JPH0347801A

JPH0347801A - 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法

Info

Publication number: JPH0347801A
Application number: JP27704089A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Ishigami; 裕石上; Yasuo Gama; 蒲　康夫; Yoshihiro Kawaguchi; 芳広川口; Kuranari Matsukawa; 松川　倉也
Original assignee: Agency of Industrial Science and Technology; Ishihara Chemical Co Ltd
Current assignee: Ishihara Chemical Co Ltd; National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 1989-04-18
Filing date: 1989-10-26
Publication date: 1991-02-28
Anticipated expiration: 2010-06-14
Also published as: JPH0755961B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）この発明は新規な多糖誘導体及びその製造方法に関する
ものであり、更に詳細には、アシル基が導入された、Ｄ
−グルコサミンを主たる構成糖とする多糖誘導体及びそ
の製造方法に関するものである。

（従来の技術及びその問題点）薬理的又は生理体に対する各種活性物質、例えば医薬成
分や、香粧品成分を含有するリポソーム等のマイクロカ
プセルを多糖類で被覆することにより、そのカプセルに
含有された活性成分の作用を効果的に発現させると共に
、そのカプセルを安定化させる試みがなされている。

例えば、特開昭５９−２１００１３号公報には、レシチ
ンを構成成分として含むリポソームを、遊離もしくはカ
ルボキシメチル化したヒアルロン酸で被覆した例が開示
されている。しかし、このヒアルロン酸もしくはカルボ
キシメチル化ヒアルロン酸で被覆されたリポソームは、
その被覆がリポソームを構成するレシチンとの静電的な
結合によるため、周囲のｐＨや塩濃度によりヒアルロン
酸の被覆が容易に解離してしまうという問題点があり好
ましくない。

特開昭５８−４９３１１号、同５８−２０１７１１号及
び同６１−６９８０１号公報には、疎水基を導入した多
糖誘導体でリポソームを被覆する技術が開示されている
が、これらの公報で提案されている多糖誘導体は、プル
ラン、アミロース、アミロペクチン、デキストラン及び
マンナンに限られていて、ヒアルロン酸のような、Ｄ〜
グルコサミンを主たる構成糖とする多糖類は一切含まれ
ていない。その理由としては、最近までは純度の高いヒ
アルロン酸を工業的に得ることができなかった上に、ヒ
アルロン酸は水及びホルムアミド以外の溶媒には不溶で
あり、リポソーム等のマイクロカプセルの被覆に使用し
ようとしても、その疎水基導入処理が困難であること等
に起因するものと考えられる。

また特開昭６１−６９８０１号公報において提案されて
いる疎水基を導入する方法は、プルラン、アミロース、
アミロペクチン、デキストラン及びマンナンに限定され
た多糖類に、３つの反応段階を経て、アミノエチルアミ
ノカルボニルメチル−コレステリル基を調製してその疎
水基を導入するものであり、工業的には極めて不利であ
る。

（発明の課題）この発明は、リポソーム等のマイクロカプセルの被覆材
料として好適な新規な多糖誘導体及びその製造方法を提
供することをその課題とする。

（課題を解決するための手段）本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた
結果、多糖類としてＤ−グルコサミンを主たる構成糖と
する多糖類を選び、これにアシル基を導入したものは、
リポソーム等のマイクロカプセルの被覆材料として好適
なものであることを見出し、本発明を完成するに至った
。

この発明に係る新規な多糖誘導体は、次の一般式（Ｉ）〔式中、Ｒ１はアシル基を意味し、Ｒ２はヒドロキシル
基、−０Ｍ基（式中、Ｈはアルカリ金属原子を意味する
）、−Ｎｌ２基又は−ＯＲ１基（式中、Ｒ１は前記と同
じ意味を有する）を意味し、モしてｎは２以上の整数を
意味する〕で表わされるＤ−グルコサミンを主とする構成糖からな
るものである。

