す ることよりなる、後天性免疫不全症候群の処置方法。 ２０．開裂させるペプチドが、ＡＳＮ−ＧＬＹ、ＡＳＮ−ＰＲＯ、ＡＳＰ−ＧＬ Ｙ、ＡＳＰ−ＰＲＯ、ＧＬＮ−ＸおよびＧＬＵ−Ｘ（ただし、Ｘはいずれかのア ミノ酸である）よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含有する、請求項ま６〜 １９のいずれか一項に記載の方法。 １．腫瘍壊死因子中のペプチド結合の開裂速度を増加させることができる抗体の 有効量により患者を処置することから在る、腫瘍壊死因子の生物学的作用を減少 させる方法。 ２２．腫瘍壊死因子中のペプチド結合の開裂速度を増加させる抗体を、患者に誘 発させることができる免疫原の有効量により、患者を処置することからなる、腫 瘍壊死因子の生物学的機能を減少させる方法。 ２３．リボ多糖中の結合の開裂速度を増加させることがてきる抗体の有効量によ り、患者を処置することからなる、上記リボ多糖の毒性作用を減少させる方法。 ２４．リボ多糖中の結合の開裂速度を増加させる抗体を、患者に誘発させること ができる免疫原の有効量により、患者を処置することからなる、上記リポ多糖の 毒性作用を減少させる方法。 ２５．ＩｇＥ中のペプチド結合の開裂速度を増加させることができるモノクロー ナル抗体の有効量により、患者を処置することからなる、ＩｇＥの不活性化によ るアレルギー症状の軽減方法。 ２６．ＩｇＥ中のペプチド結合の開裂速度を増加させることがてきる抗体を誘発 させることができる免疫原の有効量により、患者を処置することからなる、Ｉｇ Ｅの不活性化によるアレルギー症状の軽減方法。 ２７．プロドラッグのインビボ活性化方法であって、（ａ）開裂させると、上記 プロドラッグが活性形態で放出される化学的結合をその中に有するプロドラッグ を患者に導入し；そして （ｂ）このプドラッグ中の上記結合を開裂さることができるモノクローナル抗体 の有効量を、この患者に導入する； ことからなる方法。 ２８．プロドラッグのインビボ活性化方法であって、（ａ）開裂させると、上記 プロドラッグが活性形態で放出される化学的結合をその中に有するプロドラッグ を患者に導入し；そして （ｂ）このプロドラッグ中の上記結合を開裂させることができる抗体を、この患 者内で誘発させることがてきる免疫原の有効量を、この患者に導入する；ことか らなる方法。