上記一般式（Ｉ）において、Ｍで表わされるアルカリ金
属原子としては、例えばナトリウムが好ましい。

またＲ１で表わされるアシル基の炭素原子数は、２〜３
０、好ましくは４〜２０である。このようなアシル基と
しては、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ヘ
キシロイル基等の低級アシル基の他、各種高級アシル基
が包含される。高級アシル基は、飽和又は不飽和高級脂
肪酸、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン
酸、ステアリン酸、オレイン酸、リルン酸等から誘導す
ることができる。

この発明において出発物質として使用されるＤグルコサ
ミンを主たる構成糖とする多糖類は、次の一般式（ｎ）〔式中、Ｒ３は水素原子又はアルカリ金属原子を意味じ
、そしてｎは２以上の整数を意味し、その上限は約６３
００　（分子量約２５０万）である〕で表わされる多糖
類であって、特にヒアルロン酸又はその誘導体が好まし
い。

本発明によれば、一般式（１）におけるＲ１がアシル基
で、Ｒ２がヒドロキシル基又は−０Ｍ基である多糖誘導
体、すなわち、一般式（ｒＶ）〔式中、Ｒ１はアシル基、Ｒ４は前記Ｒ３と同じ、すな
わち、水素原子又はアルカリ金属原子が、あるいはＲ１
と同じ、すなわち、アシル基を意味する。ｎは前記と同
じ意味を有する〕で表わされる多糖誘導体は、前記一般式（ＩＩ）で表わ
される多糖類に、一般式（ＩＩＩ）１−ＯＨ〔式中、Ｒ１はアシル基を示す〕で表わされる脂肪酸又はそのハライドを反応させること
によって得ることができる。

また、一般式（１）において、Ｒ２が−ＮＨ２基である
多糖誘導体は、一般式ＣＩ＞においてＲ２が一０Ｒ１基
である多糖誘導体をアンモニア水で処理することによっ
て得ることができる。さらに、一般式（Ｔ）において、
Ｒ２がヒドロキシル基である多糖誘導体は、一般式（Ｉ
）においてＲ２が−ＯＲ”基である多糖誘導体を水酸化
アルカリ水溶液で処理することによっても得ることがで
きる。

この発明による一般式（Ｉ　）　（Ｒ”＝ＯＨ１−０Ｍ
又は−０Ｒ１）で表わされる多糖誘導体を得るための方
法をより具体的に示すと、例えば、出発物質のヒアルロ
ン酸を無水ジメチルホルムアミドなどの溶液中に例えば
５０℃ないし６０℃の加温下で分散させる。

欣に無水ピリジンと無水ジメチルホルムアミドなどの溶
媒に脂肪酸ハライドをあらかじめ溶解したものを加え、
５０〜６０℃で数時間引続き室温で数時間ないし数日間
撹拌しながら反応させる。得られた反応生成物はこれを
常法により洗浄、精製することにより、一般式（Ｉ）に
おけるＲ１がアシル基である多糖誘導体及び／又はグル
クロン酸部に脂肪酸無水物（Ｒ１；アシル基、Ｒ２・−
０Ｒ１）を有する多糖誘導体が得られる。一般式（Ｉ）
において、Ｒ２が一〇Ｍ基である多糖誘導体は、一般式
（Ｉ）においてＲ２が一〇Ｈ基であるものを水酸化アル
カリと反応させることによって得ることができる。

前述した脂肪酸無水物を有する多糖誘導体（Ｒ２０Ｒ１
）は、これを加水分解処理することにより、グルクロン
酸部にエステル結合していた脂肪酸無水物が脱離して遊
離カルボン酸に変換された多糖誘導体とすることができ
る。より具体的には、かかるエステル結合による酸無水
物をクロロホルムに分散し、水酸化ナトリウムなどの水
酸化アルカリを少量加えて室温で数時間反応させること
により遊離カルボン酸の形態を有する多糖誘導体を得る
ことができる。また、この場合、水酸化アルカリに代え
てアンモニア水を用いることにより、カルボン酸アミド
の形態を有する多糖誘導体を得ることができる。このよ
うにして得られた生成物を常法によって精製することに
より所望の多糖誘導体とすることができる。

この発明による多糖誘導体は、赤外線吸収スペクトル（
ＫＢｒ法）、Ｈｌ−ＮＭＲＸベクトル（溶媒重水、内部
標準ＴＭＳＰ）によって同定され、また生成物中のアシ
ル基の含有率は反応モル比、反応温度及び反応時間、更
にアルカリ処理条件等によって調整することができる。

１１（発明の効果）本発明のヒアルロン酸誘導体は、リポソームや、マイク
ロスフェア−、アクア及びゲルカプセル等のマイクロカ
プセルの被覆材料として用いることができる。また、乳
化作用及び乳化系の安定化作用を有するので、乳化剤や
乳化安定剤として食品、医薬、化粧品等の分野において
有利に用いられる。

（実施例）この発明を実施例によって更に詳細に説明する。

実施例１５００ｍｌのナス型フラスコ中でヒアルロン酸ナトリウ
ム（平均分子量２，０００，０００）０．２ｇ（０，２
／４０１＝５．０×１０−４モル糖単位）を無水ジメチ
ルホルムアミド２００−に５０〜６０℃で加温しながら
分散した。マグネチックスターラーで撹拌しながら、無
水ピリジン１．６ｇ（２，Ｏｘ　１０−２モル）及びバ
ルミトイルクロライド４．５ｇ（２，ＯＸ　１０−２モ
ル）を無水ジメチルホルムアミドの適量に溶解したもの
を加えた。これを６０℃で３時間保ち、その後室温にて
２ケ月間放置した。

２ケ月後、反応混合物を再度６０°Ｃに３０分間加温し
、１２冷却しないうちに懸濁物を濾集した。この反応生成物を
アセトン及びクロロホルムで洗浄し、減圧下、加熱乾燥
した。

乾燥後の反応生成物のＩＲ及びＮＭＲを測定した。

この反応生成物のＩＲ分析結果においては、１７４０ａ
ｎ−”にカルボニル基の吸収が見られ、これによりエス
テル形成の確認をした。また同時に１８１０ｃｍ−”に
も吸収を認め、グルクロン酸部のカルボキシル基に酸無
水物が形成されていることも確認した。また、この反応
生成物のＮＭＲ分析結果においては、０．９ｐｐｍ及び
１　、２８ｐｐｍにバルミトイル基のプロトンのピーク
を確認した。

また、この反応生成物における脂肪酸エステルが存在す
ることを、ヒドロキサム酸鉄法によって次のようにして
確認した。まず試料として反応生成物５■を精秤し、エ
タノール０．６ｍＱに懸濁した。

この懸濁液に、別に調製したアルカル性ヒドロキシルア
ミン液１．２５ｍＱを添加し、６５℃で２分間加熱した
。

なお、アルカリ性ヒドロキシルアミン液は次のようにし
て調製した。塩酸ヒドロキシルアミン２ｇを精製水２，
５ｄに溶解し、無水エタノールで５０ｍＱとしたものを
Ａ液とし、水酸化ナトリウム４ｇを精製水２．５−に溶
解し、無水エタノール５０ｍＱとしたものをＢ液とした
。使用直前にＡ液とＢ液とを等量混合し、生ずる塩化ナ
トリウムを遠心除去して使用液とした。

次に、前記６５℃で加熱した反応液を室温で５分間冷却
した後、その反応液に過塩素酸鉄溶液（過塩素酸第二鉄
六水塩５ｇを７０〃過塩素酸１０威と精製水１０−に溶
解し、冷エタノールで１００ｍ１ｌｌとしたものを冷所
保存液とし、この保存液４成と７０％過塩素酸３ｍＱを
取り、冷エタノニルで１００−としたもの）３．１５ｍ
Ｑを更に添加して、よく撹拌して３０分後に、５３０ｎ
ｍにおける発色吸光度を測定した。比較のための試料を
含まないブランクの吸光度が０．０７２であるにのに対
し、試料５ｍｇを含有するものの吸光度は１．７９であ
ることが測定され、脂肪酸エステルの存在が確認された
。

この反応生成物であるバルミトイル基導入ヒアルロン酸
誘導体（１）は次のような化合構造を有することが確認
された。またこのものは水不溶性のものであった。

（式中、Ｒはバルミトイル基を意味し、ｎは５０００で
ある）実施例２バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（１）１００■
を５０威容ナス型フラスコに取り、クロロホルム３０−
に分散した。マグネチックスターラーで撹拌しながら、
２規定水酸化ナトリウム液をパスツールピペットにて３
滴加えた。室温にて撹拌を続け、１２時間後、ロータリ
ーエバポレーターで蒸発乾固物を得た。この乾固物に精
製水３０−を加え、マグネチックスターラーで撹拌しな
がら、１規定塩酸にてｐＨを７．０調整した。その後、
６０℃で加温溶解した。水不溶性物は濾過により除去し
た。濾液を１５加熱乾燥し、バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（
２）を得た。

この生成物のＩＲ測測定行った結果、１８１０■−１の
吸収の消失と１６１０ａｎ−’の吸収の再出現により、
酸無水物の分解とカルボン酸ナトリウムの再生を確認し
た。また、１７４５ａｎ−”の吸収の減少から、酸無水
物の消失とともにエステルの部分的な分解を確認した。

さらに、この生成物のヒドロキサム酸鉄法による発色吸
光度は、試料量５ｍｇで０．３１５とバルミトイル基導
入ヒアルロン酸誘導体（１）のおよそ６分の１とエステ
ルの導入比率は小さくなったことを確認した。

前記バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（２）は次
のような化学構造を有することが確認した。

また、このものは水に対して良好な水溶性を示した。

１６− （式中、Ｒはバルミトイル基を意味し、ｎは５０００で
ある）。

実施例３バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（１）１００■
に実施例２と同様のアルカリ処理をするが、処理時間を
５時間とした。この生成物をバルミトイル基導入ヒアル
ロン酸誘導体（３）とした。

この生成物のＩＲ測測定行った結果、実施例２と同様に
酸無水物は消失したことを感銘したが、エステルの残存
率は、１７４５■−１の吸収の減少の程度が実施例２よ
り少ないことから高くなっていた。

さらにこの生成物のヒドロキサム酸鉄法による発色吸光
度は、試料量５■で０．８５５とバルミトイル基導入ヒ
アルロン酸誘導体（１）のおよそ２分の１のエステル導
入率を示した。また、このものはＪ（−ＮＭＲによるバ
ルミトイル基／Ｎ−アセチル基の比率は１／３４であっ
た。

このヒアルロン酸誘導体（３）も、バルミトイル基導入
ヒアルロン酸誘導体（２）と同じ化学構造を有すること
が確認された。また、このものは水に対して良好な水溶
性を示した。

実施例４５００ｍＧのナス型フラスコ中でヒアルロン酸ナトリウ
ム（平均分子量２，０００，０００）０．５ｇ（０，５
／４０１＝１．２５Ｘ］、Ｏ−３モル糖単位）を無水ジ
メチルホルムアミド２００畝に５０〜６０℃で加温しな
がら分散した。マグネチックスターラーで撹拌しながら
、無水ピリジン１１．３ｇ（５ｘ　１０−２モル）及び
バルミトイルクロライド３．９ｇ（５Ｘ　１０””モル
）を無水ジメチルホルムアミドの適量に溶解したものを
加えた。これを６０℃で３時間保ち、その後室温にて４
日間放置した。４日後、反応混合物を再度６０℃に３０
分間加温し、冷却しないうちに懸濁物を濾集した。この
反応生成物をアセトン及びクロロホルムで洗浄し、減圧
下、加熱乾燥した。

この反応生成物のＩＲとＮＭＲの測定結果から、実施例
１のバルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（１）と同
じ構造のものであるが、疎水性基の導入率が明らかに低
いことを確認した。この生成物のヒドロキサム酸鉄法に
よる発色吸光度は、試料量５■で０．３６０とバルミト
イル基導入ヒアルロン酸誘導体（１）のおよそ４分の１
のエステル導入率を示した。

この反応生成物をバルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導
体（４）とする。このものは水に対して不溶性を示した
。

実施例５バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（４）１００■
を５０戚容ナス型フラスコに取り、クロロホルム３０戚
に分散した。マグネチックスターラーで撹拌しながら、
２８％アンモニア水をパスツールピペットにて３滴くわ
えた。室温にて撹拌を続け、１２時間後、ロータリーエ
バポレーターで蒸発乾固物を得た。そこへ精製水３０ｍ
１ｌを加え、６０℃で加温溶解した。水不溶性物は濾過
により除去した。濾液を加熱乾燥し、バルミトイル基導
入ヒアルロン酸誘導体（５）を得た。

この生成物のＩＲ分析結果において、１８１０ｃｍ−’
の吸収の消失により、酸無水物の分解を確認すると同時
に、１６４０ｃｍ−１から１６９０ｃｍ−”の吸収帯に
変化が９あり、グルクロン酸のカルボキシル基が一級アミド（Ｃ
ＯＮＨ２）を形成していることを確認した。この生成物
のヒドロキサム酸鉄法による発色吸光度は、試料量５ｍ
ｇで０．０１０とバルミトイル導入ヒアルロン酸誘導体
（１）のおよそ１７０分のＩであった。また、このもの
の１Ｈ−ＮＭＲによるバルミトイル基／Ｎ−アセチル基
の比率は１／１１８であった。このバルミトイル基導入
ヒアルロン酸誘導体（５）は、下記化学構造を有するこ
とが確認された。このものは水に対して良好な溶解性を
示した。

（式中、Ｒはバルミトイル基を意味し、ｎは５０００で
ある）実施例６実施例Ｉにおいて、ヒアルロン酸ナトリウムとして平均
分子量的２０，０００のものを用いた以外は同様にして
式（１）（但し、ｎ＝５０）で表わされるパルミ０− トイル基導入ヒアルロン酸誘導体（６）を得た。このも
ののヒドロキサム酸鉄法による発色吸光度は、１ｍｇ当
り０．０８３を示した。また、このものの１１（−ＮＭ
Ｒによるバルミトイル基／Ｎ−アセチル基の比率は１／
３３であった。このものは水に対してやや不溶性を示し
た。

実施例７実施例２において、バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘
導体として、実施例６で得られたもの（６）を用いた以
外は同様にして式（２）（但し、ｎ＝５０）で表わされ
るバルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（７）を得た
。このもののヒドロキサム酸鉄法による発色吸光度は、
１ｍｇ当り０．００６を示した。また、このものは水に
対して良好な溶解性を示した。

実施例８実施例３において、バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘
導体として、実施例６で示したもの（６）を用いた以外
は同様にして式（２）（但し、ｎ＝５０）で表わされる
バルミトイル基導入ヒアルロン酸誘導体（８）を得た。

このもののヒドロキサム酸鉄法にょる発色吸光度は、１
ｍｇ当り０．０８４を示した。また、このもののＪ（−
ＮＭＲによるバルミトイル基／Ｎ−アセチル基の比率は
１１５５であった。このものは水に対して良好な溶解性
を示した。

実施例９実施例４において、ヒアルロン酸ナトリウムとして、平
均分子量的２０，０００のものを用いた以外は同様にし
て式（１）（但し、ｎ＝５０）で示される構造のバルミ
トイル基導入ヒアルロン酸誘導体（９）を得た。このも
ののヒドロキサム酸鉄法による発色吸光度は、１ｍｇ当
り０．０３２を示した。また、このもののＪ（−ＮＭＲ
によるバルミトイル基／Ｎ−アセチル基の比率はｌ／３
７であった。このものは水に対してやや不溶性を示した
。

実施例１０２００威容ナス型フラスコ中でヒアルロン酸ナトリウム
（平均分子量２０，０００）０．１ｇ（０，１／４０１
＝２．５　Ｘ　１０″４モル糖単位）を無水ジメチルホ
ルムアミド５０−に５０〜６０℃で加温しながら分散し
た。マグネチツクスターラーで撹拌しながら、無水ピリ
ジン０．１６ｇ（２，ＯＸ　１０−３モル）及びブチリ
ルクロライド０．２１４ｇ（２，ＯＸ　１０−３モル）
を無水ジメチルホルムアミドの適量に溶解したものを加
えた。これを６０℃で１時間保ち、その後室温にて３週
間放置した。３週間後、反応混合物を再度６０℃に３０
分間加温し、冷却しないうちに懸濁物を濾集した。この
反応生成物をアセトン及びクロロホルムで洗浄し、減圧
下、加熱乾燥して、ヒアルロン酸誘導体（１０）を得る
とともに、その乾燥後の反応生成物のＩＲ及びＮＭＲを
測定した。この反応生成物のＩＲ分析結果においては、
１７４０ｃｍ”−１にカルボニル基の吸収が見られ、こ
れによりエステル形成の確認をした。また同時に１８１
０ｃｍ−１にも吸収を認め、グルクロン酸部のカルボキ
シル基に酸無水物が形成されていることも確認した。ま
た、この反応生成物のＮＭＲ分析結果においては、０．
９ｐｐｍ及び１　、２８ｐｐｍにブチリル基のプロ１−
ンのピークを確認した。

また、この反応生成物における脂肪酸エステルが存在す
ることを、ヒドロキサム酸鉄法によって確認した。この
生成物のヒドロキサム酸鉄法によ３る発色吸光度は、試料量５ｍｇで０．３８５であった。

また、このものは１Ｈ−ＮＭＲによるブチリル基／Ｎ−
アセチル基の比率は１／３５であった。

前記で得たブチリル基導入ヒアルロン酸誘導体（１０）
は次の構造式を有するものであった。このものの水に対
する溶解性はやや小さかった。

（式中、Ｒはブチリル基を意味し、ｎは５０である）実
施例１１実施例１０で得たブチリル基導入ヒアルロン酸誘導体（
１０）１００ｍｇを５０威容ナス型フラスコに取り、ク
ロロホルム３０威に分散した。マグネチックスターラー
で撹拌しながら、２規定水酸化ナトリウム液をパスツー
ルピペットにて３滴加えた。室温にて撹拌を続け、６時
間後、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固物を得た。

この乾固物に精製水３０威を加え、マグネチックスター
ラーで撹拌しなが４− ら、１規定塩酸にてｐＨを７．０に調整した。その後、
６０℃で加温溶解した。水不溶性物は濾過により除去し
た。濾液を加熱乾燥し、ブチリル、基導入ヒアルロン酸
誘導体（１１）を得た。

この生成物のＩＲ測測定行った結果、１８１０ｃｍ”−
”の吸収の消失と１６１０ｃｍ−’の吸収の増加により
、分子内に部分的に形成されていた酸無水物の分解とカ
ルボン酸ナトリウムの再生を確認した。また、１７４０
ｃｍ−’周辺の吸収の減少から、酸無水物の消失ととも
にエステルの部分的な分解を確認した。さらに、この生
成物のヒドロキサム酸鉄法による発色吸光度は、試料量
１０ｍｇで０．２２３ヒブチリル基導入ヒアルロン酸誘
導体（１０）およそ４分の１とエステルの導入比率は小
さくなったことを確認した。

前記で得たブチリル基導入ヒアルロン酸誘導体（１１）
は次の構造式を有するものであった。このものは水に対
して良好な溶解性を示した。

（式中、Ｒはブチリル基を意味し、ｎは５０である）実
施例１２ブチリル基導入ヒアルロン酸誘導体（１０）１００ｍｇ
を５０−容ナス型フラスコに取り、クロロホルム３０ｄ
に分散した。マグネチックスターラーで撹拌しながら、
２８％アンモニア水をパスツールピペットにて３滴加え
た。室温にて撹拌を続け、６時間後、ロータリーエバポ
レーターで蒸発乾固物を得た。

そこへ精製水３０＋ｎＱを加え、６０℃で加温溶解した
。

水不溶性物は濾過により除去した。濾液を加熱乾燥し、
ブチリル基導入ヒアルロン酸誘導体（１２）を得た。

この生成物のＩＲ全分析行った結果、１８１０ｃｍ−１
の吸収の消失により、酸無水物の分解を確認すると同時
に、１６４０ｃｍ−１から１６９０ｃｍ−１の吸収帯に
変化があり、グルクロン酸のカルボキシル基が一級アミ
ド（ＣＯＮＨ２）を形成していることを確認した。この
生成物のヒドロキサム酸鉄法による発色吸光度は試料量
１０ｍｇで０．２８５とブチリル基導入ヒアルロン酸誘
導体（１０）おおよそ３分の１であった。このものは、
ブチリル基導入上ヒアルロン酸誘導体（１１）と同様、
水に対して良好な溶解性を示した。

（式中、Ｒはブチリル基を意味し、ｎは５０である）参
考例１表−１に示すヒアルロン酸及びヒアルロン酸誘導体の旋
光度〔α銘”（Ｃ＝１．０、Ｈ２Ｏ；Ｃは溶液の濃度ｇ
／１００ｍＱ　）を測定し、表−１の結果を得た。

参考例１表−１に示す各種ヒアルロン酸誘導体の旋光度〔α〕六
゛（溶媒：水、溶液濃度：　Ｉｇ／　１００帽を測定し
、その結果を表−１に示す。

＝２７表−１参考例２各種バルミトイル化ヒアルロン酸の０．５％の水溶液を
調製し、終濃度０．５％の大豆油に対する乳化能とその
経時安定性を測定した。乳化方法は、振幅２５ｃｍ、毎
分６０回で３分間振盪することにより実施した。乳化物
は、１０威容ガラス製シリンジに１０−ずつ入れ、シリ
ンジの先端を下にして放置した。

その後、経時的に下層２．５威を静かに取り、波長６０
０ｎｍにおける透過率を測定した。その透過率の経時変
化が／Ｊ％さいほど乳化物の安定性のよいことを示す。

２８− バルミトイル化ヒアルロン酸としてＨＡ−Ｐ−ＮＡ、Ｈ
Ａ５−Ｐ−ＮＡ、　ＨＡ２−Ｐ−ＮＡ、ＨＡ２−Ｐの試
料を用いた。また、比較のために、未修飾ヒアルロン酸
としてＨＡ、　ＨＡ５、ＨＡ２を用い、また、Ｔｖｅｅ
ｎ８０を用いて同様の実験を行った。さらに、無添加の
実験も行った。その結果を表−２に示した。ＨＡ５−Ｐ
−ＮＡ、　１（Ａ２−Ｐ−ＮＡ、　１（Ａ２−Ｐは濁度
の変化がほとんどないのに対し、無添加及びＨＡ５、Ｈ
Ａ２では著しい濁度の上昇が観察された。Ｔｔｍｅｅｎ
８０では中程度の濁度変化であった。なおＨＡ及びＨＡ
−Ｐ−ＮＡにおいては、乳化直後の層分離が極めて早く
、透過率の測定に供せなかった。

ここで用いたＨＡとは平均分子量２００万、ＨＡ５とは
平均分子量５万、ＨＡ２とは平均分子量２万のヒアルロ
ン酸を言う。またＨＡ−Ｐ−ＮＡ、　ＨＡ５−Ｐ−ＮＡ
、　ＨＡ２−Ｐ−ＮＡとは、ＨＡ、　ＨＡ５及びＨＡ２
のヒアルロン酸から誘導されたヒアルロン酸誘導体のこ
とで、ここでは、実施例２に従って得られるヒアルロン
酸誘導体のナトリウム塩を用いた。さらに、ＨＡ２−Ｐ
とは、ＨＡ２のヒアルロン酸から誘導されたヒアルロン
酸誘導体のことであり、実施例６で得られたものを用い
た。

以上の事から、分子量が数万程度のヒアルロン酸誘導体
には、極めて良好な乳化能及び安定化性能があるとされ
る。なお、平均分子量が２００万程度のものについては
、油の選択及び乳化方法の組み合わせにより、良好な結
果を得ることができる。

表−２参考例３乳化組成物の安定化を検討する上で、乳化形態のひとつ
であるリポソームの安定化が、最近、注目されている。

そこでバルミトイル酸で被覆したレシチンリボソーＡのホスホリパーゼ作用
抵抗性を検討した。

まず、精製卵黄レシチン（旭化成■製）とコレステロー
ルのクロロホルム／メタノール溶液を製し、一定量をナ
ス型フラスコに取り、蒸発乾固する。

その後、０．４ｍＭのカルセイン水溶液５−で水和し、
ポルテックス法にて精製卵黄レシチン及びコレステロー
ルの終濃度９マイクロモルとなるリポソームを調製した
。次いで、セファデクスＧー７５カラムにて、リポソー
ム内水層に未封入のカルセインを除去した。得られたカ
ルセイン封入リポソームへのバルミトイル化ヒアルロン
酸被覆は、バルミトイル化ヒアルロン酸誘導体を粉末の
ままリポソームへ終濃度２〜５ｍｇ／　ｍＱとなるよう
添加し、約１時間緩和に撹拌した。ホスホリパーゼＤに
対する抵抗性の試験は、リポソーム試料２−に対し、ホ
スホリパーゼＤ（東洋醸造■製）２３単位を添加し、リ
ポソーム内水層から放出してくる水溶性蛍光色素力ルセ
インの蛍光を励起波長４８０ｎｍ、蛍光波長５１０ｎｍ
にて経時的に測定した。なお、内水層で封入されている
カルセインの総量は、１０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００の
０。

０５−を加え、リポソームを破壊することで求めた。

１その結果を表−５に示す。この場合、バルミトイル化ヒ
アルロン酸誘導体として、ＨＡ−Ｐ−ＮＡ．　ＨＡ５−
Ｐ−ＮＡ及びＨＡ２−Ｐ−ＮＡを用いた。また、対照と
して被覆しないリポソームも試験に供した。表−５に示
した結果かられかるように、被覆しないリポソームにお
いて、内水層中で濃度消光していたカルセインは、全封
入量の９０％近くまで放出された。それに対し、バルミ
トイル化ヒアルロン酸誘導体被覆リポソームでは２０〜
３０％までしか放出されなかった。

ホスホリパーゼＤは、レシチンのコリンエステルを加水
分解し、リポソームの二分子膜構造に乱れを生じされる
もので、その結果、内水層封入物が放出してくるもので
ある。よって、バルミトイル化ヒアルロン酸は、リポソ
ームを被覆することでホスホリパーゼＤ抵抗性を揮発し
、リポソーム膜構造の安定化をもたらすものである。

２表−５

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１はアシル基を意味し、Ｒ＾２はヒドロキ
シル基、−ＯＭ基（式中、Ｍはアルカリ金属原子を意味
する）、−ＮＨ＿２基又は−ＯＲ＾１基（式中、Ｒ＾１
は前記と同じ意味を有する）を意味し、そしてｎは２以
上の整数を意味する〕で表わされる多糖誘導体。
（２）一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾３はヒドロキシ基又は−ＯＭ基（式中、Ｍ
はアルカリ金属原子を意味する）を意味し、そしてｎは
２以上の整数を意味する〕で表わされる多糖類に、一般式（III）ＨＯ−Ｒ＾１（式中、Ｒ＾１はアシル基を意味する）で表わされる脂肪酸又はそのハライドを反応させること
により、一般式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１およびｎは前記と同じ意味を有し、Ｒ＾
４は前記Ｒ＾３と同じか又は−ＯＲ＾１と同じ意味を有
する）で表わされる多糖誘導体を得ることを特徴とする
多糖誘導体の製造方法。
（３）一般式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１はアシル基を意味し、そしてｎは２以上
の整数を意味する〕で表わされる多糖誘導体を、アンモニア水で処理するこ
とを特徴とする一般式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１及びｎは前記と同じ意味を有する〕で表
わされる多糖誘導体を得ることを特徴とする多糖誘導体
の製造方法。
（４）一般式（VII） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１はアシル基を意味し、そしてｎは２以上
の整数を意味する〕で表わされる多糖誘導体を、水酸化アルカリ水溶液で処
理することにより、一般式（VIII） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１及びｎは前記と同じ意味を有し、Ｍはア
ルカリ金属イオンを意味する〕で表わされる多糖誘導体を得ることを特徴とする多糖誘
導体の製造方法。
（５）アンモニア水処理条件を調節することにより、得
られる反応生成物におけるアシル基含有率を製御するこ
とを特徴とする請求項３の方法。
（６）水酸化アルカリ水溶液処理条件を調節することに
より、得られる反応生成物におけるアシル基含有率を制
御することを特徴とする請求項４の方法。